1

Anlise Qumica Instrumental 3 quadrimestre de 2016

Calibrao dos mtodos

instrumentais.
Seleo de um mtodo analtico.
Erros e uso da estatstica em
Qumica Analtica.

A maior parte dos slides desta aula foram gentilmente cedidos pela Prof Cassiana Seimi Nomura

Escolha do mtodo
2

Deve ser escolhido a priori, para que se possa elaborar a melhor estratgia para a
obteno dos resultados analticos que permitam a soluo do problema.
Caractersticas desejveis do mtodo:
i.
Deve ser eficiente, simples e rpido.
ii.
No deve implicar em danos aos materiais nos quais as amostras sero
iii.

tratadas e analisadas.
No deve ser passvel de erros sistemticos.

iv.
v.
vi.

Seletividade deve ser previamente conhecida.

Deve possibilitar manipulao mnima.
Segurana operacional.

vii. Confiabilidade metrolgica.

viii. Deve ser validado.

Como a concentrao determinada via

um mtodo clssico?

Necessidade de um padro qumico !!!

Comparao direta
(mtodo direto)

MTODOS PRIMRIOS
4

Definio de mtodo primrio segundo a CCQM

(Consultative Committee for Amount of Substance )

Mtodo primrio aquele mtodo de medio com a mais elevada qualidade

metrolgica, cuja execuo pode ser completamente descrita e entendida, para o
qual a incerteza total pode ser expressa em termos do Sistema Internacional de
Unidades (SI).
Mtodo primrio direto: mede o valor de um mensurando sem referncia a um
padro da mesma grandeza.
Mtodo primrio de razo: mede a razo entre a quantidade de uma
substncia desconhecida e a quantidade do padro; sua execuo deve ser
descrita por completo atravs de uma equao representativa da medio.

MTODOS PRIMRIOS
5

Mtodos primrios reconhecidos pela CCQM

Gravimetria.
Titrimetria.
Coulometria.
Espectrometria de massa por diluio isotpica.
Abaixamento do ponto de congelamento.
Anlise por ativao neutrnica Instrumental (Abril 2007).

Como a concentrao determinada via

um mtodo instrumental?
(mtodo relativo)

Obteno de uma curva

de calibrao ou curva
analtica

Curva calibrao mostra a

resposta de um mtodo
analtico para quantidade
conhecidas de analito

Sinal Instrumental
(Sinal Analtico)

Utilizao de um
padro ou soluo
analtica

Concentrao do analito

Sequncia Analtica
7

Definio do problema.
Escolha ou desenvolvimento do mtodo.
Amostragem.
Preparo da amostra.
Calibrao.
Medida.
Avaliao dos resultados.
Ao .

AMOSTRAGEM
8

Processo de se selecionar ou remover uma pequena,

representativa e suficiente parte de um todo, a partir
da qual ser feita a anlise.

C. S. Nomura, C. S. Silva, P. V. Oliveira, Qumica Nova, 31 (2008) 104-113

AMOSTRAGEM
9

Amostra: poro que representa o todo (sample).

Sub-amostra: amostra levada para o laboratrio de
anlise (subsample).
Amostra para anlise: amostra preparada no
laboratrio de anlise (test sample).
Alquota para anlise: material pesado ou selecionado
para a anlise (test portion).

W. Horwitz, Nomenclature for sampling in Analytical Chemistry, IUPAC, Pure Appl.

Chem, 62 (1990) 1193-1208

AMOSTRAGEM
10

Amostragem adequada

AMOSTRAGEM
11

Massa de amostra
X
Homogeneidade

Quando a amostra subdividida em

pores menores, ela tende a se
tornar cada vez mais heterognea,
pois a probabilidade estatstica em
encontrar a mesma concentrao
mdia baixa

M. Roosbach, P. Ostapzuk, H. Emons, Fres. J. Anal. Chem 260 (1998) 380-383

C. S. Nomura, C. S. Silva, P. V. Oliveira, Quimica Nova, 31 (2008) 104-113

AMOSTRAGEM
12

Cuidados importantes:
A alquota dever representar a amostra laboratorial,
para garantir que a alquota seja homognea,
necessrio reduzir o tamanho das partculas,
no dever haver segregao dos constituintes da
amostras durante a seleo da alquota,
devem-se prever riscos de contaminao.

