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Chapitre 27 - L'valuation des risques biologiques
LES PRINCIPES GNRAUX
Vito Fo et Lorenzo Alessio
Concepts de base et dfinitions
Les mthodes dhygine du travail se bornent mesurer les produits chimiques qui
contaminent lair ambiant aux postes de travail et matriser les risques quils prsentent; les
autres aspects de la toxicit des substances prsentes dans lenvironnement (absorption
cutane, ingestion et expositions extraprofessionnelles) chappent leur contrle. La
surveillance biologique contribue combler cette lacune.
En 1980, la surveillance biologique a fait lobjet dun sminaire organis Luxembourg, sous
le parrainage conjoint de la Communaut conomique europenne (CEE) et de deux
organismes amricains: lInstitut national de la scurit et de la sant au travail (National
Institute for Occupational Safety and Health (NIOSH)) et lAdministration de la scurit et de
la sant au travail (Occupational Safety and Health Administration (OSHA), (Berlin,
Yodaiken et Henman, 1984). A cette occasion, la surveillance biologique a t dfinie comme
tant la mesure et lvaluation des agents chimiques ou de leurs mtabolites dans les tissus,
les scrtions, les excrtions ou lair expir ou toute combinaison de ces mthodes, afin
destimer lexposition des personnes et les risques pour leur sant par rapport une rfrence
approprie. La surveillance est un acte rptitif, rgulier et prventif qui doit conduire des
mesures de correction si ncessaire; elle ne saurait tre confondue avec une dmarche
diagnostique.
La surveillance biologique constitue lune des trois grandes dmarches suivies pour prvenir
les maladies lies la prsence dagents toxiques dans lenvironnement gnral ou
professionnel, les deux autres tant les contrles dambiance et la surveillance de la sant des
travailleurs.
La squence de dveloppement dune pathologie peut tre schmatise de la manire
suivante: source exposition un agent chimique dose interne effet biochimique ou
cellulaire (rversible) rpercussions sur la sant pathologie. La figure 27.1 montre les
relations existant entre surveillance de lenvironnement, surveillance biologique, surveillance
de lexposition et surveillance de la sant des travailleurs.
Figure 27.1 Relations entre surveillance de l'air ambiant, surveillance biologique, surveillance
de
l'exposition et surveillance de la sant des travailleurs
Lorsquune substance toxique, un produit chimique industriel par exemple, est prsente dans
lenvironnement, elle contamine lair, leau, la nourriture ou les surfaces en contact avec la
peau; la quantit de produits toxiques dans ces milieux est value par les contrles
dambiance.
Une fois le produit toxique absorb, distribu, mtabolis et excrt, une certaine dose interne
(quantit absolue de polluant absorbe ou ayant pntr dans lorganisme pendant un
intervalle de temps donn) est effectivement prsente dans lorganisme et peut tre dcele
dans les liquides biologiques. Les effets biochimiques ou cellulaires sont dus linteraction
du produit toxique avec un rcepteur au niveau dun organe cible (organe qui, dans des
conditions dexposition spcifiques, prsente la raction indsirable initiale ou la plus
importante). La surveillance biologique permet dvaluer la dose interne et de mettre en
vidence ses effets au niveau biochimique et cellulaire.
La surveillance de la sant des travailleurs a t dfinie lors du mme sminaire
CEE/NIOSH/OSHA en 1980 comme tant le suivi mdico-physiologique rgulier des
travailleurs exposs, dans le but de protger leur sant et de prvenir lapparition dune
maladie.
La surveillance biologique et celle de la sant des travailleurs font partie dun continuum qui
va du dosage des agents chimiques ou de leurs mtabolites dans lorganisme la dtection des
signes prcoces datteinte rversible dun organe cible, grce lvaluation des effets
biochimiques et cellulaires. La dtection dune maladie installe reste en dehors du champ de
ces valuations.
Les objectifs de la surveillance biologique
La surveillance biologique peut tre subdivise en deux parties: a) la surveillance de
lexposition; b) la surveillance de leffet induit, ces deux dmarches reposant respectivement
sur des indicateurs de dose interne et des indicateurs deffet.
Lobjectif de la surveillance biologique de lexposition consiste quantifier la dose interne
dun produit chimique donn, afin destimer la charge corporelle biologiquement active et
dvaluer ainsi le risque pour la sant. Il sagit de sassurer que lexposition professionnelle
natteint pas un niveau susceptible davoir des effets nocifs. Un effet est dit nocif sil
entrane une altration des capacits fonctionnelles, une moindre aptitude compenser une
situation de stress ou maintenir lhomostasie (tat dquilibre stable de lorganisme), ou
encore une plus grande sensibilit dautres facteurs prsents dans lenvironnement.
Selon le produit chimique et le paramtre biologique tudi, le terme de dose interne peut
avoir plusieurs acceptions (Bernard et Lauwerys, 1987). Il peut sagir tout dabord de la
quantit de produit chimique rcemment absorbe, par exemple, pendant un poste de travail.
Cette quantit est mesure par dosage de la concentration du polluant dans lair alvolaire ou
dans le sang au cours de cette priode ou encore le lendemain (les chantillons de sang ou
dair alvolaire pouvant tre prlevs jusqu 16 heures aprs lexposition). Sagissant dun
produit chimique ayant une demi-vie biologique longue (par exemple, les mtaux dans le
sang), la dose interne peut reflter la quantit absorbe sur une priode de plusieurs mois.
Dans une autre acception, la dose interne peut aussi reprsenter la quantit de produit
chimique accumule dans lorganisme. Dans ce dernier cas, elle constitue un indicateur
daccumulation du produit, servant estimer limportance de la fixation dans les organes ou
les tissus partir desquels ce produit sera lentement limin. Il en est ainsi, par exemple, des
dosages sanguins du DDT ou du PCB.
Enfin, la dose interne peut indiquer la quantit de produit chimique prsente au site daction,
et donc renseigner sur la dose biologiquement active. Lune des utilisations prometteuses de
cette dernire approche est la dtermination des adduits forms par les produits chimiques
toxiques avec la protine de lhmoglobine ou avec lADN.
La surveillance biologique de leffet induit a pour objectif de mettre en vidence les
altrations prcoces et rversibles au niveau dun organe cible et didentifier, cette occasion,
les individus prsentant des signes deffets pathologiques. Dans cette optique, la surveillance
biologique de leffet induit reprsente donc un outil essentiel pour la surveillance de la sant
des travailleurs.
Les principales mthodes de surveillance
La surveillance biologique de lexposition des produits chimiques fait appel des
indicateurs de dose interne qui mesurent les paramtres suivants:
les quantits de produits chimiques prsentes dans le sang ou lurine (plus rarement
dans le lait, la salive ou les tissus adipeux);
la quantit dun ou de plusieurs mtabolites dans ces milieux biologiques;
la concentration des composs organiques volatils (solvants) dans lair alvolaire;
la dose biologiquement active des produits ayant form des adduits avec lADN ou
dautres macromolcules, et prsentant de ce fait une gnotoxicit potentielle.
Les facteurs influant sur la concentration dun produit chimique et de ses mtabolites dans le
sang ou lurine sont traits plus loin dans le prsent chapitre.
Sagissant de la concentration dans lair alvolaire, plusieurs paramtres sont prendre en
considration outre le niveau dexposition dans lair ambiant: la solubilit et le mtabolisme
des substances inhales, la ventilation pulmonaire, le dbit cardiaque et la dure dexposition
(Brugnone et coll., 1980).
Lutilisation des adduits lADN et lhmoglobine pour surveiller lexposition humaine aux
substances ayant un potentiel cancrogne constitue une technique promise un bel avenir
pour les expositions de faibles concentrations de produits. Il est bon de rappeler que les
substances qui se lient aux macromolcules dans lorganisme humain ne sont pas toutes
gnotoxiques, ni donc potentiellement cancrognes. La formation dadduits reprsente
seulement une tape dans le processus complexe de la cancrogense. Dautres processus
cellulaires, comme la promotion et la progression de la rparation de lADN, contribuent sans
aucun doute moduler le risque de dveloppement dune pathologie telle que le cancer. A
lheure actuelle, la technique de dtermination des adduits devrait tre rserve exclusivement
la surveillance de lexposition aux produits chimiques. Cette question est traite de faon
plus dtaille dans larticle intitul Les produits chimiques gnotoxiques, du prsent
chapitre.
La surveillance biologique de leffet induit est assure grce ltablissement dindicateurs
deffet capables didentifier les modifications prcoces et encore rversibles. Cette approche
permet destimer indirectement la quantit de produit chimique lie aux sites daction et
dvaluer prcocement les altrations fonctionnelles de lorgane cible.
Malheureusement, seuls quelques exemples illustrent actuellement cette approche,
notamment: 1) linhibition de la pseudocholinestrase par les insecticides organophosphors;
2) linhibition de lacide delta-aminolvulinique dshydratase (ALAD) par le plomb
inorganique; 3) laugmentation de lexcrtion urinaire de lacide D-glucarique et des
porphyrines chez les sujets exposs soit des produits induisant les enzymes microsomales,
soit des agents porphyrinognes (par exemple, hydrocarbures chlors).
Les avantages et les limites de la surveillance biologique
Pour les substances dont la toxicit sexerce aprs pntration dans lorganisme humain, la
surveillance biologique permet dvaluer plus prcisment et plus spcifiquement les risques
pour la sant que ne le font les contrles dambiance. Un paramtre biologique refltant la
dose interne apporte en effet davantage dinformations sur les effets systmiques nocifs quun
contrle de lair ambiant.
Par rapport la surveillance de lair, la surveillance biologique offre de nombreux avantages
puisquelle permet en particulier dvaluer:
lexposition sur une priode prolonge;
lexposition lorsquun travailleur est appel se dplacer dun endroit un autre dans
lentreprise;
labsorption dune substance par diffrentes voies, y compris la voie cutane;
lexposition totale imputable aux diffrentes sources de pollution, professionnelles ou
non;
la quantit de substance absorbe par un sujet en fonction de facteurs autres que le
degr dexposition (effort physique requis par le travail, ventilation ou climat);
la quantit de substance absorbe en fonction des facteurs individuels susceptibles
davoir une incidence sur la cintique de lagent toxique dans lorganisme (ge, sexe,
facteurs gntiques ou tat fonctionnel des organes assurant la biotransformation de la
substance toxique et son limination).
Malgr ces avantages, la surveillance biologique souffre encore aujourdhui de limites
importantes:
le nombre des substances quil est possible de contrler dans les milieux biologiques
est encore assez faible;
en cas dexposition aigu, la surveillance biologique napporte dinformations utiles
que pour les substances rapidement mtabolises telles que les solvants aromatiques;
la signification des indicateurs biologiques nest pas encore clairement dfinie; ainsi,
on ne sait pas toujours si la quantit dune substance trouve dans un milieu
biologique reflte lexposition rcente ou cumule: cest le cas en particulier pour le
cadmium et le mercure urinaires;
en gnral, les indicateurs biologiques de dose interne permettent dvaluer le degr
dexposition, mais ne renseignent pas sur la quantit rellement prsente dans lorgane
cible;
on ignore souvent les interfrences mtaboliques possibles entre les substances
incluses dans une surveillance biologique et les autres substances exognes auxquelles
lorganisme est expos simultanment dans lenvironnement gnral ou professionnel;
les relations qui existent entre le niveau dexposition dans le milieu de travail, les
valeurs des indicateurs biologiques et les rpercussions possibles sur la sant sont
parfois mal connues;
On connat moins bien les effets possibles des mdicaments sur les valeurs des indicateurs
biologiques. Il a t montr que laspirine peut interfrer avec la biotransformation du xylne
en acide mthylhippurique; le phnylsalicylate, mdicament trs employ comme
analgsique, peut causer une augmentation importante des taux de phnol urinaires. Quant
aux prparations antiacides base daluminium, elles peuvent entraner une lvation des taux
plasmatiques et urinaires daluminium.
