http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/18conjuga.

htm
https://books.google.com.mx/books?
id=WuXjJltGSdsC&pg=PA506&lpg=PA506&dq=genes+rec&source=bl&ots=KKB
1BCzbAg&sig=ShvHLVjGKnpKQLz8AvIA2yTCaU8&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwjI
h4LpgcDOAhUCJCYKHaUZBfgQ6AEIJzAB#v=onepage&q=hfr&f=false
Romero Cabello
https://books.google.com.mx/books?
id=Wv026CUhR6YC&pg=PA659&lpg=PA659&dq=genes+rec&source=bl&ots=n
5uqkAzHJ8&sig=1N9A36EfZDP6uvDOMdfmYbnNn0&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwil5djKgsDOAhWHYiYKHXzLAUoQ6AE
IRTAF#v=onepage&q=genes%20rec&f=false

http://www.microcsalud.us.es/web/docencia/grado/biomedicina-basicaexp/virologia/practicas/gion-practica-virologia-ciclo-01.pdf

Glosario
http://www.biorom.uma.es/contenido/Glosario/D.html
Bacterifago M13:
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/DNA-recombinante/Tecnica%20DNA
%20recombinante.pdf

duplex
: bicatenario,
hbrido.
Adjetivo que se aplica a los cidos nucleicos de dos cadenas o hebras. Segn la clase de nucletidos que componen
estas
cadenas
(ribonucletidos,
desoxirribonucletidos)
admite
distintas
traducciones:
a) duplex RNA-DNA (ADN-ARN hbrido, doble hlice hbrida) cuando el cido nucleico est formado por una hebra
de
ADN
y
otra
de
ARN;
b) duplex DNA (ADN bicatenario) cuando el cido nucleico est formado por dos hebras de ADN (vase doublestranded
DNA);
c) duplex RNA (ARN bicatenario) cuando el cido nucleico est formado por dos hebras de ARN (vase doublestranded
RNA).
Observacin: los libros de texto tambin recogen las variantes doble y dplex. No son incorrectas desde el
punto de vista semntico, pero s mucho menos frecuentes que el adjetivo bicatenario.

BACTERIFAGO M13

El bacteriofago M13 tiene una cpside de tipo filamentoso dentro de la

cual se encuentra una molcula circular de ADN de hlice sencilla de
6.400 nucleotidos. Al igual que X174, tambin pasa por una forma
replicativa dplex.

Fago filamentoso M13

Esquema del bacteriofago M13

Fagos con de ADN monocatenario. El fago M13 como herramienta en

biologa molecular.
El bacterifago M13 destaca entre los fagos utilizados en biologa molecular. Se
trata de un fago de cadena sencilla circular. A diferencia del fago , este fago
infectan cepas de E. coli a travs del Pili, por ello la cepa E. coli Dh5 F resulta
un receptor idneo. Dentro de los fagos con ssDNA nos encontramos 2 familias:
Inoviridae (fago filamentoso M13, que infecta Enterobacterias ) y Microviridae
(Enterofago X174). El fago M13 es un bacterifago filamentoso de 900nm de
longitud y 6.5nm de ancho que contiene una molcula de ADN circular
monocatenario de sentido positivo encapsulado por ~2300 copias de la
protena de la capside gp8 ms cinco copias de 4 proteinas menores. El ADN se
extiende en el interior a lo largo del eje longitudinal de la partcula. Las
protenas menores estn implicadas en el inicio del ensamblaje y estabilidad de
la partcula. Las protenas gp3 y gp6 participan en la unin a la clula husped.

Cuando el fago M13 infecta a una clula bacteriana, la cadena sencilla (cadena
+) se replica y produce una molcula de doble cadena denominada forma
replicativa (RF). Las molculas RF pueden considerarse similares a los
plsmidos, pudindose insertar DNA exgeno en sitios de restriccin nicos
presentes en el DNA del fago. Cuando se reinsertan en clulas bacterianas, las
molculas RF se replican y producen cadenas sencillas (+), en las que hay una
cadena del DNA insertado. La clula hace salir los clones de DNA de cadena
sencilla que produce M13, que pueden recuperarse y utilizarse directamente
para su secuenciacin, o como molde para alteraciones mutacionales de la
secuencia clonada.

Caractersticas del Fago M13:

Simetra helicoidal. Tiene 6 nm de dimetro y 860 nm de longitud.
Infectan a travs del Pili. (E. coli Dh5 F)
Poseen DNA monocatenario circular (+).
Se forman ciertos loops por apareamientos de bases complementarias.
El ciclo replicativo es complejo: mecanismo de CIRCULO RODANTE.
En algunos casos puede integrarse en el genoma bacteriano.
Hay solapamiento de genes
Durante la replicacin, se forman FORMAS REPLICATIVAS de dsDNA. El DNA
(-) producido puede utilizarse para sintetizar mRNA.

