1.

OBJETIVOS

Conocer los tipos de microorganismos presentes en la naturaleza.

Aprender a utilizar los equipos y materiales en el laboratorio de
microbiologa, necesarios para la preparacin de medios de cultivo y
conteo, con requerimientos especiales de cultivo, tales como el agar
nutritivo, agar saboureud y caldo nutritivo.
Conocer los factores que influyen en el crecimiento de
microorganismos.
Segn las muestras, determinar el grado de contaminacin y el tipo de
contaminante en los diferentes sectores de la facultad.

2. FUNDAMENTO TERICO
Condiciones generales para el cultivo de microorganismos
Disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o
captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de
carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de
estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de
los factores nutritivos lbiles.
2- consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado
semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto
de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente
extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en
una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias
(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las
estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se
deseque el medio.
5- Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar
que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos
normales.
7- Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y
43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a
temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos
crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los
saproftos tienen rangos ms amplios.
8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el

crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios.

El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presin como agente esterilizante)

MORFOLOGA COLONIAL
BACTERIANA EN MEDIOS
DE C
Morfologa colonial
LTIV
bacteriana superficie

U
O

Cuando tienes un cultivo en agar

(caja petri) siempre es relevante
notar la morfologa colonial
(colonias aisladas) de la cepa
bacteriana para facilitar la
identificacin, los siguientes datos
e sern de utilidad:

Morfologa
colonial
bacteriana forma

CARACTERSTICAS PTICAS

Morfologa
colonial
bacteriana borde.

LUZ TRANSMITIDA ( observar a traves de la colonia)

Opaca: no permite el paso de luz
Traslcida: Deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad de los objetos
observados a travs de la colonia.
Transparente: Deja pasar la luz permitiendo ver claramente los objetos observados a
travs de la colonia.
LUZ REFLEJADA ( observar la superficie de la colonia)
Opaca
Brillante

3. PROCEDIMIENTO
Materiales que se necesita:
-

Tubos de prueba
Guantes de asbesto
Probeta
Piceta
Esptula
Algodn
Vaso de precipitado

Pipeta
Vagueta
Papel Kraft
Termmetro
Esptula
Canastilla
Gradilla

Medios de cultivo:

Agar nutritivo
Agar saboraud
Caldo nutritivo

PREPARACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

Pesar los compuestos (medios de cultivo)

Agar Nutritivo (Concentracin: 20 g en 1 litro)

-

Se utiliz 2.76 g de agar nutritivo.

Caldo Nutritivo (Concentracin: 8 g en 1 litro)

-

Se utiliz 1.08 gr de caldo nutritivo.

Agar Sabouraud (Concentracin: 65 g en 1 litro)

-

Se utiliz 4.875 g de agar Sabouraud.

PROCEDIMIENTO A :
COLONIAS DE BACTERIAS DESARROLLADAS EN PLACAS EN MEDIO
AGAR NUTRITIVO (1 y 3 )

1.- Se tienen 4 tubos a 45 con Agar nutritivos previamente preparados

.Flamear en el mechero y verter el contenido en 4 placas Petri de la siguiente
manera
4 tubos con Agar nutritivo a 45
Placas petri estriles :
N 1 , N2 , N 3

2.- Llevar a experimentacin las

cuatro placas de la siguiente
manera :

Placa Petri no estril :

Placa N 1 : Grupo 1 : Bao de
N 4 .
hombres piso 3 FIA
grupo 3 : baos de
hombre 2 piso por 15 minutos ( 16:21 horas )
-

Placa N 2 : Dividir la placa de la

siguiente manera

Zona A: Cabello

Zona B: Huella digital

Zona C: Inoculador estril

Zona D: Inoculador no estril

PLACA N3

No abrir la placa

Petri

PLACA N4

No abrir la placa

Petri

PROCEDIMIENTO B

CRECIMIENTO DE BACTERIAS EN CALDO

NUTRITIVO (2,3 y 5)

1. Usamos una pipeta estril para transferir el caldo

nutritivo esterilizado del tubo a un tubo estril y vaco.
2. Usamos una pipeta no estril para transferir el caldo nutritivo
esterilizado del tubo a un tubo estril y vaco.
3. Usamos una pipeta estril para transferir el caldo nutritivo esterilizado
del tubo a un tubo no estril y vaco.
4. Colocar los tubos en la incubadora por 48 horas. , y luego con cuidado
y sin agitar se llevan a la refrigeradora.