Le mtabolisme des solvants usuels tels que le tolune, le xylne, le trichlorothylne, le
ttrachlorothylne et le mthylchloroforme varie sensiblement dun groupe ethnique
lautre.
Certains tats pathologiques peuvent aussi avoir une incidence sur les valeurs des indicateurs
biologiques. Lorgane cible peut ainsi rpondre anormalement aux tests de surveillance
biologique, soit du fait de laction spcifique de lagent toxique en cause, soit pour dautres
raisons. Lvolution des concentrations urinaires de cadmium est un bon exemple du premier
type danomalie. En effet, une fois que les lsions tubulaires dues au cadmium sont
constitues, lexcrtion urinaire de ce mtal augmente notablement et ne reflte plus le degr
dexposition. Un exemple du second type danomalie est laugmentation des taux de
protoporphyrine rythrocytaire observe au cours des carences en fer, en labsence de toute
absorption particulire de plomb.
Les variations physiologiques des prlvements utiliss pour mesurer un indicateur biologique
(urine, par exemple) peuvent avoir une incidence sur le rsultat dun test. Pour des raisons
pratiques, seuls des chantillons urinaires ponctuels peuvent tre recueillis en milieu de
travail, alors mme que les variations de densit de lurine au cours de la journe entranent
une forte fluctuation des valeurs de lindicateur mesur.
Pour viter cet cueil, il est conseill dliminer les chantillons urinaires trop dilus ou trop
concentrs, en fixant des valeurs limites pour la densit urinaire ou la cratinine. Dans la
pratique, on carte les chantillons urinaires ayant une densit infrieure 1 010 ou suprieure
1 030, ou dont la teneur en cratinine est infrieure 0,5 g/l ou suprieure 3,0 g/l.
Plusieurs auteurs prconisent aussi dajuster les valeurs des indicateurs la densit urinaire ou
encore dexprimer les rsultats en les rapportant la cratinine urinaire.
Les variations pathologiques des milieux biologiques peuvent aussi modifier
considrablement la valeur dun indicateur biologique. Ainsi, chez un sujet anmique expos
un mtal (mercure, cadmium, plomb, etc.), la concentration sanguine de ce mtal peut tre
infrieure la valeur attendue compte tenu de lexposition, par suite de la diminution du
nombre dhmaties circulantes transportant le mtal toxique.
Le dosage dans le sang total de substances toxiques ou de mtabolites lis aux globules rouges
devrait donc toujours tre assorti de la dtermination de lhmatocrite pour connatre le
pourcentage du volume globulaire par rapport au volume sanguin.
Lexposition simultane plusieurs substances toxiques sur les lieux de travail
En cas dexposition simultane plusieurs substances toxiques sur un lieu de travail, des
interfrences mtaboliques peuvent survenir et modifier le comportement des indicateurs
biologiques, et donc donner lieu de srieux problmes dinterprtation. Cest ainsi que des
tudes effectues chez lhumain ont montr des interfrences lors dexpositions associant, des
substances comme tolune et xylne, xylne et thylbenzne, tolune et benzne, hexane et
mthylthylctone ou encore ttrachlorothylne et trichlorothylne.
Lorsque la biotransformation dun solvant est inhibe, lexcrtion urinaire de son mtabolite
diminue (sous-estimation possible du risque), alors que la concentration du solvant augmente
dans le sang ou dans lair expir (surestimation possible du risque).
Ainsi, lorsque le dosage simultan des substances et de leurs mtabolites est possible, il peut
tre utile, pour valuer le degr dinhibition mtabolique, de sassurer que lon ne se trouve
pas en prsence la fois de concentrations urinaires de mtabolites plus basses que prvues et
de concentrations accrues de solvants dans le sang ou lair expir.
Des interfrences mtaboliques ont t dcrites alors que chacune des substances tait
prsente une concentration proche de la valeur limite couramment accepte, voire parfois
une concentration infrieure. En gnral, on nobserve cependant pas dinterfrences lorsque
la concentration de chaque substance est faible.
Lutilisation pratique des indicateurs biologiques
En sant au travail, les indicateurs biologiques sont utiliss plusieurs fins, et notamment: 1)
la surveillance priodique individuelle des travailleurs; 2) lanalyse de lexposition de groupes
de travailleurs; 3) les tudes pidmiologiques. Les tests employs devraient prsenter des
caractristiques de prcision, dexactitude, de sensibilit et de spcificit telles que la
frquence des erreurs de classification soit minime.
Les valeurs et les groupes de rfrence
Une valeur de rfrence correspond la valeur dun indicateur biologique dans la population
gnrale non expose professionnellement la substance toxique tudie. On se reportera
ces valeurs pour interprter les rsultats obtenus lors des programmes de surveillance
biologique dans une population prsume expose. Ces valeurs de rfrence ne devraient pas
tre confondues avec les valeurs limites, qui sont gnralement des directives ou des limites
lgales tablies pour les expositions professionnelles ou environnementales (Alessio et coll.,
1992).
Lorsquon doit comparer les rsultats danalyses dans un groupe, il est indispensable de
connatre la distribution des valeurs dans le groupe de rfrence et dans le groupe tudi avant
de procder lanalyse statistique. Il est essentiel de comparer le groupe expos un groupe
de rfrence dont le sexe, lge, le mode de vie et les habitudes alimentaires sont semblables.
Afin dobtenir des valeurs de rfrence fiables, il faut bien sassurer que les sujets du groupe
de rfrence nont jamais t exposs aux substances toxiques soit dans le cadre de leur
activit professionnelle, soit en raison dune pollution particulire.
Pour valuer lexposition une substance toxique, il faut aussi prendre soin de ne pas inclure
des sujets qui, sans tre directement exposs cette substance, travaillent sur le mme site. En
effet, sils taient exposs indirectement, les rsultats du groupe expos en seraient sousestims.
Une autre pratique viter, et qui est pourtant rpandue, est le recours des valeurs de
rfrence publies dans des travaux raliss dans dautres pays et souvent dans des rgions o
les conditions de pollution de lenvironnement sont diffrentes.
Les contrles priodiques individuels des travailleurs
Les contrles priodiques sont obligatoires lorsque la concentration dune substance toxique
sur un lieu de travail est proche de la valeur limite. Il est recommand de mesurer si possible
la fois un indicateur dexposition et un indicateur deffet. Les rsultats ainsi obtenus seront
compars aux valeurs de rfrence et aux valeurs limites recommandes pour la substance
tudie (ACGIH, 1995).
Lanalyse dun groupe de travailleurs
Lanalyse dun groupe de travailleurs simpose lorsque les rsultats des indicateurs
biologiques utiliss risquent dtre fortement influencs par des facteurs indpendants de
lexposition (rgime alimentaire, concentration ou dilution de lurine, etc.) et lorsque la
fourchette des valeurs normales est large.
Pour garantir lutilit des rsultats, il faut que le groupe soit suffisamment important et
homogne par rapport un certain nombre de critres: exposition aux produits, sexe et, dans
le cas de certains agents toxiques, anciennet au poste de travail. Plus les niveaux
dexposition sont constants, plus les rsultats obtenus seront fiables. Une tude effectue sur
des travailleurs qui changent souvent de service ou dactivit naura pas une trs grande
valeur. Enfin, pour quune tude de ce type puisse tre value correctement, il ne suffit pas
dexprimer les rsultats sous forme de moyennes et de fourchettes: il convient aussi de
prendre en compte la distribution de frquence des valeurs de lindicateur biologique choisi.
Les tudes pidmiologiques
Outre les applications susmentionnes, les rsultats de la surveillance biologique de groupes
de travailleurs peuvent aussi tre utiliss dans des tudes pidmiologiques transversales ou
prospectives.
Les tudes transversales peuvent servir comparer les expositions dans les diffrents services
dune usine ou dans des branches dactivit diverses, afin de dresser une cartographie des
risques des processus de fabrication. Pour ce type dapplication, les contrles de qualit
interlaboratoires ne sont malheureusement pas encore suffisamment rpandus et il nest donc
pas certain que les rsultats soient comparables dun laboratoire lautre.
Les tudes prospectives permettent danalyser les variations des niveaux dexposition afin de
vrifier, par exemple, lefficacit des amliorations apportes ou de corrler sur plusieurs
annes les indicateurs biologiques et ltat de sant des sujets suivis. Les rsultats de ce type
dtudes de longue dure sont trs utiles pour rsoudre les problmes qui voluent avec le
temps. A lheure actuelle, la surveillance biologique sert ainsi surtout vrifier que
lexposition un moment donn ne comporte pas de risque, mais ne prsente quun intrt
relatif dans le cas dexpositions de longue dure. Un niveau dexposition actuellement jug
comme sans danger pourrait fort bien ne plus tre considr comme tel dans le futur.
Les aspects thiques
Lapplication de la surveillance biologique lvaluation dune toxicit potentielle pose des
problmes dordre thique. Lun des objectifs de cette surveillance consiste en effet
rassembler suffisamment dinformations pour dfinir le seuil partir duquel un effet donn
doit tre considr comme nocif; si linformation est insuffisante, toute perturbation sera
considre comme indsirable. Les consquences rglementaires et lgales de ce type
dinformations doivent tre values et discutes pour parvenir un consensus social sur la
meilleure utilisation possible des indicateurs biologiques. En dautres termes, il est
indispensable que les travailleurs, les employeurs, les collectivits et les autorits comptentes
pour lgifrer soient forms linterprtation des rsultats de la surveillance biologique, celleci ne devant tre ni trop alarmiste ni trop complaisante.
Les rsultats des tests et leur interprtation devraient tre communiqus aux personnes
concernes selon les modalits prvues. Tous les participants devraient tre clairement
informs du caractre exprimental ou non des indicateurs utiliss.
Le Code international dthique pour les professionnels de la sant au travail, tabli en 1992
par la Commission internationale de la sant au travail, spcifie que les tests biologiques et
les autres investigations doivent tre choisis en fonction de leur adquation assurer la
protection de la sant du travailleur concern en tenant dment compte de leur sensibilit, de
leur spcificit et de leur valeur prdictive. Les tests qui ne sont pas fidles ou qui nont pas
une valeur prdictive suffisante en relation avec les exigences du poste ne devraient pas tre
utiliss (voir texte du Code dans le chapitre no 19, Les questions dthique).
Les tendances rglementaires et lapplication des textes
La surveillance biologique ne peut tre effectue que sur un nombre limit de polluants en
raison du manque de donnes de rfrence. Il en rsulte que son application lvaluation des
expositions reste trs limite.
LOrganisation mondiale de la sant (OMS), pour sa part, propose des valeurs de rfrence
vise sanitaire uniquement pour le plomb, le mercure et le cadmium, valeurs quelle dfinit
comme tant les taux sanguins et urinaires nentranant aucun effet nocif dcelable. La
Confrence amricaine des hyginistes gouvernementaux du travail (American Conference of
Gouvernmental Industrial Hygienists (ACGIH)), quant elle, a tabli des indices biologiques
dexposition (BEI) qui permettent dvaluer le degr dexposition globale aux produits
chimiques industriels. Or, lACGIH na dfini de tels indices que pour 26 composs (ACGIH,
1995).