Preparo de amostra e Qualidade

13

Os erros totais de uma anlise qumica so devidos, em muitos

casos, s tarefas realizadas na etapa de pr-tratamento.
O pr-tratamento das amostras pode representar at 99% do
tempo total de uma anlise (61% em mdia).
A etapa de preparao pode representar mais de 90% dos
custos analticos.
O tempo necessrio para se concluir uma anlise devido ao
pr-tratamento pode variar de 1 minuto a 48 horas.

PR-TRATAMENTO DA AMOSTRA
14

oportuno observar que, entre todas as

operaes analticas, a etapa de pr-tratamento
das amostras a mais crtica. Em geral, nessa
etapa que se cometem mais erros e que se gasta
mais tempo. tambm a etapa de maior custo.

CALIBRAO DOS MTODOS

INSTRUMENTAIS
15

A calibrao determina a relao entre a resposta analtica

e a concentrao do analito.

Em geral determinada com o uso de padres qumicos.

Submeter quantidades conhecidas do analito a um mtodo
de medida (por exemplo, um mtodo primrio) e
monitorar as medidas obtidas.
Padres para calibrao:
soluo de referncias.
materiais de referncia certificado.

Mtodo dos quadrados mnimos

16

Holler, Skkog, Crouch. Fig. 1-8.

A anlise de regresso
permite
a
obteno
objetiva da melhor linha
reta.

As
incertezas
esto
relacionadas
com
os
resduos,
os
quais
representam uma medida
da distncia entre os
pontos dados e a melhor
linha reta.

Calibrao com padres externos

17

Determinao de um analito em uma amostra

Sinal
Analtico

Sinal
corrigido

0
0,5
1
2
4
6

0,00951
0,0521
0,1113
0,1996
0,4110
0,6078

0
0,04259
0,10179
0,19009
0,40149
0,59829

Padres externos so empregados para se

calibrar instrumentos e procedimentos quando
no h efeitos interferentes advindos dos
componentes da matriz presentes na soluo do
analito.

0,6
0,5
0,4

Sinal Analtico

Concentrao
(mg l-1)

O branco analtico
tem um papel
muito importante!

0,3
0,2
Equation

y = a + b*x

Adj. R-Square

0,1

0,99946
Value

0,0
0

Intercept

Slope

Concentrao (mg l -1)

Standard Error

-0,00341

0,00322

0,10035

0,00104

Calibrao com padres externos

18

Sinal

5y
4y

Amostra
desconhecida

3y
2y
y

0
Padres com
concentrao
conhecida

2x

3x

4x

5x

Concentrao

Erros na calibrao com padres externos

19

Efeitos de matriz, devido s espcies estranhas

presentes nas amostras, mas que no esto presentes
nos brancos ou padres.
Diferenas nas variveis experimentais.
Erros de medida devido contaminao durante a
amostragem ou as etapas de preparao das amostras.
Erros sistemticos podem ocorrer se o padro for
preparado de forma incorreta.

Mtodo de Adio de Padro

20

Adicione x mL da amostra desconhecida.

Adicione volumes conhecidos do padro.

Complete os volumes e homogeinize a soluo.

Mtodos de Adio de Padro

Sinal Analtico

21

Concentrao do
analito na amostra
|C|

Mtodos particularmente
teis quando na anlise de
amostras complexas nas
quais os efeitos de matriz
so significativos.

Concentrao do analito

Mtodo do Padro Interno

22

Padro interno uma substncia adicionada

em uma quantidade constante na amostra, no
branco e nos padres de calibrao de uma
anlise.
Na calibrao: construo de curva analtica
da razo entre o sinal do analito e o sinal do
padro interno em funo da concentrao do
analito nos padres.
Dificuldade:
encontrar
uma
substncia
adequada para servir como padro interno e
introduzi-la nas amostras e padres de forma
reprodutvel.

Holler, Skkog, Crouch. Fig. 1-12.

Exemplo: ltio como padro interno na

determinao de sdio no soro sanguneo:
comportamento similar ao sdio, mas no
ocorre naturalmente no sangue.

