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Identificao de cocos Gram-positivos

O gnero Staphylococcus composto por 37 espcies, 17 delas podem ser


isoladas de amostras biolgicas humanas. Geralmente so encontrados na
pele
e
mucosas.
Rotineiramente o teste de catalase usado para diferenciar estafilo (catalase
+) de estreptococos (catalase -), mas no significa que no exista nenhuma
espcie de estafilococos que no possua a enzima catalase.
A seguir um esquema que identifica as principais espcies de Staphylococcus.
Se tiver dificuldade de ver, clique na imagem.

Prova da catalase

Tem a finalidade de verificar a presena da enzima catalase, que decompe


H2O2 em gua e oxignio.
Colocar uma colnia numa lmina de microscopia e dissolver perxido
de hidrognio.
Observar a presena (+: estafilococos) ou no (-: estreptococos) de
bolhas.
Prova da coagulase

Existe o teste em tubo e em lmina. Tem a finalidade de verificar se o


microrganismo possui a coagulase (fator aglutinante).
TUBO

Colocar 0,5mL de plasma em tubo de ensaio

Adicionar uma colnia com ala bacteriolgica diretamente no plasma de


coelho com EDTA
Incubar por 4h em estufa a +/- 37C
Observar a formao de cogulo (brumos), caracterstica de S. aureus.
LMINA
Colocar 2 gotas de salina na lmina

Emulsionar a colnia

Adicionar 1 gota de plasma e misturar

Observar a formao de cogulo (brumos), caracterstica de S. aureus.


A prova em tubo pesquisa coagulase livre e ligada que, reagindo com um fator
plasmtico, forma um complexo que atua no fibrinognio do plasma formando a
fibrina.
O teste em lmina verifica a coagulase ligada na superfcie da parede celular,
que reagindo com o fibrinognio do plasma, causa a coagulao do mesmo.

Teste de DNAse com HCl

Tem o objetivo de verificar se a bactria possui a enzima desoxirribonuclease.


Fazer inculo denso e circular em uma regio do meio.
Incubar por aproximadamente 24h a cerca de 37C.
Aps incubao, realizar leitura com aplicao de HCl de modo que
cubra as colnias. Aguardar 30s.
A formao de um halo transparente identifica S. aureus. Se no houver halo,
identificar como estafilococo coagulase negativa.

Fermentao em manitol

Observar a capacidade do microrganismo em crescer num meio salino (7,5%


de NaCl) e fermentar o manitol.
Semear no gar manitol
Leitura: formao de halo amarelo ao redor das colnias, tpico de S. aureus.
Teste de resistncia novobiocina

Finalidade: Verificar se o germe resistente ao antibitico.


Semear por atapetamento (como para biograma) em gar sangue

Colocar um disco de novobiocina

Incubar a 37C por aproximadamente 24h.

A formao de halo igual ou inferior a 16mm identifica Staphylococcus


saprophyticus.

O S. pyogenes tambm pode ser identificado com teste de PYR

Como supracitado, a negatividade no teste da catalase


indica Streptococcus. Todos os procedimentos de identificao deste gnero se
baseia inicialmente no tipo de hemlise apresentada no gar sangue de
carneiro.
Teste de Camp
Visa a identificao de cepas de S. agalactiae, que produzem o fator CAMP.

Inocular uma estria de S. aureus de um ponto a outro na placa de gar


sangue.

Semear perpendicularmente a colnia a ser estudada, sem que haja o


contato com a outra bactria!
Levar estufa.
A formao da seta hemoltica entre a colnia de aureus e o outro
microrganismo indica positividade pra Streptotococcus agalactiae.

Teste de sensibilidade bacitracina

Esse teste vai diferenciar S. pyogenes das outras espcies beta-hemolticas.


Semeio por atapetamento em sangue de carneiro
Aplicao do disco de bacitracina
Incubao
A presena de qualquer halo de inibio interpretada como sensibilidade = S.
pyogenes.
Teste de PYR

Determina a atividade de enzima pyrrolidonil arilamidase produzida pelo S.


pyogenes.
Com auxlio de pina, colocar um disco de PYR sobre uma lmina

Pingar uma gota de gua estril

Realizar um esfregao com a bactria sobre o disco mido

Colocar uma gota do reagente PYR. A reao ocorrer em 1min.


O resultado positivo se apresenta na cor vermelha, enquanto a cor
amarela/laranja significa negatividade.

Prova da Optoquina

A presena de halo maior ou igual a 14mm indica que a bactria identificada se


trata do Streptococcus pneumoniae.

Quando a bactria apresenta -hemlise, segue-se a identificao da figura.


Bile esculina
Esse teste serve para identificar o gnero Enterococcus sp. A bile esculina
um meio rico em sais biliares. Alguns microrganismos possuem a capacidade
de hidrolisar a esculina em esculetina na presena de bile. O composto
formado complexa-se com ons ferro presente no meio e forma um precipitado
perto que indica a positividade do teste.
Teste de crescimento em NaCl 6,5%
Confirma o gnero Enterococcus sp. depois da bile. Os enterococos so
capazes de crescer em meio hipertnico.

Inocular as colnias em caldo NaCl 6,5% e observar o crescimento aps


incubao.
A leitura positiva se d por alterao da cor - de roxo para amarelo.

Baseado nos livros Bacteriologia Clnica: Manual de aulas prticas (2010) e


Boas Prticas de Microbiologia Clnica (2008).