LASSURANCE QUALIT
David Gompertz
Les dcisions concernant la sant, le bien-tre et laptitude au travail, de mme que la position
de lemployeur sur les questions de scurit et de sant, doivent tre fondes sur des donnes
de qualit. La surveillance biologique doit rpondre cette exigence. Il est de la responsabilit
de tout laboratoire analysant des chantillons biologiques prlevs sur des populations de
salaris de sassurer de la fiabilit, de lexactitude et de la prcision des rsultats. Cette
responsabilit va de la mise disposition de techniques et dinstructions aux fins du
prlvement dchantillons la communication correcte des rsultats au professionnel de
sant responsable du suivi de chaque personne. Tous ces aspects font partie du concept
dassurance qualit.
Le rle essentiel dun programme dassurance qualit est le contrle et le maintien de
lexactitude et de la prcision analytiques. Les laboratoires de surveillance biologique ont
souvent t mis en place dans un environnement clinique et ont tout naturellement adopt les
principes et les techniques dassurance qualit qui ont cours en biologie clinique. Les dosages
sanguins ou urinaires des substances toxiques et la mesure des indicateurs ne sont en effet pas
fondamentalement diffrents des mthodes qui sont employes en biologie clinique ou dans
les laboratoires de pharmacologie clinique des grands hpitaux.
Un programme dassurance qualit dbute pour lanalyste par le choix et la mise en uvre
dune mthode adapte. Dans un deuxime temps, on met en place une procdure de contrle
interne de la qualit dont le rle est dassurer la prcision. Le laboratoire doit ensuite vrifier
lexactitude de lanalyse, ce qui peut seffectuer grce une valuation externe de la qualit
(voir ci-aprs). Il faut souligner cependant que lassurance qualit va bien au-del de ces seuls
aspects du contrle de la qualit analytique.
Le choix des mthodes
De nombreux textes traitent des mthodes analytiques applicables la surveillance
biologique. Ils constituent un guide certes utile, mais ne dispensent pas lanalyste de tous les
efforts ncessaires pour parvenir des rsultats de bonne qualit. Llaboration dun protocole
constitue llment central de tout programme dassurance qualit. Ce protocole doit dcrire
en dtail les parties de la mthode qui ont le plus dimpact sur la fiabilit, lexactitude et la
prcision. Laccrditation par les Etats des laboratoires de biologie clinique, de toxicologie ou
de mdecine lgale dpend, au demeurant, de la qualit des protocoles labors par ces
laboratoires. Le dveloppement dun protocole est un processus gn- ralement trs long.
Aussi, lorsquun laboratoire dsire mettre au point une nouvelle mthodologie, il est souvent
plus rentable pour lui dadopter un protocole ayant fait ses preuves dans un autre laboratoire
et dj valid, par exemple, dans le cadre dun programme international dassurance qualit.
Dans la pratique, si un laboratoire veut employer une technique analytique spcifique telle
que la chromatographie en phase gazeuse plutt que la chromatographie liquide haute
performance, il a des chances de trouver un laboratoire connu pour la qualit de ses rsultats
et utilisant dj cette mthode analytique. Les coordonnes des laboratoires de rfrence
peuvent tre trouves dans les publications spcialises ou auprs des organisateurs de
programmes nationaux dassurance qualit.
Le contrle de qualit interne
peut alors tre assimile la concentration relle). Les programmes qui comptent de
nombreux participants sont aussi mieux mme dvaluer les performances dun laboratoire
en fonction des mthodes analytiques employes et de conseiller lemploi dautres mthodes
pour remplacer celles qui sont moins performantes. Dans certains pays, la participation ce
type de programmes est un critre important pour laccrditation dun laboratoire.
LOrganisation mondiale de la sant a publi des directives concernant lorganisation et la
mise en uvre de ces programmes dvaluation externe de la qualit (OMS, 1982a).
En labsence de programmes de ce type, on peut valuer lexactitude des rsultats au
moyen de produits de rfrence homologus qui existent pour un nombre limit de substances
et que lon peut se procurer dans le commerce. Les chantillons distribus dans le cadre des
programmes dvaluation externe prsentent plusieurs avantages: 1) lanalyste ne connat pas
le rsultat par avance; 2) les chantillons correspondent une fourchette de concentrations; 3)
le matriel ncessaire reste dun cot abordable puisquil nest pas ncessaire de recourir
des mthodes analytiques trs complexes.
Le contrle de qualit pranalytique
Tous les efforts dploys par un laboratoire pour atteindre lexac-titude et la prcision voulues
resteront vains si les chantillons nont pas t prlevs au bon moment, sils sont contamins,
sils ont t dtriors pendant le transport, ou sils ont t mal tiquets. Il est galement peu
dfendable de soumettre des personnes des prlvements invasifs sans prendre soin du
matriel biologique prlev. Le laboratoire nest pas toujours directement responsable des
prlvements; lassurance qualit dun programme de surveillance biologique nen doit pas
moins prendre ces facteurs en compte. Le laboratoire devrait ainsi sassurer que les seringues
et les flacons fournis pour les prlvements ne sont pas contamins et devrait donner des
instructions claires sur la technique de prlvement et sur la conservation et le transport des
chantillons. Limportance du moment du prlvement, pendant le poste ou la semaine de
travail, et ses consquences sur la toxicocintique sont maintenant bien reconnues (ACGIH,
1995; HSE, 1992); les professionnels de la sant responsables des prlvements devraient
donc en tre informs.
Le contrle de qualit postanalytique
Des rsultats dexcellente qualit analytique ne prsenteront pas grand intrt pour lindividu
concern ou le professionnel de la sant sils ne sont pas communiqus celui-ci en temps
utile et sous une forme interprtable. Tout laboratoire de surveillance biologique devrait donc
instaurer des procdures qui permettent dalerter en temps utile le professionnel intress en
cas de rsultat anormal, inattendu ou surprenant, afin de lui donner la possibilit de prendre
rapidement les mesures qui simposent. Linterprtation des rsultats de laboratoire,
notamment des variations de concentration entre plusieurs chantillons successifs, dpend
souvent de la connaissance de la prcision du dosage. Dans loptique dune qualit totale qui
va du prlvement la prsentation des rsultats, les professionnels de la sant devraient tre
informs de la prcision et de lexactitude des rsultats, de mme que de la fourchette de
rfrence, des limites recommandes et des limites rglementaires, pour tre mieux mme
dinterprter les rsultats.
LES MTAUX ET LES COMPOSS ORGANOMTALLIQUES
P. Hoet et Robert Lauwerys
Les mtaux et les composs organomtalliques toxiques (alumi-nium, antimoine, arsenic
minral, bryllium, cadmium, chrome, cobalt, mercure mtallique et ses sels, nickel,
composs organo-mercuriels, plomb, plomb alkyl, slnium et vanadium) sont connus depuis
longtemps pour leurs risques potentiels sur la sant des sujets exposs. Des tudes
pidmiologiques portant sur la relation entre la dose interne et leffet induit, ou la rponse
observe chez des personnes exposes professionnellement certains de ces toxiques, ont
abouti la proposition de valeurs limites biologiques vise sanitaire (voir tableau 27.1).
Tableau 27.1 Mtaux: valeurs guides proposes par l'ACGIH, la Deutsche
Forshungsgmeinschaft
(DFG) et Lauwerys et Hoet (L. & H.)
Mtaux
Echantillons
Valeurs de
Limites de
Limites de la Limites de L. &
rfrence1 *
lACGIH
DFG (BAT)3
H. (TMPC)4
(BEI)2
Aluminium Srum/plasma
Urine
<1 g/100 ml
<30 g/g
Antimoine
Urine
<1 g/g
Arsenic
Urine (arsenic
inorganique +
mtabolites
mthyls)
<10 g/g
Bryllium
Urine
<2 g/g
Cadmium
Sang
Urine
Chrome
(composs
solubles)
Srum/plasma
Urine
<0,05 g/100 ml
<5 g/g
30 g/g (fin de
poste, fin de
semaine de
travail);
10 g/g
(augmentation
en cours de
poste)
Cobalt
Srum/plasma
Sang
<0,05 g/100 ml
<0,2 g/100 ml 0,1 g/100 ml
(fin de poste, fin
de semaine de
travail)
<2 g/g
15 g/l (fin de
poste, fin de
semaine de
Urine
50 g/g (si
moyenne
pondre en
fonction du
temps = 0,05
mg/m3) et
30 g/g (si
moyenne
pondre en
fonction du
temps = 0,01
mg/m3) (fin de
poste)
1,5 g/100 ml
15 g/l
0,5 g/100 ml
5 g/g
30 g/g (fin de
poste)
0,5 g/100 ml
(EKA**)
60 g/l
(EKA**)
30 g/g (fin de
poste, fin de
semaine de
Manganse Sang
Urine
<1 g/100 ml
<3 g/g
Mercure
Sang
inorganique
<1 g/100 ml
Urine
<5 g/g
Nickel
(composs
solubles)
Srum/plasma
Urine
<0,05 g/100 ml
<2 g/g
Plomb
Sang (plomb)
<25 g/100 ml
PPZ sanguin
<40 g/100 ml
de sang
<2,5g/g dHb
<50 g/g
<4,5 mg/g
Urine (plomb)
ALA urinaire
travail)
travail)
2 g/100 ml (fin
30 g/100 ml
(non critique)
de poste)
50 g/g (fin de
poste)
45 g/l
(EKA**)
30 g/g
femmes <45
ans: 30 g/100
ml
hommes: 70
g/100 ml
40 g/100 ml
40 g/100 ml de
sang ou 3 g/g
dHb
50 g/g
5 mg/g
femmes <45
ans: 6 mg/l;
hommes: 15
mg/l
Slnium
Srum/plasma
Urine
<15 g/100 ml
<25 g/g
Vanadium
Srum/plasma
Sang
Urine
<0,2 g/100 ml
<0,1 g/100 ml
<1 g/g
70 g/g
cratinine
50 g/g
Laluminium
Dans lindustrie, les travailleurs peuvent tre exposs aux composs daluminium minral par
voie inhalatoire et aux poussires contenant de laluminium par ingestion. Laluminium est
peu absorb par voie orale, mais son absorption est augmente par ladministration simultane
de citrates. Le taux dabsorption de laluminium dpos dans les poumons nest pas connu, la
biodisponibilit dpendant selon toute vraisemblance des caractristiques physico-chimiques
des particules. Lurine est la principale voie dexcrtion de laluminium absorb. Les
concentrations sriques et urinaires daluminium dpendent la fois de lintensit de
lexposition rcente et de la charge corporelle en aluminium. Chez les personnes non exposes
professionnellement, la concentration srique daluminium est habituellement infrieure
1 g/100 ml et dpasse rarement 30 g/g de cratinine dans lurine. Chez les sujets fonction
rnale normale, lexcrtion urinaire daluminium est un indicateur dexposition plus sensible
que la concentration srique ou plasmatique.
Des tudes effectues chez des soudeurs donnent penser que la cintique dexcrtion
urinaire de laluminium passe par un mcanisme deux tapes, dont la premire correspond
une demi-vie biologique denviron 8 heures. Chez les personnes exposes depuis plusieurs
annes, le mtal saccumule dans lorganisme et les concentrations sriques et urinaires
dpendent aussi de la charge corporelle. Laluminium saccumule dans diffrents
compartiments de lorganisme do il est excrt sur plusieurs annes des vitesses variables.
