PRACTICA 5.

DETERMINACION DE ENZIMA EN SUERO

ESTUDIANTES
RAFAEL DE LA ASUNCIN
LIZMETH CALDERN
AMANDA CAMARGO

PROFESOR
DRA. CARMIA L. VARGAS Z.

UNIVERSIDAD DEL ATLNTICO

FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA
ASIGNATURA: BIOQUMICA-LABORATORIO- SEMESTRE III

OCTUBRE 2016

INTRODUCCION
En bioqumica, se llaman enzimas a las sustancias de naturaleza proteica que catalizan
reacciones qumicas, siempre que sea termodinmicamente posible (si bien no pueden hacer
que el proceso sea ms termodinmicamente favorable). En estas reacciones, las enzimas
actan sobre unas molculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en diferentes
molculas, los productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que
ocurran en tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina
reacciones enzimticas. Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus
sustratos y su velocidad crece slo con algunas reacciones de entre otras posibilidades, el
conjunto (set ) de enzimas sintetizadas en una clula determina el metabolismo que ocurre
en cada clula. A su vez, esta sntesis depende de la regulacin de la expresin gnica.
Todas las reacciones metablicas que ocurren en nuestro organismo se hayan mediados por
enzimas, debido a esto se explicar durante el desarrollo de este informe de forma clara lo
concerniente a la determinacin de enzimas en el suero sanguneo, as mismo se mostrar
el proceso ejecutado para llegar a los resultados finales y se concluir con la comparacin
de los resultados obtenidos de diferentes pacientes con el objetivo de establecer posibles
causas de dichos resultados.

OBJETIVO GENERAL
Determinar las enzimas en suero de una muestra de un paciente
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Determinar la actividad de la enzima GPT y GOT en suero humano.
Conocer los valores referencias y compararlos con los valores obtenidos en la
practica
Analizar los resultados obtenidos y conocer el significado clnico.

MARCO TERICO.
Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones qumicas,
siempre que sean termodinmicamente posibles: una enzima hace que una reaccin qumica
que es energticamente posible, pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea
cinticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la
enzima. En estas reacciones, las enzimas actan sobre unas molculas
denominadas sustratos, las cuales se convierten en molculas diferentes denominadas
productos. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran a unas
tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las
denomina reacciones enzimticas.
Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad
crece solo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas presentes en
una clula determina el tipo de metabolismo que tiene esa clula. A su vez, esta presencia
depende de la regulacin de la expresin gnica correspondiente a la enzima.
Prcticamente todas las reacciones qumicas que tienen lugar en los seres vivos estn
catalizadas por enzimas. Los enzimas son catalizadores especficos: cada enzima cataliza
un solo tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo muy
reducido de ellos. En una reaccin catalizada por un enzima:
1

La sustancia sobre la que acta el enzima se llama sustrato.

El sustrato se une a una regin concreta del enzima, llamada centro activo. El
centro activo comprende (1) un sitio de unin formado por los aminocidos que
estn en contacto directo con el sustrato y (2) un sitio cataltico, formado por los
aminocidos directamente implicados en el mecanismo de la reaccin

Una vez formados los productos el enzima puede comenzar un nuevo ciclo de
reaccin

1.- El enzima
sustrato

su 2.- Unin
activo

al

centro 3.Formacin
productos

de

Los enzimas, a diferencia de los catalizadores inorgnicos catalizan reacciones especficas.

