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LIBRO DE COMUNICACIONES

LIBRO DE COMUNICACIONES
LIBRO DE COMUNICACIONES
LIBRO DE COMUNICACIONES

ISBN - 978-84-608-2118-2

Queda prohibida la reproducción total o parcial de los textos y gráficos contenidos en esta publicación, tanto en soportes digitales, electrónicos, mecánicos, como impresos sin previo conocimiento y autorización escrita de los editores.

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

3

ÍNDICE
ÍNDICE

COMUNICACIONES PÓSTER

Autoinmunidad

5

Citogenética.y.biología.molecular

28

Diagnóstico.y.tratamiento.de.la.infertilidad

69

Endocrinología

87

Enfermedades.infecciosas.y.microbiología

136

Errores.metabólicos,.diagnóstico.prenatal

193

Evaluación.de.instrumentos.y.métodos,.Point-of-care.e.interferencias

212

Fármacos:.Monitorización-Toxicología

303

Función.renal

316

Garantía.de.calidad,.informática.y.gestión

347

Hematimetría.y.coagulación

401

Marcadores.cardiacos.y.riesgo.cardiovascular

429

Marcadores.tumorales

442

Miscelánea

458

Proteínas.y.péptidos

525

Vitaminas,.nutrición.y.elementos.traza

554

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

5

COMUNICACIONES
COMUNICACIONES

Autoinmunidad

001

¿EncEfAlomiElitis AgudA disEminAdA ó EsclErosis múltiplE En vArón dE 6 Años?

F. Barrero Alor, A. Gragera Martínez, L. Galisteo Almeda, A. Cía González, A.M. Serrano Mira

Hospital Juan Ramón Jiménez, Huelva

introducción: La encefalomielitis aguda diseminada (EMAD) es la enfermedad inflamatoria desmielinizante del sistema nervioso central más frecuente en la infancia (5 a 8 años) afectando principalmente a varones. Pero su sintomatología de inicio puede confundirse con otras patologías como la esclerosis múltiple (EM). Ésta suele afectar a adultos jóvenes siendo infrecuente en edad pediátrica (4-5% en menores de 16 años y 1% en menores de 6 años) y se da más en el sexo femenino. La evolución y pronóstico de ambas es diferente: la EMAD suele presentar episodio único y buena evolución, aunque en ocasiones puede ser recurrente, y la EM es progresiva y de curso recurrente. Exposición del caso: Varón de 6 años sin cuadro previo infeccioso o vacunal. No vómitos ni fiebre. No antecedentes de interés. Acude porque al levantarse de la cama presenta dificultad en la marcha con tendencia a caerse hacia los lados, y disminución de la motilidad espontánea en miembro superior derecho. En la exploración presenta parálisis facial derecha, hemiparesia derecha y ataxia cerebelosa. Signos meníngeos negativos. El hemograma, coagulación y bioquímica normales. Serología vírica negativa. Potenciales evocados normales. Electroencefalograma: elentecimiento difuso, más acusado en hemisferio derecho. TAC craneal normal. Resonancia nuclear magnética (RNM): afectación multifocal de la sustancia blanca supratentorial (con participación subcortical, periventricular y del cuerpo calloso) de ambos hemisferios, que sugieren un etiología inflamatoria como primera posibilidad, más probable EMAD. Estudio de LCR: 25 células/mm 3 , 100% mononucleares, proteínas y glucosa normales. Albúmina LCR: 9 mg/dL (0- 15 mg/dL); Albúmina suero: 4870 mg/dL (3500-5200 mg/dL); IgG LCR: 1,72 mg/dL (0-3,40 mg/dL); IgG suero: 1020 mg/dL (700-1600 mg/dL): índice IgG de Link: 0,91 (0,1-0,7); bandas oligoclonales positivas. Se instaura tratamiento corticoideo con mejoría de los síntomas. A los 3 meses vuelve a presentar un cuadro clínico similar. Se diagnostica de EMAD

recurrente. Posteriormente sufre dos episodios más (a los 9 y 11 meses) con aparición de nuevas lesiones captantes de contraste en RNM. En LCR persiste el índice IgG de Link

elevado (0,92) y las bandas oligoclonales. discusión: La sintomatología inicial no permite diferenciar

si

se trata de EMAD ó EM. El sexo y la edad inclina más hacia

la

primera, si bien no hay antecedentes de episodio febril,

infeccioso ni vacunal, ni clínica de encefalopatía, criterio mayor de la EMAD. Las lesiones iniciales de la RNM indican cuadro inflamatorio desmielinizante sin poder asegurar un diagnóstico, aunque más sugerente de EMAD que de EM.

A los tres meses presenta un segundo brote clasificándolo

como EMAD recurrente. Pero, la presencia de un índice IgG de Link elevado y bandas oligoclonales positivas en LCR hacen sospechar pueda tratarse de un primer episodio de EM ya que, aunque no son específicos de la EM, son poco frecuentes y de carácter transitorio en la EMAD. Las bandas oligoclonales están incluidas actualmente en los criterios diagnósticos de la EM. En el tercer brote se confirma la persistencia de las mismas. La aparición, en RNM posteriores a la primera, de nuevas lesiones en espacio y tiempo confirman el diagnóstico de EM.

002

¿soBrEdosificAción dE dicumArÍnicos o dEBut

cElÍAco A los 78 Años?

J.M. Vaquer Santamaría, P. Laporta Martín, A. Carratalá

Calvo

Hospital Clínico Universitario, Valencia

introducción: La enfermedad celíaca es una enteropatía que afecta a individuos genéticamente predispuestos al entrar en contacto con alimentos que contienen gluten. Se caracteriza por una reacción inflamatoria, en la mucosa

del intestino delgado, que dificulta la absorción de macro y micronutrientes. Puede presentarse en cualquier edad de

la vida, tanto en niños como en adultos, y por otra parte,

puede ser asintomática por lo que existen muchos casos indetectables que nunca se diagnostican. A continuación

exponemos una presentación atípica de enfermedad celíaca en el adulto. Exposición del caso: Varón de 78 años, cardiópata, que acude a Urgencias Médicas por presentar hematuria

y diarrea de 15 días de evolución, refiere que padece

episodios con deposiciones blandas ocasionalmente, y que ha perdido 5 kg de peso en el último mes. Se le determina el Índice de Quick de 5% y el INR >17, y se le diagnostica una

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sobredosificación de acenocumarol (sintrom ® ). Por su buena evolución, recibe el alta y pasa a control por su médico de cabecera. A los 10 días vuelve a Urgencias Médicas presentando mal estado general. Indica que la hematuria ha cesado pero sigue con la diarrea. Presenta INR 16 y elevación de transaminasas, por lo que se le ingresa en planta para su estudio. Durante su ingreso se le realizaron numerosas exploraciones complementarias, entre ellas un coprocultivo

y el estudio bacteriológico y parasitológico, que resultaron negativos. También se le realizó una gastroscopia y

colonoscopia, en las que se observó gastritis crónica atrófica

y duodenitis inespecífica. Se le tomaron muestras para

biopsia y se le dio el alta hospitalaria para control por su médico de cabecera. El resultado de las biopsias reveló una mucosa colónica

sin alteraciones pero una duodenitis atrófica tipo Marsch 3c. La mucosa duodenal presentaba atrofia vellositaria y linfocitos intraepiteliales, por lo que el paciente fue remitido

al Servicio de Medicina Digestiva.

En la analítica de control se observó un ligero déficit de IgA, por lo que se le determinaron los anticuerpos antitransglutaminasa IgG que resultaron ser fuertemente positivos (mayor a 200 UI/mL). Los anticuerpos anti- endomisio IgG fueron positivos a título de 1:640. Por otra parte, el estudio del genotipo HLA resultó positivo para HLA DQ 2.5 cis heterocigoto, por lo que el paciente presenta susceptibilidad genética para celiaquía. Con todos estos datos, se confirmó el diagnóstico de celiaquía del paciente. discusión: Este caso es un ejemplo de que la enfermedad celíaca puede presentarse en cualquier edad de la vida y que hay casos que pasan desapercibidos. Además puede dar lugar a diagnósticos erróneos, ya que se le diagnóstico una sobredosificación de acenocumarol (sintrom ® ) por su elevado INR cuando en realidad el paciente tenía una atrofia vellositaria avanzada que debió producir un déficit de vitamina K potenciándose con ello la dificultad para sintetizar factores de la coagulación.

003

AdEcuAción dE lA dEmAndA dE AnticuErpos AntipEroXidAsA Y AntitirogloBulinA

Á. Sánchez Sánchez, M.R. Caro Narros, P. Tajada Alegre, I. Cano De Torres, E. Fernández Pardo

Hospital General, Segovia

introducción: Para el diagnóstico de enfermedad tiroidea autoinmune en nuestra área sanitaria, contamos con los anticuerpos (Ac) antiperoxidasa (antiTPO) y antitiroglobulina (antiTG). Las guías recomiendan la determinación de antiTPO como prueba de elección. Los antiTG se indican durante el seguimiento de pacientes con antecedente de carcinoma diferenciado de tiroides y en zonas deficientes de yodo. Una vez positivizados los Ac, las guías sugieren no volver a repetir el análisis. La implantación de reglas expertas en los Sistemas informáticos de Laboratorio (SIL), puede suponer un importante ahorro a la hora de gestionar

la petición de pruebas específicas y bien protocolizadas. objetivos: Analizar el cumplimiento del protocolo para la solicitud de Ac antitiroideos implantado en nuestro hospital desde 2012. Analizar la adecuación de las peticiones de Ac para cada paciente. Evaluar la posibilidad de implantación de reglas expertas en el SIL del laboratorio para la realización de estas pruebas. pacientes y métodos: Se realizó un estudio retrospectivo en el que se revisaron las solicitudes de antiTPO y antiTG realizadas en nuestro laboratorio durante los últimos 3 años. Se ha evaluado el cumplimiento del protocolo de solicitud de pruebas diagnósticas en patología tiroidea elaborado en 2012 para población adulta: 1) realización de anti-TPO cuando TSH es patológica y T4 libre es normal y 2) no repetición de perfil de Ac una vez positivizados. Se descartaron aquellas solicitudes de pacientes con carcinoma diferenciado de tiroides y también pacientes gestantes. Se registraron datos demográficos, número de peticiones por paciente, valores de Ac y hormonas tiroideas y servicio peticionario. Los Ac se determinaron mediante enzimoinmunoanálisis en un analizador Triturus® (Grifols®) y las hormonas tiroideas por quimioluminiscencia en ADVIA Centaur XP® (Siemens Healthcare Diagnostics®). El estudio estadístico se realizó mediante paquete estadístico SPSS 22.0.0.0. resultados: Se estudiaron 392 peticiones que correspondían a 341 pacientes: 21.7% hombres y 78.3% mujeres. La mediana de edad del estudio fue 50.4 años (rango intercuartílico: 37.4-64.9). Las 51 restantes eran peticiones repetidas. La distribución de peticiones por servicios fue: 39% Medicina Interna, 21% Atención Primaria, 10% Alergología, 10% Endocrinología, 7% de Neurología y el 13% restante de otros servicios. Entre aquellas peticiones realizadas por primera vez, el 32.55% estaba correctamente indicada la solicitud de Ac según el protocolo (TSH patológica y T4 libre normal), mientras que en el 67.45% de ellas no estaba indicada su realización. De las repeticiones, un 39.66% estarían bien indicadas su repetición (los Ac eran previamente negativos) mientras que un 60.34% estarían mal solicitadas. El 99% de las peticiones solicitaban ambos Ac. Solo se encontraron 2 pacientes con antiTG positivos y antiTPO negativos, negativizándose uno de ellos en un control posterior. conclusiones: Los resultados obtenidos reflejan que el protocolo de solicitud de Ac antitiroideos no se ha implantado correctamente. La solicitud conjunta de ambos Ac no proporciona ningún beneficio en nuestra población. La solicitud de estas pruebas exclusivamente desde el SIL podría suponer una mejor gestión de la demanda así como un ahorro, al evitar realizar determinaciones de Ac innecesarias.

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004

Análisis dE lA prEvAlEnciA dE hAplotipos dE riEsgo dE EnfErmEdAd cElÍAcA En lA poBlAción dE riEsgo dE un ArEA dEl sur dE EspAñA

E. Melguizo Madrid, M.D.G. Ávila García, F. Sánchez

Jiménez, I. Rodríguez Martín, A. Pérez Pérez, C. González

Rodríguez

Hospital Universitario Virgen de la Macarena, Sevilla

introducción: La enfermedad celíaca (EC) enteropatía sensible al gluten, es una enfermedad crónica autoinmune mediada por linfocitos T y causada por la ingestión de cereales con gluten en individuos genéticamente susceptibles. la patogenia es resultado de la interacción entre factores genéticos, inmunológicos y ambientales. Induce una lesión característica, aunque no específica, de la mucosa del intestino delgado así como atrofia vellositaria, malabsorción

y síntomas otros síntomas intestinales y extraintestinales. El HLA es un complejo de genes, sistuado en el brazo corto del cromosoma 6 (6p21.31). Codifican las proteínas HLA que se encuentran en la superficie de las células inmunitarias

y están implicadas en la regulación del sistema inmune. Se

divide clásicamente en tres regiones, HLA I, II y III. La región

del HLA-II se asienta en una subregiones de las cuales, las más conocidas son HLA-DP, DQ y DR, siendo las DQ las más asociadas a EC. La proteína DQ2 es un heterodímero codificado por dos alelos: DQA1*05 (cadena alfa) y DQB1*02

(cadena beta). la proteína DQ8 está codificada por los alelos DQA1*03 (cadena alfa) y DQB1*0302 (cadena beta). El gen DRA codifica una cadena α invariable y se une a varias cadenas β codificadas por los genes DRB. Las últimas recomendaciones de la ESPGHAN, indican

el tipaje HLA-DQ2 y HLA-DQ8 como herramienta útil para

excluir el diagnóstico de EC.

Según los estudios los haplotipos que presentan mayor riesgo de EC son el DRB1*03-DQB1*0201-DQA1*0501

y el DRB1*07-DQB1*0202-DQA1*0201, mientras que el

haplotipo DRB1*11-DQB1*0301-DQA1*0505, ha mostrado tener carácter protector. objetivo: Estudio de los haplotipos que predisponen a la celiaquía presentes en la población de riesgo de un hospital

de tercer grado del sur de España.

metodología: Se estudió el tipaje del HLA con el empleo de primers específicos utilizando técnicas de PCR (polymerase chain reaction) (BIODIAGENE S.R.L. PALERMO, ITALIA). Se han analizado los haplotipos más prevalentes en la población de riesgo de un hospital del sur de España en los tres últimos años tras la implantación del estudio genético. resultados: Se han evaluado un total de 314 muestras entre la población diana. Los resultados de los haplotipos se resumen en la tabla.

haplotipos Alelo 1

haplotipos Alelo 2

n

%

DRB1*03-DQB1*0201-

DRB1*03-DQB1*0201-

DQA1*0501

DQA1*0501

8

2.5

DRB1*03-DQB1*0201-

DRB1*07-DQB1*0202-

DQA1*0501

DQA1*0201

45

14.3

DRB1*03-DQB1*0201-

DRB1*04-DQB1*0302-

DQA1*0501

DQA1*03

22

7.0

DRB1*03-DQB1*0201-

DRB1*11-DQB1*0301-

DQA1*0501

DQA1*0505

28

8.9

DRB1*03-DQB1*0201-

DQA1*0501

otros

89

28.3

DRB1*07-DQB1*0202-

DRB1*07-DQB1*0202-

DQA1*0201

DQA1*0201

2

0.6

DRB1*07-DQB1*0202-

DRB1*04-DQB1*0302-

DQA1*0201

DQA1*03

12

3.8

DRB1*07-DQB1*0202-

DRB1*11-DQB1*0301-

DQA1*0201

DQA1*0505

16

5.0

DRB1*07-DQB1*0202-

DQA1*0201

otros

34

10.8

DRB1*04-DQB1*0302-

DRB1*04-DQB1*0302-

DQA1*03

DQA1*03

0

0

DRB1*04-DQB1*0302-

DRB1*11-DQB1*0301-

DQA1*03

DQA1*0505

4

1.3

DRB1*04-DQB1*0302-

DQA1*03

otros

28

8.9

DRB1*11-DQB1*0301-

DRB1*11-DQB1*0301-

DQA1*0505

DQA1*0505

2

0.6

DRB1*11-DQB1*0301-

DQA1*0505

otros

24

7.6

conclusiones: Se ha visto una alta presencia de los haplotipos de alto riesgo, ya que un 61% de la población presenta en alguno de los alelos el haplotipo DRB1*03- DQB1*0201-DQA1*0501, y otro 20% de la población presenta en alguno de los alelos el haplotipo de riesgo

DRB1*07-DQB1*0202-DQA1*0201.

Un 8.2% de los pacientes a los que se les ha estudiado

el tipaje del HLA han presentado en alguno de los alelos el

haplotipo protector DRB1*07-DQB1*0202-DQA1*0201, que hace muy improbable el desarrollo de la enfermedad celíaca.

005

Análisis dE lAs solicitudEs dE dEtErminA- ción sErológicA dE inmunogloBulinA d. su utilidAd En El diAgnóstico dEl sÍndromE dE hipErinmunogloBulinEmiA d (shid)

V. Hernández Martí, R.M. Pascual Costa, M.J. Moreno

Monedero, C. Giménez Lozano, M. Simó Castelló, B. Laiz

Marro

Hospital Universitario La Fe, Valencia

introducción: El síndrome de hiperinmunoglobulinemia

D (SHID) se caracteriza por la presencia de episodios febriles,

de 3-7 días de duración, recurrentes y que frecuentemente se

acompañan de rash cutáneo, adenopatías, dolor abdominal, vómitos y diarreas. Estos episodios debutan durante los primeros 2 años de vida en el 80% de los pacientes, pueden ser desencadenados por una vacunación en edad infantil

y son menos intensos y frecuentes en la edad adulta. Se

observa un aumento policlonal de IgD (superior a 100 UI/ml o

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8

14 mg/dl) en dos determinaciones separadas por un intervalo mínimo de un mes, sin ser específico ni patognomónico del SHID. Se debe a mutaciones en el gen de la mevalonato kinasa (MVK), con herencia autosómica recesiva. Otro síndrome que cursa ocasionalmente con incremento de las IgD es la fiebre mediterránea familiar (FMF), con el mismo patrón de herencia pero debido a mutaciones en otro gen,

el MEFV.

objetivos: El objetivo del estudio fue analizar la incidencia de solicitudes de IgD en suero, la utilidad predictiva de sus valores y la confirmación diagnóstica de las patologías asociadas a su incremento. material y método: Estudio retrospectivo y descriptivo de las solicitudes de determinación de IgD a nuestro laboratorio durante 12 meses (año 2014). resultados: Se registraron 277 solicitudes (215 pacientes) procedentes en su mayoría de Reumatología infantil, Pediatría y Hematología. La distribución por edades fue: 0-24 años (75,3%), 25-60 años (12,6%) y 61-86 años (12,1%). Del total de pacientes analizados, únicamente 38 superaron el punto de corte establecido para el screening diagnóstico del SHID (14 mg/dL). Se excluyeron 6 pacientes de entre 61-82 años, diagnosticados de otras enfermedades como mieloma múltiple, leucemia e insuficiencia renal aguda.

De los otros 32 pacientes, de entre 2-23 años, los diagnósticos más frecuentes fueron: fiebre recurrente (11 casos), SHID (10 casos), FMF (4 casos) y otras afecciones inflamatorias

y autoinmunes. Dado que tanto la FMF como el SHID son

enfermedades hereditarias basadas en mutaciones, se precisó de un estudio genético confirmatorio. De los 4 casos de FMF se observó la presencia de mutaciones en el gen MEFV en 3 de ellos, estando el cuarto caso pendiente de confirmación. Por otro lado, entre los 10 casos de SHID, se confirmó la presencia de mutaciones del gen MVK en 9 de ellos, estando ausente en el otro caso. En cuanto a los 11 pacientes diagnosticados de fiebre recurrente, en ninguno se pudo demostrar la presencia de una mutación, descartándose los diagnósticos de FMF y SHID. conclusiones: El SHID es un síndrome muy poco frecuente característico de la edad infantil y que se resuelve al llegar a la edad adulta. No resulta justificable en los laboratorios clínicos la medición rutinaria de la IgD, junto con otras inmunoglobulinas, excepto en los casos de pacientes con IgD monoclonal o con sospecha de SHID. El diagnóstico de dicho síndrome siempre deberá ser confirmado mediante un análisis genético.

006

AnticuErpos Anti gAngliosidos gm1 igm En pAciEntE con sÍndromE dE guillAin-BArrÉ

A. Martínez Cañamero, E. Ocaña Pérez, A. Muñoz Colmenero

Complejo Hospitalario de Jaén

introducción: El síndrome de Guillain-Barré (SGB) cursa con parálisis flácida, arrefléxica, ascendente y simétrica, con o sin trastornos sensoriales, que puede llevar a la tetraparesia grave 1,2. Se clasifica en 4 subtipos (estudios neurofisiológicos): polirradiculoneuropatía aguda inflamatoria desmielinizante (PAID), neuropatía axonal

sensitivo-motora aguda (NASMA), neuropatía axonal

motora aguda (NAMA) y síndrome de Miller-Fisher (SMF) (ataxia, oftalmoplejía y arreflexia). Su etiología precisa es desconocida, pero en algunos casos existen mecanismos inmunes implicados (anticuerpos antigangliósidos). Dos tercios de los casos están precedidos de infección aguda (1-3 semanas). descripción caso clínico: Paciente de 56 años, sin antecedentes personales de interés. Alergia medicamentosa

a penicilina, estreptomicina y cloranfenicol. No presenta

HTA, ni DM ni hipercolesterolemia. Dos semanas previas al ingreso cursa con cuadro de gastroenteritis aguda. El día previo al ingreso comienza con dolor lumbar inespecífico y cierta dificultad en la deglución. Al ingreso presenta debilidad en miembros, proximal en miembros inferiores (MMII) y distal en miembros superiores (MMSS), con empeoramiento de la disfagia con atragantamiento. Refiere dificultad en la micción, cambio en el tono de voz y disartria. No se aprecia trastorno sensitivo, ni cefalea ni dolor cervical. La paciente presenta bradicardia e hipertensión arterial por lo que ingresa en unidad de cuidados intensivos. Se realiza punción lumbar para estudio de LCR sin alteraciones significativas (glucosa 58mg/dl, proteínas 44,9 mg/dl, hematíes 15/mm3

y leucocitos 1/mm3), sin aislamiento de microorganismo en

LCR (micoplasma, CMV, Herpesvirus, varicela, enterovirus)

y tan sólo destaca un ligero aumento de albumina (52 mg/dl).

