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Apresentado por: Patrcia Prado e

Vanessa Kunz.
Docente: Itana Costa.

Imobilizao um termo genrico empregado para descrever a reteno de


uma biomolcula no interior de um reator ou de um sistema analtico;

Consiste no confinamento da enzima em um suporte slido para posterior


reutilizao menos oneroso;

Escolha de um suporte e do mtodo de imobilizao preparado


imobilizado ativo e estvel.

Vrias tcnicas de imobilizao de enzimas, grande nmero de matrizes


(materiais orgnicos e inorgnicos, naturais ou sintticos);

Suportes baratos (polmeros e minerais naturais), necessidade de matrizes


especficas preparados imobilizados atividades e caractersticas
hidrodinmicas adequadas ao uso em reatores;

A imobilizao de enzimas alta atividade e seletividade.

Tecnologias requerem materiais com combinao de propriedades que no


so encontradas nos materiais convencionais;

Materiais hbridos orgnico-inorgnico - alternativa para a produo de


novos materiais multifuncionais com uma larga faixa de aplicaes;

Preparo de uma matriz hbrida - processo sol-gel:


-

Envolve diversas variveis - tempo e temperatura da reao, natureza do


catalisador, concentrao de reagentes, entre outros;

Variveis que determinam as caractersticas finais dos materiais porcentagem de hidrlise e condensao de grupos reativos, densidade de
reticulao e homogeneidade do produto;

Matriz hbrida (POS-PVA) imobilizao de diferentes fontes de lipases.


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As enzimas esto sujeitas inativao por fatores qumicos, fsicos ou


biolgicos, podendo ocorrer quando estocadas ou durante o uso;

Catlise eficiente: necessidade de proteo da interao com o solvente


(inativao) - impossibilitando a catlise da reao;

Desenvolvimento de novas tcnicas de imobilizao fornecer estabilidade


as enzimas e facilitar sua recuperao e reutilizao;

O uso de biocatalisadores imobilizados tambm crescente em escala


industrial, especialmente na indstria
alimentcia, farmacutica, de
detergentes, entre outras.

Por que imobilizar enzimas?


Importante para proporcionar a reutilizao das enzimas, facilitar a
separao dos produtos e aumentar a estabilidade em solventes orgnicos.
O principal interesse em imobilizar uma enzima obter um biocatalisador
com atividade e estabilidade que no sejam afetadas durante o processo, em
comparao sua forma livre;
A enzima imobilizada dever exibir uma atividade cataltica superior.

Baseiam-se nas ligaes fsicas e qumicas entre a biomolcula e o suporte.

Vantagens:
Desvantagens:

A imobilizao por encapsulao consiste em reteno fsica


da enzima nas cavidades internas de uma matriz slida
porosa, criando uma cela artificial delimitada por uma
membrana porosa.
Vantagens:
Pncreas de animais;
Microbiana;

Em matriz polimrica
Organogis de micro emulso leo-gua como gelatina, agaro-se ou kcarragenanas, gel de agar, PEO, casenato de sdio, amido.

Em microcpsulas
Quitosana com alginato de clcio e glice-raldedo, algi-natos ou carragenanas com cloreto de clcio ou potssio, nanoesferas de slica.

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Adsoro Fsica:

Mtodo mais simples e mais empregado para imobilizao de enzimas;

A enzima fica retida na superfcie do suporte insolvel que se encontra


em meio aquoso, atravs de interaes o biocatalisador estabilizado
por interaes fracas com o suporte, como foras de van der Waals
(interaes hidrofbicas), pontes de hidrognio;

Eficincia da adsoro tamanho da protena a ser adsorvida, rea


superficial do adsorvente e da porosidade e tamanho do poros;

Vantagens: facilidade e a simplicidade do processo e a estrutura


conformacional da enzima pouco alterada;

Desvantagem: dessoro da
temperatura, pH e fora inica.

enzima

devido

variaes

de

Adsoro Inica:

A enzima se une ao suporte atravs de atraes eletrostticas


estabelecidas entre as cargas opostas presentes, tanto na superfcie do
suporte, quanto da enzima;
Essa unio mais efetiva que a adsoro fsica, mas inferior quando
comparada com outros mtodos.

