Microbiologia Celular

1 parte

The phylogenetic tree of life

as defined by comparing rRNA gene sequencing
Procaryotes

Eukaryotes

Eukarya
Bacteria

Archaea

Universal ancestor
(adaptado de Prescott, Harley, Klein, Microbiology, 5th ed.)

Ribosomal RNA (rRNA) evolutionary chronometer

Microrganismos esto distribuidos pelos trs domnios:

Eukarya

- Microrganismos: protozorios, microalgas, fungos

- Organismos superiores: animais, plantas, algas multicelulares

- Maior parte so bactrias extremfilas, isto vivem em ambientes

extremos; por exemplo:
- bactrias que necessitam de nveis elevados de sal vivem em lagos
Lago salgado no Quenia
salgados, salinas, etc.;
Proliferao de
halobactrias vermelhas - outras que necessitam de temperaturas elevadas vivem em fontes
Archaea

termais em regies com actividade vulcnica, etc.)

- Bactrias produtoras de gs metano

(metanognicas; vivem em habitats anxicos como
rumen/animais, sedimentos de lagos, campos de arroz,
Regies vulcnicas
etc.)
(Temperaturas altas
e/ou pH cido)
(Aberturas hidrotermais fundos marinhos,
Aores, Yellowstone park, EUA, Islndia)

Bacteria

Todas as outras bactrias, incluindo maior parte das bactrias ambientais

(p.ex., do solo,da gua, da microflora natural de animais e plantas),
bactrias patognicas para o ser humano, animais e plantas, bactrias
fotossintticas, etc.

Extremozymes

Microrganismos extremfilos
- Termfilos ou Hipertermfilos
- Acidfilos ou alcalfilos
- Halfilos

Enzimas que funcionam em

condies ambientais extremas
(p.ex., a Temperatura elevada,
a pH cido ou alcalino, ou na
presena de concentraes elevadas de sal)

So activas e estveis em condies ambientais extremas

Potencial uso na industria (ex. biocatlise em condies extremas);
Aplicaes no processamento de alimentos, em materiais de limpeza, etc. ;
Investigao, etc.
Exemplos: - Proteases, amilases, celulases, xilanases, etc. termoestveis
(para a industria alimentar, txtil ou de detergentes, etc.)
- Taq DNA polimerase, Pfu DNA polimerases, etc.
aplicao na tcnica da Reaco de Polimerizao em Cadeia
do DNA (PCR- Polymerase Chain Reaction), com aplicaes
em microbiologia ambiental, microbiologia clnica, engenharia gentica, etc.
(Taq = Thermus aquaticus; Pfu = Pyrococcus furiosus)

Microrganismos procariotas
Estruturas e funo nas clulas
de bactrias

Formas e tamanho das clulas de bactrias

(Cocos)

(Bacilos ou
bastonetes)

(Espiroquetas hlices flexveis)

(Bactrias com caule ou apndice)

(Espirilos hlices rgidas)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology,
th edition,Mc GrawHill, 2002

Formas pleiomrficas formas variveis

(Miclio rede de filamentos

multinucleados)

 The largest bacteria

known has
~ 750 m dimeter
(Thiomargarita
namibiensis isolated
from a oceanic sediment
in the Nambia Coast,
1997;
Epulopiscium fishelsoni
isolated from the gut of
the surgeonfish, Red
Sea)

The smallest
bacteria known has
0.2 m of diameter
(Mycoplasma
pneumoniae)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, 5th edition,Mc GrawHill, 2002

Alguns PROCARIOTAS FAMOSOS (domnio Bacteria)

Escherichia coli
(bactria natural do intestino;
coliforme)

Bacillus anthracis
(ANTRAX bioterrorismo)

Endsporo

Cianobactria
(fotossntese oxignica;
Fitoplankton ambientes aquticos)

Pseudomonas sp.
(biodegradao de compostos orgnicos
poluentes no Ambiente)

Staphylococcus aureus
(Patogneo humano; infeces em feridas,
abcessos, choque txico)
Lactobacillus acidophilus
(fermento lcteo do Iogurte)

Some famous Archaea

Pyrococcus furiosus
Isolated from marine sediments
near volcanos; rapid growth
at 100C (duplicates in ~37 min);
also resistent to radiation;
contain enzymes with tungsten.
Pfu DNA Polymerase is
comercially availabe for use
in PCR (in vitro Polymerase
Chain Reaction)

Thermoplasma acidophilum
Grows optimally at 59C and
pH 1.8; lacks a cell wall
various shapes

Methanobrevibacter smithii
dominant archaeon in the human
gut ecosystem (large bowel);
influences the digestion of
polyssacharides by consuming
end-products of bacterial fermentation

Archaeal Lipids: Innovative Materials

for Biotechnological Applications
In European Journal of Organic Chemistry, 2008

Development of biomimetic materials, drug-delivery systems, etc.

