IEX for the separation of biomolecules was introduced in the 1960s and continues to play a

major role in the separation and purification of biomolecules. Today, IEX is one of the most
frequently used techniques for purification of proteins, peptides, nucleic acids and other
charged biomolecules, offering high resolution and group separations with high loading
capacity. The technique is capable of separating molecular species that have only minor
differences in their charge properties, for example two proteins differing by one charged
amino acid. These features make IEX well suited for capture, intermediate purification or
polishing steps in a purification protocol and the technique is used from microscale
purification and analysis through to purification of kilograms of product. This handbook
describes both theoretical and practical aspects principles of the technique, the media
available and how to select them, application examples and detailed instructions for the most
commonly performed procedures. Practical information, with many tips and hints drawn from
over forty years of experience in chromatography purification, guides beginners and experts
towards obtaining the best possible results from the latest chromatographic media.
Pengertian Ion Exchange Chromatography :
Ion exchange chromatography atau kromatografi penukar ion adalah suatu teknik
kromatografi yang digunakan untuk pemisahan biomolekul sesuai dengan sifat khusus serta
perbedaan permukaan muatan bersihnya. Kromatografi penukar ion adalah salah satu teknik
yang paling sering digunakan untuk pemurnian protein, peptida, asam nukleat dan reaksi
biomolekul lainnya, dengan resolusi dan kelompok pemisahan tinggi serta kapasitas beban
tinggi. Teknik ini mampu memisahkan jenis molekul yang hanya memiliki perbedaan kecil
pada sifat reaksi mereka, misalnya dua protein yang berbeda dengan satu asam amino
direaksikan.
Ion exchange is pr
obably the most fr
equently used chr
omatographic technique for
the separation and purification of pr
oteins, polypeptides, nucleic acids, polynucle
otides, and other char
ged biomolecules (1). The r
easons for the success of ion
exchange ar
e its widespr
ead applicability
, its high r
esolving power
, its high capaci
ty
, and the simplicity and contr
ollability of the method.

Prinsip Ion Exchange Chromatography :

Pengertian affynity :
Kromatografi afinitas memisahkan protein berdasarkan interaksi reversibel antara
protein (atau kelompok protein) dan ligan spesifik digabungkan ke matriks kromatografi.
Teknik ini menawarkan selektivitas tinggi, resolusi tinggi sehingga, dan kapasitas biasanya
tinggi untuk
protein (s) dari bunga. Pemurnian dapat di urutan pemulihan beberapa ribu kali lipat dan
bahan aktif umumnya sangat tinggi.
Kromatografi afinitas adalah unik dalam teknologi pemurnian karena merupakan satusatunya teknik
yang memungkinkan pemurnian biomolekul pada dasar fungsi biologis atau
struktur kimia individu. Pemurnian yang seharusnya dapat memakan waktu,
sulit atau bahkan tidak mungkin menggunakan teknik lain sering dapat dengan mudah dicapai
dengan afinitas
kromatografi. Teknik ini dapat digunakan untuk memisahkan biomolekul aktif dari
terdenaturasi
atau bentuk fungsional yang berbeda, untuk mengisolasi zat murni hadir pada konsentrasi
rendah di
volume besar sampel mentah dan juga untuk menghilangkan kontaminan spesifik.
GE Healthcare menawarkan berbagai macam kolom prepacked, siap untuk menggunakan
media, dan preactivated
media ligand kopling.
Prinsip afinitas
Pengertian s c :
Selama lebih dari empat puluh tahun sejak diperkenalkannya Sephadex ,
filtrasi gel telah memainkan
peran kunci dalam pemurnian enzim, polisakarida, asam nukleat, protein dan
lainnya
makromolekul biologi. Gel filtrasi adalah yang paling sederhana dan paling
ringan dari semua teknik kromatografi dan memisahkan molekul berdasarkan
perbedaan ukuran. Teknik
dapat diterapkan dalam dua cara yang berbeda:
1. Kelompok pemisahan: komponen sampel dipisahkan menjadi dua kelompok
besar
menurut berbagai ukuran. Sebuah pemisahan kelompok dapat digunakan untuk
menghapus tinggi atau rendah molekul
kontaminan berat (seperti fenol merah dari cairan kultur) atau untuk
menghilangkan garam dan pertukaran
buffer.
2. Resolusi fraksinasi Tinggi biomolekul: komponen sampel dipisahkan
menurut perbedaan ukuran molekul mereka. Resolusi fraksinasi tinggi dapat
digunakan
untuk mengisolasi satu atau lebih komponen, untuk monomer terpisah dari
agregat, untuk menentukan
berat molekul atau untuk melakukan analisis distribusi berat molekul.
Gel filtrasi juga dapat digunakan untuk memfasilitasi pelipatan protein
terdenaturasi oleh hati
kontrol perubahan kondisi penyangga.

