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(voltaje determinado).
Voltaje mayor, mayor fuerza, mayor velocidad de migracin.
Tambin separa las molculas de acuerdo a sus cargas.
Carga 3 mlV. La que tiene masa menor va a migrar al electrodo positivo que
la que tiene una masa mayor.
Es un mtodo separativo con una relacin masa/carga.
S o s necesitamos una partcula cargada para que pueda migrar al electrodo
correspondiente.
Qu hace que est cargada positiva o negativamente? Depende de los
residuos de aa, de los grupos terminales, de los radicales de los aa, para
ofrecer carga positiva o negativa de acuerdo al tipo de entorno en el cual se
encuentra.
Normalmente se intenta simular las condiciones del medio sobre todo cuando
se trabaja con biomolculas que estn en los organismos vivos, por ejemplo
para simular condin de enzimas de pncreas, se utiliza pH 8 ms bien son pH
bsicos que hacen disociaciones ms bien de todos los aa, pero no siempre es
as, pe puede trabajar con hongos, bacterias, etc.
Tipos de electroforesis:
1. De frente mvil: Tubo en forma de U, se coloca agar, dos electrodos,
agraga pool de protenas, se aplica voltaje, con una fuente de poder, se
produce separacin en bandas de las protenas.
2. De zona:
Soporte Inertes: No interaccionan con las partculas cargadas.
Papel: Papel de filtro con un buffer de corrida electrofortica. Molculas
bien cargadas. Aplicacin: Purificacin de aa y las pequeas molculas
no puede separar muy bien el papel. La mejor forma para separar pool
de pptidos primero utilizar soporte en papel y despus uno va a los
distintos geles para poder utilizarlo como soporte.
Se puede trabajar con un patrn e peso conocido.
Pool de vegetales, tiene ms proteasa. La proteasa como tiene bajo peso
molecular va a migrar ms que la enzima de inters que tiene mayor
cantidad de masa molar. Vamos a suponer que nos da una fraccin de 50
kilo Dalton (50000 gramos/mol) me dice que hay una protena (bibsica
creo) . Que puede estar presente, es ms o menos como un indicador.
La textura del papel no se puede variar fcilmente, las tramas de los geles s.
GELES
1. Gel de Almidn: Para isoenzimas. Por ejemplo: Calcio ATPasa de
eritrocitos con respecto a Calcio ATP asa de Islotes de Langerans, puede
discriminarse o separase. Esa relacin de cargas va contemplando mejor
AUDIO
Trabajaron con la velocidad de migracin y graficaron Log PM en funcin al Log
Mobilidad electrofortica. Vean menor PM mayor movilidad electrofortica.
Los patrones de masas molares que hoy se utiliza, puede ser un mix de 6, 7
protenas, cuantas ms protenas tenga, es ms costoso. Un mix si est en gel
de poliacrilamida o en gel de almidn, se separn de esta manera, ya que
tienen cierta movilidad electrofortica para cada una de las masa molares
correspondientes.
En funcin a eso si tengo una muestra desconocida y si quiero conocer su
masa molar, contemplar en el mismo experimento y calcular movilidad
electrofortica y de esa manera se puede estimar su peso molecular.
A parte de ser un mtodo separativo es un mtodo para estimar la masa molar
de la biomolcula, pero hay que hacerlo en el mismo experimento.
SON MTODOS FISICOQUMICOS COMPLEMENTARIOS UTILIZADOS EN LA
MICROSECUENCIACIN DE PPTIDOS Y AA.
Con la degradacin? Se puede estar seguro que se haya separado de sus
subnidades con las tcnicas de electroforesis se puede estar seguro y evaluar
en funcin a los experimentos de Orborn la masa molar de las subunidades.
Deteccin de protenas con abundantes residuos y uniones SS.
SDS PAGE
Tcnicas estandarizadas para la determinacin de pesos
moleculares de cadena simple y de polipptidos. Ejemplo Fraccin de Ig.
Fundamento: Intercalacin con SDS, se generan estructura de ramdom coil
que va migrando dentro del gel de separacin.
Reactivos: 1 %
desnaturalizacin.
SDS,
0,1
de
mercaptoetanol
para
favorecer
la
Sirve para ESTIMAR (no para calcular) la masa molar de DNA, RNA, de aa,
polipptidos, protenas, isoenzimas, enzimas etc.
Puede ser de dos tipos:
Movimiento libre.
Movimiento zonal: Utiliza soporte que puede ser de gel de almidn,
papel, gel de agarosa etc.
Tcnicas separativas:
Electroforesis: Separar.
Sedimentacin: Solo para separar.
Filtracin: Separar, purificar y concentrar.
Aplicaciones: