distribusi spasial dari elemen seng, strontium dan memimpin di

jaringan tulang manusia

abstrak
elemen adalah elemen kimia dalam jumlah menit, yang dikenal menumpuk di
tulang. tulang kortikal dan trabekuler terdiri dari unit struktural tulang (BSUs)
seperti osteons dan paket tulang kandungan mineral yang berbeda dan dipisahkan
oleh garis semen. Penelitian sebelumnya menyelidiki elemen di tulang
kekurangan resolusi dan oleh karena itu sangat sedikit yang diketahui tentang
konsentrasi lokal seng (Zn), strontium (Sr) dan timbal (Pb) di BSUs dari tulang
manusia. Kami menggunakan sinkrotron radiasi yang disebabkan mikro X-ray
analisis fluorescence (SR -XRF) dalam kombinasi dengan kuantitatif
backscattered elektron imaging (qBEI) untuk menentukan distribusi dan
akumulasi Zn, Sr, dan Pb dalam jaringan tulang manusia.
Empat belas sampel manusia tulang (10 leher femoralis dan 4 kepala femoral) dari
individu dengan patah tulang leher femur osteoporosis serta individu from healthy
dianalisis. peta intensitas fluoresensi dicocokkan Dengan BE gambar dan
berkorelasi dengan kalsium (Ca) konten. Kami menemukan bahwa Zn dan Pb
memiliki secara signifikan meningkatkan kadar dalam garis semen dari semua
sampel dibandingkan dengan matriks tulang mineralisasi sekitarnya. tingkat Pb
dan Sr ditemukan berkorelasi dengan tingkat mineralisasi. Menariknya, Zn
intensitas punya korelasi dengan tingkat Ca. Kami telah menunjukkan untuk
pertama kalinya bahwa ada akumulasi diferensial dari elemen Zn, Pb dan Sr di
BSUs dari tulang manusia yang menunjukkan mekanisme yang berbeda dari
akumulasi.

Pendahuluan
Ketika jaringan organisme hidup dianalisis dengan metode analisis kimia yang
sangat sensitif, spesifik unsur c kimia dalam jumlah yang sangat menit (BPPM)
dapat ditemukan. Ini disebut elemen dapat penting dan / atau non-esensial bagi
organisme hidup [1]. Namun, peran banyak elemen dalam jaringan mis tulang
kurang dipahami [2]. upaya besar telah dilakukan untuk menentukan jumlah
dimasukkan berbagai elemen di tulang [3,4]. Karena pada umumnya analisis
kimia didasarkan pada metode destruktif, informasi tentang distribusi spasial dari
elemen dalam jaringan biasanya hilang. Studi sebelumnya tidak memiliki
distribusi spasial dan hanya dibedakan antara kortikal dan tulang trabekular
[10/05]. Perkembangan baru teknologi radiasi sinkrotron memungkinkan sekarang

menganalisis dengan cara non-destruktif, spasial diselesaikan elemen seperti seng

(Zn), strontium (Sr) dan timbal (Pb) dalam jaringan tulang. Misalnya
menggunakan radiasi sinkrotron diinduksi confocal mikro X-ray fl uorescence
analisis (SR -XRF) kami menemukan akumulasi fi c yang sangat spesifik dari Pb
dan Zn di zona transisi antara mineralisasi dan nonmineralized tulang rawan
artikular dibandingkan dengan tulang subchondral [11,12]. Selain itu metode ini
juga mampu mendeteksi dan memetakan unsur yang berbeda secara bersamaan
[13].

Zn, Sr dan Pb adalah elemen, hadir dalam suf konsentrasi fi sien dalam tulang
sehingga mereka dapat dengan mudah dipetakan dengan multi-elemental SR
metode -XRF. Zn merupakan elemen jejak penting penting dalam beberapa
proses biologis dan asupan dikurangi dapat menyebabkan penyakit kronis [14]. Zn
juga hadir dalam jaringan tulang dan telah dilaporkan untuk memainkan peran
penting dalam metabolisme tulang [15-17]. Studi pada tingkat Zn pada jaringan
yang berbeda mengungkapkan bahwa sebagian besar hadir dalam tulang dan
untuk alasan ini Zn dapat dianggap sebagai komponen penting dari Calci matriks
fi ed [18,19]. Sr kemungkinan elemen jejak non-esensial, tetapi dalam baru-baru
ini tahun, penelitian telah menunjukkan bahwa Sr mampu memengaruhi
regenerasi tulang [20] dan telah diterapkan dalam bentuk strontium ranelate di
terapi pengobatan osteoporosis. Sr secara kimia sangat mirip dengan kalsium
(Ca), dan dapat menggantikan Ca, tapi masih sedikit yang diketahui tentang peran
Sr dalam metabolisme tulang normal maupun pada gangguan tulang. Pb
merupakan unsur jejak non-esensial dan merupakan logam berat yang sangat
beracun. Salah satu ancaman utama untuk logam fromheavy kesehatan manusia
dikaitkan dengan paparan Pb. Paparan Pb dikaitkan dengan penyakit kronis di
saraf, hematopoietik, tulang, ginjal dan sistem endokrin [21,22]. Pb telah
dinyatakan juga sebagai faktor risiko potensial untuk osteoporosis [23] dan
osteoarthritis [24]. Sekitar 95% dari total tubuh Pb beban disimpan dalam
kerangka [25] menunjukkan bahwa jaringan tulang memiliki kapasitas yang tinggi
untuk mengumpulkan dan menyimpan Pb. Dalam konteks ini jaringan tulang
tampaknya memiliki juga fungsi untuk menekan serumlevels elemen yang sangat
beracun tersebut.

