Desialylation Protein Plasma pada Infeksi Dengue berat: Peran Kemungkinan Stres oksidatif

Abstrak. Stres oksidatif pada infeksi dengue telah disarankan.Penelitian ini dilakukan untuk
mengeksplorasi plasma
protein oksidasi dan sialic asam yang kandungan pada infeksi dengue. Tiga puluh dua demam
berdarah dengue (DBD), 25 berdarah
shock syndrome (DSS), 29 demam berdarah (DF), dan 63 kontrol sehat dimasukkan dalam
penelitian ini. Tingkat
karbonilasi, konten sulphydryl, dan desialylation protein plasma diperkirakan dalam sampel fase
akut. Secara signifikan
tingkat yang lebih tinggi karbonil protein dan tingkat yang lebih rendah asam sialic dan kelompok
sulphydryl ditemukan pada DBD dan DSS
dibandingkan dengan DF menggunakan satu arah analisis varians. Analisis regresi menunjukkan
desialylation yang tergantung pada
protein karbonil pada DBD / DSS. Penelitian ini menunjukkan bahwa, pada infeksi dengue, protein
plasma mengalami peningkatan tingkat
dari desialylation, yang dapat disebabkan oleh stres oksidatif.Masa Depan studi mengenai status
sialylation endothelium dan
trombosit dapat menunjukkan cahaya ke dalam patogenesis infeksi dengue.

Dengue adalah infeksi arboviral paling sering, dengan> 100

juta infeksi di seluruh dunia setiap tahunnya, termasuk
250,000-500,000 kasus demam berdarah dengue (DBD)
dan 24.000 deaths.1, 2 Dalam kebanyakan kasus, demam berdarah (DF) adalah
diri terbatas. Namun, ada risiko perkembangan progresif
ke DBD atau dengue shock syndrome (DSS). DBD adalah
demam parah penyakit yang ditandai dengan kelainan pada hemostasis
dan peningkatan permeabilitas pembuluh darah, dan kemajuan yang parah
dapat mengakibatkan DSS. DSS adalah suatu bentuk hipovolemik
shock klinis yang berhubungan dengan hemokonsentrasi dan
yang mungkin mengakibatkan kematian jika perawatan yang tepat tidak diberikan. Meskipun
DF berbeda dari DBD / DSS dengan klasifikasi tradisional,
dengan berbagai manifestasi klinis setelah virus dengue
infeksi menunjukkan kontinum dari ringan sampai reaksi parah, hanya
seperti di banyak penyakit virus lainnya.

Sialic asam, sebuah keluarga turunan asetilasi dari neuraminic

asam, tersebar luas di mamalia. Ini biasanya terjadi sebagai
terminal komponen pada akhir non-mengurangi karbohidrat
rantai glikoprotein dan glycolipids. Dalam plasma manusia,
jumlah besar asam sialic ditemukan dalam 1 orosomucoid, antitrypsin, haptoglobin, ceruloplasmin, fibrinogen, melengkapi

protein, dan transferrin.3, 4 Untuk glikoprotein, glycan

gugus merupakan bagian integral penting baik secara struktural dan
functionally.5 asam sialic telah ditemukan untuk mempengaruhi glikoprotein yang
fungsi dan hidupnya span.6, 7 Selain itu, dilaporkan
bahwa non-mengurangi residu terminal asam sialic mungkin
molekul target spesies oksigen reaktif (ROS) dan ROS
khusus bersatu dan membebaskan mereka. Sebuah hubungan yang nyata telah
ditemukan antara stres oksidatif dan kandungan asam sialic dari
glycoproteins.8

Mekanisme yang terlibat dalam patogenesis demam berdarah

infeksi virus, terutama manifestasi DBD / DSS, tetap
terselesaikan. Dalam kasus DBD sekunder, viremia yang lebih tinggi
diamati, dan peningkatan antibodi-tergantung masuknya virus
ke dalam sel fagosit telah diduga sebagai penyebab
factor.9, 10 Namun, mekanisme dengan yang viremic tinggi
Status menginduksi DBD tidak jelas. Menyimpang sekresi
sitokin pro inflamasi telah disarankan sebagai satu lagi
faktor risiko untuk DHF/DSS.11 Pada infeksi virus dengue, berkepanjangan
aktivasi sel T dan apoptosis mereka telah diusulkan
sebagai penyebab tertunda clearance.12 virus Meskipun
patogenesis demam berdarah belum dipahami dengan baik, oksidatif
stres tampaknya memainkan role.13 penting