Procaryotic cell organization

Ribossomes
Cytoplasm

Nucleoid

Plasmid

Flagellum

Plasma membrane

Cell wall
Inclusion bodies

A parede celular de procariotas

(Cell Wall)

uma estrutura rigida

situada externamente
membrana plasmtica

Funes da parede celular

D forma e integridade clula

Protege a clula da lise osmtica (

)

Contribui para a patogenicidade de algumas bactrias

Protege a clula de substncias txicas

A parede celular e a proteco osmtica

osmose
movimento de gua atravs de uma
membrana selectivamente permevel, de
solues mais diludas para mais
concentradas
As clulas esto frequentemente em
solues hipotnicas
[soluto]fora da clula < [soluto]dentro da clula

A parede celular protege contra a lise osmtica

Lise osmtica
Pode ocorrer quando as clulas esto em solues hipotnicas
([solutos]fora da clula < [solutos]dentro da clula)

- O movimento de gua para o interior das clulas causa aumento de

volume que culmina na lise da clula devido diferena de presso
osmtica.

A parede celular no protege contra a plasmlise

Plasmlise
Ocorre quando as clulas esto em solues hipertnicas
[solutos]exterior da clula > [solutos]interior da clula
A gua sai da clula causando o encolhimento do citoplasma, que
resulta em perda de viabilidade da clula.
Importncia prtica da plasmlise - til na conservao de
alimentos (ex: alimentos secos e geleias)

Colorao de Gram (Gram stain)

Gram+
Ex. Clostridium

GramEx. Escherichia coli

Taxonomic importance
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

As bactrias dividem-se em dois grupos com base na estrutura e

composio da parede celular: bactrias Gram positivas e Gram negativas
As bactrias Gram positivas e Gram negativas distinguem-se com base
na resposta colorao de Gram (observao microscpica).

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Colorao de Gram

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Peptidoglicano (murena)

um componente muito importante da parede de bactrias Grampositivas e Gram-negativas (do domnio Bacteria)

Polissacrido formado por unidades repetitivas; insolvel na gua

A unidade repetitiva formada por

- N-acetilglucosamina (NAG)
cido N-acetilmurmico (NAM)
que aparecem alternados.

O cido N-acetilmurmico possui no grupo hidroxilo do C3 um

substituinte tetrapptido (normalmente, constituido por 4 aminocidos;
participa no estabelecimento de pontes entre duas cadeias -NAG-NAMNAG-NAM-).

So conhecidos mais do que 100 tipos diferentes de peptidoglicano

em espcies bacterianas diferentes
(variam principalmente na composio das cadeias peptdicas que estabelecem
as pontes entre cadeias de NAG e NAM)

Peptidoglycan
(muren)
(Polissacaride layer;
very similar in
Gram-positive and
Gram negative
Bacteria)
Diversity between
bacteria
observed mainly in the
composition of the
peptide chain and
interbridge.

Staphylococcus aureus
(Gram-positive)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

()

Gram-negativas
(ligao peptdica
directa entre as duas
cadeias)

Gram-positivas
A ligao entre duas
cadeias feita por um

pentapptido
cross linking.
(P. ex. cadeia pentaglicnica
em Staphylococcus aureus)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Ligao glicosdica
(1, 4), entre NAM e
NAG. sensvel
aco da lisozima

Alguns dos
aminocidos no
so encontrados
em protenas

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Lisozyme
- Present in animal secretions (tears, saliva), in the egg white, etc.
(Line of defense against bacterial infection ?!)

- Action of lisozyme (breaks the

Hipotonic extracelullar
medium

Isotonic extracelullar
medium
(p.ex. saline solution 0.9% NaCl,
sucrose 10%)

1-4 glycosidic bond in peptidoglycan)

- Aco do antibitico penicilina e derivados, p.ex. cefalosporinas,

bacitracina .
(inibem a sntese de peptidoglicano - ao nvel do estabelecimento da ponte entre
pptidos)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

protoplasto clula sem parede celular

(p.ex. Clulas Gram positivas - suspensas em meio isotnico ou ligeiramente
hipertnic e tratadas com penicilina, no possuem parede celular)
esferoplasto clulas sem peptidoglicano mas com parte da parede celular
(p.ex. Clulas Gram negativas - suspensas em meio isotnico ou ligeiramente
hipertnico e tratadas com penicilina mantm uma parte da parede celular, i.e., a
membrana externa)
. Protoplastos e esferoplastos so sensveis a modificaes da presso osmtica do meio
extracelular (quando suspensos em meios diludos (hipotnicos) sofrem lise em resultado da entrada
descontrolada de gua).