GRUPO 2

GRUPO 4

PROCEDIMIENTO C
-

CULTIVO DE HONGOS EN PLACAS CON AGAR SABORAUD(todos los

grupos)

1. En una placa Petri verter el Agar Saboraud ya preparado.

2. Exponerlo a un ambiente determinado y esperar 15 minutos a que el agar
haya solidificado.
3. Esperar 48 horas para ver el resultado (ideal).Se visualiz 7 das despus.
-

4. RESULTADOS
-

RESULTADOS PROCEDIMIENTO A

RESULTADOS PROCEDIMIENTO B

PROCEDIMIENTO B: CRECIMIENTO DE BACTERIAS EN CALDO

NUTRITIVO
-

Grupo N 2

Cantidad de
Crecimiento
Distribucin
de
crecimiento
- Olor

Tubo estril
- Pipeta
estril
-

Escaso

Turbia

Ptrido

Tubo no
estril
- Pipeta
estril

Tubo estril
Pipeta no
estril

escaso
Sedimento

Sedimento
-

imperceptible

escaso

Ptrido

Grupo N 4

Cantidad de
Crecimiento
Distribucin
de
crecimiento
- Olor

Tubo no
estril
- Pipeta
estril
- Escaso

Tubo estril
- Pipeta
estril
-

Escaso

Sedimento
anaerobia

Aromtico

Tubo estril
- Pipeta no
estril

Abundante

Sedimento

Pelicula
aerobia

imperceptible

Ptrido

Grupo N 5

Cantidad de
Crecimiento
Distribucin
de
crecimiento
- Olor

Tubo estril
- Pipeta
estril
-

Tubo no
estril
- Pipeta
estril
-

Tubo estril
Pipeta no
estril
-

RESULTADOS PROCEDIMIENTO C
1.- En una placa estril se vierte Agar Sabouroud especial para hongos ,
y cada grupo lo deriva a diversos ambientes de la siguiente manera :

Grupo 1 :bao de hombre piso 3

Grupo 2: Laboratorio de fisicoqumica fia
Grupo 3 : Centro de estudiantes
Grupo 4: Biblioteca FIA
Grupo 5: laboratorio de microbiologia
Las placas se dejan en el ambiente por 15 minutos

RES
ULT
ADO
S
GRU
PO
AM
BIE
NTE
LOC
ALI
ZAD
O

Ba
o
de
ho
mb
res
pis
o3

Labo
rator
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Cen
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Bibl
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FIA

labor
atori
o
de
micr
obiol
oga

N
MER
O
DE
HO
NG
OS
TIP
O
DE
HO
NG
OS

14

15

10

9
hong
os

Aspe
rgilu
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3)

6
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2
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2
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s
1
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CAR
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S

ergi
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verde
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y
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liso y
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y
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elev
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a
Rhiz
opu
s:Co
loni
a
algo
don
osa
de
colo
r
blan
ca
que

5. CONCLUSIONES
- PROCEDIMIENTO A
La buena utilizacin de los elementos y equipos de laboratorio permiten la
efectividad en la prctica de laboratorio y en la identificacin de
microorganismos.
Es evidente segn los resultados de laboratorio el grado de contaminacin al
que estamos expuestos en la FIA debido al nmero de bacterias encontradas.
-

PROCEDIMIENTO B

Crecimiento de bacterias en caldo nutritivo:

Observamos que este experimento depende de la esterilizacin de los
materiales a usar en cada caso.
- PROCEDIMIENTO C
Los microorganismos como los hongos se desarrollan en ambientes hmedos,
por lo cual cada ambiente de la facultad presenta esta caracterstica por lo cual
se han podido desarrollar.

