EXTRACCIN DE PIGMENTOS QUMICOS MEDIANTE

DISOLVENTES QUMICOS Y SEPARACIN DE PIGMENTOS DE

HOJAS POR
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA (CCF)
Paja camayo Fabin Eduardo, Salamanca Alejandro
Programa de Qumica. Facultad de Ciencias Naturales Exactas y de la
Educacin. Universidad del Cauca
Fecha de la prctica: 22/09/2016; Fecha de entrega: 06/10/2016

ABSTRACT
Se realiz la separacin de los pigmentos fotosintticos de hojas de Batavia fresca
mediante el mtodo de extraccin liquido-lquido. El mtodo de separacin se realiz por
etapas mediante la utilizacin de solventes orgnicos, hasta obtener finalmente las
fracciones por separado de cada uno de los pigmentos. Para comenzar con el proceso de
extraccin se adiciono acetona, para separar todas las especies solubles en ella,
posteriormente se realizaron varios cambios de solvente con polaridades diferentes hasta
obtener las clorofilas y carotenoides y posteriormente llevo a cabo la extraccin de los
diferentes pigmentos fotosintticos presentes en la Batavia , para dicho propsito se
emplea la tcnica de cromatografa de capa fina, a fin de identificar cada una de las 4
sustancias a separar (carotenoides, xantofilas, clorofila a y clorofila b). Para la
determinacin de la mejor mezcla de disolventes se realiz un ensayo en cromatografa
en papel, para comparar la eficiencia de la extraccin. Nuestra matriz fue la Batavia la
cual contiene un gran porcentaje de dichos pigmentos. Se calcul los factores de
retencin los cuales se alejan significativamente de los valores reportados en la literatura.
1. SECCIN EXPERIMENTAL
2.1. Reactivos
Acetona, ter de petrleo, etanol al 96%, ter etlico, metanol acuoso, carbonato de calcio,
agua destilada, hexano, cloroformo, sulfato de sodio anhdrido y benceno.
2.2. Equipos
Balanza analtica, Centrifuga, bortex, equipo de filtracin al vaco y cmara de
cromatografa, equipo de luz ultravioleta.
2. DATOS Y RESULTADOS
Tabla 1.Resultados experimentales de la prctica.
Pigmento
Clorofila a
Clorofila b
Xantofilas
Carotenos

Disolvente
Solucin acuosa
Solucin acuosa
ter etlico
ter de petrleo

Color
Verde
Verde de baja tonalidad
Amarillo
Naranja
1

Figura 1. Resultados obtenidos en la prctica.

Figura 2. Resultados obtenidos en la prctica.

Tabla 2. Clasificacin de los pigmentos segn el orden empleado en la placa
cromatografca
Indicacin
M
a
b
x
c

Pigmento
Muestra
completa
Clorofila a
Clorofila b
Xantofilas
Carotenos
2

Para iniciar con la cromatografa en capa fina, se realiz un ensayo con diferentes
mezclas de disolventes y como soporte se utilizan tiras de papel filtro.
Tabla 3. Separacin obtenida con diferentes mezclas de disolventes en la
cromatografa en papel.
Mezcla

Relacin

Resultado

A
B
C
D

Para la cromatografa en capa fina se emplearon 3 placas y como medio de separacin

las mezclas de solventes B, C y D. A continuacin se describe tanto la ubicacin como la
coloracin de los pigmentos en la figura 1 y los desplazamientos en la tabla 3.

3. DISCUSIN DE RESULTADOS
Los cloroplastos posen un mezcla de pigmentos de diferentes colores, por ejemplo, la
clorofila-a posee una coloracin verde intenso, la clorofila-b poseen una coloracin verde,
y las xantofilas posen coloracin amarillo o anaranjadas en diferentes proporciones.
Estos pigmentos fotosintticos tienen un grado diferente de solubilidad en disolventes
apolares, lo que permite su separacin. Los compuestos fotosintticos extrados se
tomaron de la Batavia, donde para dicho procedimiento se utilizaron 15 g, asegurando
que la muestra tomada estuviese libre de venas, la trituracin se realiz mediante un
proceso mecnico que garantiz un troceado uniforme. Posteriormente la adicin de
acetona permiti la separacin de una porcin de los pigmentos del resto del vegetal. Se
han descrito innumerables procedimientos para la extraccin de los pigmentos, en donde
el solvente utilizado en dichos procedimientos es la acetona; debido a su baja polaridad, y
amplio margen de solubilizacin [1] es utilizada para dicho fin. La adicin de Carbonato de
Calcio (CaCO3) en pequeas pociones protege electrostticamente a las molculas de las
clorofilas y al mismo tiempo absorbe agua presente en las hojas, impidiendo la formacin
de las feofitinas (a y b para cada una de las clorofilas correspondientes) que se pueden
generar durante la extraccin ya sea por hidrlisis cida, por aumento de la temperatura,
por exposicin directa a los rayos solares, o por accin enzimtica de la misma planta, las
feofitinas son compuestos derivados de la clorofila que se generan por la sustitucin del
Mg por dos tomos de hidrogeno (ver figura 1), una caracterstica fsica para poder
evidenciar este tipo de compuesto es su coloracin pardo oliva.

