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Bibliografa sugerida
Terminologa Analtica
Tcnica
Mtodo
Procedimiento
Protocolo
Terminologa Analtica
Analito
Seal
Transductor
Ruido
Procesamiento
de seal
Por qu calibracin?
Tcnicas clsicas
Ej. gravimetras, volumetras
Se basan en relaciones
estequiomtricas
Ej. Titulacin volumtrica de HCl
con NaOH
La medida (p. ej. volumen de
reactivo) guarda una relacin
definida con la masa de analito
6
Tcnicas instrumentales
Se basan en la medida de una
propiedad fisicoqumica del sistema
No se basan en estequiometras
Son de tipo relativo o comparativo
La respuesta de un instrumento depende de varias
variables, no slo de la concentracin de analito
La relacin entre la respuesta y la concentracin del
analito no es estable en el tiempo
7
Instrumento
Concentracin
(o masa)
Cantidad de
sustancia
Respuesta
Funcin de
respuesta
Nmero
No se puede hacer
una vez para
siempre
8
Instrumento
Escalas analgicas
10
11
Lectura digital
12
Presentacin en pantalla
Combina
analgico y
digital
13
14
Ejemplos de respuesta
Intensidad de radiacin luminosa
Absorbancia
Diferencia de potencial (voltaje)
pH
Llamamos respuesta a la indicacin que da
el instrumento.
15
Calibracin
Proceso de establecer la relacin funcional
entre la respuesta y la cantidad de
sustancia (concentracin o masa)
R = f (C )
Funcin de
calibracin
Definicin de IUPAC
Calibracin en Qumica Analtica es la operacin que
determina la relacin funcional entre valores medidos
(intensidades de seal y a ciertas posiciones de seal
zj) y cantidades analticas caracterizando tipos de
analitos qi y su cantidad (contenido, concentracin) x.
La calibracin incluye la seleccin del modelo (su forma
funcional) la estimacin de los parmetros del modelo
as como los errores, y su validacin.
IUPAC, Guideline for calibration in analytical chemistry. Part 1.
Fundamentals and single component calibration. K. Danzer, L. A. Currie,
Pure &Appl. Chem., 70(4), 993-1014 (1998).
17
18
Proceso de calibracin
Obtener/preparar patrones del analito
C = f ( R)
Funcin de
evaluacin
Curva de calibracin
Concentracin (g/L)
21
Interpolacin
Si la funcin de evaluacin se usa dentro del rango
de concentraciones usado para la calibracin, se
denomina interpolacin
Si se la usa fuera de dicho rango se denomina
extrapolacin
Para fines analticos se emplea la interpolacin
22
La extrapolacin es muy
riesgosa porque se est
suponiendo que la funcin de
calibracin se sigue
cumpliendo an fuera de dicho
rango de concentraciones
23
Proceso de calibracin
C1
R1
C2
R2
R = f(C)
C3
C4
R3
R4
24
Proceso de calibracin
Preparacin de una tabla a dos columnas
Concentracin
Respuesta
C1
R1
C2
R2
C3
R3
Anlisis de regresin
Cmo determinar la funcin de calibracin?
Modelado matemtico
Se emplea una herramienta estadstica
llamada Anlisis de Regresin
26
Anlisis de regresin
Ejemplo: y como funcin de x
Supongamos una relacin lineal:
y=a+b x
Los valores de los parmetros a y b se obtienen
mediante el mtodo de los mnimos cuadrados
Se dispone de ecuaciones para calcular los
parmetros para distintos modelos de ajuste
27
29
Ajuste de curva
16
14
Absorbancia
Fluorescencia
12
10
y = 2.2124x + 1.0395
8
6
4
Residuales o residuos
(traduccin del ingls
residuals)
2
0
0
Concentracin (mg/mL)
30
El problema de la incertidumbre en x
No es cero
x corresponde a concentraciones o masas de
patrones preparados con mucho cuidado:
balanzas de elevada precisin
material volumtrico de calidad
trabajo cuidadoso
b=
[( x x)( y
i =1
i=m
( x x)
i =1
y )]
2
a = y bx
ay b
32
mxy - x y
b=
2
2
m x -( x )
m = nmero de
niveles de x
y x - x xy
a =
m x 2 - ( x )2
(se ha omitido el smbolo ^ porque se sobreentiende
que son valores estimados)
33
y=bx
y = bx +
cx2
x 2 x 2 y - x3 xy
c=
x4 x 2 - ( x3 )2
x4 xy - x3 x 2 y
b=
x4 x 2 - ( x3 )2
34
y
[m
xy
+
[m
x
]
y
)
)
x
x
x
x
x
x
c
a4 =
[ x2 x4 - ( x3 )2 ]m- [ x x4 - x2 x3 ] x+[ x x3 -( x2 )2 ] x2
2
3
4
2 2
4
2
3
2
[
y
[(
xy
+
[
y
)
x
x
x
x
x
x
x
x
b
b4 =
[ x2 x4 - ( x3 )2 ]m- [ x x4 - x2 x3 ] x+[ x x3 -( x2 )2 ] x2
2
4
3 2
4
2
3
3
2 2
2
[
y
[
xy
+
[
y
)
)
x
x
x
x
x
x
x
x
x
a=
c4
[ x2 x4 - ( x3 )2 ]m- [ x x4 - x2 x3 ] x+[ x x3 -( x2 )2 ] x2
35
Qu modelos emplear?