Parede celular de bactrias Gram positivas

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Contm essencialmente peptidoglicano e cidos teicicos

cidos teicicos
so polmeros de glicerol
ou ribitol ligados por
grupos fosfato
(Polialcois)
- podem ter acares ou
D-alanina ligados

- conferem carga negativa

superfcie celular e
ligam caties divalentes
(p.ex. Ca2+)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Parede celular de bactrias Gram negativas

Parede
celular

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Consiste numa fina camada de peptidoglicano rodeada por uma membrana externa

A membrana externa composta por lpidos, lipoprotenas, e lipopolissacridos (LPS)

Lipopolissacrido (LPS) nas bactrias Gram negativas

Consiste em trs partes:

Lpido A (hidrfobo)
Regio central polissacardica (hidrfila)
Polissacardeo lateral O
(composio varia entre espcie bacterianas)

Importncia do LPS

Contribui para a especificidade

antignica da espcie bacteriana
(cadeia lateral O);
Contribui para a carga negativa da
superfcie da clula (regio central
polissacardica)
Ajuda a estabilizar a estrutura da
membrana externa (lpido A)
Pode ser uma endotoxina (lpido
A) (em algumas bactrias Gram negativas
que causam infeces, p.ex. Gneros
Salmonella, Escherichia, Shigella sintomas
no hospedeiro)
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Ligaes entre estruturas (Bactrias Gram negativas)

As lipoprotenas de Braun ligam a membrana externa ao
peptidoglicano (fortemente)
Locais de adeso
Locais de contacto directo entre a membrana plasmtica e a
membrana externa
Algumas substncias podem entrar e sair directamente da
clulas nestes locais de adeso

Outras caractersticas da membrana externa

relativamente permevel a compostos qumicos e pptidos
devido presena de porinas
As porinas formam canais atravs dos quais pequenas
molculas (600-700 daltons) so capazes de passar

Estruture of Pseudopeptidoglycan
(Ex. em Methanobacterium species)

Em algumas bactrias do domnio

Archaea, o componente principal da
parede celular o
pseudopeptidoglicano.
- os acares da unidade repetitiva

so a

N-acetilglucosamina e o cido Nacetiltalosaminurnico (no possui cido murmico)

- as ligaes glicosdicas so do tipo -1,3 (no so
sensveis aco da lisozima)
- a ponte entre duas cadeias feita por um
resduo de glutamato

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Em outras espcies Archaea,

a parede celular consiste em
camadas de polissacridos,
glicoproteinas ou protenas.

Tipo de parede celular mais

comum em Archaea - camada
superficial paracristalina (Slayer), composta por
subunidades de protenas ou
glicoprotenas; tem simetria
cristalina (hexagonal,
tetragonal, etc.).
Tambm presente em algumas bactrias
do domnio Bacteria.

Espao
Periplasmtico

o espao entre a membrana plasmtica e a parede celular (em bactrias grampositivas) ou entre a membrana plasmtica e a membrana externa (em bactrias
gram-negativas)

Periplasma - substncia que ocupa o espao periplasmtico

ENZIMAS PERIPLASMTICAS
- Encontradas no periplasma de bactrias gram-negativas
- Funes principais
- Aquisio de nutrientes
- Sntese de peptidoglicano
- Modificao de compostos txicos

O citoplasma
Encontra-se entre a
membrana e o

nucleoide
Contm ribossomas
e corpos de

incluso

Corpos de incluso

grnulos de materiais orgnicos ou inorgnicos produzidos

pela clula;

frequentemente usados como materiais de reserva

energtica ou reserva de materiais estruturais.

quantidade depende do estado nutricional da clula.

