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SEMINARIO DE TUTORIA INICIAL III

NOMBRE __________________________________________________________
PRCTICA
Frotis sanguneo
OBJETIVOS

Realizar Frotis sanguneos

Realizar la tincin hematolgica
Manipular con seguridad material contaminado

FROTIS
La prctica del Frotis sanguneo, tambin llamado extendido, es de gran importancia en hematologa ya que el
diagnstico de muchas enfermedades hematolgicas puede realizarse con slo observar las caractersticas
morfolgicas de las clulas sanguneas, de manera que ste no debe ser excesivamente grueso ni
excesivamente fino. La importancia de un buen extendido y su correcta tincin son fundamentales a la hora
de la observacin al microscopio, ya que un Frotis mal hecho entrega muy poca informacin acerca de la
morfologa celular, y en algunos casos es esta observacin la que entrega al Clnico la informacin que
requiere para realizar su diagnstico. Todas las lminas por usar, sobre todo nuevas, deben ser limpiadas con
algodn y alcohol al 70% para eliminar la grasa que viene adherida.

MTODO DE LOS DOS PORTAOBJETOS

Consiste en la extensin de una gota de sangre sobre un portaobjeto (25 x 75), empleando el canto
biselado de otro portaobjeto de igual dimensin
Coloracin de los Frotis. Los colorantes cidos se unen a los componentes bsicos de las clulas
(citoplasma). Los colorantes bsicos son atrados por los componentes cidos de la clula (ncleo).
Existen varios tipos de coloracin: la de Wright, May-Grnwald-Giemsa, Giemsa, etc.
MATERIAL
1 Tubo con Sangre y EDTA (5 ml).
1 caja de Portaobjetos de vidrios limpios
y desgrasados (25 x 75 mm).
1 Pipeta Pasteur de vstago corto con
bulbo o pipeta de plstico
1 bote de plstico
Guantes
Bata

Franela
Jabn
Cloro
Fibra para lavar
Papel estraza (trozo de 60 X 60 cm)
Lpiz graso marca mirado

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REACTIVOS
Metanol
Buffer 7
Aceite de inmersin

Colorante de Whrigt

EQUIPO
Microscopio


PROCEDIMIENTO

1. Colocar una gota de sangre (aproximadamente de 3 mm. de dimetro) a 2 cm. aproximadamente

de uno de los extremos del portaobjetos.
2. Colocar el canto de otro portaobjetos esmerilados sobre la superficie del primer portaobjetos,
formando un ngulo de 45 (ver figura)

3. Permitir que la sangre se extienda por capilaridad a lo largo de la arista (ver figura)

4. Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjetos hacia el otro extremo en sentido

longitudinal, de manera que la sangre se extienda uniformemente.
5. Dejar secar (unos 10 min.)

NOTAS:

El grosor de Frotis sanguneo puede variar segn sea el ngulo que formen entre s ambos
portaobjetos. As, si es superior a 45 o, la extensin obtenida ser gruesa y corta, si es inferior a 45 o
ser larga y fina.
El nmero de Frotis depender de la cantidad de sangre y/o nmero de tubos de sangre
conseguidos para la prctica, cada persona al menos hacer 10 frotis.

TINCIN DE WRIGHT
Es una coloracin es conocida como policromtica debido a que produce varios colores. Es una
solucin de alcohol metlico de un colorante cido (eosina) y otro bsico (azul de metileno). El
alcohol sirve como un fijador del Frotis sanguneo al portaobjetos. El amortiguador, que consiste en

una solucin tamponada, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorcin por los
diferentes componentes celulares.

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PROCEDIMIENTO PARA LA TINCIN

Elegir el mejor Frotis.

Colocar el Frotis seco en las varillas de tincin.
Cubrir gota a gota completamente el portaobjetos con el colorante de Wright
Dejar actuar el colorante entre 5 a 8 minutos (verificar el tiempo con el encargado del Lab.)

** El colorante deber cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los
bordes. Deber agregarse una cantidad adicional si ste se comienza a evaporar.

Agregar directamente sobre el colorante un volumen igual de buffer para evitar la coloracin dbil (puede
usarse de igual manera agua desionizada).
Esperar la formacin de brillo metlico.
Dejar actuar de 10 a 15 minutos.
Lavar cuidadosamente con agua de la llave hasta que el Frotis presente un aspecto rosado al examinarlo
a simple vista.
Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodn humedecido en alcohol para eliminar cualquier
resto de colorante.
Secar al aire.
Observar al microscopio con objetivo panormico de 4X
Observar y enfocar con el objetivo de inmersin

RESULTADOS

Dibujar las clulas identificadas, mostrando los colores que adquirieron las clulas
Indicar en nombre de la estructura teida.
Anotar el nombre de la clula observada.

Objetivo _______________________
Objetivo
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4.

DISPOCIN DE RESIDUOS BIOLGICO INFECCIOSO

Colocar agua con cloro (soln. al 3%) en el bote de plstico.
Ir depositando en l, los portaobjetos, pipetas y tubos con sangre.
Dejar actuar la solucin de cloro al menos 10 minutos.
Lavar el material con agua y jabn.

Si el material se va a desechar, depositarlo en el contenedor para material de vidrio o plstico segn

corresponda.
Algodones, gasas o papeles con sangre depositarse en el contenedor de basura comn, si la
cantidad de sangre que contienen es grande inactivar primero con cloro.

CONCLUSIONES