Sin embargo hay distintos grados de especificidad. El enzima sacarasa es muy especfico:
rompe el enlace b-glucosdico de la sacarosa o de compuestos muy similares. As, para el
enzima sacarasa, la sacarosa es su sustrato natural, mientras que la maltosa y la
isomaltosa son sustratos anlogos. El enzima acta con mxima eficacia sobre el sustrato
natural y con menor eficacia sobre los sustratos anlogos. Entre los enzimas poco

especficos estn las proteasas digestivas como la quimotripsina, que rompe los enlaces
amida de protenas y pptidos de muy diverso tipo.
Una molcula de enzima no tiene por qu actuar siempre a la misma velocidad. Su
actividad puede estar modulada por:
cambios en el pH
cambios en la temperatura
presencia de cofactores
las concentraciones del sustrato y de los productos finales
presencia de inhibidores
modulacin alostrica
modificacin covalente
activacin por proteolisis
isoenzimas
La aspartato aminotransferasa , antes conocida como transaminasa glutmicooxalactica (GOT)
y
tambin
llamada aspartato
transaminasa (AST),
es
una enzima aminotransferasa que se encuentra en varios tejidos del organismo de los
mamferos, especialmente en el corazn, el hgado y el tejido muscular. Se encuentra en
cantidades elevadas en el suero en casos de infarto agudo de miocardio,
de hepatopata aguda y de miopatas, por el empleo de determinados frmacos y en casos de
cualquier enfermedad o trastorno en donde las clulas resulten daadas gravemente.
La concentracin de la AST se eleva en cualquier situacin que exista dao heptico y dao
pulmonar. Tambin se encuentra presente en los hemates, en el miocardio, en el msculo
esqueltico, en el rin y en el cerebro, por lo cual, ante la presencia de dao en cualquiera
de estos sitios, tambin elevar su concentracin srica. La AST se defini como marcador
bioqumico para el diagnstico de infarto agudo de miocardio en 1954. Sin embargo, su uso
como marcador ha quedado obsoleto debido a la mayor sensibilidad y precocidad de la
elevacin de la concentracin de las troponinascardacas. La AST forma parte del perfil
heptico que se realiza en la clnica con el fin de evaluar la funcin del hgado.
Es un examen que mide el nivel de la enzima AST en la sangre.
Forma en que se realiza el examen
Se necesita una muestra de sangre.
Razones por las que se realiza el examen
La AST es una enzima que se encuentra en altas concentraciones en el hgado, el corazn y
los msculos. Tambin se puede encontrar en menores cantidades en otros tejidos. Una
enzima es una protena que causa un cambio qumico especfico en el cuerpo.
Este examen se hace principalmente junto con otras pruebas (como
la ALT, ALP y bilirrubina) para diagnosticar y vigilar la enfermedad heptica.
Resultados normales
El rango normal es:
Hombres: 10 a 40 UI/L
Mujeres: 7 a 35 UI/L
Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios.
Algunos laboratorios usan diferentes medidas o pueden evaluar diferentes muestras. Hable

con su proveedor de atencin mdica acerca del significado de los resultados especficos de
su examen.
Significado de los resultados anormales
Un incremento en el nivel de ALT generalmente es seal de una enfermedad heptica. Esta
enfermedad es incluso ms probable cuando los niveles de sustancias analizadas en
otras pruebas de la funcin heptica tambin se han incrementado:
Un incremento en el nivel de ALT puede deberse a:
Cicatrizacin del hgado (cirrosis)
Muerte del tejido del hgado
Hgado hinchado e inflamado (hepatitis)
Demasiado hierro en la sangre (hemocromatosis)
Demasiada grasa en el hgado (hgado graso)
Falta de flujo sanguneo al hgado (isquemia heptica)
Tumor o cncer del hgado
Uso de medicamentos hepatotxicos
Mononucleosis ("mono")
Hinchazn e inflamacin del pncreas (pancreatitis)
Riesgos
Extraer una muestra de sangre implica muy poco riesgo. Las venas y las arterias varan en
tamao de un paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro, razn por la cual extraer sangre
de algunas personas puede ser ms difcil que de otras.
Otros riesgos asociados con la extraccin de sangre son leves, pero pueden ser:
Sangrado desde donde se introdujo la aguja.
Desmayo o sensacin de mareo.
Hematoma (acumulacin de sangre debajo de la piel).
Infeccin (infrecuente).
La alanina aminotransferasa (ALT), anteriormente conocida como transaminasa
glutmico-pirvica (GPT),
tambin
llamada alanina
transaminasa (ALT),
es
una enzima aminotransferasa con gran concentracin en el hgado y en menor medida en
los riones, corazn y msculos.
Cuando hay una lesin de estos rganos la ALT es liberada a la sangre y aparece elevada en
los anlisis.
Como es una aminotransferasa ms especficamente heptica que la aspartato
aminotransferasa (AST), aparece ms elevada en las enfermedades hepticas que en otras,
por eso el cociente AST/ALT (o GOT/GPT) ser menor de 1 en ciertas enfermedades
hepticas como la hepatitis vrica. Al contrario aparece mayor de 1 en enfermedades
crnicas como la cirrosis heptica, enfermedad heptica alcohlica, congestin heptica o
tumores hepticos.
Los valores normales de ALT es 7 a 33 U/L en mujeres y entre 8 y 50 U/L en hombres,
aunque tambin depende del criterio del laboratorio.

