Problemas 10. a. 2 13. 4 Desigacse tin aminoscide encontrado en Tas proteinas que pueda ser convertida por tratamiento con una base fuerte en otro amino- Acido gue también se encuentre en las proteinas Designese tin aminciicido natural cuyo punto isoeléetrico sea mayor de 8,0 y que por tratamiento con borohidruro de litio Sorme un deri- vada eayo peso molecular sea 118. Calcilense Jos valores de pH, de Ia glicocola, ta alanina, 1a serina Ja treanina y el dcido glutémaico 2 partir de sus valores de pK” (abla 42) ‘Tomanda de In tabla 42 los valores de pK necesarios, indiquese Ja carga aeta (=, 0.6 +) de la glicocola, ef Scido aspéttico, a lisina y Ja histidina a: a) pH 1,0, &) pH 2.10, ¢) pH 4.0 y d) pH 10. Se practics una electroforesis sobre papel, a pH 60, de una mezcla de glicocolo, alanina, acide glutémico, lisina, argimina y serina, a) iCoalles) de los compwestos se mueve Bacia e] aaodo? 5) (Cual de ellos emigra hacia el catodo? fe) Gul de ellos permanece en, 0 cerca de, el orien? |A una resina de intercambio anidnico se Je aftade una mezcla de Acido aspartico, acido glutémico, tisina y alanina, fa pHT elevado. Predecir el orden de ehicién de los aminodcidos por tratamiento de ta resina com disoluciones de pHi sucesivamente de- creclente La eromatografia moaodimeasional sobre papel de una mezcla de serina, alanina, écido glutimico y de igoleucina, se Teva a cabo Con ua sistema disolvente que contiene r-butanol, agua y Scido acé- fico, Predecit las movilidades relativas de los aminodcidos en el sistema deserito indicanda, en primer Jugar. cual se espera sea el gue ae desplace a mayor distancia del origen. 2Cuantos gramas de NaOH deherdin aftadirse a 500 mi de disclue Cin O01 MZ de bistidina totalmente cargada con protones para Avuma disolucion de 1 Litre de“i,0 i de glicocola, que se halla al PH de su punto isoeléctrico, se le afiaden 03 mol de HCL. {Cua ser el pH de la disolucién resultante? {Cul seria el pH si en sw lugar se aadiesen 0,3 mol de NaOH? Una dizolucién de 1-alanina (400 ml) se evs a pH 80. Se trats fa continuacién con un exceso de formaldehido. La disotacién resul tamte necesité un total de 250 ml de disolucién de NaOH 0.2 M para levarla nuevamente hasta pH 8.0. ¢Cuintos gramos de t-nla- ina contiene Ia disolucién original? Utilizando tos datos de la tabla 43, celedlese la rotaciba Optica de la disolucién de 110 Mf de alanina en agua a 25°C, medida con un tubo polarimétrico de 25 cm y utilizando como fuente lumi-, znosa Ia linea D del sodio. Una disoluciéa ave contiene Snicamente tieoleuina y I-fealatanina, cahibe on rar ee ae a mae 25 cm 27 Reacei micas de los aminodcidos 25 cm 2 Reacciones, quimicas 15, Supsogase que Ia distribucion en contracorviente del Problema {4 se extiende hasta un total de 20 tubos. :Cusntos mg de a) X y ) Y st hallan presentes en el tubo 20? 16. A400 ml de glicocoln O.1_M en sn punto ieoeléctrco se le afiaden 100 mal de acklo acstico 0.5 M. Calctlese a) el pH de Ia mezcla y 1) una concentracion aproximada para la forma eoeléctrica predo- sminante de la glicecola en Ja mezcla, 17. Una dusoluetén 0,1 M de Acido glutémico se halla en su punto Isoelecrio, 4) Caldlese una concentracion aproximada para In forma fosic- trea principal. CCaledlese una concentracién proximada para la forma come pletamente_protonad by 2) 0152 M; 6) 0,182 0.64 mg Gly; 0,11 mg Phe a) tubo 4, tubo 3; b) tubo 1, 0,8 mg X, tubo 3, 38.4°mg X, 43.2 mg Y; tubo 4, 51,2 mg X, 21,6 mg Y 15 a) 1,44 mg; 6) 6,09 x 107 mg 16 2) 350; b) 00748 