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Partie IV.

Instruments et approches
English
Chapitre 33 - La toxicologie
INTRODUCTION
Ellen K. Silbergeld
La toxicologie est ltude des substances toxiques et, plus prcisment, lidentification et
lvaluation quantitative des consquences nfastes lies lexposition des agents
physiques, chimiques ou de toute autre nature. Comme telle, elle fait appel, tant pour ses
connaissances que pour sa dmarche de recherche ou ses mthodes, la plupart des sciences
biologiques fondamentales, aux disciplines mdicales, lpidmiologie et divers domaines
de la chimie et de la physique. Elle stend de la recherche fondamentale sur le mcanisme
daction des agents toxiques la mise au point et linterprtation de tests normaliss
permettant de caractriser les proprits toxiques de ces agents. Elle fournit la mdecine et
lpidmiologie des informations indispensables pour comprendre ltiologie et tablir le lien
entre les expositions, y compris professionnelles, et les pathologies observes. La toxicologie
peut tre scinde en spcialits: toxicologie clinique, toxicologie mdico-lgale, toxicologie
fondamentale et toxicologie rglementaire, tre prsente selon les organes cibles (par
exemple, immunotoxicologie, toxicogntique) ou encore selon ses objectifs (recherche,
exprimentation et valuation du risque).
Vouloir prsenter de faon exhaustive la toxicologie dans cette Encyclopdie relve de la
gageure. Ce chapitre ne saurait tenir lieu ni daide-mmoire sur cette discipline ni dabrg
des connaissances sur les effets nocifs des divers agents toxiques. Ces informations sont
plutt rechercher dans les bases de donnes continuellement mises jour, comme nous
lexpliquons dans la dernire partie du prsent chapitre. Il ne tente pas non plus daborder des
branches particulires de la toxicologie telle que la toxicologie mdico-lgale, mais bien de
fournir des informations utilisables dans les diffrentes activits de cette discipline, ainsi que
dans divers domaines mdicaux et spcialits. Les thmes ont t choisis en raison de leur
orientation dlibrment pratique et pour faciliter le renvoi dautres rfrences au sein de la
prsente Encyclopdie.
Dans les socits modernes, la toxicologie est devenue un lment important pour assurer la
sant tant dans le domaine environnemental que professionnel. Cest pourquoi de nombreuses
organisations gouvernementales et non gouvernementales font appel son fonds de
connaissances pour valuer les risques en milieu professionnel ou dans lenvironnement en
gnral et proposer une rglementation. Partie intgrante des stratgies de prvention, la
toxicologie est dune valeur inestimable, puisquelle est la source dinformations sur les
risques potentiels en labsence dexpositions humaines pertinentes. Il faut aussi rappeler que
lindustrie emploie beaucoup les mthodes toxicologiques puisquelle y puise des
renseignements utiles la formulation de nouveaux produits ou la conception de nouvelles
molcules.
Le prsent chapitre commence par cinq articles sur les principes gnraux de la toxicologie,
importants pour aborder la plupart des thmes. Le premier concerne les relations entre
exposition externe et dose interne. Dans la terminologie moderne, lexposition fait
rfrence aux concentrations ou quantits dune substance auxquelles sont soumis des
individus ou une population quantits trouves dans un volume donn dair, deau ou de
sol. La dose reprsente la concentration ou la quantit dune substance prsente chez un
individu ou dans un organisme expos. En sant au travail, les valeurs de rfrence et les

lignes directrices sont souvent tablies en terme dexposition ou de limites admissibles de


concentrations dans des situations spcifiques, par exemple dans latmosphre du lieu de
travail. Ces limites dexposition sont fondes sur la connaissance, ou parfois les hypothses,
de relations existant entre lexposition et la dose; cependant, la dose interne ntant pas
toujours connue, de nombreuses tudes de sant au travail se limitent dduire une
association entre lexposition et la rponse ou leffet. Dans quelques cas, les normes ont t
tablies daprs la dose (par exemple, pour les taux admissibles de plomb dans le sang ou de
mercure dans lurine). Bien que ces mesures soient directement corrles la toxicit, il est
encore ncessaire de recalculer les taux dexposition correspondant ces valeurs afin de
mieux matriser les risques.
Larticle qui suit, Dfinitions et concepts, a trait aux facteurs et aux vnements
dterminant les relations entre exposition, dose et rponse. Les premiers de ces facteurs
concernent la captation tissulaire, labsorption et la distribution processus qui dterminent
le transport rel des substances dans le corps depuis lenvironnement externe travers les
portes dentre telles que la peau, les poumons ou lintestin. Ces processus sont linterface
entre ltre humain et son environnement. Les seconds facteurs, mtaboliques, objectivent la
faon dont lorganisme traite les substances absorbes. Certaines dentre elles sont
transformes par les processus cellulaires du mtabolisme qui peut soit renforcer leur activit
biologique, soit lattnuer.
Les concepts dorgane cible et deffet critique ont t labors pour faciliter linterprtation
des donnes toxicologiques. Selon la dose, la dure et la voie dexposition, et selon des
facteurs intrinsques tels que lge, de nombreux agents toxiques peuvent induire des effets
divers au niveau des organes et des organismes. Un des principaux rles de la toxicologie est
de dterminer leffet ou la srie deffets importants afin de prvenir lapparition de maladies
irrversibles ou invalidantes. Pour cela, il convient surtout didentifier lorgane touch en
premier ou le plus affect par lagent toxique: cet organe est appel organe cible. A
lintrieur de cet organe, il est capital de dceler le ou les vnements importants objectivant
une intoxication ou une lsion et permettant de mettre en vidence une altration de lorgane.
Ce premier vnement dune srie dtapes physiopathologiques (lexcrtion de protines de
faible poids molculaire reprsente un effet critique en nphrotoxicit), ou le premier effet
potentiellement irrversible dans le processus dune maladie (la formation dadduits lADN
lors du processus de cancrogense), est appel leffet critique. Ces concepts sont
importants en sant au travail, car ils permettent de prciser le type de toxicit et de
pathologie associ une exposition spcifique; dans la plupart des cas, la diminution de
lexposition aura pour unique objectif de prvenir les effets critiques au niveau des organes
cibles, et non ceux de lensemble des effets observs dans les diffrents organes.
Les deux articles suivants concernent les effets intrinsques qui modifient les rponses de
nombreux agents toxiques. Il sagit des dterminants gntiques, des facteurs de sensibilit ou
de rsistance hrditaire, de lge, du sexe ou encore de paramtres tels que le rgime
alimentaire ou la coexistence dune maladie infectieuse. Ces facteurs peuvent aussi affecter
lexposition et la dose, en modifiant la captation tissulaire, labsorption, la distribution et le
mtabolisme. Etant donn la diversit de ces facteurs parmi les travailleurs dans le monde, il
est essentiel que les spcialistes de la sant au travail et les dcideurs comprennent la faon
dont ils font varier les rponses en fonction de la population et des individus lintrieur de la
population. Dans les socits qui ont une population htrogne, cette question est
particulirement importante. Cette disparit des populations humaines doit tre prise en
compte pour valuer les risques dexposition professionnelle et tirer des conclusions
rationnelles partir dtudes exprimentales effectues dans le cadre des recherches
toxicologiques.

Cette section aborde ensuite deux aspects gnraux des mcanismes daction en toxicologie.
De ce point de vue, les toxicologues modernes considrent que tous les effets toxiques
sexercent en premier lieu au niveau cellulaire; les rponses cellulaires reprsentent donc les
signes les plus prcoces de la lutte de lorganisme vis--vis dun agent toxique et font
probablement partie dune suite dvnements qui va de la lsion initiale jusqu la mort
cellulaire. La lsion cellulaire fait appel des processus spcifiques auxquels la cellule, plus
petite unit dorganisation biologique dans un organe, a recours pour rpondre latteinte.
Ces rponses impliquent des modifications dans le fonctionnement des processus cellulaires,
en particulier au niveau de la membrane dont on connat les rles dabsorption, de scrtion et
dexcrtion des substances, de la synthse protique partir dacides amins et du
renouvellement des composants cellulaires. Ces rponses peuvent tre communes toutes les
cellules endommages, ou tre spcifiques des types cellulaires particuliers de certains
organes. La mort cellulaire est la destruction des cellules dans un systme organique, par suite
dune lsion cellulaire irrversible ou non compense. Elle peut survenir lors dune
intoxication aigu, comme dans le cas des agents toxiques agissant sur le transfert doxygne,
ou tre la consquence dune intoxication chronique. Elle peut tre suivie dune rgnration
dans certains organes, bien que cette prolifration puisse, dans certaines conditions, tre
considre comme une rponse toxique. Mme en labsence de mort cellulaire, une lsion
rpte peut induire un stress au niveau dun organe susceptible daltrer ses fonctions et son
devenir.
Le prsent chapitre traite ensuite de domaines plus spcifiques, regroups selon les catgories
suivantes: mcanismes, mthodologies, rglementation et valuation du risque. Les articles
portant sur les mcanismes mettent laccent principalement sur les systmes cibles plutt que
sur les organes. Cette prsentation est limage de la pratique de la mdecine et de la
toxicologie modernes, qui tudient les systmes plutt que les organes isols. Ainsi, les
commentaires sur la toxicogntique ne concernent pas uniquement les effets toxiques des
agents sur un organe spcifique, mais bien le matriel gntique en tant que cible de laction
toxique. De mme, larticle sur limmunotoxicologie examine les divers organes et cellules du
systme immunitaire en tant que cibles vis--vis des agents toxiques. Les articles
mthodologiques se veulent avant tout oprationnels; ils dcrivent les mthodes quon
emploie actuellement dans de nombreux pays pour identifier les risques, ou la manire dont
on labore linformation sur les proprits biologiques des agents toxiques.
Le chapitre se poursuit par cinq articles relatifs lapplication de la toxicologie sur le plan
rglementaire et dcisionnel, depuis lidentification du risque jusqu son valuation. Les
procdures actuellement suivies dans diffrents pays y sont prsentes, de mme que celles du
Centre international de recherche sur le cancer (CIRC). Ces articles devraient permettre au
lecteur de comprendre comment, partir de linformation tire des tests toxicologiques
associs des dductions mcanistiques et fondamentales, lon parvient une information
quantitative qui sert ensuite tablir les niveaux dexposition et dautres approches
permettant de matriser les risques sur le lieu de travail et dans lenvironnement en gnral.
Dautres chapitres de la prsente Encyclopdie renseignent sur les bases de donnes
concernant la toxicologie. Ces bases fournissent aux spcialistes de la sant au travail, aux
travailleurs et aux employeurs une information actuelle sur la toxicologie et lvaluation des
agents toxiques par des organismes nationaux et internationaux.
Le prsent chapitre porte sur la toxicologie dans ses relations avec la scurit et la sant au
travail. Pour cette raison, la toxicologie clinique et la toxicologie mdico-lgale ny sont pas
expressment abordes. De nombreux principes et de nombreuses dmarches semblables
ceux qui y sont dcrits sont utiliss dans ces sous-disciplines de la mme faon quen sant
environnementale. Ils sont galement applicables pour valuer limpact des agents toxiques
sur les populations autres quhumaines, proccupation majeure des politiques

environnementales dans de nombreux pays. On a tent, dans ce chapitre, de prsenter les


points de vue et les expriences des experts et des praticiens de tous les secteurs dans de
nombreux pays; cependant, le lecteur pourra noter un certain parti pris envers les scientifiques
universitaires du monde dvelopp. Bien que lditeur et ses collaborateurs soient convaincus
que les principes et la pratique de la toxicologie sont internationaux, les prjugs culturels et
le caractre restreint de lexprience pourront paratre vidents dans ce chapitre. Lditeur
espre que les lecteurs de cette Encyclopdie profiteront de ses mises jour pour confrer
cet ouvrage la perspective le plus large possible et contribuer son enrichissement permanent.
LES PRINCIPES GNRAUX DE LA TOXICOLOGIE
DFINITIONS ET CONCEPTS
Bo Holmberg, Johan Hgberg et Gunnar Johanson
Lexposition, la dose et la rponse
La toxicit est la capacit intrinsque dun agent chimique avoir un effet nocif sur un
organisme.
Le terme xnobiotique dsigne une substance trangre, cest--dire extrieure
lorganisme, par opposition aux composants endognes. Les xnobiotiques comprennent les
mdicaments, les produits chimiques industriels, les poisons naturels et les polluants
environnementaux.
Un danger reprsente une toxicit potentielle pouvant survenir dans un cadre ou une situation
dtermins.
Un risque est la probabilit dapparition dun effet nocif spcifique. Il est souvent exprim en
pourcentage de cas dans une population donne pour une dure dtermine. Une valuation
du risque peut tre faite partir de cas rels ou par projection de cas futurs, base sur des
extrapolations.
Lvaluation de la toxicit, de mme que la classification de la toxicit, peuvent tre utilises
dans un but rglementaire. Il sagit dune classification arbitraire des doses ou des niveaux
dexposition (trs toxique, extrmement toxique, modrment toxique, etc.) lorigine
deffets toxiques qui permet de rpertorier les produits exerant une toxicit aigu. La
classification de la toxicit permet de regrouper les produits chimiques dans des catgories
gnrales selon leur effet toxique essentiel, par exemple les allergnes, les neurotoxiques, les
cancrognes, etc. Elle peut avoir une valeur administrative davertissement et dinformation.
La relation dose-effet est la relation entre la dose et leffet lchelle de lindividu.
Laugmentation de la dose peut accrotre lintensit ou la svrit dun effet. Une courbe doseeffet peut tre trace pour lensemble de lorganisme, la cellule ou la molcule cible. Certains
effets toxiques, comme la mort ou le dveloppement dun cancer, nont pas un caractre
progressif: ils reprsentent des effets tout ou rien.
La relation dose-rponse dsigne la relation entre la dose et le pourcentage dindividus
prsentant un effet spcifique. Lorsque la dose augmente, un plus grand nombre dindividus
sont affects dans la population expose.
Il est essentiel pour la toxicologie dtablir les relations dose-effet et dose-rponse. En
mdecine (pidmiologie), le critre de relation causale souvent employ entre un agent et
une pathologie repose sur la proportionnalit entre la dose et les effets ou rponses observs.
Plusieurs courbes dose-rponse peuvent tre traces pour un mme produit chimique une
par type deffet. La courbe dose-rponse pour la plupart des effets toxiques (quand ils sont
tudis dans une population importante) a une forme sigmode. On observe gnralement une
zone de doses faibles o aucune rponse ne peut tre dtecte; avec laugmentation de la dose,
la rponse suit une courbe ascendante pour atteindre gnralement un plateau 100% de
rponses. La courbe dose-rponse reflte les variations interindividuelles dans une population.