For more than forty years since the introduction of Sephadex, gel filtration has played a
key role in the purification of enzymes, polysaccharides, nucleic acids, proteins and other
biological macromolecules. Gel filtration is the simplest and mildest of all the
chromatographic techniques and separates molecules on the basis of differences in size. The
technique
can be applied in two distinct ways:
1. Group separations: the components of a sample are separated into two major groups
according to size range. A group separation can be used to remove high or low molecular
weight contaminants (such as phenol red from culture fluids) or to desalt and exchange
buffers.
2. High resolution fractionation of biomolecules: the components of a sample are separated
according to differences in their molecular size. High resolution fractionation can be used
to isolate one or more components, to separate monomers from aggregates, to determine
molecular weight or to perform a molecular weight distribution analysis.
Gel filtration can also be used to facilitate the refolding of denatured proteins by careful
control of changing buffer conditions.
Gel filtration is a robust technique that is well suited to handling biomolecules that are
sensitive to changes in pH, concentration of metal ions or co-factors and harsh environmental
conditions. Separations can be performed in the presence of essential ions or cofactors,
detergents, urea, guanidine hydrochloride, at high or low ionic strength, at 37 C or in the
cold room according to the requirements of the experiment.
This handbook describes the use of gel filtration for the purification and separation of
biomolecules, with a focus on practical information for obtaining the best results. The media
available, selection criteria and examples with detailed instructions for the most common
applications are included, as well as the theoretical principles behind the technique. The first
step towards a successful separation is to select the correct medium and this handbook
focuses on the most up-to-date gel filtration media and prepacked columns.
The biocompatibility, stability and utility of gel filtration media from Amersham Biosciences
have made these products the standard choice in practically every laboratory using the
technique. A wide variety of prepacked columns and ready to use media is available.
Gel filtrasi adalah teknik yang kuat yang cocok untuk biomolekul penanganan
yang
sensitif terhadap perubahan pH, konsentrasi ion logam atau co-faktor dan kasar
lingkungan
kondisi. Pemisahan dapat dilakukan dengan adanya ion esensial atau kofaktor,
deterjen, urea, guanidin hidroklorida, pada kekuatan ion tinggi atau rendah, pada
37 C atau di
Ruangan dingin sesuai dengan persyaratan dari percobaan.
Buku pedoman ini menjelaskan penggunaan filtrasi gel untuk pemurnian dan
pemisahan
biomolekul, dengan fokus pada informasi praktis untuk mendapatkan hasil
terbaik. Media
tersedia, kriteria seleksi dan contoh dengan petunjuk rinci untuk yang paling
umum
aplikasi yang disertakan, serta prinsip-prinsip teoritis belakang teknik. Pertama
langkah menuju pemisahan yang sukses adalah memilih buku ini media yang
benar dan
berfokus pada sebagian besar media filtrasi gel up-to-date dan kolom prepacked.
Biokompatibilitas, stabilitas dan kegunaan media filtrasi gel dari Amersham

Biosciences
telah membuat produk ini pilihan standar dalam hampir setiap laboratorium
menggunakan
Teknik. Berbagai macam kolom prepacked dan siap untuk menggunakan media
yang tersedia.

