Tcnicas Analticas Instrumentales

Fluorescencia.

Serie de problemas 3. Espectroscopa de fluorescencia.

Problema 1.
Definir los siguientes trminos:
a) fluorescencia
d) estado singulete
g) conversin interna
j) predisociacin

b) fosforescencia
e) estado triplete
h) conversin externa
k) disociacin

c) fluorescencia resonante
f) relajacin vibratoria
i) cruzamiento entre sistemas
l) rendimiento cuntico.

Problema 2.
Explicar la diferencia que existe entre el espectro de emisin de fluorescencia y el
espectro de excitacin de fluorescencia. Cul es el que se parece ms al espectro de
absorcin?
Problema 3.
Cul de los miembros de los pares de compuestos que se indican a continuacin
tienen un mayor rendimiento cuntico de fluorescencia? Justifique su respuesta.
a)

OH

CO2H

fenolftalena

OH

CO2H

Fluorescena

b)

fluoreno

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bifenilo

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Fluorescencia.

c)

OH

OH

HO

HO
N N

N N

H H

bis(o -hidroxifenil)hiidracina

o,o' -dihidroxiazobenceno

d)

H
H
H

H
trans-estilbeno

cis-estilbeno

Problema 4.
Indicar en cul de los siguientes disolventes ser mayor la fluorescencia del naftaleno:
1-cloropropano, 1-bromopropano o 1-yodopropano. Justifique su respuesta.
Problema 5.
Indique si la fluorescencia de la anilina ser mayor a pH = 3 o a pH =10. Justifique su
respuesta.
Problema 6.
a) Describa esquemticamente un espectrofluormetro.
b) Compare su disposicin con un espectrofotmetro UV-VIS.
c) Compare los lmites de deteccin de ambas tcnicas.

Problema 7.
La forma reducida de la nicotinamida adenina dinucletido (NADH) es una coenzima
muy importante e intensamente fluorescente (busque su estructura molecular).
Presenta un mximo de absorcin a 340 nm y un mximo de emisin a 465 nm.
Mediante soluciones patrn de NADH se obtuvieron las siguientes intensidades de
fluorescencia:

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Fluorescencia.

[NADH]/M
0,100
0,200
0,300
0,500
0,600
0,700
0,800

Intensidad relativa
13,0
24,6
49,9
59,7
71,2
83,5
95,1

Construir una curva de calibracin y calcular la concentracin de NADH en una muestra

desconocida que tiene una intensidad de fluorescencia relativa de 42,3 unidades.

Problema 8.
La quinina es una molcula fluorescente usada comnmente para especificar los
lmites de deteccin de diversos espectrofluormetros. Se presenta abajo la estructura
de la quinina. Predecir que parte de la molcula tiene la mayor probabilidad de
comportarse como cromforo y como centro fluorescente.

Problema 9.
La concentracin de cido acetilsaliclico (C9H8O4) en tabletas de aspirina puede ser
determinada por hidrlisis al ion salicilato (C7H5O3-) y determinacin de su
concentracin por espectrofluorometra. Se prepara una solucin stock estndar
pesando 0,0774 g de cido saliclico (C7H6O3) en un matraz de 1 L y diluyendo a
volumen con agua destilada. Luego, se prepara un conjunto de estndares de
calibracin pipeteando 0; 2,0 ; 4,0 ; 6,0 ; 8,0 y 10,0 mL de la solucin stock en sendos

Gerardo Caballero

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Fluorescencia.

matraces de 100 mL conteniendo 2,0 mL de NaOH 4M y diluyendo a volumen con agua

destilada. La fluorescencia de los estndares de calibracin fue medida a emisin =
400 nm, usando excitacin = 310 nm.
Se obtuvieron los siguientes resultados:
mL de solucin
estndar stock
0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0

Intensidad de
fluorescencia
0
3,02
5,98
9,18
12,13
14,96

A continuacin, varias tabletas de aspirina se molieron en mortero a un polvo fino del

cual se tomaron 0,1013 g que se llevaron a un matraz de 1 L. Se llev a volumen con
agua destilada, y una porcin de esta solucin se filtr para remover los excipientes
insolubles, y un alcuota de 10,0 mL se transfiri a un matraz de 100 mL conteniendo
2,0 mL de NaOH 4M. Despus de llevar a volumen, se encontr que la fluorescencia de
la solucin resultante era 8,69.
Determine el % p/p del cido acetilsaliclico en la tableta de aspirina.

Problema 10.
El selenio (IV) en aguas naturales puede ser determinado por complejacin con
pirrolidinditiocarbamato de amonio, y extraccin con cloroformo. Esta etapa sirve para
concentrar el Se (IV) y separarlo del Se (VI). Luego, el Se (IV) es llevado nuevamente a
fase acuosa con cido ntrico. Despus de complejar con 2,3-diaminonaftaleno, el
complejo es extrado en ciclohexano. Se mide fluorescencia a 520 nm luego de
excitacin a 380 nm. Se realiza una calibracin por adicin de cantidades conocidas de
Se (IV) a la muestra de agua antes de comenzar el anlisis. Calcule la concentracin de
Se (IV) dados los siguientes resultados:
[Se(IV)] agregado (nM)
0
2,0
4,0
6,0

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Intensidad de
fluorescencia
323
597
862
1123

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