La pente de la courbe varie dun produit chimique lautre et selon le type deffet. Dans le
cas de certains produits chimiques prsentant des effets spcifiques (cancrognes, initiateurs,
mutagnes), la courbe dose-rponse peut tre linaire pour une gamme de doses donne ds la
dose zro. Cela signifie quil nexiste aucun seuil pour ces substances et que des doses mmes
faibles font encourir un risque. Au-del de cette gamme de dose, le risque peut passer un
taux plus important que le taux linaire.
Les variations dexposition en cours de journe ou la dure totale dexposition au cours dune
vie peuvent tre aussi importantes pour le rsultat observ que la dose moyenne ou mme la
dose intgre. Des pics levs dexposition peuvent tre plus dangereux quune exposition
plus rgulire. Cest le cas avec certains solvants organiques. Par ailleurs, pour certains
cancrognes, il a t dmontr exprimentalement qu dose totale identique, le
fractionnement en plusieurs expositions a une incidence accrue sur lapparition de tumeurs.
La dose est souvent exprime en tant que quantit (mg/kg de poids corporel) de xnobiotique
ayant pntr lorganisme. Elle peut tre exprime de diffrentes manires (plus ou moins
informatives): dose dexposition, concentration dans lair dun polluant inhal durant une
certaine priode (huit heures en gnral en hygine du travail); dose retenue ou absorbe
(galement appele en hygine du travail charge corporelle) qui est la quantit prsente dans
lorganisme un moment donn pendant ou aprs une exposition. La dose tissulaire est la
quantit de substance dans un tissu spcifique et la dose cible est la quantit de substance
(gnralement un mtabolite) lie la molcule critique. La dose cible est la quantit de
produit chimique (en mg) fixe par mg de macromolcule spcifique dans un tissu. Pour
utiliser ce concept, il faut disposer dinformations sur le mcanisme daction au niveau
molculaire. La dose cible est associe plus prcisment leffet toxique. La dose
dexposition ou la charge corporelle, plus facilement disponibles, sont lies de manire moins
prcise leffet toxique.
La notion de dose comporte souvent un paramtre temporel, mme sil nest pas toujours
exprim. La dose thorique selon la loi de Haber est D = ct, o D est la dose, c la
concentration du xnobiotique dans lair et t la dure dexposition un produit chimique. Au
niveau de lorgane cible ou au niveau molculaire, on peut dire quil sagit de la quantit fixe
par mg de tissu ou de molcule pour un temps donn. La prise en compte du temps est
gnralement plus importante pour comprendre les expositions rptes et les effets
chroniques que pour les expositions uniques et les effets aigus.
Les effets additifs sont le rsultat dune exposition combine plusieurs produits chimiques,
o les toxicits particulires sont simplement additionnes les unes aux autres (1+1 = 2).
Lorsque les produits chimiques agissent selon le mme mcanisme, on peut prsumer quils
auront un effet additif, mais il nen va pas toujours de mme dans la ralit. Ainsi, il peut
arriver que linteraction entre des produits chimiques aboutisse une inhibition
(antagonisme), leffet observ tant plus faible que celui attendu par addition des effets des
produits chimiques individuels (1+1<2). Inversement, la combinaison de produits chimiques
peut produire un effet plus prononc que celui attendu par simple addition (rponse
augmente chez les individus ou augmentation de la frquence des rponses parmi une
population) (synergie) (1+1>2).
Le temps de latence est le temps qui scoule entre une premire exposition et lapparition
dun effet ou dune rponse dcelables. Ce terme est souvent employ pour les effets
cancrognes, o les tumeurs apparaissent longtemps aprs le dbut de lexposition et
quelquefois bien aprs son arrt.
Une dose seuil est le niveau de dose en dessous duquel aucun effet observable ne survient. Il
existe des seuils pour certains effets, notamment les effets toxiques aigus, mais non pour
dautres, par exemple pour les effets cancrognes (initiateurs formant des adduits lADN).

Une simple absence de rponse dans une population donne ne saurait cependant tre
interprte comme la preuve de lexistence dun seuil. Elle peut tre due un simple
phnomne statistique: un effet toxique ne se produisant qu faible frquence pourra ne pas
tre dcel dans une petite population.
La DL50 (dose ltale 50) est la dose qui entrane le dcs de la moiti du lot danimaux de
laboratoire soumis au toxique tudi. Elle est souvent employe dans la littrature classique
comme une mesure de la toxicit aigu des produits chimiques. Plus la DL50 est leve, plus la
toxicit aigu est faible. Un produit chimique trs toxique (avec une faible DL50) est dit
violent. Il nexiste pas ncessairement de corrlation entre la toxicit aigu et la toxicit
chronique. La DE50 (dose efficace) est la dose responsable dun effet spcifique autre que la
ltalit chez 50% des animaux.
La valeur NOEL (NOAEL) (No Observed (Adverse) Effect Level) correspond la dose
laquelle aucun effet (nocif) nest observ, ou encore la plus forte dose nentranant aucun effet
toxique. Pour tablir une valeur NOEL, il faut disposer de nombreuses doses dans une
population importante mais aussi dautres informations pour sassurer que labsence de
rponse nest pas simplement le rsultat dun phnomne statistique. La valeur LOEL (Low
Observed Effect Level) correspond la dose efficace la plus faible sur une courbe doserponse, ou la plus faible dose provoquant un effet.
Un facteur de scurit est un chiffre formel et arbitraire par lequel on divise les valeurs NOEL
ou LOEL obtenues exprimentalement pour dfinir une dose admissible chez lhumain. Ce
facteur, souvent employ en toxicologie alimentaire mais aussi en toxicologie professionnelle,
peut servir extrapoler des donnes issues de petites populations des populations plus
importantes. Les facteurs de scurit varient de 100 103. On considre quun facteur de
scurit de deux suffit protger dun effet peu svre (par exemple, une irritation), alors que
pour tous les effets trs svres (par exemple, un cancer), on applique un facteur pouvant aller
jusqu 1 000. Lexpression facteur de scurit pourrait fort bien tre remplace par celle de
facteur de protection ou, encore, facteur dincertitude, notion qui reflte en effet mieux
lincertitude scientifique quant savoir si des donnes dose-rponse concernant un produit
chimique particulier, un effet toxique ou une condition dexposition peuvent tre extrapoles
de lanimal lespce humaine.
Les extrapolations sont des estimations thoriques qualitatives ou quantitatives de toxicit
(extrapolation dun risque) obtenues par dduction de donnes dune espce lautre, ou dun
ensemble de donnes dose-rponse obtenues dans une zone de doses leves des zones de
dose-rponse pour lesquelles il nexiste pas de donnes. Elles permettent de prvoir une
rponse toxique en dehors du champ dobservation. On les tablit partir de modles
mathmatiques bass sur la connaissance du devenir dun produit chimique dans lorganisme
(modle toxicocintique) ou sur la probabilit statistique de la survenue dun mcanisme
biologique (modle biologique ou mcanistique). Certains organismes nationaux ont mis au
point, dans un but rglementaire, des modles dextrapolation complexes permettant de
prvoir un risque (voir commentaires sur lvaluation du risque plus loin dans ce chapitre).
Les effets systmiques sont les effets toxiques observs dans des tissus loigns de la voie
dabsorption.
Lorgane cible est lorgane principal ou lorgane le plus sensible atteint lors dune exposition.
Un mme produit chimique pntrant dans lorganisme peut atteindre des organes cibles
diffrents selon la voie, la dose, le sexe et lespce. Une interaction entre produits chimiques,
ou entre produits chimiques et dautres facteurs, peut galement affecter diffrents organes
cibles.
Les effets aigus sont des effets survenant rapidement (en gnral en moins de vingt-quatre
heures) aprs une exposition limite; ils peuvent tre rversibles ou irrversibles.

Les effets chroniques surviennent aprs une exposition prolonge (mois, annes, dcennies)
ou persistent une fois que lexposition a cess.
Une exposition aigu est une exposition de courte dure, tandis quune exposition chronique
est une exposition de longue dure (parfois toute la vie).
La tolrance (appele aussi accoutumance ou mithridatisation) est le phnomne qui se
produit lorsque des expositions rptes entranent une rponse infrieure celle que lon
observe sans prtraitement.
La captation tissulaire et la disposition
Le processus de transport
Diffusion. Pour pntrer dans lorganisme et atteindre le site o elle exercera sa toxicit, une
substance trangre doit franchir plusieurs obstacles, y compris les cellules et leurs
membranes. La plupart des substances toxiques traversent les membranes passivement par
diffusion. Ainsi, les petites molcules hydrosolubles passent travers les canaux aqueux, les
molcules liposolubles pntrant par dissolution et diffusion travers la partie lipidique de la
membrane. Lthanol, petite molcule la fois hydro- et liposoluble, diffuse rapidement
travers les membranes cellulaires.
Diffusion des acides et bases faibles. Les acides et bases faibles peuvent facilement traverser
les membranes sous leur forme non ionise liposoluble, alors que les formes ionises trop
polaires ne le peuvent pas. Le degr dionisation de ces substances dpend du pH. Sil existe
un gradient de pH de part et dautre dune membrane, elles saccumuleront dun seul ct.
Lexcrtion urinaire des acides et des bases faibles est fortement dpendante du pH urinaire.
Le pH ftal ou embryonnaire est un peu plus lev que le pH maternel, ce qui explique la
tendance des acides faibles saccumuler dans le ftus ou lembryon.
Diffusion facilite. Le passage dune substance peut tre facilit par lexistence de
transporteurs membranaires. La diffusion facilite est comparable un processus enzymatique
dans la mesure o elle est sous la dpendance dune protine fortement slective et saturable.
Dautres substances peuvent inhiber le transport facilit des xnobiotiques.
Transport actif. Certaines substances sont activement transportes travers les membranes
cellulaires. Ce transport seffectue par lintermdaire de protines porteuses selon un
processus analogue celui des enzymes. Le transport actif sapparente la diffusion facilite,
mais il peut se produire contre un gradient de concentration. Il requiert un apport dnergie et
peut tre bloqu par un inhibiteur mtabolique. La plupart des polluants environnementaux ne
sont pas transports de manire active. La scrtion et la rabsorption actives au niveau
tubulaire rnal des mtabolites acides constituent une exception.
Phagocytose. Il sagit dun processus par lequel des cellules spcialises comme les
macrophages absorbent des particules en vue de les dgrader. Ce processus de transport est
important, par exemple pour llimination de particules au niveau des alvoles pulmonaires.
Flux de masse. Les substances sont aussi transportes dans lorganisme avec le flux de lair,
ou par le flux sanguin, lymphatique ou urinaire.
Filtration. Leau traverse les pores endothliaux sous linfluence de la pression hydrostatique
ou osmotique. Tout solut de faible poids molculaire sera filtr en mme temps que leau.
Une partie de la filtration se fait au niveau du lit capillaire dans tous les tissus; elle est
particulirement importante pour la formation de lurine primaire dans les glomrules rnaux.
Labsorption
Labsorption est lincorporation dune substance par lorganisme. Ce terme comprend
habituellement non seulement le passage travers la barrire tissulaire, mais aussi le transport
ultrieur vers la circulation sanguine.

Absorption pulmonaire. Les poumons constituent la voie essentielle de dpt et dabsorption


des petites particules ariennes, des gaz, des vapeurs et des arosols. Dans le cas des gaz et
des vapeurs trs hydrosolubles, lincorporation se fait pour lessentiel au niveau du nez et de
larbre respiratoire, alors que pour les substances moins hydrosolubles elle seffectue surtout
dans les alvoles pulmonaires. Les alvoles ont une surface trs importante (environ 100 m2
chez lhumain). De plus, la barrire de diffusion est extrmement mince puisquelle est
constitue de deux couches cellulaires fines formant un espace de lordre de quelques microns
entre lair alvolaire et la circulation sanguine systmique. Les poumons sont donc trs
efficaces non seulement pour les changes oxygne et gaz carbonique, mais aussi pour les
autres gaz et vapeurs. En gnral, la diffusion travers la paroi alvolaire est si rapide quelle
ne limite pas le transport. Le taux dabsorption dpend par contre du flux (ventilation
pulmonaire, dbit cardiaque) et de la solubilit (coefficient de partage sang:air). Un autre
facteur important est llimination mtabolique. Limportance relative de ces facteurs sur
labsorption pulmonaire varie beaucoup selon les substances. Lactivit physique entrane une
augmentation de la ventilation pulmonaire et du dbit cardiaque, ainsi quune diminution du
flux sanguin hpatique (et, partant, du taux de biotransformation). Pour beaucoup de
substances inhales, cela se traduit par une augmentation marque de labsorption pulmonaire.
Absorption percutane. La peau est une barrire trs efficace. A ct de son rle
thermorgulateur, elle est conue pour protger lorganisme contre les micro-organismes, le
rayonnement ultraviolet et autres agents nocifs et viter une perte deau excessive. La distance
de diffusion dans le derme est de lordre de quelques diximes de millimtres. De plus, la
couche de kratine prsente une trs grande rsistance la diffusion pour la plupart des
substances. Nanmoins, en prsence de substances liposolubles trs toxiques telles que les
insecticides organophosphors ou les solvants organiques, on peut observer une absorption
dermique considrable pouvant tre lorigine dune intoxication. Dans le cas de substances
liquides, labsorption est notable. Labsorption percutane de vapeurs peut tre importante
pour les solvants prsentant une pression de vapeur trs basse et une forte affinit pour leau
et la peau.
Absorption gastro-intestinale. Elle survient par ingestion accidentelle ou volontaire. Les plus
grosses particules inhales et dposes dans lappareil respiratoire peuvent tre avales aprs
transport mucociliaire vers le pharynx. En pratique, toutes les substances solubles sont
efficacement absorbes dans lappareil gastro-intestinal. Le pH acide de lintestin facilite
labsorption de certains toxiques, les mtaux par exemple.
Autres voies. En toxicologie exprimentale, on utilise pour des raisons de commodit dautres
voies dadministration, alors quelles sont rares et non pertinentes en milieu professionnel: les
injections intraveineuses (iv), sous-cutanes (sc), intrapritonales (ip) et intramusculaires
(im). Dune faon gnrale, ces voies parentrales permettent une absorption plus rapide et
plus complte des substances, surtout dans le cas de la voie intraveineuse. On obtient alors des
pics de concentration de courte dure, mais levs, lorigine dune plus forte toxicit de la
dose administre.
La distribution
La distribution dune substance dans lorganisme est un processus dynamique dpendant des
vitesses de captation tissulaire et dlimination, du flux sanguin vers les diffrents tissus et de
laffinit de ces derniers pour la substance. Les petites molcules hydrosolubles, non ionises,
les cations monovalents et la plupart des anions diffusent facilement et finissent par se rpartir
de faon relativement rgulire dans lorganisme.
Volume de distribution. Il sagit de la quantit dune substance dans lorganisme, divise par
la concentration sanguine, plasmatique ou srique un moment donn. Cette valeur na pas de
sens en termes de volume physique, de nombreuses substances ntant pas distribues

uniformment dans lorganisme. Un volume de distribution infrieur 1 litre par kg de poids


corporel indique une distribution prfrentielle dans le sang (le srum ou le plasma), alors
quune valeur suprieure tmoigne dune prdilection pour les tissus priphriques, par
exemple le tissu adipeux pour les substances liposolubles.
Accumulation. Ce terme dsigne laccumulation dune substance dans un tissu ou un organe
une concentration suprieure celle prsente dans le sang ou le plasma. Il peut galement
faire rfrence une accumulation progressive dans lorganisme au cours du temps. De
nombreux xnobiotiques sont fortement liposolubles et ont tendance saccumuler dans le
tissu adipeux, alors que dautres prsentent une affinit particulire pour le tissu osseux. Cest
ainsi que le calcium osseux peut schanger avec des cations tels que le plomb, le strontium,
le baryum ou le radium, et les groupes hydroxyles osseux schanger avec des ions fluorure.
Barrires. Les vaisseaux sanguins au niveau du cerveau, des testicules et du placenta
prsentent des structures anatomiques spciales empchant le passage des grosses molcules
telles que les protines. Ces structures, souvent appeles barrires hmato-mninge,
testiculaire et placentaire, peuvent donner limpression errone quelles empchent le passage
de toute substance quand elles ont en fait peu dimportance, voire aucune, pour les
xnobiotiques qui peuvent diffuser travers les membranes cellulaires.
Liaison sanguine. Les substances peuvent tre lies aux hmaties, aux composants
plasmatiques, ou se trouver ltat libre non lies dans le sang. Le monoxyde de carbone,
larsenic, le mercure organique et le chrome hexavalent ont une forte affinit pour les
hmaties, alors que le mercure inorganique et le chrome trivalent montrent une prdilection
pour les protines plasmatiques. De nombreuses autres substances sont galement lies aux
protines plasmatiques. Seule la fraction libre est disponible pour la filtration et la diffusion
vers les organes dlimination. Ainsi, la liaison sanguine peut faire augmenter la dure du
sjour dans lorganisme et diminuer la captation tissulaire au niveau des organes cibles.
Llimination
Llimination est la phase qui assure la disparition dune substance de lorganisme soit parce
quelle est excrte, soit parce quelle est transforme en dautres produits qui ne sont plus
dcelables. La vitesse de disparition peut tre exprime par la constante dlimination, la
demi-vie biologique ou la clairance.
La courbe temps-concentration. La courbe de concentration dans le sang (ou le plasma) en
fonction du temps est une manire pratique de dcrire la captation tissulaire et le devenir dun
xnobiotique.
Laire sous la courbe taux plasmatique-temps est lintgrale de la concentration dans le sang
(ou le plasma) au cours du temps. En labsence de saturation mtabolique et dautres
processus non linaires, laire sous la courbe est proportionnelle la quantit absorbe de
substance.
La demi-vie biologique (ou demi-vie) est le temps ncessaire aprs la fin dune exposition
pour rduire de moiti la quantit de substance prsente dans lorganisme. Comme il est
souvent difficile dvaluer la quantit totale dune substance, on mesure sa concentration
sanguine (plasmatique). La demi-vie doit tre utilise avec prcaution, car elle peut varier, par
exemple, selon la dose et la dure dexposition. De plus, de nombreuses substances ont des
courbes de dcroissance complexes avec plusieurs demi-vies.
La biodisponibilit est la fraction dune dose administre pntrant dans la circulation
systmique. En labsence de clairance prsystmique, ou de mtabolisme de premier passage,
la fraction est gale 1. Lors dune exposition per os, la clairance prsystmique peut tre due
au mtabolisme au niveau du contenu gastro-intestinal, de la paroi intestinale ou du foie. Le
mtabolisme de premier passage rduit labsorption systmique de la substance et accrot
plutt labsorption des mtabolites, ce qui peut modifier le type de toxicit.