Tulang manusia pada dasarnya terdiri dari susunan non-homogen dan nonisotropik dari mineral brils kolagen fi. tulang kortikal dan trabekular dibentuk oleh
osteons individu dan paket tulang (unit struktural yang disebut tulang - Bsus).
Mereka diproduksi pada saat-saat yang berbeda selama (re) siklus modeling oleh
aktivitas terkoordinasi sel-sel tulang, dimana osteoblas mensintesis, mengeluarkan

dan menyimpan matriks kolagen, yang kemudian secara bertahap mineralizes.

Dengan demikian, masing-masing BSU memiliki kandungan mineral tertentu
tergantung pada waktu deposisi [26]. Secara umum Bsus ini dihubungkan oleh
lapisan tipis mineral protein non-kolagen, yang disebut garis semen / lapisan
diproduksi selama siklus remodeling [27]. Hanya sangat sedikit data yang tersedia
mengenai distribusi spasial rinci elemen dalam suatu jaringan tulang.

Dengan demikian, tujuan dari penelitian ini adalah untuk memetakan jejak unsur
Zn, Sr dan Pb dalam jaringan tulang dan untuk menjelaskan pertanyaanpertanyaan berikut: i) apakah ada pola akumulasi diferensial Zn, Sr dan Pb
tergantung pada Ca isi matriks tulang mineralisasi dalam paket tulang, osteons,
dan tulang interstitial? dan ii) merupakan akumulasi Zn, Sr dan Pb dalam garis
semen berbeda dari matriks tulang mineral? Dengan mempertimbangkan bahwa
ukuran spot dari confocal SR pengaturan -XRF adalah sekitar 5 kali lebih lebar
dari lebar garis semen intensitas diukur sebenarnya meremehkan besar dari tingkat
nyata dari elemen di wilayah ini.
Untuk tujuan ini kami menganalisis trabekuler dan tulang kortikal dari leher
femoralis manusia dan kepala menggunakan SR -XRF dalam kombinasi dengan
kuantitatif pencitraan elektron backscattered (qBEI). qBEI, metode mapan dan
divalidasi [28], digunakan untuk memvisualisasikan jaringan mineralisasi dengan
resolusi spasial 1 m per pixel, untuk mengukur mineral tulang konten / Ca lokal
dan memilih daerah yang menarik untuk pengukuran -XRF SR dalam jaringan
tulang.

Bahan dan metode

sampel tulang
Untuk tulang penelitian ini sampel dari 14 wanita menopause telah dianalisis: a)
sampel leher femoralis (n = 10) yang telah menjadi bagian dari studi mantan
[29,30] dan ramah disediakan oleh N. Loveridge (Departemen Kedokteran,
Universitas dari Cambridge, Cambridge). Lima dari sampel ini berasal dari pasien
yang menderita patah tulang leher femur osteoporosis dan 5 sampel otopsi
fromforensic individu tanpa metabolik usia penyakit tulang cocok dengan yang
patah tulang osteoporosis. Rata-rata usia orang-orang ini adalah 81,5 tahun mulai
74-92 tahun. b) sampel kepala femoralis (n = 4), yang diperoleh selama operasi
penggantian pinggul. Individu menderita patah tulang leher femur osteoporosis
dan berusia 60 sampai 80 tahun dengan usia rata-rata 77,5 tahun. Pengukuran
dilakukan di kedua wilayah tulang trabekuler dan kortikal untuk sampel leher
femoralis dan

hanya di wilayah trabecular untuk sampel kepala femoral menghasilkan total 35

daerah dari sekitar 500 m 650 m. Istilah matriks mineral tulang akan
menjelaskan kedua osteons dan tulang interstitial di osteonal wilayah tulang dan
tulang paket di wilayah tulang cancellous. Untuk yang terbaik dari pengetahuan
kita, tidak ada pasien telah terkena konsentrasi Pb lebih tinggi dari tingkat alam di
ruang tamu mereka. Penelitian ini adalah sesuai dengan dan disetujui oleh komite
etika lokal (Institutional Review Board of Medical University of Vienna).