17 a) 0,0843M; b) 0,0079M; ¢) 8 €) (Guintas formas en Inco conceat Capitulo # 1 Aso/Gin 2 Ornitina 3° Gly, 5.97; Ala, 602; Ser, 5,68; Tar, 6.53: Glu, 3.22 4 a) +5 b) tic) $5 d) a) +: b) +i 6) =3 d) — a) +3 b) +; oc) +: d) O/— a) tsb) tic) tid) — 5 b) Lys, Arg: ¢) Gly. Ala, Ser 6 Arg, Lys, Tyr, Ala, Glu, Asp 7 Me, Ala, Ser, Glu 8 038 ¢ 9 a) 271; 6) 9.23 10 4.45 1 045 2 13 4 Ficus 4-17 concentraci mieestea oF La glicaco: daolvente soluble en, Ay B so vente A. £ fenilatanin: budo de 5 capa super ven volume? aleanzer «| Inlaniea et Iibrio por Fl aminos en el dito soluble en disolventes ‘una mezcl: an sistem= maximo el cada amin: Las teacciones orgénicas caracteristicas de los aminodcidos son las de sus grupos funcionales, es decir, los grupos carbo- xilo, los. grupos @-amino y los grupos funcionales. presentes en las distintas cadenas laterales. El conocimiento de estas reacciones es itil en varios aspectos importantes de la quimica de las proteinas: (1) la identificacién y andlisis de aminodci- dos en los hidrolizados de proteina, (2) la identificacién de Ta secuencia aminoacida en las moléculas de proteina, (3) la identificacién de los restos aminodcides especificos de las proteinas nativas que se precisan para su funcién biolégica, (4) modificacién quimica de fos restos aminoacidos en las, moléculas proteinicas para alterar su actividad biolégica uu otras propiedades. y (5) la sintesis quimica de los poli- péptidos. Reacciones de los grupos carboxilo Los grupos carboxilo de todos los aminodcidos experimentan reacciones organicas bien conocidas, conducentes a la forma- cién de amidas, ésteres y haluros de acilo, Estas reacciones no necesitan detallarse aqui. La esterificacién de los amino- cidos con etanol © con alcohol bencilico, se utiliza frecuente- mente como método para proteger el grupo carboxilo de los aminoacids en la sintesis quimica de los péptidos (pig. 119). ReducciOn det grupo carboxito de tos ‘aminoseidos. goon HNC [um o1,0% BN-C=HFicuna 418 Formacisn del derivado bensilosicarbonilico (carbobenzoxi) de los aminoscidos. R—t—cooH NH : | a I i P— Clcarbonto pre 4 bi de bencilo Derivado henziloricarboniico (carbobenzoxi) Ficura 4-19 Reaccién de la ninhidrina, Este agente Otra reaccién del grupo carboxilo de especial utilidad en el estudio de la secuencia aminodcida (pag. 106) es la reduc- cién en un medio anhidro con el potente reductor borohidruro de litio para obtener el correspondiente alcohol primario (fi gura 4-17). Reacciones de los grttpos amino El grupo a-amino de los aminoacidos puede acilarse por tra- tamiento con haluros 0 anhidridos de acido; este procedi- miento se utiliza corrientemente para proteger el grupo a-ami. no en la sintesis quimica de los péptidos (pag. 119). Un reac- tivo profusainente utilizado con este objeto es el elorocart nato de bencilo. aue inde el corsespondiente benciloxi nifo deriva 9 temente ce H Nice se realizan ioe mica del a on condiciones . ducirse Ia 4 Una de R-t—cooH Aminotcido 2S y mas amy i tina, ‘que puede Nay static vamente & e un eeaminoici Macgea-co, lucto {ntensamen ao nine hidrina ap: cides vy péptidos ° gue oe" Hudridantine aa 6 oxidante fuerte efectiia la descarboxilacion xi oxidativa de los aminoacidos. El amoniaco y la hidridantina asi formadas reaccionan con una segunda molécula de ninhidrina para producir un pigmento purptireo, del que solamente el atomo de -nitrégeno pertenece al aminodcido. atta 280 i i .: oO onJa prolina y la hidroxiprolina, en las que el grupo «-amino sc halla