Une forte accumulation daluminium (os, foie, cerveau) a aussi t observe chez des patients
atteints dinsuffisance rnale. Les malades sous dialyse risquent une toxicit osseuse ou une
encphalopathie lorsque leur taux srique daluminium dpasse 20 g/100 ml, mais il est
possible dobserver des signes de toxicit des concentrations infrieures. Pour prvenir les
intoxications par laluminium, la Commission des Communauts europennes recommande
que la concentration plasmatique reste constamment infrieure 20 g/100 ml, toute
concentration suprieure 10 g/100 ml devant conduire augmenter la frquence de la
surveillance biologique et de la surveillance de la sant des travailleurs, et les concentrations
suprieures 6 g/100 ml devant tre considres comme le signe vident dune charge
corporelle excessive.
Lantimoine
Lantimoine inorganique peut pntrer dans lorganisme par ingestion ou inhalation, mais son
taux dabsorption nest pas connu. Les composs pentavalents absorbs sont excrts
principalement par voie urinaire, les composs trivalents par les fces. Une rtention de
composs antimoniques aprs une exposition de longue dure est possible. Les concentrations
sriques et urinaires normales en antimoine sont probablement infrieures 0,1 g/100 ml et
1 g/g de cratinine, respectivement.
Une tude prliminaire chez des travailleurs exposs de lantimoine pentavalent sur leur lieu
de travail montre quune exposition moyenne de 0,5 mg/m3, pondre en fonction du temps,
entranerait une lvation de la concentration urinaire pouvant atteindre 35 g/g de cratinine
au cours dun poste de travail.
Larsenic minral
Larsenic minral peut pntrer dans lorganisme par les voies gastro-intestinale et
respiratoire. Larsenic absorb est principalement limin par le rein, soit sous forme
inchange, soit aprs mthylation. Larsenic inorganique est galement excrt par la bile sous
forme de complexe avec le glutathion.
Dans le cas dune exposition orale unique une faible dose darsniate, 25% et 45% de la
dose administre sont excrts par voie urinaire en 1 et 4 jours, respectivement.
Aprs exposition larsenic trivalent ou pentavalent, lexcrtion urinaire est constitue de 10
20% darsenic inorganique, 10 20% dacide monomthylarsonique et 60 80% dacide
Pour des expositions moyennes (pondres en fonction du temps) de 0,1 mg/m3 et 0,05
mg/m3, on a constat sur des chantillons recueillis en fin de poste des concentrations
urinaires moyennes de 30 75 g/l et de 30 40 g/l, respectivement. Le moment des
prlvements est important, car on observe une augmentation progressive des concentrations
urinaires de cobalt au cours de la semaine de travail.
Chez les travailleurs exposs des oxydes ou des sels de cobalt, ou du cobalt en poudre
dans une raffinerie, on a constat quune exposition moyenne, pondre en fonction du temps,
de 0,05 mg/m3 conduisait une concentration moyenne de cobalt de 33 et 46 g/g de
cratinine dans les urines recueillies respectivement le lundi et le vendredi en fin de poste.
Le plomb
Le plomb inorganique, toxique cumulatif absorb par les poumons et le tube digestif, est le
mtal qui a t le mieux tudi. Il en rsulte que la fiabilit des mthodes biologiques utilises
pour valuer aussi bien lexposition rcente que la charge corporelle est meilleure pour le
plomb que pour tous les autres contaminants mtalliques.
En cas dexposition constante, la concentration de plomb dans le sang total est considre
comme le meilleur indicateur de la concentration dans les tissus mous et, donc, de
lexposition rcente. Laugmentation de la concentration sanguine sattnue cependant
progressivement lorsque le degr dexposition slve. Aprs une exposition professionnelle
prolonge, la concentration sanguine de plomb ne retombe pas ncessairement la valeur
initiale quand lexposition cesse, en raison dune libration continue de plomb partir des
dpts tissulaires. Les concentrations sanguines et urinaires normales de plomb sont
gnralement infrieures 20 g/100 ml et 50 g/g de cratinine, respectivement. Ces
concentrations peuvent dpendre des habitudes alimentaires et du lieu de rsidence des sujets
concerns. LOrganisation mondiale de la sant (OMS) a propos une valeur maximale
admissible pour la plombmie de 40 g/100 ml chez les hommes adultes et de 30 g/100 ml
chez les femmes en ge de procrer. Chez les enfants, des ractions indsirables au niveau du
systme nerveux central ont t corrles des valeurs infrieures ces limites. La
concentration urinaire de plomb slve de faon exponentielle avec le taux sanguin et, ltat
dquilibre, elle traduit surtout lexposition rcente.
La quantit de plomb excrte dans lurine aprs administration dun agent chlateur (EDTA
calcique, par exemple) est le reflet de la rserve de plomb mobilisable. Chez des sujets
tmoins, la quantit de plomb excrte dans lurine, dans les 24 heures suivant
ladministration intraveineuse de 1 g dEDTA, nexcde gnralement pas 600 g. Il semble
que, lors dune exposition constante, les quantits de plomb chlatables correspondent
principalement aux rserves de plomb prsentes dans les tissus mous et dans le sang, une
petite fraction seulement provenant du tissu osseux.
Une technique fluorescence X a t mise au point pour mesurer les concentrations de plomb
dans les tissus osseux (phalanges, tibia, calcanum, vertbres), mais la limite de dtection de
cette technique en restreint actuellement lutilisation aux sujets professionnellement exposs.
La technique du dosage du plomb dans les cheveux a t propose pour valuer la rserve de
plomb mobilisable. Sur un lieu de travail, il est cependant difficile de distinguer le plomb
endogne incorpor dans les cheveux de celui qui est simplement adsorb leur surface.
Le mesurage de la concentration de plomb dans la dentine pripulpaire des dents de lait a t
employ pour estimer lexposition au plomb au cours de la petite enfance.
Les paramtres refltant linterfrence du plomb avec des processus biologiques peuvent
galement tre utiliss pour valuer lintensit dune exposition saturnine. Les paramtres
biologiques couramment utiliss sont la coproporphyrine urinaire (COPRO-U), lacide deltaaminolvulinique urinaire (ALA-U), la protoporphyrine rythrocytaire (PE, ou
protoporphyrine zinc, PPZ), ainsi que lacide delta-aminolvuliniquedshydratase (ALAD) et
Le slnium
Le slnium est un oligo-lment essentiel. Les composs solubles du slnium semblent tre
facilement absorbs par les poumons et le tractus gastro-intestinal. Le slnium est surtout
excrt dans les urines mais, lorsque lexposition est trs forte, il peut aussi tre excrt dans
lair expir sous forme de vapeur de slniure de dimthyle. Les concentrations normales dans
le srum et les urines dpendent de labsorption journalire, qui peut varier sensiblement
selon les rgions, mais elles sont dordinaire infrieures 15 g/100ml et 25 g/g de
cratinine, respectivement. Le slnium urinaire traduit lexposition rcente. La relation entre
lintensit de lexposition et la concentration urinaire de slnium na pas encore t tablie.
Il semble que les concentrations plasmatiques (ou sriques) et urinaires refltent surtout
lexposition de courte dure, le slnium rythrocytaire tmoignant plutt de lexposition de
longue dure.
Les dosages sanguins ou urinaires de slnium permettent dtablir un bilan, plus souvent
pratiqu pour rechercher un dficit quune surexposition. Il nest gure possible de proposer
actuellement une limite biologique, car on ne dispose pas de donnes suffisantes sur les
risques dune exposition de longue dure au slnium et sur la relation entre les risques
potentiels pour la sant et les concentrations dans les milieux biologiques.
Le vanadium
Dans lindustrie, le vanadium est absorb principalement par voie pulmonaire, labsorption
orale semblant faible (moins de 1%). Le vanadium est excrt par les urines avec une demivie biologique denviron 20 40 heures et, pour une faible part, dans les fces. Le vanadium
urinaire semble tre un bon indicateur de lexposition rcente, mais la relation entre la
quantit retenue dans lorganisme et les concentrations urinaires na pas encore t bien
tablie. Il a t mentionn que lcart entre les concentrations urinaires de vanadium
constates avant et aprs le poste de travail pourrait permettre dvaluer lexposition pendant
cet intervalle de temps, alors que le dosage urinaire pratiqu aprs deux jours sans exposition
(le lundi matin) reflterait laccumulation du mtal dans lorganisme. Chez les personnes non
exposes professionnellement, la concentration urinaire de vanadium est dordinaire
infrieure 1 g/g de cratinine. La limite biologique pour le vanadium urinaire a
provisoirement t fixe 50 g/g de cratinine (en fin de poste).
LES SOLVANTS ORGANIQUES
Masayuki Ikeda
Introduction
Les solvants organiques sont volatils et gnralement solubles dans les graisses de
lorganisme (lipophiles), bien que certains dentre eux comme le mthanol ou lactone soient
galement solubles dans leau (hydrophiles). Ils ont t largement employs dans lindustrie et
pour la fabrication de produits dutilisation courante tels que les peintures, les encres, les
diluants, les dgraissants, les produits de nettoyage sec, les dtachants ou les rpulsifs. Bien
que la surveillance biologique puisse servir mettre en vidence leurs effets prjudiciables sur
la sant (au niveau du foie ou des reins, par exemple), il est de loin prfrable de surveiller le
niveau dexposition chez les personnes qui travaillent au contact des solvants organiques.
Cette mthode, suffisamment sensible, permet en effet de donner lalerte bien avant la
survenue de phnomnes de toxicit. La dtection des personnes particulirement sensibles
la toxicit des solvants peut aussi contribuer protger la sant des travailleurs.
Rappel sur la toxicocintique des solvants organiques
Dans les conditions habituelles demploi, les solvants organiques sont volatils, bien que ce
paramtre varie dun solvant lautre. Le principal mode dexposition en milieu de travail est
donc linhalation. Le taux dabsorption est beaucoup plus important au niveau des alvoles
pulmonaires qu celui de lappareil digestif, des taux dabsorption pulmonaire de lordre de
50% tant considrs comme caractristiques des solvants courants tels que le tolune. A
ltat liquide, certains solvants comme le sulfure de carbone et le N,N-dimthylformamide
(DMF) peuvent traverser la peau intacte en quantits suffisamment importantes pour entraner
des effets toxiques.
Aprs absorption dun solvant, une partie est exhale par la respiration sans aucune
biotransformation, alors que la majeure partie est distribue dans les organes et les tissus
riches en lipides, en raison du caractre lipophile de ce type de produit. La biotransformation
se droule principalement dans le foie (et, dans une moindre mesure, dans dautres organes);
par un processus doxydation, puis de conjugaison, la molcule devient suffisamment
hydrophile pour tre excrte par voie urinaire sous forme de mtabolite(s). Une faible partie
peut aussi tre limine sous forme inchange dans les urines.