Persiapan sampel
Seperti yang sudah dijelaskan dalam publikasi sebelumnya [31,32], sampel
disusun sebagai blok undecalci fi ed di polymethylmethacrylate (PMMA)
tertanam jaringan tulang. Sampel leher femoralis dipotong pada bidang transversal
dan sampel kepala femoral tegak lurus terhadap permukaan artikular (bidang
frontal). Permukaan bagian yang diproduksi dengan menggiling dengan kertas
pasir dan kemudian memoles berlian suspensi (3 dan 1 m ukuran butir) pada
presisi perangkat polishing (PM5: Logitech Ltd, Glasgow, UK) atau
oleh penggilingan dengan berlian yang ultra miller (SP2600: Leica Microsystems
GmbH, Wetzlar, Jerman). Seluruh embedding dan persiapan permukaan prosedur
diuji untuk bebas dari Zn terdeteksi, Sr dan kontaminasi Pb.
qBEI
Kuantitatif backscattered elektron imaging (qBEI) adalah teknik divalidasi untuk
memvisualisasikan dan mengukur distribusi konsentrasi kalsium (Ca) dalam
tulang didasarkan pada hamburan balik elektron dari dana permukaan sampel
dalam mikroskop elektron scanning (SEM). Daerah dengan tingkat abu-abu terang
mencerminkan matriks dengan konten Ca tinggi, sedangkan daerah dengan tingkat
abu-abu gelap menunjukkan konten Ca rendah. garis semen, zona transisi antara
paket tulang yang berbeda dan osteons biasanya menunjukkan kandungan mineral
lebih tinggi dari mineralisasi matriks tulang yang berdekatan [26,33]. Rincian
lebih lanjut tentang metode qBEI dapat ditemukan di tempat lain [31,34].

Sebuah SEM (DSM 962, Zeiss, Oberkochen, Jerman) dipekerjakan untuk

memperoleh qBEI gambar menggunakan 20 elektron keV mengarah ke informasi
mendalam dari sekitar 1,5 m [35]. Gambar pada spesifikasi-Magni berbeda 12 kali
lipat untuk ikhtisar dan 200 kali lipat (resolusi pixel dari sekitar 1 1 m)
diperoleh untuk memilih dan mendefinisikan daerah bunga (ROI) dalam tulang
untuk analisis SR--XRF mirip dengan penelitian yang dilakukan sebelumnya

[32]. Terutama daerah (paket tulang, osteons) yang mengandung matriks tulang
mineralisasi dengan derajat yang berbeda dari mineralisasi telah dipilih.

SR--XRF
Sifat radiasi sinkrotron (SR) termasuk foton tinggi fluks, collimation alami,
polarisasi dan kemungkinan untuk memilih energi dari foton primer diaktifkan
kepekaan hingga kisaran femtogram dan resolusi spasial tinggi dalam kisaran
mikrometer. Dalam penelitian sebelumnya, kombinasi geometri confocal dan SR
memungkinkan analisis elemen di tulang dan tulang rawan artikular di kisaran
mikrometer dengan sensitivitas tinggi dan spasial tinggi distribusi [11,36,37].
Rincian lebih lanjut tentang confocal SR--XRF dapat ditemukan di tempat lain
[38-42].

Pengukuran ini telah dilakukan di FLUO beamline fasilitas sinkrotron ANKA di

Karlsruhe Institute of Technology Kampus Utara [40,41] menerapkan pengaturan
confocal sama seperti yang sudah dijelaskan sebelumnya [32]. Energi eksitasi
yang sebenarnya adalah 17 keV dan ukuran balok adalah 17 m 12m (
horisontal vertikal) dengan resolusi kedalaman 19 m di 9.71 keV (Au-L). scan
daerah di permukaan sampel dilakukan di kisaran 500 m 500m sampai 500 pm
650m dengan ukuran langkah 15 mhorizontaland 10 m vertikal. kali akuisisi
lebih dari 12 s per pixel ditemukan tidak menunjukkan perbaikan dalam sinyal
untuk rasio kebisingan dari peta elemental yang diperoleh. Terutama, rendahnya
tingkat konten Pb diperlukan waktu akuisisi yang relatif lama ini. Spektrum yang
diperoleh, contoh yang ditunjukkan pada Gambar. 1, diproses sesuai dengan
protokol yang dijelaskan dalam [32].

evaluasi Data
Informasi tentang struktur jaringan tulang dan mineral seperti yang diperoleh
dengan qBEI dikombinasikan dan berkorelasi dengan intensitas X-ray peta
elemental sesuai. The 2Ddata software evaluasi ImageJ (v1.44, National Institutes
of Health, USA) [43] dan custom made rutinitas yang diterapkan untuk pra-proses
diperoleh data sebelum evaluasi statistik dengan GraphPad Prism (v4.0c,
GraphPad Software, Inc. , USA).

Daerah tujuan

Pertama gambar qBEI resolusi spasial tinggi (1 mper pixel) telah selaras dengan
-XRF peta yang sesuai SR. Kedua, ROI mewakili mineralisasi matriks tulang
dan semen garis yang ditunjukkan dalam gambar qBEI. ROI dari matriks tulang
mineralisasi ditandai dalam unit tunggal struktural (osteon, paket tulang)
mengurus bahwa setidaknya jarak dari fewmicrons (5 sampai 10 pM) untuk retak,
garis semen, osteosit kekosongan, kanal haversian atau permukaan trabekular
disimpan. Garis semen sendiri diberi label oleh 10 pm garis tebal yang sesuai
diameter sinar X-ray. Akhirnya, tanda ini / masker pada gambar qBEI dipindahkan
/ overlay langsung ke peta elemental (Gbr. 2).

