FACULTAD DE MEDICINA HUMANA.

Laboratorio de Microbiologa
TEMA.
MEDIOS DE CULTIVO, MTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
BACTERIANO

DOCENTE
Carlos Abanto Daz
ALUMANO.
Jos Mario Bustamante Daz

CICLO: IV / SEMESTRE ACADEMICO 2016 - II

I.

INTRODUCCIN:

Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseado diversos

mtodos que permiten cultivarlos bajo condicione artificiales, en los que es posible
cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de
microorganismo. Una de las tcnicas ms usadas en el laboratorio de
microbiologa consiste en transferir una muestra microbiolgica de un ambiente
determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos. A l
efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en el rea de trabajo,
existen muchos otros microorganismos; debido a esto, es necesario tomar
precauciones para impedir que stos penetren y contaminen los cultivos en
estudio. Por otra parte, para considerar no slo el aspecto nutricional, sino tambin
las condiciones ambientales de su hbitat natural, por lo que en el medio de cultivo
se debe ajustar el pH y concentracin de sales y durante la incubacin
condiciones tales como la temperatura, aireacin, la luminosidad. La aplicacin de
estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos
mixtos, as como su aislamiento y la obtencin de cultivos puros, facilitando de
este modo, el estudio, caracterizacin, aplicacin y control de los mismos. La
forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propsito
especfico del estudio.
Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de
ste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas. La poblacin
de microorganismos desarrollada en un medio se denomina cultivo. Cuando ste
contiene una sola especie de microorganismo, se denomina cultivo puro o
axnico, cuando contiene ms de una especie de microorganismos se denomina
cultivo mixto.

II.

OBJETIVOS:

Comprender la utilidad de los medios de cultivo en el trabajo microbiolgico.

Diferenciar los distintos medios de cultivo de acuerdo a su consistencia y

funcin.

Conocer y realizar las diferentes tcnicas de siembra y aislamiento bacteriano.

Observar el desarrollo de bacterias aisladas a partir de un cultivo mixto.

III.

MARCO TERICO:

CONDICIONES GENERALES
Presentar todos los elementos necesarios y en sus proporciones y/o
cantidades necesarias.
pH adecuado.
Condiciones osmticas adecuadas.
Estril y preservado de cualquier contaminacin.
Medio fresco (ya que se desecan y pierden humedad, concentrndose el resto
de componentes).
COMPONENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Agua (Destilada o desionizada),

Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se obtiene
de ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.
Azcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los ms
empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa.
Extractos. Son preparados de ciertos rganos o tejidos animales o vegetales
obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de levadura, de malta, etc.
Peptonas. Son protenas hidrolizadas, se obtienen por digestin qumica o
enzimtica de protenas animales o vegetales.
Fluidos corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero
sanguneo son aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos
microorganismos patgenos.
Sistemas amortiguadores. Son sales que se aaden al medio para mantener
el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Ej.: fosfatos
bisdicos o bipotsicos.
Indicadores de pH. Son indicadores cido-base que se aaden para detectar
cambios de pH en el medio.

Agentes reductores. Sustancias que se aaden al medio para crear las

condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos o
anaerobios. Ej.: cistena y tioglicolato.

CLASIFICACIN
Por su consistencia:

Medios de cultivos lquidos: caldo nutritivo, caldo selenito, caldo peptonado

Medios de cultivos semislidos: agar SIM, agar MIO
Medios de cultivos slidos: agar sangre, agar MacConkey, agar manitol
salado
Por su funcin o fines especiales:
Medios nutritivos (simples): con nutrientes mnimos para que bacterias poco
exigentes desarrollen. Ej: caldo y agar nutritivo
Medios nutritivos enriquecidos: son medios simples a los que se aaden ciertos
productos a manera de suplemento nutritivo que permiten el aporte de factores
de crecimiento. Ej: agar sangre, agar chocolate, etc.
Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que por su composicin
qumica favorecen o permiten la multiplicacin de unos microorganismos,
inhibiendo parcialmente la de otros. Ej: caldo selenito, caldo peptonado
alcalino.
Medios selectivos: permiten el crecimiento solo de la especie que se desea
aislar, para lo cual se les agrega colorantes bacteriostticos (azul de metileno,
verde de malaquita, verde brillante, etc.). Ej: agar Mac Conckey, agar
Salmonella-Shigella (SS), agar manitol salado.
Medios diferenciales: contienen sustancias nutritivas y un indicador de pH que
permite detectar las reacciones bioqumicas especficas de los
microorganismos: Ej: agar triple azcar (TSI), agar urea, agar citrato, etc.
Medios de transporte: permite mantener viables a los microorganismos durante
el traslado al laboratorio: caldo hafna, Cary Blair, Stuard, etc.

MTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO BACTERIANO:

En Microbiologa se entiende como siembra al proceso mediante el cual se

lleva una porcin de una poblacin de microorganismos, denominada inculo,
de un cultivo crecido a un medio nutritivo para su crecimiento. Todo este
proceso hay que llevarlo a cabo con instrumentos y medios previamente
esterilizados y siguiendo las instrucciones de los monitores de prcticas. La
principal advertencia consiste en trabajar siempre prximos a la llama del
mechero que, debido a las corrientes de conveccin verticales que genera, es

capaz de crear un ambiente estril en la zona inmediatamente alrededor y

debajo de la llama.
Para realizar un cultivo de microorganismos es necesario que el nmero de
clulas bacterianas (inoculo) sea transferido (inoculado) a un medio de cultivo
estril. Al querer aislar una especie en particular a partir de una muestra con
mezcla de microorganismos deben emplearse tcnicas de aislamiento lo que
permiten obtenerlas en forma pura. Esto implica la utilizacin de medios tanto
simples como especiales, mayormente slidos de acuerdo a la naturaleza del
microorganismo.
Las tcnicas de cultivo se realizan por siembra o diluciones sucesivas.

Por Siembra: es el procedimiento por el cual se pone en contacto al

microorganismo con un medio de cultivo, para que en condiciones ptimas de
temperatura y tiempo de incubacin pueda desarrollar y multiplicarse in vitro.
La finalidad es el aislamiento para obtener un cultivo puro de bacterias a partir
de una muestra problema (orina, heces, secreciones, aguas servidas, etc).
La siembra puede ser:
-

Por inoculacin
Por estras simples
Por dispersin o agotamiento
Por puntura

Por diluciones sucesivas: que consiste en hacer diluciones seriadas de la

muestra o del inculo, es decir esta se utiliza cuando se tienen muestras
lquidas (orina, agua, etc) y como su nombre lo indica se realiza haciendo
diluciones a las muestras (1:100, 1:1000, 1:10000, etc). Posteriormente se
siembra cada dilucin en placas petri con medios de cultivo.

Una vez obtenidos los cultivos puros, pueden procederse al examen

microscpico (tinciones especficas), al examen macroscpico (morfologa de
las colonias) y posteriormente al estudio de las actividades bioqumicas o
caractersticas inmunolgicas de los microorganismos aislados. Todos los
procedimientos mencionados permitirn lograr la identificacin precisa de las
bacterias.

IV.

RESULTADOS :

Manejo del asa bacteriolgica

El profesor demostrar el manejo adecuado del asa y explicar las

precauciones que se deben tener en la toma de la muestra, tales como:
esterilizar el asa, dejara enfriar para evitar al quemar a las bacterias.

Sumergir el asa hasta el fondo del cultivo lquido (ya que este sitio se
encuentra una mayor concentracin de microorganismos) y observar que el
asa al retirarle del tubo est cubierta por una pelcula lquida.