La clairance est le volume de sang (plasma) compltement pur dune substance par unit de
temps; cest aussi le rapport entre le dbit urinaire, par minute, dun corps et sa concentration
dans le plasma. Afin de la distinguer de la clairance rnale, on parle de clairance totale,
mtabolique ou sanguine (plasmatique).
La clairance intrinsque est laptitude des enzymes endognes transformer une substance;
elle est galement exprime en volume par unit de temps. Si la clairance intrinsque dun
organe est plus faible que le flux sanguin, le mtabolisme est dit capacit limite.
Inversement, si la clairance intrinsque est beaucoup plus leve que le flux sanguin, le
mtabolisme est limit par le flux.
Lexcrtion
Lexcrtion est llimination de lorganisme dune substance et de ses produits de
biotransformation.
Excrtion dans lurine et la bile. Les reins sont les organes excrteurs les plus importants.
Certaines substances, en particulier les acides de poids molculaire lev, sont excrtes par la
bile. Une fraction des substances ainsi excrtes peut tre rabsorbe au niveau intestinal. Ce
processus, appel circulation entro-hpatique, est habituel pour les substances conjugues
aprs hydrolyse intestinale.
Autres voies dexcrtion. Certaines substances, les solvants organiques, des produits de
dgradation comme lactone, sont suffisamment volatiles pour quune fraction importante
puisse tre limine par exhalaison aprs leur inhalation. Les molcules hydrosolubles ou
liposolubles de faible poids molculaire sont facilement scrtes vers le ftus par voie
placentaire, et dans le lait chez les mammifres. Chez la mre, la lactation peut tre une voie
dexcrtion importante du point de vue quantitatif pour les produits chimiques liposolubles.
La descendance peut tre secondairement expose par lintermdiaire de la mre pendant la
grossesse et lors de la lactation. La sueur et la salive peuvent aussi servir dmonctoire, bien
que beaucoup moins important, aux composs hydrosolubles. Cependant, tant donn le
volume de salive produit et absorb, lexcrtion salivaire peut contribuer la rabsorption
dun produit. Certains mtaux, comme le mercure, sont excrts dans les cheveux par suite de
leur forte liaison aux groupes sulphydryles de la kratine.
Les modles toxicocintiques
Les modles mathmatiques sont des outils importants pour comprendre et dcrire la
captation tissulaire et la rpartition des substances trangres. La plupart des modles sont
compartimentaux, lorganisme tant reprsent par un ou plusieurs compartiments. Un
compartiment est un volume thorique du point de vue chimique et physique dans lequel la
substance est cense se distribuer de manire homogne et instantane. Les modles simples
sont exprims comme une somme de termes exponentiels, alors que les plus complexes
requirent des calculs numriques sur ordinateur. Les modles peuvent tre subdiviss en
deux catgories: descriptive et physiologique.
Dans les modles descriptifs, on assure lajustement des donnes mesures en modifiant les
valeurs numriques des paramtres du modle ou mme la structure de celui-ci. La structure
du modle na normalement que peu de rapport avec celle de lorganisme. Ces modles
prsentent lavantage de ne ncessiter que peu dhypothses et aucune donne
supplmentaire; ils ont par contre linconvnient de navoir quune utilisation limite pour les
extrapolations.
Les modles physiologiques sont construits partir de donnes physiologiques indpendantes,
anatomiques et autres. Le modle est alors affin et valid par comparaison avec les donnes
exprimentales. Un des avantages des modles physiologiques est quils peuvent servir faire
des extrapolations. Par exemple, ils permettent de prdire linfluence de lactivit physique
sur la captation tissulaire et la rpartition des substances inhales du fait des ajustements

physiologiques connus de la ventilation et du dbit cardiaque. Ces modles requirent


malheureusement une quantit importante de donnes indpendantes.
La biotransformation
La biotransformation est un processus qui mne la transformation mtabolique de composs
trangers (xnobiotiques) dans lorganisme. Ce processus est souvent appel mtabolisme des
xnobiotiques. En rgle gnrale, le mtabolisme convertit les xnobiotiques liposolubles en
mtabolites hydrosolubles, de poids molculaire plus lev et faciles liminer.
Le foie est le principal site de la biotransformation. Tous les xnobiotiques absorbs au niveau
intestinal sont transports vers le foie par un vaisseau sanguin unique, la veine porte. Si une
substance trangre est absorbe en petites quantits, elle peut tre compltement mtabolise
par le foie avant datteindre la circulation gnrale et les autres organes (effet de premier
passage). Les xnobiotiques inhals parviennent au foie par la circulation gnrale. Seule une
fraction de la dose est alors mtabolise avant datteindre les autres organes.
Les cellules hpatiques contiennent diverses enzymes qui oxydent les xnobiotiques. Cette
oxydation active gnralement le compos, qui devient plus ractif que la molcule mre.
Dans la plupart des cas, le mtabolite oxyd est mtabolis plus compltement par dautres
enzymes lors dune seconde phase. Ces enzymes conjuguent le mtabolite avec une substance
endogne, de sorte que la molcule augmente de volume et se polarise, ce qui facilite son
limination.
Les enzymes mtabolisant les xnobiotiques sont galement prsentes dans dautres organes
tels que les poumons et les reins o elles peuvent jouer des rles spcifiques et
qualitativement importants dans le mtabolisme de certains xnobiotiques. Les mtabolites
forms dans un organe peuvent tre ensuite mtaboliss nouveau dans un second organe.
Les bactries intestinales peuvent aussi participer la biotransformation.
Les mtabolites des xnobiotiques peuvent tre excrts par les reins ou par la bile. Ils
peuvent aussi tre exhals par les poumons, ou se lier des molcules endognes dans
lorganisme.
La relation entre la biotransformation et la toxicit est complexe. La biotransformation peut
tre considre comme un processus ncessaire la survie. Elle protge lorganisme vis--vis
dune toxicit en empchant les substances nocives de saccumuler dans lorganisme.
Cependant, des mtabolites ractifs intermdiaires peuvent se former lors de la
biotransformation, mtabolites qui sont potentiellement dangereux. Ce phnomne est appel
lactivation mtabolique. La biotransformation peut donc induire galement une toxicit. Sils
ne sont pas conjugus, les mtabolites oxyds intermdiaires peuvent se lier aux structures
cellulaires et les endommager. Par exemple, la liaison dun mtabolite de xnobiotique
lADN peut tre lorigine dune mutation (voir larticle La toxicologie gntique). Si le
systme de biotransformation est dpass, il peut se produire une destruction massive de
protines essentielles ou des membranes lipidiques qui peut aboutir la mort cellulaire (voir
larticle La lsion et la mort cellulaires).
Le terme mtabolisme est souvent employ de faon interchangeable avec celui de
biotransformation. Il dsigne la dgradation chimique ou les ractions de synthse catalyses
par des enzymes dans lorganisme. Les nutriments alimentaires, les composs endognes et
les xnobiotiques sont tous mtaboliss dans lorganisme.
Lactivation mtabolique signifie quun compos moins ractif est converti en une molcule
plus ractive. Cette conversion se produit lors des ractions de phase I.
Linactivation mtabolique renvoie au fait quune molcule active ou toxique est convertie en
un mtabolite moins actif. Ce phnomne se produit gnralement lors des ractions de phase
II. Dans certains cas, un mtabolite inactiv peut tre ractiv, par suite dun clivage
enzymatique, par exemple.

La raction de phase I, qui constitue la premire tape du mtabolisme dun xnobiotique,


indique gnralement que le compos est oxyd. Loxydation cre habituellement un compos
plus hydrosoluble et facilite les ractions ultrieures.
Les enzymes du cytochrome P450 constituent un groupe denzymes oxydant
prfrentiellement les xnobiotiques lors des ractions de phase I. Les diffrentes enzymes
sont spcialises pour la prise en charge de groupes spcifiques de xnobiotiques prsentant
certaines caractristiques. Les molcules endognes sont galement des substrats pour ces
enzymes. Les enzymes du cytochrome P450 sont induites par des xnobiotiques dune
manire spcifique. La connaissance dune induction du cytochrome P450 peut renseigner
utilement sur la nature des expositions antrieures (voir larticle Les dterminants gntiques
de la rponse toxique).
La raction de phase II, qui reprsente la seconde tape dans le mtabolisme des
xnobiotiques, signifie que le compos oxyd est conjugu (coupl) une molcule endogne.
Cette raction se caractrise par une augmentation de lhydrosolubilit. De nombreux
mtabolites conjugus sont fortement excrts par la voie rnale.
Les transfrases constituent un groupe denzymes catalysant les ractions de phase II. Elles
conjuguent les xnobiotiques avec des composs endognes tels que le glutathion, les acides
amins, lacide glucuronique ou le sulfate.
Le glutathion est une molcule endogne, un tripeptide, conjugu aux xnobiotiques lors des
ractions de phase II. Il est prsent dans toutes les cellules (en fortes concentrations dans les
cellules hpatiques) et, gnralement, protge de la toxicit des xnobiotiques activs.
Lorsque le glutathion est puis, des ractions toxiques peuvent se produire entre les
mtabolites actifs des xnobiotiques et les protines, les lipides ou lADN.
Linduction signifie que les enzymes participant la biotransformation sont augmentes (en
activit ou en quantit) en rponse lexposition un xnobiotique. Dans certains cas,
lactivit peut subir plusieurs augmentations en quelques jours. Linduction est souvent
quilibre lorsque les ractions des phases I et II subissent simultanment une augmentation;
il se produira alors une biotransformation plus rapide qui peut expliquer une tolrance. Au
contraire, une induction dsquilibre peut accrotre la toxicit.
Linhibition de la biotransformation peut survenir lorsque deux xnobiotiques sont
mtaboliss par la mme enzyme. Les deux substrats entrent en comptition et, gnralement,
lun des substrats lemporte. Dans ce cas, le second substrat nest pas mtabolis, ou lest plus
lentement. Comme pour linduction, linhibition peut donc faire augmenter la toxicit ou la
faire diminuer.
Lactivation de loxygne peut tre dclenche par les mtabolites de certains xnobiotiques.
Ils peuvent sauto-oxyder en produisant des espces oxygnes actives. Ces espces drives
de loxygne, qui incluent le superoxyde, le peroxyde dhydrogne et le radical hydroxyle,
peuvent lser lADN, les lipides et les protines dans les cellules. Lactivation de loxygne
intervient galement dans les processus inflammatoires.
La variabilit gntique entre les individus a t constate pour de nombreux gnes codant
pour des enzymes de phase I et de phase II. Cette variabilit peut expliquer que certains
individus soient plus sensibles que dautres aux effets toxiques des xnobiotiques.
LA TOXICOCINTIQUE
Duan Djuric
Lorganisme humain constitue un systme biologique complexe avec des niveaux
dorganisation varis, depuis le niveau molculaire-cellulaire jusquaux tissus et organes. Il
sagit dun systme ouvert, changeant matire et nergie avec lenvironnement travers des

ractions biochimiques nombreuses en quilibre dynamique, environnement qui peut tre


pollu ou contamin par divers toxiques.
La pntration de molcules ou dions toxiques depuis lenvironnement, gnral ou
professionnel, dans un tel systme biologique si fortement coordonn, peut perturber de
manire rversible ou irrversible les processus biochimiques cellulaires normaux, ou mme
lser et dtruire la cellule (voir larticle La lsion et la mort cellulaires).
La pntration dun toxique depuis lenvironnement jusquaux sites o il va exercer son effet
toxique dans lorganisme peut tre divis en trois phases:
1. La phase dexposition comprend tous les processus se produisant entre les divers
toxiques ou les facteurs environnementaux ayant une influence sur eux (lumire,
temprature, humidit, etc.). Des transformations chimiques peuvent se produire, de
mme quune dgradation, une biodgradation (par les micro-organismes) ou une
destruction des toxiques.
2. La phase toxicocintique englobe labsorption des toxiques dans lorganisme et tous
les processus ultrieurs: transport par les fluides de lorganisme, distribution et
accumulation dans les tissus et les organes, biotransformation en mtabolites et
limination (excrtion) des toxiques ou des mtabolites en dehors de lorganisme.
3. La phase toxicodynamique fait rfrence linteraction des toxiques (molcules, ions,
collodes) avec des sites spcifiques daction la surface ou lintrieur des cellules
rcepteurs responsables de leffet toxique ultrieur.
Nous nous intresserons plus particulirement aux processus toxicocintiques qui ont lieu
dans lorganisme humain aprs une exposition des toxiques environnementaux.
Les molcules ou les ions toxiques prsents dans lenvironnement pntrent dans lorganisme
travers la peau et les muqueuses, ou les cellules pithliales des appareils respiratoire et
gastro-intestinal, selon la voie dentre. Pour cela, les molcules et les ions toxiques doivent
franchir les membranes cellulaires de ces systmes biologiques ainsi que le rseau complexe
des membranes se trouvant lintrieur de la cellule.
Tous les processus toxicocintiques et toxicodynamiques se produisent au niveau molculaire
ou cellulaire. Ils sont commands par un certain nombre de facteurs que lon peut scinder en
deux groupes fondamentaux:
constitution chimique et proprits physico-chimiques des toxiques;
structure de la cellule et, surtout, proprits et fonction des membranes autour de la
cellule et des organites internes.
Les proprits physico-chimiques des toxiques
Cest en 1854 que le toxicologue russe E.V. Pelikan a commenc ltude de la relation entre la
structure chimique dune substance et son activit biologique la relation structure-activit
(RSA). La structure chimique dtermine directement les proprits physico-chimiques, dont
certaines sont responsables de lactivit biologique.
Pour dfinir la structure chimique, on a le choix entre plusieurs paramtres ou descripteurs qui
peuvent tre rpartis selon les groupes suivants:
1. Physico-chimique:
o gnral point de fusion, point dbullition, tension de vapeur, constante de
dissociation (pKa), coefficient de partage de Nernst (P), nergie dactivation,
chaleur de raction, potentiel de rduction, etc.;
o lectrique potentiel dionisation, constante dilectrique, moment diple,
rapport masse/charge, etc.;

chimie quantique charge atomique, nergie de liaison, nergie de rsonance,


densit lectronique, ractivit molculaire, etc.
2. Strique: volume molculaire, forme et surface, forme infrastructurale, ractivit
molculaire, etc.
3. Structurel: nombre de liaisons, nombre de cycles (pour les composs polycycliques),
nombre de ramifications, etc.
Pour chaque toxique, il convient donc de slectionner un ensemble de descripteurs
correspondant un mcanisme dactivit particulier. Nanmoins, du point de vue
toxicocintique, deux paramtres revtent une importance gnrale pour tous les toxiques:
le coefficient de partage de Nernst (P) tablit la solubilit des molcules toxiques dans
le systme deux phases octanol (huile)-eau, reli leur lipo- ou hydrosolubilit. Ce
paramtre a une influence considrable sur la distribution et laccumulation des
molcules toxiques dans lorganisme;
la constante de dissociation (pKa) dfinit le degr dionisation (dissociation
lectrolytique) des molcules dun toxique en cations et anions chargs pour un pH
donn. Cette constante reprsente le pH correspondant 50% dionisation. Les
molcules peuvent tre lipophiles ou hydrophiles, mais les ions sont exclusivement
solubles dans leau des fluides et des tissus de lorganisme. Connaissant le pKa, il est
possible de calculer le degr dionisation dune substance pour chaque pH en utilisant
lquation de Henderson-Hasselbach.
Dans le cas des arosols et des poussires inhales, leur toxicocintique et leur
toxicodynamique est aussi fonction de la taille des particules, de leur forme, de leur surface et
de leur densit.
La structure et les proprits des membranes
La cellule eucaryote est entoure dune membrane cytoplasmique qui commande le transport
des substances et maintient lhomostasie cellulaire. Les organites cellulaires (noyau,
mitochondrie) possdent eux aussi une membrane. Le cytoplasme cellulaire est
compartiment par des structures membranaires intriques, le rticulum endoplasmique et
lappareil de Golgi (endomembranes). Toutes ces membranes ont une structure semblable,
mais diffrent par leur teneur en lipides et en protines.
Structurellement, les membranes sont constitues dune double couche de molcules
lipidiques (phospholipides, sphingolipides, cholestrol). La principale composante de la
molcule de phospholipide est le glycrol dont deux groupes OH sont estrifis par des acides
gras aliphatiques de 16 18 atomes de carbone, le troisime groupe tant estrifi par un
groupe phosphate et un compos azot (choline, thanolamine, srine). Les sphingolipides
quant eux sont surtout forms de sphingosine.
La molcule lipidique est amphipathique, car elle possde une tte polaire hydrophile
(amino-alcool, phosphate, glycrol) et une double queue non polaire (acides gras). La
double couche lipidique est dispose de telle sorte que les ttes hydrophiles constituent la
surface intrieure et extrieure de la membrane et que les queues lipophiles sont tires vers
lintrieur de la membrane, qui contient de leau, divers ions et des molcules.
Des protines et des glycoprotines sont insres dans la double couche lipidique (protines
intrinsques) ou attaches la surface de la membrane (protines extrinsques). Ces protines
contribuent lintgrit structurale de la membrane, mais elles peuvent galement remplir la
fonction denzymes, de protines porteuses, de parois de pores ou de rcepteurs.
La membrane constitue une structure dynamique qui, selon les besoins fonctionnels, peut tre
dsagrge et reconstruite avec une proportion diffrente de lipides et de protines.
o