Normalisasi SR -XRF-peta
Sebuah normalisasi umum dari tarif hitungan XRF untuk waktu akuisisi dan saat
sinkrotron-ring 100 mA dilakukan. Intensitas XRF Pb, Zn, dan Sr yang lebih
dikoreksi untuk variasi dalam intensitas XRF disebabkan oleh perubahan kecil
dalam setup pengukuran antara peta yang berbeda, sampel dan sesi sinkrotron,
sehingga Pb, Zn, dan Sr XRF-intensitas antara semua peta dapat langsung
dibandingkan dan diperlakukan sebagai ukuran kandungan unsur. Untuk tujuan ini
faktor rata-rata K (lihat rumus (1)) dievaluasi untuk setiap peta, mengungkapkan
rasio rata-rata antara Ca yang diukur dengan qBEI (wt.% Ca) dan Ca yang diukur
dengan SR -XRF (cpsCa). Dengan demikian, perbanyakan SR -XRF nilai cps
Pb, Zn, dan Sr dari peta individu dengan faktor K yang sesuai mengarah ke
koreksi / normalisasi semua peta berdasarkan nilai-nilai Ca mutlak seperti yang
diperoleh dengan metode qBEI.

Formula 1: K = berarti faktor normalisasi satu SR peta -XRF,

wt.% Ca i = konsentrasi Ca rata-rata dari matriks ROI mineralisasi tulang
diukur dengan qBEI, cpsCa = berarti Ca-K fl uorescence intensitas mineral
matriks tulang ROI i, n = jumlah ROI matriks tulang termineralisasi dari peta
masing-masing.

evaluasi statistik
Untuk setiap sampel median dari tingkat normal hitungan Ca, Zn, Pb dan Sr untuk
matriks tulang mineralisasi dan ROI garis semen dihitung. Tingkat signifikansi
dari perbedaan antara mineralisasi matriks tulang dan semen garis diuji dengan uji
Mann-Whitney nonparametrik untuk setiap sampel secara terpisah. Untuk tujuan

ini semua dievaluasi mineralisasi matriks tulang dan garis semen ROI dari
masing-masing sampel yang digunakan. Jumlah mineral matriks tulang dan garis
semen ROI berbeda untuk semua sampel. Jumlah garis semen ROI lebih besar
untuk semua sampel. Untuk mengevaluasi perubahan rasio tingkat hitungan antara
garis semen dan matriks mineralisasi tulang uji Wilcoxon dengan nilai hipotetis
median 1 (= sama distribusi unsur) yang digunakan.

The signifikansi dari korelasi antara konten Ca dan elemen jejak tingkat semua
ROI matriks tulang termineralisasi dievaluasi dari semua sampel (n = 402) diuji
dengan tes Spearman non-parametrik ini. Perbedaan atau korelasi dengan p b 0,05
dianggap signifikan.

hasil
Ini harus ditekankan bahwa ukuran spot dari confocal SR pengaturan -XRF
adalah sekitar 5 kali lebih lebar dari lebar garis semen. Dengan demikian tingkat
elemen di garis semen disajikan dalam berikut ini benar-benar meremehkan besar
dari tingkat nyata dari elemen (lihat detail di "Keterbatasan" bagian).

Peta Zn, Pb dan Sr di jaringan tulang

Pada Gambar. 3 contoh distribusi spasial / peta dari unsur-unsur Ca, Zn, Pb dan Sr
di jaringan tulang yang ditunjukkan: i) gambar qBEI yang sesuai, a) osteonal dan
b) display tulang trabecular daerah dengan kandungan mineral yang berbeda (abuabu gelap, rendah dan abu-abu terang, kandungan mineral yang tinggi). ii) Tak
satu pun dari XRF unsur peta Showa distribusi homogen dalam jaringan tulang.
iii) Zn menunjukkan peningkatan yang luar biasa dalam garis semen dan di
perbatasan dengan saluran haversian (daerah ini tidak dievaluasi). Zn intensitas
tampak agak konstan dalam matriks tulang termineralisasi. Akumulasi Zn dalam
garis semen ditunjukkan pada Gambar. 3b. Banyak garis semen paralel dilihat di
gambar qBEI sesuai dengan band-band dari tinggi intensitas Zn-K Peta -XRF.
iv) Pb juga terakumulasi dalam garis semen dan di perbatasan dengan saluran
haversian (daerah ini tidak dievaluasi). Selain itu Pb menunjukkan korelasi yang
kuat dengan Ca-konten di matriks tulang termineralisasi. Dengan demikian,
osteon muda pusat dengan lowmineralization dan konten Ca karena rendah
memiliki kandungan Pb yang sangat rendah yang bahkan batas deteksi metode
SR--XRF tercapai. Pada Gambar. 3b tingkat Pb dari sampel tulang begitu rendah
sehingga pameran peta Pb hanya sinyal suara. v) Perilaku distribusi Sr berbeda
dari Zn dan Pb. Tidak ada akumulasi di garis semen dan haversian perbatasan

channel. Namun ada perbedaan jelas terlihat antara matriks tulang mineralisasi
dari berbagai osteons.

Perbandingan Zn, Pb dan tingkat Sr antara matriks tulang mineral dan garis semen
Dalam semua sampel diselidiki kami menemukan secara signifikan lebih tinggi
Zn dan Pb intensitas dalam garis semen dibandingkan dengan mineralisasi tulang
matriks (Gambar. 4) (pb 0,05 untuk setiap sampel individu). Bahkan dalam
sampel, yang memiliki tingkat Pb terendah (ditunjukkan pada Gambar. 3b),
sebuah secara signifikan lebih tinggi konten Pb dalam garis semen dapat
ditemukan. Ada variasi antar-besar di Zn dan Pb XRF intensitas mineralisasi
matriks tulang dan semen garis (Gambar. 4).