La enzima cataliza la transferencia de un grupo amino desde la alanina al alfa-cetoglutarato,

los productos de esta transaminacin reversible son piruvato y glutamato.
La prueba de ALT se suele realizar como una parte del estudio general de la funcin
heptica, que tambin incluye el anlisis de otras enzimas hepticas. La determinacin de la
concentracin de ALT junto con las de otras enzimas hepticas (como la aspartato
aminotransferasa, o AST, y la fosfatasa alcalina, o ALP) proporcionan a los mdicos una
informacin ms especfica sobre los problemas hepticos.
Preparacin
Para someterse a esta prueba, no es necesario realizar ningn tipo de preparacin. Usted
debera informar con antelacin al pediatra sobre los medicamentos que est tomando su
hijo, ya que hay algunos medicamentos pueden alterar los resultados de esta prueba.
Si el da en que le hagan el anlisis de sangre su hijo lleva camisa o camiseta de manga
corta, har las cosas ms fciles y ms rpidas al personal tcnico que le haga la extraccin.
El procedimiento
Por lo general, un profesional de la salud ser quien se encargue de hacer la extraccin de la
sangre desde una vena. Si se trata de un lactante, se puede obtener la sangre practicando
una pequea puncin en el taln del beb utilizando una aguja pequea denominada
lanceta. Si la extraccin de sangre se realiza desde una vena, se limpia la superficie de la
piel con un antisptico y se coloca una goma elstica (que hace de torniquete) en la parte
superior del brazo para ejercer presin y conseguir que las venas se hinchen y se llenen de
sangre. A continuacin, se inserta una aguja en el interior de una vena (generalmente en la
cara interna del codo o en el dorso de la mano) y la sangre se extrae y se recoge en un vial o
en una jeringuilla.
Despus del procedimiento, se retira la goma elstica. Una vez recogida la sangre, se extrae
la aguja, se cubre la zona con un trocito de algodn para detener el sangrado y se coloca
una tirita o pequeo vendaje a continuacin. La extraccin de sangre para llevar a cabo esta
prueba slo dura unos pocos minutos.

Qu esperar
Cualquiera de los dos mtodos que se utilizan para extraer muestras de sangre (sea
punzando el taln o pinchado la vena) provoca molestias de carcter temporal y lo nico
que siente el paciente es un breve pinchazo. Despus de la extraccin, es posible que
aparezca un pequeo moretn, que debera desaparecer al cabo de pocos das.
Obtencin de los resultados