Setelah masuknya virus, aktivasi sistem kekebalan tubuh terjadi,

dan sel-sel fagositik dan lain menghasilkan ROS sebagai pembelaan
mechanism.13 Sekarang ada banyak bukti bahwa oksidan bermain
peran yang kompleks pada penyakit virus, mulai dari pengaruh pada
metabolisme sel inang dan kurang efek racun yang diinginkan pada host
tissue.14-16 Oksidator sangat tidak stabil dan bereaksi dengan
asam nukleat, lipid, protein, karbohidrat, atau molekul lain,
menyebabkan kaskade reaksi berantai yang mengakibatkan selular
kerusakan. Proses ini akan menyebabkan hilangnya fluiditas dan produksi
dari peroksida protein dan lemak, yang mengarah ke dinding sel
kehancuran. karbonil Protein (PC) adalah dibentuk
penanda protein oxidation.17 PC-PC telah terbukti
lebih rentan untuk cross-linking dan belahan dada yang mengalami
cepat proteolysis.18 Wide spektrum pertahanan antioksidan
mekanisme inactivates dan terletak dalam keseimbangan dengan ini
oksidan. Kelompok sulfhidril protein terikat (PBSH) memiliki
peranan penting dalam pertahanan antioksidan. Meskipun mamalia

eritrosit kaya glutatione (GSH), konsentrasi

GSH dalam isi ekstraseluler, khususnya dalam plasma manusia,
sangat rendah dibandingkan dengan content.19 intraseluler Sebagian besar
kelompok sulfhidril bebas dalam plasma manusia terikat protein
residu asam amino, yang telah disarankan untuk berkontribusi
signifikan terhadap kapasitas antioksidan dari plasma.20 manusia
Namun, tidak ada informasi yang tersedia tentang asam sialic
isi glikoprotein plasma dalam spektrum klinis yang berbeda
infeksi dengue. Selain itu, hubungan antara
terikat sialic asam dan perubahan oksidatif dalam protein plasma
pasien dengan demam berdarah belum dijelaskan.
Maka pekerjaan ini dilakukan pada infeksi dengue untuk
mencari 1) kandungan asam sialic dari glikoprotein serum dan
2) hubungannya dengan penanda oksidasi protein plasma.

BAHAN DAN METODE

Studi desain, pasien, dan kontrol. Di kota Pondicherry,
India Selatan, sebuah wabah dengue dilaporkan untuk pertama kalinya
Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia
pada bulan September 2003,21 Delapan puluh enam orang dewasa yang terinfeksi dengue (umur
rentang, 26-54 tahun, 48 pria dan 38 perempuan) berpartisipasi dalam
studi. Enam puluh tiga sehat subjek (rentang usia, 23-55 tahun; 42
laki-laki dan 21 perempuan), termasuk sebagai kontrol. Individu yang terinfeksi
tersebut kemudian dikelompokkan menjadi 29 DF, 32 DBD, dan 25
kasus DSS per sistem penilaian WHO dijelaskan di bawah ini.
kontrol normal adalah darah donor yang negatif untuk
baik anti-dengue IgM dan antibodi IgG. Ditulis informasi
persetujuan diperoleh dari semua peserta, dan penelitian ini adalah
disetujui oleh komite peninjau etik lembaga tersebut.
Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia
Klinis definisi dan pengujian virus dengue. Lengkap
sejarah klinis, tes laboratorium, dan parameter lain yang terkait
untuk diagnosis infeksi dengue seperti tourniquet tersebut
tes, hematokrit, dan platelet (Sysmex-k-100 otomatis
sel counter) dilakukan di rumah sakit setempat tercatat.
Kasus diklasifikasikan menurut WHO grading
Infeksi Dengue system.22 dibagi menjadi DF klasik, DBD,
dan DSS. DF adalah penyakit ringan membatasi diri demam akut.
DBD didefinisikan sebagai demam dengan manifestasi hemoragik,
trombositopenia, dan hemokonsentrasi atau tanda-tanda lain dari
kebocoran plasma (setara dengan DBD klasifikasi WHO
Kelas I dan II). DSS didefinisikan sebagai kriteria DBD ditambah hipotensi