(. Gambar 5) ketika menganalisis garis semen untuk rasio matriks tulang

mineralisasi untuk Zn dan Pb dari semua sampel kami menemukan berikut: i)
konten Zn berada di median 1,3 kali lebih tinggi (kuartil bawah: 1,2; kuartil atas:
1,4; pb 0,05 ) sejalan semen dari dalam matriks tulang mineral; ii) tingkat Pb
berada di median 2,0 kali lebih tinggi (kuartil bawah: 1,5; kuartil atas: 2,5; p b
0,05) di garis semen dari dalam matriks tulang mineral; dalam satu sampel Pb
adalah 3,8 kali meningkat dibandingkan dengan matriks tulang mineralisasi
(Gambar. 5). Dengan demikian, kami menemukan perbedaan antar yang lebih
besar untuk Pb daripada Zn.
Sebaliknya, intensitas Sr tidak secara signifikan berubah di antara mineralisasi
matriks tulang dan semen baris.

Hubungan mineralisasi pada Zn, Pb dan tingkat Sr di mineralisasi matriks tulang

Korelasi konten Ca dan tingkat elemen jejak dievaluasi menggunakan data yang
diperoleh dari semua ROI matriks tulang mineralisasi (kuning daerah berlabel
pada Gambar. 2) dari seluruh sampel. Diagram yang menunjukkan hubungan Zn,
Pb dan Sr dengan isi Ca disajikan pada Gambar. 6.Nocorrelations antara Zn dan
tingkat Ca ditemukan, sementara Pb dan Sr menunjukkan peningkatan non-linear
dengan tingkat mineralisasi, yang signifikan (p b 0,001; rank uji korelasi
Spearman).

Perbandingan antara retak dan non-retak leher femoralis

Analisis data dari dua subkelompok, femoralis tulang leher dengan fraktur leher
osteoporosis dan usia cocok tanpa fraktur, menunjukkan tidak ada perbedaan yang
signifikan dalam isi unsur jejak dan distribusi pola.

Diskusi
radiasi Synchrotron diinduksi confocal mikro X-ray fl uorescence analisis (SR XRF) bersama-sama dengan kuantitatif backscattered elektron imaging (qBEI)
telah digunakan untuk pertama kalinya untuk mengevaluasi distribusi spasial dari
jejak unsur Zn, Sr dan Pb dalam jaringan tulang. Hasil analisis menunjukkan
tingkat yang lebih tinggi dari Zn dan Pb dalam garis semen dibandingkan dengan
matriks tulang termineralisasi berdekatan. Dalam paket tulang / osteons tingkat Pb
dan Sr yang secara signifikan tergantung pada konten Ca mereka. Sebaliknya, ini
tidak ditemukan untuk Zn.

Mineralisasi matriks tulang dibandingkan garis semen

Garis semen diidentifikasi dan ditelusuri dalam gambar qBEI menunjukkan Zn
secara konsisten lebih tinggi dan nilai-nilai Pb dibandingkan dengan matriks
tulang mineralisasi yang berdekatan menunjukkan mekanisme yang berbeda dari
Zn dan Pb penggabungan / akumulasi antara dua wilayah ini dari jaringan tulang.
Berbeda dengan matriks tulang mineralisasi garis semen (lebih tepat permukaan
semen) kaya dengan protein non-kolagen seperti osteocalcin dan osteopontin [27].
Selama fase pembalikan tulang renovasi garis semen terbentuk, yang mendapat
mineralisasi pada umumnya sampai batas yang lebih tinggi dari matriks tulang
mineralisasi yang berdekatan sebagai visualized oleh backscattered pencitraan elektron. lapisan permukaan semen ini
terkena cairan interstitial sampai matriks tulang baru (osteoid) diendapkan oleh
osteoblas. Selama periode ini Zn dan Pb ion hadir dalam cairan interstitial dapat
diakumulasikan dalam semen materi garis disimpan (protein dan mineral) dalam
dua cara: a) oleh penyerapan ion langsung dalam hidroksiapatit dan tambahan b)
oleh keterikatan untuk protein, yang memiliki fi af tinggi nity kepada mereka.
Dengan demikian, peningkatan konsentrasi Pb dalam garis semen mungkin karena
osteocalcin, yang memiliki fi nity af lebih tinggi untuk Pb daripada Ca bahkan
pada tingkat lowPb [44,45] .Incontrast, Zn merupakan bagian / kofaktor dari
enzim seperti metaloproteinase matriks ( MMPs) yang memainkan peran penting
dalam degradasi kolagen selama siklus remodeling tulang [46] serta alkali
fosfatase tulang [b-ALP] [47-51]. Semua osteoblas disintesis terlibat juga dalam