 Puede liberarse de la clula sin lisarla, produciendo fagos continuamente.

Este fago ha sido muy utilizado en BIOLOGIA MOLECULAR. Permite la
secuenciacin de genes por el mtodo de Sanger, se puede utilizar como
vector de expresin, en ensayos de mutagnesis, as como en ensayos de
clonacin de fragmentos de gran tamao.

Tambin se utilizan otros bacterifagos como vectores, entre los que destaca el
fago de cadena sencilla M13. Cuando M13 infecta a una clula bacteriana, la
cadena sencilla (cadena +) se replica y produce una molcula de doble cadena
denominada forma replicativa (RF). Las molculas RF pueden considerarse
similares a los plsmidos, pudindose insertar DNA exgeno en sitios de
restriccin nicos presentes en el DNA del fago. Cuando se reinsertan en
clulas bacterianas, las molculas RF se replican y producen cadenas sencillas
(+), en las que hay una cadena del DNA insertado. La clula hace salir los
clones de DNA de cadena sencilla que produce M13, que pueden recuperarse y
utilizarse directamente para su secuenciacin, o como molde para alteraciones
mutacionales de la secuencia clonada.

Mutagnesis dirigida. Los avances en las tcnicas de sntesis de DNA han

acelerado los progresos experimentados en el estudio de las funciones de las
protenas y de la expresin gnica. Una de las formas ms efectiva de estudiar
la relacin entre la estructura y la funcin proteicas consiste en alterar una
porcin determinada de la protena y observar los cambios funcionales que se
producen. Hasta hace unos aos, esto se realizaba mediante la modificacin
qumica de aminocidos individuales o mediante induccin de mutaciones en el
gen que codifica la protena objeto de estudio. Sin embargo, la modificacin
qumica de una protena no siempre es especifica, ya que pueden verse
alterados varios aminocidos y no slo el que se desea alterar; por otro lado,
hasta hace unos aos no siempre era posible producir la mutacin adecuada en
la localizacin del gen que se deseaba. Estas dificultades han sido superadas
en los ltimos aos gracias a la tcnica de la mutagnesis dirigida; en ella se
sintetiza un oligonucletido de unas 20 bases que contiene el cambio de
secuencia deseado. Posteriormente se permite que dicho oligonucletido
alterado con la mutacin objeto de estudio hibride con una copia
monocatenaria del gen salvaje original completo; posteriormente se amplifica
el complejo mediante PCR, con lo que la polimerasa extiende el olignucletido
y copia el resto del gen diana para producir una nueva copia del gen con la
mutacin deseada. Si unimos el gen a un fago de DNA monocatenario como es
el caso del fago M13, puede introducirse el gen mutado en una bacteria
husped y clonarse, con lo que obtendremos grandes cantidades de una
protena mutante para el estudio de su funcin.

Virus M13

El M13 es un fago filamentoso. Se trata de un virus en forma de hilo (900 nm de

longitud, con slo 9 nm de dimetro), con un ADN en forma de anillo de una nica

hebra (tambin denominada hebra +) y una cubierta proteica de 2710 subunidades

proteicas idnticas.
El virus penetra E. coli a travs del pilus, que posibilita el intercambio de ADN
entre bacterias. M13 es muy til por la posibilidad de obtener ADN en forma de
hebras simples. Las hebras simples de los genes clonados se necesitan
especialmente para la secuenciacin del ADN y la mutagensis in vitro.

Mapa gentico del fago M13

El ADN de M13 no se integra (como en el fago lambda) en el genoma bacteriano.

No provoca tampoco la lisis de las clulas. La bacteria crece y se divide, sin
embargo, ms lentamente que las clulas no infectadas. Las clulas hijas liberan
todava fagos M13.
Por generacin se originan aproximadamente mil nuevos fagos M13. Puesto que
el husped no muere, se pueden cultivar y cosechar fcilmente en grandes
cantidades.

Fago M13

Fago M13

Azul: Protena pIII; Marrn: Protena pVI; Rojo: Protena

pVII; Verde: Protena pVIII; Fucsia: Protena pIX; Prpura:
ADN monocatenario.

