Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Ciencias Biolgicas EAP Gentica y Biotecnologa

Laboratorio de Gentica Humana
Daniel Alcibiades Torrejn Maldonado
14100031

La tecnologa del PCR en el diagnstico de infecciones por Mycobacterium

Tuberculosis Complex (MTC) y su comparacin con los mtodos
convencionales
La tuberculosis es una enfermedad infecciosa causada por Mycobacterium tuberculosis
que ocasiona daos en el funcionamiento de los pulmones. El contagio ocurre por la
inhalacin de bacilos tuberculosos expuestos en el aire que fueron expulsados por el
estornudo o tos de alguna persona que lo padece. La OMS estima que un tercio de la
poblacin mundial padece de tuberculosis latente, es decir, que no han enfermado y
tampoco pueden transmitirlo. No obstante, estas pueden activarse debido a una
disminucin de la defensa inmunitaria como se da en el caso de los pacientes con VIH,
diabetes o malnutricin.
Las pruebas que se detallan como mejor alternativa diagnostica en pacientes con
sospecha de tuberculosis son el mtodo de tincin Ziehl-Neelsen (ZN) y el medio selectivo
LwensteinJensen (LJ medium) para especies Mycobacterium. Aunque estos sean los
Test de referencia para muchos laboratorios e instituciones de salud, hay ciertas
desventajas que resulta del empleo de estos mtodos. La tincin ZN identifica diversos
Bcilos lcohol cido Resistentes lo que puede conllevar a un diagnostico cruzado, y por
ende, a un incorrecto tratamiento y retraso del adecuado. Adems para realizar esta
tincin se necesita que el paciente sospechoso haya avanzado en su enfermedad hasta el
punto donde las concentraciones sean suficientes para dar positiva la tincin, esto es una
desventaja frente a pacientes con tuberculosis inactiva o aquellos con tuberculosis
paucibacilares, donde las concentraciones de mycobacterium son muy reducidas, tal caso
se da principalmente en nios, ancianos, y victimas de VIH. Mientras que el tiempo de
incubacin en el medio LJ es significativamente extenso, debido a la lenta divisin de las
cepas de Mycobacterium que abarca entre quince a diez horas, hace que los resultados
se obtengan en semanas.
Ya que el diagnstico temprano es muy importante para el tratamiento de la tuberculosis,
como de cualquier enfermedad, es relevante la bsqueda de otras pruebas que brinden

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Ciencias Biolgicas EAP Gentica y Biotecnologa
altos valores de sensibilidad y de especificidad en la deteccin de la tuberculosis. Los
mtodos PCR se han convertido en sofisticadas alternativas, debido a sus altos niveles de
sensibilidad y especificidad. Estos a comparacin con las pruebas Gold standard,
necesitan pequeas cantidades de muestras y existen diversos protocolos para la
extraccin de ADN micobacterial a partir de muestras de orina, aspiracin gstrica, fluido
pleural, y otros.
Otro problema que se afronta en el diagnstico de tuberculosis es que este no solo puede
ser causado por M. tuberculosis sino tambin por otras especies genticamente
relacionadas del gnero Mycobacterium que junto al primero conforman el grupo
Mycobacterium Tuberculosis Complex (MTC). Si bien la prueba LJ medium y la tincin ZN
lograr identificar a distintas mycobacterias, existen un grupo denominado Nontubercaulous Mycobacteria (NTM), que si bien no generar la tuberculosis, provocan
enfermedades con sntomas similares a este. Frente a esta diversidad bacteriana los
mtodos de PCR han buscado el diseo de primers que flanqueen regiones altamente
conservadas y propias o regiones muy variables y amplificables que permitan reconocer y
diferenciar miembros de MTC y NTM. Una de estas estrategias la plantea Mokaddas &
Ahmad (2006) con el empleo de un protocolo de multiplex PCR (mPCR) que se basan en
la amplificaciones de la regin intergnica oxyR-ahpC y la regin variable del gen rpoB
para la deteccin y diferenciacin de las especias MTC de NTM. Los amplicones son
detectados por electroforesis y los resultados son validados por secuenciacin de DNA
de la regin ITS 16S-23S, esto coincide con el trabajo de Frothinghan (1996) en la evala
la alta tasa de sustitucin esta regin.
La tcnica molecular PCR, en sus variantes, brinda resultados significativos que de
repente no superen los valores de sensibilidad y especificidad de los Test de referencia.
Sin embargo, se emplea menor tiempo, menor cantidad de muestra necesaria, y otras
ventajas ms. El principal objetivo es la elaboracin de mejores protocolos de ADN
mycobaterial y la bsqueda de regiones que permitan discernir entre diversas especies
mediante el diseo de primers apropiados.

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Ciencias Biolgicas EAP Gentica y Biotecnologa

ANEXO

Primers:
Pan-Mycobacterium: MYITSF (5-GATTGGGACGAAGTCGTAACAAG-3) and MYITSR
(5-AGCCTCCCACGTCCTTCATCGGCT-3)
Mycobacterium Tuberculosis Complex: MTCF (5-TACGGTCGGCGAGCTGATCCAAA3) and MTCR (5-ACAGTCGGCGCTTGTGGGTCAAC-3)
Non-Tuberculosis Mycobacterium: NTMF (5-GGAGCGGATGACCACCCAGGACGTC-3
) and NTMR (5-CAGCGGGTTGTTCTGGTCCATGAAC-3)

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Ciencias Biolgicas EAP Gentica y Biotecnologa

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Ciencias Biolgicas EAP Gentica y Biotecnologa

Bibliografa
Mokaddas E, Ahmad S. Development and evaluation of a multiplex PCR for rapid
detection and differentiation of Mycobacterium tuberculosis complex members from nontuberculous mycobacteria. Jpn J Infect Dis. 2007 May; 60(2-3):140-4.

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Facultad de Ciencias Biolgicas EAP Gentica y Biotecnologa
Lozano D, Aburto C, Valer G. Formas clnicas de tuberculosis en pediatra: Relacin con
vacuna BCG y PPD. Servicio de Neumologa. IESN. Enero - Febrero 1999
Gholoobi A, Masoudi-Kazemabad A, Meshkat B, Meshkat Z. Comparison of Culture and
PCR Methods for Diagnosis of Mycobacterium tuberculosis in Diffrent Clinical Specimens.
Jundishapur J Microbiol. 2014 February; 7(2)
Azevedo J, Maruza M, et al. Evaluation of four molecular methods for the diagnosis of
tuberculosis in pulmonary and blood samples from immunocompromised patients. Mem
Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Vol. 109(6): 805-813, 2014.
Fnez R, Varela-Martnez C. Mtodos Diagnsticos en Tuberculosis: lo convencional y lo
nuevo. Rev Med Hondur 2006.