SELEO DO MTODO ANALTICO

23

Necessrio definir a natureza do problema analtico:

Qual a exatido
necessria?
Qual a faixa de
concentrao do analito?
Qual a
seletividade do
mtodo?

Quais so as propriedades
fsicas e qumicas da matriz
da amostra?

Quanto tempo e
cuidado sero
necessrios?

Qual a quantidade de
amostra disponvel?
Quais componentes da
amostra podem causar
interferncia?
Qual o
mtodo?

Qual a
sensibilidade
que o
mtodo deve
apresentar?

Ponto de vista
econmico.

Quantas amostras devem ser

analisadas?

Caractersticas de desempenho dos

instrumentos
24

Holler, Skkog, Crouch. Tab. 1-3

Critrios quantitativos de desempenho dos instrumentos para auxiliar na escolha do

mtodo. Caractersticas expressas em termos numricos FIGURAS DE MRITO.

Critrio

Figuras de Mrito

1. Preciso

Desvio padro absoluto, desvio padro

relativo, coeficiente de variao, varincia.

2. Vis

Erro absoluto sistemtico, erro relativo

sistemtico.

3. Sensibilidade

Sensibilidade da calibrao, sensibilidade

analtica.

4. Limite de
deteco

Branco mais trs vezes o desvio padro do

branco.

5. Faixa dinmica

Limite de quantificao expresso em

concentrao (LDQ) at a concentrao
limite da linearidade (LDL)

6. Seletividade

Coeficiente de seletividade.

Outras caractersticas a serem consideradas na

escolha de um mtodo
25

Velocidade.

Facilidade de convenincia.

Habilidade requerida do operador.

Custo e disponibilidade do equipamento.

Custo por amostra.

Figuras de mrito para a preciso dos mtodos analticos

26

Desvio padro absoluto, s

Desvio padro relativo (DPR ou

RSD)
Erro padro da mdia, sm

Coeficiente de variao (CV)

Varincia, s2
Holler, Skkog, Crouch. Tab. 1-5.

SENSIBILIDADE
27

0,6
Equation

0,5

Sinal Analtico

y = a + b*x

Adj. R-Square

0,99946

0,99946
Value

0,4

Intercept

Slope

Intercept

Slope

Standard Error

-0,00341

0,00322

0,10035

0,00104

-0,00171

0,00161

0,05017

5,21249E-4

0,00104

0,3

0,0005212

0,2
0,1
0,0
0

Concentrao (mg

l -1)

Dois
fatores
limitam
a
sensibilidade:
a
inclinao
da
curva
de
calibrao e a
reprodutibilidade
ou preciso do
dispositivo
de
medida.

S = mc + Sbr

SENSIBILIDADE
28

Sensibilidade = a capacidade de responder de forma confivel e mensurvel s

variaes de concentrao do analito.

FAIXA DINMICA OU FAIXA LINEAR

Resposta do instrumento

29

Holler, Skkog, Crouch. Fig. 1-13.

LIMITE DE DETECO
30

a menor quantidade de analito que

significativamente diferente de um branco.
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Mdia
SD

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Sinal Analtico
0,00128
0,00116
0,00234
0,00821
0,00367
0,00169
0,00246
0,00652
0,00587
0,00544
0,003864
0,002355764

Sinal

Concentrao do analito

3
LD
S
Sinal 3 vezes maior que o rudo detectvel

Limite de Quantificao, LOQ

31

a menor quantidade de analito que pode ser

medida com razovel exatido
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Medida
Mdia
SD

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Sinal Analtico
0,00128
0,00116
0,00234
0,00821
0,00367
0,00169
0,00246
0,00652
0,00587
0,00544
0,003864
0,002355764

Sinal

10
LQ
S

Concentrao do analito

Sinal 10 vezes maior que o rudo quantificvel

Robustez
32

a capacidade de um mtodo analtico no ser afetado por

pequenas variaes, deliberadamente feitas, nos parmetros de
operao.
Tambm chamada de preciso intermediria, a variao
observada quando um ensaio feito por pessoas diferentes, em
instrumentos diferentes, em dias diferentes, mas em um mesmo
laboratrio.