Clasificacin de los virus

Grupo:

II (Virus ADN monocatenario)

Familia:

Inoviridae

Gnero:

Inovirus

Especie:

Fago M13 de Enterobacteria

[editar datos en Wikidata]

El fago M13 es un bacterifago filamentoso compuesto por una nica molcula de ADN
monocatenario circular la cual tiene aproximadamente 6407 nucletidos de longitud; esta
molcula se encuentra encapsulada en una cubierta proteica formada por aproximadamente
2700 copias de la protena mayor de recubrimiento P8, y encapuchada en los extremos por
cinco copias de dos diferentes protenas de recubrimiento menores (P9, P6, P3). La protena
de recubrimiento menor P3 permite que el fago se una a un receptor presente en la punta de
los pilli del hospedador Escherichia coli. La infeccin con bacterifagos filamentosos no es
letal para las bacterias; sin embargo la infeccin causa placas turbias en los cultivos de E. coli.
Aunque no se trata de un virus ltico, si se ha observado una disminucin en la velocidad de
reproduccin de las clulas infectadas. Los plsmidos M13 llamados fagmidos son utilizados

en numerosos procesos de recombinacin de ADN, y el virus ha sido estudiado por las

posibles aplicaciones en nanoestructuras y nanotecnologa de los principios que dominan su
proceso de encapsulamiento.

Estructura del fago[editar]

La cubierta proteica del fago se encuentra formada primariamente por un ensamble de
monmeros de una protena formada por 50 aminocidos llamada pVIII (o p8), la cual se
encuentra codificada por el gen VIII (o g8) en el genoma del fago. Un fago M13 de tipo
silvestre emplea aproximadamente unas 2700 copias de la protena p8 para formar la cubierta
que, tpicamente, tiene aproximadamente 900 nm de longitud. Sin embargo, las dimensiones
de la cubierta son flexibles y el nmero de monmeros de p8 utilizados para formarla se
pueden ajustar para empacar correctamente el tamao del genoma de cadena simple que lo
forma. Por ejemplo, cuando el genoma del fago se muta para reducir el nmero de bases de
ADN (de 6,4 kb a 221 pb),1 el nmero de copias de p8 utilizadas para empacarlo se reduce a
menos de 100, provocando que la cubierta de p8 se ajuste para acomodar el genoma
reducido. Aparentemente existe una limitacin en la capacidad del fago para contener material
gentico que est en torno al doble de su contenido normal de ADN. Sin embargo,
la delecin del gen que codifica para la protena p3 del fago previene que este pueda escapar
de su hospedador E. coli, y en estas condiciones es posible encontrar dentro de la clula
hospedadora fagos con una longitud de entre 10 y 20 veces la longitud normal, partculas
vricas que poseen varias copas del genoma del fago.
Existen tambin otras cuatro protenas en la superficie del fago, dos de las cuales han sido
extensamente estudiadas. En uno de los extremos del filamento hay cinco copias de la
protena de superficie pIX (p9) y de su protena acompaante pVII (p7) que se encuentra ms
profundamente enclavada en la cubierta proteica del fago. Si fuera posible comparar a la
protena p8 con el material del cual est formada el asta del bastn que es el fago, entonces
p7 y p9 forman el pomo que es posible ver en las microfotografas. Estas protenas son muy
pequeas, conteniendo 33 y 32 aminocidos respectivamente, sin embargo es posible aadir
residuos a la porcin terminal de cada una, ya que esta porcin se encuentra presente en la

parte exterior de la cubierta. En el otro extremo del fago hay cinco copias de la protena pIII
(p3) expuestas en la superficie y de la protena accesoria pVI (p6) la cual se encuentra un
poco menos expuesta. Estas forman el extremo redondeado del fago y son las primeras
protenas en interaccionar con el hospedador E. coli en el momento de la infeccin. La
protena p3, es adems el ltimo punto de contacto con el hospedador cuando la partcula
viral abandona la superficie bacteriana.

Ciclo vital del fago[editar]

Las etapas generales del ciclo de vida viral son: infeccin, replicacin del genoma viral,
ensamble de nuevas partculas virales, y liberacin de la progenie de partculas del
microorganismo hospedador.

Infeccin[editar]
Los fagos filamentosos utilizan una estructura bacteriana conocida como pilus F para infectar
a E. coli. La protena p3 del extremo del fago se ancla a la protena To1A del pilus bacteriano
permitindole al fago transferir su genoma hacia el citoplasma de la bacteria, donde las
enzimas de la maquinaria metablica bacteriana convierten el genoma formado por una
cadena simple de ADN (llamada cadena positiva o +), en la forma replicativa (FR) de ADN
doble cadena. Esta forma replicativa sirve adems de molde para la expresin de los genes
virales.