Dun point de vue pratique, on peut donc faire appel trois milieux biologiques pour
surveiller lexposition aux solvants: lurine, le sang et lair expir. Lorsquon choisit lun ou
lautre de ces milieux, il faut tenir compte dun paramtre important, savoir la vitesse de
disparition de la substance absorbe. Ce paramtre, que lon peut valuer quantitativement par
la demi-vie biologique, correspond au temps ncessaire pour que la concentration diminue de
moiti dans le milieu en question. Cest ainsi que les solvants disparaissent de lair expir
beaucoup plus rapidement que leurs mtabolites urinaires en raison dune demi-vie beaucoup
plus courte. La demi-vie biologique de ces mtabolites varie par ailleurs en fonction de la
rapidit du mtabolisme du solvant absorb, de sorte que le moment du prlvement par
rapport lexposition est essentiel (voir ci-aprs). Un deuxime paramtre important dans le
choix du milieu biologique est la spcificit du produit chimique recherch par rapport
lexposition. Ainsi, lacide hippurique, utilis depuis longtemps comme marqueur de
lexposition au tolune, nest pas seulement form dans lorganisme, mais peut aussi avoir
une origine autre que professionnelle (additifs alimentaires, par exemple). Il nest donc plus
considr comme un marqueur fiable en cas de faibles expositions au tolune (infrieures 50
cm3/m3). Dune manire gnrale, les mtabolites urinaires sont trs largement utiliss comme
indicateurs dexposition diffrents solvants organiques. La recherche dun solvant dans le
sang donne des informations qualitatives sur lexposition, car le compos disparat
gnralement plus vite de ce milieu et ce rsultat reflte surtout les situations dexposition
aigu. Le dosage du solvant dans lair expir est difficile utiliser pour valuer lintensit
moyenne de lexposition, la concentration dans lair alvolaire diminuant rapidement lorsque
le sujet cesse dtre expos. Le dosage urinaire des solvants constitue en revanche une
solution prometteuse pour valuer lexposition, mais des tudes de validation
complmentaires simposent.
Les tests biologiques dexposition aux solvants organiques
Comme nous lavons mentionn, le moment du prlvement est un paramtre essentiel de la
surveillance biologique en cas dexposition des solvants. Le tableau 27.2 indique les
moments recommands pour les expositions professionnelles quotidiennes aux solvants les
plus courants. Lorsque lanalyse concerne le solvant lui-mme, il faut prendre soin dviter
toute perte, par vaporation, par exemple, ou toute contamination, notamment par lair
ambiant lors de la manipulation des chantillons prlevs. Des prcautions identiques
devraient tre prises lorsque les prlvements sont transports vers un laboratoire extrieur ou
sont conservs avant lanalyse. La conglation est recommande pour les mtabolites, alors
que la rfrigration (mais non la conglation) est prfrable pour le solvant lui-mme qui
devrait tre plac dans un rcipient tanche et sous vide (de prfrence dans un flacon
espace de tte). Dans une analyse chimique, le contrle qualit est indispensable la
fiabilit des rsultats (voir larticle intitul Lassurance qualit dans le prsent chapitre) et
des rgles dthique devraient tre respectes pour la communication des rsultats (voir
chapitre no 19, Les questions dthique).
Tableau 27.2 Exemples de produits chimiques recherchs lors d'une surveillance biologique
et moment de prlvement
Solvants
Produits chimiques
Urine/sang Moment de prlvement1
recherchs
N,N-dimthylformamide
N-mthylformamide
Urine
L Ma Me J V
Urine
Hexane
2,4-Hexanedione
Hexane
Urine
Sang
L Ma Me J V
Confirmation de lexposition
Mthanol
Mthanol
Urine
L Ma Me J V
Styrne
Acide mandlique
Acide phnylglyoxylique
Styrne
Urine
Urine
Sang
JV
JV
Confirmation de lexposition
Sulfure de
carbone
Acide 2-thiothiazolidine4-carboxylique
Urine
JV
Tolune
Acide hippurique
o-Crsol
Tolune
Tolune
Urine
Urine
Sang
Urine
Ma Me J V
Ma Me J V
Confirmation de lexposition
Ma Me J V
Urine
JV
Urine
JV
Sang
Confirmation de lexposition
Ma Me J V
Ma Me J V
Fin de poste, sauf indication contraire (jours indiqus = jours de prlvement prfrs).
Trois isomres, spars ou combins.
Source: d'aprs OMS, 1996.
Il existe des procdures analytiques pour le dosage de nombreux solvants. Ces mthodes
varient selon le produit chimique considr, mais la plupart de celles qui ont t mises au
point rcemment font appel la chromatographie en phase gazeuse (CG) ou la
chromatographie liquide haute performance (CLHP). Lutilisation dun chantillonneur
automatique et le traitement informatique des donnes sont recommands pour assurer le
contrle qualit des rsultats. Lorsquon doit analyser un solvant sous forme inchange dans
le sang ou dans lurine, il est trs utile de recourir la technique de la chromatographie en
phase gazeuse avec espace de tte, surtout pour les solvants qui sont relativement volatils.
Le tableau 27.3 donne quelques exemples de mthodes utilises pour les solvants les plus
courants.
2
Urine
Chromatographie en phase
gazeuse avec dtection thermoionique (CG-DTI)
2Ethoxythanol
et son actate
Acide thoxyactique
Urine
Extraction, drivation et
chromatographie en phase
gazeuse avec dtection
ionisation de flamme (CG-FID)
Hexane
2,4-Hexanedione
Hexane
Urine
Sang
Mthanol
Mthanol
Urine
Styrne
Acide mandlique
Acide phnylglyoxylique
Styrne
Urine
Urine
Sang
Filtration et CLHP-UV
Filtration et CLHP-UV
CG-FID avec espace de tte
Sulfure de
carbone
Acide 2-thiothiazolidine-4carboxylique
Urine
Tolune
Acide hippurique
o-Crsol
Tolune
Tolune
Urine
Urine
Sang
Urine
Filtration et CLHP-UV
Hydrolyse, extraction et CG-FID
CG-FID avec espace de tte
CG-FID avec espace de tte
Trichlorothylne
Acide trichloroactique
(TCA)
Urine
Colorimtrie ou estrification et
chromatographie en phase
gazeuse avec dtection capture
dlectrons (CG-DCE)
Oxydation et colorimtrie, ou
hydrolyse, oxydation,
estrification et CG-DCE
CG-DCE avec espace de tte
Les mutations sont des modifications hrditaires permanentes des lignes cellulaires,
touchant soit les cellules somatiques, soit les cellules germinales (cellules sexuelles). Elles
peuvent donc affecter lorganisme par modification des cellules somatiques ou tre transmises
la descendance en raison des lsions induites au niveau des cellules sexuelles. La
gnotoxicit prcde ainsi la mutagnicit, mais il faut rappeler que la plupart des lsions
gnotoxiques sont rpares et ne sont jamais exprimes sous forme de mutations. Les
mutations somatiques sont induites au niveau cellulaire et, dans le cas o elles conduisent la
mort cellulaire ou des atteintes malignes, elles peuvent se manifester par des troubles varis
au niveau des tissus ou de lorganisme lui-mme. Le vieillissement ou la formation de plaques
dathrosclrose sont vraisemblablement des effets lis des mutations somatiques (voir
figure 27.3 et le chapitre no 2 Le cancer).
Figure 27.3 Reprsentation schmatique du processus gnotoxique et de ses rpercussions sur
la sant humaine
Les mutations de la ligne cellulaire germinale peuvent tre transfres au zygote (luf
fcond) pour sexprimer la gnration suivante (voir galement le chapitre no 9 Le
systme reproducteur). Les troubles mutationnels les plus importants retrouvs chez le
nouveau-n sont dus une mauvaise sparation des chromosomes pendant la gamtogense
(dveloppement des cellules germinales), conduisant des syndromes chromosomiques
graves (par exemple, trisomie 21 ou syndrome de Down, et monosomie X ou syndrome de
Turner).
La figure 27.3 reprsente de manire schmatique le processus gnotoxique, depuis
lexposition jusquaux effets prvisibles.
Diffrents arguments exprimentaux indirects permettent de con- firmer la relation entre
gnotoxicit et cancrognicit, comme le montre la figure 27.4.
Figure 27.4 Relations entre gnotoxicit et cancrognicit
Cest cette corrlation qui sert de fondement lutilisation des marqueurs biologiques de
gnotoxicit comme indicateurs du risque de cancer chez lhumain.
La toxicit gntique et lidentification du risque
Le rle des altrations gntiques en cancrogense explique limportance des tests de toxicit
gntique aux fins de lidentification des agents cancrognes potentiels. Diffrents tests
court terme permettent de dtecter des signes de gnotoxicit ayant un rapport probable avec
le processus de cancrogense.
Plusieurs tudes grande chelle ont t ralises afin de comparer le pouvoir cancrogne de
certains produits chimiques et les rsultats obtenus lors de tests court terme. Il est apparu
quaucun test valid ne peut fournir lui seul des informations suffisantes sur lensemble des
risques gntiques mentionns ci-dessus, et que tout produit chimique doit tre soumis
plusieurs tests. La validit des tests de gnotoxicit court terme utiliss pour prvoir le
potentiel cancrogne dun produit chimique a fait lobjet de nombreuses discussions et
synthses. A partir de ces donnes, un groupe de travail du CIRC a conclu que la plupart des
agents cancrognes chez lhumain donnent des rsultats positifs dans les tests court terme
courants, tels que le test sur Salmonella ou les tests daberrations chromosomiques (voir
tableau 27.4). Il faut nanmoins souligner que les agents cancrognes pigntiques, qui
peuvent majorer les processus gnotoxiques sans pour autant tre eux-mmes gnotoxiques
(par exemple, composs activit hormonale), ne sont pas dtects par les tests court terme
qui montrent uniquement lactivit gnotoxique intrinsque dune substance.
24/30
80
14/20
70
72/128
56
3: non classs
19/66
29
Lymphocytes
Lymphocytes
Micronoyaux
Lymphocytes
Adduits lADN
Adduits protiniques
Hmoglobine, albumine
Activation doncogne
Mutations/oncoprotines
Rparation dADN
sanguins
Les altrations reconnaissables de la molcule dADN incluent la formation dadduits
lADN et la rorganisation de la squence dADN. Les lsions par formation dadduits
lADN sont dceles par diverses techniques, comme le postmarquage au 32P ou lutilisation
danticorps monoclonaux anti-adduits. La dtection des cassures de brin dADN se fait
traditionnellement laide de techniques dlution alcaline ou de droulement. Les mutations
peuvent tre mises en vidence par le squenage de lADN dun gne spcifique, comme le
gne HPRT.
Plusieurs rapports mthodologiques dtaillant les techniques utilises (voir tableau 27.5) ont
t publis (CCE, 1987; CIRC, 1988, 1992, 1994).
La gnotoxicit peut aussi tre contrle indirectement par la dtection des adduits protiques
(sur lhmoglobine, par exemple) ou par la dtermination de lactivit rparatrice de lADN.
En tant que stratgie de surveillance, les contrles peuvent tre effectus de manire
ponctuelle ou continue; dans tous les cas, les rsultats obtenus doivent contribuer
lamlioration de la scurit des conditions de travail.
La surveillance biologique cytogntique
Des fondements thoriques et empiriques relient cancer et lsions chromosomiques. Les
mutations touchant lactivit ou lexpression de gnes de facteurs de croissance sont des
tapes cls de la cancrogense. De nombreux types de cancers ont t associs des
aberrations chromosomiques, spcifiques ou non. Dans plusieurs maladies hrditaires qui
frappent ltre humain, on a pu tablir une corrlation entre linstabilit chromosomique et
une sensibilit accrue au cancer.
La surveillance cytogntique des personnes exposes des produits chimiques ou des
rayonnements cancrognes ou mutagnes permet de mettre en vidence les effets sur le
matriel gntique. Mais alors que les aberrations chromosomiques sont tudies depuis
plusieurs dizaines dannes chez les personnes exposes des rayonnements ionisants dans
leur travail, seuls quelques agents cancrognes ont donn lieu des rsultats clairement
tays dans la sphre des produits chimiques.