Ligao Covalente:

A imobilizao por ligao covalente um dos mtodos mais utilizados;

Envolve a formao de ligaes covalentes entre os grupos funcionais


presentes na superfcie do suporte e os grupos funcionais dos resduos
de aminocidos da enzima;

Vantagens: evita o fenmeno de dessoro, diminuio da velocidade


de desativao espontnea, aumenta o tempo de vida til e da
estabilidade trmica, promovem rigidez na estrutura da enzima,
limitando seu movimento quando submetida a altas temperaturas;

Desvantagem: facilidade em alterar a estrutura terciria nativa da


enzima, com subsequente reduo da atividade cataltica.

Ligao Covalente:
Imobilizao por ligao cruzada
livre de suporte, e as enzimas esto ligadas umas s outras, ou a
protenas inativas (gelatina, albumina), formando uma estrutura
tridimensional complexa;
Pode ser obtida via mtodos fsicos ou qumicos;
Quando obtidas por mtodos qumicos so resultantes das ligaes
covalentes entre as enzimas e so favorecidas pelo uso de agentes
multifuncionais;
Desvantagens: baixa reteno da atividade e a baixa estabilidade
mecnica, que dificulta sua aplicao industrial, alm de pouca
reprodutibilidade.

Parmetros que influenciam na imobilizao de enzimas para uso em meio


orgnico.

Por

que?
Pncreas de animais
Microbiana;

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Imobilizao de Lipases

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Comparao do desempenho da lipase de Candida rugosa imobilizada em


suporte hbrido de polissiloxano-polivinillcool empregando diferentes
metodologias

Ariela V. Paula et al. (2007)

Objetivo: comparar a eficincia de diferentes mtodos de imobilizao


(Adsoro Fsica, Ligao Covalente e Encapsulao) na obteno de sistemas
imobilizados ativos e estveis para subsequente aplicao na sntese e
hidrlise de steres;
Materiais: Lipase (Candida rugosa, tipo VII), matriz hbrida constituda de
polissiloxano-lcool polivinlico (POS-PVA), suporte
previamente
neutralizado com soluo aquosa de NaOH (adsoro), suporte ativado com
uma soluo de glutaraldedo 2,5% (ligao covalente);

Mtodos: imobilizao de Lipase de Candida rugosa por adsoro fsica (ADS),


ligao covalente (LC) e encapsulao (EC) em POS-PVA.
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Imobilizao da lipase de Candida rugosa em POS-PVA empregando


diferentes metodologias:
Imobilizao ADS - 96,5% de rendimento de imobilizao;
Ativado com glutaraldedo (LC) - 81,5% de rendimento (modificao
conformacional da enzima durante a etapa de fixao ao suporte ativado com
glutaraldedo);
Imobilizao EC - no houve expresso de atividade do sistema resultante
(rigidez da estrutura da matriz conferida pelo PVA, que promoveu limitaes
relacionadas transferncia de massa e impedimento estrico da enzima);

Considerados apenas os sistemas imobilizados obtidos pelas tcnicas de ADS e


LC modificao das propriedades dos materiais hbridos, reduo do PVA
(indesejado).
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Propriedades bioqumicas e cinticas da lipase livre e imobilizada em POSPVA

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Propriedades bioqumicas e cinticas da lipase livre e imobilizada em POSPVA:

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Aplicao dos sistemas imobilizados na sntese de butirato de butila:

* Tempo de meia-vida de 39 h ADS;

*Tempo de meia-vida de 81 h LC.

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As lipases imobilizadas pelas tcnicas de adsoro e de ligao covalente


apresentaram um rendimento de 96,50 e 81,05%, respectivamente.

No foi possvel recuperar a atividade da lipase de C. rugosa imobilizada em


POS-PVA por encapsulao.

o sistema imobilizado obtido por ligao covalente foi o mais estvel tanto em
condies de estocagem como em condies operacionais.

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Desempenho da matriz hbrida sio2-quitosana na imobilizao da lipase


microbiana de Candida rugosa
Aline S. Simes et al. (2010)

Objetivo: testar uma matriz hbrida SiO2-quitosana preparada pela tcnica


sol-gel, empregando como precursor silano tetraetilortossilicato (TEOS) para
imobilizao da lipase de Candida rugosa .
Materiais: lipase de Candida rugosa (tipo VII), matriz hbrida SiO2-quitosana,
leos vegetais;

Mtodos: imobilizao de lipases da Candida rugosa por ligao covalente.