Replicacin del genoma[editar]

El ADN de fago que entra en la clula es de cadena sencilla y se lo suele llamar "hebra +".
Apenas penetra en la clula, la ARN polimerasa de la clula hospedadora sintetiza un cebador
en el origen de replicacin. La ADN polimerasa de la clula hospedadora empieza a sintetizar
la cadena complementaria que se denomina "hebra -". Cuando la Pol III encuentra el cebador
se disocia del ADN. Luego la ADN Pol I con actividad exonucleasa 5'elimina el cebador y llena
la brecha. Finalmente la ligasa suelda los dos tramos de ADN recin sintetizados. La sntesis
de la cadena - da lugar a un ADN de doble cadena llamado "forma replicativa".
Dos productos de los genes del virus cumplen un rol crtico en esta etapa del ciclo de vida del
fago: Estos son la protena pII (p2) que es una endonucleasa y provoca una "muesca" en el
genoma viral cuando se encuentra en su forma de doble cadena, para posibilitar la iniciacin
en la replicacin de la cadena + y permanece unida al fosfato en el extremo 5' dejando el
extremo 3' libre. Sin la presencia de p2, no se puede producir la replicacin del fago. Las
enzimas de la bacteria hospedadora van completando las cadenas + con su cadena

complementaria formando de esta manera mltiples copias del ADN viral en su forma de doble
cadena. La protena pV (p5) compite con la formacin de ADN de doble cadena secuestrando
copias sencillas de la cadena + formando un complejo nucleoproteico que servir de ncleo
para la formacin de nuevas partculas virales.
La protena Rep del husped es una helicasa que ayuda a desenredar el ADN en el punto
donde se encuentra la muesca. La ADN Pol III del anfitrin utiliza extremo 3' libre como un
cebador para la sntesis de una nueva hebra +, mientras que la vieja se quita. Una vez
completada la replicacin se obtienen dos molculas de ADN: una circular de doble cadena y
una de cadena sencilla, sobre esta ltima acta la protena p2 soldando el extremo 5 'y 3' por
medio de una reaccin de transesterificacin recreando de esta forma una hebra +. Este
proceso contina hasta que se empieza a acumular p5. Esta protena se une al ADN de
cadena sencilla + y evita que se siga replicando.
Existe adems una protena adicional codificada por el genoma del fago, la pX (p10), que es
importante para regular el nmero de genomas de doble cadena en el hospedador bacteriano.
Sin la protena p10 no se acumulan cadenas +. Lo que resulta particularmente interesante con
respecto a esta protena es que es idntica a la porcin carboxilo terminal de p2, ya que el gen
que codifica para p10 se encuentra de hecho dentro del gen p2 y la protena surge de
una iniciacin diferencial de la transcripcin dentro del gen de p2. Esto hace que la
manipulacin de p10 se encuentre inextricablemente unida a la manipulacin de p2 (un
verdadero dolor de cabeza desde el punto de vista de la ingeniera) pero esto logra una
estructura gentica sumamente compacta y eficiente en la naturaleza.

Ensamble de las partculas virales[editar]

La maduracin del fago requiere de las protenas pIV (p4), pI (p1) codificadas tambin en el
genoma viral, y de la protena pXI (p11). Esta ltima es una protena codificada por el mismo
gen pI, y es producto de un punto de iniciacin de transcripcin diferencial. En la membrana
externa de la bacteria se ensamblan mltiples copias (generalmente entre 12 y 14) de p4 para
formar una estructura estable con forma de barril. En forma similar un puado de p1 y p11 (5 o
6 copias de cada una) se ensamblan en la membrana interna de la bacteria, y la evidencia
gentica sugiere que las porciones C terminales de p1 y p11 interaccionan con la porcin N
terminal de p4 en el periplasma. Estas protenas en conjunto, p1, p11, p4; forman un complejo
en forma de canal a travs del cual el fago maduro es secretado de su hospedador bacteriano.

Excresin[editar]

Para iniciar la secrecin del fago, dos de las protenas menores de la envoltura: p9 y p7,
interactan con el complejo formado por ADN monocatenario y p5 a la altura de la regin del
ADN llamada secuencia de empaque (tambin conocida como secuencia PS). Entonces las
protenas p5 que recubren la hebra de ADN monocatenario son reemplazadas por las
protenas p8 que se encuentran empotradas en la membrana celular de la bacteria y el fago
en crecimiento es "hilado" al atravesar el canal formado por p1, p11 y p4. Este proceso de
reemplazo de p5 por p8 explica la evidencia de microfagos presentada anteriormente
indicando como es que el tamao de la partcula viral se encuentra determinado por el nmero
de bases empacadas dentro del fago. Una vez que el ADN viral se encuentra completamente
recubierto con p8, se finaliza la secresin aadiendo los capuchones p3/p6 y el fago se
desprende de la superficie bacteriana.