Les lsions chromosomiques observables en microscopie sont constitues par des aberrations
chromosomiques structurelles dans lesquelles on observe dimportantes modifications
morphologiques et par des changes de chromatides surs qui consistent en un change
symtrique de matriel chromosomique entre deux chromatides surs. Les micronoyaux
proviennent de fragments acentriques de chromosomes ou de chromosomes entiers
abandonns. Ce type daltrations est illustr la figure 27.6.
Figure 27.6 Chromosomes de lymphocytes humains la mtaphase montrant une mutation
chromosomique induite (flche pointe vers un fragment acentrique)
Les lymphocytes humains circulants conviennent bien aux tudes de surveillance, car ils sont
faciles obtenir et permettent dintgrer lexposition sur une priode relativement longue.
Lexposition de nombreux produits chimiques mutagnes peut accrotre la frquence des
aberrations chromosomiques ou des changes de chromatides surs dans les lymphocytes
circulants des sujets exposs. Lintensit des lsions observes est pratiquement corrle
lexposition, bien que cette corrlation nait t dmontre que pour quelques produits
chimiques.
Lorsque les tests cytogntiques effectus sur des lymphocytes circulants rvlent une atteinte
du matriel gntique, les rsultats ne peuvent servir estimer le risque qu lchelle dune
population. Une augmentation de la frquence des aberrations chromosomiques dans une
population devrait tre considre comme le signe dun risque accru de cancer, mais les tests
cytogntiques ne permettent pas de prvoir le risque de cancer sur une base individuelle.
Les lsions gntiques somatiques observes sur les lymphocytes circulants dun prlvement
nont gure de signification lchelle individuelle puisque la plus grande partie des
lymphocytes porteurs de lsions gntiques sont dtruits et remplacs.
Les problmes lis aux tudes de surveillance biologique chez lhumain
Il faut pouvoir compter sur un plan dtude rigoureux pour assurer une surveillance
biologique chez lhumain, car de nombreux facteurs individuels non lis lexposition au(x)
produit(s) chimique(s) spcifiquement recherch(s) peuvent affecter les rponses biologiques
tudies. Dans la mesure o les tudes de surveillance biologique sont longues et difficiles, il
est important de bien les planifier. La confirmation exprimentale du potentiel gnotoxique
dun produit chimique est une condition pralable de toute tude cytogntique chez ltre
humain.
Deux causes majeures de variations peuvent survenir lors des tudes de surveillance
biologique cytogntique. La premire peut tre due des facteurs techniques lis une
discordance de lecture des lames ou aux conditions de culture, notamment au type de milieu,
la temprature ou la concentration des substances chimiques ajoutes au milieu de culture
(bromodsoxyuridine ou cytochalasine-B, par exemple). Le moment de lchan- tillonnage
peut galement avoir une influence sur les rsultats du test daberrations chromosomiques et,
sans doute galement, du test des changes de chromatides surs, en raison de modifications
au niveau des sous-populations lymphocytaires T et B. Dans le test des micronoyaux, les
rsultats obtenus dpendent troitement de la mthodologie (par exemple, utilisation de
cellules binucles induites par la cytochalasine-B).
Les lsions causes lADN lymphocytaire par lexposition des produits chimiques qui
conduisent des aberrations chromosomiques, des changes de chromatides surs ou des
micronoyaux doivent persister in vivo jusquau moment du prlvement sanguin, puis in vitro
jusqu ce que les lymphocytes en culture commencent synthtiser de lADN. Il est donc
important dexaminer les cellules immdiatement aprs leur premire division (en cas
daberrations chromosomiques ou de micronoyaux) ou aprs la seconde division (lors
dchanges de chromatides surs) afin destimer au mieux les lsions induites.
La lecture des rsultats est un aspect capital de la surveillance biologique cytogntique. Les
lames doivent tre randomises et codes, afin dviter dans toute la mesure possible les biais
lis lvaluation. Il est indispensable de se rfrer des critres dvaluation cohrents,
dassurer un contrle de qualit et, enfin, de normaliser les analyses statistiques et la
prsentation des rsultats. Il existe une deuxime cause importante de variation des rsultats
lie des facteurs individuels: ge, sexe, prise de mdicaments, infections ou encore
sensibilit gntique aux produits prsents dans lenvironnement.
Il est essentiel de constituer un groupe tmoin prsentant des caractristiques aussi proches
que possible de celles du groupe tudi, tant pour le sexe et lge que pour les habitudes
tabagiques, les infections virales et les vaccinations, la consommation dalcool, la prise de
mdicaments et lexposition aux rayons X. Lexposition professionnelle au(x) produit(s)
gnotoxique(s) suspect(s) devra galement tre connue qualitativement (type de travail,
anciennet de lexposition) et quantitativement (concentration du produit dans la zone
respiratoire et mtabolites spcifiques, si possible). Une attention particulire devrait tre
porte lanalyse statistique des rsultats.
La pertinence de la surveillance biologique gntique aux fins de lvaluation du risque de
cancer
A ce jour, ce nest que pour certains agents quil a t possible de dmontrer de manire
rpte quils induisaient des modifications cytogntiques chez lhumain, alors que la plupart
des substances cancrognes connues altrent les chromosomes lymphocytaires.
Limportance des lsions est fonction du niveau dexposition, comme cela a t notamment
montr pour le chlorure de vinyle, le benzne, loxyde dthylne et les agents anticancreux
alkylants. Bien que les tests cytogntiques naient pas encore une sensibilit et une
spcificit suffisantes pour dceler les cas dexposition des substances toxiques dans le
milieu professionnel, il reste quen prsence de rsultats positifs, des enqutes dhygine du
travail ont souvent t effectues, mme si la relation entre les lsions chromosomiques
somatiques et les effets prjudiciables pour la sant ntait pas prouve.
Les informations dont on dispose en matire de surveillance biologique cytogntique
proviennent pour lessentiel des situations professionnelles forte exposition. Trs peu de
cas ont t confirms par plusieurs tudes indpendantes et la plupart dentre elles reposaient
sur la dtection des aberrations chromosomiques. Dans la version mise jour des
Monographies du CIRC (vol. 43 50) figurent au total 14 cancrognes professionnels de
classe 1, 2A ou 2B pour lesquels des tests cytogntiques se sont rvls positifs chez
lhumain, avec confirmation de la plupart des rsultats chez lanimal (voir tableau 27.6). Cette
base de donnes limite donne penser que les produits chimiques cancrognes ont tendance
tre clastognes, et que ce pouvoir clastogne est associ aux cancrognes humains connus.
Tous les cancrognes ninduisent cependant pas de lsions cytogntiques chez lhumain ou
les animaux in vivo. Les cas o des donnes animales positives ne sont pas retrouves chez
lhumain peuvent tre dus des diffrences de niveau dexposition. Il est aussi possible que
les expositions professionnelles complexes et prolonges chez lhumain ne soient pas
comparables aux exprimentations animales de courte dure.
Tableau 27.6 Produits cancrognes pour l'humain utiliss en milieu professionnel et ayant
fait l'objet de tests cytogntiques la fois chez l'humain et chez l'animal (pouvoir
cancrogne avr, probable ou potentiel)
Tests cytogntiques1
Humain
Produits/exposition
AC
Animal
SCE
MN
AC
SCE
MN
Amiante
Benzne
Bis(chloromthyl)ther et
chloromthylmthyl ther (qualit
technique)
(+)
Chlorure de vinyle
Composs du nickel
Cyclophosphamide
Fume de tabac
Melphalan
+
+
Radon
Adriamycine
()
Cisplatine
Dibromure dthylne
Epichlorhydrine
Formaldhyde
Oxyde dthylne
DDT
Dimthylformamide
(+)
Styrne
2,3,7,8-Ttrachlorodibenzo- pdioxine
Vapeurs de soudage
mutation spcifique ayant un rapport direct avec des processus cancreux chez les rongeurs
exposs au produit chimique tudi (voir figure 27.7).
Figure 27.7 Pertinence des marqueurs de surveillance biologique gntique pour la prvision
des risques de cancer
Considrations thiques et surveillance biologique gntique
Les progrs rapides des techniques de gntique molculaire, lvolution acclre du
squenage du gnome humain et la mise en vidence du rle des gnes suppresseurs de
tumeurs et des proto-oncognes en cancrogense humaine soulvent des questions de nature
thique quant linterprtation, la communication et lutilisation des informations
personnelles de ce type. Le dveloppement rapide des techniques danalyse des gnes
humains permettra bientt didentifier de nouveaux gnes de sensibilit hrditaires chez les
sujets sains asymptomatiques qui se prteront aux dpistages gntiques (US Office of
Technology Assessment, 1990).
De nombreuses questions dordre social et thique se poseront si lutilisation du dpistage
gntique devient une ralit. Ds prsent, une cinquantaine de particularismes gntiques
touchant le mtabolisme, les polymorphismes enzymatiques, les systmes de rparation de
lADN sont souponns dtre lorigine dune sensibilit accrue diverses pathologies, et il
existe des tests diagnostiques portant sur lADN pour environ 300 maladies gntiques.
Plusieurs questions viennent spontanment lesprit. Le dpistage gntique est-il de mise en
milieu de travail? Qui prendra la dcision de faire subir un tel dpistage? Comment seront
utilises ces informations pour les dcisions dembauche ou de carrire? Qui y aura accs et
comment les rsultats seront-ils communiqus aux personnes concernes? Beaucoup de ces
questions sont fortement lies aux normes sociales et aux valeurs thiques qui ont cours. Le
principal objectif doit tre la prvention de la maladie et de la souffrance humaine, mais la
volont propre des individus et les principes thiques ne sauraient pour autant tre ignors.
Cest ces questions dordre thique quil faut apporter une rponse avant de mettre en place
toute tude de surveillance biologique sur le lieu de travail (voir tableau 27.7 et le chapitre no
19 Les questions dthique).
Tableau 27.7 Etudes de surveillance biologique gntique en mdecine du travail et principes
thiques lis au droit l'information
Destinataires de linformation
Nature de linformation
Personne
concerne
Mdecin du
travail
Employeur
Objet du test
Justification du test
Risques encourus
Donnes confidentielles
Continue et prolonge
Variable et intermittente
Niveau dexposition
Relativement constante
Extrmement variable
Type dexposition
Un plusieurs produits
Absorption cutane
Facile contrler
Contrles dambiance
Utile
Rarement informative
Surveillance biologique
Lgre
Convalescence
en 1-3 jours
60-90
Modre
Convalescence
en 1-2 semaines
90-100
Svre
Les valeurs normales de lactivit de lAChE et de la PChE prsentent des variations chez les
sujet sains, de mme que dans certaines conditions physiopathologiques spcifiques (voir
tableau 27.10). La sensibilit de ces paramtres biologiques aux fins du suivi dune exposition
aux organophosphors est donc meilleure si lon prend comme rfrence les valeurs basales
de chaque individu avant exposition pour les comparer aux activits cholinestrasiques
constates aprs exposition. Les valeurs de rfrence de la population ne devraient tre
retenues que si les taux individuels avant exposition sont inconnus (voir tableau 27.11).
