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PRACTICA #02

1.HISTORIA DEL MICROSCOPIO


El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece
en la obra de William Harvey sobre la circulacin sangunea al mirar al
microscopio
los capilares
sanguneos,
y Robert
Hooke public
su
obra Micrographia.
En 1665 Robert Hooke observ con un microscopio un delgado corte
de corcho y not que el material era poroso, en su conjunto, formaban
cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llam clulas. Se
trataba de la primera observacin de clulas muertas. Unos aos ms
tarde, Marcello Malpighi, anatomista y bilogo italiano, observ clulas vivas.
Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio.
A mediados del siglo XVII un holands, Anton van Leeuwenhoek, utilizando
microscopios simples de fabricacin propia, describi por primera
vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glbulos rojos. El microscopista
Leeuwenhoek, sin ninguna preparacin cientfica, puede considerarse el
fundador de la bacteriologa. Tallaba l mismo sus lupas, sobre pequeas
esferas de cristal, cuyos dimetros no alcanzaban el milmetro (su campo de
visin era muy limitado, de dcimas de milmetro). Con estas pequeas
distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observ los glbulos de la
sangre, las bacterias y los protozoos; examin por primera vez los glbulos
rojos y descubri que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no
revel sus mtodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron
cedidos a la Royal Society de Londres.
Durante el siglo XVIII continu el progreso y se lograron objetivos acromticos
por asociacin de Chris Neros y Flint Crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y
mejorados por John Dollond. De esta poca son los estudios efectuados
por Isaac Newton y Leonhard Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que
la dispersin y la refraccin se podan modificar con combinaciones adecuadas
de dos o ms medios pticos, se lanzan al mercado objetivos acromticos
excelentes.
Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecnicos que
aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron
por el momento mejoras pticas. Las mejoras ms importantes de la ptica

surgieron en 1877, cuando Ernst Abbepublic su teora del microscopio y, por


encargo de Carl Zeiss, mejor la microscopa de inmersin sustituyendo el
agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A
principios de los aos 1930 se haba alcanzado el lmite terico para los
microscopios pticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o
1,000X. Sin embargo, exista un deseo cientfico de observar los detalles de
estructuras celulares (ncleo, mitocondria, etc.).
El microscopio electrnico de transmisin (TEM) fue el primer tipo
de microscopio electrnico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar
de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue
desarrollado
por Max
Knoll y Ernst
Ruska enAlemania en
1931.
Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido.

2.TIPOS Y PARTES DEL MICROSCOPIO

Microscopio ptico

Microscopio simple

Microscopio compuesto

Microscopio de luz ultravioleta

Microscopio de fluorescencia

Microscopio petrogrfico

Microscopio en campo oscuro

Microscopio de contraste de fase

Microscopio de luz polarizada

Microscopio con focal

Microscopio electrnico

Microscopio de iones en campo

Microscopio de sonda de barrido

Microscopio de efecto tnel

Microscopio de fuerza atmica

Microscopio binocular

Microscopio reflector
PARTES DEL MICROSCOPIO: se deben considerar dos
partes:
1. PARTE MECNICA.
2. PARTE OPTICA.
PARTE MECNICA: es un sistema que mantiene en posicin la parte
ptica y se encuentra formada por los siguientes elementos:

1. PIE: es el que sirve de base al instrumento. Es slido y muy pesado.


2. COLUMNA: es un vstago vertical que parte del pie y sostiene al tubo
y a la platina.
3. TUBO: sostiene l o los oculares y los objetivos. Estos ltimos estn
colocados en un tambor giratorio llamado revolver.
Para el desplazamiento del tubo o de la Platina y lograr el enfoque
correcto, existe un Sistema de Enfoque, formado por dos Tornillos:
Tornillo Macromtrico: que es el que permite efectuar
movimiento amplio.

Tornillo Micromtrico: que es el que permite realizar los

movimientos finos.
Con el tornillo Macromtrico se busca el punto aproximado de enfoque y
luego con el tornillo Micromtrico se obtiene el punto exacto.
4. PLATINA: es el lugar donde se coloca el material a observar, el cual
est sustentado en un portaobjetos. La platina presenta una abertura
central, a travs de la cual pasa la luz, y un carro mecnico que permite
movilizar el preparado. Esto se realiza por medio de un tornillo de
desplazamiento lateral y anteroposterior.

PARTE OPTICA: sta parte consta de los siguientes elementos:


Dos sistemas de lentes convergentes centradas: Objetivo y Ocular.
Condensador.
Diafragma.
Fuente luminosa.
1. Objetivo: llamado as porque se halla prximo al objeto a examinar.