La muestra de sangre se procesar utilizando una mquina. Los resultados se suelen

entregar al cabo de pocas horas o bien al da siguiente.
Si los resultados parecieran indicar que el paciente padece una lesin o una enfermedad
hepticas, lo ms probable es que fuera necesario realizar ms pruebas para determinar la
causa del problema y el tratamiento a seguir.
Significado de los resultados anormales
Un incremento en el nivel de ALT generalmente es seal de una enfermedad heptica. Esta
enfermedad es incluso ms probable cuando los niveles de sustancias analizadas en otras
pruebas de la funcin heptica tambin se han incrementado:
Un incremento en el nivel de ALT puede deberse a:
Cicatrizacin del hgado (cirrosis)
Muerte del tejido del hgado
Hgado hinchado e inflamado (hepatitis)
Demasiado hierro en la sangre (hemocromatosis)
Demasiada grasa en el hgado (hgado graso)
Falta de flujo sanguneo al hgado (isquemia heptica)
Tumor o cncer del hgado
Uso de medicamentos hepatotxicos
Mononucleosis ("mono")
Hinchazn e inflamacin del pncreas (pancreatitis)

Cirrosis heptica: definicin

La cirrosis es la inflamacin intersticial del hgado. Se trata de una enfermedad crnica
e irreversible que provoca fibrosis y ndulos entre las clulas del hgado, lo que
provoca cambios en la estructura del hgado y en sus funciones, ya que la circulacin de
la sangre est bloqueada. Si la cirrosis es muy avanzada, puede llegar a provocar
insuficiencia heptica o cncer de hgado.
Causas
Segn la American Medical Association, las causas ms comunes de la cirrosis son:
Infeccin por el virus de la hepatitis B o de la hepatitis C.

Enfermedades autoinmunitarias del hgado como la hepatitis autoinmunitaria, la

cirrosis biliar primaria o la colangitis esclerosante primaria.

Enfermedades del hgado graso no alcohlico, que puede darse en personas

con obesidad.

Enfermedades hereditarias metablicas del hgado como la hemocromatosis, la

enfermedad de Wilson o la deficiencia de antitripsina.

Exposicin prolongada al alcohol que provoca la inflamacin del hgado.

Sntomas
En los primeros estados de la patologa muchos de los pacientes no presentan sntomas.
Segn avanza la enfermedad, pueden empezar a detectarse los siguientes:

Debilidad y fatiga.
Prdida de apetito y de peso.
Nuseas y vmitos.
Dolor e hinchazn abdominal.
Los vasos sanguneos adquieren forma de araa en la superficie de la piel.
En estados avanzados de la enfermedad, tambin se pueden empezar a
presentar sntomas ms graves, como lista el Instituto Nacional de Diabetes y
Enfermedades Digestivas y del Hgado (Niddk):
Edemas y ascitis.
Moretones y hemorragias frecuentes.
Hipertensin portal: es un aumento de presin sangunea en la vena porta, la cual
conecta los intestinos y el bazo con el hgado.
Aparicin de varices esofgicas y gastropata.
Esplenomegalia.
Ictericia: ocurre cuando un hgado enfermo no elimina suficiente bilirrubina de la
sangre, lo que hace que la piel y el blanco de los ojos adopten un tono amarillento, as como
un oscurecimiento de la orina.
Clculos biliares.
Mayor sensibilidad a los medicamentos.
Encefalopata heptica.
Diabetes tipo 2: la cirrosis provoca resistencia a la insulina, lo que acaba
provocando un exceso deglucosa en el torrente sanguneo.
Cncer de hgado.
Prevencin
Para que no se produzca la cirrosis se deben evitar sus causas ms comunes como el
consumo excesivo de alcohol; en el caso de padecer una enfermedad heptica crnica, hay
que acudir peridicamente al mdico para comprobar si se trata de una enfermedad tratable
e impedir as que se convierta en una cirrosis.

Tipos
Dependiendo de la causa, segn la clasificacin de la Clnica Mayo se pueden distinguir
entre varios tipos de cirrosis:
Cirrosis alcohlica: provocada por un consumo excesivo de alcohol, daa al hgado
de forma general.
Hepatopata grasa no alcohlica: la acumulacin de grasas en las clulas del
hgado crea una fibrosis.
Cirrosis vinculada a la hepatitis: la hepatitis B o C de un paciente acaba
generando fibrosis en el hgado.
Cirrosis criptognica: se desconoce qu causa la fibrosis.
Cirrosis biliar primaria: un fallo del sistema inmunolgico hace que este ataque a
las clulas que revisten las vas biliares del hgado.
Colangitis esclerosante primaria: las vas biliares se hinchan y presentan fibrosis,
lo que hace que queden obstruidas.

