AO DE LA CONSOLIDACIN DEL

MAR DE GRAU
FACULTAD DE INGENIERA
E.P. ING. AMBIENTAL Y SANITARIA
PRCTICA N2
TEMA
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS

CTEDRA: Microbiologa
Catedrticos:

INTEGRANTES:

DE LA CRUZ HILARIO, Samuel

GOMEZ QUISPE, Percy
AHUI MARTINEZ, Elvis
RAMOS HUAIRA, Deysi
SEDANO ARECHE, Silvia Mara
SOTO MERGE, Kelly
TICLLASUCA MEZA, Percy
VILCAS MATAMOROS, Juleissy
BOZA CAOANI, Elizabeth
VILLA CAYETANO, Pola

CICLO: IV B

HUANCAVELICA-PER
2016

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E. P. de Ing. Ambiental y sanitaria

INTRODUCCIN
Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en
la superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos
nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el
extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una
muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido
donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos
reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia
macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta
colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un
solo tipo de bacteria. Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que
es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar
cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios
de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento
de la mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si
est presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales
que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH
que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan
catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que
pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de
cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los
nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos
rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas de agarsangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de
microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las
enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias. (1)

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I.

OBJETIVOS
a. Objetivo general
Preparar medios de cultivos.
b. Objetivos especficos
Aprender la correcta preparacin medios de cultivos, utilizando
los materiales adecuados.
Familiarizarse con los con los equipos, conociendo sus funciones
en las preparacin del cultivo.

II.

MARCO TERICO

El Agar MacConkey es un medio selectivo diferencial utilizado para el aislamiento y

diferenciacin de bacilos gram negativo fermentadores y no fermentadores de lactosa.
Se utiliza con frecuencia para el aislamiento de coliformes. (2)
Composicin:

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Digerido pancretico de gelatina 17,0 g

Digerido pancretico de casena 1,5 g
Digerido pptico de tejido animal 1,5 g
Lactosa 10,0 g
Mezcla de sales biliares 1,5 g
Cloruro de sodio 5,0 g
Agar 13,5 g
Rojo neutro 30,0 mg
Cristal violeta 1,0 mg
Agua destilada 1.000 mL
pH final 7,1 0,2

Sirve como un indicador visual de pH, distinguiendo as las bacterias gram negativas
que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-). (2)

Agar MacConkey con bacterias

lac+ (izquierda) y lac(derecha)

III.

MATERIALES Y METODOS
3.1. MATERIALES

MATERIALES

Algodn

IMAGEN

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Estufa

Matraz Erlenmeyer

Hilo Pabilo

Esptula

Papel Aluminio

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Agar MacConkey Medium

EQUIPOS

Balanza Analtica

Autoclave

3.2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

IMAGEN

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Primer paso: estar bien uniformado y prestar atencin

indicaciones del encargado de la prctica.

a las

Segundo paso: reunir, los materiales y equipos necesarios para la

realizar correctamente la prctica.

Tercer paso: pesar

el Agar MacConkey Medium para ello
necesitamos la cantidad y obtendremos asiendo huso de la regla
simple.
50.03 gr---------------1000ml
X ml------------------ 300ml
X =50.03 gr * 300ml/1000ml X = 15.003 ml

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Cuarto paso: a continuacin pesar 15.009gr de Agar MacConkey

Medium y medir 300ml de agua en la probeta.

Quinto paso: echar el Agar MacConkey Medium al matraz y sobre

ello transvasar los 300ml de agua destilada y disolver por completo
en ese orden.

Sexto pas: Una vez disuelto la solucin llevar a la estufa y dar de

tres a cuatro hervidas, luego lo tapamos con el algodn y el papel
crask (capuchn) posteriormente amarar con el hilo pabilo.

Sptimo paso: por ultimo llevar a la autoclave a 121 C durante 15

minutos.

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IV.

RESULTADOS
Resultados

Una vez disuelto el Agar MacConkey

Medium Y con el agua destilada por
completo, obtuvimos un color marrn.

Luego de llevarlo a la estufa al hacer

hervir notamos la presencia de espuma
durante los cuatro hervidos

Luego de los hervidos notamos un color

marrn oscuro.

por ultimo llevar a la autoclave a 121

C durante 15 minutos.

Imgenes

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V.

DISCUSIN
Especficamente se nos indic correctamente las condiciones generales para el
cultivo de microorganismos en nuestra prctica realizada.
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son
ajenos por completo al propio medio.

1- disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica.

2- consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en
estado semislido o slido.

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Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y

comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est
ampliamente extendido en el laboratorio.

3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en
una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias
(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4- condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las
estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que
se deseque el medio.

5- Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.

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6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe
olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metablicos normales.

7- Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos
medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que
utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante)

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VI.

CONCLUSIN
En el laboratorio central de microbiologa de la Universidad Nacional de
Huancavelica, aprendimos a identificar y preparar los medios de cultivo ms
utilizados, de igual forma los mtodos que se utilizan para llevar a cabo dicha
preparacin, as como los tipos de microorganismos que crecen en estos medios.
Teniendo en cuenta que los medios de cultivos son un conjunto de nutrientes,
para

el

crecimiento

desarrollo

condiciones

necesarias

de

los

microorganismos, es decir, son el soporte para el crecimiento de los

microorganismos.
La preparacin de medios de cultivo no solo es muy delicada sino que tambin
es un proceso tardado; se deben de seguir una serie de pasos con exactitud y
presin, para lo cual siguiendo los pasos a realizar con delicadeza, pesamos en
la balanza analtica 15.009 gr de Macconkey agar Medium, lo cual vertemos a
un matraz, para luego diluirlo con 300 ml de agua destilada y finalmente llevarlo
a la estufa la solucin diluida (sin realizar cambios de temperatura bruscas), de
esta forma obteniendo las solucin de agar Macconkey, el cual una vez rotulado,
ser introducido en el autoclave a 121C por 21 minutos para su respectiva
esterilizacin.
De esta forma culminamos el desarrollo de la prctica en el laboratorio de
microbiolog

VII.

ANEXOS

Ilustracin 1: Calculando valores matemticos para realizar la preparacin de

la solucin Agar.

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Ilustracin 2: Los compaeros atendiendo a las indicaciones del ingeniero

responsable de la prctica.

VIII.

1. BBL. Dy. Manual de Medios de Cultivo Microbiolgicos. 2003.

2. Merck. Microbiology Manual. 2002.

BIBLIO
GRAF
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