Replicacin en E. coli
Debajo se listan los pasos involucrados en la replicacin del fago M13 en el anfitrin E. coli.

La cadena de ADN viral (+) entra al citoplasma.

Las enzimas bacterianas sintetizan la cadena complementaria (-).

La ADN girasa, una topoisomerasa tipo II, acta sobre el ADN de doble cadena y
cataliza la formacin de superenrrollamientos de ADN doble cadena.

El producto final es la forma replicativa (RF) parental de ADN.

Una protena del fago, pII, hace una muesca en la cadena RF (+).

El extremo 3'-hidroxilo acta como cebador en la creacin de una nueva cadena viral.

La pII forma cadenas circulares a partir de la cadena (+) viral.

Se produce un reservorio de molculas RF de doble cadena como progenie.

La cadena (-) de la RF funciona como molde para la transcripcin.

Los ARNm son traducidos a protenas del fago.

Los dmeros pV unen a las cadenas simples de ADN recin sintetizadas, y previenen
la conversinn de estas a ADN RF.

La sntesis de ADN RF contina hasta que pV alcanza una concentracin crtica

La replicacin del ADN cambia hacia la sntesis de ADN viral (+) de simple cadena.

Se forman estructuras de pV-ADN de aproximadamente 800 nm de longitud y 8 nm de

dimetro.

Los complejos pV-ADN sirven como sustrato para la reaccin de ensamble del fago.

M13 como vector de clonacin[editar]

Dado que el ADN de M13 es monocatenario, este bacterifago es un vector conveniente para
la clonacin de ADN. La longitud de su genoma no es fijo y por lo tanto es capaz de aceptar
ADN extrao sin comprometer la viabilidad del fago. Un vector de clonacin particular que
explota el ciclo de vida del fago M13 se llama "fagmido".
El fagmido es una molcula circular de ADN de doble cadena de plsmido que contiene un
origen de replicacin (ori V) y el origen de replicacin de M13 pero que no contiene los genes
que codifican para las protenas estructurales del fago. En un fagmido se puede clonar una
secuencia de ADN de inters que se desea que se exprese en una poblacin de clulas
mediante la explotacin de la infeccin por fagos. Debido a que el fagmido contiene solo el
origen de replicacin de fago, es incapaz de generar las protenas estructurales necesarias
para el ensamblaje del fago y para el empaquetamiento del ADN dentro de l. Por esta razn,
se utiliza el fago auxiliar M13K07. Este fago contiene un origen de replicacin y de codificacin
para todas las protenas estructurales necesarias para el montaje de la forma infectiva del
fago. Cuando las clulas que contienen el fagmido se superinfectan con M13K07, la Gp2
producida por los genes del M13K07 reconoce como secuencia de origen de fago a la que se
encuentra presente en el fagmido por lo que en consecuencia es capaz de replicarse y de
empaquetarse junto con las protenas estructurales codificadas por el fago auxiliar.

Otras investigaciones
George Smith, entre otros, mostr que los fragmentos producidos por la endonucleasa EcoRI
pueden ser soldados en un sitio Bam nico de los fagos filamentosos f1, y por lo tanto resultar
expresados en el gen III; cuya protena pIII resulta accesible desde el exterior. ste no es el
nico sitio Bam existente en el gen III de M13. Se puede modificar al M13 para obtener
diferentes sitios de insercin accesibles, hacindolo til en su flexibilidad para el manejo de
insertos de diferente tamao. Debido a que el sistema de expresin M13 permite una gran
flexibilidad en la localzacin y nmero de protenas recombinantes que pueden obtenerse del
fago, es una herramienta popular para la construccin e investigacin de nanoestructuras. 2 por
ejemplo, el fago puede ser genticamente modificado para expresar protenas diferentes en
sus extremos y en su segmento medio. Esto puede ser utilizado para ensamblar estructuras
tales como nanocables de oro u xido de cobalto para la fabricacin de bateras,3 o para
empacar nanotubos en forma de manojos orientados para su utilizacin en celdas
fotovoltaicas.4

MUTANTE
SUPRESO
RA

Mutante condicional
Mutante que expresa el fenotipo normal bajo determinadas condiciones (permisivas) y el
fenotipo mutante bajo otras condiciones (restrictivas).