En la exploración neurológica destaca tetraparesia en MMSS

a nivel proximal (3/5) y distal (4/5) y en MMII proximal (3/5)

y distal (5/5). Electrocardiograma normal. RMN de cráneo y columna cervical sin alteraciones significativas. Estudio neurofisiológico. Estudio de conducciones sensitivas normales, en las conducciones motores se registran tres bloqueos de conducción en nervios perineales

y cubital izquierdo. En el estudio inmunológico destaca aumento de IgG e IgA (2370 y 403 mg/dl), estudio anticuerpos anti receptos acetilcolina negativos, ANA negativos, ANCA negativos,

y anticuerpos anti GM1 IgM positivos. La positividad de

estos anticuerpos apoyaba la sospecha diagnóstica de síndrome de SGB, que permitió iniciar el tratamiento con inmunoglobulinas intravenosas. La paciente presento mejoría clínica y se inició rehabilitación con excelente evolución y deambulación autónoma. discusión: La determinación de anticuerpos anti-GM1 de isotipo IgM confirma el diagnóstico de SGB excluyendo otras patologías agudas del tronco cerebral. El conjunto de hallazgos confirma que existe una correlación enfermedad específica entre algunas neuropatías y determinados anticuerpos antigangliósido con utilidad clínica.

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9

007

AutoAnticuErpos Anti igE dEtEctAdos mEdiAntE dEgrAnulAción dE BAsófilos trAs disociAción ácidA En pAciEntE con urticAriA crónicA

Á. Blasco Barbero (1) , J.M. Álamo (1) , O. Noguera (2) , I. Llorca (2) , C. Muñoz (3) , B. Llorca (1)

(1) Centro Inmunológico Alicante; (2) Hospital Vega Baja, Alicante; (3) Hospital General Alicante

introducción: La urticaria crónica se caracteriza por exantemas cutáneos transitorios que ocurren casi todos los días durante al menos 6 semanas. Las causas son variadas, siendo las más frecuentes las asociados a enfermedad tiroidea autoinmune y los relacionados con infección por Helicobacter pylori. En un 33% de pacientes la causa se debe a la existencia de autoanticuerpos anti FcεRI de la

IgE y/o autoanticuerpos anti-IgE que tienen la capacidad de activar los basófilos y mastocitos, siendo estos pacientes los que presentan una urticaria más severa. Exposición del caso: Paciente varón de 28 años, con urticaria mantenida durante más de 6 meses. Se descarta infección por Helicobacter pylori. Hormonas tiroideas dentro de la normalidad: TSH 3,11 mU/L (0,30-4,70 mU/L), con ausencia de Ac anti TPO y anti-tiroglobulina. Concentración de IgE de 429,00 IU/mL (0,10-100 IU/mL) y presencia de ANA positivos con un título bajo de 1/40. Se solicita estudio de autoanticuerpos anti-IgE en suero como sospecha causante de la urticaria. Se emplea la técnica de la degranulación de basófilos como prueba funcional para determinarlos, enfrentando el suero del paciente a un pool de sangre EDTA de personas sanas. No se detecta degranulación de los basófilos. No obstante, debido a la concentración elevada de IgE y el posible secuestro de dichos anticuerpos por estar unidos a la IgE, se recomienda repetir la técnica tras disociación ácida. Consiste en la incubación durante 15 minutos de 20 µL del suero con 100 µL de ácido acético, tras

lo cual se añaden 31 µL de tris 1 M y 49 µL de tampón de

dilución. Se mide la degranulación de basófilos resultando

la prueba positiva con un 13,9% de basófilos degranulados

(0,4% control negativo). discusión: La presencia de autoanticuerpos anti IgE

y autoanticuerpos anti FcεRI de la IgE son una causa

frecuente de urticaria crónica, enfermedad cuya prevalencia se estima en un 1-2% de la población. Su diagnóstico y la detección de dichos anticuerpos supone un reto para el Laboratorio Clínico debido a diferentes problemas: posible presencia de diferentes Ac anti IgE, ELISAS sólo disponibles para autoanticuerpos anti FcεRI, posible secuestro de

autoanticuerpos en pacientes con concentraciones altas de IgE, falta de solicitud de pruebas por el médico (anticuerpos anti tiroideos por ejemplo), entre otras. Es necesario una buena comunicación de feedback con los clínicos y un conocimiento profundo de las técnicas de laboratorio, para

el

correcto abordaje diagnóstico de los pacientes, ya que de

lo

contrario, muchos casos de urticaria crónica causados por

estos autoanticuerpos son mal catalogados como urticaria idiopática.

008

cAlprotEctinA fEcAl: EvAluAción trAs 3 Años dE su implAntAción

L. Gómez Fernández, C. Muñoz Peña, C. Almazán Alonso, M.D.C. López Aguayo, J.M. Molina Santiago

Hospital San Agustín, Linares

introducción: La calprotectina es una proteína fijadora de Ca +2 y Zn +2 abundante en el citoplasma de los neutrófilos, con propiedades bacteriostáticas y fungicidas que participa en la regulación de procesos inflamatorios y neoplásicos. Se ha demostrado su elevación en las heces durante los procesos inflamatorios intestinales de origen orgánico, como en la Enfermedad Inflamatoria Intestinal (EII). Tiene un elevado valor predictivo negativo, usándose como prueba de cribado para la realización de colonoscopias y así evitar pruebas invasivas innecesarias en pacientes con enfermedad funcional. objetivo: Conocer la evolución de la demanda en nuestro hospital de la calprotectina fecal, así como su rendimiento diagnóstico global, por servicio peticionario y diagnóstico. material y métodos: Se realizó un estudio observacional retrospectivo de las solicitudes de calprotectina fecal desde su incorporación a la Cartera de Servicio del Laboratorio (Marzo 2012- Marzo 2015). Se recogieron los siguientes datos del SIL: fecha de petición, servicio peticionario, diagnóstico y resultado. La estadística se realizó en el programa Excel (Microsoft, Redmond, EEUU). resultados: Se han realizado un total de 216 peticiones, teniendo 42 incidencias: 12 muestras en envase incorrecto, en 29 no se remitió muestra y una no se realizó por tener un resultado previo reciente. Se procesaron 174, de las que 60 fueron positivas (>50 μg/g), teniendo un rendimiento diagnóstico del 34.5%. La evolución de la demanda como el rendimiento diagnóstico por servicio y diagnóstico se recoge en la siguiente tabla:

Año

peticiones

2012

19

2013

45

2014

113

2015 (Hasta marzo)

39

Total

216

 

rendimiento diagnóstico por diagnóstico

 
 

Dolor abdominal

S. diarreico

EII

Otros

Positivos

1

12

20

11

Negativos

28

37

18

25

Total

29

49

38

36

Rendimiento

34.5%

24.5%

52.6%

30.6%

rendimiento diagnóstico por servicio peticionario

 

Atención Primaria Consulta Digestivo Consulta Pediatría Otros

Positivos

4

29

8

3

Negativos

10

66

26

5

Total

14

95

34

8

Rendimiento

28.6%

30.5%

23.5%

37.5%

conclusiones: Tras la incorporación en el año 2012 la

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

10

demanda ha aumentado en más del doble cada año con respecto al anterior, justificado por su demostrado valor en el diagnóstico y seguimiento de la EII. Se prevé la estabilización de la demanda este año, no contemplándose medidas de adecuación de la demanda. El rendimiento diagnóstico por Servicio Peticionario no muestra grandes diferencias. Nos llamó la atención el elevado rendimiento en las peticiones de otros servicios, revisando las historias eran pacientes ya diagnosticados que se realizaron control en esos servicios. En el rendimiento según diagnóstico sí se aprecian diferencias significativas, alcanzándose el 52.6% cuando se sospecha EII. El elevado rendimiento en la categoría de otros diagnósticos se debe a que incluye pacientes con EII que se realizaron control por recidiva. La utilización de la calprotectina fecal en nuestro Hospital se adecua a su utilidad como marcador de cribado de la EII. Todas las peticiones realizadas contemplaban como síntomas los propios de la EII, evitándose la colonoscopia en todos los casos en los que resultó negativa (114), reduciendo la carga asistencial y adelantándose el diagnóstico y tratamiento al enfermo.

009

cApAcidAd diAgnósticA dEl ÍndicE dE linK Y lAs BAndAs oligoclonAlEs En pAciEntEs con sospEchA dE EsclErosis múltiplE

F. Ocampo Bustos, E. Fernández Morán, S. Martin Liras, M.D. Blanco Mercadé

Complejo Asistencial de León, León

introducción: La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad desmielinizante que afecta al sistema nervioso central; vinculándose al sistema inmune como principal responsable. Los criterios McDonald (2010) excluyen el estudio del Líquido Cefalorraquídeo (LCR) como criterio diagnóstico, salvo en pacientes con clínica de progresión neurológica insidiosa sugestiva de EM donde la presencia de bandas oligoclonales (BOC) IgG o la elevación del Indice de Link pueden ser diagnósticos. Sin embargo, el estudio del LCR sigue siendo una herramienta clave para diagnosticar la EM. Identificar síntesis intratecal de IgG con Link y BOC es obligado para el diagnóstico. objetivos: Determinar la capacidad diagnóstica del Indice de Link y las BOC de IgG en pacientes con sospecha de EM. material y métodos: Se realizó un estudio retrospectivo en pacientes con sospecha de EM; y con estudio de BOC e Indice de Link. Se revisaron 142 muestras de suero y LCR, así como las historias clínicas respectivas; a los que se había solicitado el estudio durante los años 2010 y 2011. Se descartaron N muestras procedentes de otro hospital, de las que no se disponía de la Historia. El diagnóstico definitivo de EM fue establecido por el Servicio de Neurología de este Hospital en 48 pacientes. Las determinaciones de IgG y albúmina en LCR y suero se realizaron mediante Nefelometría (BNII, Siemens), utilizando el sistema Protis de interpretación de resultados para el Indice de Link. Se consideraron positivos para

síntesis intratecal, valores > 0.7. La detección de bandas oligoclonales en LCR y suero se hizo mediante Isoelectroenfoque con el sistema Hydrasys Focousin (Sebia). Se consideró positiva la presencia de dos

o más bandas de IgG en LCR, sin coincidencia en suero. resultados: De los 48 casos positivos para EM, 29 (60%) presentaron un Índice por encima de 0.7 y 19 (40%) un valor dentro de la normalidad. Esto determinó una sensibilidad de 67.44% y una especificidad de 80.81%. En cuanto a las bandas, 46 (96%) pacientes presentaron más de 2 bandas oligoclonales y sólo 2 (4%) no. Esto corresponde a una sensibilidad de 75% y una especificidad de 97.53%. Considerando la capacidad diagnóstica combinada, los 48 pacientes presentaron alguna alteración en una u otra prueba; con una sensibilidad de 76.19% y una especificidad de 100%. La capacidad diagnóstica combinada corregida por los valores óptimos de la curva ROC arrojó una sensibilidad del 61.04%, y una especificidad del 98.46%. conclusiones: La determinación aislada de las BOC en LCR constituyen una mejor herramienta de apoyo diagnóstico que los valores aislados del Índice de Link. Los valores del Índice de Link aún siendo menos sensibles

y específicos, aportan información complementaria en la

identificación de la disfunción de la barrera hematoencefálica

o

la síntesis intratecal. Al combinar las dos pruebas, observamos que aumenta

la

sensibilidad y especificidad diagnóstica.

Para el estudio de pacientes con sospecha de EM, se deben realizar ambas pruebas bioquímicas simultáneamente; consiguiendo aumentar la sensibilidad diagnóstica. En nuestro hospital se mantiene el estudio de LCR en pacientes con sospecha de EM como herramienta fundamental al diagnóstico.

010

compArAción dE dos mÉtodos pArA lA dEtErminAción dE AnticuErpos nuclEArEs EXtrAÍBlEs (EnAs)

M.D. Blanco Blanco, V. Santaclara Maneiro, J. Pérez

Clemente, J. Díaz Bermejo, A. Ruiz López, M.D.C. Gallego

Ramírez

Hospital Universitario Rafael Méndez, Murcia

introducción: El estudio de los anticuerpos antinucleares

(ANA) constituye una herramienta clave para el diagnóstico

y pronóstico de las enfermedades del tejido conectivo. Su detección incluye una prueba de cribado basada en inmunofluorescencia indirecta (IFI) y dentro de este grupo de autoanticuerpos, están los dirigidos contra componentes nucleares (DNA bicatenario, histonas), y los que reconocen antígenos nucleares extraíbles (ENAs), que van dirigidos contra proteínas nucleares no histonas y pueden extraerse del núcleo con soluciones salinas de baja fuerza iónica; entre estos últimos, los más estudiados y mejor caracterizados son: SSA/Ro, SSB/La, RNP-U1, Sm, centrómero, Scl-70, Jo-1 y ribonucleoproteína P, cuya búsqueda tiene utilidad en

la práctica clínica, dadas sus asociaciones con determinadas

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

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manifestaciones clínicas y enfermedades. Existen diversos métodos para detectar estos autoanticuerpos entre los que se incluyen el enzimoinmunoanálisis (ELISA) el inmunobloting como los más utilizados. El objetivo de este estudio es comparar ambos métodos (ELISA frente a inmunobloting) en la identificación de antígenos nucleares extraíbles. material y método: Se recogen 96 muestras de suero con resultado positivo para la prueba de ANA (portas con células Hep-2-NOVA-Lite ® IZASA), procedentes del Servicio de Reumatología, que pertenecen a pacientes con sospecha de enfermedad autoinmune. Se les realiza un screening de ENAs (ThermoFisher ® ) que utiliza una mezcla de proteínas recombinantes humanas y nativas purificadas. En las muestras que resultaron positivas, se identifican, de forma específica, los autoanticuerpos frente a los que son positivos, para lo que se utiliza inmunobloting (ensayo en tiras que detecta indivudualmente: Sm, RNP, SSA, SSB, centrómero, Scl-70, Jo-1 e histonas, INNOGENETICS), y ELISA (detección individual de estos anticuerpos, ThermoFisher ® ). resultados: En la tabla siguiente, se muestra la identificación de autoanticuerpos específicos por ambos métodos.

EnAs-inmunobloting

EnAs- ElisA

SSA

SSA

(n= 28)

(n =28)

SSA+SSB

SSA+SSB (n= 14) SSA (n= 16)

(n= 30)

Sm+RNP

Sm+RNP (n= 3) RNP (n= 15)

(n= 18)

Centrómero

Centrómero

(n= 15)

(n= 15)

Ribosomal P

Ribosomal P

(n= 3)

(n= 3)

Scl-70

Scl-70

(n=2)

(n=2)

n: número de pacientes.

conclusiones: Los resultados muestran concordancia entre ambas técnicas en el caso de SSA, centrómero, Scl- 70 y Ribosomal P. Para el resto de patrones no se observa esa coincidencia, debido a que la técnica de ELISA, aunque utiliza antígenos recombinantes como el inmunonobloting, son más específicos. Tal es el caso de la reactividad cruzada que existe entre los anticuerpos RNP y Sm (positivos ambos por inmunobloting), mientras que en el caso del ELISA, Sm corresponde a un antígeno altamente purificado asegurando la especificidad. La detección de autoanticuerpos específicos para las enfermedades autoinmunes sistémicas puede ser de ayuda en su diagnóstico; por ello, el uso de métodos altamente específicos para su identificación, puede aumentar el valor predictivo positivo y, por tanto, la utilidad clínica del test.

011

compArAción dE trEs mÉtodos dE Análisis dE AnticuErpos AntimitocondriAlEs (AmA) m2: EnZimoinmunoAnálisis vs inmunoflo- rEscEnciA indirEctA vs Quimioluminis- cEnciA

J.M. Vaquer Santamaría, P. Laporta Martín, Á. Justamante Rodríguez, A. Carratalá Calvo

Hospital Clínico Universitario, Valencia

introducción: La Cirrosis Biliar Primaria (CBP) es una enfermedad hepática colestásica, crónica y progresiva. Su etiología es, en gran parte, desconocida pero se asocia a

determinados trastornos inmunológicos como el aumento de las IgM, detección de linfocitos T anormales, complejos inmunes circulantes y elevados títulos de autoanticuerpos. Los anticuerpos antimitocondriales (AMA) son el principal marcador diagnóstico de la CBP, ya que se detectan en más del 90% de los casos. Los AMA están dirigidos contra

la 2-oxoácido deshidrogenasa localizada en la cara interna

de la membrana mitocondrial y perteneciente al complejo de

la piruvato deshidrogenasa (citocromo) y juegan un papel

importante en el diagnóstico de la enfermedad, pudiendo incluso estar presentes antes del inicio sintomático de la misma. El análisis de los AMA se realiza mediante inmunofluorescencia indirecta (IFI) en cortes triples de hígado, riñón y estómago de rata o ratón; también existen comercializados test de enzimoinmunoanálisis (ELISA, EIA) y, más recientemente, métodos automatizados de

quimiolumiscencia (CLIA) que están adquiriendo gran relevancia por su practicabilidad, precisión, especificidad superior al 98% y sensibilidad similar al EIA. objetivo: Comparar la determinación de anticuerpos anti-M2 mediante inmunofluorescencia indirecta, enzimoin- munoanálisis y quimioluminiscencia. material y métodos: Se analizaron muestras de pacientes procedentes de la consulta de Medicina Digestiva

y Hepatología durante cuatro meses. En este estudio se

utilizaron los analizadores Zenit SP (Menarini Diagnostics ® )

para ELISA y Zenit Ra (Menarini Diagnostics ® ) para CLIA, así como portas de triple tejido de rata (riñón, hígado y estómago) de Menarini Diagnostics ® y un microscopio de fluorescencia Olympus ® BX40. Para el cálculo del estadístico Kappa, se utilizó la aplicación informática VassarStats®. resultados: Se analizaron muestras de 62 pacientes, con una porcentaje de 71% mujeres y 29% hombres, y una media de edad de 60 años. Se consideraron positivos los resultados del ELISA y CLIA cuando superaban el punto de corte facilitado por el fabricante. Hubo un resultado discordante entre CLIA y las otras dos metodologías empleadas, correspondiente a una paciente cuyo diagnóstico era de hepatopatía crónica. De los 62 casos analizados, 4 fueron positivos por las 3 técnicas, 3 fueron positivos débiles para ELISA, y 1 fue positivo débil tanto para ELISA como para IFI. El índice Kappa obtenido para las comparativas establecidas fue:

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

12

 

KAppA

Error

intErvAlo dE

compArAtivA

oBsErvAdo

EstándAr

confiAnZA 95%

CLIA vs EIA

0.70

0.16

0.39-1

CLIA vs IFI

0.88

0.12

0.65-1

EIA vs IFI

0.82

0.13

0.56-1

conclusiones: El grado de concordancia de las tres técnicas analíticas, ha resultado elevado, tal como nos indica el índice Kappa observado. Dado que este índice es superior en CLIA vs IFI que en EIA vs IFI nos disponemos

a cambiar la técnica de rutina actual de nuestro laboratorio de enzimoinmunoanálisis por la nueva técnica de quimioluminiscencia.

012

contriBución dEl lABorAtorio Al diAg- nóstico Etiológico dE unA polinEuropAtÍA

C. Giménez Lozano, M.J. Moreno Monedero, R. Pascual Costa, M. Simó Castelló, A. Sarnago Gonzalo, V. Hernández Martí, B. Cortés García, B. Laíz Marro

Hospital Universitario La Fe, Valencia

La polineuropatía es una afectación generalizada de nervios periféricos, simétrica y frecuentemente distal. Su etiología incluye tóxicos (alcohol), déficits nutricionales

(B12, folato), enfermedades metabólicas (diabetes mellitus), infecciones y procesos autoinmunes. Dentro de este grupo, la producida por anticuerpos antiglicoproteína asociada

a la mielina (anti-MAG) es una entidad grave en la que el

laboratorio puede agilizar el diagnóstico. Exposición del caso: Mujer de 59 años con antecedentes de enolismo, que acude a urgencias por síndrome constitucional e hipoestesia en miembros inferiores de un mes de evolución. Ingresa para completar

estudio por hepatomegalia severa, ataxia con pérdida de sensibilidad (superficial y profunda) bilateral y simétrica, anemia macrocítica, trombopenia e hiperbilirrubinemia. La biopsia hepática es diagnóstica de cirrosis alcohólica, y el TAC descarta la presencia de patología tumoral. La serología no objetiva infección activa por virus hepatotropos. En la bioquímica se detecta déficit de folato. La RMN cerebral descarta la presencia de lesiones ocupantes de espacio que pudiesen justificar la clínica neurológica, siendo además la electroneurografía característica de una polineuropatía sensitivo-motora. El estudio citobioquímico del LCR es normal, descartándose la presencia de bandas oligoclonales. El proteinograma sérico

y la cuantificación de inmunoglobulinas son diagnósticos de

GMSI IgM kappa. Se solicitan autoanticuerpos causantes de neuropatías autoinmunes, entre ellos los antigangliósidos, onconeuronales y anti-MAG, siendo positivo este último. Se diagnostica de polineuropatía autoinmune anti-MAG asociada a IgM kappa. Recibe tratamiento con rituximab experimentando una lenta mejoría. discusión: Las polineuropatías autoinmunes pueden presentarse asociadas a otras enfermedades, (POEMS, amiloidosis, GMSI), o de forma aislada, como el Guillain- Barré o las polineuropatías desmielinizantes crónicas. La producida por anticuerpos anti-MAG es poco frecuente,

cursa con desmielinización y alteraciones sensitivo-motoras en miembros, y en el 50% de los casos se asocia a GMSI IgM. Para llegar a su diagnóstico, hubo que descartar otras causas de afectación neurológica. Inicialmente se sospechó causa tumoral (concretamente hepatocarcinoma) con metástasis cerebrales causantes de la ataxia e hipoestesia, pero las pruebas de imagen no evidenciaron neoplasia. La anemia macrocítica, trombopenia e hiperbilirrubinemia fueron secundarias a la hepatopatía alcohólica. Se sospechó también en el efecto tóxico del alcohol o el déficit nutricional asociado (folato) como causantes del cuadro neurológico. Sin embargo, el rápido deterioro neurológico y la falta de mejoría tras administrar folato y B12, hicieron buscar otra etiología. Se descartaron infecciones y enfermedades desmielinizantes mediante serología y análisis del LCR con bandas oligoclonales. La electroneurografía confirmó la naturaleza periférica de la hipoestesia y ataxia (sensitiva). Se solicitaron anticuerpos antigangliósido, onconeuronales y anti-MAG para descartar origen autoinmune de la polineuropatía. Los onconeuronales (Hu, Yo, Ri) se detectan en neuropatías paraneoplásicas. Aunque por imagen no había neoplasias, el síndrome constitucional y el hecho de que estos anticuerpos puedan preceder en años al tumor, obligó a su determinación. Su negatividad, sin embargo, no permite excluir una neuropatía paraneoplásica porque no siempre son positivos. El hallazgo de la GMSI en el proteinograma (realizado para filiar el síndrome constitucional) y de los anti-MAG permitió establecer el diagnóstico final. No obstante, sólo la evolución podrá descartar un síndrome paraneoplásico asociado.