mineralisasi matriks tulang. peningkatan kadar Zn dari garis semen ini

menunjukkan bahwa enzim ini / protein disimpan dalam garis semen selama
proses renovasi. Hal ini dapat berspekulasi bahwa dalam fase resorpsi tulang
mengikuti ion Zn dilepaskan dan kembali digunakan sebagai kofaktor dari enzim
untuk tahap pembentukan tulang berikutnya dan / atau segera dimasukkan
kembali ke dalam tulang terbentuk baru. Hal ini didukung oleh fakta bahwa
selama remodeling tulang Zn tidak meningkatkan kadar serum [52-54].
Menariknya, variasi antar-individu tingkat Zn yang jauh lebih kecil dibandingkan
dengan Pb (Gambar. 4a), yang menunjukkan bahwa Zn merupakan komponen
yang melekat dari garis semen daripada tergantung dari variasi periode di mana
garis semen terkena fluida interstitial selama siklus renovasi Pb jelas tidak. Dalam
konteks ini harus disebutkan bahwa dalam studi terbaru mengenai tingkat Zn
diamati di zona transisi antara mineralisasi dan nonmineralized tulang rawan
(tanda air pasang), perilaku diferensial yang sama Zn dan akumulasi Pb
ditemukan. Zn jelas meningkat tanpa variasi utama juga, sementara peningkatan
bertepatan Pb lebih tinggi semakin lama tanda air pasang itu terkena cairan
interstitial dari non-mineralisasi tulang rawan artikular [11,12,36].
Berbeda dengan Zn dan Pb, Sr tidak memiliki fenomena akumulasi dalam garis
semen yang dapat diamati, meskipun diketahui bahwa ion Sr mampu
menggantikan ion Ca. Penelitian pada hewan menunjukkan bahwa Sr dapat
menggantikan Ca di hampir semua proses fisiologis dan hampir secara eksklusif
disimpan di tulang [55]. Protein mengikat afinitas dari Sr adalah mirip dengan Ca
[56]. Jumlah diet Sr dapat bervariasi tanpa terjadinya gejala keracunan dan tidak
di bawah kendali homeostatis sehingga darah dan serum kadar tidak dijaga
konstan [55] .Asit akan dijabarkan dalam keterbatasan bawah, mungkin ada
bertepatan peningkatan Sr dengan Ca di garis semen, tetapi peningkatan relatif Ca
dan Sr mungkin terlalu kecil untuk dibedakan dalam volume matriks 12 pmn
(Ukuran voxel) dengan ketebalan garis semen hanya 1 sampai 2 pm.

Unsur jejak vs mineralisasi matriks tulang konten Ca

Dalam BSU elemen jejak yang merata mirip dengan unsur Ca. Oleh karena itu
hipotesis kami mechanismof melacak elemen penggabungan adalah, bahwa Zn, Sr
dan Pb dimasukkan ke dalam mineral tulang (berkarbonasi kalsium hidroksiapatit)
selama pembentukan tulang, ketika osteoid mendapat mineralisasi oleh
perkembangan depan mineralisasi (fase mineralisasi primer) [26]. Jumlah elemen
yang dimasukkan adalah demikian tergantung pada tingkat serum ini. Asumsi ini
sangat didukung oleh penelitian yang kami buat pada penggabungan Sr di tulang
selama perawatan Sr-ranelate (manusia dan hewan [32,57,58]). Hal ini dapat
menunjukkan bahwa Sr didirikan terutama dalam matriks tulang mineralisasi,

yang dibentuk selama pengobatan ranelate Sr. Selanjutnya, isi Sr adalah sebanding
dengan tingkat serum Sr [57]. Selain itu, analisis karakteristik kisi kristal mineral
membuktikan bahwa ion Sr dimasukkan ke dalam kisi apatit kristal [58].

Pb hadir dalam matriks tulang mineralisasi kemungkinan besar akumulasi

selama fase mineralisasi mirip dengan ion Sr Pb dalam serumare kimia mirip
dengan ion Ca2 +. Ia bahkan telah menunjukkan bahwa Pb2 + secara langsung
bersaing dengan Ca2 + pada tegangan diaktifkan Ca2 + channel [59,60]. Lanjut
telah menunjukkan bahwa Pb mampu menempati kedua Ca2 + situs di
hidroksiapatit (HA) kristal [61-64] .a perilaku serupa disarankan untuk ion Sr2 +
[55,58]. Kami berasumsi bahwa untuk Sr [57,58,65-68] jumlah Pb dimasukkan
selama mineralisasi tergantung pada serumlevels Pb. Semakin Pb2 + ion hadir di
serum lebih ion Pb dimasukkan ke dalam tulang.

Selain itu, in-vitro studi menggunakan sintetis HA serta sapi bone meal
menemukan bahwa HA memiliki kemampuan untuk mengakumulasi
(melumpuhkan) Pb, Zn2 +, Sr2 + Jalur Konsentrasi Rasio Semen / tulang Matrix
dan ion logam bervalensi dua lainnya [69-76]. Saat ini empat jalur yang berbeda
disarankan untuk mekanisme imobilisasi HA: i) proses pertukaran ion, ii)
permukaan kompleksasi, iii) pembubaran dan curah hujan dan co-presipitasi [69].
Mekanisme ini dapat diharapkan untuk menjadi sangat mirip untuk ion divalen
lainnya. Dalam studi ini konsentrasi lebih tinggi dari logam berat telah digunakan.
Namun menurut Bigi et al. [77] dan Buckner et al. [78] kemungkinan bahwa
mekanisme akumulasi HA untuk Pb 2+ juga berlaku pada konsentrasi rendah,
karena mereka hadir pada manusia. Untuk Pb dalam tulang kami telah
menunjukkan bahwa hampir secara eksklusif obligasi untuk berkarbonasi kalsium
hidroksiapatit [79], yang con fi rms asumsi di atas tentang bagaimana Pb
dimasukkan ke dalam matriks tulang termineralisasi.