Le contrle du transport des substances lintrieur et lextrieur de la cellule constitue


lune des fonctions fondamentales des membranes externes et internes.
Certaines molcules lipophiles passent directement travers la double couche lipidique, les
molcules hydrophiles et les ions tant transports par les pores. Les membranes ragissent au
changement de conditions en ouvrant ou en fermant des pores de diverses tailles.
Les processus et mcanismes suivants interviennent dans le transport de substances, y compris
celui des toxiques, travers les membranes:
diffusion travers la double couche lipidique;
diffusion travers les pores;
transport laide dune protine porteuse (diffusion facilite).
Processus actifs:
transport actif par lintermdiaire dune protine porteuse;
endocytose (pinocytose).
La diffusion
Elle reprsente le mouvement des molcules et des ions travers la double couche lipidique
ou les pores depuis une rgion forte concentration, ou fort potentiel lectrique, vers une
rgion faible concentration ou potentiel (gradient de concentration). La diffrence de
concentration ou de charge lectrique est la force motrice dterminant lintensit du flux dans
les deux directions. A ltat dquilibre, lafflux est gal au flux sortant. La diffusion est rgie
par la loi de Fick, selon laquelle le taux est directement proportionnel la surface
membranaire disponible, au gradient de concentration (charge) et un coefficient de
diffusion, et inversement proportionnel lpaisseur de la membrane.
Les petites molcules lipophiles passent facilement travers la couche lipidique membranaire
selon le coefficient de partage de Nernst.
Les grosses molcules lipophiles, les molcules hydrosolubles et les ions utilisent les pores
aqueux pour leur passage. La taille et la configuration strique conditionnent le passage des
molcules. Pour les ions, outre la taille, le type de charge est dterminant. Les protines
constitutives de la paroi des pores peuvent acqurir une charge positive ou ngative. Les pores
troits sont slectifs les ligands chargs ngativement permettant le seul passage des
cations, les ligands chargs positivement uniquement celui des anions. Lorsque le diamtre du
pore augmente, le flux hydrodynamique est dominant et permet le libre passage des ions et
des molcules, selon la loi de Poiseuille. La filtration est une consquence du gradient
osmotique. Dans certains cas, les ions peuvent pntrer par lintermdiaire de molcules
spcifiques complexes les ionophores produits par des micro-organismes et prsentant
des effets antibiotiques (nonactine, valinomycine, gramicidine, etc.).
La diffusion facilite ou catalyse
Ce type de diffusion requiert la prsence dune molcule porteuse dans la membrane,
gnralement de nature protique (permase). La molcule porteuse fixe les substances dune
manire slective, ressemblant un complexe substrat-enzyme. Des molcules similaires (y
compris des toxiques) peuvent entrer en comptition vis--vis de la molcule porteuse
spcifique jusqu ce que le point de saturation soit atteint. Des toxiques peuvent entrer en
comptition vis--vis de la molcule porteuse; une fois lis celle-ci de faon irrversible, le
transport est bloqu. Chaque type de molcule porteuse prsente un taux de transport
caractristique. Sil est ralis dans les deux directions, le transport est appel diffusion
dchange.
Le transport actif

Dans le cas de certaines substances vitales pour la cellule, un type spcial de transporteur
existe, qui permet le transport contre le gradient de concentration ou le potentiel lectrique
(en amont). La molcule porteuse prsente une grande strospcificit et elle est saturable.
Ce type de transport ncessite de lnergie, qui lui est fournie par le clivage catalytique de
molcules dATP en molcules dADP par lenzyme adnosine triphosphatase (ATP-ase).
Des toxiques peuvent interfrer avec ce type de transport par inhibition comptitive ou non
comptitive des molcules porteuses ou par inhibition de lactivit ATP-asique.
Lendocytose
Lendocytose est un mcanisme de transport au cours duquel la membrane cellulaire
enveloppe le matriau pour former une vsicule pntrant dans la cellule. Lorsque le matriau
concern est liquide, le processus est appel pinocytose. Dans certains cas, ce matriau est li
un rcepteur et le complexe ainsi form est transport par une vsicule membranaire. Cest
ce type de transport quutilisent notamment les cellules pithliales du tractus gastro-intestinal
et les cellules hpatiques et rnales.
Labsorption des toxiques
Lorganisme est expos de nombreux toxiques prsents dans lenvironnement gnral ou
professionnel. Ces toxiques peuvent pntrer dans lorganisme par trois portes dentre
principales:
lappareil respiratoire, par inhalation de lair pollu;
lappareil gastro-intestinal, par ingestion de nourriture, deau ou de boissons
contamines;
la peau, par pntration cutane au niveau du derme.
Dans lindustrie, linhalation reprsente la principale porte dentre des toxiques, suivie de la
pntration cutane. Dans lagriculture, labsorption en cas dexposition certains pesticides
se fait autant par la peau que par inhalation. Quant la population dans son ensemble, elle est
expose par voie gastro-intestinale essentiellement (ingestion de nourriture, deau et de
boissons contamines), mais aussi par voie inhalatoire et, plus rarement, par pntration
cutane.
Labsorption par la voie respiratoire
Labsorption pulmonaire reprsente la principale voie de captation de nombreux toxiques
prsents dans lair (gaz, vapeurs, fumes, brouillards, poussires, arosols, etc.).
Lappareil respiratoire constitue un systme idal pour les changes gazeux. Il prsente en
effet une surface membranaire totale allant de 30 m2 ( lexpiration) 100 m2 (lors dune
inspiration profonde), faisant face un rseau capillaire denviron 2 000 km. Le systme,
dvelopp au cours de lvolution, est localis dans un espace relativement petit (cavit
thoracique) protg par les ctes.
Anatomiquement et physiologiquement, lappareil respiratoire peut tre divis en trois
compartiments:
la partie suprieure ou nasopharyngienne, stendant du nez au pharynx et au larynx,
fait fonction de systme de climatisation;
larbre tracho-bronchique, compos de nombreux tubes de tailles diverses
acheminant lair aux poumons;
le compartiment pulmonaire, consistant en des millions dalvoles (sacs alvolaires)
disposes la faon de grappes de raisins (disposition racmeuse).
Les toxiques hydrophiles sont facilement absorbs par lpithlium de la rgion
nasopharyngienne, lpithlium des rgions nasopharyngienne et tracho-bronchique tant
recouvert en totalit dun film aqueux. Les toxiques lipophiles sont un peu absorbs dans ces

deux rgions, mais ils le sont principalement au niveau des alvoles par diffusion travers les
membranes alvolo-capillaires. Le taux dabsorption dpend de la ventilation pulmonaire, du
dbit cardiaque (qui conditionne le flux sanguin au niveau pulmonaire), de la solubilit du
toxique dans le sang et de son mtabolisme.
Cest au niveau alvolaire que seffectuent les changes gazeux. La paroi alvolaire est
constitue dun pithlium, dune membrane basale interstitielle, de tissu conjonctif et dun
endothlium capillaire. A travers ces couches dont lpaisseur est de 0,8 m environ, la
diffusion des toxiques est trs rapide. Dans les alvoles, le toxique est chang entre la phase
arienne et la phase liquide (sang). Le taux dabsorption dun toxique (distribution de lair
vers le sang) dpend de sa concentration dans lair alvolaire et du coefficient de partage de
Nernst pour le sang (coefficient de solubilit).
Dans le sang, le toxique est dissous dans la phase liquide par simple processus physique ou
par suite de sa liaison aux cellules sanguines ou aux constituants plasmatiques selon laffinit
chimique ou par adsorption. Le sang contenant 75% deau, les gaz et les vapeurs hydrophiles
prsentent donc une grande solubilit dans le plasma (par exemple, les alcools). Les toxiques
lipophiles (comme le benzne) sont gnralement lis aux cellules ou aux macromolcules
telles que lalbumine.
Ds le dbut dune exposition par voie pulmonaire, deux processus opposs surviennent:
labsorption et la dsorption. Lquilibre entre ces processus dpend de la concentration du
toxique dans lair alvolaire et le sang. En dbut dexposition, la concentration sanguine en
toxiques est nulle et la rtention dans ce milieu est pratiquement totale. Avec la poursuite de
lexposition, un quilibre stablit entre labsorption et la dsorption. Les toxiques
hydrophiles atteignent rapidement lquilibre et le taux dabsorption dpend de la ventilation
pulmonaire plutt que du flux sanguin. Les toxiques lipophiles ont besoin dun temps plus
long pour atteindre lquilibre et, dans ce cas, le flux de sang insatur commande le taux
dabsorption.
Le dpt des particules et des arosols dans le tractus respiratoire dpend de facteurs
physiques et physiologiques et de la taille des particules. Plus la particule est petite, plus elle
pntre profondment dans le tractus respiratoire.
La rtention relativement faible des particules de poussire observe de faon constante dans
les poumons de personnes fortement exposes (les mineurs, par exemple) donne penser quil
existe un systme trs efficace de clairance des particules. Dans la partie suprieure du tractus
respiratoire (zone tracho-bronchique), cette fonction est assure par une couche mucociliaire.
Dans la partie pulmonaire, trois mcanismes ou niveaux interviennent: 1) la couche
mucociliaire; 2) la phagocytose; 3) la pntration directe des particules travers la paroi
alvolaire.
Les 17 premires des 23 arborescences de larbre tracho-bronchique possdent des cellules
pithliales cilies. Par leurs mouvements, ces cils poussent continuellement une couche de
mucus vers la bouche. Les particules dposes sur cette couche mucociliaire sont avales au
niveau buccal (ingestion). Une couche de mucus couvre galement la surface de lpithlium
alvolaire, se dplaant en direction de la couche mucociliaire. De plus, des cellules
spcialises pouvant se dplacer les phagocytes absorbent les particules et les microorganismes prsents dans les alvoles et migrent dans deux directions possibles:
vers la couche mucociliaire, qui les achemine ensuite vers la bouche;
travers les espaces intercellulaires de la paroi alvolaire vers le systme lymphatique
pulmonaire; les particules peuvent aussi pntrer directement par cette voie.
Labsorption au niveau de lappareil gastro-intestinal

Les toxiques peuvent tre ingrs la suite dune ingestion accidentelle, de labsorption de
nourriture ou de boissons contamines, ou par ingestion de particules limines par le tractus
respiratoire.
Le tractus digestif dans son intgralit, depuis lsophage jusqu lanus, prsente la mme
structure de base. Une couche muqueuse (pithlium) est sous-tendue de tissu conjonctif et,
au-del, par un rseau de capillaires et de muscle lisse. La surface de lpithlium stomacal est
trs plisse ce qui accrot la surface dabsorption et de scrtion. La surface intestinale
contient de nombreux replis (villosits), capables dabsorber le matriel par pompage. La
surface active pour labsorption dans les intestins est denviron 100 m2.
Au niveau du tractus gastro-intestinal, tous les processus dabsorption sont trs actifs:
transport transcellulaire par diffusion travers la couche lipidique ou les pores des
membranes cellulaires, ou encore par filtration au niveau des pores;
diffusion paracellulaire travers les jonctions intercellulaires;
diffusion facilite et transport actif;
endocytose et mcanisme de pompage au niveau des villosits.
Certains ions de mtaux toxiques utilisent les systmes de transport spcialiss des lments
essentiels: le thallium, le cobalt et le manganse font appel au systme de transport du fer, le
plomb employant celui du calcium.
De nombreux facteurs ont une influence sur le taux dabsorption des toxiques dans les
diverses parties du tractus gastro-intestinal:
les proprits physico-chimiques des toxiques, particulirement le coefficient de
partage de Nernst et la constante de dissociation; dans le cas des particules, leur
granulomtrie revt une importance particulire: en effet, plus elles sont petites, plus
elles sont solubles;
la quantit de nourriture prsente dans le tractus gastro-intestinal (effet de dilution);
le temps de rtention dans chaque partie du tractus gastro-intestinal (de quelques
minutes au niveau buccal une heure dans lestomac et plusieurs heures au niveau
intestinal);
la surface dabsorption et la capacit dabsorption de lpithlium;
le pH local, qui rgit labsorption des toxiques ioniss; dans le pH acide de lestomac,
les composs acides non ioniss seront plus facilement absorbs;
le pristaltisme (mouvement musculaire au niveau des intestins) et le flux sanguin
local;
les scrtions gastriques et intestinales transforment les toxiques en produits plus ou
moins solubles; la bile est un agent mulsif produisant des complexes plus solubles
(hydrotrophie);
lexposition combine dautres toxiques, produisant des effets synergiques ou
antagonistes lors des processus dabsorption;
la prsence dagents complexants ou chlateurs;
laction de la microflore du tractus gastro-intestinal (environ 1,5 kg), quelque
60 espces de bactries diffrentes pouvant intervenir dans la biotransformation des
toxiques.
Il faut galement mentionner la circulation entro-hpatique. Les toxiques ou leurs
mtabolites polaires (glucuronides et autres conjugus) sont excrts avec la bile dans le
duodnum. A ce niveau, les enzymes de la microflore ralisent une hydrolyse et les produits
librs peuvent tre rabsorbs et transports par la veine porte vers le foie. Ce mcanisme est

trs dangereux dans le cas de substances hpatotoxiques, car il permet leur accumulation
temporaire dans le foie.
Sagissant des toxiques biotransforms dans le foie en mtabolites moins toxiques ou non
toxiques, lingestion peut reprsenter une voie dentre moins dangereuse. Aprs absorption
dans le tractus gastro-intestinal, ces toxiques sont transports par la veine porte au foie o ils
peuvent tre partiellement dtoxifis par biotransformation.
Labsorption travers la peau (dermique, percutane)
La peau (1,8 m2 de surface chez ladulte) et les muqueuses des orifices recouvrent la surface
corporelle. La peau agit comme un rempart vis--vis des agents physiques, chimiques et
biologiques et, entre autres tches physiologiques, elle maintient lintgrit du corps et
lhomostasie.
La peau est constitue de trois couches: lpiderme, la vraie peau (le derme) et les tissus souscutans (hypoderme). Du point de vue toxicologique, lpiderme est du plus grand intrt. Il
est constitu de nombreuses couches cellulaires. Une surface calleuse de cellules mortes
aplaties (stratum corneum, couche corne) constitue la couche suprieure, sous laquelle se
trouvent une couche continue de cellules vivantes (stratum corneum compactum, couche
corne compacte), une membrane lipidique typique, puis le stratum lucidum, le stratum
granulosum et le stratum mucosum. La membrane lipidique reprsente une barrire
protectrice que traversent les follicules des poils et les canaux des glandes sudoripares dans
les parties velues de la peau. Labsorption dermique peut donc se faire selon les mcanismes
suivants:
absorption transpidermale par diffusion travers la membrane lipidique (barrire),
principalement pour les substances lipophiles (solvants organiques, pesticides, etc.) et,
dans une moindre mesure, par certaines substances hydrophiles travers les pores;
absorption transfolliculaire autour de la tige des follicules pileux, vitant ainsi la
barrire membranaire; cette absorption a lieu au niveau des surfaces cutanes pileuses;
absorption au niveau des canaux sudoripares, dont la section transversale correspond
environ 0,1 1% de la superficie totale de la peau (labsorption relative suit cette
proportion);
absorption travers la peau quand celle-ci est lse pour des raisons mcaniques,
thermiques, chimiques ou par suite daffections cutanes; les couches cutanes, y
compris la barrire lipidique, sont alors rompues et la voie est libre pour la pntration
des toxiques et des agents dangereux.
Le taux dabsorption travers la peau dpend de nombreux facteurs:
la concentration du toxique, le type de vhicule (milieu), la prsence dautres
substances;
le degr dhydratation cutane, le pH, la temprature, le flux sanguin local, la
transpiration, la surface de peau contamine, lpaisseur de la peau;
les caractristiques anatomiques et physiologiques de la peau en fonction du sexe, de
lge, des variations individuelles, des diffrences de nature ethnique ou raciale, etc.
Le transport des toxiques par voie sanguine et lymphatique
Quelle que soit la voie dabsorption, les toxiques atteignent le sang, la lymphe ou les autres
fluides corporels. Le sang reprsente le vhicule principal assurant le transport des toxiques et
de leurs mtabolites.
Le sang, tissu liquide fluide circulant, transporte loxygne et les nutriments ncessaires aux
cellules et limine les produits de dchet du mtabolisme. Il contient galement des
composants cellulaires, des hormones et dautres molcules participant de nombreuses
fonctions physiologiques. Le sang circule lintrieur dun rseau de vaisseaux sanguins,