untuk usia atau tekanan nadi sempit (> 20 mm

Hg) atau tanda-tanda klinis dari syok, misalnya, lambat pengisian kapiler,
dingin berkeringat kulit (setara dengan DBD Kelas III dan IV).
Trombositopenia didefinisikan sebagai jumlah trombosit <100.000 /
mm3 dan hemokonsentrasi sebagai peningkatan hematokrit 20%
di atas normal untuk usia dan jenis kelamin. Pengujian serologi darah
sampel untuk kedua IgM dan antibodi IgG antidengue
dilakukan menggunakan kit ELISA (Novatech, Dietzenbach,
Jerman), sesuai prosedur yang diuraikan oleh produsen.
Multiplex reverse transcriptase-polymerase chain reaction
(RT-PCR) dilakukan, dan dengue serotipe 3
ditemukan untuk bertanggung jawab untuk ini outbreak.23

Estimasi asam plasma sialic. Sialic asam isi

protein plasma diukur dengan menggunakan modifikasi berikut
dari method.24 Aminoff's Secara singkat, 50? plasma L
diambil dan dilarutkan dalam air suling (1:4). protein serum
diendapkan oleh pemusingan dengan 125 L 5% TCA? di 2.000
rpm selama 5 menit. Supernatan dibuang, dan sialic
asam gugus dari pelet protein dihidrolisis dengan 0,5
mL 0,1 mol / L H2SO4 pada 80 C selama 60 menit. Untuk hidrolisat,
250? L pereaksi periodat (25 mmol / L periodik
asam dalam 0,125 mol / L H2SO4, pH 1,2) ditambahkan dan diinkubasi
dalam C 37 air mandi selama 30 menit. Kelebihan periodat adalah
dikurangi dengan 0,2 mL natrium arsenit (2% larutan natrium
arsenit dalam 0.5 mol / L HCl). Sebagai warna kuning Begitu dibebaskan
yodium memulai memudar, mL asam thiobarbituric 2 (0,1
mol / L larutan asam 2-thiobarbituric dalam air, pH disesuaikan
menjadi 9,0 dengan NaOH) ditambahkan, dan dengan stopper, tabung
diinkubasi dalam penangas air mendidih selama 8 menit. The
tabung reaksi didinginkan dalam air es dan diekstraksi dengan 5 mL
butanol asam campuran (butan-1-ol mengandung vol 5% / vol di
HCl), pemisahan dua tahap dilakukan dengan singkat cepat
sentrifugasi, dan warna intensitas fase butanol diukur
spektrofotometri pada 549 nm. Tingkat sialic asam
dihitung menggunakan koefisien molar kepunahan (70,7 103
L protein / mol cm) dan dinyatakan dalam mikrogram per miligram
mengingat berat molekul asam sialic sebagai 309,3. Jumlah
protein serum diukur dengan metode Biuret menggunakan
Ciba Corning 550 Express autoanalyzer (Ciba Corning Diagnostics,
Oberlin, OH).
Pengujian karbonilasi protein plasma. Alat tes itu
dilakukan sesuai dengan metode Levine dan others.25 The