Para cada ambiente de la facultad existe una diferencia entre el nmero de

hongos y su clasificacin, depende mucho del medio. Por ejemplo el ambiente
ms contaminado en este procedimiento es el Bao de Caballeros FIA , donde
se puede apreciar hongos y levaduras en mayor cantidad.

6. RECOMENDACIONES
No agitar los tubos de ensayo al momento de observar los resultados,
pues ya no se distingue adecuadamente la distribucin del crecimiento
(anillo o sedimento).
Verificar que absolutamente todos los materiales se encuentren en el
estado ptimo para llevar a cabo los experimentos.
Procurar tener selladas las placas Petri, para evitar el ingreso de
microorganismos.
Hacer un control riguroso de los tiempos requeridos en los experimento
para evitar complicaciones posteriores.

 Realizar bien la medicin del peso de los medios de cultivo, as como del
volumen de agua destilada, para llevar a cabo los experimentos de
manera exitosa.
7. CUESTIONARIO
1. Qu factores influyen en la flora microbiana del aire?
-

La atmsfera no tiene una microbiota autctona, pero es un medio para la

dispersin rpida y global de muchos tipos de microorganismos. Adems hay
una importante transferencia de ellos y de sus metabolitos gaseosos entre la
atmsfera, la hidrosfera y la litosfera. Aunque la atmsfera es un ambiente
hostil para los microorganismos, en la troposfera inferior se encuentran un gran
nmero de ellos.
Las nubes poseen agua, intensidad de luz y concentracin de CO2
suficiente para permitir el crecimiento de los microorganismos
fotoauttrofos.

En zonas industriales, puede haber, incluso, la suficiente concentracin de

sustancias orgnicas en la atmsfera que permita el crecimiento de algunos
microorganismos hetertrofos.

2. Qu grupo de agentes causa la mayor incidencia de enfermedades

respiratorias?
- Hongos (algunos de ellos), virus y bacterias. Estos provocan diferentes tipos de
enfermedades que pueden llegar a hacer mortales.
-

3. Qu enfermedades son transmitidas por el aire?

-

Enfermedades bacterianas transmitidas por va area:

Tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis)

Faringitis causada por (Streptococcus pyogenes)
Neumona causada por (Streptococcus pneumoniae)
Difteria (Corynebacterium diphteriae)
Legionelosis causada por (Legionella pneumophila)
Tosferina causada por Bordetella pertusis.

Enfermedades vricas transmitidas por va area:

Varicela ( virus Varicela-Zoster)

Rubola
Sarampin
Gripe
Resfriado comn

4. Cules son las caractersticas de Rhizopus Nigricans, alternara y

sacharomyce cerevisae?
-

Rhizopus nigricans: Es un tipo de moho inofensivo, hallable en crecimiento en

pan, conocido por "moho del pan". Es un miembro del gnero Rhizopus, que se
compone de hongos con esporangios columnares hemisricos areos,
anclados al sustrato por rizoides. Puede causar infecciones si no se tiene
cuidado. Puede causar reacciones concretas alrgicas. Rhizopus nigricans
posee esporas que flotan alrededor en el aire.

Presentan el aspecto de una suave pelusa griscea o verdosa que se

desarrolla en la superficie de la materia orgnica en descomposicin sobre la
que viven. Vistos al microscopio presentan un micelio formado por abundante
cantidad de hifas blanquecinas y sin tabiques.

En el extremo de algunas hifas se desarrollan los esporangios de forma y

nmero variado segn las especies. Las esporas contenidas en los
esporangios son generalmente negras o verdosas. Cuando quedan libres dan
origen a la formacin de nuevos micelios.