Existen tres codones de terminacin, que reciben distintos nombres. UAG, el primero
descubierto, se conoce como codn mbar; UGA, como codn palo; y UAA, como
codn ocre.3 4

-Por tRNA supresores: esto ocurre cuando la mutacin afecta a un tARN. Este nuevo tARN
mutado puede incorporar un aa en lugar de un codn de parada al leer la secuencia de ARN.
Esto es debido a una mutacin en la regin del ARN que codifica para el anticodn en el
tRNA. Este proceso no es completamente efectivo, ya que parte se sintetizar como protena
truncada y parte como normal (en este caso participar el tRNA mutado). Las cepas en las
que existe este doble mutante tienen un crecimiento lento debido a la falta de protena correcta
en cantidad suficiente.
Relacionados

Lee todo en: Efectos de las mutaciones genticas | La gua de

Biologa http://biologia.laguia2000.com/genetica/efectos-de-las-mutacionesgeneticas#ixzz4HvMz3fRt

https://books.google.com.mx/books?id=ALR9bgLtFhYC&pg=PA476&lpg=PA476&dq=mutaci
%C3%B3n+supresora&source=bl&ots=droS_hopsy&sig=vgjGqbg4_ILF4cpvZuVck7e7ADQ&hl=es&sa=X&sqi=2&ved=0ahUKEwipypuBp9HOAhWJbSYKHQ
nODrkQ6AEIPjAF#v=onepage&q=mutaci%C3%B3n%20supresora&f=false

https://books.google.com.mx/books?
id=NVVtJcqvVxgC&pg=PA150&lpg=PA150&dq=mutante
+condicional+AMBAR&source=bl&ots=OIDUFB3PP&sig=GuzBDOc94fymkrmfAgQc1F2H2cI&hl=es
&sa=X&ved=0ahUKEwjH45jEk8rOAhUJdyYKHYryCTAQ6
AEIIDAB#v=onepage&q=mutante%20condicional
%20AMBAR&f=false

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Clase09_23
097.pdf

Introduccin Antes de mencionar la conjugacin tenemos que hacer mencin

de la recombinacin gentica la cual hace referencia a la sustitucin de uno o
ms genes presentes en el cromosoma de una clula por los del cromosoma de
otra clula genticamente distinta. Dicha recombinacin puede presentarse de
tres maneras distintas: Conjugacin, Transformacin y Transduccin Cuando la
transferencia gentica se produce entre miembros de la misma especie se le
llama transferencia vertical de genes; cuando esta ocurre entre miembros de
especies distintas se usa el trmino transferencia horizontal. Para que se d el
proceso de conjugacin deben de existir contacto fsico entre la bacteria
donadora de ADN y la receptora. La capacidad de donar la proporciona el
poseer un plsmido al cual se le denomina conjugativo, factor de fertilidad o
plsmido sexual. La conjugacin entre bacterias Gram negativas suele ocurrir a
travs de Pili sexuales codificados por el plsmido conjugativo. Estos plsmidos
conjugativos sern los siguientes: F: plsmido autnomo, libre en el
citoplasma Hfr :plsmido integrado en el cromosoma celular F: plsmido
autnomo modificado por marcadores cromosmicos Entre stos el mejor
estudiado es el plsmido F de Escherichia coli. Las bacterias que lo poseen (F+)
sintetizan 2 o 3 pili con los que contactan con bacterias receptoras y se
acercan a ellas. Entonces el plsmido F se rompe por un lugar fijo (el origen de
transferencia), y una de sus cadenas pasa a travs del puente citoplsmico
creado por el pili, hasta el citoplasma de la clula receptora. Mientras tanto la
otra gira en el citoplasma de la donadora (mecanismo del crculo rodante). En
ambos citoplasmas se van sintetizando las cadenas complementarias de forma
que al final del proceso ambas bacterias poseen un plsmido F completo. Por
tanto la conjugacin convierte a la bacteria receptora (F-) a su vez en donadora
(F+), lo que acelera el proceso de extensin del plsmido, y puede ocurrir entre
bacterias de la misma o de diferentes especies relacionadas. Joshua
Lederberg y Edward Tatum (1946) mezclaron dos cepas doblemente
auxotrofas, dotadas de distintos marcadores genticos. En los aos de 1950
Joshua Lederberg y William Hayes, cada uno por separado, aislaron un nuevo
tipo de cepas frtiles a partir de las cepas F+ originales, cuyas propiedades
distintivas respecto de las cepas F+ Alan Cambell propuso en 1962 un modelo
hipottico que posteriormente se vio confirmado por otros experimentos, y que
daba cuenta del comportamiento de las cepas F+ de Lederberg y de las Hfr de
Lederberg y Hayes. Estos autores, que trabajaban en el Instituto Pasteur de
Pars, realizaron a partir de 1956 una importantsima serie de experiencias, que
demostraron que la transferencia conjugativa tiene una polaridad (un sentido
determinado): la transferencia de ADN por cada cepa Hfr es unidireccional y
linear, o sea, los genes del donador van entrando al receptor en un orden
determinado. Resultados Tabla 1. Ttulo de las clulas donadoras y receptoras
para la cruza CSH62 X RC712 (Hfr y Rec+). Cepa Dilucin No de Colonias Ttulo

CSH62 (Donadora) 330/314 50/50 RC712 (Receptora) 224/200 35/37 Tabla 2.