Mtodo de siembra por agotamiento: aislamiento a partir de un cultivo mixto

1. Tomar un lpiz graso y marcar por detrs de la caja que contiene el agar, las
lneas, como est indicado en la figura 1, quedarn tres sectores, el sector
nmero 1 es ms pequeo que los otros dos y servir para descargar el asa.
2. Esterilizar el asa y obtener una asada de cultivo del medio lquido (como se
indic previamente). Cerrar el tubo y colocar en una gradilla.
3. Con la mano izquierda levantar parcialmente la tapa de la caja de Petri y
sembrar trazando una serie de lneas en zigzag muy cerradas a todo lo ancho
del sector 1. (Esto mismo se puede hacer colocando la caja de Petri sobre la
mesa y con la palma de la mano, hacer un movimiento rpido para levantar el
fondo que contiene el medio de cultivo, como indicar el profesor).
4. Esterilizar el asa en el mechero. Girar la caja 90 grados hasta que el sector 1
quede a la izquierda y el sector 2 hacia arriba. Sin volver a tomar inoculo,
trazar un zigzag un poco ms abierto en el sector 2, invadiendo el sector 1 en
las primeras lneas de zigzag, pero no en las ltimas.
5. Girar nuevamente la placa 90 grados, ahora el sector 2 estar a la izquierda y
el sector 3 hacia la derecha.
6. Hacer un nuevo zigzag en el sector 3, invadiendo el sector 2. Este paso puede
repetirse, sembrando un cuarto sector.
7. Incubar las cajas a 37 C durante 24 horas. Las cajas ya sembradas debern
colocarse con la tapa hacia abajo y la parte que contiene el agar sembrado,
hacia arriba.

Mtodo de siembra en Caldo de cultivo:

Coger el asa de siembra en aro, esterilizarla al mechero al rojo vivo y dejarla

enfriar por unos segundos.
Abrir una placa con medio de cultivo y cultivo bacterianos y coger una colonia
bien aislada, con ayuda del asa de siembra.
Luego destapar un tubo con Caldo de cultivo cogiendo la torunda con el dedo
meique de la mano con que se est cogiendo el asa de siembra con la
colonia.
Introducir el asa de siembra en el tubo y agitar suavemente hasta que se
desprenda la colonia del asa de siembra.
Tapar el tubo con la torunda, llevar a esterilizar el asa de siembra y
homogeneizar bien el Caldo.
Llevar a incubar a 37 C por 12 hrs.

 Staphylococcus aureus

Agar sangre

Agar Mac Conkey

Escherichia coli

Agar Sangre

Agar Mac Conkey

1. Qu precauciones se deben tener antes de sembrar en medios para

anaerobios?
Las bacterias anaerobias se pueden cultivar eliminando el oxgeno del medio
ambiente o estableciendo un potencial redox bajo, mediante la adicin de los
suficientes materiales reductores al medio de cultivo. La proteccin de los cultivos
anaerobios del oxgeno libre se puede conseguir por varios mtodos diferentes, el
ms empleado en clnica es sembrar la bacteria en placas o tubos de cultivo e
introducirlos en las llamadas jarras de anaerobiosis donde se genera una
atmsfera libre de oxgeno.

2. Cul es la importancia de un cultivo puro?

Una vez que se obtiene un cultivo puro, normalmente se ha de propagar (se le
hace crecer de nuevo). Para cultivar microorganismos en el laboratorio, se ha de
preparar un medio de cultivo, lquido o slido, con todos los nutrientes necesarios
para su crecimiento. Los medio slidos se hacen generalmente, aadiendo agar a
los lquidos.

V.

DISCUSIN:
Se realiz algunos cultivos en la prctica, donde para empezar a realizar
uno mismo un cultivo debe de tener en cuenta tener una vestimenta
adecuada para el laboratorio, tambin se aprendi a sembrar
microorganismos de los diferentes mtodos.

VI. CONCLUSIONES:
Al realizar la prctica se comprendi la utilidad de los medios de cultivo en
el trabajo microbiolgico.

Se realiz las diferencias de los distintos medios de cultivo de acuerdo a su

consistencia y funcin.
Se diferenci y conoci las diferentes tcnicas de siembra y aislamiento
bacteriano.

Observacin del desarrollo de bacterias aisladas a partir de un cultivo mixto.

VII.

BIBLIOGRAFA:
http://www.fagro.edu.uy/~microbiologia/docencia/materiales
%20teoricos/Siembra%20y%20aislamiento.pdf
http://www.izt.uam.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbi
ologia_general.pdf

http://www.ub.edu/medicina/program/3tercer/esp/MicrobiologiatradES.pdf