Tableau 27.10 Activit de l'actylcholinestrase (AChE) et de la cholinestrase plasmatique
(PChE): variations chez le sujet sain et dans certaines conditions physiopathologiques
Activit de lAChE
Activit de la PChE
Sujets sains
Variation interindividuelle1 10-18%
15-25%
Variation intraindividuelle1
3-7%
6%
Non
Age
Masse corporelle
Corrlation positive
Cholestrol srique
Corrlation positive
Variation saisonnire
Non
Non
Variation circadienne
Non
Non
Menstruation
Diminue
Grossesse
Diminue
Etats pathologiques
Activit diminue
Leucmie, noplasie
Activit augmente
Hommes
Femmes
0,770,08
0,750,08
0,950,19
0,820,19
Hommes/femmes 13,20,31
4,900,02
Hommes
Femmes
3,030,66
3,030,68
4,010,65
3,450,61
* Moyenne cart-type.
Sources: 1 Laws, 1991. 2 Alcini et coll., 1988.
Le sang devrait tre prlev de prfrence dans les 2 heures suivant lexposition. La ponction
veineuse est prfrable au prlvement de sang capillaire recueilli au bout du doigt ou au lobe
de loreille car, chez les sujets exposs, la peau risque dtre souille par le pesticide
lendroit du prlvement. Il est recommand de dterminer la valeur normale de base de
chaque individu sur trois chantillons successifs prlevs avant exposition (OMS, 1982c).
Il existe diverses mthodes analytiques pour mesurer lAChE et la PChE sanguines.
LOrganisation mondiale de la sant (OMS) recommande comme mthode de rfrence celle
dEllman par spectrophotomtrie (Ellman et coll., 1961).
Les indicateurs biologiques dexposition. La surveillance dune exposition aux
organophosphors est assure grce au dosage urinaire des mtabolites drivs de la partie
alkylphosphate de la molcule dorganophosphors ou des rsidus dhydrolyse de la liaison PX (voir figure 27.8).
Figure 27.8 Hydrolyse des insecticides organophosphors
Les mtabolites alkylphosphates. Le tableau 27.12 dresse la liste des mtabolites urinaires
alkylphosphates et des produits dont ils sont issus. Les alkylphosphates urinaires sont des
marqueurs sensibles dexposition aux organophosphors, leur prsence dans lurine tant en
effet dcelable pour des niveaux dexposition auxquels aucune inhibition de la cholinestrase
plasmatique ou rythrocytaire nest observe. Lexcrtion urinaire des alkylphosphates a t
mesure dans diffrentes conditions dexposition et avec divers organophosphors (voir
tableau 27.13). Quelques tudes ont tabli une relation entre les doses externes de ce type
dinsecticide et les concentrations urinaires dalkylphosphates. Certaines ont dmontr une
relation significative entre lactivit cholinestrasique et les concentrations urinaires
dalkylphosphates.
Tableau 27.12 Pesticides organophosphors: mtabolites alkylphosphates retrouvs dans
l'urine
Mtabolites
Abrviations
Principaux produits de dpart
Monomthylphosphate
MMP
Malathion, parathion
Dimthylphosphate
DMP
Dithylphosphate
DEP
Dimthylthiophosphate
DMTP
Dithylthiophosphate
DETP
Dimthyldithiophosphate DMDTP
Dithyldithiophosphate
Disulfoton, phorate
DEDTP
Acide phnylphosphorique
Leptophos, EPN
Parathion2
Intoxication
non mortelle
Orale
DEP = 0,5
DETP = 3,9
Disulfoton2
Fabrication
Cutane/ inhalation
DEP = 0,01-4,40
DETP = 0,01-1,57
DEDTP = <0,01-0,05
Phorate2
Fabrication
Cutane/ inhalation
DEP = 0,02-5,14
DETP = 0,08-4,08
DEDTP = <0,01-0,43
Malathion3
Epandage
Cutane
DMDTP = <0,01
Fenitrothion3
Epandage
Cutane
DMP = 0,01-0,42
DMTP = 0,02-0,49
Monocrotophos4
Epandage
Cutane/ inhalation
DMP = <0,04-6,3/24 h
Pour les abrviations, voir tableau 27.12. 2 Dillon et Ho, 1987. 3 Richter, 1993. 4 van Sittert et
Dumas, 1990.
En principe, les alkylphosphates sont excrts rapidement dans lurine. Les chantillons
urinaires devraient donc tre recueillis en fin de poste pour doser ces mtabolites.
Le dosage des alkylphosphates urinaires ncessite une mthode analytique assez labore,
base sur la drivation des composs et la dtection par chromatographie en phase gazeuse
(Shafik et coll., 1973a; Reid et Watts, 1981).
Les rsidus dhydrolyse. Le p-nitrophnol (PNP) est le mtabolite phnolique du parathion,
du mthylparathion et de lthylparathion. Le dosage du PNP urinaire (Cranmer, 1970) est un
indicateur fiable quon emploie beaucoup pour surveiller les expositions au parathion. Il
existe une bonne corrlation entre le PNP urinaire et la quantit de parathion absorbe. Une
excrtion urinaire de PNP allant jusqu 2 mg/l, aprs absorption de parathion, ne
saccompagne daucun symptme dintoxication et daucune variation notable des activits
cholinestrasiques. Le p-nitrophnol est rapidement excrt et les taux urinaires deviennent
insignifiants dans les 48 heures qui suivent lexposition. Les chantillons urinaires devraient
donc tre recueillis rapidement aprs lexposition.
Les carbamates
Les indicateurs biologiques deffet. Les pesticides carbamiques comprennent des
insecticides, des fongicides et des herbicides. La toxicit des carbamates insecticides est due
linhibition de lAChE synaptique, tandis que dautres mcanismes de toxicit interviennent
pour les carbamates herbicides ou fongicides. Seule lexposition aux insecticides carbamiques
est donc justiciable de la recherche de lactivit cholinestrasique rythrocytaire (AChE) ou
plasmatique (PChE). LAChE est habituellement plus sensible leffet inhibiteur des
carbamates que la PChE. Les personnes exposes professionnellement aux carbamates
prsentent gnralement des symptmes cholinergiques lorsque lactivit de lAChE dans le
sang est infrieure 70% de la valeur basale individuelle (OMS, 1982b).
Linhibition des cholinestrases par les carbamates est rapidement rversible. Cest pourquoi
des rsultats faussement ngatifs peuvent tre observs si un dlai trop long scoule entre
lexposition et le recueil de lchantillon biologique, ou entre celui-ci et lanalyse. Pour viter
ces problmes, il est recommand de prlever les chantillons de sang et de les analyser dans
les 4 heures qui suivent lexposition. La prfrence devrait tre donne aux mthodes
analytiques qui permettent de mesurer lactivit cholinestrasique immdiatement aprs la
prise de sang, comme nous lavons dj mentionn pour les organophosphors.
Les indicateurs biologiques dexposition. Le dosage des mtabolites urinaires comme
mthode de surveillance dune exposition humaine aux carbamates na t utilis que pour
quelques produits et dans un nombre limit dtudes. Le tableau 27.14 en rsume les
principales donnes. Les carbamates tant rapidement excrts dans lurine, le dosage des
mtabolites devrait tre effectu sur des chantillons recueillis peu aprs lexposition. Les
mthodes analytiques pour le dosage de ces mtabolites urinaires ont t dcrites par Dawson
et coll. (1964), DeBernardinis et Wargin (1982) ainsi que Verberk et coll. (1990).
Tableau 27.14 Concentrations urinaires de mtabolites carbomiques enregistres dans des
tudes de terrain
Produits
Indices
Conditions
Concentrations Rsultats
Rfrences
biologiques dexposition
dans lair
Carbaryl
alphanaphthol
alphanaphthol
Fabrication
Mlange/
pandage
0,23-0,31
mg/m3
a-naphthol
Population non
expose
Verberk et
coll., 1990
Sulfure de
carbone (CS2)
Fabrication
1,03 0,62
mg/m3
TTCA1
Fabrication
Manbe/
mancozbe
ETU2
Epandage
Mancozbe
Manganse
Epandage
57,2 g/m3
Kurttio et
coll., 1990
Il est courant de trouver du sulfure de carbone, du TTCA et du manganse dans lurine des
sujets non exposs. Il est donc recommand de mesurer les concentrations urinaires de ces
composs avant toute exposition et de recueillir les chantillons durine le matin suivant
larrt de lexposition. Les mthodes analytiques applicables au dosage du CS2, du TTCA et
de lthylnethioure ont t dcrites par Maroni et coll. (1992).
Les pyrthrinodes de synthse
Les indicateurs biologiques dexposition. Les pyrthrinodes de synthse sont des
insecticides analogues aux pyrthrines naturelles. Des tudes ralises sur des volontaires
humains ont permis didentifier les mtabolites urinaires aux fins de la surveillance
biologique. Lacide 3-(2,2-dichloro-vinyl)-dimthyl-cyclopropane carboxylique (Cl2CA),
mtabolite acide, est excrt chez les sujets traits per os par la permthrine et la
cypermthrine, lanalogue brom (Br2CA) tant retrouv chez les sujets traits par la
deltamthrine. Chez les volontaires traits par la cypermthrine, un mtabolite phnoxy,
lacide 4-hydroxy-phnoxy benzoque (4-HPBA), a galement t identifi. Ces mtabolites
ne sont cependant pas trs employs pour la surveillance des expositions professionnelles en
raison de la complexit des techniques analytiques ncessaires (Eadsforth, Bragt et van Sittert,
1988; Kolmodin-Hedman, Swensson et Akerblom, 1982). Chez les utilisateurs de
cypermthrine, les taux urinaires de Cl2CA se situent entre 0,05 et 0,18 mg/l, alors que chez
les ouvriers fabriquant lalpha-cypermthrine les taux urinaires de 4-HPBA sont infrieurs
0,02 mg/l.
Il est recommand de doser les mtabolites dans les urines de 24 heures recueillies ds la fin
de lexposition.
Les organochlors
Les indicateurs biologiques dexposition. Les insecticides organochlors trs employs dans
les annes cinquante et soixante, ont cess pour la plupart de ltre dans de nombreux pays en
raison de leur persistance dans lenvironnement.
La surveillance biologique de lexposition aux organochlors peut tre assure par le dosage
des substances elles-mmes ou de leurs mtabolites dans le sang ou le srum (Dale, Curley et
Cueto, 1966; Barquet, Morgade et Pfaffenberger, 1981). Aprs absorption, laldrine est
rapidement mtabolise en dieldrine qui peut tre dose dans le sang. Lendrine a une demivie trs courte dans le sang et son dosage ne peut donc seffectuer quen cas dexposition
rcente. Le dosage dun mtabolite urinaire, lanti-12-hydroxy-endrine, peut galement
permettre de surveiller les expositions lendrine.
Une corrlation significative entre la concentration des indicateurs biologiques et la survenue
deffets toxiques a t mise en vidence pour certains composs organochlors. Des signes
dintoxication aprs exposition laldrine et la dieldrine apparaissent des concentrations
sanguines de dieldrine suprieures 200 g/l. Une concentration sanguine de lindane de
20 g/l est considre comme le seuil critique dapparition de signes et de symptmes
neurologiques. Aucun effet nocif aigu na t observ chez les travailleurs exposs des
concentrations sanguines dendrine infrieures 50 g/l. Aucun effet indsirable prcoce
(induction denzymes microsomales hpatiques) na t signal pour des expositions rptes
lendrine entranant des concentrations urinaires danti-12-hydroxy-endrine infrieures
130 g/g de cratinine et pour des expositions rptes au DDT correspondant des
concentrations sriques de DDT ou de DDE infrieures 250 g/l.