Menariknya, meskipun variasi intra dan inter-individu yang tinggi dalam Pb

(Gambar. 4b) dan tingkat Sr, peningkatan non-linear dengan Ca-konten dari
matriks tulang mineralisasi ditemukan (Gambar. 6b dan c). Peningkatan
overproportional Pb dan Sr di kisaran mineralisasi tinggi dapat dijelaskan oleh
fakta bahwa Bsus dengan waktu lama mineralisasi (fase mineralisasi sekunder)
mencapai dataran tinggi mineralisasi (sekitar 26 wt.% Ca) [26]. Namun, proses
akumulasi, sebagaimana telah disebutkan di atas, ion Pb2 + dan Sr2 + dalam
kristal apatit mungkin masih berlangsung dengan waktu, setelah kristal telah
berhenti tumbuh ion substitusi. Sr2 +, Pb2 + dan mungkin semua logam divalen

lainnya ion mungkin mencapai bagian dalam tulang melalui systemin vaskular
saluran haversian dan sumsum tulang ruang, masing-masing. Sebuah studi hewan
menggunakan radiostrontium (85Sr) menunjukkan bahwa ion Sr melewati dinding
kapiler pembuluh darah oleh difusi untuk mencapai fluida interstitial [80]. Cara
yang sama dapat diasumsikan untuk ion Pb. Dari ruang sumsum tulang osteosit
kekosongan jaringan canaliculi dapat digunakan sebagai jalur untuk Pb2 + dan
Sr2 + ke dalam matriks tulang mineral, mengakibatkan peningkatan
overproportional diamati elemen ini dibandingkan dengan Ca.

Meskipun telah melaporkan bahwa Zn adalah bersamaan digabungkan dengan Ca

selama mineralisasi [81], tidak ada korelasi antara Zn dan tingkat mineralisasi
seperti untuk Sr dan Pb terdeteksi oleh pengukuran kami (Gambar. 6a). Hal ini
sesuai dengan penyelidikan sebelumnya Lappalainen et al., Yang menunjukkan
bahwa Ca bukan merupakan faktor yang signifikan untuk menjelaskan konsentrasi
Zn dalam tulang [82]. Oleh karena itu Zn disarankan untuk berada di bawah
kendali homeostatis.

obligasi Zn untuk hidroksiapatit (HA) sangat mungkin dimasukkan selama proses

kristalisasi secepat percobaan dari Tang et al. pada tahun 2009 telah menunjukkan
[83]. Namun situs koordinasi preferensi Zn, situs Ca2 dari kristal HA, akan
memungkinkan penyerapan dan pelepasan Zn sebagai situs kerangka Ca2 struktur
tidak terganggu [83]. Zn tidak hanya dimasukkan oleh proses pertukaran ion,
tetapi Ca lowongan-cacat dapat bertindak situs sebagai masuk akal untuk Zn2 +
substitusi [84] .Seperti dikatakan di atas, Zn sangat penting untuk metabolisme
tulang, karena itu adalah bagian dari enzim penting bagi mekanisme renovasi
tulang dan Zn dilepaskan selama remodeling tulang dimasukkan kembali ke
dalam tulang [46,50,52].

keterbatasan
Pencocokan gambar qBEI dengan -XRF diperoleh peta elemental tidak bisa
sempurna dilakukan. The resolusi lateral berbeda SR -XRF (~ 10-20 m) dan dari
qBEI (1-2 m) membuat overlay yang tepat dari kedua peta mustahil. Tipis fitur
(misalnya garis semen) di qBEI yang kabur di peta -XRF. Selanjutnya
kedalaman informasi yang lebih besar dari SR -XRF (~ 20 mforCa-K)
comparedtoqBEI (~ 1m) memberikan kontribusi untuk lebih kabur. Fitur dekat di
bawah permukaan (mis garis semen, atau rongga / void) tidak terdeteksi oleh
qBEI tapi mungkin terlihat di peta -XRF yang sesuai. Namun, melapiskan sesuai

peta SR -XRF elemental dan BE gambar ditemukan sangat berguna dalam

menghubungkan morfologi tulang dengan intensitas X-ray.

Meremehkan Zn dan Pb intensitas sinyal di jalur semen diperkenalkan karena

fakta bahwa garis semen lebih tipis (di kisaran 2 mm) daripada terfokus
beamwidth X-ray. Sinyal XRF adalah rata-rata lebih dari volume matriks lebih
besar dari fitur garis semen benar menempati. Oleh karena itu data yang diperoleh
menunjukkan batas bawah untuk konsentrasi unsur nyata relatif. Dengan asumsi
SR -XRF ukuran voxel dari 12 13 17 m 3 dan garis semen lebar 1 m
peningkatan 2 kali lipat tingkat Pb di garis semen yang diukur dengan -XRF
mungkin hasil dari yang sebenarnya peningkatan 34 kali lipat.