Size ex
clusion chromatography is used
for semi
preparative purifications
and various
analytical assays
. It is a
separa
tion technique
which takes the advantage of the difference in
size and geometry of the molecules. The molecules
are
separated based on their size.
Grant
Henry Lathe and Colin R Ruthven was the pioneer of size exclusion
chromatography who
started this techn
ique for separation of analytes of different size with starch gels as
the
matrix, later
Jerker Porath
and
Per Flodin
introduced dextran gels.
Other gel filtration
matrices
include agarose and polyacrylamide.
Note
:
Unlike ion exchange chromatography, g
el filtration does not
depend on
any
chemical interac
tion with protein, rather it is based on a

physical
property of the
protein
that being the
effective molecular radius
(which relates to mass for most
globular proteins).
Principle:
Size exclusion chromatography (SEC) is the separation of mixtures
based
on the
molecular size (more correctly, their
hydrodynamic volume
) of the components.
Separation
is achieved by the differential exclusion or inclusion of solutes as
they pass through
stationary phase consisting of heteroporous
(pores of different sizes)
cross
linked polymeric
gels or beads. The process is based upon different permeation
rates of each solute molecule
into the interior of gel particles.
Size exclusion chromatography involves
gentle interaction
with the sample, enabling high retention of bio
molecular activity.
For the separation of
biomolecules in aqueous systems, SEC is referred to as gel
filtration chromatography (GFC),
while the separation of organic polymers in non
aqueous systems is called gel permeation
chromatography (GPC).
Kromatografi eksklusi ukuran yang digunakan
untuk semi
pemurnian preparatif

dan berbagai
tes analitis
. Ini adalah sebuah
teknik pemisahan
yang mengambil keuntungan dari perbedaan dalam
ukuran dan geometri molekul. Molekul-molekul
adalah
dipisahkan berdasarkan ukuran mereka.
Hibah
Henry Bubut dan Colin R Ruthven adalah pelopor dari kromatografi eksklusi
ukuran yang
mulai teknik ini untuk pemisahan analit dari ukuran yang berbeda dengan gel
pati sebagai
matriks, kemudian
Jerker Porath
dan
Per Flodin
diperkenalkan gel dekstran.
Filtrasi gel lainnya
matriks
termasuk agarosa dan poliakrilamida.
Catatan
:
Tidak seperti kromatografi pertukaran ion, filtrasi gel tidak
bergantung pada
apa saja
interaksi kimia dengan protein, melainkan didasarkan pada
fisik
milik
protein
-bahwa menjadi
radius molekul efektif
(yang berhubungan dengan massa untuk sebagian
protein globular).
Prinsip:
Kromatografi eksklusi ukuran (SEC) adalah pemisahan campuran berdasarkan
pada
ukuran molekul (lebih tepatnya, mereka
Volume hidrodinamik
) Dari komponen.
Pemisahan dicapai dengan pengecualian diferensial atau masuknya zat terlarut
ketika mereka melalui
fase stasioner yang terdiri dari heteroporous
(pori-pori dengan ukuran yang berbeda)
menyeberangi terkait polimer
gel atau manik-manik. Proses ini didasarkan pada tingkat perembesan yang
berbeda dari setiap zat terlarut molekul ke dalam interior partikel gel.
Kromatografi eksklusi ukuran melibatkan
Interaksi lembut
dengan sampel, memungkinkan retensi yang tinggi bio
aktivitas molekul.
Untuk pemisahan
biomolekul dalam sistem berair, SEC disebut sebagai kromatografi filtrasi gel
(GFC),

sedangkan pemisahan polimer organik di non

sistem air disebut permeasi gel
kromatografi (GPC).