relativement bien ferm et sous pression leve en raison de lactivit cardiaque. Cette
pression leve entrane une fuite liquidienne et le systme lymphatique fait office de systme
de drainage grce un fin rseau de petits capillaires lymphatiques paroi mince ayant des
ramifications dans les tissus mous et les organes.
Le sang est le mlange dune phase liquide (plasma, 55%) et dune phase solide constitu de
cellules sanguines (45%). Le plasma contient des protines (albumines, globulines,
fibrinogne), des acides organiques (lactique, glutamique, citrique) et de nombreuses autres
substances (lipides, lipoprotines, glycoprotines, enzymes, sels, xnobiotiques, etc.). Les
cellules sanguines comprennent les rythrocytes, les leucocytes, les rticulocytes, les
monocytes et les plaquettes.
Les toxiques sont absorbs sous forme molculaire ou ionique. Certains dentre eux forment,
au pH du sang, des particules collodales constituant la troisime forme de transport dans ce
liquide. Les molcules, les ions et les collodes toxiques sont transports dans le sang de
diverses manires:
par liaison physique ou chimique aux lments du sang, surtout aux rythrocytes;
par dissolution physique dans le plasma ltat libre;
par liaison un ou plusieurs types de protines plasmatiques, complexs avec des
acides organiques ou avec dautres fractions du plasma.
La plupart des toxiques sanguins se trouvent soit ltat libre dans le plasma, soit lis aux
rythrocytes et aux constituants plasmatiques. Leur distribution dpend de leur affinit envers
ces constituants. Toutes les fractions sont en quilibre dynamique.
Certains toxiques sont transports par les lments du sang la plupart par les rythrocytes
trs rarement par les leucocytes. Les toxiques peuvent tre adsorbs la surface des
rythrocytes ou se lier aux ligands du stroma. Sils pntrent dans les rythrocytes, ils peuvent
se lier lhme (le monoxyde de carbone et le slnium, par exemple) ou la globine (Sb111,
Po210). Parmi les toxiques transports par les rythrocytes, on trouve larsenic, le csium, le
plomb, le radium, le sodium et le thorium. Le chrome hexavalent est exclusivement li aux
rythrocytes et le chrome trivalent aux protines plasmatiques. Dans le cas du zinc, on assiste
une concurrence entre les rythrocytes et le plasma. Le plomb est transport 96% environ
par les rythrocytes. Le mercure organique est principalement li aux rythrocytes, le mercure
inorganique tant en majeure partie achemin par lalbumine plasmatique. De petites fractions
de bryllium, de cuivre, de tellure et duranium sont prises en charge par les rythrocytes.
La majorit des toxiques sont transports par le plasma ou les protines plasmatiques. De
nombreux lectrolytes sont prsents sous forme ionique en quilibre avec les molcules non
ionises libres ou associes aux fractions plasmatiques. La fraction ionique des toxiques est
trs diffusible et pntre travers les parois des capillaires dans les tissus et organes. Les gaz
et vapeurs peuvent tre dissous dans le plasma.
Les protines plasmatiques possdent une surface totale denviron 600 800 km2 pouvant
assurer labsorption des toxiques. Les molcules dalbumine possdent environ 109 ligands
cationiques et 120 ligands anioniques la disposition des ions. De nombreux ions sont
partiellement transports par lalbumine (cadmium, cuivre et zinc, par exemple). Il en va de
mme pour les composs tels que les dinitro- et ortho-crsols, les drivs nitrs et halogns
des hydrocarbures aromatiques et les phnols.
Les molcules de globuline (alpha et bta) transportent des toxiques de faible poids
molculaire, des ions mtalliques (cuivre, fer et zinc) et des particules collodales. Le
fibrinogne a une affinit pour les molcules de faible poids molculaire. Divers types de
liaisons peuvent se former entre les toxiques et les protines plasmatiques: forces de van der

Waals, attraction de charges, association entre groupes polaires et apolaires, ponts hydrogne,
liaisons covalentes.
Les lipoprotines plasmatiques transportent des toxiques lipophiles comme les PCB. Les
autres fractions plasmatiques interviennent aussi dans ce transport. Laffinit des toxiques
pour les protines plasmatiques tmoigne de leur affinit protique dans les tissus et les
organes lors de la distribution.
Les acides organiques (lactique, glutamique, citrique) forment des complexes avec certains
toxiques. Les lments alcalins et les terres rares, de mme que certains lments lourds sous
forme cationique, sont galement complexs avec des oxyacides organiques et des acides
amins. Tous ces complexes sont gnralement diffusibles et facilement distribus dans les
tissus et les organes.
Physiologiquement, les agents chlateurs plasmatiques tels que la transferrine et la
mtallothionine rivalisent avec les acides organiques et les acides amins vis--vis des
cations pour former des chlates stables.
Les ions libres diffusibles et certains complexes et molcules libres passent facilement du
sang aux tissus et aux organes. La fraction libre des ions et des molcules est en quilibre
dynamique avec la fraction lie. La distribution dun toxique du sang vers les tissus et les
organes ou, inversement, sa mobilisation depuis les tissus et les organes vers le sang,
dpendent de sa concentration sanguine.
La distribution des toxiques dans lorganisme
Lorganisme humain peut tre divis en plusieurs compartiments: 1) les organes internes; 2) la
peau et les muscles; 3) le tissu adipeux; 4) le tissu conjonctif et le tissu osseux. Cette
classification est principalement base sur le degr, en loccurrence dcroissant, dirrigation
vasculaire (sanguine). Ainsi, les organes internes (dont le cerveau), reprsentant 12% du poids
corporel total, reoivent environ 75% du volume sanguin total. A loppos, les tissus
conjonctif et osseux (15% du poids total du corps) ne reoivent que 1% du volume sanguin
total.
Les organes internes fortement irrigus atteignent gnralement la plus forte concentration
toxique dans le temps le plus court; de mme, ltat dquilibre entre ces organes et le sang est
atteint plus rapidement. La captation des toxiques par les tissus moins perfuss est plus lente,
mais la rtention y est plus forte et la dure de sjour plus longue (accumulation) en raison de
la faible perfusion.
Trois lments revtent une importance capitale dans la distribution intracellulaire des
toxiques: leau, les lipides et les protines, et en particulier leur teneur dans les cellules des
divers tissus et organes. Les compartiments susmentionns se caractrisent par une teneur en
eau cellulaire dcroissante. Les toxiques hydrophiles sont distribus plus rapidement dans les
fluides et les cellules riches en eau, alors que la distribution des toxiques lipophiles est plus
rapide vers les cellules contenu lipidique lev (tissus gras).
Lorganisme possde des barrires empchant la pntration de certains groupes de toxiques,
surtout hydrophiles, dans des organes et des tissus:
la barrire hmato-encphalique (barrire crbro-spinale), qui restreint la pntration
de molcules de poids molculaire lev et celle de toxiques hydrophiles dans le
cerveau et le SNC; cette barrire est constitue dune couche de cellules endothliales
troitement soudes que les toxiques lipophiles sont les seuls pouvoir traverser;
la barrire placentaire, qui a un effet comparable sur la pntration des toxiques du
sang maternel vers le ftus;

la barrire histo-hmatologique dans les parois des capillaires, permable aux


molcules de petite taille et de taille intermdiaire ainsi qu certaines grosses
molcules et aux ions.
Comme nous lavons dj mentionn, seules les formes libres des toxiques dans le plasma
(molcules, ions, collodes) peuvent pntrer travers les parois capillaires. Cette fraction
libre est en quilibre dynamique avec la fraction lie. La concentration des toxiques dans le
sang, qui est elle aussi en quilibre dynamique avec leur concentration dans les organes et les
tissus, commande leur rtention (accumulation) ou leur mobilisation dans ces milieux.
Ltat gnral de lorganisme, ltat fonctionnel des organes (en particulier la rgulation
neuro-humorale), lquilibre hormonal et dautres facteurs jouent un rle dans la distribution.
La rtention dun toxique dans un compartiment donn est gnralement temporaire et se
termine par une redistribution vers dautres tissus. La rtention et laccumulation sont bases
sur les diffrences entre vitesse dabsorption et vitesse dlimination. La dure de rtention
dans un compartiment est exprime par la demi-vie biologique, intervalle de temps durant
lequel 50% du toxique sont limins du tissu ou de lorgane pour tre redistribus dans
lorganisme ou en tre limins.
Lors de la distribution et de la rtention dans les organes et tissus, on asssiste divers
processus de biotransformation. Cette biotransformation produit des mtabolites plus polaires
et plus hydrophiles, qui sont plus faciles liminer. Un taux faible de biotransformation dun
toxique lipophile provoque gnralement son accumulation dans un compartiment.
Les toxiques peuvent tre diviss en quatre groupes principaux selon leur affinit et leur mode
prdominant de rtention et daccumulation dans un compartiment particulier:
1. Les toxiques solubles dans les fluides corporels sont distribus uniformment selon la
teneur en eau des compartiments. De nombreux cations monovalents (lithium,
potassium, rubidium, sodium, par exemple) et certains anions (chlore, brome, etc.)
sont distribus selon ce modle.
2. Les toxiques lipophiles montrent une forte affinit pour les organes (SNC) et tissus
(gras, adipeux) riches en lipides.
3. Les toxiques formant des particules collodes sont capts par les cellules spcialises
du systme rticulo-endothlial des tissus et organes. Les cations tri- et quadrivalents
(lanthane, csium, hafnium) sont distribus dans ce systme des tissus et des organes.
4. Certains toxiques ont une forte affinit pour les tissus osseux et conjonctifs (lments
ostotrophiques, chercheurs dos), y compris les toxiques cationiques divalents
(aluminium, baryum, bryllium, cadmium, calcium, plomb, radium, strontium, par
exemple).
Laccumulation dans les tissus riches en lipides
Un homme normal de 70 kg de poids corporel est constitu de 15% environ de tissu
adipeux (jusqu 50% chez lobse), mais cette fraction lipidique nest pas rpartie
uniformment. Le cerveau (SNC) est un organe riche en lipides et les nerfs priphriques sont
entours dune gaine de myline riche en lipides et en cellules de Schwann, tissus qui tous
permettent laccumulation de toxiques lipophiles.
De nombreux toxiques non ioniss et apolaires ayant un coefficient de partage de Nernst
favorable seront distribus dans ce compartiment, de mme que de nombreux solvants
organiques (alcools, aldhydes, ctones, etc.), des hydrocarbures chlors (dont les insecticides
organochlors comme le DDT), certains gaz inertes (radon), etc.
Le tissu adipeux accumule les toxiques en raison de sa vascularisation et de son taux de
biotransformation faibles. Laccumulation des toxiques peut y reprsenter une sorte de
neutralisation temporaire du fait de labsence de cibles pour leffet toxique dans ce milieu.

Cependant, le danger potentiel pour lorganisme est toujours prsent en raison de la possibilit
dune mobilisation des toxiques depuis ce compartiment vers la circulation.
Le dpt de toxiques au niveau crbral (SNC) ou dans le tissu riche en lipides de la gaine de
myline du systme nerveux priphrique savre trs nocif. En effet, les neurotoxiques sont
dposs directement proximit de leur cible. Les toxiques retenus dans les tissus riches en
lipides des glandes endocrines peuvent entraner des troubles hormonaux. Malgr la barrire
hmato-encphalique, de nombreux neurotoxiques lipophiles atteignent le cerveau (SNC):
anesthsiques, organomercuriels, pesticides, plomb ttrathyle, solvants organiques, etc.
La rtention dans le systme rticulo-endothlial
Dans tous les tissus et organes, des cellules spciales possdent une activit phagocytaire leur
permettant de piger les micro-organismes, les particules, les particules collodales, etc. Ce
systme, appel systme rticulo-endothlial, comporte la fois des cellules fixes et des
cellules mobiles (phagocytes) prsentes sous forme inactive. Lorsquelles se trouvent
exposes un nombre lev de microbes ou de particules, ces cellules sont actives jusqu
un point de saturation.
Les toxiques collodaux sont capts par le systme rticulo-endothlial des organes et des
tissus. La distribution dpend de la taille des particules collodales, la rtention des plus
grosses particules ayant lieu prfrentiellement dans le foie. Pour les particules collodales
plus petites, une distribution plus ou moins uniforme se fait entre la rate, la moelle osseuse et
le foie. Au niveau du SNC, la clairance des collodes est trs lente, alors que les petites
particules sont limines de faon relativement plus rapide.
Laccumulation osseuse
Environ 60 lments sont identifis comme lments ostotrophiques, ou chercheurs dos.
Les lments ostotrophiques peuvent tre diviss en trois groupes:
1. Les lments formant ou remplaant des constituants physiologiques de los. Vingt
lments de ce type sont prsents en plus forte quantit, les autres ne se retrouvant
qu ltat de traces. Lors dune exposition chronique, des mtaux toxiques tels que le
plomb, laluminium et le mercure peuvent galement pntrer dans la matrice
minrale osseuse.
2. Les lments alcalins et dautres lments formant des cations dont le diamtre
ionique est identique celui du calcium sont changeables avec lui dans la partie
minrale de la substance osseuse. De mme, certains anions sont changeables avec
les anions (phosphate, hydroxyle) de cette mme substance osseuse.
3. Les lments formant des microcollodes (terres rares) peuvent tre adsorbs la
surface du minral osseux.
Le squelette dun homme normal reprsente 10 15% du poids corporel total et constitue un
potentiel de stockage important pour les toxiques ostotrophiques. Los est un tissu hautement
spcialis form, en volume, de 54% de minraux et de 38% de matrice organique. La matrice
minrale osseuse est constitue dhydroxyapatite, Ca10(PO4)6(OH)2, dans laquelle le rapport
Ca/P est denviron 1,5 1. La surface de minral disponible pour ladsorption est denviron
100 m2 par gramme de tissu osseux.
Les os du squelette peuvent tre diviss en deux catgories en fonction de leur activit
mtabolique:
los actif, au point de vue mtabolique, dans lequel les processus de rsorption et de
formation de nouveau tissu osseux, ou de remodelage de tissu osseux existant, sont
trs importants;
los stable faible taux de remodelage ou de croissance.