kepunahan milimolar koefisien produk berwarna

22.01/mmol/cm pada 366 nm. Protein carbonylated bereaksi
dengan 2,4-dinitrophenyhydrazine (DNPH) untuk membentuk suatu berwarna
aduk 2,4-dinitrophenylhydrazone. Total plasma protein
diperkirakan dengan metode biuret menggunakan sepenuhnya otomatis
auto-analyzer 550 mengekspresikan ditambah (Ciba Corning Diagnostics).
Penentuan konten grup protein-terikat sulphydryl.
Protein-terikat kandungan gugus sulphydryl ditentukan
menurut metode Sedlak dan Lindsay.26 dengan 5,
5 2-nitrobenzoic asam-dithiobis? (DTNB) dengan sedikit modifikasi.
Secara singkat, 200 L plasma? Diambil dan dilusian pada tahun suling
air (1:4). protein plasma diendapkan dengan sentrifugasi
dengan 500? L TCA 5% pada 15.000 rpm selama 3 menit.
Supernatan dibuang, dan pelet protein dicampur
dengan 2 mL buffer 0,2 mol / L Tris-HCl (pH 8,2) -20 mmol L /
EDTA dan 20? L dari 10 mmol / L DTNB dan 0,15 mL 5%
SDS. Akhirnya, absorbansi diukur pada 412 nm terhadap
kosong (tanpa DTNB) dan juga dikoreksi untuk pereaksi sampel
kosong (tanpa contoh). Pembacaan absorbansi
dibuat 15 menit setelah menambahkan DTNB untuk menguji sampel. The
eksperimen ditentukan kepunahan koefisien molar
13.1/mm/cm. Nilai disajikan dalam nmoles per miligram
protein.
Analisis statistik. Data dianalisis menggunakan statistik
program SPSS for windows, versi 13 (SPSS, Chicago, IL).
Hasil diberikan sebagai rata-rata SD. T independen Student
uji digunakan untuk menentukan perbedaan yang signifikan
antara kasus dan kontrol. Satu-way ANOVA diikuti
dengan uji HSD Tukey post hoc digunakan untuk mengetahui perbedaan
parameter dipelajari dalam kelompok-kelompok klinis dari demam berdarah
infeksi. Hubungan antara PCOS dan terikat sialic
kadar asam dievaluasi dengan menggunakan regresi linier. Hasil
dinyatakan sebagai koefisien regresi (?). Klinis
antara kelompok yang berbeda dibandingkan dengan? 2 uji
biner variabel dan uji t Student atau Mann-Whitney U test
jika sesuai. P <0,05 dianggap signifikan secara statistik.
Pasien berdarah antara 3 dan 5 hari sejak timbulnya gejala
sekitar penurunan suhu badan sampai yg normal. Sampel darah dikumpulkan dalam
botol heparinized, dan plasma dipisahkan dan disimpan pada
-70 C sampai analisis.

HASIL

Tabel 1 menunjukkan karakteristik klinis dengue terinfeksi

pasien yang dilibatkan dalam penelitian ini. Semua pasien disajikan dengan
demam (100%). Durasi (SD) rata demam adalah 4.2 (1.1)
hari (kisaran, 1-9 hari). Tidak ada perbedaan yang signifikan
dalam durasi demam antara kelompok-kelompok klinis yang berbeda
(P 0,07?). Jangka waktu rawat inap lebih dalam DBD
dan kelompok DSS dibandingkan dengan kelompok DF (P <0,001).
Sakit kepala, arthralgia, dan petechia secara bermakna lebih
umum pada DBD dibandingkan dengan DF (P <0,001), sedangkan
perdarahan hepatomegali dan klinis secara bermakna lebih
sering dalam DSS (P? 0,002). Selama rawat inap, hematokrit
tingkat pasien meningkat, dan pasien dengan syok
(DSS)

Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia

0,001). Sementara itu secara keseluruhan (hari) untuk mencapai maksimum
Tingkat hematokrit setelah onset demam pada DBD lebih tinggi (4.9)
dan DSS (5,6) dibandingkan dengan DF (4.2) pasien.
Tingkat residu asam sialic, kelompok sulphydryl, dan
karbonil kandungan protein plasma pada orang yang terinfeksi dengue
dan kontrol akan ditampilkan dalam Tabel 2. Tingkat
residu asam sialic dan PBSH ditemukan secara signifikan
(P <0,001) menurun pada infeksi dengue, sedangkan PCOS
secara signifikan (P <0,001) meningkat dalam kasus ini dibandingkan
untuk mengontrol mata pelajaran. Satu-way ANOVA diikuti dengan
post hoc Tukey HSD test menunjukkan bahwa perbedaan yang signifikan
diamati dengan kandungan asam yang rendah terikat sialic dan PBSH
dan PCOS tinggi di ketiga kelompok klinis dibandingkan dengan
kontrol (Tabel 3). Hasil yang sama ditemukan pada DBD dan
DSS kasus dibandingkan dengan kasus DF (P <0,05). Antara DBD
dan DSS, perbedaan yang signifikan diamati pada terikat sialic
asam (? P 0,033) dan PCOS level (P <0,001), namun tidak
perbedaan ditemukan pada konten PBSH (P 0,456?). Linear
Analisis regresi menunjukkan hubungan negatif yang signifikan
antara karbonil protein dan kadar asam terikat sialic di
DBD (? -0,409?, P <0,001) dan DSS (?? -0,508, <P
0,001; Gambar 1). Sebuah korelasi positif ada antara sulphydryl
kelompok dan terikat kadar asam sialic antara DSS (r?
0,450, P? 0,024).

DISKUSI
Dalam beberapa tahun terakhir, telah ada bunga yang cukup besar
dan penelitian dalam asam sialic dan perannya dalam kesehatan dan diseases.27

asam Serum sialic adalah penanda respon fase akut.

Fase akut glikoprotein dengan asam sialic sebagai komponen
rantai samping oligosakarida yang diproduksi oleh hati,
dirangsang oleh sitokin pro inflamasi seperti interleukin6, interleukin-6 dan tumor necrosis factor-? ,28-32 ini sitokin
ditemukan akan meningkat pada infeksi dengue, dan mereka
tingkat telah dikaitkan dengan derajat keparahan disease.11 Namun,
konsentrasi protein C-reaktif tidak ditemukan
berbeda dalam infeksi dengue dari kontrol dan ditemukan
lebih rendah dari infection.32 bakteri penelitian kami menunjukkan bahwa
ada penurunan yang signifikan (P <0,001) dalam plasma proteinbound
asam sialic konten pada pasien DBD dibandingkan dengan
kontrol. Temuan ini juga diamati ketika pasien dengan
DF, DBD, dan DSS dibandingkan dengan kontrol. Itu
mencatat bahwa tingkat desialylation adalah maksimal dalam DSS,
diikuti oleh DBD, dan tingkat perusahaan adalah minimal di DF.Ada
beberapa penjelasan yang mungkin untuk penurunan asam sialic
konsentrasi. Telah dilaporkan bahwa ROS dapat secara khusus
terminal asam bersatu sialic residues.33 Hati disfungsi
terlihat pada infeksi virus dengue dapat mengakibatkan berkurangnya sintesis
dan pelepasan fase akut proteins.9 menyimpang koagulasi
dan kebocoran pembuluh darah juga bisa mengakibatkan hilangnya protein serum
ke space.9 ketiga
Sebuah laporan baru-baru ini telah menunjukkan peningkatan stres oksidatif dalam
dengue infeksi dan hubungannya dengan penyakit severity.13
The diubah tingkat peroksida lipid dan aktivitas antioksidan
enzim dipelajari untuk menunjukkan stress.13 oksidatif, 34 ini
Penelitian menemukan tingkat yang meningkat dari karbonil protein dan mengurangi
kapasitas antioksidan dievaluasi sebagai kelompok sulphydryl
kandungan protein plasma selama fase awal virus dengue
infeksi. Temuan ini konsisten dengan laporan lain
peningkatan peroksidasi lipid dan menurunkan serum antioksidan
kapasitas yang berkaitan dengan virus demam berdarah illness.13, 34 oksidasi
kelompok sulfhidril-terikat protein merupakan indikasi langsung
kerusakan oksidatif. kelompok sulfhidril diketahui mengais-ngais
air peroxyl radikal. Dalam penelitian ini, penurunan yang signifikan
dalam kelompok plasma sulfhidril protein-terikat pada awal
Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia
hari sakit menunjukkan bahwa mereka mungkin menjadi salah satu awal
pertahanan antioksidan untuk melawan serangan radikal peroxyl di
infeksi dengue. Namun, sisa antioksidan total
Status perlu dipelajari untuk menguatkan hasil ini. Penggantian
penanda redoks menunjukkan bahwa perubahan ini
mungkin dimulai sebelum timbulnya gejala klinis, menunjukkan

suatu kompromi awal oksidan / keseimbangan antioksidan.