013

dÉficit sElEctivo dE igA En nuEstrA árEA sAnitAriA

E. García Moreno, S. Pardo Moreno, J. Porras Gracia, E. Roldán Fontana

Hospital de la Merced, Osuna

introducción: Las inmunodeficiencias se caracterizan por ser un grupo de enfermedades que provocan una disminución o falta de respuesta de uno o varios componentes del sistema inmunológico, dando lugar a infecciones repetitivas, causadas por microorganismos oportunistas; generalmente se producen en los primeros años de vida o también en la adolescencia o edad adulta. Se clasifican en primarias, secundarias o adquiridas. Las inmunodeficiencias primarias son un grupo de enfermedades congénitas causadas por alteraciones cuantitativas y/o funcionales de distintos mecanismos implicados en la respuesta inmunitaria. Se caracterizan por una mala respuesta frente a agentes infecciosos y una mayor prevalencia de manifestaciones autoinmunes, alergia y enfermedades linfoproliferativas. El déficit selectivo de IgA es la inmunodeficiencia primaria más común, generalmente es hereditaria, autosómica recesiva. Siendo su incidencia de 1/163 en España. Se define como la ausencia parcial o total de IgA en suero,

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

13

mientras que el resto de las inmunoglobulinas presentan cifras normales. Su diagnóstico suele ser de manera casual, encontrando

niveles normales de las otras inmunoglobulinas y ausentes

o muy reducidos de IgA (<7mg/dl). En el 85-90% de los

casos de déficit selectivo de IgA son asintomáticos, pero el resto puede desarrollar infecciones recurrentes del tracto respiratorio (otitis, sinusitis, bronquitis y neumonía),

gastrointestinales, alergias (asma, alergia a los alimentos)

y enfermedades autoinmunes (artritis reumatoide, LES,

púrpura trombocitopénica autoinmune y enfermedad celiaca). objetivos: Realizar un estudio retrospectivo de los valores de IgA durante el año 2014, ver la incidencia en nuestro medio y la patología más frecuente en estos pacientes. material y métodos: Las determinaciones de IgA se realizaron por nefelometría en un autoanalizador BNII de Siemens®. Se hizo una búsqueda de todas las determinaciones de IgA realizadas en el año 2014 en el Sistema de Información de Laboratorio (SIL) Omega 3000 y Omnium de Roche Diagnostic®. resultados: Durante el año 2014 se recibieron 3170 peticiones, correspondientes a 2644 pacientes, para cuantificación de IgA. Los resultados obtenidos fueron 27 pacientes con déficit de IgA, de entre los cuales: 11 eran enfermedad primaria de causa hematológica y los otros 16 correspondían a un déficit selectivo de IgA. De los 16 déficit de IgA sólo 9 fueron diagnosticados de novo y los otros 7 restantes eran pacientes control diagnosticados en años anteriores. Según esto la incidencia de déficit selectivo de IgA en nuestra área de estudio es de un 1/165 individuos. Los diagnósticos indicados en las peticiones fueron: 3 dolor abdominal, 1 catarro, 1 manchas de café con leche, 1 faringitis, 1 pancreatitis, 1 fallo de medro, 1 diarrea y 1 sospecha de intolerancia a la leche y en el resto no se indicaba el diagnóstico. Siendo los siguientes porcentajes:

patología respiratoria (12.5%), patología digestiva (31.25%), fallo de medro (6.25%) y no presentan diagnóstico en la solicitud (37.5%). conclusiones: La incidencia de déficit selectivo de IgA en nuestra área es de 1/288 individuos, similar a la incidencia en el conjunto de población española (1/163). El diagnóstico más común es la patología digestiva, seguido por la patología respiratoria, obviando la falta de diagnóstico en las peticiones.

014

dEtEcción dE AnticuErpos Anti-sintEtAsA En lA EnfErmEdAd intErsticiAl pulmonAr idiopáticA (Epi)

F. Marqués García, M.B. Aparicio Hernández, I. De Los Santos De Los Santos, J.M. González Ruíz, M.D. Ludeña Cruz, E. Marcos Vadillo, J.M. González De Buitrago Arriero

Hospital Universitario de Salamanca, Salamanca

introducción: La Enfermedad Intersticial Pulmonar Idiopática (EPI) es un grupo heterogéneo de trastornos del parénquima pulmonar de diferente etiología, pero con unos

criterios clínicos, radiológicos y patológicos bien definidos (Consenso Internacional, Am J Respir Crit Care Med, 2013). Dentro de los autoanticuerpos característicos de la miositis inflamatorias ideopáticas (MII), se encuentran los anticuerpos anti-sintetasa (AAS) (estimación del 20-30% en MII), cuya presencia define un grupo de pacientes con características clínicas similares agrupados en el síndrome anti-sintetasa (SAS). El antígeno diana de los AAS son las aminoacil-tRNA sintetasas, enzimas fundamentales para la unión de cada aminoácido a su RNA de transferencia (tRNA) correspondiente. Se han descrito 8 AAS diferentes:

anti-Jo1, anti-PL7, anti-PL12, anti-EJ, anti-OJ, anti-KS, anti- YRS y anti-Zo. La EPI representa una de las características clínicas más importantes en el SAS, así la detección de AAS en los pacientes diagnosticados de EPI (estimación del 60- 80%), podría indicar un futuro desarrollo de una enfermedad autoinmune sistémica, o bien tener un valor predictivo, pronóstico y terapéutico en los mismos. objetivo: Valorar la presencia de anticuerpos anti- sintetasa (anti-Jo-1, anti-PL7, anti-PL12, anti-EJ, anti- OJ y anti-KS) y anticuerpos asociados en pacientes diagnosticados de EPI con estudio de autoinmunidad previa no específica de enfermedad sistémica. materiales y métodos: A muestras de suero de 34 pacientes se les determinó la presencia de anticuerpos anti-miositis y anti-esclerosis mediante Inmunotransferencia (Systemic Sclerosis y Myositis Profile Euroline ® IgG, EuroImmun, Lubeck, Germany). Las muestras fueron remitidas desde la consulta de Neumología-EPID (junio de 2014 a marzo del 2015), de pacientes remitidos de forma consecutiva con diagnóstico de EPI. Se determinaron previamente TCAR (Tomografía Computerizada de Alta Resolución) torácico, bioquímica general, autoinmunidad inicial (ANA, ENA, factor reumatoide, ECA, proteinograma, ANCA, CCP, anticuerpos anti-antitiroideos). El estudio estadístico se realizó utilizando el programa SPSS v.20 (IBM). resultados: El grupo de pacientes estudiados, presentaba una mayor incidencia de EPI en los varones (22 varones versus 8 mujeres), con un rango de edades de 46 a 87 años. El 80% presentaban exposición ambiental de riesgo, tabaquismo mayoritariamente. Presentaron clínica sugestiva de enfermedad sistémica 7 pacientes (21%), con anticuerpos antinucleares (ANAs) positivos con un título superior a 1:160 (Inmunofluorescencia Indirecta), excluyéndose del estudio. Los AAS y anticuerpos asociados estaban presentes en 7 pacientes (20,5%): Anticuerpos Anti- NOR-90 (3), Anticuerpos Anti-Th/To (1), Anticuerpos Anti- PL7 (2), y Anticuerpos Anti-Mi2 (1). conclusiones: Los anticuerpos anti-sintetasa y anticuerpos asociados se detectaron en el 20,5% de pacientes con diagnóstico inicial de EPI. Esta presencia se asoció, de forma estadísticamente significativa a EPI con más de 6 meses de evolución desde el diagnóstico (17% versus 2,9%, Chi 2 = 7,2 p=0,007). Aunque la prevalencia de AAS es muy baja, podrían ser útiles en el diagnóstico en combinación con las características clínicas y patológicas de EPI. El estudio de estos pacientes tiene un carácter preliminar, por lo que se hace necesario el seguimiento de los mismos determinando estos anticuerpos de forma periódica cada 6 meses.

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

14

015

dEtErminAción dE AnticuErpos Anti- cArdiolipinA Y β 2 -glicoprotEinA i: Estudio compArAtivo EntrE EnZimoinmunoAnAli- sis (ElisA) Y fluoroEnZimoinmunoAnAlisis (EliA)

F. Marqués García, M.B. Aparicio Hernández, E. Marcos Vadillo, A.I. Martín Martín, J.M. González De Buitrago Arriero

Hospital Universitario de Salamanca, Salamanca

introducción: El síndrome antifosfolipidico se caracteriza por trombosis arteriales y venosas, y por complicaciones obstétricas. Además de los signos clínicos, este síndrome se caracteriza por la presencia persistente de los denominados anticuerpos antifosfolipidicos (consenso de Sydney, 2004). Estas autoanticuerpos también se elevan en otras situaciones clínicas como infecciones o enfermedades autoinmunes como el lupus. Estos anticuerpos son las cardiolipinas y las β 2 -glicoproteina I, además del anticoagulante lúpico. La técnica de enzimoinmunoanálisis (ELISA) ha sido la empleada para la determinación de la concentración de anticuerpos anti-cardiolipina y anti-β 2 -glicoproteina I. Esta técnica presenta importantes limitaciones, como la necesidad de añadir β 2 -glicoproteina I para realizar el ELISA de valoración de anticuerpos anti-cardiolipinas, o la influencia que puede tener el plástico de la placa sobre el ensayo para determinar anticuerpos anti- β 2 -glicoproteina I. La aplicación de los ensayos de fluoroenzimoinmunoanálisis (ELIA) ha sido una revolución en el campo de la autoinmnunidad, los cuales tratan de superar las limitaciones observadas en las técnicas de ELISA. objetivo: Estudiar el grado de correlación entre los valores de anticuerpos anti-cardiolipinas y anti-β 2 - glicoproteina I (isotipos IgG e IgM) obtenidos utilizando dos métodos analíticos. materiales y métodos: A partir de 80 muestras de suero, se determinó la concentración de anticuerpos anti- cardiolipina (GPL-U/ml, MPL-U/ml) y anti-β 2 -glicoproteina I (U/ml) (isotipo IgG e IgM), utilizando las metodologías de ELISA (Varelisa ® , Phadia-Thermo Fisher, Germany) y ELIA (Phadia-ThermoFisher, Germany) en paralelo. Las muestras se dividieron en series analíticas de 14 muestras cada una. Los estudios estadísticos se realizaron con el software MedCalc (Microsoft Partner). resultados: Los datos obtenidos para los cuatro tipo de anticuerpos en las dos plataformas analíticas, no seguían una distribución normal (p<0,0001, Kolmogarov-Smirnov). Los grupos de datos se compararon realizando una regresión de Passing-Bablok. Las rectas de regresión obtenidas fueron, anti-cardiolipina IgG: ELISA (mediana=4,69) versus ELIA (mediana=1,7) y=0,306+0,280x (pendiente CI 95% 0,1845- 0,5907, ordenada CI 95% -0,8098-0,7174); anti-cardiolipina IgM: ELISA (mediana=9,31) versus ELIA (mediana=5,5) y=- 3,56+1,227x (pendiente CI 95% 0,7867-2,5631, ordenada CI 95% -12,0156-(-0,3121)); anti-β 2 -glicoproteina I IgG: ELISA (mediana=3,77) versus ELIA (mediana=1,1) y=0,311+0,277x (pendiente CI 95% 0,1414-0,5789, ordenada CI 95% -0,2387- 0,7190); anti-β 2 -glicoproteina I IgM: ELISA (mediana=2,699) versus ELIA (mediana=0,9) y=0,047+0,684x (pendiente CI 95% 0,1066-0,8517, ordenada CI 95% -0,3861-0,7803).

conclusiones: Los métodos ELISA y ELIA no son comparables entre sí, observándose una sobreestimación de los resultados en la determinación de anticuerpos

antifosfolipídicos por parte del método ELISA. La mayor precisión del método ELIA disminuye el número de falsos positivos obtenidos, facilitando la utilidad de estos datos en

la interpretación clínica. Además, el método ELIA posee una

mayor estabilidad que el método ELISA, con una velocidad

de procesamiento también mayor.

016

diAgnóstico AtrAvÉs dE tEst ActivAción dE BAsófilos dE AlErgiA A toXoidE tEtánico En pAciEntE con shocK AnAfiláctico

B. González Herreros, E. Fernández Grande, A.U. Muñoz Colmenero, R. Melero, J.M. Urra, Y. Méndez, V. Morales

Elipe

Hospital General, Ciudad Real

introducción: El test de activación de basófilos permite el diagnóstico de la hipersensibilidad de tipo inmediato (reacciones de tipo 1, en las que participan los anticuerpos

IgE) y acelerado (reacciones de tipo 2), especialmente en repuesta de tipo retardada con participación de otros tipos de células (como las reacciones de tipo 4). Los anticuerpos IgE específicos de antígeno se unen a los receptores Fc de los mastocitos tisulares y basófilos. La unión de los alérgenos

a la IgE en la superficie celular induce la activación de los basófilos, provocando la fusión de gránulos citoplásmicos con la membrana plasmática y liberando los mediadores inflamatorios. Las células se analizan mediante citometría de flujo utilizando luz de excitación azul-verde (488nm). caso clínico: Hombre de 80 años que tras herida con arma blanca se le administró Naproxeno un comprimido vía oral, toxoide tetánico IM y Augmentine 2g intravenoso.

Inmediatamente inició con visión borrosa, rash generalizado

y parada cardiorrespiratoria. Precisó intubación e ingresó en

UCI. Antecedentes personales: Hipertensión, dislipemia, obesidad, bronquitis crónica. Fue diagnosticado de shock anafiláctico tipo 4 con posible relación con beta-lactámicos, toxoide tetánico y naproxeno. Se descartó intolerancia aines. Se prohibió rigurosamente la administración de beta-lactámicos por ser el causante más probable de la reacción, Se procedió al estudio de alergias una vez fue dado de alta. Se realizó estudio a beta-lactámicos. Pruebas cutáneas en prick negativas. Tras obtener estos resultados se extrajo nuevas muestras al paciente y se realizó un estudio in-vitro realizando test de activación de basófilos tanto como para amoxicilina como para el toxoide tetánico como para el naproxeno. Los resultados obtenidos fueron negativo para naproxeno, negativo para amoxicilina y positivo para toxoide tetánico. Se decidió realizar la determinación de IgE específica para amoxicilina, penicilina V y G y para toxoide tetánico siendo negativas para todos los beta-lactámicos y positiva para el toxoide (1,45 UI/mL), con una IgE total de 683 UI/mL y una

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

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triptasa de 2,3 UI/mL. Con estos resultados se diagnosticó al paciente de alérgico a toxina tetánica. método: El test de activación de basófilos se realiza con muestra des angre heparinizada. Tras la activación de basófilos La muestra es incubada con el anticuerpo monoclonal anti-CD63-FITC se conjuga con isotiocianato de fluoresceína y reconoce la glicoproteína gp53 (CD 63) expresada en los basófilos activados. La muestra se analiza

a través de un citómetro. La prueba consiste en en un flujo

laminar en suspensión de partículas que circula por delante de un haz de láser focalizado. El impacto de cada célula produce señales (de dispersión y fluorescencia) que se detectan y pueden cuantificarse. conclusiones: El laboratorio de alergias desempeñó un papel importante en el diagnóstico de este paciente ya que como primera sospecha diagnóstica se consideró la amoxicilina como causante del shock, dada su alta incidencia. Al realizar toda la batería de pruebas se concluyó que la causa de la reacción alérgica fue el toxoide tetánico, alérgeno poco frecuente.

017

diAgnóstico difErEnciAl EntrE sArcoido- sis Y AlvEolitis AlÉrgicA EXtrÍnsEcA A trAvÉs dE lA citomEtrÍA dE fluJo

I. Rodríguez Martín, M.D.G. Ávila García, A. Pérez Pérez, J.M. Maesa Márquez, J.F. Tejón Blanco, P. Menéndez Valladares, E. Melguizo Madrid, V. Sánchez Margalet

Hospital Universitario Virgen de la Macarena, Sevilla

introducción: El diagnóstico de enfermedades granulomatosas intersticiales supone a menudo todo un desafío. Entre estas patologías encontramos la sarcoidosis

y la alveolitis alérgica extrínseca (AAE). Ambas comparten múltiples características. En primer lugar, se caracterizan por la presencia de granulomas no caseificantes. Estos granulomas se forman debidos a una respuesta inmune persistente, frente a antígenos que actúan de forma continuada. En el caso de la sarcoidosis esta respuesta es llevada a cabo fundamentalmente por linfocitos T CD4+ y en el caso de la AAE por linfocitos T CD8+. Por otro lado, comparten un carácter multisistémico, afectando a ojos, piel, sistema linfático y pulmones sobre todo. En tercer lugar, presentan una clínica respiratoria inespecífica y común. Por todo lo expuesto, son difícilmente diferenciables por la clínica o radiología, pero fácilmente diferenciables a través del estudio del lavado broncoalveolar (BAL). objetivos: En muchas ocasiones BAL define patrones típicos de cada enfermedad y presenta un alto poder diagnóstico. El objetivo será realizar un estudio observacional retrospectivo, que persigue demostrar que el análisis citológico de BAL permite discriminar entre ambas patologías. materiales y métodos: Se incluyen 21 pacientes (n=21), diagnosticados de sarcoidosis (n=16) o de alveolitis alérgica extrínseca (n= 5) entre los años 2011-2014, a los que se

les realizó un BAL como parte de su diagnóstico. Además,

conjuntamente, se tomó una muestra de sangre periférica de cada paciente con el fin de realizar un estudio comparativo entre ambas muestras. Las dos muestras, previa preparación

y marcado con la mezcla de 6 monoclonales de Becton

Dickinson (Ref. 337166), fueron adquiridas en el citómetro de flujo para el estudio inmunológico. Éste incluyó el recuento de polimorfonucleares y linfocitos (T, B y NK; así como subpoblaciones CD4+ y CD8+). resultados: Los resultados obtenidos en BAL para pacientes diagnosticados con sarcoidosis (n= 16) fueron:

60.94 % (± 20.20) linfocitos, 8.94% (±19.00) monocitos y 30.12% (±16.19) polimorfonucleares. En relación al cociente de subpoblaciones linfocitarias CD4+/CD8+, podemos afirmar que existió un claro aumento de dicho cociente en BAL con respecto a sangre. La media del cociente CD4+/ CD8+ en sangre fue 1.09 (±0.59), mientras que en BAL fue 5.35 (±3.75). El 68.8% de los pacientes mostraron un cociente CD4+/CD8+ superior a 3.5. Los resultados obtenidos en BAL para pacientes diagnosticados con AAE (n= 5) fueron: 63.33% (±10.40) linfocitos, 5.00 (± 0.00) monocitos, 31.67 (±10.40) polimorfonucleares. Además el cociente en estos pacientes estaba notablemente disminuido en BAL con respecto a los valores en sangre: la media del cociente CD4+/CD8+ en sangre fue de 2.07 (±1.47), mientras que en BAL toma valores de 0.2 (± 0.119). En ambas patologías puede observarse un claro predominio linfocitario, pero presentan como diferencia más significativa el aumento de CD4+ (sarcoidosis) o de CD8+ (AAE). conclusiones: El estudio inmunológico de BAL en estos

pacientes es especialmente útil. Distinguir entre sarcoidosis

y AAE no siempre es tarea fácil a través de la clínica o

radiología, pero parecen fácilmente diferenciables a través

del estudio celular de BAL.

