Biomarcador de susceptibilidad :determinacin del polimorfismo SULT1A1.

El SULT1A1 genotipo se determin mediante un ensayo basado en pyrosequencing. Un

par de base de 268 (pb) fragmento del gen SULT1A1 humanos se PCR-amplificacin con
los primers I6F395 (5'-biotina-GTTGAGGAGTTGGCTCTGCAGGGTC-3 ') y R733 (5'GGGGACGGTGGTGTAGTTGGTCATAG-3'). Seis nanogramos de ADN genmico se
mezclaban con TaqPlus Precision amortiguacin (Stratagene, La Jolla, CA, EE.UU.) en
una mezcla de reaccin que contiene 50 mM dNTPs, 10 pmol PCR primers y 1 U de DNA
polimerasa TaqPlus de precisin en un 50 l de volumen de reaccin. Ciclismo
condiciones incluyen desnaturalizacin inicial de 5 min a 94 C seguido de 25 ciclos de
94 C durante 1 min, 68 C durante 1 min inicialmente stepdown con un incremento de
0,5 C en cada ciclo, y 72 C durante 1 min . Esto fue seguido por 20 ciclos de 94 C
durante 1 min, 56 C durante 1 min y 72 C durante 1 min. Una ltima prrroga de 10 min
a 72 C completado la amplificacin. La presencia del producto de PCR fue confirmada
por electroforesis en gel de agarosa.