Ttulo de las transconjugantes resultantes de la cruza de CSH62 y RC712.(Hfr y
Rec+). Medio Dilucin No de Colonias Ttulo G8 55/50 4/2 G9 93/91 5/8 G10
280/298 16/15 Frecuencia de reversin* *Las dos colonias fueron encontradas
en los medios G8 y G10. Frecuencia de recombinacin de la cruza CSH62 x
RC712 Tabla 2.1 Ttulo de transconjugantes resultantes de la cruza JC4046 x
KL323 y la cruza CSH62 X KL323 Cruza Medio No de colonias Dilucin Titulo
JC4046 X KL323 G8 513 G9 Sin crecimiento - - G10 Sin crecimiento - - CSH62 X
KL323 G8 Sin crecimiento - - G9 Sin crecimiento - - G10 Sin crecimiento - Frecuencia de recombinacin de las cepas JCC4046 X Kl323 Tabla 2.2 Ttulo de
transconjugantes resultantes de la cruza JC4046 x RC712 Medio Dilucin
Colonias Ttulo G8 Incontable Incontable 62/101 G9 2/2 1/1 G10 8/20 No hubo
crecimiento No se encontraron revertantes Frecuencia de recombinacin
Discusin Para la cruza de las cepas (y de todas las que se realizaron) CSH62 x
RC712 se sembraron cada cepa en los medios de seleccin que fueron G8, G9 y
G10 los cuales contenan estreptomicina que es un contraselector y ste se
utiliz para que las cepas donadoras no pudieran crecer adems de contener lo
anterior mencionado tambin contienen Prolina y triptofano el medio G8 con el
cual se pud identificar a las His+, el G9 contena histidina y prolina con el cual
se pudo indentificar a las Trp+ Y EL G10 que contena Histidina y triptofano se
lorgr identificar a los Pro+, esto se realiz para determinar la frecuencia de
reversin, y que con esto se pudiese cuantificar de manera adecuada la
trasferencia de material gentico, ya que sabiendo la frecuencia de reversin
se podra saber de manera adecuada la frecuencia de recombinacin de las
cruzas, restando el valor de la frecuencia de reversin a la frecuencia de
recombinacin, pero en este caso al ser la fecuencia de reversin muy pequea
se pudo despreciar ese valor, por lo cual no se resto a la frecuencia de
recombinacin. La cruza de CSH62 x RC712 al ser una Hfr y la otra F- y Rec+,
esto ultimo nos indica que tiene un sistema para recombinacin con lo cual se
esperaba que la cruza se llevara acabo, y para esto, la cruza se sembr en los
medios de seleccin G8, G9 y G10, que contenan los aminocidos ya
mencionados anteriormente. En el medio G8 se encontraron menos
transconjugantes con respecto a los otros medios, esto debido a que en el DNA
de la bacteria Hfr, el marcador de la histidina se encuentra posterior a los de
Prolina y Triptofano, razn por la cual tiene una frecuencia de trasnferencia
menor con respecto a estos, y por tal motivo en los dems medios se pudo
observar como el marcador de Triptofano fue el segundo en tener un mayor
nmero de trasnconjugantes y finalmente en el medio G10 para indentificar a
las Pro+ hubo un mayor nmero de trasnconjugantes debido a lo mismo, ya
que este marcador en el genoma de bacteria es el que se encuentra mas
cercano al origen de la replicacin del DNA con lo cual hubo una mayor
frecuencia de trasnferencia. En la cruza de JC4046 x RC712, la cepa donadora
al ser F significa que contiene en el plsmido un pedazo del DNA genmico y
est plsmido contiene el marcador de histidina, y al ser el plsmido lo primero
en transferirse se encontr que el marcador para histidina fue el de mayor
frecuencia por tal razn. Por otro lado el de menor frecuencia fue el marcador
de prolina y esto se debe a lo mismo ya que el marcador para ste, no se