018

ElEvAción dEl mArcAdor tumorAl cA 15-3:

A propósito dE un cAso

M.V. Sanhermelando Rossi (1) , J.M. Vaquer Santamaría (2) , P. Laporta Martín (2) , A. Carratalá Calvo (2)

(1) Hospital

Universitario, Valencia

9

de

Octubre,

Valencia;

(2) Hospital

Clínico

introducción: Los resultados inesperados generan nuevos análisis con aumento del gasto y demora en el diagnóstico definitivo. En el caso de los marcadores tumorales, se solicitan nuevas exploraciones al paciente que, en muchos casos, son molestas, agresivas y causa de ansiedad. Exposición del caso: Mujer de 69 años, que presenta un CA 15-3 elevado (84 UI/mL, valor normal de referencia <30 UI/mL) y las pruebas radiológicas y ecografía normales, pendiente de interconsulta con la Unidad de Cirugía Mamaria. En la anamnesis se identifica un episodio de anemia grave hace 20 años que requirió transfusión y de la que no se llegó a identificar la causa. Ante este resultado inesperado, se descartó la existencia

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

16

de una interferencia analítica mediante el protocolo para inmunoensayos: analizando la muestra mediante otro método analítico (anticuerpos diferentes), bloqueando los posibles anticuerpos heterófilos y procesando diluciones seriadas del suero. Revisando en la bibliografía causas de interferencias analíticas o de aumento del marcador CA 15-3 en ausencia de neoplasia encontramos: insuficiencia renal, hepatopatía, trastornos gastrointestinales, enfermedades autoinmunes, déficit de vitamina B 12 (vit B 12 ), endometriosis y enfermedades dérmicas. La presencia de anemia con un VCM de 119 fL aconsejó la determinación de vitB 12 resultando de una concentración de 65 pg/mL (inferior a los valores de referencia (197-866 pg/mL)) y muy disminuida, TSH normal, anticuerpos anti- factor intrínseco y anti-células parietales positivas. Ante estos hallazgos se trató con vit B 12 parenteral normalizando las cifras tanto de vit B 12 como de CA15-3. No hubo necesidad de más exploraciones y se anuló la interconsulta con la Unidad de Cirugía de Mama. discusión: Es importante conocer los mecanismos por los que se producen los marcadores tumorales. El origen del aumento del CA 15-3 en pacientes no tratados de anemia perniciosa, parece estar relacionado con la liberación por eritroblastos apoptóticos de la médula ósea. Identificar estos resultados como no relacionados con neoplasia es importante para evitar pruebas y exploraciones que, además de encarecer el diagnóstico, causan gran ansiedad e incomodidad al paciente. En nuestro caso, la clave del diagnóstico fue un VCM de 119 fL y el antecedente de anemia grave con transfusión. La confirmación fue la baja concentración de vit B 12 que presentaba la paciente. El tratamiento con vit B 12 normalizó su anemia y los niveles elevados del CA 15-3.

019

EnfErmEdAd miXtA dE tEJido conEctivo: A propósito dE un cAso

M.L. Giménez Alarcón, A. Peña Cabia, A. Gómez Pérez, S. Serrano Martínez, A. Cerezo Arilo, R. Franquelo Gutiérrez

Hospital General Virgen de la Luz, Cuenca

introducción: La Enfermedad Mixta del Tejido Conectivo (EMTC) es una enfermedad sistémica autoinmune de difícil diagnóstico, que se caracteriza por un solapamiento de rasgos clínicos de lupus eritematoso sistémico, esclerosis sistémica, polimiositis y presencia de títulos elevados de anticuerpos anti-U1-ribonucleoproteína (U1-RNP). Afecta sobre todo a mujeres, generalmente entre la segunda y cuarta década de vida, siendo muy poco habitual en la infancia pero de especial importancia reconocerlo y diagnosticarlo para mejorar el pronóstico de estos pacientes. Exposición del caso: Paciente de sexo femenino de 14 años de edad diagnosticada de artritis de metacarpofalángicas (MCFs) e interfalángicas proximales (IFPs), bilateral y enfermedad de Raynaud. Desde el inicio sin tratamiento. Es derivada desde Atención Primaria a la Unidad de Reumatología por presentar tumefacción de manos, debilidad muscular, sin fiebre, y analítica reciente

con aumento de transaminasas (ALT y AST) y Factor reumatoide positivo. No presenta disnea, ni síntomas de reflujo gastroesofágico, no se observan ulceras orales ni rash malar, tampoco adenopatías laterocervicales. Refiere dolor a la presión en MCFs e IFPs de ambas manos así como en carpos pero no presenta limitación de grandes articulaciones. Por la sospecha de patología autoinmune se solicita nueva analítica con determinación de autoanticuerpos. Los resultados más significativos fueron:

Anemia microcítica hipocrómica; hemoglobina 10.4 g/dL (13-16.5), VCM 64 fl, ferritina sérica 178 ng/mL (15-120). AST 110 U/L (2-31) y ALT 81 U/L (2-31). CPK 1108 U/L (20-123) y LDH 695 U/L (240-480). Factor reumatoide 122 UI/mL (0-14). Serología Virus de hepatitis C negativo. Bioquímica de orina normal. ANA: Positivos > 1/1280, patrón moteado. ENAs: anti-U1-RNP positivos, resto negativos. Anticuerpos anti-DNA negativos. Anticuerpos antimitocondriales negativos. Anticuerpos antifosfolípidos negativos. El diagnóstico se hace basándonos en los criterios diagnósticos definidos por Alarcón-segovia para Emtc

(1989):

1. criterio serológico: Anticuerpos anti U1-RNP positivo a título elevado. 2. criterios clínicos: Edema de manos, Sinovitis, Miositis, Fenómeno de Raynaud, Acroesclerosis. requerimientos: Criterio Serológico más 3 caracte- rísticas clínicas. La asociación de edema de manos, fenó- meno de Raynaud y acroesclerosis requiere al menos otra característica más. Se sugiere como diagnóstico definitivo Enfermedad mixta de tejido conectivo. Se pautó Prednisolona y Metotrexato. discusión: Como en todas las entidades con alteraciones multisistémicas autoinmunes, es difícil dilucidar si se trata de una patología en concreto o un síndrome de solapamiento de enfermedades del tejido conectivo, ya que las manifestaciones clínicas iniciales de EMTC suelen ser inespecíficas. En el caso que nos ocupa, la presencia de ANA positivos a título superior a 1/1280, con Ac. Anti-RNP positivos, con anti-DNA negativos, en el contexto clínico de miositis (elevación enzimas musculares AST, CPK, LDH), edema de manos, fenómeno de Raynaud y sinovitis (inflamación interfalángicas), cumplía los criterios definidos por Alarcón-Segovia de EMTC. La EMTC es muy infrecuente en la infancia, siendo en estos casos especialmente grave. El pediatra de Atención Primaria, y desde el Laboratorio, se deben reconocer estas enfermedades, y sus recaídas, y derivar a los pacientes a unidades especializadas de forma precoz, para iniciar el tratamiento adecuado que permita controlarlas y así mejorar el pronóstico a largo plazo.

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

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020

Estudio dEscriptivo dE EnfErmEdAd cElÍAcA diAgnosticAdA dE novo mEdiAntE AnticuErpos Anti-trAnsglutAminAsA igA

M. Mayor Reyes (1) , I. Castro Vega (1) , A. Serrano Garballo (1) , G.M. Varo Sánchez (2)

(1) Hospital Universitario Regional y Virgen de la Victoria, Málaga; (2) Hospital General Universitario de Albacete, Albacete

introducción: La enfermedad celíaca (EC), enteropatía sensible al gluten, es una enfermedad crónica autoinmune mediada por linfocitos T y causada por la ingestión de cereales con gluten (trigo, centeno y cebada), en individuos genéticamente susceptibles. La patogenia es el resultado de la interacción entre factores genéticos, inmunológicos y ambientales, existiendo marcadores genéticos específicos como HLA-DQ2 (90%) y HLA-DQ8 (6%). Induce una característica, aunque no específica, lesión de la mucosa del intestino delgado, atrofia vellositaria, malabsorción y síntomas clínicos, tanto con manifestaciones intestinales como extraintestinales. El tratamiento es fundamental y exclusivamente dietético, mediante una dieta sin gluten (DSG) y con pronta mejoría tras el cumplimiento estricto de

la

misma. La EC ha sido reconocida tradicionalmente en niños

y

adultos jóvenes, sin embargo, en los últimos años, la

detección en la población adulta ha aumentado. En la actualidad, la EC es un proceso frecuente, de distribución mundial, que afecta a todo tipo de razas, puede aparecer a

cualquier edad de la vida, tanto en niños como adolescentes, siendo relativamente frecuente en el adulto y cada vez se diagnostica más, incluso en los ancianos (hasta un 20% de los adultos son diagnosticados con más de 60 años). Todo ello es debido al aumento de la sospecha clínica por

la diversidad de las manifestaciones de la EC, junto con

el advenimiento de nuevos tests serológicos altamente sensibles y específicos, (endomisio y la determinación de anticuerpos transglutaminasa tisular), lo que han permitido una mayor facilidad en el diagnóstico y el aumento de la prevalencia. objetivo: Evaluar el número de determinaciones positivas de novo para anticuerpos antiendomisio, previo cribado a través de la determinación de anti-transglutaminasa IgA, y su estudio descriptivo,del total de muestras recibidas para el estudio de celiaquía desde Enero 2014 a Enero 2015 material y métodos: Determinación de anticuerpos antiTransglutaminasa (anti-tTG) de isotipo IgA en suero humano (Phadia® (Thermo fisher)). La confirmación de las muestras anti-tTG positivas se realizó mediante ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la detección de anticuerpos anti-endomisio (EMA) (Menarini®) en suero humano, de clase IgA y clase IgG en pacientes con deficiencia de IgA. M.Excel 2007. resultados: Del total de AAtTG solicitadas (n=8407), n=147 poseían valores de novo positivos (elevación 10 veces mayor al limite superior del valor normal) (10 U/mL) y

sospecha clínica de EC, posteriormente se realizó IFI para la determinación de EMA para confirmación,obteniendo como resultados:

1. Patrón EMA positivo: n=132 (89,79% del total de AAtTG positivos de novo);distribuyéndose: AAtTG clase IgA n=125; AAtTG clase IgG n=7. 2. Distribución por sexo: 63.94% mujeres (n=94); 36.05% hombres (n=53). Comprendidos entre 1 y 85 años. 3. Distribución por grupos de edad: a) <14 años: n=44 (29.93%); b) entre 14-60 años: n=92 (62.58%); c) >60 años: n=11 (7.48 %). conclusión: Nuestros resultados son avalados por la bibliografía existente, donde se describe a la EC como un proceso frecuente que puede aparecer en cualquier etapa de la vida y con un mayor número de casos diagnosticados en adultos, incluso en mayores de 60 años.

021

Evolución dE los mArcAdorEs sEroló- gicos Y BioQuÍmicos En un pAciEntE diAg-

nosticAdo dE EnfErmEdAd cEliAcA trAs implAntAción dE lA diEtA sin glutEn

A. López Gutiérrez, Y. Pastor Murcia, D. López Solé,

L.

Sahuquillo Frías, D. Balsells Roselló, E. Moreno Noguera,

L.

Juan Serra, R. Fernández Gallardo

Hospital Can Misses, Eivissa

introducción: La Enfermedad Celíaca (EC) es un trastorno sistémico mediado por el sistema inmunitario, provocado por el gluten y prolaminas relacionadas en individuos genéticamente susceptibles y caracterizado por la presencia de una combinación variable de manifestaciones clínicas dependientes del gluten, anticuerpos específicos de la EC (anticuerpos anti-transglutaminasa IgA (Ac antitTG IgA), anticuerpos anti-endomisio (EMA)), haplotipos HLA DQ2 o DQ8 y enteropatía. El diagnóstico de la EC se basa en la valoración conjunta de los síntomas clínicos, los datos genéticos, las determinaciones serológicas, los hallazgos de la biopsia intestinal así como a la respuesta de la DSG. Las nuevas guías clínicas de la European Society of Paediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition (ESPGHAN 2012) para el diagnóstico de la EC, establecen algunas modificaciones respecto a los criterios diagnósticos y manejo de los marcadores serológicos con el objetivo de lograr una mayor precisión diagnóstica. Se presenta un caso clínico desde su diagnóstico, seguimiento y control de una DSG. material y métodos: Se determinó el HLA por el método SLC (Sysmex XE-2100); el ácido fólico y la vit B12 mediante electroquimioluminiscencia (Modular E-170 de Roche); el hierro por turbidimetría; la ferritina, transferrina y la IgA por inmunoturbidimetría (Olympus 5420 Beckman Coulter); los Ac anti-tTG IgA por fluoroenzimoinmunoensayo (FEIA tipo sándwich ImmunoCap250 de Thermo Scientific) y los EMA mediante IFI. Biopsia de la segunda porción duodenal mediante endoscopia remitida a anatomía patológica teñida mediante tinción hematoxilina-eosina. resultados:

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

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prE-

diAgnóstico

post-

post-

diAgnóstico

diAgnóstico diAgnóstico

 

6meses

12 meses

hemoglobina 12.7 g/dL

12.6 g/dL

13.7 g/dl

14.1 g/dl

hierro

36 µg/dL

14 µg/dL

62 µg/dl

83 µg/dl

transferrina

340 mg/dL

370 mg/dL

301 mg/dl

ferritina

<8 ng/mL

<8 ng/mL

36 ng/dl

77 ng/dl

ác. fólico

2 ng/mL

11.56 ng/mL

4.55 ng/ml

vit B12

315.6 pg/mL

471.1 pg/mL

igA

149 mg/dL

166 mg/dl

155 mg/dl

Ac antittg igA

500 AU/mL

20.15 Au/ml

<7 Au/ml

EmA

POSITIVO

positivo

tipaje hlA

hlA dQB1 * 02:01 asociado a susceptibilidad genética

 

conclusiones: Según las guías de práctica clínica de ESPGHAN 2012 los valores de Ac anti-tTG IgA >100 AU/mL,

son capaces de predecir la presencia de atrofia vellositaria con suficiente fiabilidad, haciendo innecesaria la realización

de una endoscopia duodenal. Se realizó la biopsia intestinal

que confirmó el diagnóstico de EC presentando un nivel de atrofia vellositaria Marsh3c, donde si se hubieran seguido

las recomendaciones de las nuevas guías, ésta no hubiese

sido necesaria por el valor tan elevado de los Ac anti-tTG

IgA (500 AU/mL).Tras el diagnóstico se instauró una DSG.

A los 6 meses ya se observó una mejora en los niveles de

Hbb, hierro y ferritina, y una disminución de los Ac anti-tTG IgA, aunque no se llegaron a negativizar los EMA, indicando

todavía lesión vellositaria. Al año se negativizaron los Ac anti- tTG IgA. La clínica abdominal y extraabdominal mejoraron aumentando su calidad de vida. Cabe destacar la dificultad

a la hora de valorar la sintomatología extraintestinal de esta enfermedad, ya que puede presentar múltiples variables haciendo más difícil una temprana sospecha clínica, diagnóstico y por lo tanto instauración de DSG.

022

frEcuEnciA dE AutoAnticuErpos Anti- rods & rings En pAciEntEs con vhc

D. Sáenz (1) , L. Bermúdez De Castro (1) , L. Rapún (1) , S. Orient (2) , C. Vilaplana (2) , V. Mas (2)

(1) Hospital del Mar, Barcelona; (2) Laboratorio de Referencia de Cataluña

introducción: La infección crónica por el virus de

la hepatitis C así como el tratamiento concomitante

(interferón y ribavirina) están asociados frecuentemente

a patologías autoinmunes. Los autoanticuerpos anti-

Rods and Rings (RR) han sido descritos en los últimos años, generalmente asociados a este tipo de pacientes.

El patrón observado mediante inmunofluorescencia indirecta es especialmente característico, observándose unas estructuras citoplasmáticas en forma de bastones

y anillos. Recientemente se ha identificado a las enzimas

citidina trifosfato sintetasa (CTPS) e inosina monofosfato deshidrogenasa (IMPDH), implicadas en el metabolismo nucleotídico, como componentes de estas estructuras.

El significado de estos anticuerpos es incierto, aunque se ha relacionado su presencia con una mala respuesta al tratamiento con interferón. Es destacable que estos autoanticuerpos solo se detectan en portaobjetos con células Hep2 de algunas casas comerciales, y su descripción es relativamente reciente. Es por ello que estos anticuerpos aún no se informan en nuestro laboratorio. En este trabajo hemos estudiado la incidencia de estos autoanticuerpos en las muestras de nuestro laboratorio durante un periodo de 6 meses, como paso previo para introducir su informe en la rutina. material y métodos: La determinación de anticuerpos anti-nucleares (ANA) se realizó incubando suero de pacientes con células Hep2 en portas NOVA Lite® HEp- 2 ANA (Inova Diagnostics), mediante una dilución inicial 1/40. El procedimiento se realizó de forma automatizada en un aparato QUANTA-Lyser (Inova Diagnostics), y la observación de los portas fue realizada de forma rutinaria por un observador o dos en aquellos casos dudosos de difícil interpretación. Se analizaron retrospectivamente todos los resultados de ANA durante el periodo junio 2014-febrero 2015 para estudiar la incidencia de anticuerpos anti-RR en nuestros pacientes. resultados: Durante el citado periodo se realizaron en nuestro laboratorio 12090 determinaciones de ANA, siendo 4377 (36%) de las determinaciones positivas (de las cuáles:

patrón moteado: 32%, patrón homogéneo: 31%; nucleolar:

7%; otros patrones: 30%). Se detectó un patrón RR en 49 muestras (1%), correspondientes a 38 pacientes, 13 de los cuáles correspondían a nuestro hospital de referencia. 2 de los pacientes presentaban un patrón ANA asociado, y otros 2 otro tipo de autoanticuerpos; el resto mostraron únicamente patrón RR. La mayoría de pacientes (10/13) eran pacientes del Servicio de Medicina Digestiva con VHC, no respondedores al tratamiento con interferón/rivabirina; un paciente procedía del Servicio de Neurología y dos de Reumatología, uno de ellos también VHC. conclusiones: El patrón RR tiene una baja incidencia en la población general, pero parece estar relacionado con la infección por VHC o el tratamiento anti-retroviral, y en nuestros pacientes se observa la misma tendencia, especialmente asociado a pacientes VHC no respondedores. Serán necesarios estudios prospectivos para determinar si la presencia o el título de estos anticuerpos se relacionan con una mejor o peor respuesta al tratamiento y, por ello, puede ser de utilidad clínica en un futuro.

023

grAnulomAtosis con poliAngEÍtis Aso- ciAdA A fEnómEno dE rAYnAud E isQuEmiA digitAl

E. Ocaña Pérez, M.J. Carrero Lérida, M.I. Aceituno Azaustre

Complejo Hospitalario de Jaén

introducción: La granulomatosis con poliangeítis (Granulomatosis de Wegener) es una vasculitis de vaso pequeño (VVP) poco frecuente asociada a anticuerpos anti citoplasma de neutrófilo (ANCA). Son enfermedades

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

19

multisistémicas que pueden presentarse de forma muy variada, siendo su diagnóstico un reto para los profesionales, ya que comparten características epidemiológicas, clínicas e histopatológicas con otras vasculitis. Exposición del caso: Varón de 41 años que ingresó en el Servicio de Medicina Interna por cuadro sistémico de varios meses de evolución con astenia, mialgias, artralgias, fenómeno de Raynaud y fiebre. A los tres días del ingreso aparecen de forma progresiva lesiones purpúricas en región pretibial y pies, edemas a nivel de miembros inferiores, dedos de manos y pies violáceos y fríos, con parestesias, dolor muy intenso en segundo dedo de mano derecha y de tercero de pie izquierdo, con aparición de isquemia digital en ambos. Aparece saliva manchada de sangre, sin clara hemoptisis ni disnea. En analítica se detectó anemia en rango transfusional, desarrollando durante el ingreso una insuficiencia renal progresiva con proteinuria en rango nefrótico. Estudio analítico: Al ingreso presentaba hematocrito 40,6%, Hemoglobina 13,4 gr/dl, proteínas 5,8 gr/dl Urea 58 mg/dl y Creatinina 1,20 mg/dl., deteriorando posteriormente hasta creatinina 3,6 mg/dL, hemoglobina 7,5 gr/dl y hematocrito 22,1%. Orina: Proteinuria 3566 mg/24h. Serología VIH, VHB y VHC negativo. ANA negativo. Ausencia de crioglobulina. ANCA positivo (ANCA-PR3, 78 U/ml). Ac anti membrana basal glomerular negativos. pruebas de imagen: TAC torácico en las que aparece infiltrado alveolar en pulmón derecho e imagen compatible con hemorragia pulmonar. Estudios histopatológicos: Biopsia lesiones purpúricas compatible con vasculitis leucocitoclástica con intenso componente eosinofílico. Biopsia renal compatible con glomerulonefritis pauicinmune asociada ANCA con semilunas epiteliales en un total de 22 de 34 glomérulos (64%, incluyendo el estudio de inmunofluorescencia) con signos de vasculitis activa y cambios degenerativos tubulares marcados, sin áreas de fibrosis tratamiento y evolución: Se inicia tratamiento de inducción con Ciclofosfamida IV y bolos de 1 g de metilprednisolona y plasmáferesis. Con el Raynaud tan severo y la aparición de isquemia se inicia tratamiento con antiagregantes plaquetario y prostaglandinas IV. En el momento del alta presentaba estabilización de la función renal y descenso de los niveles de anticuerpos anti- Pr3 (12 U/ml). discusión: Presentamos un caso de granulomatosis con poliangeitis en el que además de la afectación renal, pulmonar y de vías respiratorias altas, típicas de esta patología presentó lesiones purpúricas y un intenso fenómeno de Raynaud, con isquemia digital, siendo un hallazgo poco habitual en las vasculitis de vaso pequeño. La positividad de ANCA con presencia de anticuerpos anti- Pr3, en este caso, fueron determinantes en el diagnóstico final de la enfermedad. Dada la agresividad del cuadro, con afectación renal, pulmonar, nasal y cutánea consideramos que la positividad de estos parámetros permitió la instauración precoz del tratamiento con inmunosupresores. En base a ello la determinación de estos anticuerpos, supone una herramienta muy útil que debe ser valorada en todos los pacientes con afectaciones sistémicas poco definidas para descartar la presencia de VVP.

024

ig-A-AntitrAnsglutAminAsA como mArcA- dor sErológico único En El scrEEning dE lA EnfErmEdAd cElÍAcA En pAciEntEs pEdiátricos

L. Del Gigia Aguirre, S. García Muñoz, J. Sánchez Gómez, F. García Caballero, F.J. Muñoz Vico, T. Fernández Sanfrancisco

Hospital Torrecárdenas, Almería

introducción: La enfermedad celiaca (EC) es un trastorno sistémico autoinmune debido a la ingesta de gluten y otras prolaminas relacionadas, en pacientes genéticamente predispuestos, caracterizado por manifestaciones clínicas gluten-dependientes, anticuerpos específicos, haplotipo HLA DQ2 y/o DQ8 y enteropatía. En enero de 2012, la European Society for Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition (ESPGHAN) publicó su guía para el diagnóstico de la EC, incluyendo como nueva propuesta:

• Niños y adolescentes con síntomas sugestivos de EC, dieta con gluten y valores de antitransglutaminasa ( t-TG2) IgA > 10 veces VR, deben ser confirmados mediante la determinación de antiendomisio (EMA)- IgA. Es aconsejable realizar estudio genético de EC con el fin de reforzar el diagnóstico y evitar la realización de biopsia intestinal.