Chez le ftus, le nouveau-n et le jeune enfant, los mtabolique (squelette disponible)


reprsente prs de 100% du squelette. Ce pourcentage dos mtabolique dcrot avec lge.
Lincorporation des toxiques lors dune exposition se fait dans los mtabolique et dans les
compartiments se renouvelant plus lentement.
Cette incorporation se produit de deux manires:
1. Dans le cas des ions, un change a lieu avec les ions calcium prsents, ou les anions
(phosphate, hydroxyle).
2. Pour les toxiques formant des particules collodes, ladsorption se fait la surface du
minral.
Les ractions dchange ionique
Los minral, hydroxyapatite, reprsente un systme complexe dchange ionique. Les ions
calcium peuvent tre changs avec divers cations. Les anions prsents dans los peuvent
galement tre changs par des anions: le phosphate par des citrates et des carbonates,
lhydroxyle par des fluorures. Les ions non changeables peuvent tre adsorbs la surface
minrale. Lorsque des ions toxiques sont incorpors dans le minral, une nouvelle couche de
minral peut recouvrir la prcdente, emprisonnant le toxique dans la structure osseuse.
Lchange ionique est un processus rversible, dpendant de la concentration en ions, du pH
et du volume de fluide. Ainsi, une augmentation en calcium alimentaire peut faire diminuer le
dpt dions toxiques dans le rseau minral. Avec lge, le pourcentage dos mtabolique
baisse, alors que lchange ionique se poursuit; on assiste alors une rsorption osseuse, au
cours de laquelle la densit osseuse dcrot. Les toxiques prsents dans los peuvent alors tre
relargus (plomb, par exemple).
Environ 30% des ions incorpors dans les os sont faiblement fixs et peuvent tre changs,
capturs par des agents chlateurs naturels, puis excrts, avec une demi-vie biologique de
15 jours. Les 70% restants sont fixs plus solidement, leur mobilisation et leur excrtion ayant
une demi-vie biologique de 2,5 annes ou plus selon le type dos (processus de remodelage).
Les agents chlateurs (Ca-EDTA, pnicillamine, BAL, etc.) peuvent mobiliser des quantits
trs importantes de mtaux lourds et entraner une forte augmentation de leur excrtion
urinaire.
Ladsorption des collodes
Les particules collodales sont adsorbes la manire dun film sur la surface minrale
(100 m2 par g) par des forces de van der Waals ou par adsorption chimique. Cette couche
collodale est ensuite recouverte par la couche suivante de minral et les toxiques sont alors
intrioriss dans la structure osseuse. Le taux de mobilisation et dlimination dpend des
processus de remodelage.
Laccumulation dans les cheveux et les ongles
Les cheveux et les ongles, riches en groupes thiols, contiennent de la kratine, capables de
chlater les cations mtalliques comme le mercure et le plomb.
La distribution du toxique dans la cellule
La distribution de certains toxiques, en particulier les mtaux lourds, lintrieur des cellules
dans les tissus et les organes a fait lobjet dtudes rcentes. Grce aux techniques
dultracentrifugation, il est possible de sparer les diverses fractions cellulaires pour tudier
leur teneur en ions mtalliques et autres toxiques.
Les tudes chez lanimal ont montr quaprs pntration dans la cellule, certains ions
mtalliques sont lis une molcule spcifique, la mtallothionine. Cette protine de faible
poids molculaire est prsente dans les cellules hpatiques, rnales, et dans dautres organes et
tissus. Les groupes thiols de cette molcule peuvent fixer six ions par molcule. La
biosynthse de cette protine rsulte de la prsence accrue dions mtalliques. Les ions

cadmium sont les plus puissants inducteurs. La mtallothionine a galement pour fonction de
maintenir lhomostasie des ions vitaux comme le cuivre et le zinc. Elle peut fixer le bismuth,
le cadmium, le cobalt, le cuivre, le mercure, lor, le zinc et dautres cations.
La biotransformation et llimination des toxiques
Durant leur rtention dans les cellules des divers tissus et organes, les toxiques sont exposs
des enzymes qui peuvent les biotransformer (mtaboliser) et les transformer en mtabolites.
Llimination des toxiques ou de leurs mtabolites peut se faire de multiples faons: par lair
exhal, lurine, la bile, la sueur, la salive, le lait, les cheveux et les ongles.
Elle dpend de la voie dentre. Au niveau pulmonaire, le processus dabsorption/dsorption
dbute immdiatement, les toxiques tant partiellement limins par lair exhal. Plus longue,
llimination des toxiques absorbs par les autres voies commence aprs le transport sanguin
et nest complte quaprs distribution et biotransformation. Pendant labsorption, on assiste
un quilibre entre les concentrations du toxique dans le sang et dans les tissus et organes.
Lexcrtion fait diminuer la concentration sanguine du toxique et peut induire sa mobilisation
depuis les tissus vers le sang.
De nombreux facteurs exercent une influence sur le taux dlimination des toxiques et de
leurs mtabolites:
les proprits physico-chimiques, en particulier le coefficient de partage de Nernst (P),
la constante de dissociation (pKa), la polarit, la structure molculaire, la forme et le
poids molculaire;
le niveau dexposition, le temps dlimination aprs exposition;
la voie dentre;
la distribution dans les compartiments corporels, qui diffrent par leur taux dchange
avec le sang et leur circulation sanguine;
le taux de biotransformation des toxiques lipophiles en mtabolites plus hydrophiles;
ltat de sant gnral de lorganisme et, spcialement, des organes excrteurs
(poumons, reins, tractus gastro-intestinal, peau, etc.);
la prsence dautres toxiques pouvant perturber llimination.
Il est possible de distinguer deux groupes de compartiments: 1) le systme dchange rapide
dans lequel la concentration tissulaire du toxique est semblable celle du sang; 2) le systme
dchange lent, o cette concentration est plus leve que dans le sang en raison dune liaison
et dune accumulation, au niveau du tissu adipeux, du squelette et des reins, ce qui se traduit
par une rtention temporaire de certains toxiques, larsenic et le zinc, par exemple.
Un toxique peut tre limin simultanment par deux ou plusieurs voies dexcrtion.
Cependant, une voie est gnralement prdominante.
Les scientifiques ont mis au point des modles mathmatiques dcrivant lexcrtion dun
toxique donn. Ces modles sont bass sur la mobilisation partir dun ou de deux
compartiments (systmes dchange), sur la biotransformation, etc.
Llimination par lair exhal
Llimination par les poumons (dsorption) est caractristique des toxiques ayant une forte
volatilit (solvants organiques, par exemple). Les gaz et les vapeurs de faible solubilit dans le
sang seront facilement limins par cette voie, les toxiques de forte solubilit dans le sang
ltant par dautres voies.
Les solvants organiques absorbs par le tractus gastro-intestinal ou la peau sont partiellement
limins par lair inhal chaque passage du sang travers les poumons, sils ont une
pression de vapeur suffisante. LAlcootest utilis pour dceler et valuer lalcoolmie des
conducteurs fait appel cette proprit. La concentration en oxyde de carbone dans lair

exhal est en quilibre avec la teneur du sang en carboxyhmoglobine. Le radon, gaz


radioactif, apparat dans lair exhal la suite de la baisse du radium accumul dans le
squelette.
Llimination dun toxique par lair exhal en fonction de la priode postrieure lexposition
est gnralement exprime par une courbe triphasique. La premire phase correspond
llimination du toxique du sang, demi-vie courte. La seconde phase, plus lente, reprsente
llimination par change sanguin avec les tissus et les organes (systme dchange rapide).
La troisime phase, trs lente, est due lchange du sang avec les tissus adipeux et le
squelette. Si le toxique nest pas accumul dans ces derniers compartiments, la courbe sera
biphasique. Dans certains cas, on peut aussi obtenir une courbe quatre phases.
Pour tablir lexposition des travailleurs, on procde parfois au dosage des gaz et des vapeurs
dans lair exhal au cours de la priode suivant lexposition.
Lexcrtion rnale
Le rein est un organe spcialis dans lexcrtion de nombreux toxiques et mtabolites
hydrosolubles, permettant de maintenir lhomostasie de lorganisme. Chaque rein possde
environ un million de nphrons capables dassurer cette excrtion. Lexcrtion rnale est un
mcanisme trs complexe comprenant trois processus:
la filtration glomrulaire au niveau de la capsule de Bowman;
le transport actif au niveau du tube proximal;
le transport passif au niveau du tube distal.
Lexcrtion dun toxique par la voie urinaire dpend du coefficient de partage de Nernst, de la
constante de dissociation et du pH urinaire, de la taille et de la forme de la molcule, de sa
transformation en mtabolites plus hydrophiles et de ltat de la fonction rnale.
La cintique de lexcrtion rnale dun toxique et de ses mtabolites peut tre schmatise par
une courbe deux, trois ou quatre phases, selon la distribution du toxique dans les divers
compartiments corporels en fonction de la vitesse dchange avec le sang.
La salive
Certains mdicaments et ions mtalliques peuvent tre excrts par la salive, par exemple, le
plomb (lisr de Burton), le mercure, larsenic, le cuivre, de mme que les bromures et les
iodures, lalcool thylique, les alcalodes, etc. Les toxiques sont ensuite ingrs pour atteindre
le tractus gastro-intestinal, o ils peuvent tre rabsorbs ou limins par les fces.
La sueur
De nombreux produits non ioniss peuvent tre partiellement limins par la sueur: alcool
thylique, actone, phnols, sulfure de carbone et hydrocarbures chlors.
Le lait
De nombreux mtaux, solvants organiques et certains pesticides organochlors (DDT) sont
excrts dans le lait maternel. Cette excrtion lacte peut reprsenter un danger pour les
enfants lors de lallaitement.
Les cheveux
Lanalyse des cheveux peut tre utilise comme indicateur de lhomostasie pour diverses
substances physiologiques. On peut valuer par ce moyen lexposition certains toxiques, les
mtaux lourds en particulier.
Llimination des toxiques peut tre acclre par:
la translocation mcanique par lavage gastrique, transfusion sanguine ou dialyse;
la cration de conditions physiologiques mobilisant les toxiques par un rgime, un
changement dans lquilibre hormonal ou lamlioration de la fonction rnale par
administration de diurtiques;

ladministration dagents complexants (citrates, oxalates, salicylates, phosphates) ou


dagents chlateurs (Ca-EDTA, BAL, ATA, DMSA, pnicillamine); cette mthode est
uniquement indique dans le cas des personnes soumises un contrle mdical strict.
Les agents chlateurs sont souvent administrs aux travailleurs exposs des mtaux
lourds pour leur permettre de les liminer de leur organisme. On les emploie aussi
pour valuer la charge corporelle totale et les expositions antrieures.
Lvaluation de lexposition
Le dosage des toxiques et des mtabolites dans le sang, lair exhal, lurine, la sueur, les fces
et les cheveux est de plus en plus utilis pour valuer lexposition humaine (tests
dexposition) ou le degr dintoxication. Cest ainsi que des limites biologiques dexposition
(concentrations maximales admissibles (MAC)) et des indices biologiques dexposition
(Biological Exposure Indices (BEI)) ont t tablis rcemment. Ces dosages biologiques
permettent dvaluer lexposition interne de lorganisme, cest--dire lexposition totale du
corps la fois dans lenvironnement gnral et dans le milieu de travail, quelles que soient les
voies de pntration (voir larticle Les indicateurs biologiques).
Les effets combins en cas dexpositions multiples
Les individus sont exposs dordinaire, sur leur lieu de travail comme dans lenvironnement
gnral, plusieurs agents physiques et chimiques de faon simultane ou conscutive. En
outre, certaines personnes prennent des mdicaments, fument, consomment de lalcool et de la
nourriture contenant des additifs, etc., autant de facteurs lorigine eux aussi dexpositions
multiples. Les agents physiques et chimiques peuvent interagir chaque tape des processus
toxicocintiques ou toxicodynamiques, entranant trois effets possibles:
1. Indpendant. Chaque agent produit un effet distinct en raison dune diffrence dans le
mcanisme daction.
2. Synergique. Leffet combin est suprieur celui de chacun des agents pris isolment.
On distingue alors deux types deffets: a) additif, lorsque leffet combin est gal la
somme des effets induits par chaque agent pris isolment; b) potentialis, quand leffet
combin est suprieur la simple addition des effets individuels.
3. Antagoniste. Leffet combin est infrieur celui qui est induit par addition des effets
individuels.
Les tudes concernant les effets combins sont rares. Elles sont en effet trs complexes en
raison des nombreux facteurs et agents prendre en compte.
En cas dexposition deux ou plusieurs toxiques de manire simultane ou conscutive, il
convient donc denvisager la possibilit que certains effets puissent se conjuguer et entraner
soit une augmentation, soit une diminution des processus toxicocintiques.
LORGANE CIBLE ET LES EFFETS CRITIQUES
Marek Jakubowski
La toxicologie professionnelle et environnementale a pour principal objectif damliorer la
prvention des risques dus lexposition des agents nocifs, dans lenvironnement gnral ou
professionnel, ou de limiter de faon notoire leurs effets sur la sant. Des systmes ont t mis
au point qui permettent dvaluer de manire quantitative le risque li une exposition
donne (voir larticle La toxicologie et les rglementations en matire de scurit et de
sant).
Les effets dun produit chimique sur un systme ou organe donn sont lis lintensit et au
type dexposition: aigu ou chronique. Etant donn la diversit des effets toxiques pouvant
survenir dans un systme ou organe, on a adopt vis--vis des organes et des effets critiques
une dmarche gnrale qui permet dvaluer le risque et dtablir des limites de concentration
vise sanitaire pour les substances toxiques prsentes dans lenvironnement.

Du point de vue de la mdecine prventive, il est trs important didentifier les effets nocifs
prcoces, pour pouvoir prvenir ou limiter lapparition de consquences pour la sant plus
graves encore.
Cest lapproche qui a t choisie pour les mtaux lourds. Ces mtaux, comme le cadmium, le
mercure et le plomb, appartiennent un groupe particulier de substances dont la toxicit
chronique sexerce par accumulation dans les organes. Un groupe de travail spcialis dans la
toxicit des mtaux (Nordberg, 1976) a adopt cet gard les dfinitions ci-dessous.
La dfinition de lorgane critique propose par ce groupe de travail a t adopte avec une
lgre modification, le terme mtal ayant t remplac par lexpression substance
potentiellement toxique (Duffus, 1993).
Lorsquon dcide de considrer quun organe ou un systme donn est critique, on tient
compte non seulement du mcanisme toxique du produit dangereux, mais galement de la
voie dabsorption et de la population expose.
la concentration cellulaire critique est la concentration laquelle des lsions
fonctionnelles, rversibles ou non, surviennent au niveau cellulaire;
la concentration critique dans lorgane est la concentration moyenne dans lorgane au
moment o les cellules les plus sensibles de cet organe atteignent la concentration
critique;
lorgane critique est lorgane o la concentration critique en mtal est atteinte en
premier lieu dans des conditions dexposition et pour une population donnes;
leffet critique est le point prcis reliant la dose et leffet chez un individu ou, plus
prcisment, le point auquel un dysfonctionnement cellulaire survient au niveau de
lorgane critique. A une exposition infrieure celle entranant une concentration
critique de mtal dans lorgane critique, certains effets dcelables par des tests,
biochimiques en particulier, peuvent se produire sans lser le fonctionnement
cellulaire. De tels effets sont appels effets sous-critiques.
Du point de vue biologique, on ne connat pas toujours la signification de leffet sous-critique;
il peut servir dindice biologique dexposition, dindice dadaptation ou deffet critique
prcurseur (voir larticle Les indicateurs biologiques). Cette dernire possibilit peut avoir
un intrt prophylactique particulier.
Le tableau 33.1 donne des exemples dorganes et deffets critiques pour diffrents produits
chimiques. Lors de lexposition chronique au cadmium dorigine environnementale, o la
voie dabsorption est dune importance secondaire (les concentrations de cadmium dans lair
vont de 10 20 g/m3 en zone urbaine et de 1 2 g/m3 en zone rurale), lorgane critique est
le rein. Dans une entreprise o la valeur limite dexposition est de 50 g/m3, linhalation
reprsente la principale voie dexposition, les deux organes considrs comme critiques tant
le poumon et le rein.
Tableau 33.1 Exemples d'organes et d'effets critiques
Substance
Organe critique lors dune Effet critique
exposition chronique
Cadmium

Poumons

Sans seuil:
Cancer pulmonaire (risque unitaire 4,6 103)

Reins

Seuil:
Excrtion urinaire accrue de protines de
faible poids molculaire (2M, RBP)

Poumons

Modifications fonctionnelles bnignes,

emphysme
Plomb

Adultes
Systme hmatopotique

Excrtion accrue dacide -aminolvulinique


urinaire (ALA-U); augmentation de la
concentration en protoporphyrine libre
rythrocytaire (PLE)

Systme nerveux priphrique Ralentissement des vitesses de conduction des


fibres nerveuses les plus lentes
Mercure
(lmentaire)

Jeunes enfants
Systme nerveux central

Diminution du QI et autres effets discrets;


tremblement mercuriel (doigts, lvres,
paupires)

Mercure
(mercurique)

Reins

Protinurie

Manganse

Adultes
Systme nerveux central

Altration des fonctions psychomotrices

Tolune

Enfants
Poumons

Symptmes respiratoires

Systme nerveux central

Altration des fonctions psychomotrices

Muqueuses

Irritation

Chlorure de vinyle Foie

Cancer (angiosarcome, risque unitaire 1 10


6
)