Cirrosis biliar secundaria: surge como consecuencia de la obstruccin de las vas

biliares.
Diagnstico
En primer lugar, el mdico realiza una anamnesis para buscar signos de cirrosis. La
decisin de llevar a cabo este examen suele basarse en determinar que el paciente se
encuentra en riesgo de sufrir una cirrosis, por ejemplo, si presenta un problema de
alcoholismo u obesidad.
Para estudiar el hgado se realizan otras pruebas como una ecografa, una elastografa por
resonancia magntica, una tomografa computarizada o una resonancia magntica.
Por ltimo, para confirmar el diagnstico, se realiza una biopsia para obtener una
muestra de tejido heptico, al que se le realiza un examen microscpico. Si se distinguen
bandas diseminadas de tejido fibroso que dividen al hgado en ndulos, significa que el
paciente tiene cirrosis.
Si el paciente tiene una cirrosis avanzada se puede determinar su probabilidad de
supervivencia a 90 das mediante el puntuaje MELD (modelo para el puntuaje de la
enfermedad heptica en etapa terminal). Este puntuaje se basa en el resultado de tres
pruebas de sangre (ndice internacional normalizado, bilirrubina y creatinina) del que se
extrae una puntuacin del 6 al 40. Una puntuacin cercana al 6 indica que el paciente tiene
una alta probabilidad de sobrevivir pasado este tiempo, mientras que las puntuaciones ms
cercanas a 40 indican que corre mucho ms riesgo de no superar la enfermedad.
Tratamientos
No existe un tratamiento que sea capaz de eliminar por completo la cirrosis, pero se
suelen llevar a cabo intervenciones para aliviar los diversos sntomas:

Cambios en el estilo de vida: evitar el alcohol en casos de alcoholismo o tratar de

perder peso puede ayudar a que los sntomas no se agraven. Tambin se recomienda una
dieta nutritiva baja en sodio.
Medicamentos: pueden retrasar el avance de algunos tipos de cirrosis o ayudar a
aliviar sntomas como el dolor o el cansancio.
Disminuir la presin sangunea: esto se consigue mediante endoprtesis
vasculares (unas pequeas prtesis cilndricas que se colocan en las paredes arteriales), y
puede ayudar a aliviar problemas de retencin de lquidos o sangrado venoso en el
estmago y el esfago.
Mejorar el flujo de bilis: mediante un endoscopio se estiran las vas biliares para
extraer los clculos biliares que obstruyan el paso de la bilis.
Trasplante de hgado: en los estados ms avanzados de la enfermedad se puede
plantear la sustitucin del hgado.

MATERIALES Y MTODOS.
(Ver informacin en la Gua de la prctica #5)
RESULTADOS

Fig.1. sangre total del paciente

fig. 2. Suero extrado de la sangre

Fig. 3. Actividas de GOT

Despus de tomar la muestra se midi la absorbancia con el espectrofotmetro y se

realizaron los siguientes clculos para determinar las enzimas en la sangre del paciente.

A=

Clculos para determinar la actividad de GOT

A 1 A 2
2

Actividad de GOT = A 3333= /L

Datos:
Absorbancia a 365nm a 1 min= 0,305
Absorbancia a365nm a 2 min= 0,31

A=

0,3050,31
=0,0025
2

Actividad de GOT =0.0025 3333=8,3325 / L

De la anterior manera se determinaron los valores a dems pacientes y se realiz la
siguiente tabla para la enzima GOT
Paciente