• Valores de t-TG2 IgA moderadamente elevados (<10 veces VR), se confirmarán mediante EMA-Ig A.

• Resultados negativos de ATGt no se recomiendan pruebas adicionales para estudio de EC. Actualmente en nuestro laboratorio de inmunología se procede a la determinación de ambos anticuerpos en pacientes pediátricos, mientras que en adultos se realiza solo la t-TG2 IgA. objetivos: Determinar la fiabiidad de la t-TG2 IgA en el screening EC en pacientes pediátricos, como marcador serológico único e inicial, con el fin de conseguir una reducción de costes de laboratorio así como ahorro de tiempo por parte del profesional. materiales y métodos: Se estudiaron las muestras recibidas en el laboratorio de inmunología de nuestro centro procedentes de pediatría desde octubre 2014-abril 2015. La metodología utilizada para t-TG2 IgA fue quimioluminiscencia y para EMA-IgA inmunofluorescencia indirecta mediante el uso de portas fijados con esófago de mono en dispositivos Zenit ra y Zenit UP de A.Menarini diagnostics® respectivamente. Los VR fueron para AAE < ¼ y para la ATGt 0.00-

10.00UA/ml.

Comparamos la concordancia entre ambos marcadores (t-TG2/EMA) asumiendo que una relación del 95% permitirá establecer el objetivo propuesto. resultados: Se recibieron 155 muestras, 90 mujeres (58,1%) y 65 hombres(41,9%) de edades comprendidas entre 1 y 14 años. 112 muestras (72,2%) fueron negativas y 43 positivas (27,8%) para t-TG2 IgA. De las 112 negativas, 110 (98,2%) también lo fueron para EMA-IgA mientras que 2 (1,8%) positivos.

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

20

De las 43 positivas, 38 (88,4%) también lo fueron para EMA-IgA y 5 (11,6%) fueron negativas. En estas 5 los valores de t-TG2 IgA fueron moderadamente positivos recomendándose una repetición del estudio serológico a los 3-6 meses. Se observó concordancia en 148 pacientes (95,5%) y discordancia en 7 (4,5%) los cuales suponen del total de nuestra muestra un 1,3% para t-TG2-/EMA+ y un 3,2%para

t-TG2+/EMA-.

conclusiones: La concordancia obtenida (95,5%) permite definir t-TG2 IgA como marcador serológico único e inicial en el diagnóstico EC en pacientes pediátricos, como indican las nuevas recomendaciones de ESPGHAN 2012. Además la discordancia obtenida a favor de la t-TG2 pone de manifiesto el mayor valor clínico en el cribado de esta determinación siendo muy bajo el porcentaje de falsos negativos detectados. Bibliografía:

1. (ESPGHAN. J. Pediatr Gastroenterol Nutr. 2012 Jan;54 (1):136-60 ).

025

lupus nEonAtAl. A propósito dE un cAso

discusión: El LN es un ejemplo de autoinmunidad pasiva adquirida, ya que los anticuerpos formados de la madre, pasan íntegros a través de la barrera placentaria al feto. Las afectaciones cutáneas son las más frecuentes, de aparición

a los días o semanas tras el nacimiento y coincidente con

una exposición a la luz solar. Ante una sintomatología tan

inespecífica y tratarse de una enfermedad autoinmune, destacamos el papel del laboratorio como clave para el diagnóstico final de la enfermedad. Aunque la afectación principal sea la cutánea y ésta sea benigna puesto que resuelve espontáneamente, hay que tenerla muy en cuenta para futuras gestaciones ya que se ha considerado como factor de riesgo de la afectación cardíaca en el feto.

026

pAncrEAtitis AutoinmunE Y EnfErmEdAd rElAcionAdA con igg4 (Er-igg4)

I. Castro Vega, M. Mayor Reyes, A. Serrano Garballo, J.R. Ramos González, A. Enguix Armada

Hospital Universitario Regional y Virgen de la Victoria, Málaga

A. Hernando, I. Gutiérrez, F. Bermejo, E. Martín, L. Martínez

 

introducción: La ER-IgG4 es un trastorno

Hospital Universitario Santa Lucía, Murcia

potencialmente multiorgánico que se caracteriza por un infiltrado linfoplasmocitario rico en células plasmáticas

introducción: El lupus neonatal (LN) es una enfermedad autoinmune que ocurre con una incidencia de 1 de cada 20000 nacidos vivos y se produce por consecuencia del

IgG4+, asociado a fibroesclerosis, flebitis obliterativa, y por lo general niveles séricos elevados de IgG4. Pueden comprometerse uno o más órganos siendo la pancreatitis autoinmune (PAI) el prototipo de ER-IgG4. Se estima que

paso de auto anticuerpos anti Ro/SSA y anti La/SSB a través

representa el 2% de casos de pancreatitis crónica.

de

la barrera placentaria, en hijos de madres portadoras.

Exposición del caso: Varón de 66 años, remitido a

La

mayoría de sus manifestaciones son reversibles en los

urgencias por cuadro de ictericia cutáneo mucosa coluria

primeros 6 a 8 meses de vida en función de la vida media

y

acolia de 48 horas de evolución sin dolor abdominal.

de las inmunoglobulinas transferidas. Las manifestaciones

clínicas más frecuentes son las cutáneas tras la exposición

al sol, incluyendo rash, máculas eritematosas, pápulas o

placas; Otras manifestaciones menos frecuentes son las hematológicas o los trastornos hepáticos (enfermedad hepatobiliar) con elevación de enzimas hepáticas y la

colestasis. La forma más temida del lupus neonatal es la cardíaca, con bloqueos congénitos de primer, segundo

y tercer grado, miocarditis, pericarditis o anomalías

estructurales. La variante de afección más grave es el bloqueo atrioventricular congénito completo (BAVCC). Exposición del caso: Dos gemelas lactantes de 72 días de vida acuden al servicio de urgencias por presentar lesiones cutáneas faciales, supraciliares en nuca y región glútea, que blanquean en el centro con halo eritematoso externo. En la analítica se observa un aumento de la enzima GGT en las dos lactantes. Tras elevada sospecha de LN, se realiza el perfil inmunológico, detectándose ANAs positivos por medio de enzimoinmunoanálisis fluororimétrico (Elia) con un valor del ratio >11 (VR:<1) en ambos casos. Se decide hacer el perfil de ENAs, observándose valores >240 U/mL (VR: <7 U/mL) para los anti Ro/SSA, diagnosticándose así de LN a las dos gemelas. Se procede a la realización del estudio materno, asintomática hasta la fecha, cuyos resultados fueron ANAs positivos, con un ratio de 20 y los anti Ro/SSA >240 U/mL y anti La/SSB 102 U/mL (VR: <7 U/mL).

Refiere episodios previos autolimitados de epigastralgia irradiada a hipocondrios sin náuseas, vómitos, fiebre u otra sintomatología acompañante. Al ingreso, la analítica presentaba colestasis intensa (GGT 2211, FA 1100, BT 10), y aumento de CA 19.9. Tras el ingreso se realizaron pruebas de imagen y determinaciones analíticas para orientar el diagnóstico:

• Ecografía de abdomen: observó esteatosis hepática, vesícula con abundante barro biliar. Ligera dilatación de vía biliar intrahepática (VBI) y del colédoco.

• Colangio-Resonancia: colelitiasis y dilatación del colédoco proximal e imagen pseudonodular de 2.5cm en la cabeza del páncreas.

• TAC abdomen: se identificó un manguito periaórtico sugerente de fibrosis retroperitoneal.

• Se completa estudio con PET-TAC, con captación difusa, posterior realización de Ecoendoscopia, evidenciandose una masa en cabeza del páncreas cuya PAAF fue negativa para células neoplásicas.

• A nivel analítico destacaba una elevación de IgG total con claro predominio de IgG4 (949 mg/dL).

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

21

rEsultAdos AnAlÍticos

 

parámetro Analítico

día 0

día 1 ingreso

1ª semana

2ª semana

2ª semana + 3 dias

post tratamiento

unidades

rango

leucocitos

8.9

10e3/uL

4.20-10.90

neutrófilos

6.22

10e3/uL

2.20-7.42

hb

14.5

gr/dL

13.00-17.50

vcm

97

fL

80.00-98.00

plaquetas

373.00

10e3/uL

140.00-365.00

urea

34

35

34

mg/dL

18.00-50.00

creatinina

0.9

0.9

0.8

mg/dL

0.50-1.30

Amilasa

105

UI/L

25.00-115.00

got

242

227

208

321

265

10

UI/L

8.00-45.00

gpt

398

324

394

30

UI/L

14.00-62.00

ggt

2211

2465

3892

3357

161

UI/L

12.00-78.00

fA

733

819

1271

1086

71

UI/L

45.00-117.00

Bt

10.5

10

9.9

5.28

4.4

0.55

mg/dL

0.20-1.10

ferritina

>1000

ng/mL

10.00-260.00

ca 19.9

735

913

200

UI/L

<37.00

Bd

8.7

8

8.3

4.6

3.6

mg/dL

pcr

25

30

28

<3.10

mg/dL

3.10-5.00

igg

1919

1000

mg/dL

700.00-1600.00

igg4

949

355

mg/dL

8.00-140.00

discusión: El compromiso pancreático de la ER-IgG4 fue el primero y más frecuentemente descrito, bajo la forma PAI, que aparece generalmente en pacientes de edad avanzada (media de 65 años) y relación hombre:mujer 4:1. El síntoma clínico más frecuente es la ictericia obstructiva, afebril e indolora, asociada a engrosamiento del páncreas, y adenopatías (80%).Este cuadro altamente sugerente de cáncer de páncreas, es una de las clásicas simulaciones de ER-IgG4, como es el caso de nuestro paciente. Los criterios diagnóstico de ER-IgG4 combinan: hallazgos de imagen, serología, anatomía patológica y respuesta al tratamiento. En el caso presentado, el diagnóstico compatible con PAI, el aumento de IgG4 y la presencia de fibrosis retroperitoneal, sugiere que estamos ante un caso de ER- IgG4, previamente descartado la tumoración pancreática. Tras tratamiento corticoideo, el paciente presentó mejoría clínica, analítica y remisión radiológica completa, datos que apoyan el diagnóstico.

027

pAtrón dE BAndAs oligoclonAlEs igg nEgAtivo - igm positivo En lÍQuido cEfAlo- rrAQuÍdEo: rEvisión dE cAsos

M. Simó-Castelló (1) , V. Hernández Martí (1) , M.J. Moreno Monedero (1) , R.M. Pascual Costa (1) , I. Cal Carvajal (1) , F. Gascón Giménez (2) , C. Alcalá Vicente (1) , B. Laiz Marro (1)

(1) Hospital Universitario La Fe, Valencia; (2) Hospital Clínico Universitario, Valencia

introducción: La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria y neurodegenerativa de carácter autoinmune y de etiología desconocida, caracterizada por una destrucción de la vaina de mielina de las neuronas del SNC y que cursa con afectación motora progresiva. En esta patología es característica la síntesis intratecal de inmunoglobulinas, demostrada por la aparición de bandas oligoclonales (BOC) de IgG e IgM en el líquido cefalorraquídeo (LCR), siendo las primeras un criterio de apoyo al diagnóstico de la enfermedad, y un factor de mal pronóstico las segundas. objetivos: El objetivo de nuestro estudio fue realizar un análisis de los casos en los que en una primera punción lumbar (PL) el resultado fue positivo para BOC IgM y negativo para BOC IgG en LCR, y comprobar si éstas se positivizaron con el tiempo en una segunda PL. material y método: Se realizó un estudio retrospectivo del total de determinaciones de BOC en LCR y suero realizadas mediante isoelectroenfoque e inmunofijación durante un período de 7 años (2008-2015) en nuestro laboratorio. De entre todas aquellas que habían mostrado un patrón IgG negativo e IgM positivo, se seleccionaron los casos de pacientes con más de una punción lumbar. resultados: De las 2320 determinaciones conjuntas de BOC IgG e IgM realizadas durante el periodo de tiempo estudiado, 113 (4,9%) respondieron a un patrón IgG negativo- IgM positivo. Trece de estos pacientes fueron sometidos a una punción lumbar posterior, siendo seleccionados para continuar el estudio. Cuatro de ellos fueron diagnosticados de EM remitente-recidivante (EMRR) y mantuvieron el patrón IgG negativo e IgM positivo a lo largo de los años. Otros 4 pacientes presentaron una EMRR con BOC IgG

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

22

que se positivizaron con el tiempo. Tres de ellos fueron diagnosticados de otras enfermedades neurológicas y las BOC IgM se negativizaron en 2 de los casos. Otro paciente presentó un patrón IgG-IgM negativo en una primera PL, IgG negativo-IgM positivo en una segunda PL, y se negativizó de nuevo en una tercera PL, siendo diagnosticado de EMRR. El último caso fue una EMRR, pero se excluyó del estudio por haber recibido corticoides en días previos a la punción. conclusiones: En nuestra serie, la mayoría de pacientes con el patrón estudiado fueron finalmente diagnosticados de EM clínicamente definida, por lo que sería recomendable un seguimiento de los que presentan BOC IgM positivas de forma aislada, ya que generalmente no se realiza una segunda PL. A pesar de que las BOC IgM no están incluidas en los criterios diagnósticos de la EM, consideramos que en determinados casos pueden aparecer de forma más precoz que las BOC IgG o presentarse de forma aislada y mantenida en el tiempo, siendo por tanto de interés como apoyo al diagnóstico.

028

prEvAlEnciA dE hAplotipos hlA AsociAdos A cEliAQuÍA En unA cohortE dE pAciEntEs pEdiátricos

L. Del Gigia Aguirre, S. García Muñoz, J. Sánchez Gómez, F.J. Muñoz Vico, F. García Caballero, T. Fernández Sanfrancisco

Hospital Torrecárdenas, Almería

dispositivo Genxtract ®de Hain. Se definieron 3 perfiles genéticos: HLA1 correspondiente

a DQ2; HLA2 correspondiente a haplotipos no DQ2/ noDQ8

y HLA3 correspondiente a DQ8. resultados: Se recibieron 155 muestras, 90 mujeres (58,1%) y 65 hombres(41,9%) de edades comprendidas entre 1 y 14 años. Solo se realizo pruebas genéticas a 44 pacientes (28,4%) siendo 43 (97,7%)positivos y 1 (2,3%) negativo. Los perfiles obtenidos fueron: HLA1, 34 (77,3%), HLA2, 7 (15,9%); HLA3, 2 (4,5%). De estos presentaron serología positiva 31 (70,5%) y 13 negativa (29,5%). En función del haplotipo: HLA1, 26 (76,5%) serología positiva y 8 (23,5%) negativa; HLA2, 4 (57,1%) serología positiva y 3 (42,9%)

negativa; HLA3, 1 serología positiva (50%) y 1 (50%) negativa

y el único HLA negativo también fue negativo para serología. Los pacientes no estudiados fueron 111 (71,6%), presentaron serología positiva 12 (11%) y negativa 99 (89%). conclusiones: El haplotipo predominante en la población estudiada es HLA1, dato que concuerda con las evidencias descritas aunque se manifiesta en una porcentaje menor, 77,3% frente al 90%. De igual manera el haplotipo HLA2 supone, en nuestra muestra, una mayor presentación con un 15,9% frente al 5% citado en referencias bibliográficas. Por último el porcentaje de presentación del haplotipo HLA3

si concuerda con las referencias publicadas.

029

psEudoQuilotórAX: unA rArA formA dE prEsEntAción

introducción: La enfermedad celiaca (EC) es un trastorno de malabsorción causado por intolerancia al gluten o proteínas relacionadas presentes en cereales como el

K.M. Pinto Tapia, M.J. Lorenzo Lorenzo, C.E. Vázquez García, M. Pombar Pérez, J.M. Castro Freire, C. Varela Morlón, M.A. Andrade Olivié

trigo, centeno, cebada y avena. La susceptibilidad al gluten es en parte genéticamente

Hospital Xeral, Vigo. CHUVI., Bolivia

determinada y está asociada con los dos alelos del locus HLA- DQ (locus CELIAC1,cromosoma 6p21) que codifican

introducción: El derrame pleural (DP) puede tener origen

para la cadena α y la cadena β de la molécula MHC II subclase DQ. La EC se ha relacionado genéticamente con dos haplotipos: DQ2/ DQ8. Los alelos correspondientes

infeccioso, traumático, autoinmune o maligno, entre otros. La afectación pleuropulmonar de la artritis reumatoide (AR) no es infrecuente y puede deberse a la propia enfermedad

son DQ2 (HLADQA1*0501+HLADQB1*0201), DQ8

o

al tratamiento y más frecuente en varones (4:1), aunque

(HLADQA1*0301+HLADQB1*0302).

la

AR es 3 veces superior en mujeres. El DP se presenta en

El HLA-DQ2 se presenta en un 90% de los celíacos. No obstante, tenerlo positivo no implica desarrollar la EC, los celíacos representan solo 2-5% de los portadores del HLA- DQ2. Por el contrario un estudio genético negativo excluye casi totalmente EC. Alrededor del 5% de celíacos presenta el HLA DQ8 y al menos el 5% restante de celíacos no presentan ni el heterodímero DQ2, ni el DQ8, o sólo tienen un alelo del DQ2 (HLADQA1*0505+HLADQB1*0202). objetivo: Estudio descriptivo retrospectivo de la prevalencia de haplotipos HLA asociados a EC en pacientes pediátricos en un periodo de 7 meses. materiales y métodos: Se estudiaron las muestras procedentes de pediatría recibidas entre octubre 2014-abril 2015 con petición de estudio genético de EC. El estudio se realizó con kits de GenID® GmBH. La metodología consiste en una PCR multiplex seguida de hibridación reversa en tiras de nitrocelulosa. La extracción DNA previa a partir de sangre periférica tiene lugar en

un 5% de los pacientes con AR, suele ser unilateral derecho

y es raro como forma inicial de presentación, siendo más

habitual en la fase activa de la enfermedad. Exposición del caso: Mujer de 51 años con dolor torácico pleurítico derecho de <24h de evolución, febrícula, no tos ni expectoración. Fumadora activa 10 cigarrillos/día,

VHC(+), paquipleuritis derecha postneumónica, probable artritis reumatoide. Examen Físico: disminución de ruidos respiratorios. Rx/TAC Tórax: DP 2/3 de hemitórax derecho. Toracocentesis: Escasa cantidad de liquido pleural (LP) lechoso-purulento. Diagnósticos de presunción al ingreso:

empiema pleural crónico, quilotórax o pseudoquilotórax tuberculoso o AR. Analítica 1 er LP: turbio-lechoso; pH 7,13; leucocitos 1.000/mm 3 (90% mononucleares, 10% polimorfonucleares), presencia de cristales de colesterol; tinción de Gram: no se observan gérmenes; glucosa<5mg/dL; proteínas 5,5g/dL; albúmina 1,8g/dL; ADA 42,2U/L; LDH 3.785UI/L. Criterios de Light: LDH LP/S 10,5,

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

23

albúmina S-LP 1g/dL, proteínas S-LP 1,4g/dL. Microbiología:

cultivo/baciloscopia LP negativa, cultivo Mycobacterias

y Ziehl Nielsen (-), PCR Mycobacterium tuberculosis

(-). Citología: no se aprecia malignidad. Resto analítica:

leucocitosis neutrofilica de 18.760 L/mm 3 (3.700-10.800), plaquetas 505.000mm 3 (130.000-400.000). VSG 48mm/h(3- 20), fibrinógeno 637 mg/dL(150-600), colesterol 257 mg/ dL(100-200), triglicéridos 197 mg/dL(50-150), IgM 279 mg/ dL(40-230). Ac anti péptido cítrico citrulinado (antiCCP) 33,25U/mL(0-5), FR 11,4IU/mL(0-14). Biopsia pleural:

Focos de inflamación crónica y fibrosis, sin granulomas. Evolución: Inicialmente con medicación sintomática y tubo

de drenaje pleural evoluciona de forma favorable clínica y

radiológicamente. Meses después persiste DP y alteración ventilatoria restrictiva, y paralelamente clínica articular: dolor y tumefacción en muñecas. Analítica 2º LP tras 20 días:

turbio; pH 7,11; leucocitos 1.310/mm 3 (53% mononucleares, 47% polimorfonucleares); glucosa <3mg/dL; proteínas 4,5g/dL; albúmina 1,7g/dL; ADA 62,8U/L; LDH 6.828UI/L; colesterol 135 mg/dL; triglicéridos (TG) 19mg/dL. 3 er LP 15 meses después: turbio; pH 7,12; leucocitos 270/mm 3 (79%mononucleares, 21% polimorfonucleares); glucosa <3mg/dL; proteínas 5,4g/dL; albúmina 1,8g/dL; ADA 56,5U/L; LDH 5.125 UI/L; colesterol 241mg/dL; triglicéridos 32mg/dL.

En ambos LP: abundantes cristales de colesterol. Tinción de

Gram: no se observan gérmenes. discusión: Inicialmente diagnosticada de empiema pleural, los primeros resultados analíticos (Líquido Pleural

lechoso y con presencia de cristales de colesterol) orientaron al clínico a realizar diagnóstico diferencial entre pseudoquilotórax (colesterol >200mg/dL y TG <50mg/dL) y quilotórax (colesterol bajo y TG>110mg/dL), y en caso de pseudoquilotórax a realizar diagnóstico diferencial entre tuberculosis o artritis reumatoide. Los datos clínicos, analíticos y evolutivos llevaron finalmente al diagnóstico de AR: afectación extraarticular en forma de derrame pleural unilateral con colesterol elevado y presencia de cristales de colesterol en LP y antiCCP positivos en suero. El diagnóstico

de DP reumatoideo es sencillo en AR establecida, pero la

dificultad diagnóstica de este caso estribó en el comienzo pleural junto a un cuadro articular todavía no definitorio de AR. Los resultados de laboratorio aportaron información fundamental desde el inicio para orientar el diagnóstico y tratamiento adecuado en el menor tiempo posible.

