Funcin Heptica

Transaminasas y Fosfatasas
Dr. Jos C. Jara Aguirre
Escuela de Tecnologa Medica
Facultad de Medicina Alberto Hurtado
Universidad Peruana Cayetano Heredia

 ENZIMAS
Transaminasa de Alanina (ALT-TGP) o transaminasa
glutamico piruvica

Transaminasa de Aspartato (AST-TGO) o

transaminasa glutamico oxalacetica

Distribucin Tisular

Tipos de Metodos

1. Metodo colorimetrico de punto final

Metodo de Rietman y Frankel

2. Metodo enzimatico de puntos

multiples UV
Metodo de Wrobleski y La Due
Metodo de Karmen

Metodo de punto final colorimetrico

Metodo de punto final colorimetrico

Metodo de puntos multiples UVWrobleski y LaDue / ALT, segun

IFCC

ALT, segun IFCC

El piruvato formado se acoplad a la

reaccion conla enzima lactato
deshidrogenasa (LD), y se cuantifica la
desaparicion del NADH + H a 340 nm

ALT, segun IFCC sin piridoxal

Metodo descrito Karmen /AST,

segn IFCC sin piridoxal

AST

ALT

Calculo de Resultados

0,1
0,1
0,1
0,05

A1
A2
A3
A4
A5

abs 340 nm
0,3
0,4
0,5
NADH+H
0,6
0,65

tiempo (minutos)
0
1
2
3
4

Abs/min = el promedio de A2 - A1 con A3-A2 con

A4- A3 y no A5-A4, ya que se pierde linearidad
Act ( U/ L) =

Abs/min x factor

FOSFATASA ALCALINA

Fosfatasa alcalina

Las
fosfatasas
alcalina
son
enzimas
ampliamente distribuidas en el organismo.
Las fosfatasas son un grupo de enzimas que
catalizan la transferencia de un grupo fosfato
con la consiguiente formacin de un alcohol y
de un ortofosfato inorgnico, en condiciones
de pH acido menor de 5

H2O

OR O P OOH

FA

R OH +

H2PO4

cofactores inorgnicos (Mg++, Zn++).

Fosfatasa alcalina-Isoenzimas

En el adulto proviene :
Hgado (fraccin termoestable)
Hueso, sistema retculoendotelial
vascular (fraccin termolbil)

Fosfatasa alcalina

Aumento fisiolgico :
1.- Al Final del primer trimestre del
embarazo,
a
expensas
de
la
isoenzima placentaria que en este
perodo alcanza niveles mximo
(aproximadamente el doble de los
valores normales).

Fosfatasa alcalina

Aumento fisiolgico :
2.-Crecimiento esqueltico en edad
infantil y adolescente. Despus de la
pubertad los valores retornan a sus
niveles normales.

Fosfatasa alcalina

Metodo de Referencia : Bowers y

McComb
Punto final colorimetrico
FA

pNFp

Mg++

pNfenol
Incoloro medio alcalino
por NaOH = amarillo
Abs max =405 nm

Metodos de Analisis de Fosfatasa

Alcalina

Mtodo de Bowers y
McCoomb
Mtodo de referencia

Buffer (MAP) pH 10.2

Incubacin: 30C
Se mide a 400 a
420nm
La intensidad del
color es proporcional
a la actividad de la
fosfatasa.
Sustrato PNPP para
dar NPP

Condiciones de la Actividad
Enzimatica

Requiere el Mg+ para su activacin y es

inhibido por el Ca++ y el Pi
Se recomienda una T de 25 A 37 C
Cuando el aceptor del fosfato es el H2O se
forma Pi.
El pH ptimo es aproximadamente 10
Se requiere Buffer Transfosforilantes
( MAP,DEA,TRIS) y sustrato (PNPP,NPP)

FOSFATASA ALCALINA

Muestra
Suero
Plasma heparinizado

Principales interferencias
EDTA, citrato, oxalato, fosfato inorgnico,
calcio y sulfato de amonio. Los
anticoagulantes como EDTA, oxalato y
citrato inhiben la enzima por complejar el
Mg++
Hemolisis leve es aceptable evitando
hemolisis visibles. La bilirrubina no
interfiere con los mtodos cinticos que
utilizar el pNPP como sustrato.
La muestra se debe tomar con 8hrs de
ayuna procesarlo al instante o guardarlo a
en congelacion

PATRON COLESTASIS

U/l

TGP

TGO

GGT

FA

TIEMPO

PATRON HEPATITIS

U/l

TGP

GGT

TGO

FA
TIEMPO

PATRON HEPATITIS ALCOHOLICA

GGT

U/l
TGO y FA

TGP

TIEMPO