23 de agosto del 2016

Contenido
CULTIVO DE LOS TEJIDOS..........................................................................3
CONCEPTO, DEFINICIN E IMPORTANCIA...............................................3
TINCIN VITAL Y SUPRA VITAL...................................................................3
Las tinciones vitales:.............................................................................3
Las tinciones supravitales:.....................................................................4
Las tinciones no vitales:.........................................................................4
CENTIFUGACIN........................................................................................4
DIREFENCIAL..........................................................................................4
POR GRADIENTES DE DESIDAD..............................................................4
Histoqumica enzimtica...........................................................................5
Inmunohistoqumica................................................................................5

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23 de agosto del 2016

CULTIVO DE LOS TEJIDOS

CONCEPTO, DEFINICIN E IMPORTANCIA
Concepto:

El cultivo de tejidos
puede
definirse
como el conjunto de
tcnicas
que
permiten el cultivo
en
condiciones
aspticas
de
rganos,
tejidos,
clulas
y
protoplastos.
Constituye
dentro
de
las
biotecnologas,
la
que mayor aporte
prctico
ha
brindado.Puede
definirse como el
conjunto
de
tcnicas
que
permiten el cultivo
en
condiciones
aspticas
de
rganos,
tejidos,
clulas
y
protoplastos.
Constituye
dentro
de
las
biotecnologas,
la
que mayor aporte
prctico
ha
brindado.

Sus
aplicaciones
van desde estudios
tericos
sobre
fisiologa
y
bioqumica vegetal,
hasta la obtencin
de plantas libres de
patgenos,
conservacin
de
germoplasma,
produccin
de
metabolitos
secundarios,
propagacin masiva
de
plantas,
mejoramiento
gentico, induccin
de
mutaciones,
seleccin in vitro y
desarrollo
de
protocolos
de
regeneracin
de
plantas
para
su
utilizacin
en
ingeniera gentica.

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TINCIN VITAL Y SUPRA VITAL

Las tinciones vitales y supravitales son aquellas que se practican sobre
clulas que estn vivas.

Las tinciones vitales: Son aquellas que se efectan sobre clulas

que estn vivas, mediante la introduccin de un colorante en la
circulacin de un organismo vivo. Son colorantes vitales, por ejemplo, el
verde Jano y el azul de metileno.

Las tinciones supravitales:

Son aquellas que se realizan sobre clulas o tejidos vivos, pero que
estn aislados del organismo del que proceden.

Las tinciones no vitales:

Se realizan sobre clulas muertas. La coloracin de clulas muertas
requiere un proceso previo de fijacin, que tiene por objeto el mantener
inalterada su estructura y el adherirlas firmemente a la superficie del
portaobjetos. La fijacin puede realizarse mediante calor, aunque
habitualmente se realiza con etanol o metanol

CENTIFUGACIN
Tcnica de sedimentacin, acelerada gracias al uso de fuerza centrfuga.
Se aplica al anlisis o separacin de mezclas.

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DIREFENCIAL
Es el proceso que tiene como resultado la obtencin de un sobrenadante
y un material sedimentado.

POR GRADIENTES DE DESIDAD

Proceso mediante el cual las partculas se distribuyen en fracciones de
diferentes densidades de un fluido lquido. Permite la separacin de
varios o todos los componentes de la muestra y la realizacin de
medidas analticas.

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Histoqumica
enzimtica se

basa
en la capacidad que tienen
algunos enzimas del tejido de
mantener funcional su centro
activo tras el proceso de fijacin.
Estos enzimas y las clulas que
los
poseen
se
ponen
de
manifiesto
mediante
una
reaccin
enzimtica
que
convierte
a
unos
sustratos
solubles e incoloros en productos
insolubles y coloreados.
Los sustratos son especficos
para la enzima y los productos se
depositan en el lugar preciso
donde se produjo la reaccin, es

decir, donde se localiza el

enzima. Las enzimas que se
pueden detectar son variadas
como las peroxidasas, fosfatasas,
deshidrogenasas,
diaforasas,
acetilcolinesterasa, entre otras.
Hay que tener en cuenta que
cuando se quiere detectar una
actividad
enzimtica
es
recomendable
no
incluir
el
material para obtener secciones
puesto que la deshidratacin y la
temperatura elevada pueden
daar la conformacin de la
enzima y por tanto la actividad
de su centro activo. Por ello estas
tcnicas se realizan normalmente
en secciones obtenidas por
congelacin o con el vibratomo.

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Inmunohistoqumica
Es un procedimiento histopatolgico en el que se usan anticuerpos para
identificar ciertos antgenos en una muestra de tejido. Por lo general, el
anticuerpo se une a una sustancia radiactiva o un tinte que hace que los
antgenos en el tejido se iluminen al microscopio. Utiliza el principio de la
reaccin antgeno-anticuerpo, el cual es muy especfico.
El proceso consiste en poner un corte histolgico del tejido en estudio en
incubacin con una sonda que reconoce al antgeno y se fija a l. Luego
revelamos la reaccin con una
sustancia
llamada cromgeno, que le da un
color
especfico al tejido y podemos reconocerla al microscopio.
Tambin sirve para estudiar la
capacidad de responder a
hormonas u otros tratamientos,
que es gran utilidad en el
tratamiento del cncer de mama y
de la prstata.

lo

FUNDAMENTOS
DE LA HIBRIDACION IN SITU
La tcnica de hibridacin in situ est marcada en la capacidad que
poseen los cidos nucleicos para hibridarse entre s, es decir, la
existencia de determinada secuencia de ADN o ARN, que resulta
complementaria con otra secuencia.
Se disea una sonda (formada por una secuencia de ADN previamente
conocida), y marcada con un fluorocromo o isotopo radioactivo.
La utilizacin de esta tcnica produce:

La hibridacin (unin) de la sonda marcada, con la secuencia a buscar

(si es que est presente) y posteriormente, tcnicas especficas de

deteccin (FISH), se obtiene la transformacin de la secuencia algo

visible.
Permite detectar secuencias especificas de ADN genmico o de ARNm
en secciones de tejidos intactas o clulas dispersas.
Se aade la sonda y la hibridacin se produce cuando se halla presente
cDNA (ADN complementario).

Con un lavado se aade la sonda marcada se separa la sonda marcada

no unida y las secuencias mal apareadas.

Tipos de hibridacin In Situ:

I.
II.
III.

IV.

Hibridaciones in situ Tisular.

Hibridaciones in situ
Cromosmica.
FISH(Fluorescent In Situ
Hybridization,Hibridaciones in
situ con fluorescencia).
Hibridaciones in situ
Cromosmica consondas
fluorescentes.