030

sÍndromE AntisintEtAsA con miopAtÍA inflAmAtoriA Y nEumopAtÍA intErsticiAl:

discusión dE un cAso BAsAdo En critErios clÍnicos

F. Marqués García, M.B. Aparicio Hernández, A. Chamorro Fernández, E. Marcos Vadillo, G. Luna Rodrigo, J.M. González De Buitrago Arriero

Hospital Universitario de Salamanca, Salamanca

introducción: El Síndrome antisintetasa (SAS) es un trastorno poco frecuente incluido dentro de las Miopatías Inflamatorias Idiopáticas (MII), que se caracteriza por la presencia de anticuerpos anti-aminoacil-tRNA sintetasa

(anti-ARS), el Anti Jo-1 es el más comúnmente identificado, aunque recientemente se han descrito otros anti-ARS que podrían conferir un fenotipo distinto de enfermedad con

características clínicas dependientes de la especificidad del anticuerpo presente (anti-PL-12, anti-KS o anti-OJ). Se presenta un caso de Síndrome Antisintetasa con Miopatía Inflamatoria y Neumopatía Intersticial. Exposición del caso: Mujer de 79 años, sin hábitos tóxicos, con antecedentes de túnel carpiano bilateral pendiente de intervención quirúrgica, flebitis en pierna izquierda hace años. Valorada por el servicio de cirugía vascular. Acude a Consulta de atención inmediata por presentar un cuadro clínico sin antecedente de traumatismo

ni sobreesfuerzo previo, con dolor en fosa lumbar derecha

punzante sin irradiación, desde hace 12 meses. Parestesias en los pulpejos de los cinco dedos de ambas manos, con dactilitis, hiperqueratosis palmar de predominio en regiones laterales de los dedos, debilidad para elevar el brazo

izquierdo para peinarse, posible fenómeno de Raynaud en dedos de manos y pies con el frío y el estrés. No refiere clínica infecciosa, no ojo seco ni boca seca, no síndrome general, no clínica miccional. Datos de Laboratorio:

Bioquímica general, renal y hepática: normal; AST: 47 U/L, ALT: 39 U/L, CK: 563 U/L (25-170), VSG: 20 mm. Hemograma: Hb 13 g/dL, Leucocitos 7660 u/L, plaquetas 267000 u/L.

Anti-nucleares

(ANA) positivos patrón nucleolar (Título 1/160). Anticuerpos Anti-SSA/Ro 320 U/mL. Se amplía el Estudio realizando un blot de anticuerpos contra antígenos de miositis (Euroimmum) siendo positivos los anticuerpos anti- PM Scl 100 y PM Scl 75 y Anti- SSA/Ro 52 Kd. TAC Toraco- Abdominal:

En parénquima pulmonar en ambos lóbulos inferiores se aprecian discretas áreas de aumento de densidad en vidrio deslustrado que sugieren neumopatía Intersticial. Ecocardiograma: normal.

reflujo

gastroesofágico.

deltoides

izquierdo con diagnóstico anatomo patológico de miopatía inflamatoria leve endo y perimisial. Capilaroscopia: Elevada presencia de dilataciones y megacapilares con imágenes cerbriformes y arboriformes

con aisladas hemorragias sin ausencias, tortuosidades, ni otros datos sobreañadidos. Patrón activo. discusión: Se establece como diagnóstico definitivo:

Síndrome Antisintetasa (cumple los 2 criterios mayores

y 4 menores) con Miopatía inflamatoria y Neumopatía

Intersticial. Los criterios diagnósticos propuestos por Labirua

Estudio

autoinmunidad:

Anticuerpos

Tránsito

esofagogástrico:

muscular

Hernia

de

hiatal

y

músculo

Biopsia

Fragmento

et

al comprenden 2 criterios mayores; miositis (polimiosistis

o

dermatomiositis, confirmada por biopsia, neumopatía

intersticial y 6 criterios menores, fiebre, fenómeno de Raynaud, alteraciones capilaroscópicas (hemorragias, dilataciones o tortuosidades entre otras), manos de mecánico, artritis (puede ser erosiva o con tendencias a la

luxación-tipo Jaccoud), trastornos de la motilidad esofágica, calcinosis. Los anticuerpos anti-ARS que más comúnmente aparecen en la miositis son los anticuerpos anti-Jo-1 (anti- histidil tRNA sintetasa), aunque otros anticuerpos asociados

a las miopatías inflamatorias podrían conferir un fenotipo distinto de enfermedad. Es necesario ampliar el estudio

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

24

de anticuerpos específicos de miosistis distintos a los anticuerpos anti-Jo-1, cuando la sospecha de enfermedad es alta.

031

sÍndromE pulmo-rEnAl sEcundArio A vAsculitis por AnticuErpos Anti-mpo

B. Moreno González (1) , A. Romo Rivero (1) , M.V. Muruzabal Sitges (2) , A. Fontán Abad (2)

(1) Hospital de Navarra, Pamplona; (2) Hospital San Pedro de la Rioja, Logroño

introducción: Las vasculitis asociadas a anticuerpos anticitoplasma de neutrófilo (ANCA) agrupan tres síndromes heterogéneos: la granulomatosis de Wegener, la poliangeítis microscópica y la granulomatosis alérgica de Churg-

Strauss. Se caracterizan por la presencia de una vasculitis necrotizante de vaso pequeño y mediano calibre, afectando fundamentalmente a riñón, pulmón y sistema nervioso periférico, junto con la presencia de ANCA.

La detección de ANCA es fundamental para establecer el

diagnóstico. Por inmunofluorescencia indirecta se distinguen

dos patrones: el perinuclear (p-ANCA) y el citoplasmático

(c-ANCA), que en la mayoría de los casos corresponden con anticuerpos anti-mieloperoxidasa (A-MPO) y anti-proteinasa 3 (A-PR3) respectivamente. Exposición del caso: Paciente de 14 años que ingresa por neumonía comunitaria. La paciente acude hace 2 días al Servicio de Urgencias donde se diagnostica una otitis media izquierda y se pauta como tratamiento amoxicilina

e ibuprofeno. A las 24 horas comienza con fiebre de hasta

39ºC, con escalofríos pero sin tiritona. Ha tenido tos poco

productiva y con restos de sangre.

En la analítica realizada en Urgencias se objetiva anemia

con una hemoglobina de 6,9g/dL, (12-16 g/dL); alteración en

la función renal con una creatinina de 1,43 mg/dL (0,57-0,87

mg/dL) y una Proteína C Reactiva de 93 mg/dL (0-10 mg/dL).

A la paciente se le transfunden 4 concentrados de

hematíes por su intensa anemización. Al no haber datos que sugieran hemólisis y ante la sospecha de una posible hemorragia pulmonar en el contexto de enfermedad autoinmune se solicita estudio de autoinmunidad (ANCA, A-MPO y A-PR3) para descartar vasculitis a la vista

de la presencia de esputos hemoptoicos y hematuria, obteniéndose los siguientes resultados: anti p-ANCA positivo

a 1/1280 (N20), anti c-ANCA negativo a 1/20 (N20), A-MPO >156 U/mL (0-3,5 U/mL) y A-PR3 0.2 U/mL (0-2 U/mL).

El diagnóstico final es de vasculitis asociada a ANCA

(poliangeítis microscópica). Se inicia tratamiento con bolus

de corticoides, inducción con Ciclofosfamida intravenosa y se completa con plasmaféresis. Tras el inicio del tratamiento la paciente presenta mejoría clínica y analítica con disminución de los títulos de anticuerpos p-ANCA, A-MPO

y normalización de la función renal. Con la buena evolución

que presenta es dada de alta para continuar con revisiones periódicas. discusión: Las vasculitis asociadas a ANCA son enfermedades poco frecuentes. Las manifestaciones iniciales a menudo son inespecíficas, lo que dificulta su

diagnóstico. La detección de ANCA, así como la presencia

de insuficiencia renal grave y hemorragia pulmonar sugiere

granulomatosis de Wegener o poliangeítis microscópica, lo que disminuye el retraso del diagnóstico, facilitándose la instauración del tratamiento de forma precoz.

Entre las pruebas de laboratorio para el diagnóstico de esta patología los p-ANCA, aparecen en el 70-80% de los pacientes. Dada la agresividad del cuadro de nuestra paciente, con afectación renal y pulmonar; la positividad de p-ANCA con

presencia de A-MPO fueron determinantes para comenzar rápidamente con el tratamiento. El estudio de la biopsia renal realizado por Anatomía Patológica nos confirma el diagnóstico de la enfermedad: “lesiones glomerulares compatibles con glomerulonefritis proliferativa extracapilar con formación de semilunas epiteliales en tres glomérulos

de ocho” (glomerulonefritis rápidamente progresiva pauci-

inmune).

032

un insólito cAso dE EncEfAlitis lÍmBicA pArAnEoplásicA AsociAdA A cArcinomA EpidErmoidE dE pulmón

M.D.S. López Vélez (1) , J.L. García De Veas Silva (1) , Y. Gamarra Morales (1) , L.M. Bernal Bolaños (1) , R. Escobar Conesa (2) , J.V. García Lario (1)

(1) Complejo Hospitalario Universitario de Granada; (2) Hospital Clínico Universitario Virgen de la Victoria, Málaga

introducción: La encefalitis límbica (ENL) es un

síndrome paraneoplásico que con frecuencia se asocia a cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de mama, tumores testiculares y timoma. La EL se caracteriza por un comienzo subagudo, disfunción congnitiva, colvulsiones

y síntomas psiquiátricos. Los principales antígenos

intracelulares relacionados con la ENL son Hu, Ma2 y con menos frecuencia CV2/CRMP5 y anfifisina. presentación del caso: Hombre de 79 años de edad que acude a Urgencias Hospitalarias por presentar alteración del comportamiento, convulsiones y fiebre. En las Urgencias; la fiebre fue confirmada (37.2 ºC) y en el TAC cerebral se detectó daño cerebral isquémico residual. El diagnóstico del paciente fue encefalitis subaguda. Sin embargo, el estado del paciente empeoró progresivamente presentando agresividad, agitación y varios episodios de versión oculocefálica. El paciente es ingresado en la Unidad de Neurología para estudiar el origen (infeccioso, autoinmune o neoplásico) de los episodios de encefalitis subaguda. Los resultados obtenidos son los siguientes:

1. Estudio de Bioquímica y hemograma: Se encuentran una LDH (696 U/L) y PCR (18.4 mg/L) alteradas sin alteración significativa del resto de parámetros bioquímicos. Función tiroidea normal. El hemograma también es normal. 2. Estudio de marcadores tumorales: AFP, CEA, CA-125, CA 15.3, CA 19.9, B-HCG y PSA en rangos normales. Sólo se observa alteración de la NSE (Enolasa Neuronal Específica) con un valor de 27.3 ng/mL.

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

25

3. Estudio microbiológico (estudio de meningitis y encefalitis viral): PCR negativa para Herpex Simplex, Vaicella-Zoster, Toscana virus y Enterovirus. Estudio microbiológico negativo. 4. Estudio de Autoinmunidad: ANA, DNA y ENAs negativos. En el estudio de anticuerpos onconeuronales se detecta la presencia de anticuerpos anti-anfifisina a titulo 1/100 por inmunofluorescencia indirecta en tejido de cerebelo de primate y confirmado por inmunoblot. La presencia de este anticuerpo se asocia a ENL paraneoplásica por lo que nos permitió diagnosticar los síntomas del paciente como ENL y derivar el estudio hacia la búsqueda de un tumor oculto. Se procede a realizar pruebas de rayos-X, TAC toraco-abdominal y broncoscopia. 5. Estudio de rayos X de tórax: normal sin presencia de infiltrados o masas. 6. tAc toraco-abdominal: condensación en el pulmón izquierdo y presencia de adenopatías en el mediastino y abdomen sugerentes de carcinoma pulmonar. 7. Estudio de Broncoscopia: en la biopsia de los fragmentos obtenidos en la broncoscopia de la mucosa pulmonar se detectó la presencia de células tumorales CK5/6+, P63+, TTF1- y CK7- asociadas a carcinoma epidermoide de pulmón. discusión: La presencia de un determinado anticuerpo onconeuronal en un paciente nos proporciona una información muy valiosa que nos orienta hacia la búsqueda de un tumor oculto. La detección de los anticuerpos anti-anfifisina en este paciente nos permitió diagnosticar el carcinoma epidermoide de pulmón. Los anticuerpos paraneoplásicos se presentan como una herramienta útil para clasificar alteraciones neurológicas como paraneoplásicas y orientarnos hacía el tipo de tumor subyacente en el paciente.

033

utilidAd dE lA dEtErminAción dE lAs cAdEnAs ligErAs liBrEs En suEro pArA El mAnEJo dE pAciEntEs dE EnfErmEdAd cEliAcA

J. Jiménez Jiménez (1) , T. Pais (2)

(1) Hospital Universitario Severo Ochoa, Leganés; (2) The Binding Site, Portugal

introducción: La enfermedad celíaca (EC) se caracteriza por una intolerancia permanente al gluten en individuos genéticamente predispuestos, resultando en una inflamación crónica, de base inmune, de la mucosa del intestino. Es frecuentemente diagnosticada en la infancia motivo por el cual es fundamental disponer de biomarcadores poco invasivos que permitan evitar la biopsia duodenal (BI). Asimismo, la búsqueda de nuevos biomarcadores aumentaría la confianza en el diagnóstico y seguimiento de estos pacientes. Niveles aumentados de cadenas ligeras libres en suero (CLLs) son típicos de enfermedades autoinmunes, con lo cual su determinación podría funcionar como prueba adicional de diagnóstico de EC y/o evaluación de la respuesta en pacientes bajo una dieta sin gluten (DSG).

objetivo: Evaluar la utilidad de la determinación de las

CCLs como marcador de alteraciones de la mucosa intestinal

en pacientes con EC. materiales y métodos: Cohorte de 165 pacientes

diagnosticados de EC con muestras de suero al diagnóstico,

de los cuales 22 tenían igualmente muestras de seguimiento

a los 6 meses después de iniciada la DSG. El grupo control incluye 52 pacientes de edades semejantes con sospecha

inicial de EC posteriormente descartada. Se les realiza bioquímica de rutina (Covas 8000. Roche), anticuerpos antitransglutaminasa IgA (TG2) (Menarini diagnostics), IgA (BNII. Siemens), y suma kappa+Lambda

de CLLs (κ+λ) (Freelite. The Binding Site). Si la TG2 es más

que 10x el valor de referencia (VR) se confirma mediante

anticuerpos antiendomisio (EMS) (Menarini diagnostics).

Si la clínica es sugestiva no se realiza BI. Estudio genético

(INNO-LiPA. Innogenetics). Una vez confirmado el diagnóstico de EC se inicia el

tratamiento a través de la eliminación del gluten de la dieta, y

a los 6 meses del diagnóstico se les realiza un nuevo control. resultados: Pacientes con EC confirmada presentan niveles medios de CLLs (κ+λ) significativamente más elevados que el grupo control (30,2mg / L vs 18,0mg / L,

p <0,0001, Fig.1). Cuando se comparan las muestras

obtenidas a los 6 meses de inicio de DSG con las correspondientes al diagnóstico se observa una disminución significativa de los niveles de CLL (33,6mg / L vs 19,3mg / L, p=0,0016): disminución media de 1,5 veces (0,9 a 3,6). De hecho, 6 meses tras el inicio de la DSG, ya no se observa

una diferencia estadística entre este grupo y el grupo control (18 mg/L vs 19,3mg / L, p = 0,28). Por último, 19/20 muestras

de seguimiento con datos disponibles de TG2 muestran una

reducción de sus valores a los 6 meses de la DSG.

conclusiones: Los valores aumentados de CLLs en

el grupo EC frente al grupo control confirman el papel de

las cadenas ligeras libres en enfermedades autoinmunes.

Además, la disminución significativa de sus niveles tras

el inicio del tratamiento basado en la dieta sin gluten

demuestra su potencial utilidad en cuanto marcador de respuesta probablemente reflejando la normalización de la mucosa intestinal. Los datos de TG2 están en línea con esta hipótesis, sin embargo solo con los datos de las BI se podría confirmar esta teoría.

034

vAlor clÍnico dE los AnticuErpos Anti- hu (AnnA-1) En pAciEntEs con sÍndromEs pArAnEoplásicos

M.D.S. López Vélez (1) , J.L. García De Veas Silva (1) , L.M. Bernal Bolaños (1) , Y. Gamarra Morales (1) , R. Escobar Conesa (2) , J.V. García Lario (1)

(1) Complejo Hospitalario Universitario de Granada; (2) Hospital Clínico Universitario Virgen de la Victoria, Málaga

introducción: Los anticuerpos anti-HU ó ANNA-1 van dirigidos contra un antígeno que se localiza en el núcleo de todas las neuronas y también en las células tumorales. Van dirigidos contra una familia de proteínas de unión al ARN con un tamaño molecular de 35-40 kDa. Se expresan en

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

26

los núcleos de las neuronas del sistema nervioso central

y periférico. Los síndromes paraneoplásicos asociados a

este anticuerpo son neuropatía sensitiva, encefalomielitis,

degeneración cerebelosa con disfunción autónoma y

encefalitis límbica mientras que los tumores que se asocian

a la aparición de este anticuerpo son carcinoma microcítico

de pulmón, carcinoma de próstata, cáncer de mama, neuroblastoma y sarcoma. objetivos: Describir la utilidad clínica de los anticuerpos dirigidos contra el núcleo de las neuronas o anti-HU. material y métodos: Se han estudiado cuatro pacientes que presentaron síndromes paraneoplásicos y tras realizar el estudio autoinmune se detectaron la presencia

de anticuerpos anti-HU. Los anticuerpos neuronales se identificaron en muestra de suero de pacientes mediante inmunofluorescencia indirecta IFI (Euroimmun AG - Análisis y Genética SL.) que emplea como sustrato tejido de cerebelo, intestino y nervio de primate a dilución 1/10 y 1/100 y los resultados positivos obtenidos se confirmaron posteriormente mediante ensayo de inmunoblot recombinante (Ravo Diagnostika que detecta anticuerpos HU, YO, RI, CV-2, MA-

1, MA-2 y ANFIFISINA). Un resultado es positivo cuando se

confirma por las dos técnicas. resultados: Los resultados para los cuatro pacientes estudiados se muestran en la tabla.

Género Edad

Síndrome

Imagen y Diagnóstico del

Supervivencia

 

(años)

Paraneoplásico

título por

paciente

 

IFI

H

79

Encefalitis

Anti-HU

Cáncer

Exitus

 

límbica

1/100

microcítico de

(2 meses)

 

pulmón

M

46

Neuropatía

Anti-HU

Esclerosis

Viva

 

sensitiva

1/100

múltiple

(25 meses)

 

remitente-

recurrente

H

67

Encefalitis

Anti-HU

Adenocarcinoma

Exitus

 

paraneoplásica

1/1000

de pulmón

(19 meses)

M

50

Encefalitis

Anti-HU

Cáncer

Exitus

 

paraneoplásica

1/1000

microcítico de

(7 meses)

 

pulmón

discusión y conclusiones: La presencia de los anticuerpos anti-HU se asoció a cáncer de pulmón en tres pacientes mientras que en el paciente restante no se encontró patológica tumoral. En los tres pacientes con

cáncer la presencia de los anticuerpos anti-HU se asociaron

a un mal pronóstico con un tiempo de supervivencia corto.

En el paciente con esclerosis múltiple y anti-HU positivo se ha realizado un seguimiento periódicamente del mismo pero no se ha encontrado un tumor a pesar de la presencia de anti-HU positivos continuamente. En dicho paciente, se estudió la posible presencia de interferencia de anticuerpos antinucleares y anticuerpos antimitocondriales resultando ambos estudios negativos. En conclusión, la presencia de este anticuerpo debe orientar al clínico hacía la búsqueda de un tumor oculto, siendo el principal de ellos, el cáncer microcítico de pulmón presente en el 80% de los casos de positividad para este anticuerpo. En caso de que el estudio del tumor oculto sea negativo, como en el caso del paciente con esclerosis múltiple, se debe realizar un seguimiento periódico del paciente ya que el tumor puede aparecer varios meses después de los síntomas neurológicos.