Es un sistema de lentes ubicadas en la parte inferior del tubo. Existen


dos tipos de objetivos: los objetivos a seco y los objetivos a
inmersin. Los objetivos a seco son aquellos en los que entre la lente
y el objeto existe una pequea capa de aire. Este tipo de objetivos
son los de menor aumento. Los objetivos a inmersin son aquellos
en los cuales se interpone entre la lente y el objeto un lquido (aceite
de cedro) el cual tiene un ndice de refraccin que es semejante al
del cristal de la lente.
2. Ocular: es llamado de sta forma porque se halla prximo al ojo del
observador. Est formado por un sistema de lentes convergentes.
Los microscopios pueden tener dos modelos de oculares: modelos
de un solo ocular (monocular) o modelos con dos oculares
(binoculares). Su funcin es la de aumentar la imagen proyectada por
el objetivo.
3. Condensador: recibe la luz y la intensifica, permitiendo una mayor
claridad de la imagen.

4. Diafragma: su funcin es la de graduar la cantidad de luz que reciba


el objeto.
5. Fuente luminosa: es una lmpara que se encuentra al pie del

microscopio.
6. Porta filtro: es el lugar donde se coloca un filtro, generalmente de
color azul, para obtener una luz homognea y parecida a la luz
natural. En algunos modelos de microscopio el filtro est incorporado
a la lmpara.

3.USOS DEL MICROSCOPIO


El microscopio es sin duda el elemento ms importante en cualquier
laboratorio. Nos permite, por ejemplo, ver clulas, microorganismos y bacterias,
lo
cual
es
imposible
de
observar
a
simple
vista.
Con el microscopio hemos descubierto infinidades de cosas que nos han
ayudado a evolucionar como por ejemplo hames descubierto enfermedades
que seran imposible de detectar sin la ayuda del microscopio tambin hemos
descubierto las cura para esas y muchas ms enfermedades. El microscopio
ha sido una de las herramientas esenciales para el estudio de las ciencias de la
vida. Abri el ojo humano hacia una nueva dimensin. Tanto es as que

actualmente, el microscopio nos permite observar el "corazn" mismo de la


materia: los tomos.
Los microscopios pueden ser utilizados en distintas reas, como pueden ser:

Escuelas

Laboratorios clnicos

Hospitales

Industria farmacutica

Industria biolgica

Industria alimenticia

4.CMO SE FORMA
MICROSCOPIO?

LA

IMAGEN

DEL

La imagen en un microscopio se forma por la transmisin de los rayos


provenientes de una fuente luminosa a travs del objeto. Los rayos
luminosos atraviesan el diafragma, que a manera de iris, delimita el
dimetro del haz lumnico que penetra por el condensador. Este ltimo,
est formado por un sistema de lentes convergentes que concentra y
proyecta el haz lumnico sobre el objeto a examinar, a travs de la
abertura de la platina. El objetivo recoge la luz que atraves el objeto
examinado y proyecta una imagen real, invertida y aumentada que se
forma dentro del tubo y que es recogida por el ocular que es la segunda
lente, la cual forma una imagen virtual, invertida y aumentada del objeto
examinado.

Imagen real: significa que podr ser recogida por una pantalla o por
una placa fotogrfica.

Imagen virtual: es una impresin subjetiva que no puede ser


recogida ni por pantalla ni por placas fotogrficas.

5.POR QU SE USA EL ACEITE DE


INMERSIN CON EL OBJETIVO DE 100X
SOLAMENTE
Los aceites de inmersin son sustancias transparentes con las propiedades
pticas y las caractersticas de viscosidad necesarias para su uso en

microscopa. Los aceites tpicos utilizados suelen tener un ndice de


refraccin de alrededor de 1,515. Un objetivo de inmersin es una lente
especialmente diseada para ser utilizada de este modo. Muchas
lentes condensadoras tambin proporcionan una resolucin ptima cundo
estn inmersas en aceite.
El primero en desarrollar est tcnica a mediados del siglo XIX fue el ptico
italiano Giovanni Battista Amici (1786-1863).
Antes del desarrollo de los aceites de inmersin sintticos en la dcada de
1940, el aceite de cedro era ampliamente utilizado. Este aceite tiene un ndice
de refraccin de aproximadamente 1,516. La apertura numrica de los
objetivos correspondientes generalmente est alrededor de 1,3. Aun as, el
aceite de cedro tiene una serie de desventajas: absorbe luz azul y ultravioleta,
amarillea al envejecer, y tiene acidez suficiente para causar daos potenciales
a los objetivos con su uso repetido (ataca los adhesivos utilizados para unir
las lentes), que al diluirse en el aceite alteran su viscosidad (y los ndice de
refraccin y dispersin). Adems debe ser retirado del objetivo inmediatamente
despus de su uso para evitar que pueda endurecerse en contacto con la lente,
con el riesgo de averiarla en el proceso de retirar el aceite una vez solidificado.
En microscopa moderna los aceites de inmersin sinttica son
mayoritariamente utilizados porque eliminan la mayora de estos
problemas. Valores de apertura numrica de 1,6 pueden conseguirse con
distintos aceites sintticos. A diferencia de los aceites naturales, los sintticos
no se endurecen en la lente y normalmente pueden mantenerse en el objetivo
durante meses sin problemas.