Les organochlors peuvent tre trouvs en faibles concentrations sanguines ou urinaires dans
la population gnrale. Les concentrations mesures dans le sang peuvent ainsi atteindre
1 g/l pour le lindane, 10 g/l pour la dieldrine et 100 g/l pour le DDT ou le DDE, et les
taux urinaires peuvent aller jusqu 1 g/g de cratinine pour lanti-12-hydroxy-endrine. Il est
donc recommand de mesurer les taux de base initiaux, avant toute exposition.
Chez les sujets exposs, les chantillons sanguins devraient tre prlevs ds la fin dune
exposition unique. En cas dexposition de longue dure, le moment du prlvement sanguin
nest pas critique. Des chantillons ponctuels durine devraient tre recueillis en fin
dexposition en vue de doser les mtabolites urinaires.
Les triazines
Les indicateurs biologiques dexposition. Peu de travaux ont port sur lexcrtion urinaire de
latrazine et de ses mtabolites triaziniques chez les sujets exposs. La figure 27.9 montre les
profils dexcrtion urinaire des mtabolites de latrazine aprs exposition cutane des
concentrations datrazine de lordre de 174 275 mol/poste de travail (Catenacci et coll.,
1993). Etant donn que les autres chlorotriazines (simazine, propazine, terbuthylazine)
prsentent un mtabolisme identique celui de latrazine, il est possible de doser les
mtabolites triaziniques dsalkyls pour surveiller lexposition tous les herbicides
chlorotriaziniques.
Figure 27.9 Profils d'excrtion urinaire des mtabolites de l'atrazine
La dtermination qualitative des substances inchanges dans lurine peut tre utilise pour
identifier les composs responsables de lexposition. Il est recommand de rechercher les
mtabolites dans les urines de 24 heures recueillies partir du dbut de lexposition.
Un test, appel test ELISA, a permis didentifier un conjugu mercapturique de latrazine
comme mtabolite urinaire majeur chez les travailleurs exposs. Ce conjugu est retrouv
des concentrations au moins dix fois suprieures celles des mtabolites dsalkyls. La
quantit totale de conjugu mercapturique excrte sur une priode de dix jours est corrle
lexposition cutane et respiratoire cumule (Lucas et coll. 1993).
Les drivs coumariniques
Les indicateurs biologiques deffet. Les rodenticides coumariniques inhibent lactivit des
enzymes du cycle de la vitamine K dans le foie des mammifres, y compris chez lhumain
(voir figure 27.10), provoquant ainsi une rduction dose-dpendante de la synthse des
facteurs de coagulation dpendant de la vitamine K, particulirement des facteurs II
(prothrombine), VII, IX et X. Les effets anticoagulants apparaissent lorsque les taux
plasmatiques des facteurs de coagulation ont diminu denviron 20% par rapport aux valeurs
normales.
Figure 27.10 Cycle de la vitamine K
Ces antagonistes de la vitamine K ont t subdiviss en composs de premire gnration
(comme la warfarine) et de seconde gnration (brodifacoum, difenacoum, par exemple),
ces derniers tant caractriss par une trs longue demi-vie biologique (100 200 jours).
On fait souvent appel au test du temps de Quick (taux de prothrombine) pour surveiller
lexposition aux drivs coumariniques. Il faut prciser que ce test nest sensible qu partir
dune diminution denviron 20% des facteurs de coagulation plasmatiques par rapport la
normale. On ne peut donc pas lemployer pour dceler les effets prcoces dune exposition,
pour lesquels il est recommand de mesurer la concentration plasmatique de prothrombine.
A lavenir, ces tests pourraient tre remplacs par la dtermination des facteurs prcurseurs de
la coagulation (PIVKA, ou protine induite par les antivitamines K), substances retrouves
dans le sang uniquement en cas de blocage du cycle de la vitamine K par les coumarine.
Dans des conditions dexposition prolonge, le moment des prlvements sanguins nest pas
critique. En cas de surexposition aigu, la surveillance biologique devrait tre exerce pendant
les cinq jours au moins suivant lexposition, pour tenir compte du dlai de latence de leffet
anticoagulant. Il est recommand de mesurer les valeurs initiales de base avant toute
exposition, afin daugmenter la sensibilit de ces tests.
Les indicateurs biologiques dexposition. Le dosage sanguin des drivs coumariniques
natifs a t propos pour surveiller lexposition chez lhumain. Lapplication en reste
cependant trs limite, car les techniques analytiques sont beaucoup plus complexes (et moins
bien normalises) que celles qui permettent de rechercher les effets sur la coagulation
(Chalermchaikit, Felice et Murphy, 1993).
Les herbicides phnoxy
Les indicateurs biologiques dexposition. Les herbicides phnoxy sont peu mtaboliss chez
les mammifres. Chez lhumain, plus de 95% de lacide 2,4-dichlorophnoxyactique (2,4-D)
sont excrts sous forme inchange dans lurine en cinq jours, et les acides 2,4,5trichlorophnoxyactique (2,4,5-T) et 4-chloro-2-mthylphnoxyactique (MCPA) sont
galement excrts dans lurine (essentiellement sous forme inchange) dans les quelques
jours suivant leur absorption par voie orale. Le dosage urinaire des molcules natives est
utilis pour la surveillance des expositions professionnelles ces herbicides. Dans des tudes
de terrain ralises chez des travailleurs exposs, on a mis en vidence des taux urinaires
compris entre 0,10 et 8 g/l pour le 2,4-D, entre 0,05 et 4,5 g/l pour le 2,4,5-T et entre moins
de 0,1 g/l et 15 g/l pour le MCPA. Pour doser les composs inchangs, il est recommand
de recueillir les urines des 24 heures qui suivent la fin de lexposition. Draper (1982) a dcrit
des mthodes analytiques convenant au dosage urinaire des herbicides phnoxy.
Les composs ammoniums quaternaires
Les indicateurs biologiques dexposition. Le diquat et le paraquat sont des herbicides
faiblement biotransforms dans lorganisme humain. En raison de leur forte hydrosolubilit,
ils sont facilement excrts sous forme inchange dans lurine. Il nest pas rare de trouver des
concentrations urinaires infrieures la limite de dtection analytique (0,01 g/l) chez les
travailleurs exposs au paraquat; dans les rgions tropicales, des concentrations allant jusqu
0,73 g/l ont t mises en vidence aprs des erreurs de manipulation. Des concentrations
urinaires de diquat infrieures la limite de dtection analytique (0,047 g/l) ont t signales
chez des sujets exposs par voie cutane des concentrations de 0,17 1,82 g/h, ou par
inhalation des concentrations infrieures 0,01 g/h. Pour les dosages, il est recommand
dutiliser un chantillon des urines de 24 heures recueillies en fin dexposition. A dfaut, on
pourra se servir dun chantillon prlev ponctuellement en fin de poste.
Le dosage srique du paraquat est utile au pronostic en cas dintoxication aigu, la survie
tant probable lorsque les taux sriques ne dpassent pas 0,1 g/l, 24 heures aprs lingestion.
Summers (1980) a dress la synthse des mthodes analytiques convenant au dosage du
paraquat et du diquat.
Autres pesticides
Le 4,6-dinitro-o-crsol (DNOC). Le DNOC est un herbicide qui a fait son apparition en 1925,
mais dont lutilisation a progressivement diminu en raison de sa forte toxicit pour les
plantes et pour lhumain. Etant donn que les concentrations sanguines de DNOC prsentent
une certaine corrlation avec la svrit des effets nocifs, le dosage sanguin du DNOC
inchang a t propos pour surveiller les expositions professionnelles et valuer ltat
clinique des sujets intoxiqus.
Le pentachlorophnol. Le pentachlorophnol (PCP) est un biocide large spectre actif sur les
plantes adventices, les insectes et les champignons. Les dosages sanguins et urinaires du PCP
inchang sont recommands comme indicateurs de surveillance des expositions
professionnelles (Colosio et coll., 1993), car ils renseignent bien sur la charge corporelle en
PCP. Chez les travailleurs exposs de faon prolonge au PCP, le moment des prlvements
sanguins nest pas critique, alors que les chantillons ponctuels durine devraient tre
recueillis le matin suivant la fin de lexposition.
Une mthode universelle applicable au dosage des mtabolites des pesticides halogns et
nitrophnoliques a t dcrite par Shafik et coll. (1973b).
Dautres tests proposs pour la surveillance biologique de lexposition aux pesticides sont
prsents dans le tableau 27.16.
Tableau 27.16 Autres indices proposs dans la littrature pour la surveillance biologique
de l'exposition aux pesticides
Produits
Indices biologiques
Urine
Sang
Bromophos
Bromophos
Bromophos
Captane
Ttrahydrophtalimide
Carbofurane
3-Hydroxycarbofurane
Chlorodimforme
Drivs de la 4-Chloro-o-toluidine
Chlorobenzilate
p,p-1-Dichlorobenzophnone
Dichloropropne
Mtabolites de lacide
mercapturique
Fenitrothion
p-Nitrocrsol
Ferbame
Fluazifop-Butyl
Thiurame
Fluazifop
Flufenoxuron
Flufenoxuron
Glyphosate
Glyphosate
Malathion
Malathion
Malathion
Produits
organostanneux
Etain
Etain
Trifenomorph
Morpholine, triphnylcarbinol
Zirame
Thiurame
Conclusion
Les indicateurs biologiques permettant de surveiller lexposition aux pesticides ont t utiliss
dans de nombreux travaux exprimentaux et dans des tudes de terrain.
Certains tests pour lesquels des limites biologiques dexposition ont t proposes (voir
tableau 27.17) sont valids par une longue exprience. Il en est ainsi du dosage des
cholinestrases dans le sang ou du dosage sanguin ou urinaire de certains pesticides sous
forme inchange. Dautres tests, notamment ceux qui portent sur les mtabolites sanguins ou
urinaires, restent dun emploi beaucoup plus limit en raison des problmes analytiques ou
des difficults dinterprtation des rsultats qiils posent.
Tableau 27.17 Limites biologiques recommandes (1996)
Produits
Indices biologiques
BEI1
BAT2
HBBL3
BLV4
Inhibiteurs de
lAChE
DNOC
Lindane
Parathion
PNP urinaire
70%
70%
70%,
20
0,02mg/l
0,5mg/l
0,5 mg/l
2 mg/l
5 mg/l
0,3 mg/l
1 mg/l
mg/l,
0,02mg/l
100 g/l
Endrine
Anti-12-hydroxy-endrine
urinaire
130 g/l
DDT
250 g/l
Coumarines
Temps de Quick
Concentration plasmatique
de prothrombine
10% audessus de la
valeur basale
60% de la
valeur basale
MCPA
MCPA urinaire
0,5 g/l
2,4-D
2,4-D urinaire
0,5 g/l
BEI = indices biologiques dexposition recommands par lACGIH (1995). 2 BAT = limites
de tolrance biologique recommandes par la DFG (Commission allemande de recherche sur
les risques lis aux composs chimiques utiliss sur les lieux de travail) (1992). 3 HBBL =
limites biologiques recommandes par un Groupe de travail de lOMS (1982b). 4 BLV =
limites biologiques proposes par un Groupe de travail du Comit scientifique sur les
pesticides de la Commission internationale de la sant au travail (Tordoir et coll., 1994). En
cas de dpassement, une valuation des conditions de travail est exige.
La surveillance biologique est un domaine en pleine volution. Vu limportance que les
indicateurs biologiques revtent aux fins de la surveillance de lexposition aux pesticides, le
dveloppement et la validation de nouveaux tests sont promis une volution constante.
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Partie IV. Instruments et approches
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