Exemplos de corpos de incluso orgnicos

Grnulos de Glicognio (reserva de Carbono e energia)
- Polmero de glucose (ex: bactrias E. coli, Salmonella, Bacillus; tambm em
fungos)

Grnulos de Amido (reserva de Carbono e energia)
- Polmero de glucose (amilose, amilopectina) ex: gneros Clostridium,Acetobacter

Grnulaes lipdicas de poli--hidroxibutirato

(PHB) (reserva de Carbono e energia)
polmero de -hidroxibutirato
(ex: gneros Alcaligenes, Bacillus)

Corpos de incluso inorgnicos

Grnulos

de polifosfato

So polmeros lineares de ortofosfato tambm chamados grnulos de

volutina ( na espcie ex: Spirillum volutens)
Constituem reserva de fsforo para a sntese de cidos nucleicos e
fosfolpidos

Grnulos de enxofre
- material de reserva energtica em bactrias que
oxidam compostos de enxofre reduzidos (como o
H2S) e acumulam temporariamente S0
(no citoplasma e/ou no espao periplasmtico)
Deposio de grnulos de
enxofre no interior de clulas
de Chromatium

Magnetossomas
(em algumas espcies de

bactrias aquticas)

contm ferro sob a forma de magnetite

(Fe3O4)
so usados para orientar as clulas no
campo magntico terrestre (magnetotaxia).

Migrao de bacterias em onda, quando expostas a

campo magntico

Magnetossomas isolados
(morfologia depende da espcie)

magnetossomas

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Aquaspirillum magnetotacticum

Vacolos gasosos

Presentes em bactrias

aquticas (ex: cianobactrias, bactrias

prpura e verdes e algumas bactrias aquticas no-fotossintticas; em

lagos)

Permitem s clulas regular a profundidade a que vivem numa
coluna de gua (conferem capacidade para flutuar consoante as necessidades de
luminosidade ptimas para fotossntese)
Heterociste (site of N2 fixation)

P. ex. Anabena (cyanobacteria)

Gas vacuoles
(clusters of hollow
structures made of protein
and filled with gas)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Ribossomas

So estruturas complexas constitudas por protenas e RNA

o local onde se realiza a sntese de protenas

So mais pequenos que os ribossomas de eucariotas

Ribossomas de procariotas 70S (sub-unidades 50S e 30S)
(Ribossomas de eucariotas 80S)
S = unidade Svedburg (sedimentao)

NUCLEIDE
uma regio com forma irregular
onde se localiza o cromossoma (molcula de DNA em cadeia
dupla, geralmente, em conformao circular fechada) - normalmente,
1 / clula

O cromossoma procariotico
uma molcula de DNA cadeia
dupla e geralmente circular
Tamanho varivel entre 0,5
e 10 Mpb (pb pares de bases)
Em muitos casos, uma s cpia
por clula
90% do genoma de E. coli
codifica para protenas

Plasmdeos
So pequenas molculas de DNA cadeia dupla
Existem e replicam independentemente do cromossoma
No so necessrios para o crescimento e reproduo
da clula
Podem conter genes que conferem vantagem selectiva
s clulas que os albergam
(ex: resistncia a drogas; transformao e/ou degradao
de compostos txicos)

Componentes exteriores parede celular

CAPSULE AND
SLIME LAYERS

Cpsula

- Geralmente formada por polissacridos; ou por protenas, em alguns casos

- dificilmente removida da clula;
- observvel no microscpio ptico, por colorao negativa.

FUNES:
- favorece a adeso a superfcies (ex. infeco de tecidos por
bactrias patognicas; formao de biofilmes na Natureza);

- protege a bactria de condies ambientais desfavorveis

como a desidratao; proteco do stresse osmtico;
- protege a bactria das defesas do organismo hospedeiro que
infecta (p.ex. da fagocitose)
- protege a bactria de infeces por virus


PILLI AND FIMBRIAE

Virus-covered pillus
(microscopia electrnica de transmisso)

FIMBRIAS
- Apndices pequenos e finos, constituidos

por protenas (at 1000 / clula);

- Medeiam a adeso a superfcies (p.ex.
reconhecem receptores nas clulas dos
tecidos infectados; tambm, na
formao de biofilmes)

PILLI
- Semelhantes s fimbrias, mas mais grossos
e menos numerosos (1-10/clula);
- Necessrios para a conjugao entre bactrias
(Transferncia horizontal de plasmdeos e partes de
cromossomas entre bactrias)

Flagelo (Flagellum; plural Flagella)

3 partes: - filamento cilindro rgido e oco, composto por sub-unidades proteicas - flagelina;

- gancho liga o filamento ao corpo basal;

- corpo basal srie de anis que provocam o movimento flagelar

(funciona como motor)

Em bactrias Gram negativas

Em bactrias Gram positivas

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Possible mechanism for

Flagellar movement
In Gram negative bacteria
(proton turbine model)

Mot proteins function as the flagellar motor

Energy source: proton-motive force
~ 1000 protons / single rotation of flagellum (?)