Actate dthyle

Irritation

Muqueuses

Avec le plomb, les organes critiques chez ladulte sont le systme hmatopotique et le
systme nerveux priphrique, o les effets critiques (augmentation de la concentration en
protoporphyrine rythrocytaire libre (PEL), augmentation de lexcrtion urinaire en acide
delta-aminolvulinique, ou troubles de la conduction nerveuse priphrique) apparaissent
lorsque le taux de plombmie (indice dabsorption systmique du plomb) avoisine
200 300g/l. Chez le jeune enfant, o lorgane critique est le systme nerveux central
(SNC), des symptmes de dysfonctionnement, mis en vidence laide de tests
psychologiques, apparaissent dans les populations tudies des concentrations de lordre de
100 g/l de plombmie.
Dautres dfinitions permettent de mieux expliciter la notion deffet critique. Selon lOMS
(1989), leffet critique correspond au premier effet nocif apparaissant lorsque le seuil
(critique) de concentration ou de dose est atteint dans lorgane critique. Des effets nocifs
comme le cancer, pour lequel aucune concentration seuil nest dfinie, sont souvent
considrs comme critiques. La dcision de juger si un effet est critique ou non est affaire de
spcialiste. Dans les lignes directrices du Programme international sur la scurit des
substances chimiques (PISSC) concernant ltablissement des documents appels
Environmental Health Criteria Documents, on dfinit leffet critique comme tant leffet nocif
jug le plus appropri pour dterminer la dose admissible. Cette dfinition a t formule dans
le but dvaluer les limites dexposition compatibles avec la sant dans lenvironnement
gnral. Lessentiel parat donc dtablir quel effet doit tre considr comme nocif. Selon la
terminologie actuelle, leffet nocif est la modification de morphologie, physiologie,
croissance, dveloppement ou dure de vie dun organisme rsultant dune moindre capacit

compenser un stress additionnel ou dune augmentation de la sensibilit aux effets nocifs


dorigine environnementale. Seul un expert est en mesure de juger si un effet est nocif ou non.
La figure 33.1 montre les courbes dose-rponse hypothtiques correspondant divers effets.
Lors dune exposition au plomb, A reprsente un effet sous-critique (inhibition de lALAdshydratase rythrocytaire), B leffet critique (augmentation de la protoporphyrine zinc
rythrocytaire ou de lexcrtion de lacide -aminolvulinique), C leffet clinique (anmie) et
D lissue fatale (dcs). La dpendance existant entre les effets lis lexposition et la
plombmie (tmoin de la dose) sont vidents dans lintoxication saturnine, aussi bien sous
langle de la relation dose-rponse que pour les diffrentes variables (sexe, ge, etc.).
Ltablissement des effets critiques et de la relation dose-rponse pour ces effets chez
lhumain permet de prvoir la frquence dun effet dtermin pour une dose donne ou sa
contrepartie (concentration dans le milieu biologique) dans une population donne.
Figure 33.1 Courbes dose-r&eacuteponse hypothtiques reprsentatives d'effets divers
Les effets critiques peuvent tre de deux types: ceux qui ont un seuil et ceux pour lesquels il
existe un risque, quel que soit le niveau dexposition (absence de seuil pour les cancrognes
gnotoxiques et les mutagnes au niveau des cellules germinales). Chaque fois que possible,
on doit valuer le risque partir de donnes humaines appropries. Pour tablir les seuils
appliquer lensemble dune population, des estimations du niveau dexposition (dose
admissible, indices biologiques dexposition) doivent tre faites, de sorte que la frquence de
leffet critique dans la population expose un toxique donn corresponde la frquence de
cet effet dans la population gnrale. Lors de lexposition au plomb, la valeur maximale
recommande pour la plombmie dans la population gnrale (200 g/l, mdiane infrieure
100 g/l) (OMS, 1987) est pratiquement infrieure la valeur seuil pour leffet critique
suppos augmentation du taux de protoporphyrine rythrocytaire libre mais cette valeur
est suprieure celle responsable des effets sur le SNC chez lenfant ou sur la pression
sanguine chez ladulte. De faon gnrale, si des donnes obtenues partir dtudes bien
conduites sur une population humaine permettent de dfinir un niveau pour lequel aucun effet
nocif nest observ et constituent une base dvaluation de la scurit, on considre quil
convient dappliquer un facteur dincertitude de dix. En cas dexposition professionnelle, les
effets critiques peuvent se rfrer ceux observs dans une certaine proportion de la
population (par exemple, 10%). Ainsi, lors dune exposition saturnine en milieu de travail, le
niveau de plombmie admissible vise sanitaire recommand chez les hommes a t fix
400 mg/l, en partant du principe que, pour une plombmie de lordre de 300 400 mg/l, on
observe une excrtion de 5 mg/l dALA-U chez 10% dentre eux. Sagissant de lexposition
professionnelle au cadmium (en admettant que laugmentation de lexcrtion urinaire de
protines de faible poids molculaire constitue leffet critique), on a fix 200 ppm la valeur
admissible pour ce mtal dans le cortex rnal, car cet effet critique est observ chez 10% de la
population expose. Cependant, en 1996, de nombreux pays envisageaient dabaisser ces
valeurs.
Les avis divergent quant la mthode suivre pour valuer le risque de produits chimiques
pour lesquels leffet critique na pas de seuil, comme les cancrognes gnotoxiques. Des
approches bases essentiellement sur la mise en vidence dune relation dose-rponse ont t
adoptes pour valuer de tels effets. Du fait de labsence de consensus sociopolitique en ce
qui concerne le risque cancrogne dans des documents tels que les Directives pour la qualit
de lair en Europe (OMS, 1987), seules les valeurs du type risque unitaire rapport la dure
de vie (cest--dire le risque associ lexposition durant toute la vie 1 g/m3 de produit
dangereux) sont proposes pour les effets sans seuil (voir larticle La toxicologie et les
rglementations en matire de scurit et sant).

Actuellement, ltape essentielle de lvaluation dun risque est la dtermination de lorgane


et de leffet critiques. Les dfinitions de leffet critique comme de leffet nocif tmoignent du
choix de leffet considrer comme critique dans un organe ou un systme donn, choix qui
est ensuite directement li la dtermination rsultante de valeurs recommandes pour un
produit chimique dans lenvironnement gnral, par exemple, dans les Directives pour la
qualit de lair en Europe (OMS, 1987) ou celle de limites vise sanitaire applicables aux
expositions professionnelles (OMS, 1980). Il peut arriver en pratique quil soit impossible de
dire quel est leffet critique partir dune gamme deffets sous-critiques et que les limites
recommandes de concentrations pour des produits chimiques toxiques dans lenvironnement
gnral ou professionnel soient impossibles respecter. Le fait, par exemple de considrer
comme critique un effet susceptible dinclure des effets cliniques prcoces peut conduire
adopter des valeurs auxquelles des effets nocifs peuvent survenir dans une partie de la
population. Dcider si oui ou non un effet donn doit tre considr comme critique relve de
la responsabilit de groupes dexperts spcialiss en toxicologie et en valuation du risque.
LES EFFETS DE LGE, DU SEXE ET DAUTRES FACTEURS
Spomenka Teliman
On observe souvent des diffrences importantes dans la manire dont les individus ragissent
aux produits chimiques toxiques et parfois dans la faon dont un mme individu y ragit aux
diffrentes priodes de sa vie. Ces variations peuvent tre attribues un grand nombre de
facteurs susceptibles davoir une influence sur le taux dabsorption, la distribution dans
lorganisme et le taux de biotransformation ou dexcrtion dun produit chimique donn.
Hormis les facteurs hrditaires qui sont connus pour avoir un lien vident avec la sensibilit
aux toxiques chimiques chez lhumain (voir larticle Les dterminants gntiques de la
rponse toxique), dautres facteurs interviennent aussi parmi lesquels il faut citer lge et le
sexe; un tat pathologique prexistant ou la rduction fonctionnelle dun organe (acquise); les
habitudes alimentaires, le tabagisme, la consommation dalcool et de mdicaments;
lexposition concomitante des toxines biologiques (micro-organismes) et des facteurs
physiques (rayonnements, humidit, tempratures trs basses ou trs leves ou pressions
baromtriques ayant une influence particulire sur la pression partielle dun gaz), de mme
que lexercice physique ou le stress psychologique et, enfin, lexposition pralable
professionnelle ou environnementale un produit chimique particulier, notamment
lexposition simultane dautres produits chimiques non ncessairement toxiques (mtaux
essentiels, par exemple). La contribution possible de ces facteurs la potentialisation ou la
diminution de la sensibilit aux effets nocifs, de mme que les mcanismes daction, varient
selon le produit concern. Par consquent, seuls les facteurs les plus courants, les mcanismes
de base et quelques exemples caractristiques seront prsents ici, les informations
spcifiques un produit chimique particulier figurant dans une autre partie de la prsente
Encyclopdie.
Selon ltape laquelle ces facteurs interviennent (absorption, distribution, biotransformation
ou excrtion dun produit chimique particulier), on peut classer de faon schmatique les
mcanismes en fonction de deux types dinteraction essentiels: 1) une modification de la
quantit de produit chimique au niveau de lorgane cible, cest--dire au niveau de son (ses)
site(s) deffet dans lorganisme (interactions toxicocintiques); 2) une modification de
lintensit de la rponse spcifique au produit chimique au niveau de lorgane cible
(interactions toxicodynamiques). Les mcanismes les plus courants, quel que soit le type
dinteraction, sont dus la concurrence que se livrent les produits chimiques pour se lier au
mme constituant participant leur transport dans lorganisme (protines sriques spcifiques,
par exemple) ou pour suivre la mme voie de biotransformation (enzymes spcifiques, par
exemple) aboutissant une modification de la vitesse ou de la squence entre la raction
initiale et leffet nocif final. Cependant, des interactions la fois toxicocintiques et

toxicodynamiques peuvent avoir une incidence sur la sensibilit individuelle un produit


chimique particulier. Linfluence de plusieurs facteurs concomitants peut aboutir : a) des
effets additifs lintensit de leffet combin est gale la somme des effets produits par
chaque facteur sparment; b) des effets synergiques lintensit de leffet combin est
suprieure la somme des effets produits par chaque facteur sparment; c) des effets
antagonistes lintensit de leffet combin est infrieure la somme des effets produits par
chaque facteur sparment.
La quantit dun toxique ou dun mtabolite au niveau du site daction dans lorganisme peut
tre value approximativement par la surveillance biologique, qui consiste, par le choix du
spcimen biologique adquat et le moment optimal du prlvement des chantillons, prendre
en compte les demi-vies biologiques dun produit chimique donn la fois dans lorgane
critique et dans le compartiment biologique valu. De faon gnrale, on manque toutefois
dinformations fiables concernant les autres facteurs pouvant avoir une influence sur la
sensibilit individuelle chez lhumain et, par consquent, la majorit de nos connaissances
repose sur des donnes exprimentales animales.
Il faut souligner qu niveau et dure dexposition quivalents, ltre humain et les autres
mammifres ragissent parfois de manire trs diffrente de nombreux toxiques; ainsi,
lhumain parat beaucoup plus sensible aux effets nocifs de plusieurs mtaux toxiques que le
rat (employ de faon courante dans les tudes exprimentales animales). Certaines de ces
diffrences peuvent tre attribues au fait que les voies de transport, de distribution et de
biotransformation de nombreux toxiques sont troitement tributaires de variations minimes du
pH tissulaire et de lquilibre redox dans lorganisme (de la mme manire que certaines
activits enzymatiques). Ces disparits sexpliquent aussi par le fait que le systme redox de
ltre humain est trs diffrent de celui du rat.
Ces diffrences apparaissent clairement pour des antioxydants importants comme la vitamine
C et le glutathion (GSH), essentiels au maintien de lquilibre redox et qui, par leur rle
protecteur vis--vis des effets nocifs des radicaux libres drivs de loxygne ou gnrs par
des xnobiotiques, interviennent dans de nombreux tats pathologiques (Kehrer, 1993).
Contrairement au rat, ltre humain ne peut synthtiser la vitamine C et la teneur, de mme
que le taux de renouvellement du GSH rythrocytaire, sont beaucoup plus faibles chez celuici. Il prsente aussi un dficit de certaines enzymes antioxydantes protectrices par rapport au
rat et aux autres mammifres; (ainsi, la GSH-peroxydase est peu active dans le sperme
humain). Ces exemples montrent bien que lhumain est beaucoup plus sensible au stress
oxydatif (surtout dans les cellules sensibles, comme en tmoigne la plus grande vulnrabilit
du sperme humain aux toxiques, toujours par rapport au rat) et quil ragit de manire
diffrente divers facteurs auxquels il est dailleurs plus vulnrable que les autres
mammifres (Teliman, 1995).
Linfluence de lge
Compars aux adultes, les trs jeunes enfants sont souvent plus sensibles la toxicit des
substances chimiques en raison de leur volume dinhalation relativement plus important, de
leur taux dabsorption gastro-intestinale plus lev du fait dune plus grande permabilit de
leur pithlium intestinal, en raison aussi de limmaturit de leurs systmes de dtoxication et
dun taux dexcrtion de produits chimiques relativement plus faible que chez ladulte. Au
dbut de son dveloppement, le systme nerveux central semble particulirement sensible la
neurotoxicit de produits chimiques comme le plomb et le mthylmercure. Les sujets gs,
pour leur part, peuvent avoir t sensibiliss par des expositions antrieures responsables du
stockage corporel de certains xnobiotiques ou dune insuffisance fonctionnelle dorganes
cibles ou dactivits enzymatiques, qui aboutissent une altration des processus de
dtoxication et dexcrtion. Chacun de ces facteurs peut contribuer laffaiblissement des
dfenses de lorganisme et une diminution de ses rserves, expliquant une sensibilit accrue

lexposition ultrieure dautres risques. Par exemple, les enzymes du cytochrome P450
(intervenant dans la biotransformation de la plupart des produits chimiques toxiques) peuvent
tre induites ou inhibes sous linfluence dun certain nombre de facteurs tout au long de la
vie (dont les habitudes alimentaires, le tabagisme, lalcool, la consommation de mdicaments
et lexposition des xnobiotiques environnementaux).
Linfluence du sexe
Des diffrences de sensibilit lies au sexe ont t dcrites pour un grand nombre de produits
chimiques toxiques (environ 200), diffrences qui se retrouvent dans de nombreuses espces
de mammifres. Les mles sont gnralement plus sensibles aux substances nphrotoxiques et
les femelles aux substances hpatotoxiques. Cette diffrence entre mles et femelles est non
seulement lie lexistence de disparits physiologiques (par exemple, les femelles liminent
davantage certains toxiques par voie menstruelle, par le lait maternel ou par transfert au ftus;
toutefois, elles sont soumises un stress supplmentaire lors de la gestation, de la parturition
et de la lactation), mais elle est due aussi des disparits dans les activits enzymatiques, les
mcanismes de rparation gntique, les facteurs hormonaux, ou encore la prsence chez les
femelles de rserves lipidiques plus importantes, rserves responsables dune plus grande
accumulation de toxiques lipophiles, tels que les solvants organiques et certains mdicaments.
Linfluence des habitudes alimentaires
Les habitudes alimentaires ont une influence importante sur la sensibilit aux toxiques, un tat
nutritionnel satisfaisant tant essentiel au bon fonctionnement des systmes de dfense de
lorganisme vis--vis de ces substances. Un apport quilibr en oligolments (y compris les
mtallodes) et en protines, en particulier les acides amins soufrs, assure la biosynthse des
enzymes dtoxifiantes et la fourniture de glycine et de glutathion indispensable aux ractions
de conjugaison avec les composs endognes et exognes. Les lipides, en particulier les
phospholipides, et les lipotropes (donneurs de groupements mthyles) sont ncessaires la
synthse des membranes biologiques. Les glucides apportent lnergie quexigent les
processus de dtoxification et fournissent lacide glucuronique pour la conjugaison des
toxiques et de leurs mtabolites. Le slnium (mtallode essentiel), le glutathion et les
vitamines telles que la vitamine C (hydrosoluble), la vitamine E et la vitamine A
(liposolubles), assument le rle important dantioxydants (contrle de la lipidoperoxydation et
maintien de lintgrit des membranes cellulaires) et de pigeurs de radicaux libres produits
par certains toxiques. De plus, certains constituants alimentaires (protines, fibres, minraux,
phosphates, acide citrique, etc.), de mme que le volume alimentaire, peuvent avoir des
rpercussions non ngligeables sur labsorption gastro-intestinale de nombreux toxiques
(ainsi, labsorption moyenne des sels solubles de plomb consomms avec lalimentation est
denviron 8%, alors quelle est de 60% chez le sujet jeun). Par ailleurs, le rgime alimentaire
peut tre galement une source dexposition individuelle supplmentaire divers toxiques (on
constate, par exemple, chez les sujets consommant des fruits de mer contamins, une
augmentation considrable des apports journaliers en arsenic, mercure, cadmium ou plomb
responsables dune accumulation).
Linfluence du tabagisme
Le tabagisme peut avoir une incidence sur la sensibilit de nombreux toxiques en raison des
interactions dues aux multiples composants prsents dans la fume de cigarette (en particulier
hydrocarbures polycycliques aromatiques, monoxyde de carbone, benzne, nicotine,
acroline, certains pesticides, cadmium, et, dans une moindre mesure, plomb et autres mtaux
toxiques, etc.). Certains dentre eux peuvent saccumuler dans lorganisme tout au long de la
vie, y compris durant la priode prnatale (plomb et cadmium, par exemple). Les interactions
ont lieu surtout au niveau du transport et de la distribution et celui de la biotransformation
cause respectivement de la concurrence vis--vis des sites de liaison et vis--vis des enzymes
qui interviennent. Ainsi, certains constituants de la fume de cigarette peuvent induire les