Dari penelitian ini, stres oksidatif yang disebabkan perubahan
protein plasma ditemukan lebih dalam parah dengue
infeksi (DBD / DSS) dibandingkan dengan infeksi ringan (DF).
Selain itu, pengamatan hubungan negatif yang signifikan
antara kadar asam karbonil dan sialic protein plasma
antara DBD / DSS mungkin menunjukkan bahwa oksidatif
stres terlibat dalam desialylation disempurnakan protein dalam
darah pada infeksi dengue. Studi sebelumnya telah menunjukkan
bahwa stres oksidatif dapat menyebabkan desialylation dari glikoprotein
protein serum, platelet, dan lipoprotein low-density
(LDL) particles.8, 35,36 Namun, mekanisme yang tepat tidak
dipahami dengan jelas. Desialysed plasma protein yang diproduksi oleh
kerusakan oksidatif diambil oleh hati, karena merupakan
umum mekanisme pemindahan asialoglycoproteins.37
Pada DBD / DSS, peningkatan permeabilitas vaskuler disarankan
karena kerusakan endothelium daripada struktural
destruction.10, 38 Ketika sel-sel endotel yang dirangsang oleh sitokin,
ROS generasi dapat dideteksi, dan proses ini telah
telah dilaporkan dalam dengue infection.38, 39 Beberapa studi pada
hubungan antara ROS dan disfungsi pembuluh
telah reported.40, 41 Hasil ini menunjukkan suatu keparahan yang lebih tinggi
oksidatif stres dan desialylation protein plasma pada DBD /
DSS dibandingkan pasien dengan infeksi dengue ringan.Penelitian
Studi juga menunjukkan bahwa permeabilitas vaskuler diatur
oleh gugus asam sialic. Endotelium vaskular membawa
konsentrasi tinggi asam sialic, dan karenanya, luas endotel
kerusakan yang terkait dengan infeksi dengue berat
dapat menjelaskan yang menumpahkan ke circulation.28 Oleh karena itu,
itu menimbulkan kemungkinan stres oksidatif dan terkait
glikoprotein perubahan dalam mendorong disfungsi endotel dan
kebocoran vaskular, fitur pathognomonic dengue berat
infeksi.
Telah ditunjukkan bahwa trombositopenia pada demam berdarah
Terjemahan Inggris ke Bahasa Indonesia
berevolusi dari peningkatan laju kerusakan perifer
pembentukan trombosit daripada mencukupi mereka. Meskipun
penyebab dan mekanisme dari penghancuran platelet perifer
tidak begitu jelas, disarankan bahwa kerusakan ini adalah
hasil dari beberapa peristiwa kekebalan tergantung pada antibodi
activities.42, 43 Sebuah penelitian pada malaria menunjukkan hubungan negatif
antara jumlah trombosit dan peroksidasi lipid plasma
dan juga dengan malendialdehyde trombosit levels.44 Oleh karena itu,
layak mempelajari apakah glikosilasi dari membran platelet

berkurang dalam infeksi virus dengue dan stres oksidatif

dan relatif kontribusi terhadap kandungan asam sialic dari
platelet dalam menjelaskan patogenesis trombositopenia
pada infeksi virus dengue.
Penelitian ini menyimpulkan bahwa desialylation protein plasma
ditemukan pada infeksi virus dengue. Tingkat desialylation
itu maksimal dalam DSS, diikuti oleh DBD, dan beratnya
sangat minim di DF. Juga tingkat desialylation adalah
ditemukan terkait dengan tingkat oksidasi protein dalam
parah penyakit demam berdarah. Oleh karena itu, masa studi yang sialylation
status sel endotel dan trombosit dapat menumpahkan beberapa
cahaya ke dalam patogenesis infeksi virus dengue.
Google Terjemahan untuk:PenelusuranVideoEmailTeleponObrolanBisnis
Tentang Google TerjemahanMatikan terjemahan instanPrivasiBantuan