Esquema da construo do filamento do flagelo numa bactria

Gram negativa
Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002


FLAGELOS permitem a locomoo das clulas

Montriquico e polar
(1 flagelo numa extremidade da clula )

lofotrquico

Peritrquico
(Vrios flagelos volta de
toda a superfcie da clula)

lofotrquico

(tufos de vrios flagelos numa ou ambas as extremidades da clula)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Movimento
Flagelar
O flagelo roda como
uma ventoinha,
no sentido ou
contra o
movimento dos
ponteiros do relgio

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Quimiotaxia (Chemotaxis)

Movimento das clulas na direo de um

composto qumico atractivo ou para longe
de um repelente

A concentrao destes compostos qumicos

detectada por quimioreceptores existentes na
superfcie das clulas

complexo mas rpido

As respostas ocorrem em
menos de 20 milisegundos

Phototaxia (Phototaxis)
Movimento das clulas na direo da luz
(em microrganismos fototrficos)

O ENDSPORO BACTERIANO
- produzido por certas bactrias Gram positivas (p.ex. dos gneros Bacillus,
Clostridium, Sporosarcina, Sporolactobacillus, etc.) quando sujeitas a condies
ambientais extremas (p.ex. ausncia de nutrientes, desidratao);
- uma estrutura dormente
- resistente a agresses ambientais (calor, radiao Ultra-Violeta,
desinfectantes qumicos, desidratao); ajuda sobrevivncia da espcie
bacteriana em condies ambientais adversas. No tem actividade metablica.

Esporulao
(quando fonte de C ou N se esgota)

Libertao do esporo maduro

Geralmente, 10-15 horas aps incio
da esporulao

Formao de endsporo em Clostridium pascui

(microfotografia obtida por Microscopia de contraste de fase)

FORMA E LOCALIZAO NA CLULA - tem valor taxonmico

Terminal

Central

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Sub-terminal

ESPORO MADURO

(Envlucro do endosporo - composto por vrias camadas de

Exosporium

protenas; impermevel e responsvel

pela resistncia do endosporo entrada
de compostos qumicos).

(camadas de peptidoglicano intercruzadas)

Ncleo do endosporo (core or spore protoplast)

contm algumas estruturas celulares da clula vegetativa
(p.ex. ribossomas e cidos nucleicos.)
Constituinte principal dipicolinato

de clcio

Estrutura do cido dipicolinico

Dipicolinato de clcio
complexo formado entre o
cido dipicolnico e ies Ca2+
(BrocK biology of microorganisms,Prentice-Hall)

O que torna o endsporo to resistente?

Presena de clcio complexado com cido dipicolnico intercalado
nas bases do DNA, estabilizando-o;
Desidratao do interior do endsporo (somente 10-15% H2O),
inactivando enzimas (ausncia de actividade metablica)
Camada espessa a proteger o interior do endsporo
Rico em enzimas de reparao de DNA
Contm muitas protenas de pequena dimenso (small acidsoluble protens, SASPs) que:
- protegem o DNA da radiao UV, secagem e calor
(DNA em forma mais compactada);
- podem funcionar como fonte de C e energia para a nova clula

vegetativa que vir a resultar da germinao do endosporo.

ESPOROGNESE
- Comea normalmente
quando o crescimento da
clula vegetativa pra
devido a falta de
nutrientes (normalmente,
falta de fonte de C ou de N);
- Processo complexo;
- demora entre 8 e15 h,
dependendo da
bactria em causa

Produo de SASPs
e cido dipicolinico
Incorporao de Ca2+

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

em Bacillus subtilis

GERMINAO DOS ENDOSPOROS

Germinao:

- endosporo absorve gua e incha

- cido dipicolnico excretado
- inicia-se a sntese de macromolculas
- inicia-se actividade enzimtica e actividade metablica
- protopasto do endsporo sintetiza componentes novos, emerge
do envlucro do endosporo e entra no ciclo de vida vegetativo.
Activao da germinao de endsporos
- induo da germinao;

normalmente, por aco do calor

(p.ex. 60C ou em gua em ebulio
durante 5 min dependendo da
espcie bacteriana)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002

Germinao inibida em
ambientes cidos
(aplicao na
conservao de alimentos)

Prescott, Harley & Klein, Microbiology, Mc GrawHill, 2002