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Faculdade Pitgoras

Curso de Graduao em Farmcia


Campus Timbiras BH

1-DOSAGEM DE HEMOGLOBINA mtodo de Sahli


H vrios mtodos para se fazer a dosagem de hemoglobina.
Usaremos a tcnica de Sahli, que se fundamenta no mtodo colorimtrico.
1.1 Objetivos:
1. Conhecer uma tcnica que possibilite dosar a hemoglobina do sangue.
2. Possibilitar ao aluno calcular a quantidade de hemoglobina por hemcia.
1.2 Materiais e Solues:
Materiais: hemoglobinmetro de Sahli e acessrios, algodo.
Solues: HCl 0,1N; gua destilada.
1.3 Tcnica:
1. Coloque cido clordrico (HCl O,1N) at a marca 2 do tubo do hemoglobinmetro.
2. Agite o sangue do frasco e aspire-o com a micropipeta at preencher 20 mm3. Limpe com
algodo todo sangue que fica fora do tubo capilar.
3. Transfira o sangue da micropipeta para o tubo com HCl. Mediante vrias suces e sopros,
lave o capilar da micropipeta com o prprio cido clordrico do tubo.
4. Deixe a mistura repousar por 5 minutos para que a hemoglobina reaja com o cido,
formando o cloridrato de hematina.
5. Decorrido este tempo, adicione gota a gota gua destilada, enquanto agita a mistura com
um basto de vidro. O procedimento deve continuar at que a soluo fique com idntica
colorao dos tubos vizinhos, contidos no hemoglobinmetro.
6. Faa a leitura na escala impressa no prprio tubo, expressando a concentrao de
hemoglobina em g/100 ml de sangue e em porcentagem (%). So considerados valores
normais nesta tcnica: entre 13,8 a 17,3 g/100 ml de sangue.

1- DOSAGEM DA HEMOGLOBINA mtodo colorimtrico


1.1) Fundamento
O ferrocianeto transforma o ferro da hemoglobina do estado ferroso (bivalente) para o estado
frrico (trivalente), formando metahemoglobina que, por sua vez, combina com o cianeto de
potssio para produzir a cianometahemoglobina, que lida em 540 nm.
1.2) Procedimento

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Pipetar 5,0 mL do lquido diluidor (Drabkin) em um tubo de ensaio.


Pipetar 0,02 mL (20 l) de sangue e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor.
Homogeneizar e aguardar cerca de 10 minutos.
Fazer um tubo BRANCO apenas com o lquido diluidor e um tubo PADRO com 5,0 mL do
lquido diluidor e 0,02 mL do padro de hemoglobina.
Fazer a leitura em espectrofotmetro, no comprimento de onda de 540 nm.
3) Clculos
[Hb] g/dL = Abs. Teste X Com. padro/ Abs. Padro.

4) Valores de Referncia
Homem 13,5 a 18,0 g/dL
Mulher 12,0 a 16,0 g/dL
RN

13,5 a 19,5 g/dL

5) Interpretao
Valores aumentados e valores diminudos esto presentes praticamente em todas as
condies que determinam aumento e diminuio das hemcias, respectivamente.
Pesquisar: Qual a principal funo da dosagem da Hemoglobina no hemograma e indique os
tipos de hemoglobinas normais em um adulto.
2- CLCULO DOS NDICES HEMATIMTRICOS
Os ndices hematimtricos avaliam indiretamente as caractersticas dos eritrcitos quanto ao
volume e o contedo de hemoglobina.
OBS: utilizar dados das aulas anteriores
VCM: volume corpuscular mdio calculado dividindo-se o hematcrito pelo nmero de
eritrcitos e multiplicando-se por 10. Representa o tamanho mdio dos eritrcitos e sua
unidade fentolitros (fL.).
VCM=(Ht/n eritrcitos) x 10 - 80 a 98fL

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HCM: hemoglobina corpuscular mdia calculada dividindo-se a hemoglobina pelo


nmero de eritrcitos e multiplicando-se por 10, sua unidade picogramas (pcg ou pg.).
HCM=(Hb/N eritrcitos) x 10 - 27 a 32 pcg
CHCM: concentrao de hemoglobina corpuscular mdia, calculado pela razo entre
hemoglobina e hematcrito deve ser expressa em %.
CHCM=(Hb/Ht)X100
3- PESQUISA DE DREPANCITOS (Hemcias Falciformes)
A hemoglobina S ocorre em 8% dos negros brasileiros, tornando a sua pesquisa um exame
bastante solicitado em nosso meio. A demonstrao dessa hemoglobina anormal feita pro
trs tipos de exames : a eletroforese de hemoglobina que o mtodo mais eficaz, porm,
trabalhoso e caro para ser usado rotineiramente; pelos testes de solubilidade para
hemoglobina S e pela pesquisa de drepancitos.
O fenmeno da falcizao trata de uma reorganizao das molculas de hemoglobina em
estado reduzido, formando longas cadeias denominadas tactides, isto , massas criatalinas. In
vitro o fenmeno demonstrado pelo uso de agentes redutores como metabissulfito de sdio.
In vivo a falcizao ocorre pela baixa tenso de oxignio nos capilares, levando ao
aparecimento de hemcias falciformes circulantes, o que ocasiona a anemia hemoltica.
Soluo redutora:
Metabissulfito de sdio..............................0,2mg
gua destilada q.s.p...................................10,0ml
Preparar no momento do uso.
TCNICA:
1. Colocar uma gota pequena do sangue sobre a lmina de microscopia. Gotas maiores
fornecem um excesso de lquido sob a lamnula e sobreposio das hemcias
2. Adicionar ao sangue duas gotas do mesmo tamanho de metabissulfito de sdio.
3. Misturar com o canto da lamnula, cobrindo com ela a preparao.
4. Vedar todos os lados da lamnula com esmalte.
5. Fazer a primeira observao ao microscpio, duas horas aps a vedao, com aumento de
400x, procurando identificar hemcias falciformes que apresentam prediletao pela rea
marginal da lamnula se negativo repetir a leitura 6, 12 e por fim 24 horas para liberar o
resultado.
Interpretao: dado como negativo ou positivo, conforme presena ou ausncia de clulas
falciformes

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