sustituido, rinden derivados algo diferentes que poseen tun color amarillo caracteristico, Los grupos «-amino de los amincdcidos reaccionan rever- siblemente con los aldehides para formar compuestos llamados bases de Schiff (fig, 4-20). Las bases de Schiff intervienen ‘como intermediarios en cierto nimero de reacciones enzimé- ficas en las que se registra la accién mutua del enzima con ‘grupos amino © carbonilo del sustrato (pags. 228, 435 y 479). ‘Otra reaccién importante de los grupos amino tiene lugar con P Reacciones de los grupos R 8 Los aminodcidos muestran también reacciones coloreadas cua Titativas tipicas de las funciones presentes en sus grupos R, Ptales como el grupo tiol de Ia cisteina, el grupo hidroxilo 2 fenélico de la tirosina y el grupo guanidinio de la arginina. 1X. Aungue estas reacciones coloreadas resultan, 2 veces, ‘itiles © para ensayos @ la gota © para identificacién cualitative, los daminoacidos se identifican y determinan con més seguridad © a concentraciones muy bajas. mediante métodos cromatogré- § ficos (véase més adelante). Sin embargo. otros grupos fun- cionales situados en les cadenas laterales de los aminodcidos desempeian importantes cometidos en la actividad biolégica de las proteinas; se encuentra entre ellos el grupo tiol sulffidsilo de la cisteine. Este grupo, que es muy reactivo, es extremadamente susceptible a la oxidacidn a disulfure por el oxigeno atmosférica en presencia de sales de hierro u otros oxidantes suaves. El producto de la oxidacion es la cistina (fig. 4-22), en la que el enlace disulfuro constituye un puente covalente entre dos restos de cisteina. Otra reaccién impor- tante y caracteristica del grupo tiol ocurre con metales pe- sados tales como Hg y Ag’, con los que forma mercéptidos (fig. 4-23). Los grupos tiol de la cisteina y los restos de cis- teina de los péptides y de las proteinas pueden determinarse por una reaccién cuantitativa con el reactive de Ellman (fi- gura 4-24), dando un produeto que puede medirse colorimeé tricamente. Veremos mas adelante (pag, 230) que los grupos tiol de restos especificos de cisteina juegan, en ciertas molé~ culas enziméticas. un papel importante sobre su actividad cae talitica: la modificacion de tales grupos tiol mediante reaecio- nes como las descritas anteriormente, inactivan frecuentemien- te al enzima La cistina, forma oxidada de la cisteina, desempefia un papel especiel en la estructura de la proteina, ya que su grupo disulfuro actiia como un enlace covalente transversal entre Prcuea 420 Foumscién de una base de Schif i a-t-cooit Aminoscide . ehido 1 I hay CxO ton canto b # ' R000 Anos “ orton (=o ha, Fees 4.22 Omdacion de citeina 2 isting coon HN-o-# " Cita Ch, SH su fe wd, boost joa Catia coon coo i TNC HAN—C—H cH SO CienaFicura 4-24 Reascién de la cisteina con el reactive de Elinan, Esta reaccién provoca la iberacién de una molécula de écido tionteobensoico, ef cual a pH 80 posce tuna absorcién intensa a 412 nm. NO, C OOH 8 5 55'Ditiobis- Cutina (G-teide nitrobenzoico) (CH SSH, si alts P-Mercaptoctanol (OOH bayon l SH Goon cH 2) NCH G1 Git—cooH a) ANG us NH, Cisteina oe bt No, : poe coo# t i Di.pdinironietlaiscliro na : ise 8 eH ap- { dayon ja ‘or. iiy—GH—COOR mica, y origina dos moléculas de dcido cisteico, tssta impor- tante reaccién se discutira mas adelante (pag. 102). Tanto los ‘grupos sulfhidrilo como los grupos disulfuro se destruyen en disoluciones alcalinas concentradas, con formacién de diversos productos. Acido tionitrobenzoico 00H NOs