6.PODER DE RESOLUCIN, PROFUNDIDAD DE


CAMPO, AUMENTO Y MEDICIN CON EL
MICROSCOPIO
PODER DE RESOLUCIN
El poder de resolucin est determinado en parte por la longitud de onda de la
radiacin empleada para iluminar el espcimen y es inversamente proporcional
a la misma, es decir, a menor longitud de onda, mayor poder de resolucin. El
haz de electrones puede tener longitudes de onda variables, las cuales influyen
en el lmite de resolucin que a su vez depender del voltaje empleado para
acelerar los electrones (tabla 5-1).

Tabla 5-1.-Relacin del voltaje de aceleracin, la longitud de onda del haz de


electrones y el poder de resolucin en el microscopio electrnico de
transmisin expresadas en kilovoltios (kV), angstroms () y nanmetros
(nm). Modificado de Sjstrand F. (1967). Electron Microscopy of Cells and
Tissues. Vol. 1, Instrumentation and Techniques.

Con el microscopio electrnico se puede alcanzar una resolucin de


aproximadamente 40.000 veces ms que el poder de resolucin del
microscopio de luz y 2 x 106 veces el poder de resolucin del ojo humano
PROFUNDIDAD DE CAMPO
La definicin tcnica de la profundidad de campo es el rango de movimiento a
lo largo del eje ptico que un objeto o espcimen puede moverse sin afectar la
claridad de visin. Esto significa que la profundidad de campo es la cantidad
que el objeto o espcimen puede moverse y seguir siendo claro. La
profundidad de foco es el opuesto a la profundidad de campo, que tiene lugar
en el lado opuesto del lente. Tambin, la profundidad de foco se mide en
unidades microscpicas de medicin, tales como nanmetros, mientras que la
profundidad de campo se mide en unidades macroscpicas, tales como metros
o pies.
AUMENTO Y MEDICIN CON EL MICROSCOPIO
Muchas veces interesa al observador conocer el tamao real de los objetos o
microorganismos que est observando a travs del microscopio. Para estas
mediciones pueden utilizarse varios mtodos.
Mtodo de los micrmetros. Se utiliza para esto un micrmetro de platina o de
objetivo, que consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala
graduada (de 2 mm de longitud), con separaciones, entre cada divisin, de una
centsima de milmetro.

Adems se utiliza un micrmetro ocular que lleva una escala graduada en


dcimas de milmetros. Se coloca el micrmetro objetivo sobre la platina y se
enfoca el microscopio hasta que las lneas de la escala graduada aparezcan
ntidas. Luego se hace superponer la escala del ocular y se toma como
referencia las primeras divisiones en que una lnea del micrmetro objetivo y
una lnea del micrmetro ocular coincidan o se superpongan exactamente.
Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada divisin
ocular. Veamos un ejemplo. Si 9 divisiones del micrmetro objetivo (0,09 mm)
equivalen a 30 divisiones del micrmetro ocular, cada divisin del ocular
equivaldr a: 0,09 mm/30 = 0,003 mm = 3 m
Quiere decir que para el objetivo calibrado y el ocular utilizado, cada divisin
del micrmetro ocular equivale a 3 m. Una vez obtenido este dato para cada
objetivo en la forma que hemos expuesto, teniendo el microscopio ocular
podran hacerse todas las mediciones que se deseen. Para medir, por ejemplo,
un Paramecium de una preparacin, procedemos as: haremos coincidir los
extremos del microorganismo con las divisiones del micrmetro ocular. Si la
longitud del organismo es de 75 divisiones del micrmetro ocular, y cada
divisin equivale a 3 m, la longitud del Paramecium ser 75x3= 225 m.
Tambin se pueden efectuar mediciones en el microscopio con cmara clara y
utilizando una regla. En realidad, estas medidas no son tan exactas como
cuando se utilizan micrmetros por errores que se introducen superponiendo
imgenes.