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Ncleo Bolvar
Escuela de Ciencias de la Salud
Virologa
INMUNOFLUORESCENCIA
Prof:
Alumna:
Angelica Farreras.
Farfn Luimore
C.I: 25.493.050
El
proceso
consta
de
dos
etapas:
Primera etapa: se fijan sobre un portaobjetos los antgenos que constituyen el
substrato conocido especfico (clulas que contiene virus, T. gondii, T. pallidum,
etc.) sobre l se coloca el suero de quien se sospecha la presencia de
FLUOROCROMOS
Sustancias que emiten un fotn cuando son excitados por un fotn incidente.
Formen uniones con las protenas (Ac) pero sin afectar los grupos de
combinacin
especfica
del
anticuerpo.
El pH afecta la fluorescencia y por esta razn se debe trabajar a pH estable y
adecuado dependiendo del colorante: fluorescena (pH 8), rodamina (pH 7),
DANS (pH 1.6-14)
VENTAJAS
Se
pueden
obtener
resultados
rpidos.
-No
es
necesario
realizar
cultivos.
-Se puede identificar microorganismos especficos en un grupo mixto.
-Determina
la
identidad
de
un
organismo
muerto.
-Es sensible.
DESVENTAJAS
-Costos
en
reactivo
y
equipo
-Debe
ser
realizado
por
personal
muy
especializado.
-Los resultados no son 100% especficos (como toda tcnica serolgica).
1.
2.
pasos de amplificacin de la va clsica del complemento,una molcula de Ac puede fijar muchas molculas de
C3b al Ag, que se revelan con Acanti C3b fluoresceinado. Es una tcnica mucho ms sensible.En los tres casos,
los IC formados se ponen de manifiesto por observacin del porta enun microscopio provisto de luz ultravioleta
(los Ac se ven con fluorescencia verde). Elpatrn de fluorescencia es caracterstico de cada Ag.3. HISTOQUMICA
Y CITOQUMICAHistoqumica es el estudio qumico de los tejidos independientemente del mtodo deanlisis
empleado. En la prctica se emplea la palabra para designar el mtodo juntocon el auxilio de los microscopios
pticos (MO) y electrnico (ME).Esta tcnica permite la identificacin y localizacin de compuestos o radicales
qumicosen las clulas y tejidos. Esto se consigue provocando reacciones que dan productosinsolubles que son
coloreados o electrodensos y visibles por el MO y el ME
3. PREPARACIN
DE
LA
MUESTRA
(1)
4.
por
dilisis
de
las
sales
para
eliminar
las
sustancias
5.
6.
7.
sin
que
Es
pierda
preferible
trabajar
con
sus
cortes
antgenos.
fijados
ya
que.la
tincin
9.
son
excitados
por
un
fotn
incidente.
Se deben utilizar colorantes que formen uniones con las protenas pero
sin afectar los grupos de combinacin especfica del anticuerpo. La reaccin
de unin ocurre entre los grupos amino y carboxilo de la protena y los
grupos tiocianato o cloruro de sulfonilo de los colorantes. El fenmeno de
fijacin disminuye la fluorescencia de los fluorocromos de tal manera que los
conjugados solo muestran de 15-30% de la fluorescencia del colorante libre.
El pH afecta la fluorescencia y por esta razn se debe trabajar a pH
estable y adecuado dependiendo del colorante : fluorescena (pH 8), rodamina
(pH
7),
DANS
(pH
1.6-14)
(1).
El
isocianato
fluorescencia verde
de
fluorescena
manzana bajo
la
rodamina anarajando
el
luz
DANS
muestran
ultravioleta
una
la
brillante (1).
se
define
como fluorescencia.
10.VENTAJAS Y DESVENTAJAS
11. VENTAJAS
-
Se
-No
pueden
obtener
es
resultados
necesario
rpidos.
realizar
cultivos.
la
identidad
sensible.Nota:
La
figura
de
un
muestra
un
organismo
ejemplo
de
muerto.
fagocitosis.
12. DESVENTAJAS
-Costos
-Debe
en
ser
reactivo
realizado
por
personal
muy
equipo
especializado.
13.APLICACIONES
Esta tcnica tiene mltiples
aplicaciones en diagnstico e
investigacin. Se ha utilizado
en
estudios
bacteriolgicos,
de
la
imagen.
17.
los
materiales
cuya
organizacin
cristalina
es
diferente
como
nicoles estaban
La
figura
muestra
un
ejemplo
de
fagocitosis.