Alternarias: Es un hongo ascomiceto .Las diferentes especies de este gnero

son uno de los mayores patgenos de plantas. Son conocidas comnmente
como alrgenos en los humanos, y, dentro de casa, pueden causar rinitis
alrgica o reacciones de hipersensibilidad que, en ocasiones, pueden producir
ataques de asma. Sus esporas son las causantes de la alergia, y, al igual que
los plenes, son transportadas por el aire hasta la nariz o bronquios del
alrgico, causando la rinitis o asma. Existen esporas de alternaria todo el ao y,
por lo tanto, causan patologa alrgica perenne; aunque vare la intensidad
segn las estaciones, suele haber ms en primavera y verano. Tambin
aparecen infrecuentemente entre las infecciones oportunistas en personas
inmunodeprimidos, como por ejemplo, en personas afectadas por el sida. Hay
cuarenta y cuatro especies conocidas, pero puede haber cientos de ellas an
por descubrir. Son una especie omnipresente en el ambiente y parte
fundamental en la flora de hongos en cualquier sitio. Son agentes activos en la
descomposicin. Sus esporas estn en suspensin en el aire, sobre el suelo,
sobre los objetos y en el agua, tanto fuera, como dentro de casa. Las esporas
se pueden distribuir de una en una, o en largas cadenas, y pueden crecer en
colonias visibles, de color negro o gris.

Saccharomyces cerevisiae: La levadura de cerveza es un hongo unicelular,

un tipo de levadura utilizado industrialmente en la fabricacin de pan, cerveza y
vino

Caractersticas:

Morfologa elptica u ovoide

Alta capacidad fermentativa.

Formadora de esporas (ascosporas con 4 esporas)

No asimila nitratos ni escinde arbutina.

Crecimiento en presencia de etanol.

Fermenta y asimila glucosa, galactosa, maltosa, sacarosa y rafinosa.

5. Qu clase de nutrientes proporciona cada uno de los ingredientes del caldo

nutritivo, Agar sabouraud y Agar nutritivo?
Agar Nutritivo
A principios de 1900 la APHA
(American Public Health Association)
sugiri esta formulacin como un medio
de cultivo estndar para el anlisis de
agua. El Agar Nutritivo se encuentra
descrito en los Mtodos

Agar
Nutritivo
- Extracto de
carne
- Peptona
- Agar
- Agua

Cantidad
-

3g
5g
15g
1000ml

Estndar de la APHA y de la
AOAC (Association of Oficial Analytical Chemists) para el anlisis de agua, leche y sus
derivados, alimentos y otros materiales.
- El Agar Nutritivo sigue siendo un medio ampliamente utilizado para el cultivo de
microorganismos no fastidiosos.
- En este medio el extracto de carne y la peptona aportan la fuente de nitrgeno,
vitaminas y carbono. El agar es adicionado como agente solidificante.
Caldo Nutritivo
Medio de cultivo utilizado para
propsitos generales, para el desarrollo
de microorganismos con escasos
requerimientos nutricionales.

Caldo
Nutritivo
- Extracto de
carne
- Peptona
-

Agua

Cantidad
-

3g
5g
1000ml

Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos,

aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
Agar Sabouraud
Es un medio para el cultivo de
Agar
- Cantidad
hongos y levaduras. El Agar Sabouraud es
Sabouraud
una modificacin del Agar de Dextrosa. Este
- Pluripepto
- 10g/l
medio es usado para el cultivo de hongo
na
patgenos, particularmente de aquellos
- Cloranfen
- 0.05g/l
asociados con infecciones de la piel. La alta
icol
concentracin de dextrosa y la acidez del
- Glucosa
- 40g/l
pH hacen a ste un medio selectivo para
- Agar
- 15g/l
hongos. Con la adicin de cicloheximida,
estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario
de dermatofitos.
-

8. BIBLIOGRAFA
BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS.- MICHAEL T. MADIGAN; JOHN
M. MARTINEZ; JACK PARKER.

 MICROBIOLOGIA 4TA EDICION LANSIN M. PRESCOTT, JOHN P. HARLEY,

DONALD A. KLEIN
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo
%20de%20microorganismos.pdf
PELCZAR. Microbiologa. 4ta edicin
http://danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios_html
http://www.arrakis.es/lluengo/biologa1.html
http://www.microbe.org/espanol/microbes/reproduction.asp
-