Seletividade
33

Seletividade

Exatido

Interferncia

Capacidade de produzir resultados exclusivamente relacionados ao analito na

sua identificao/quantificao na amostra

Interferncia
34

Qumica
Fsica
Instrumental

Positivo
Negativo

Origem

Efeito

Interferncia

Mecanismo
O mesmo
Diferente

Efeito
Aditivo
Proporcional
Mltiplo

Como reconhecer uma interferncia

35

Mtodo das diluies

Amostra

Sinal analtico Sinal analtico

Sem diluio

0,100

0,100

Diluio 2x

0,050

0,099

Diluio 4x

0,025

0,050

Diluio 10x

0,010

0,010

H
interferncia

No h
interferncia
No h interferncia

Como reconhecer uma interferncia

Comparao das curvas de calibrao em
meio aquoso e na presena de matriz

36

Calibrao em meio aquoso

Padro
Sinal

branco

2X

3X

4X

X-b

2X-b

3X-b

4X-b Calibrao em meio da amostra

Padro
Sinal

branco

2X

3X

4X

X-a

2X-a

3X-a

4X-a

Como reconhecer uma interferncia

Comparao das curvas de calibrao em
meio aquoso e na presena de matriz

37

Meio aquoso

No h interferncia

Sinal Analtico

Sinal Analtico

H interferncia

Meio aquoso
Meio da amostra

Meio da amostra

Concentrao do analito

Concentrao do analito

Como reconhecer uma interferncia

38

Testes de adio e recuperao

Padro 10 g l-1

0,025

0,025

Amostra

0,100

0,100

Amostra + Padro10 g l-1

0,125

0,100

No h
interferncia

H
interferncia

Quantidade de analito na Amostra

39

Classificao de anlises qumicas com base na massa

de amostra disponvel para anlise
0,001 g

Ultra-micro
analysis

0,01 g

Micro
analysis

0,1 g

Semi-micro
analysis

Macro
analysis

Valcrcel, Fig. 1.23

Quantidade de analito na Amostra

40

Classificao de anlises qumicas com base na

concentrao de analito na amostra

0,01 %

Traos

1%

Micro
componentes

Macro
componentes

Determinaes

Valcrcel, Fig. 1.24

ERROS
41

Grosseiro: Erro grave que no deixa outra alternativa a no ser

reiniciar todo o experimento .
Ex: quebra dos instrumentos, perda acidental da amostra, uso de
reagentes inapropriados.
Em geral, so facilmente reconhecidos.

Sistemtico ou determinado: afeta a exatido dos resultados

Ocasionados, principalmente, pela insuficiente qualificao do
analista e/ou inadequada infraestrutura laboratorial
Ex: Contaminao da amostra, erro no preparo dos padres.
Aleatrio ou indeterminado: afeta a preciso dos resultados.
Ex: erro instrumental.

ERROS
42

A confiabilidade de um resultado depende

mais de quem o produz do que como obtido.
No existem maus mtodos, mas apenas maus
analistas que no atentam para suas prprias
limitaes.
S. Abbey, Anal. Chem., 53 (1981) 529A

Preciso X Exatido
43

Processo
analtico

RESULTADOS
^
XA

Erros
Aleatrio

Propriedades Analticas
Sistemtico

Exatido

Alto

Alto (-)

Baixo

Baixo

Baixo

Alto (-)

Baixo

Alto

Alto

Baixo

Alto

Baixo

Baixo

Baixo

Alto

Alto

Preciso

^
X

^
XB

B
^
XC

C
^
XD

Preciso X Exatido
44

Impreciso e inexato

Impreciso e exato

Preciso e inexato

Preciso e exato

Ferramentas da Estatstica
45

Distribuio Gaussiana.

Teste t.

Teste Q.

Teste F.

Validao do mtodo
46

A validao do mtodo o processo que prova que um

mtodo analtico aceitvel para os propsitos a que ele
se destina. Na qumica farmacutica, por exemplo, as
exigncias da validao de um mtodo para submisso ao
rgo adequado incluem estudos da especificidade do
mtodo, linearidade, exatido, preciso, faixa linear, limite
de deteco, quantificao e robustez.