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Parmetros cinticos da LCR livre e imobilizada em SiO2-quitosana (fig. 3) e


estabilidade trmica da LCR livre e imobilizada em SiO2-quitosana (Fig. 4):

Valores de KM indicando uma mudana da afinidade da lipase pelo substrato, na forma


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imobilizada (efeitos de interao enzima e suporte );

Estabilidade trmica da LCR livre e imobilizada em SiO2-quitosana :

influncia positiva do mtodo de imobilizao na estabilidade trmica da lipase,


revelando um tempo de meia-vida de 0,19 e 1,63 h, respectivamente, para lipase livre
e imobilizada;

Corresponde a um aumento da estabilidade trmica de aproximadamente 9 vezes da


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lipase imobilizada em SiO2-quitosana.

Bom desempenho desse suporte, fornecendo derivado imobilizado com


caractersticas bioqumicas e cinticas adequadas para emprego na hidrlise
de leos vegetais;

Para a lipase imobilizada, o valor de atividade tima foi obtido para valores
de pH superiores a 7,5 para uma ampla faixa de temperatura (40-50 C);

Valores de KM - mudana da afinidade da lipase pelo substrato aps o


processo de imobilizao;

Estabilidade trmica - aumento de 9 vezes da lipase imobilizada em SiO2quitosana em relao enzima livre.

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Ttulo do Artigo

Materiais

Mtodos

Atividade
Enzimtica

Concluso

Comparao do
Lipase (Candida
Imobilizao de
desempenho da lipase rugosa, tipo VII),
Lipase por
Rendimento de 96,50 e
de Candida rugosa matriz hbrida de
Tempo de meiaadsoro fsica
81,05% - ADS E LC;
imobilizada em suporte polissiloxanovida: 39 h ADS,
(ADS), ligao
EC (sem recuperao
hbrido de
lcool
81 h LC, ***
covalente (LC) e
da atividade); LC mais
polissiloxanopolivinlico (POS(EC).
encapsulao (EC)
estvel - estocagem e
polivinillcool
PVA), cido
em POS-PVA.
condies operacionais.
empregando diferentes
butrico em
metodologias
heptano.

Bom desempenho desse


Tempo de meia- suporte (hidrlise de
Desempenho da matriz
lipase de
vida: 0,19 e 1,63 leos vegetais); lipase
hbrida sio2-quitosana Candida rugosa
Imobilizao de
h, para lipase
imobilizada (valores
na imobilizao da
(tipo VII), matriz
lipases por ligao
livre e
timos p/ pH e T);
lipase microbiana de
hbrida SiO2covalente
imobilizada,
mudana da afinidade
Candida rugosa
quitosana, leos
respectivamente.
da lipase pelo
vegetais.
substrato; estabilidade
trmica ( 9x).
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Titulo do artigo

Imobilizao de
lipases em filme de
caseinato de
sdio/glicerol:
aplicao na sntese
de steres

Autores

Damianni Sebro;
Vanessa Dutra Silva;
Maria da Graa
Nascimento;
Marcelo Alves Moreira;

Resultados
Caseinato mostrouse um bom suporte
de imobilizao de
lipases com
posteriores
aplicaes em
sntese orgnica.

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ARIELA V. Paula et al. Comparao do desempenho da lipase de candida rugosa


imobilizada em suporte hbrido de Polissiloxano-polivinillcool empregando
diferentes metodologias. Quim. Nova, Vol. 31, No. 1, 35-40, 2008.

SIMES et al. Desempenho da matriz hbrida sio2-quitosana na imobilizao da


lipase microbiana de Candida rugosa. Quim. Nova, Vol. 34, No. 1, 33-38, 2011.
PEREIRA R. M. Tcnicas de imobilizao e estabilizao de lipases obtidas a
partir de diferentes fontes microbianas, 2014. Disponvel em:< http://www.
unifal-mg.edu.br/engenhariaquimica/system /files/imce/TCC_2013_2 /Rafael
%20Matsumoto.pdf>. Acesso em 02 de setembro de 2016.