encontraba cerca del origen como la histidina. Para las cruzas que contenan
cepas con Rec- que fueron la cruza JC4046 x KL323 y la cruza CSH62 X KL323,
las cepas receptoras al no tener un sistema recombinante, o sea, que no
puedan poder integrar un DNA ajeno al genmico, se esperaba que no se
encontraran transconjugantes, sin embargo en la cruza de JC4046 x KL323 se
encontr un marcador para la prolina, esto se debi a que en la cepa donadora
se pueden formar Hfr temporales para poder transferir el DNA y dependiendo
del lugar donde se pegue el marcador en el DNA de la receptora, ste ser la
frecuencia con la que se transfiere, y por ese motivo slo en un medio se
encontr que las transconjugantes resultantes tuvieran un marcador para la
Prolina. Para la experiencia que requera el fago, no se obtuvo resultado, pero
sin embargo se esperaba que con el fago M13 hubiera un pequeo halo de
inhibicin que realmente era un halo de crecimiento tene de las bacterias, y
que al utilzar este fago, se esperaba poder saber el tipo sexula de las
trasnconjugantes obtenidas, ya que el fago al ser tener su sitio de fijacin en la
protena pilina del extremo del pili, se esperaba que con esto se pudiera
indentificar a las sexductantes. Conclusiones En la cruza CHS62 x RC712 el
marcador transferido de mayor frecuencia es el de Prolina. No hay
recombinacin en la cruza de una Hfr y una Rec-. En la cruza JC4046 x RC712
el marcador trasnferido de mayor frecuencia es el histidina. Bibliografa. 1.
BD..Davis, R.Dulbecco Tratado de microbiologa, Salvat editores, S.A, Espaa
1972 (204-214). 2. http://cienciasnaturales.es/CONJUGACION.swf. 3.
http://cvb.ehu.es/open_course_ware/castellano/salud/tecnicasmol/tema2pdf.pdf

AGAR
ES

El ensayo de formacin de colonias en agar blando es una tcnica ampliamente utilizada para
evaluar la transformacin celular in vitro. Histricamente, se utiliz otro ensayo, el ensayo
clonognico, descrito por Pucket al. En 1956 para evaluar la capacidad de las clulas para
formar colonias 1. En esta tcnica, las clulas se dispersaron en una placa de cultivo y se
cultivaron en la presencia de clulas alimentadoras '' o medio acondicionado para proporcionar
factores de crecimiento necesarios. La limitacin de esta tcnica es que slo se proporciona
informacin con respecto a la formacin de colonias. Las clulas normales se impide el
crecimiento independiente de anclaje, debido a un tipo particular de muerte apopttica,
denominado anoikis 2.Sin embargo, las clulas transformadas tienen la capacidad de crecer y
dividirse sin unirse a un sustrato. Para sacar provecho de este concepto, los investigadores
desarrollaron el ensayo de formacin de colonias en agar blando. El ensayo de formacin de
colonias en agar blando desde entonces ha sido modificada, en aos ms recientes, para
abordar specific necesidades. Una variacin consiste en la incorporacin de colorante

fluoromtrico para permitir de alto rendimiento recuento de colonias. Otra variacin implica el
uso de solucin especializada agar para permitir la recuperacin de clulas viables despus
de la formacin de colonias cuando se necesitan muestras de protenas o de ADN.
En el ensayo de formacin de colonias en agar blando tradicional, las clulas se cultivan en
una capa de agar blando mezclado con medio de cultivo celular que descansa sobre otra capa
de agar blando, tambin mezclado con medio de cultivo celular, pero que contiene una mayor
concentracin de agar. Esto evita que las clulas se adhieran a la placa de cultivo, sin
embargo, permite que las clulas transformadas para formar colonias visibles. El fundamento
de esta tcnica es que las clulas normales dependen de contacto clula a la matriz
extracelular para ser capaz de crecer y dividirse. Por el contrario, las clulas transformadas
tienen la capacidad de crecer y dividirse independientemente de su entorno. Por lo tanto, las
clulas capaces de formar colonias de una manera independiente de anclaje fueron
considered a transformar y cancergeno. El objetivo general de este mtodo es medir esta
capacidad en las clulas de una manera semi-cuantitativa y rigurosa.

https://books.google.com.mx/books?
id=TX4UDZaKIUsC&pg=PA555&lpg=PA555&dq=tipos+sexuales+de+escherichia+coli&source
=bl&ots=NmOX2KrDSD&sig=suh605pHWpoB3GkwMbro2tG93_Q&hl=es&sa=X&ved=0ahUKE
wiHoK6B39LOAhWCSCYKHWSbB3oQ6AEITTAK#v=onepage&q=tipos%20sexuales%20de
%20escherichia%20coli&f=false

http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/18conjuga.htm