Untuk menentukan rasio intensitas sinyal dari Zn dan Pb antara garis semen dan
matriks mineralisasi tulang dan untuk menyelidiki lebih lanjut distribusi spasial
mereka dalam scan garis semen atau bahkan pemetaan di garis balok nano fokus
seperti P06 di PETRA III (DESY, Hamburg, Jerman) direncanakan untuk masa
depan.

Tidak ada nilai absolut (wt.%) Dari Zn, Pb dan Sr dapat diberikan. Dengan
demikian, hanya perbedaan relatif antara elemen dapat dilaporkan. Karena tulang
adalah senyawa mineral organik kompleks dan sangat heterogen, tidak ada bahan
referensi yang sesuai namun untuk kalibrasi setup eksperimental yang tersedia,
yang akan memungkinkan memperoleh konsentrasi mutlak elemen yang sesuai
untuk setiap tingkat hitungan X-ray diukur.

Implikasi
Pb yang dimasukkan, Zn dan ion Sr di HA kemungkinan besar akan mendistorsi
kisi kristal mineral karena ukuran atom yang berbeda dibandingkan dengan Ca.
Ini mungkin memiliki efek negatif pada stabilitas dan kekuatan mineral. Efek ini
mungkin bisa menjadi relevan di tingkat penggabungan tinggi. Namun, pengganti
5% dari ion Ca oleh ion Sr terjadi pada pengobatan ranelate Sr di postmenopausal
osteoporosis [57,58] an perubahan sifat mekanik dari material tulang yang diukur
dengan nanoindentation tidak dapat diamati [57].
Efek sangat beracun dari Pb pada sel-sel tulang dan tulang metabolismand
demikian remodeling tulang dijelaskan secara rinci untuk tingkat Pb tinggi seluruh
paparan tubuh [44,45,60,63,85]. Misalnya, Pb telah terbukti mengubah

homeostasis Ca dan mengganggu aktivitas metabolismor selular osteoklas [86]

dan osteoblas [87-92]. Seperti telah dinyatakan Pb memiliki jauh lebih tinggi
afinitas untuk osteocalcin dari Ca Pb2 + [45] dan sebagai konsekuensinya
memengaruhi sifat mengikat dari osteocalcin ke mineral tulang negatif [44]. Kita
bisa berspekulasi bahwa, pada prinsipnya, mekanisme yang sama berlaku secara
lokal, meskipun pada tingkat yang jauh lebih rendah, ketika ion Pb yang dirilis di
cairan interstitial selama remodeling tulang dengan tingkat turnover tulang
normal. Namun, rilis Pb disimpan di tulang dapat sangat ditingkatkan pada
penyakit dengan peningkatan tulang pergantian.

kondisi medis atau penyakit, seperti osteoporosis, hipertiroidisme,

hyperparathyroidismand kehamilan menyebabkan pergantian tulang meningkat
dan sesuai terkait dengan rilis peningkatan Pb bergerak dan disimpan dalam
kerangka [22,93,94]. The remobilisasi Pb tulang kembali ke dalam sirkulasi
merupakan sumber potensial yang relevan dari jaringan lunak Pb paparan dan
toksisitas lama setelah paparan Pb eksternal berhenti [95]. Pb dalam serum dapat
meningkat ke tingkat yang mungkin beracun untuk organ dalam (misalnya saraf
dan sistem hematopoietik) yang lebih sensitif terhadap Pb dan logam berat
lainnya. Bahkan proses metabolisme di tulang yang terpengaruh oleh Pb
[44,45,60,63,85] .Further Pb telah dinyatakan sebagai faktor risiko potensial untuk
osteoporosis [23], memiliki negatif pengaruh-pengaruh pada tulang penyembuhan
mekanisme [96] dan mungkin mempengaruhi jaringan tulang rawan artikular [24].
Dalam penelitian ini tidak signifikan perbedaan dalam isi unsur jejak dan
distribusi pola antara tulang dari individu dengan patah tulang leher osteoporosis
dan orang-orang dari usia cocok individu yang sehat tanpa patah tulang dapat
dideteksi. Namun, ukuran sampel hanya n = 5.

Sumber utama dari paparan Pb di negara-negara industri yang berasal di masa lalu
dari pipa air dipimpin dan bensin bertimbal. Banyak upaya telah dilakukan untuk
menghilangkan hampir semua sumber-sumber ini [21]. Namun, biologis paruh Pb
di tulang manusia adalah sekitar 20 tahun [97,98]. Sehingga tulang dianalisis dari
individu dalam rentang usia 60 sampai 80 tahun masih memiliki sejumlah terukur
Pb hadir. Akan menarik untuk mengetahui berapa banyak penyerapan Pb
lingkungan berkurang sekarang pada orang muda.

kesimpulan

Kami telah menunjukkan untuk kali pertama fi bahwa distribusi elemen Zn, Pb
dan Sr tidak seragam antara unit-unit struktural jaringan tulang manusia,
menerapkan kombinasi SR -XRF dan qBEI. garis semen lanjut terakumulasi Zn
dan Pb ke tingkat yang lebih tinggi daripada yang berdekatan matriks mineralisasi
tulang menunjukkan mekanisme yang mungkin berbeda dari serapan Zn, Sr, dan
Pb. Selain itu, terungkap bahwa dalam unit struktural tulang konsentrasi Pb dan Sr
tergantung pada derajat mineralisasi sementara ini tidak terjadi untuk Zn.