Figura
3.Reac
cin de

produccin de las feofitinas por hidrlisis acida, estas al ser libre de magnesio poseen una
menor polaridad.
Con lo que respecta a los carotenoides es sabido que son bastantes estables, por lo que
solo se han registrado oxidaciones e isomerizaciones posteriores al desarrollo de la
separacin. Debido a estos fenmenos qumicos presentes se debe garantizar un
ambiente fresco, con luz tenue, y una extraccin rpida [2].
A continuacin la centrifugacin de la solucin resultante permiti la separacin de los
restos celulares de la solucin de acetona que contena los pigmentos de estudio y
sustancias solubles en acetona. Cada uno de los pigmentos fotosintticos se separaron
mediante solventes, la extraccin liquido-liquido simple aprovecha la propiedad de las
diferentes solubilidades de los pigmentos anteriormente mencionada, con el empleo de
solventes inmiscibles es posible dicha separacin.
Las molculas de clorofilas (a y b) poseen un tomo central de Mg 2+ contenido en un
anillo de porfirina junto a un alcohol insaturado llamado fitol, ambas estructuras
nicamente difieren en el sustituyente del carbono 3, mientras la clorofila-a posee un
grupo metilo, la clorofila-b posee un grupo aldehdo (-CHO), esta diferencia estructural no
tan solo confiere una diferencia en la coloracin sino que tambin en su polaridad por lo
que la clorofila-b es ms polar que la clorofila-a [3,4].
Los carotenos son compuestos formados nicamente por carbono e hidrogeno por lo que
se clasifica como hidrocarburos [5], consecuentemente es un compuesto muy apolar, los
carotenos se clasifica en y carotenos (por ser los ms abundantes), sus coloraciones
van desde el amarillo hasta el anaranjado, tambin dentro de los pigmentos extrados se
encuentran las Xantofilas, que son derivados oxigenados de los carotenos. Las Xantofilas
poseen coloraciones por lo general amarillas, siendo la Leutina y la Violaxantina las ms
abundantes.
Las caractersticas estructurales de los pigmentos estudiados nos permitieron clasificar la
polaridad de cada uno por lo que se gener un gradiente de polaridad desde el ms
apolar al menos apolar, la figura 2 muestra dicho gradiente de polaridad,
Carotenos < Clorofila- < Xantofilas < Clorofila-
Figura 4.Gradiente de polaridad desde el ms apolar al menos apolar (polar).
El cambio de disolvente permiti eliminar compuestos solubles en acetona diferentes a los
pigmentos fotosintticos, se adiciono ter de petrleo a la solucin de acetona realizando
4

lavados con agua en un embudo de separacin con el fin de eliminar la acetona que
pueda estar presente en la nueva matriz que contiene los pigmento de estudio.
Posteriormente se procedi a separar los pigmentos en parejas, la adicin de metanol
permite la separacin de las Xantofilas y Clorofila-b de los Carotenos y Clorofila-}a, el
metanol posee una alta polaridad por lo que es a fin con los compuestos polares, (ver
figura 2).
Hasta ahora se han separado los compuestos polares de los apolares, gracias a la adicin
de metanol y de ter de petrleo, ahora el tratamiento de lo solucin de metanol con lleva
un cambio de matriz, se adicion ter etlico con lavados de agua destilada, por lo que las
Xantofilas y Clorofila-b pasan al ter etlico, este procedimiento permiti pasar de un
medio muy polar a uno menos polar, pero con la suficiente polaridad que permita la
retencin de los pigmentos, el metanol posee un valor de ndice de polaridad de 5,1
mientras que el ter etlico posee un valor de 4,1 [5].
Finalmente la hidrlisis de las clorofilas permite la separacin de su pigmento
acompaante, el fitol presente encada una de las clorofilas es hidrolizado mediante el
ataque nuclefilico del KOH, generando fitolato de potasio y las repetitivas clorofilidas, la
adicin de agua (ndice de polaridad 10,2 [5]) permite la separacin de las clorofilas de su
respetivo pigmento acompaante (ver tabla 1).

4. CONCLUSIONES
La extraccin liquido-liquido realizada permiti la separacin de cada uno de los
pigmentos fotosintticos, aprovechando las diferencias de solubilidad de estos en
solventes orgnicos, de igual manera el cambio de solvente o de matriz de los analtos se
debe realizar garantizado que la mayor parte de la concentracin de los analtos se
reparta en la nueva matriz, lo cual se lleva a cabo mediante la adicin de un solvente de
mayor polaridad.
Para finalizar La produccin de feofitinas se puede generar fcilmente debido a que en la
lisis celular se puede liberar enzimas presentes en la planta lo que hace que el mtodo
sea inadecuado, aunque en nuestro experimento se tuvo las precauciones debidas
anteriormente mencionadas en el anlisis.
5. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
Cul es la funcin de la acetona durante el proceso de extraccin?
Se utiliza acetona debido a su baja polaridad, y amplio margen de solubilizacin.
6. REFERENCIAS
[1]M. C. Rodrguez Dodero, I. Moreno Garrido. Optimizacin de variables para la mejora
de la separacin y la sensibilidad en un anlisis por cromatografa en capa fina: aplicacin
al estudio del perfil pigmentario de algas marinas Anales de la Real Sociedad Espaola de
Qumica. 2002, 3, 34-39

[2] H. Quach, R. Steeper, W. Griffin. J Chem. Un mtodo mejorado para la extraccin y

cromatografa en capa fina de clorofila a y b de la espinaca, J. Chem. Educ. 2004 81(3),
385-387.
[3] H. Curtis, S. Barner, Biologa, Medica panamericana, Buenos aires Argentina 2005.
[4] S.J Schawartz, T. V. Lorenzo, Food Sci, Nutr. 1900, 29 (1), 1-17.
[5] Torissi, F, D. Una experiencia sencilla con fundamentos complejos: la separacin de
pigmentos fotosintticos mediante cromatografa sobre el papel, Aula y laboratorio de
Qumica, Anales de la Real Sociedad Espaola de Qumica. 2007, 103 (4), 45-51.