Para calibracin se suelen probar modelos
polinomiales
Grado de polinomio superior a 2 no
recomendable
Un polinomio de grado suficientemente alto
ajustar cualquier conjunto de puntos,
aunque la funcin no tenga ningn sentido
fsico.
36
37
Modelo: y = b x + a
38
Modelo: y = cx2 + b x + a
39
Modelo: y = g x6+ f x5 + e x4 + d x3 + c x2 + b x + a
40
42
Seal
Curva de calibracin
2000
1800
1600
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
0
10
15
Concentracin
y = 7.0316x2 + 54.343x + 83.542
R = 0.9969
43
Significado de x e y
x, la variable independiente es generalmente la
concentracin del analito
y es la respuesta del mtodo, y depende del mismo
Por ejemplo: absorbancia, intensidad de emisin,
fluorescencia, diferencia de potencial
En algunas tcnicas x puede ser masa en lugar de
concentracin
44
Ajuste de curva
16
14
Absorbancia
Fluorescencia
12
10
y = 2.2124x + 1.0395
8
6
4
Residuales o residuos
2
0
0
Concentracin (mg/mL)
45
46
47
mejor modelado
menos trabajo
48
Emisin
0
0
0.5
1.5
Concentracin (mg/L)
2.5
3.5
49
Ms niveles de concentracin
8
Emisin
0
0
0.5
1.5
Concentracin (mg/L)
2.5
3.5
50
Absorbancia
0.6
0.4
0.2
0
0
0.5
1.5
Concentracin (mg/L)
2.5
3.5
51
52
Curvas de calibracin
en mtodos volumtricos
Tiene sentido?
Estequiometra definida
Curva de calibracin Volumen de
titulante consumido vs. masa de
analito Cmo sera?
53
Curvas de calibracin
en mtodos volumtricos
Vale la pena invertir tiempo en hacerla?
Caso excepcional: titulaciones volumtricas
con reacciones no estequiomtricas
54
Seleccin de la curva
de mejor ajuste
56
modelo lineal
58
Seleccin de la curva
de mejor ajuste
Diversos criterios:
1. Inspeccin visual
2. Estudio de los residuales
3. Estudio de la varianza de regresin
4. Uso del coeficiente de correlacin (?)
5. Pruebas de hiptesis de base estadstica
59
Emisin
0
0
Concentracin (mg/L)
61
6
Emisin
y = 1.55x + 1
Modelo lineal
con ordenada
en el origen
0
0
Concentracin (mg/L)
62
Emisin
6
y = 1.780x
4
Modelo lineal
sin ordenada
en el origen
0
0
Concentracin (mg/L)
63
Emisin
Modelo
cuadrtico con
ordenada en el
origen
0
0
Concentracin (mg/L)
64
Emisin
6
y = 22.75x
y = -0.2x
+ 2.75x
4
Modelo
cuadrtico sin
ordenada en el
origen
0
0
Concentracin (mg/L)
65
66
Estudio de rachas
de signos
+
+
+
+
+
+
-
67
Grfico de residuales
68
n
=
f
2
(
y
y
)
i i ,R
i =1
Residuo
Seleccin de la curva
de mejor ajuste
Diversos criterios:
