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INTRODUCCIN
La hemoglobina es una protena conjugada, la cual proporciona el color rojo de la
sangre. Se encarga de llevar el oxgeno a los tejidos y participa en el transporte
del CO2 para el equilibrio cido-base. La porcin porfirnica de la hemoglobina es
una protoporfirina IX, la cual combinado con Fe(II) constituye el grupo heme; este
ms la parte proteica (globina) constituye la hemoglobina.
Existe una amplia variedad de tcnicas para cuantificar a la hemoglobina, entre las
que destacan: determinacin de su contenido de Fe, espetrofotometra,
refractometra, gasometra, etc.
El mtodo de cianometahemoglobina es el mtodo recomendado por el Comit
Internacional para la Estandarizacin en Hematologa y las ventajas que ofrece
este mtodo son:
Existen soluciones estndar certificadas de cianometahemoglobina (HbCN) con
una estabilidad mayor de un ao.
El espectro de absorcin de (HbCN) permite efectuar lecturas en la regin del
visible en cualquier tipo de fotmetro ya que representa un mximo de 540 nm y
las soluciones de (HbCN) siguen la ley de Beer a esta longitud de onda.
FUNDAMENTO
El Fe (II) es oxidado a Fe(III) por accin del ferricianuro y por lo tanto la
hemoglobina se convierte en metahemoglobina, la cual se combina con cianuro
para producir la cianometahemoglobina (CNHb) que es estable y se puede medir
en la regin de 530-550 nm. La hemoglobina, oxihemoglobina, metahemoglobina y
carboxihemoglovina es decir todas las formas de hemoglobina y presentes son
transformadas en cianometahemoglobina excepto la sulfohemoglobina.
OBJETIVOS:
PROCEDIMIENTO
Material:
Tubos de ensayo de 13x100 mm
Pipetas de 1.0 mL
Pipetas de 5.0 mL
Pipetas de Sahli (0.02 mL)
Boquilla
Gradilla
Celdas de 1 cm de dimetro
Material biolgico:
Sangre capilar o venosa con anticoagulante.
Equipo:
Espectrofotmetro o fotmetro
Reactivos:
Solucin de EDTA al 10%
Reactivo de Drabkin
Solucin estndar de cianometahemoglobina 80 mg/gl
Etanol al 70%
Toxicidad se sustancias:
El reactivo de Drabkin y la solucin estndar de (HbCN) contiene derivados de
cianuro los cuales son txicos; sin embargo; las concentraciones de estos estn
por debajo de la dosis letal referido a un litro de solucin. Se recomienda utilizar
perillas de seguridad para pipetear estas soluciones y no ingerir alimentos durante
la prctica; al finalizar la determinacin es necesario lavarse las manos.
Tcnica
B
Solucin
estndar de
(HbCN)(mL)
Reactivo de
Drabkin
mL
Concentraci
n g/dl
Moles/L
Curva Estndar
1
2
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0.0
Valores de referencia.
Hombres
Mujeres
15.4-17.6 g/dl
13.6-15.6 g/dl
VALOR DE HEMATOCRITO
INTRODUCCIN
El hematocrito representa la proporcin de glbulos rojos en la sangre circulante.
Este valor depende de nmero de hemates de sangre perifrica, de la forma y
tamao de los mismos. Al igual de la hemoglobina y la cuenta de eritrocitos, el
hematocrito es uno de los parmetros importantes para determinar los ndices
eritrocticos (VGM, CMHG).
FUNDAMENTO
El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresado como un porcentaje del
volumen de sangre total existente en una muestra. Es determinado en sangre
anticoagulada por medio de centrifugacin y es expresado como volumen de
eritrocitos por unidad de volumen.
OBJETIVOS:
PROCEDIMIENTO
Material:
Tubos de ensayo de 13x100 mm
Tubos de Wintrobe graduado
Pipetas Pasteur con bulbo
Capilares
Plastilina
Material biolgico:
Sangre capilar o venosa con anticoagulante
Equipo:
Centrfuga
Disco lector de hematocrito.
Reactivos:
Anticoagulante EDTA al 10%
Tcnica Macrohematocrito:
a) Homogenizar perfectamente la muestra de sangre.
b) Con una pipeta Pasteur llenar con sangre un tubo de Wintrobe hasta la
marca superior 10, evitar la formacin de espuma, no debe quedar ninguna
burbuja de aire dentro de la columna o en el fondo.
c) Centrifugar a 3600 rpm durante 30 minutos.