035

vAlor pronóstico dE los AnticuErpos contrA pÉptidos Y protEÍnAs citrulinAdAs (Anti-ccp) En pAciEntEs con Artritis rEumAtoidE

J.L. García De Veas Silva (1) , C. González Rodríguez (2) , B. Hernández Cruz (2)

(1) Complejo Hospitalario Universitario de Granada; (2) Hospital Universitario Virgen de la Macarena, Sevilla

introducción: Los nuevos criterios de clasificación de Artritis Reumatoide (AR) del año 2010 introdujeron una ponderación para los anti-CCP según se encuentren positivos a títulos bajos (<3xValor Referencia o VR) o títulos altos (>3xVR). Sin embargo, el valor pronóstico de los anti- CCP no está definido porque en los estudios realizados se observan resultados contradictorios. objetivo: Determinar el valor pronóstico de los anti-CCP en pacientes con AR. materiales y método: Estudio longitudinal (3 años) sobre una cohorte de 59 pacientes con AR, edad de 53(42- 59) años y en tratamiento con fármacos modificadores del curso de la enfermedad. Se monitorizó el índice de actividad de la enfermedad DAS28 (Disease Activity Score sobre 28

articulaciones). Los pacientes se estratificaron en dos grupos según los puntos de corte de 40 U/ml (<3xVR) y 120 U/ml (>3xVR) para los anti-CCP. El test de Wilcoxon se usó para evaluar los cambios en el DAS28 durante el seguimiento mientras que para estudiar las diferencias entre grupos a lo largo del tiempo se empleó el test de la U-Mann-Whitney. Se consideró estadísticamente significativo un p<0.05. resultados:

punto de corte 120 u/ml: La puntuación DAS28 fue similar en pacientes con (N=27) y sin (N=32) anti-CCP positivos en la visita basal siendo de 5,77(4,04-6,75) para los pacientes positivos y de 5,75(4,33-6,65) para los pacientes negativos. En los pacientes positivos; el DAS28 descendió significativamente desde el valor inicial

a niveles de 3,75(2,89-4,72), 3,43(2,64-4,53) y aumentó

a 3,71(2,51-4,15) UI/mL a los 12, 24 y 36 meses de

seguimiento respectivamente (p=0,001). Para los pacientes negativos, la evolución fue desde el valor inicial a niveles de 3,44(2,11-4,91), 2,91(1,89-3,65) y 2,56(2,03-3,37) respectivamente (p<0,0001). Los pacientes con anti-CCP positivos presentaron valores más altos del DAS28 que aquellos con anti-CCP negativos. Aunque la puntuación del DAS28 descendió significativamente tanto en los pacientes positivos como negativos para los anti-CCP; las diferencias encontradas entre grupos de pacientes con anti-CCP positivos y negativos sólo fueron significativas a los 24 (3,43 vs. 2,91 UI/mL, p=0,049) y 36 meses (3,71 vs. 2,56 UI/mL,

p=0,012).

punto corte 40 u/ml: la puntuación DAS28 fue similar en pacientes con (N=40) y sin (N=19) anti-CCP positivos en la visita basal siendo de 5,81(4,07-6,81) para los pacientes positivos y de 5,59(4,69-6,42) para los pacientes negativos. En los pacientes positivos; el DAS28 descendió significativamente desde el valor inicial a niveles de 3,63(2,82- 4,81), 3,15(2,50-4,05) y 3,10(2,20-3,84) UI/mL a los 12, 24 y 36 meses de seguimiento respectivamente (p=0,001). Para

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

27

los pacientes negativos, la evolución fue similar desde el valor inicial a niveles de 3,44(2,22-4,79), 3,16(1,89-4,08) y 2,73(2,14-3,39) respectivamente (p<0,0001). Los pacientes con anti-CCP positivos presentaron valores más altos del DAS28 que aquellos con anti-CCP negativos pero las diferencias encontradas entre grupos de pacientes no fueron significativas. conclusión: El punto de corte de 40 U/ml no presentó valor pronóstico en los pacientes mientras que el punto de corte de 120 U/ml permite separar a los pacientes en dos grupos con distinta respuesta al tratamiento y por lo tanto distinto pronóstico según el índice de actividad DAS28.

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

28

citogenética y biología molecular

036

“Jumping trAnslocAtion” En un cAso dE nEoplAsiA miEloprolifErAtivA crónicA

A. Arteche López, J.F. Quesada Espinosa, M. Molina Romero, M.A. Sanz De Benito, E. Arranz Muñoz

Hospital Universitario de La Princesa, Madrid

introducción: Las “jumping traslocations” (JT) son eventos cromosómicos raros en los que un segmento del cromosoma donante sufre una translocación desequilibrada en múltiples y distintos cromosomas receptores. Los puntos de corte de las JT son en general regiones ricas en ADN repetitivo (telómeros, centrómeros y regiones de heterocromatina), pero aún hoy en día se desconoce el origen y el mecanismo molecular específico. Aunque se han descrito JTs constitucionales y en abortos espontáneos, la mayoría de las JTs se adquieren durante el curso de enfermedades hematológicas como en síndromes mielodisplásicos (SMDs), leucemias mieloide y linfoide, linfoma No Hodking y más frecuentemente en mieloma

múltiple. En dichas neoplasias, la región distal del brazo corto del cromosoma 1 (1q21) es la más frecuentemente implicada, aunque también se han descrito otros loci como 11q o 3q. Presentamos un caso clínico poco común, en el que se detectó la presencia de una JT en una paciente con una neoplasia mieloproliferativa crónica (NMP) en evolución. Exposición del caso: Paciente de 65 años diagnosticada

a los 36 de policitemia vera con Jak2V617F positiva y BCR-ABL mayor y menor negativa. A los 63 años muestra signos histológicos de evolución a mielofibrosis reticulínica, apareciendo síntomas constitucionales secundarios, febrícula y sudoración nocturna. Dada la edad y los síntomas clínicos, la paciente es clasificada como riesgo intermedio y recibe tratamiento con hydrea. Realizamos un estudio citogenético convencional en médula ósea y posteriormente un estudio de FISH para confirmar los hallazgos del cariotipo. Utilizamos las siguientes sondas específicas de locus: 1q21 (CKS1B), 13q14 (D13S5319) y 22q11 (BCR). El cariotipo definitivo fue: 46,XX,der(13)t(1;13)(q12;p11) [18] / 46,XX,der(22)t(1;22)(q12;p11)[6] / 46,XX,der(14)t(1;14) (q12;p11)[4] / 46,XX,der(1)t(1;1)(q12;q44)[2] / 46,XX [13]. discusión: En la mayoría de las neoplasias hematológicas, las JT son cambios secundarios que ocurren durante el transcurso de la enfermedad y se asocian con un curso agresivo de la misma. En concreto, la aparición de JTs de 1q en NMPs y SMDs presenta una probabilidad de entre un 80 y 88% de transformación a leucemia mieloide aguda a los 8 y 9 meses desde su detección respectivamente. Por tanto, las JTs parecen ser un evento que contribuye más a

la progresión de las neoplasias y no tanto a la patogénesis

de las mismas. El interés del caso clínico presentado radica en la baja incidencia de las JT de 1q descrita para las NMPC, que se estima del 0.6% al diagnóstico y del 1.3% de progresión (mediana de seguimiento de 11 años). Además, dado el

rápido avance de la mielofibrosis en nuestra paciente desde

su detección, refuerza su asociación con un mal pronóstico.

037

A propósito dE un cAso dE sÍndromE dE mErrf

S.

Franco Freire (1) , P. Carrasco Salas (2) , J. López Montiel (2) ,

V.

Álvarez Martínez (3) , J. López Siles (2) , V. Pérez Valero (1)

(1) Genética. UGC Laboratorio Hospital Regional Universitario Málaga; (2) CGM Genetaq; (3) Unidad Genética. Hospital Universitario Asturias

introducción: La epilepsia mioclónica asociada fibras rojas rasgadas (MERRF) es un desorden multisistémico caracterizado por mioclonía, que a menudo es el primer

síntoma, seguida de epilepsia generalizada, ataxia, debilidad

y demencia. La pérdida de audición, estatura corta, atrofia

óptica y cardiomiopatía con síndrome Wolf-Parkinson-White

(WPW) son hallazgos comunes. Ocasionalmente también manifiestan retinopatía pigmentaria y lipomatosis. Está causado por mutaciones en el ADN mitocondrial

y se transmite por herencia materna. Cuatro mutaciones (m.8344A>G, m.8356T>C, m.8361G>A, y m.8363G>A)

acontecen en el 90% de los afectos por MERRF. La más común es la mutación m.8344A>G presente en cerca del 80% de los afectos mientras que las otras tres representan el 10%. Exposición del caso: Varón 36 años de edad remitido desde neurología a la consulta de genética por ataxia progresiva solicitando estudio genético de ataxias

heredodegenerativas.

Antecedentes familiares vía materna: tío con temblor

y discapacidad mental (fallecido a los 46 años), tía con

retraso madurativo (fallecida con 52 años), tío recientemente diagnosticado de enfermedad de Parkinson y primo con retraso madurativo. Madre: lipomatosis generalizada; cierta inestabilidad en la marcha recientemente con caídas frecuentes. Hermanos, hermanas y sobrinos asintomáticos. Por vía paterna no hay antecedentes de interés. Antecedentes personales: lesión traumática en ojo derecho por accidente en la infancia. Refiere hipoacusia derecha. Lipomas en espalda. Evolución: desde adolescencia nota temblor fino al coger objetos con ambas manos y en tareas de precisión. Múltiples caídas. Curso progresivo con dificultad mayor para la marcha y mayor pérdida fuerza en los brazos. Dismetría dedo-nariz y talón-rodilla. Aumento CPK, LDH, aldolasa y láctico. Estación y marcha atáxica con aumento de base. Cuadriparexia leve de predominio proximal. Atrofia cerebelosa vermiana y troncoencefálica. EMG/ENG: miopatía difusa. El estudio molecular de las ataxias hereditarias más frecuentes en nuestra población se realizó mediante PCR, con primers específicos para los genes ATXN1, ATXN2, ATXN3, CACNA1A, ATXN7, PPP2R2B, TBP y ATN1, seguido de electroforesis capilar en secuenciador automático. No se observó expansión de tripletes en ninguno de ellos. Dados los antecedentes maternos, se solicitó estudio de MELAS y MERRF, dos citopatías mitocondriales

que deben ser incluidas en el diagnóstico diferencial de pacientes con ataxias. El estudio mediante PCR con primers específicos para dos fragmentos de ADN mitocondrial donde se encuentran las mutaciones relacionadas con estos síndromes, con secuenciación posterior de los productos

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

29

amplificados en secuenciador automático, identificó la mutación m.8344A>G en el gen MT-TK en aparente homoplasmia en el caso índice. La madre era portadora en heteroplasmia de la misma mutación. discusión: Los estudios moleculares son fundamentales para establecer el diagnóstico de algunas enfermedades hereditarias, especialmente en aquellas en las que resulta difícil de establecer debido a la complejidad clínica. Además, en las enfermedades hereditarias, es muy importante encontrar el defecto genético subyacente para poder realizar un consejo genético adecuado.

038

A propósito dE un cAso. distrofiA miotóni- cA tipo 1 o dE stEinErt

A. Fontán Abad, A. Crespo Santiago, C. Martínez Carretero, S. Martín Rodríguez, R. Hernández García, I. Bernardo

González

Hospital San Pedro de la Rioja, Logroño

datos clínicos: Familia de tres miembros, dos hermanos

y el padre. El probando es un hombre de 24 años, acude a

consulta de neurología (CEXN) refiriendo agarrotamiento “de siempre”, con empeoramiento en los últimos años y pérdida de fuerza en extremidades superiores. En la exploración, destaca una facies miotónica, debilidad en musculatura orbicular y fenómeno miotónico positivo. Reseña que tiene un hermano afecto de sintomatología similar, pero sin ningún diagnóstico. Se sospecha de distrofia miotónica (DM1) y solicitan estudio genético al laboratorio. El hermano mayor, 28 años, acude a CEXN, donde refiere agarrotamiento en manos. No se objetiva debilidad, pero si voz gangosa, discreta ptosis palpebral y fenómeno miotónico positivo. Se solicita estudio genético. El padre, 55 años, como único antecedente presenta una intervención de cataratas, sin agarrotamientos, sin fenómeno miotónico. Resto de la exploración, anodina. Solicita también estudio de Steinert. ¿Qué es la dm1?: La DM1 es una enfermedad multisistémica con debilidad progresiva, atrofia y miotonía. Es la miopatía del adulto más frecuente, autosómica dominante, con penetrancia incompleta, anticipación y varios fenotipos clínicos que correlacionan con el tamaño del fragmento expandido. Causada por alteraciones en el DNA, principalmente, en la región no codificante del gen DMPK, cromosoma 19. En esta zona inestable se pueden producir expansiones del triplete CTG. De 5 a 35 tripletes, zona estable, fenotipo normal. Entre 36 y 50, puede ser inestable, fenotipo normal. Entre 51 y 150, zona premutada,

con síntomas leves y de aparición muy tardía. Superior a 150, alelo expandido y mutado, clínica por lo general clara. diagnóstico: El primer paso en el diagnóstico molecular de la DM1 es analizar si el paciente tiene dos alelos con número bajo de repeticiones, mediante PCR convencional

y análisis de fragmentos. Si sólo se detecta un alelo, se

debe realizar otra PCR adicional, una triplet-repeat-primed (TP-PCR). En la TP-PCR, se utilizan 2 cebadores, uno hibrida fuera de la zona de repetición, y otro en la zona de expansión. El producto de esta PCR, será una mezcla de fragmentos de diferente tamaño, que serán analizados por

electroforesis capilar. datos de laboratorio: Tras PCR convencional y electroforesis capilar, se observa en el padre un alelo normal, 6 repeticiones, y uno premutado, 106 repeticiones. En ambos hijos se observa un alelo normal, 8 repeticiones de diferente tamaño a los del padre. Frente a esto, planteamos, si los hijos eran homocigotos para los alelos con 8 repeticiones, cuestionándonos la paternidad, o bien, que pudiesen haber heredado el alelo mutado del padre. Tras realizar la TP-PCR a los tres individuos, confirmamos el tamaño del alelo premutado del padre, y encontramos en ambos hijos un alelo expandido de más de 150 repeticiones, siendo el alelo del hijo menor de mayor tamaño. conclusión: Esta familia está afecta de distrofia miotónica de Steinert. Se observa un claro fenómeno de anticipación, en el que encontramos relación directa entre la expansión y la clínica de cada miembro, haciéndose patente la importancia del laboratorio clínico en el diagnóstico de este tipo de enfermedades genéticas.

039

A propósito dE un cAso: polimorfismo 9qh+ diAgnosticAdo por BAndAs c

A. Martínez Cañamero (1) , M.J. Carrero Lérida (1) , M.I. Aceituno Azaustre (1) , J.A. Luque Livón (1) , E. Martínez Molina (2)

(1) Hospital Universitario Ciudad de Jaén, Jaén; (2) Universidad de Granada

introducción: Se recibe en la Unidad de Genética una

muestra de sangre periférica, procedente de la Unidad de Reproducción, de una paciente de 31 años sin abortos, hijos previos ni antecedentes de interés. La correspondiente petición solicitaba cariotipo ante un caso de infertilidad primaria. Al procesar la muestra mediante técnicas de bandeo cromosómico con Giemsa se obtiene el cariotipo de la paciente y sus cromosomas teñidos con las características Bandas G. Se observa una región anómala en el brazo largo de un cromosoma 9 en todas las metafases estudiadas. Ante la necesidad de discernir entre una anormalidad patogénica o simplemente heterocromatina constitutiva se opta con completar el estudio. Exposición del caso: La tinción con bandas G es la técnica inicial para el análisis cromosómico (más habitual)

y aplica una tinción de Giemsa tras digerir parcialmente las proteínas cromosómicas con tripsina. Sin embargo no es

capaz de teñir la heterocromatina constitutiva que se localiza normalmente cerca de los centrómeros. Necesitamos diferenciar entre una anormalidad patogénica o simplemente heterocromatina constitutiva. Así pues se inicia el proceso de identificación de la región extranumeraria mediante tinción de bandas C, correspondiente a la heterocromatina constitutiva. La tinción de bandas C está basada en la desnaturalización de la estructura cromosómica dando lugar

a la tinción diferencial de las regiones pericentroméricas de los cromosomas 1, 9, 16 e Y. La tinción de las metafases de nuestra paciente por la técnica de las Bandas C demostró la existencia de una variante en la región heterocromática del largo del

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

30

cromosoma 9, diagnosticándose de polimorfismo 9qh+ no relacionado con la patología de la paciente. discusión: La heterocromatina constitutiva carece de información genética y se encuentra en los centrómeros de los cromosomas (que no expresan su ADN). Contiene un tipo

el resultado citogenético, siendo la deleción parcial en la citobanda Xp22.33 de 1,8Mb (región PAR1) y alterando la dosis de 11 genes RefSeq, entre ellos el gen SHOX. Tras los hallazgos genéticos se realizó ecografía abdomino-pélvica no observándose ovarios (posiblemente

particular de ADN denominado satélite que está formado por gran número de secuencias cortas repetidas en tándem, por

atróficos). También se solicitó estudio hormonal destacando niveles indetectables de hormona antimuleriana en suero

lo

que no se puede estudiar por técnicas de secuenciación

(<0.1 ng/ml), baja concentración de inhibina B dimérica (10

o

de hibridación. Es altamente polimórfica probablemente

pg/ml) y niveles elevados de gonadotropinas (FSH y LH).

debido a la inestabilidad del ADN satélite. Es importante recordar la presencia de estas regiones

discusión: La disgenesia gonadal es una característica constante de todas las fusiones entre Cromosomas X,

y

utilizar las técnicas de estudio apropiado para evitar

independientemente de si están unidos por los brazos

diagnósticos erróneos y costes innecesarios. No existe en la actualidad suficientes estudios que sugieran un aumento de la infertilidad con la presencia de estas regiones.

cortos o largos, o si hay o no un línea celular 45,X presente. El fenotipo Turner se asocia más a menudo a deleciones grandes de Xp, mientras que la estatura baja parece ser una consecuencia de deleciones terminales incluso muy pequeñas como es nuestro caso (que incluye el gen SHOX).

040

AmEnorrEA primAriA por trAslocAción EntrE cromosomAs X, 46,X,idic(X)(p22.33). A propósito dE un cAso

R. González Tarancón, A.B. Lasierra Monclús, M.J. Alcaine Villaroya, S. Izquierdo Álvarez, M.D. Miramar Gallart, A. Rodríguez Valle, Y. González Irazabal, J.I. González Hevia

Servicio de Bioquímica, Hospital Universitario Miguel Servet, Zaragoza

introducción: Las translocaciones que implican al cromosoma X (cr.X) son raras, más aún, la translocación

entre dos cr.X. Previamente se han descrito en la bibliografía como 46,X,der(X),t(X;X) ó 45,X/46,X,dic(X). Este fenómeno resulta en una deleción parcial de la región donde se produce el punto de rotura y una duplicación del resto del cr.X, causando una trisomía parcial del cr.X y una monosomía de

la región terminal donde se produce la unión.

Las pacientes con cr.X isodicéntricos unidos por sus brazos cortos generalmente presentan disgenesia gonadal, baja estatura y, en ocasiones, características del Síndrome de Turner. Exposición del caso: Mujer de 17 años de edad, con baja estatura (149 cm.), sin otros antecedentes clínicos de interés. Acude a consulta de genética derivado por su ginecólogo por amenorrea primaria y escaso desarrollo de caracteres sexuales secundarios. Se realiza estudio citogenético en sangre periférica tras doble cultivo de linfocitos con bandeo convencional GTG. Todas las metafases examinadas presentan 46 cromosomas, observándose un cromosoma derivativo dicéntrico formado por dos cromosomas X. Mediante técnica FISH se comprueba una monosomía Xp22.33 (Deleción Tel Xp) que no implica la región del Kallman (Duplicación LSI KAL/CEP X). También se realizó estudio citogenético de sus progenitores siendo ambos normales (46,XX y 46,XY), tratándose por tanto de una translocación de novo. fórmula cromosómica: 46,X,idic(X)(p22.33)dn. Para precisar el tamaño de la deleción se realiza array CGH (qChip Post). Cariotipo molecular: arr[hg18] Xp22.33(230,393-2,026,670)x1 arr[hg18] Xp22.3 3q28(2,128,389-154,877,960)x3. Este resultado corrobora

041

Análisis dE gEnotipos hlA AsociAdos A EnfErmEdAd cEliAcA En nuEstro mEdio

M.J. Carrero Lérida, E. Ocaña Perez, M.I. Aceituno Azaustre

Complejo Hospitalario de Jaén

introducción: La enfermedad celíaca (EC) es el resultado de una respuesta inmunológica anómala frente al gluten, mediada por linfocitos T y de base genética. Son factores obligados el gluten y una predisposición genética, mientras que otros factores ambientales actúan como desencadenantes. La EC puede estar asociada a numerosos hallazgos gastrointestinales diarrea, anorexia, distensión abdominal y otros hallazgos variables anemia ferropénica, dermatitis herpetiforme, fatiga crónica, artritis. Estudios de grandes poblaciones de pacientes celíacos han puesto en evidencia que el 92-95%de los celíacos presenta el HLA DQ2 (codificado por los alelos DQA1*0501, DQB1*0201), asociados a DR3 (codificado por el alelo DRB1*03) ó DR5/ DR7 (codificados por los alelos DRB1*11/DRB1*07. Los que no tienen este HLA son DR4 /DQ8 (codificado por los alelos DRB1*04 /DQB1*0302). Los escasos pacientes, entre un 2-10%, no DQ2 ni DQ8, tienen algún alelo de susceptibilidad. Por lo que en la EC la asociación al HLA es absoluta. ojetivos: Analizar los datos obtenidos mediante determinación molecular de alelos HLA de clase II de cadena beta y alfa DQ y DR, así como la frecuencia de alelos, genotipos y haplotipos DQB1 DRB1 de una muestra de 163 pacientes con sospecha clínica de EC. material y métodos: Estudio descriptivo observacional. Se revisaron los estudios de histocompatibilidad asociados a enfermedad celiaca remitidos al laboratorio de Inmunología del Complejo Hospitalario de Jaén durante el año 2014. La tipificación HLA se realizó mediante PCR-SSP (Protrans, Diagnostica Longwood) en el Termociclador Gene Amp Ò PCR System 9700 con posterior identificación del ADN amplificado por electroforesis en gel de agarosa. resultados: Se realizaron 163 estudios de HLA asociado a EC. En 123 casos (75,46%) se obtuvo genotipo HLA de asociación con EC. En 109 pacientes (88,61%) se encontró el DQ2 (DQB1*0201/DQA1*0501) asociado a

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

31

DRB1*03 o DRB1*07/*11 y en 14 casos (11,38%) el HLA DQ8 (DQB1*0302/DQA1*0301). La combinación de haplotipos de riesgo DQB1 DRB1 de los pacientes se presenta en la siguiente tabla:

comBinAción hAplotipo dQB1* drB1*

pacientes, n (%)

*0201-*03 / *0201-*03

49 (39,83)

*0201-*03 / *0202-*07

25 (20,32)

*0201-*03 / *0301-*11

9 (7,31)

*0201-*03 / *0302-*04

9 (7,31)

*0202-*07 / *0301-*11

9 (7,31)

*0301-*11 / *0302-*04

3 (2,43)

*0202-*07 / *0302-*04

5 (4,06)

*0302-*04 / X

14 (11,38)

X cualquier alelo que no se DRB1*03, 07, y 11.

conclusiones: La distribución de alelos, genotipos y haplotipos DQB1 DRB1 en nuestra población coincide con

lo descrito en la bibliografía, siendo los alelos DQB1*02 DRB1*03 y en concreto el haplotipo *0201-*03 / *0201-*03

el más frecuente.