1. Inspeccin visual
2. Estudio de los residuales
3. Estudio de la varianza de regresin
4. Uso del coeficiente de correlacin (?)
5. Pruebas de hiptesis de base estadstica
72
5. Pruebas estadsticas
Prueba de falta de ajuste (prueba de lack-offit o prueba de LOF)
Es una prueba de hiptesis
Para un dado modelo de regresin, permite
aceptarlo o rechazarlo sobre una base
estadstica
73
Pruebas estadsticas
Como toda prueba de hiptesis, el usuario
debe elegir un valor de probabilidad llamado
nivel de confianza
En Qumica Analtica suele elegirse un nivel
de confianza de 95% (= 0.05)
74
Prueba de LOF
Se dispone de mediciones de los valores de y para
varios niveles de x (en este caso para varios niveles
de concentracin)
Para cada valor de x, xi, se dispone de varios valores
2
s
de y, yij, cuyo promedio ser y i con varianza i
Es condicin necesaria que estas varianzas sean
homogneas (condicin de homoscedasticidad)
Esta condicin debe verificarse previamente
mediante otra prueba de hiptesis (p. ej. prueba de
Bartlett)
75
76
77
Prueba de LOF
A partir de estas varianzas se calcula la varianza de
repetibilidad:
m
2
(
y
y
)
ij i
2
rep
i =1 j =1
m(n 1)
Prueba de LOF
Se calcula adems la varianza respecto a la
regresin, ya vista anteriormente:
n
=
f
( y
i =1
yi , R )
Prueba de LOF
La prueba de LOF compara la varianza de
repetibilidad con la varianza respecto a la regresin
Se intenta determinar, si el apartamiento de los
puntos experimentales respecto a la curva de
regresin puede explicarse nicamente a partir de la
dispersin aleatoria de los valores
H0: s2R = s2rep
HA: no H0
80
Prueba de LOF
Se emplea el estadstico
s R2
F= 2
s rep
el cual cumple con la distribucin F para el nivel de
confianza seleccionado, con (m-p, ni m) grados
de libertad
m= nmero de niveles de concentracin, ni = n de
repeticiones en cada nivel, p = nmero de
parmetros del modelo
81
10
0
0
-2
82
10
0
0
-2
83
Prueba de LOF
12
10
0
0
-2
84
10
0
0
-2
85
10
0
0
-2
86
10
0
0
-2
87
88
El cuarteto de Anscombe
http://en.wikipedia.org/wiki/Anscombes_quartet
89
Incertidumbre en la regresin
Los parmetros estimados tienen una incertidumbre
asociada. Para la regresin lineal simple:
90
Incertidumbre en la regresin
Como consecuencia la curva de regresin tiene
tambin una incertidumbre
91
Incertidumbre en la regresin
Esta incertidumbre se expresa en los corredores de
confianza:
Y por ende los valores
de x (concentracin)
obtenidos por
interpolacin tendrn
una incertidumbre
asociada
92
Interferencias
Decimos que en una determinacin analtica existen
interferencias cuando los resultados son inexactos como
consecuencia de algn fenmeno fsico o qumico cuya
influencia no fue prevista
93
Clasificacin de interferencias
Desde el punto de vista del efecto neto
que producen:
Interferencias aditivas
Interferencias multiplicativas
94
Interferencias aditivas
Producen el efecto de sumar una constante al
valor medido
R = k1 + bC
(k1 0)
95
Interferencias aditivas
Ejemplo: si medimos la absorbancia de una sustancia
pero la muestra contiene adems otra sustancia que
absorbe a esa longitud de onda, mediremos, sin
saberlo, la suma de dos absorbancias.
96
Interferencias multiplicativas
Ocurre cuando la matriz de la muestra afecta la respuesta del
analito
Producen el efecto de multiplicar la respuesta por un factor
distinto de 1
R = k2bC (k2 1)
A igual concentracin de analito la respuesta ser diferente para
los estndares y para la muestra
97
99
Muestra
(ya procesada)
Vm
Vm
Vm
Vm
102
Patrn
V1
C1
V2
C2
V4
V3
C3
C4
103
105
106
18
16
14
Adiciones
estndar
12
10
Calibracin
directa o externa
0
0
10
107
La interferencia
multiplicativa debe ser
constante en todo el
rango de
concentraciones
No deben existir
interferencias aditivas
Si existieran debern
ser corregidas
separadamente
108
El mtodo de adiciones
estndar puede ser ms
exacto pero es ms
impreciso (mayor
dispersin)
Es ms trabajoso
No se recomienda su uso
si no es imprescindible
109
-C0
-C0
110