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ralentissent davantage la lumire laquelle sera dphase par rapport la lumire traversant une rgion de la
cellule dont lindice de rfraction est peu lev. Le degr de dphasage entre les diffrentes ondes
lumineuses recombines va rsulter en une lumire plus ou moins intense.
E/ Microscope lectronique transmission
Le principe de la microscopie lectronique est de concentrer un faisceau dlectrons sur le spcimen
biologique. Les lectrons qui frappent le spcimen biologique sont plus ou moins diffracts par les diverses
structures cellulaires selon leur densit. Les lectrons qui ne sont pas diffracts sont dirigs sur un cran qui
produit alors une image alors que les lectrons diffracts natteignent pas lcran ce qui va rsulter en une
zone sombre sur lcran. Une lentille lectromagntique condenseur concentre le faisceau dlectron sur le
spcimen biologique. Des lentilles objectifs et une lentille projecteur concentrent les lectrons sur un cran.
F/ Microscope lectronique balayage
Le microscope lectronique balayage donne des images de la surface des objets. Le spcimen
biologique est pralablement vaporis avec un mtal lourd tel que le platine avant dtre dispos dans le
microscope lectronique puis balay par un faisceau dlectrons. Les molcules de mtal recouvrant le
spcimen sont alors excites et mettent des lectrons secondaires qui sont concentrs sur un dtecteur
scintillation. Le signal rsultant est envoy vers un tube cathodique et observ sur un cran. On peut obtenir
une vue tridimensionnelle du spcimen biologique.
II- Les techniques de prparation des tissus pour la microscopie
Microscopie optique
Techniques de fixation-inclusion-coupe-coloration
La fixation conserve la structure des cellules. Les fixateurs (thanol; formol...) crent des liaisons
chimiques trs stables entre les molcules de la cellule et en empchent la dgradation. Les tissus ou organes
fixer sont plongs dans le fixateur. Les tissus fixs, aprs lavage puis dshydratation par lalcool sont
inclus dans la paraffine. Linclusion permet la ralisation de coupes fines qui se font grce un microtome.
Les coupes sont tales et colles leau glatine sur une lame de verre, puis sches ltuve pour tre
ensuite colores.
Microscopie lectronique
La fixation des prlvements se fait dans des fixateurs (paraformaldhyde, glutaraldhyde). Elle
est suivie dune post fixation dans du ttroxyde dosmium pour stabiliser les lipides. Les objets sont ensuite
rincs puis dshydrats et inclus dans des rsines. Le bloc de rsine contenant lobjet est taill, plac dans un
porte-bloc de lultramicrotome. Les coupes ultrafines (90nm dpaisseur) sont traites par des sels de
mtaux lourds (actate duranyle, citrate de plomb) qui se fixent prfrentiellement sur certaines structures.
Les sels fixs absorbent plus ou moins les lectrons et renforcent le contraste de limage obtenue sur lcran
fluorescent.
III- Lhistochimie
Lhistochimie est ltude de la composition chimique des cellules, des divers tissus vivants et des
ractions chimiques cellulaires et tissulaires au cours des processus mtaboliques.
Les techniques histochimiques permettent de colorer des groupes chimiques, de localiser des
enzymes, dtudier les fonctions cellulaires, de connaitre la rpartition des acides nucliques, des protines,
des lipides, des glucides dans la cellule,.
dimensions. Ainsi, selon lespacement et la disposition des atomes dans une molcule, les rayons X seront
dvis de manire diffrente. Cette mthode de diffraction aux rayons X a notamment permis de dterminer
la structure en double hlice de la molcule dADN.