Sexo

A1

A2

Meyli
Evelyn
Jos
Rafael

F
F
M
M

0,325
0,28
0,35
0,305

0,33
0,275
0,34
0,31

/ L

8,33
8,33
16,6
8,33

Katherine

0,298

0,29

13,33

Valores de referencia:
Mujeres: 10-37/L
Hombres: 11-39/L

A=

Clculos para determinar la actividad de GPT

A 1 A 2
2

Actividad de GPT =A 3333= / L

Datos:
Absorbancia a 365nm a 1 min= 0,375
Absorbancia a365nm a 2 min= 0,37

A=

0,3750, 37
=0,0025
2

Actividad de GP T =0.0025 3333=8,3325 /L

De la anterior manera se determinaron los valores a dems pacientes y se realiz la

siguiente tabla para la enzima GPT
Paciente

Sexo

A1

A2

Meyli
Evelyn

F
F

0,375
0,32

0,39
0,315

/ L

24,99
8,33

Jos
Rafael
Katherine

M
M
F

0,375
0,375
0,35

0,385
0,37
0,34

16,6
8,33
16,6

ANLISIS DE RESULTADOS
Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con
elevada concentracin en corazn, hgado, msculo esqueltico, rin y eritrocitos. La
actividad srica en condiciones normales es baja o nula. Un dao o enfermedad en
cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los niveles sricos. As, luego de un
infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT
(abundante en msculo cardaco).
En hepatitis virales y otras formas de enfermedad heptica que involucren necrosis tisular,
predominar la actividad srica de GPT (abundante en tejido heptico). Una elevada
actividad de transaminasas puede detectarse tambin en traumas accidentales o quirrgicos
y en distrofias musculares o miositis.
En este procedimiento se observaron valores bajos en la transaminasa GOT lo cual indica
una baja disminucin de esta enzima en la sangre o una mala manipulacin de los reactivos.
Los valores estn por debajo de lo normal lo cual no es posible, la persona que se le
realizaron los estudios no presenta ningn sntoma y con esos niveles pues prcticamente
no estuviera con vida, por lo tanto, todo inclina a que hubo algn error en el pipeteo o en
algn otro paso.
Las enzimas de escape son un medio muy importante para la prevencin de enfermedades
hepticas por lo tanto tenemos que tenerlas siempre muy presentes para darle un mejor
nivel de vida al paciente.

CONCLUSIONES
En esta prctica experimental se cumpli con los objetivos planteados, se logr extraer de
manera adecuada la sangre y separarla para determinar las enzimas en suero. El
procedimiento a seguir para la determinacin de actividad de transaminasas, as como los
valores normales, dependen del Kit a usar. Aunque la mayora de los Kits manejan una
tcnica colorimtrica, los reactivos, como las concentraciones y los clculos pueden variar,
por lo cual es de suma importancia indicar el Kit que se us y manejar los valores de
referencia y normales que vienen indicados, para evitar algn error en la determinacin.
En este caso, el valor de ALT se encuentran dos pacientes con disminucin en esta enzima y
tres dentro del lmite indicado, mientras que el valor de AST tres pacientes tienen un valor
disminuido. Aunque el bajo valor de AST puede ser causado por alguna patologa, cabe
destacar que los pacientes no se encontraban en ayuno, por lo cual el valor obtenido de AST
pudo ser afectado, tambin puede ser debido a un error de toma de tiempos en el
espectrofotmetro.

BIBLIOGRAFIA
1. Bioqumica Harper edicin 28. http://es.slideshare.net/carmenpalomino/bioqumicailustrada-harper
2. GOT/GPT Color- LINEAR CHEMICALS
http://www.linear.es/ficheros/archivos/1130010C.pdf Consultado 12/10/2016
3. El Paciente Con Transaminasas Altas
http://www3.caes.es/archivos_pdf/download/panda/modulo5/REVI5.PDF
Consultado 12/10/2016
4. Las Transaminasas AST o TGO - ALT o TGP
http://hepato.com/p_transaminases/011_transamin_esp.php Consultado 12/10/2016
5. Procedimiento De ALT (TGP) Para La Determinacin Cuantitativa De Alanina
Aminotransferasa En Suero UVhttp://www.cimascientific.com/2250S.htm
Consultado 12/10/2016