042

Análisis dE los gEnotipos dEl virus dE lA hEpAtitis c En nuEstro mEdio

M.J. Carrero Lérida, A. Martínez Cañamero, M.I. Aceituno

Azaustre

Complejo Hospitalario de Jaén

introducción: La infección por el virus de la hepatitis C (VHC) se caracteriza, por una evolución crónica y, en general, benigna, tal como demuestran los estudios epidemiológicos prospectivos y retrospectivos. Sin embargo, en su evolución crónica, pueden aparecer de una manera progresiva lesiones histológicas hepáticas: hepatitis crónica, cirrosis

y hepatocarcinoma, así como complicaciones clínicas, por

la hipertensión portal y deterioro analítico de la función hepática. Una característica muy importante del VHC es el alto grado de heterogeneidad en las secuencias genómicas

y, por lo tanto, de las proteínas codificadas. Basándose en

la secuencia de nucleótidos, se han definido seis grupos mayores del virus VHC, llamados genotipos, designándose éstos por números (genotipos 1 al 6). Los genotipos 1, 2, y 3 se encuentran en el 90% de las infecciones por el VHC en América del Norte y en Sudamérica, Europa, Rusia, China, Japón, Australia y Nueva Zelanda. El genotipo 3 es muy frecuente en América y en Europa, y los otros genotipos se encuentran en Asia o África. Los diferentes genotipos se han asociado con la tasa de respuesta al tratamiento de interferón y rivabirina. Así pues, los pacientes infectados con virus del genotipo 1, responden peor al tratamiento que los infectados con genotipos 2 ó 3. En nuestro medio, el 80-90% de las infecciones se deben al genotipo 1. objetivos: Analizar los datos obtenidos mediante determinación molecular de los distintos genotipos del VHC, así como la frecuencia de los mismos de una muestra de 96

pacientes con diagnóstico clínico de infección por VHC en nuestro medio. material y métodos: Estudio descriptivo observacional. Se revisaron los pacientes que fueron diagnosticados de infección por VHC remitidos al laboratorio de Biología Molecular del Complejo Hospitalario de Jaén durante el período Enero-Abril de 2015. La tipificación del genotipo se realizó mediante RT-PCR en el Termociclador Gene Amp Ò PCR System 9700 con posterior identificación del ADN amplificado por hibridación in situ con tiras de nitrocelulosa en el analizador Profiblot. resultados: Se realizaron 96 estudios de genotipos del VHC encontrándose los siguientes resultados:

gEnotipos dEl virus dE lA hEpAtitis c

genotipo 1

74 (77,08%)

genotipo 2

2 (2,08%)

genotipo 3

15 (15,62%)

genotipo 4

5 (5,21%)

genotipo 5

0 (0%)

genotipo 6

0 (0%)

conclusiones: La distribución de genotipos en nuestra población coincide con lo descrito en la bibliografía, siendo los genotipos 1 y 3 con un 77,08% y un 15,62% respectivamente los más frecuentes.

043

Análisis dEl EstAdo mutAcionAl dEl Egfr En cáncEr dE pulmón no microcÍtico

M.D.P. Afonso Medina, R. Martin Alfaro, C. Domínguez Cabrera, J.A. Castellano Del Toro, A. Losada Cabrera

Hospital Universitario de Gran Canaria Doctor Negrín, Las Palmas de Gran Canaria

introducción: En el tratamiento del Cáncer de pulmón no microcítico (CPNM) avanzado o metastático se han introducido en los últimos años como opción terapéutica de primera línea fármacos inhibidores de la tirosin cinasa, en aquellos pacientes que presentan mutaciones activadoras del gen del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). Es por ello necesario conocer el estado mutacional de EGFR para seleccionar aquellos pacientes que se pueden beneficiar de este tipo de terapias, que han demostrado en diferentes estudios un incremento significativo del intervalo libre de enfermedad y una mayor supervivencia. objetivo: Conocer el estado mutacional del EGFR de los pacientes con CPNM avanzado o metastático en nuestro hospital para seleccionar aquellos pacientes candidatos a tratamiento con inhibidores de la tirosin cinasa. material y métodos: Estudio descriptivo retrospectivo de pacientes con CPNM avanzado o metastático en los que se ha solicitado a nuestro laboratorio de Análisis Clínicos el estudio del estado mutacional del EGFR. Se analizaron 107 muestras desde agosto de 2013 hasta marzo de 2015: 26 citologías, 2 biopsias de metástasis y 79 biopsias de tumor primario. El tipo histológico predominante fue el

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adenocarcinoma. A todas la muestras se les realizó una extracción manual de DNA con el kit Cobas DNA simple preparation kit (Roche). De las muestras procesadas 11 (10.28%) fueron insuficientes para poder realizar la determinación. Las 96 muestras restantes (89.72%) se procesaron con la prueba Cobas EGFR mutation test (Roche), que es capaz de identificar 41 mutaciones en los exones 18,19 20 y 21 del EGFR, con una sensibilidad del 5%, con un método de PCR a tiempo real en el analizador Cobas z 480 con amplificación y detección automáticas. resultados: De las 96 muestras estudiadas, encontramos mutaciones con deleción del exón 19 en 7 casos (7.3%), mutaciones en el exón 21 L858R en 2 casos (2.1%) y mutaciones con inserciones en el exón 20 en 2 casos (2.1%). En el resto de las muestras (88.6%) no encontramos ninguna de las mutaciones estudiadas, siendo informadas como nativas o wild type. conclusiones: El porcentaje de pacientes encontrados en nuestro medio con mutaciones en el EGFR es similar al descrito en otras poblaciones, siendo las más frecuentes las deleciones del exón 19. Conocer el estado mutacional del EGFR ha permitido en nuestro hospital seleccionar a un grupo de pacientes con CPNM avanzado o metastático que se puede beneficiar del tratamiento con inhibidores de la tirosin cinasa.

044

Análisis dEl gEnotipAdo dE cYp2c19 En El lABorAtorio dE fArmAcogEnÉticA

muestra. Las muestras fueron analizadas a su vez mediante los métodos rutinarios de nuestro laboratorio, la plataforma de microarrays de alto rendimiento Amplichip que analiza los alelos *1, *2 y *3 y mediante el sistema de PCR en tiempo real en el LightCycler 480 (Roche Diagnostics) que analiza los alelos *1, *2, *3 y *17. resultados: Se detectaron las siguientes frecuencias alélicas: Alelo *1, 33.3%; alelo *2, 33.3%, alelo *5, 8.3%; alelo *17, 25%. El 20% de los pacientes analizados presentaron un genotipo que predice metabolización eficiente para CYP2C19, un 40% correspondieron al fenotipo metabolizador ultrarapido y un 40% metabolizadores lentos.

Observamos una concordancia en todos los casos mediante los tres métodos empleados si bien el alelo *5 sólo se analiza con el método Infiniti. conclusiones: La importancia de realizar una buena selección del fármaco y de la dosis individualizada a partir de los estudios de farmacogenética se debe a la elevada variabilidad en la eficiencia de las enizmas metabolizadoras

y a que los efectos adversos de estos fármacos son causa

frecuente de interrupción o fracaso del tratamiento. En nuestro estudio la determinación del genotipo de CYP2C19 mediante la plataforma Infiniti constituye un método adecuado de análisis que proporciona información sobre las variantes alélicas de mayor relevancia en nuestra población.

045

AniridiA BilAtErAl congÉnitA por dElEción intErsticiAl En El cromosomA 11 (11p13)

B.

García Berrocal, E. Marcos Vadillo, A.I. Martín Martín,

F. Sánchez Martin, S.A. Pérez, R. Iglesias, J.A. Garrote, M.J.

F.

Marqués García, P. Carrero Baz, A. Crego Martín,

Sánchez, M.L. Arranz

M.

Isidoro García

Hospital Universitario de Salamanca, Salamanca

introducción: El análisis del gen CYP2C19 de la familia del citocromo P450 proporciona una predicción genotípica de la actividad enzimática asociada. Este es un gen muy polimorfo y determinadas variantes alélicas se asocian son modificaciones de la actividad enzimática. Una gran proporción de fármacos son metabolizados por enzimas codificados por este gen por lo que su genotipado contribuye a la selección del tratamiento y a la determinación individualizada de la dosis farmacológica. objetivos: Considerando la gran relevancia de los fármacos metabolizados por esta vía nos planteamos la valoración metodológica de un nuevo sistema de microarrays de genotipado para determinar el fenotipo metabolizador de los pacientes. material y métodos: Se analizaron 15 pacientes mediante la plataforma Infiniti (Autogenomics, Palex Medical), basada en microarrays de matriz hidrogel revestida de polyester. Tras la extracción del DNA con el sistema MagNAPure Compact® (Roche Diagnostics), se realizó una amplificación mediante PCR y posterior hibridación con sondas de captura y análisis de fluorescencia emitida. Este método proporciona información sobre la presencia de los siguientes alelos *2, *3,*4,*5,*6,*7,*8,*9,*10,*17. Los resultados se analizaron mediante un programa informático para determinar la información genética específica de la

Hospital Universitario del Río Hortega, Valladolid

introducción: El síndrome de WAGR es una alteración genética rara que puede cursar con distintas malformaciones que incluyen: tumor de Wilms, falta total o parcial del iris, alteraciones genito-urinarias y retraso psicológico y madurativo. Está causado por una mutación genética esporádica durante el desarrollo embrionario precoz por causas desconocidas, en la que la deleción de una parte del brazo corto del cromosoma 11 afecta a los genes PAX6 (relacionado con la aniridia) y WT1 (relacionado con el tumor de Wilms). Se desconoce la alteración de los genes que podrían causar las alteraciones neurológicas, pero es evidente que podrían ser genes cercanos a la localización de los implicados en el resto de las malformaciones. Exposición del caso: Presentamos el caso de una recién nacida a término con 2780 gr de peso, con diagnóstico al nacimiento de aniridia congénita bilateral parcial, sin otras alteraciones morfológicas evidentes. No presenta antecedentes familiares de interés (hermana de 4 años normal). Ante este hallazgo nos solicitaron la realización del cariotipo, donde se evidenció una deleción del cromosoma 11

[46,XX,del(11)(p12~p14)], por lo que se amplió el estudio con secuenciación en sangre periférica (con resultado negativo)

y estudio molecular de los genes implicados en este trastorno (PAX6 y WT1) mediante técnica MLPA, detectándose una deleción completa en estado heterocigoto del gen PAX6, sin

IX Congreso Nacional del Laboratorio Clínico

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anormalidades en el gen WT1. De manera complementaria se observó la deleción en estado heterocigoto de los genes BDNF, FSHB, DCDC1, E2P4, DKF7 situados en cromosoma 11. El cariotipo de los padres fue normal, lo que demostró que la deleción de la paciente era “de novo”. Con este resultado se amplió estudio de la paciente para descartar un síndrome de WAGR, con ecografía abdominal (incluyendo aparato genito-urinario) cuyo resultado fue normal y la ecografía cerebral donde se observó discreta asimetría ventricular. discusión: La paciente fue diagnosticada de ANIRIDIA CONGENITA BILATERAL PARCIAL (deleción del gen PAX6) sin alteraciones renales, por lo que se descartó síndrome de WAGR típico. En la actualidad continúa en revisiones periódicas en consulta de neurología y oftalmología pediátrica para valorar posibles alteraciones a nivel neurológico y detectar complicaciones a nivel ocular. En nuestro caso la deleción del gen PAX6 ocasionó la aniridia bilateral mientras que el gen WT1 no estaba afectado por lo que la paciente no presentará tumor de Wilms. Sin embargo, si están afectados una serie de genes del cromosoma 11 (BDNF, FSHB,DCDC1, E2P4 Y DKF7) pero desconocemos la repercusión de estas alteraciones. Por este motivo la paciente está siendo revisada periódicamente para detectar posibles alteraciones neurológicas (a la edad de 4 años si se evidencia cierto retraso psicológico a nivel del lenguaje y motor que habrá que seguir vigilando).

046

AplicAción dE lA tÉcnicA mlpA Al diAgnóstico molEculAr dE sÍndromE dE lYnch

A.M. Serrano Mira (1) , R. Fernández García (2) , M.Y. Peláez Nora (2) , G. Fernández González (1) , A. Cía González (1) , S. Borrego López (2)

(1) Hospital Juan Ramón Jiménez, Huelva; (2) Hospital Universitario Virgen del Rocío, Sevilla

introducción: El Síndrome de Lynch (SL) o cáncer de colon no polipósico hereditario (HNPCC) tiene una herencia autosómica dominante y alta penetrancia. Se caracteriza por un número escaso de adenomas y el desarrollo temprano de cáncer colorrectal (CCR) y otros tumores extra-colónicos:

endometrio, ovario, estómago, intestino delgado, tracto hepato-biliar, páncreas, tracto urinario, cerebro, próstata y piel. El SL es causado por mutaciones germinales en alguno de los genes que codifican proteínas reparadoras del ADN “MMR” (MLH1, MSH2, MSH6, PMS2). La mayoría son mutaciones puntuales, aunque hay un porcentaje pequeño debido a variaciones en el nº de copias (CNVs) de 1 o varios exones. Estas proteínas reconocen y corrigen los apareamientos incorrectos que se producen espontáneamente durante la replicación. Por lo tanto, una mutación que inactiva estos genes conduce a la acumulación de mutaciones somáticas, aumentando la probabilidad de desarrollar cáncer. Exposición del caso: Presentamos 7 familias de las 250 estudiadas en nuestra unidad, cuya causa molecular

responsable de la presentación de la enfermedad es una CNV en alguno de los genes reparadores. Las alteraciones detectadas mediante la aplicación de la técnica MLPA (Multiplex-Ligation Probe Amplification), fueron las siguientes:

• Deleción de los 6 primeros exones del gen MSH2, así como de la región terminal del gen EPCAM, conocido regulador de la expresión de MSH2 y ubicado en 5´con respecto a este.

• Deleción de los 2 primeros exones de MSH2, y de la región terminal de EPCAM.

• Deleción del exón 4 de MSH2.

• Deleción del exón 14 de PMS2.

• Deleción del exón 8 de PMS2.

• Duplicación de los exones 5-8 de MLH1.

discusión: Actualmente, los enormes avances tecnológicos han permitido conseguir notables mejoras en el diagnóstico molecular de las enfermedades hereditarias. En este sentido, la secuenciación de última generación (NGS, Next Generation Sequencing), se ha posicionado como la clara técnica de elección para la detección de mutaciones puntuales en patologías como el SL, en las que hay varios genes implicados. Sin embargo, con los presentes resultados queda evidenciado que se hace necesaria la utilización de técnicas complementarias, como el MLPA, para analizar la presencia de posibles CNVs (deleciones o duplicaciones), que no pueden detectarse por técnicas de secuenciación clásica o de última generación. El MLPA es una herramienta de diagnóstico simple, de fácil interpretación y con una alta sensibilidad y especificidad que debe ser sin duda alguna utilizada de forma complementaria a las técnicas de secuenciación para su aplicación al diagnóstico molecular de SL. La causa molecular responsable de SL en las 7 familias que presentamos, habría quedado sin identificar si no se hubiera hecho un análisis de CNVs de los genes implicados en SL. La identificación de estas deleciones/duplicaciones permitió ofrecer un adecuado consejo genético y reproductivo a las familias, así como la realización de estudios moleculares de valoración de riesgo familiar a los miembros que lo solicitaron, con las ventajas que esto implica en términos de seguimiento y terapia.

047

ArrAYcgh En AltErAcionEs dEl dEsArro- llo psicomotor. sÍndromE dE townEs- BrocKs. A propósito dE un cAso

A. Alonso Larruga, A. González Delgado, J. Cabrera Hernández, F. Díaz-Flores Estévez

Hospital Universitario de Canarias, San Cristóbal de La Laguna

introducción: El array CGH (Hibridación Genómica Comparada) es una técnica citogenética que permite detectar cambios en el número de copias (CNV) a lo largo de todo el genoma en un único ensayo experimental. Consiste en comparar el contenido genético del paciente a estudio con un individuo normal control en busca de síndromes de microdeleciones o duplicaciones conocidos o nuevos, con

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una resolución 10 veces superior al cariotipo. Se ha visto que es de utilidad en casos de pacientes con fenotipo de tipo retraso mental, rasgos dismórficos, autismo, etc.

donde el solapamiento de los síntomas clínicos dificulta el estudio dirigido de las patologías, de modo que se buscan variaciones asociadas de alguna forma a las mismas a modo de screening postnatal. Exposición del caso: Paciente varón de 9 años al que se le solicita realizar un array CGH por presentar retraso psicomotor y ponderoestatural: bajo rendimiento escolar, dificultad de concentración, dislexia y dificultad para reconocer los números (discapacidad del 66%). Se observan rasgos de dismorfología facial: pabellón auricular derecho displásico, hipoacusia de trasmisión, síndrome vertiginoso, miopía magna y retrognatia. Además presenta acabalgamiento del tercer dedo del pie izquierdo

y del primer dedo de la mano derecha, dedos pulgares

anchos, escoliosis, laxitud ligamentosa y pie plano. Ha sido sometido a cirugía por pene incurvado y presenta enuresis nocturna. Es un paciente con alergias alimentarias múltiples, asmático y ha sido ingresado por neumonía varias ocasiones. Se realizó estudio genético de déficit de A1AT obteniéndose genotipo afecto MZMS. El análisis del cariotipo fue normal. Como antecedentes familiares destacan episodios de enuresis en tío y primo y antecedentes de asma en padre. discusión: La realización del array CGH demostró la presencia de una deleción patogénica de 5’69 megabases en las citobandas 16q11.2q12.1 (chr16:46,564,357-

52,254,286), que afecta a 22 genes entre los que se encuentra

el gen SALL1. Este gen codifica un factor de transcripción

implicado en la organogénesis y el desarrollo cerebral. Su déficit se relaciona con el síndrome de Townes-Brocks. Este síndrome consiste en un trastorno genético de herencia autosómica dominante dentro de las causas genéticas raras de hipoplasia renal. Se manifiesta con dismorfias en las

orejas y pérdida de audición neurosensorial, anomalías en los dedos de los pies y de las manos (pulgares trifalángicos

o supernumerarios, aracnodactilia, etc.) y ano no perforado.

Se han descrito casos de mutaciones de novo y también de deleciones similares a las que tiene nuestro paciente. En ocasiones se presenta de forma solapada con el síndrome braquiotorenal, que incluye entre sus manifestaciones una insuficiencia renal que todavía no se ha diagnosticado en el paciente y no incluye el ano no perforado. En este caso se puso de manifiesto la mayor capacidad de los microarrays en el cribado de CNVs con respecto al cariotipo el genoma del paciente, explicando por qué se está

considerando esta técnica como una alternativa más rápida, eficaz y económicamente más rentable como método diagnóstico de primera línea en estas patologías.

048

cArActEriZAción dE lAs mutAcionEs Y vAriABlEs dE significAdo inciErto En BrcA1 Y 2 En nuEstro hospitAl

S. Romero Chala (1) , V. Moreno Carbonell (2) , J.A. García Trujillo (1) , S. Santiago González (1) , C. Cámara Hijón (1) , E. Madany Alkheder (1) , L. Fernández Pereira (1)

(1) Complejo Hospitalario, Cáceres; (2) Hospital de Mérida, Mérida

introducción: El cáncer de mama es la neoplasia más frecuente entre mujeres. El riesgo aumenta con la edad llegando hasta el 8% a los 85 años. Asimismo, es la primera causa de muerte entre las mujeres de 35 a 64 años. Uno de los principales factores de riesgo es la historia familiar. Entre un 5 y un 10% de los casos presentan un componente hereditario, atribuible a mutaciones heredadas. Se han identificado dos genes de alta penetrancia:

BRCA1 y BRCA2. objetivos: Caracterizar las mutaciones y variables del significado incierto (VSI) en BRCA1/2 en una población de riesgo del oeste de España. materiales y métodos: Se estudiaron 436 pacientes índice con historia familiar de CM y/o de CO remitidas por el Servicio de Oncología Médica sin presentar ninguno de ellos relación de parentesco entre sí. Las pacientes índice se seleccionaron de acuerdo con los criterios previamente establecidos por la American Society of Clinical Oncology. Se amplificaron los exones de BRCA1/2 y parte de sus regiones flanqueantes, mediante PCR multiplex. Después fueron secuenciadas con la técnica Sanger (secuenciador 3130x/ de Applied Biosystems). Las secuencias obtenidas se compararon con GenBank U14680 para BRCA1 y la U43746 para BRCA2. Las alteraciones genéticas observadas se anotaron siguiendo la nomenclatura HGVS. resultados: Se identificaron 35 mutaciones patogénicas diferentes, 16 en BRCA 1 y 19 en BRCA2, y 76 VSI, 29 en BRCA 1 y 67 en BRCA 2. Las 35 mutaciones patogénicas se detectaron en 43/ 436 pacientes representando una tasa de mutación del 9.86%. En ambos genes, el exón más mutado fue el 11 (11 y 10 mutaciones diferentes para el BRCA 1 y 2 respectivamente) seguido del exón 18 para el BRCA 2. De la misma manera, el exón 11 presentaba un mayor número de VSI (10 diferentes en el BRCA 1 y 9 distintas en el BRCA 2), seguidas del exón 18 en BRCA 1 (5 en total) y el exón 12 en BRCA 2 (4 en total). En los exones 17, 21, 26 no se encontraron mutaciones ni VSI. La mutación más repetida fue c.330A>G, p.R71G, BRCA 1 (4 veces) y c.3036delACAA, en BRCA 2 (3 veces). conclusiones: En nuestra población Encontramos una mayor proporción de mutaciones en BRCA2 (19/35 q es un [54%]) que en BRCA1 (16/35 constituye un [46%]), al igual que en Otras Comunidades como la Valenciana y Castilla Y León. Por el contrario, en otras poblaciones españolas son más frecuentes las mutaciones en BRCA1 Estas diferencias podrían deberse a particularidades específicas de cada población. El mayor número de mutaciones y VSI localizadas en el exón 11 puede explicarse porque es el exón de mayor tamaño de ambos genes. Conocer las mutaciones y VSI de nuestra pobl