enzymes du cytochrome P450, alors que dautres peuvent les inhiber, do une perturbation
des mcanismes de biotransformation utiliss par de nombreux autres toxiques, comme les
solvants organiques et certains mdicaments. Une consommation importante de cigarettes sur
une priode prolonge peut donc affaiblir considrablement les mcanismes de dfense de
lorganisme en diminuant les rserves ncessaires pour faire face aux effets nocifs des autres
facteurs du mode de vie.
Linfluence de lalcool
La consommation dalcool (thylique) influence de diverses manires la sensibilit de
nombreux toxiques. Elle a une incidence sur labsorption et la distribution de certains produits
chimiques dans lorganisme (augmentation de labsorption gastro-intestinale du plomb, ou
encore diminution de labsorption pulmonaire du mercure inhal ltat de vapeur en inhibant
son oxydation ncessaire sa rtention). Lthanol peut galement conditionner la sensibilit
divers produits chimiques en modifiant court terme le pH tissulaire et en faisant augmenter
le potentiel redox, par son mtabolisme: loxydation de lthanol en actaldhyde, puis en
actate, produit en effet des formes rduites de nicotinamide adnine dinuclotide (NADH) et
de lhydrogne (H+). Etant donn que laffinit de liaison tissulaire des mtaux essentiels ou
toxiques et des mtallodes dpend du pH et des modifications de potentiel redox (Teliman,
1995), un apport mme modr dthanol peut avoir de multiples consquences: 1)
redistribution du plomb accumul depuis longtemps dans lorganisme sous une forme inactive
vers une forme active biologiquement; 2) remplacement du zinc essentiel par du plomb au
niveau des enzymes contenant du zinc, modifiant ainsi lactivit enzymatique, ou influence du
plomb mobilis sur la distribution dautres mtaux et mtallodes essentiels pour lorganisme
tels que le calcium, le cuivre, le fer ou le slnium; 3) augmentation de lexcrtion urinaire du
zinc, etc. Ces effets peuvent aussi tre accentus en raison de la quantit apprciable de plomb
que les boissons alcoolises peuvent renfermer cause des contenants dans lesquels ils sont
conservs ou du procd de fabrication employ (Prpi-Maji et coll., 1984; Teliman et coll.,
1984, 1993).
Autre raison courante des modifications de sensibilit lies lthanol: le fait que de
nombreux toxiques, des solvants organiques, par exemple, utilisent une voie de
biotransformation faisant intervenir les mmes enzymes du cytochrome P450. Selon
lintensit de lexposition aux solvants organiques, la quantit et la frquence de lingestion
alcoolique (consommation aigu ou chronique), lthanol peut soit ralentir, soit acclrer les
vitesses de biotransformation des divers solvants organiques et modifier ainsi leur toxicit
(Sato, 1991).
Linfluence des mdicaments
La consommation de mdicaments peut elle aussi avoir une influence sur la sensibilit aux
toxiques. Un bon nombre dentre eux, en se liant en effet aux protines sriques, dterminent
les conditions du transport, de la distribution ou de lexcrtion de substances toxiques, et
peuvent induire ou inhiber les enzymes dtoxifiantes (enzymes du cytochrome P450,
notamment), modifiant ainsi la toxicit des produits chimiques qui utilisent la mme voie de
biotransformation. Laugmentation de lexcrtion urinaire de lacide trichloroactique
(mtabolite de plusieurs hydrocarbures chlors) aprs consommation de salicyls, de
sulfamides ou de phnylbutazone, ou laugmentation de lhpato-nphrotoxicit du
ttrachlorure de carbone aprs consommation de phnobarbital, sont caractristiques de
chacun de ces mcanismes. De plus, certains mdicaments contiennent des produits chimiques
potentiellement toxiques en quantit apprciable. Ainsi, les antiacides ou les prparations
utilises pour le traitement thrapeutique de lhyperphosphatmie survenant lors dune
insuffisance rnale chronique renferment de laluminium.
Linfluence de lexposition simultane dautres produits chimiques

Les modifications de la sensibilit conscutives aux interactions entre plusieurs produits


chimiques (effets additifs, synergiques ou antagonistes possibles) ont surtout t tudies chez
lanimal, en particulier chez le rat. On ne dispose pas dtudes pidmiologiques ou cliniques
srieuses sur la question. Cette constatation nest pas sans consquence quand on sait que les
produits toxiques provoquent des rponses plus intenses et des effets nocifs plus divers chez
ltre humain que chez le rat et les autres mammifres. La plupart des donnes dont on
dispose, en dehors de celles publies dans le domaine pharmacologique, concernent
uniquement lassociation de deux produits chimiques diffrents appartenant des groupes de
substances spcifiques, par exemple des pesticides, des solvants organiques, ou des mtaux et
mtallodes essentiels ou toxiques.
Lexposition combine des solvants organiques peut provoquer des effets additifs,
synergiques ou antagonistes (en fonction des associations de solvants organiques, de
lintensit et de la dure de lexposition) dus essentiellement leurs influences rciproques
sur les processus de biotransformation (Sato, 1991).
Autre exemple caractristique: les interactions des mtaux et mtallodes essentiels avec les
agents toxiques, car elles peuvent varier en fonction de lge (par exemple, accumulation
corporelle tout au long de la vie du plomb et du cadmium dorigine environnementale), du
sexe (manque de fer habituel chez la femme), des habitudes alimentaires (apport alimentaire
excessif en mtaux et mtallodes toxiques, ou apport alimentaire insuffisant en mtaux et
mtallodes essentiels), des habitudes tabagiques et de la consommation dalcool (exposition
au cadmium, au plomb et dautres mtaux toxiques, etc.), et de la consommation de
mdicaments (une seule dose dantiacide pouvant, par exemple, accrotre dun facteur de 50
lapport journalier moyen en aluminium dorigine nutritionnelle). Le tableau 33.2 illustre les
diverses possibilits deffets additifs, synergiques ou antagonistes qui peuvent survenir lors
dune exposition des mtaux et mtallodes chez lhumain. On constate que des interactions
supplmentaires peuvent se produire lorsque des lments essentiels entrent en interaction les
uns avec les autres: il faut signaler ici leffet antagoniste bien connu du cuivre sur labsorption
gastro-intestinale et le mtabolisme du zinc, et vice versa. Le mcanisme essentiel de ces
interactions est la concurrence que se livrent les mtaux et mtallodes pour le mme site de
liaison (surtout le groupement thiol-SH) au niveau de diverses enzymes, des mtalloprotines
(surtout la mtallothionine) et des tissus (membranes cellulaires et barrires entre organes).
Ces interactions peuvent jouer un rle significatif dans le dveloppement de maladies
chroniques par suite de laction des radicaux libres et du stress oxydatif (Teliman, 1995).
Tableau 33.2 Effets importants des nombreuses interactions possibles
Mtal ou mtallode Effets importants de linteraction avec un autre mtal ou mtallode
toxiques
Aluminium (Al)

Fait diminuer labsorption du Ca et en modifie le mtabolisme; un rgime


alimentaire carenc en Ca accrot le taux dabsorption de lAl.
Modifie le mtabolisme des phosphates.
Donnes quivoques sur les interactions avec Fe, Zn et Cu (rle possible
dun autre mtal comme mdiateur).

Arsenic (As)

Affecte la distribution du Cu (augmentation du Cu dans les reins et


diminution dans le foie, le srum et lurine).
Modifie le mtabolisme du Fe (augmentation du Fe dans le foie avec
diminution concomitante de lhmatocrite).
Zn rduit labsorption de lAs inorganique et attnue la toxicit de lAs.
Se fait diminuer la toxicit de lAs et vice versa.

Cadmium (Cd)

Limite labsorption du Ca et en modifie le mtabolisme; un rgime

alimentaire carenc en Ca fait augmenter labsorption du Cd.


Modifie le mtabolisme des phosphates (augmente leur excrtion urinaire).
Modifie le mtabolisme du Fe; un rgime alimentaire carenc en Fe fait
augmenter labsorption du Cd.
Affecte la distribution du Zn; Zn rduit la toxicit du Cd, tandis que son
influence sur labsorption du Cd est quivoque.
Se rduit la toxicit du Cd.
Mn rduit la toxicit du Cd lors dune exposition de faible niveau au Cd.
Donnes quivoques sur les interactions avec Cu (rle possible du Zn, ou
dun autre mtal, comme mdiateur).
Concentrations leves de Pb, Ni, Sr, Mg ou Cr(III) dans les aliments
peuvent faire diminuer labsorption du Cd.
Mercure (Hg)

Affecte la distribution du Cu (augmentation du Cu dans le foie).


Zn rduit labsorption du Hg inorganique et la toxicit du Hg. Se attnue la
toxicit du Hg.
Cd fait augmenter la concentration rnale du Hg, tout en faisant diminuer la
toxicit rnale du Hg (synthse de mtallothionine induite par Cd).

Plomb (Pb)

Modifie le mtabolisme du Ca; un rgime alimentaire carenc en Ca fait


augmenter labsorption du Pb inorganique et la toxicit du Pb. Modifie le
mtabolisme du Fe; un rgime carenc en Fe accrot la toxicit du Pb, tandis
que son influence sur labsorption du Pb est quivoque.
Modifie le mtabolisme du Zn et augmente lexcrtion urinaire du Zn; un
rgime alimentaire carenc en Zn fait augmenter labsorption du Pb
inorganique et la toxicit du Pb.
Se fait diminuer la toxicit du Pb.
Donnes quivoques sur les interactions avec Cu et Mg (rle possible du Zn,
ou dun autre mtal, comme mdiateur).

Note: les donnes sont obtenues principalement partir dtudes exprimentales chez le rat,
les donnes cliniques et pidmiologiques pertinentes (en particulier sur les relations
quantitatives dose-rponse) faisant gnralement dfaut (Elsenhans et coll., 1991;
Fergusson,1990; Teliman et coll., 1993).
LES DTERMINANTS GNTIQUES DE LA RPONSE TOXIQUE
Daniel W. Nebert et Ross A. McKinnon
On sait depuis longtemps que chaque individu ragit diffremment aux produits chimiques
prsents dans lenvironnement. Lexplosion rcente de la biologie molculaire et de la
gntique a favoris une meilleure comprhension des causes molculaires dune telle
variabilit. Les facteurs dterminants de cette rponse individuelle aux produits chimiques
incluent les diffrences importantes existant au niveau dune dizaine de superfamilles
denzymes, baptises enzymes mtabolisant les xnobiotiques (trangers lorganisme) ou
enzymes mtabolisant les mdicaments. Bien quon leur ait longtemps prt un pouvoir
dtoxifiant, on sait maintenant que ces enzymes sont galement capables de transformer de
nombreux composs inertes en intermdiaires fortement toxiques. On a pu identifier
rcemment, au niveau des gnes codant pour ces enzymes, des diffrences lgres ou
importantes, responsables de disparits marques de leur activit enzymatique. Il est
maintenant tabli que chaque individu possde un effectif dactivits enzymatiques
mtabolisant les xnobiotiques qui lui est propre, cette diversit pouvant tre assimile une
empreinte mtabolique. Cest linteraction complexe de ces nombreuses superfamilles
denzymes qui dtermine non seulement le devenir dun produit chimique chez un individu

donn et son potentiel de toxicit, mais galement lvaluation de lexposition. Dans cet
article, nous avons choisi la superfamille des enzymes du cytochrome P450 pour illustrer les
remarquables progrs accomplis dans la comprhension de la rponse individuelle aux
produits chimiques. Le dveloppement de tests ADN relativement simples identifiant les
altrations des gnes spcifiques de ces enzymes permet maintenant de prvoir de faon plus
exacte la rponse individuelle lexposition un produit chimique. On peut esprer que ces
tests conduiront au dveloppement de la toxicologie prventive. Chaque individu pourrait
ainsi connatre les produits chimiques auxquels il serait particulirement sensible, ce qui lui
viterait de sexposer des produits dont on ne souponnait pas auparavant quils aient chez
lui des effets toxiques, voire cancrognes.
Ltre humain est expos tous les jours, bien souvent son insu, une multitude de produits
chimiques. Beaucoup de ces produits extrmement toxiques proviennent de sources trs
diverses, environnementales ou alimentaires. La relation entre ces expositions et la sant
humaine a t, et continue dtre, un des principaux objectifs de la recherche biomdicale
dans le monde.
Les exemples de ce vritable bombardement de produits chimiques ne manquent pas. Plus de
400 agents ont t mis en vidence dans le vin rouge et identifis. La cigarette ne produit pas
moins de 1 000 espces chimiques diffrentes et les produits cosmtiques et savons parfums
renferment un nombre incalculable de produits chimiques. Dans lagriculture, la situation
nest pas diffrente: pour traiter les terres cultives aux Etats-Unis, on utilise tous les ans plus
de 75 000 agents chimiques sous forme de pesticides, dherbicides et dengrais; ces produits
sont capts par les plantes et les herbivores, ou les poissons dans les eaux environnantes,
avant dtre ingrs par ltre humain qui se trouve la fin de la chane alimentaire. Cette liste
ne serait pas complte sans quon y ajoute deux autres sources importantes de produits
chimiques: a) les mdicaments consomms de faon prolonge; b) les substances dangereuses
auxquelles les travailleurs sont exposs au cours de la vie active.
Il est maintenant tabli que lexposition aux produits chimiques peut avoir de nombreux effets
nocifs sur la sant humaine et entraner lapparition de maladies chroniques et de bien des
cancers. Des travaux effectus ces dix dernires annes ont permis de mieux comprendre la
base molculaire de ces relations. Ils ont aussi permis de prendre conscience des diffrences
individuelles de sensibilit aux effets nocifs des produits chimiques.
Les efforts actuels pour prvoir la rponse de lhumain une exposition un produit chimique
associent deux dmarches fondamentales (voir figure 33.2): surveillance de lexposition
humaine laide de marqueurs biologiques (biomarqueurs) et prvision de la raction
probable dun individu un niveau dexposition donn. Ces deux approches, pour importantes
quelles soient, nen sont pas moins trs diffrentes lune de lautre. Le prsent article porte
sur les facteurs gntiques lorigine de la sensibilit individuelle lexposition aux produits
chimiques. Ce champ de recherche porte le nom gnral dcogntique ou de
pharmacogntique (Kalow, 1962, 1992). Si des progrs ont t raliss rcemment dans la
mise en vidence des sensibilits individuelles une toxicit chimique, cest quon comprend
maintenant mieux les mcanismes qui permettent lhumain et aux autres mammifres de
dtoxifier tous ces produits et quon a une meilleure connaissance de la remarquable
complexit des systmes enzymatiques entrant en jeu.
Figure 33.2 Corrlations entre l'valuation de l'exposition, les diffrences ethniques, l'ge,
le rgime, l'alimentation et l'valuation de la prdisposition gntique diffrents facteurs
jouant un rle dans le risque individuel de toxicit ou de cancer

Nous expliquerons dans un premier temps comment les rponses toxiques varient dun tre
humain lautre, avant de prsenter quelques-unes des enzymes responsables dune telle
variabilit, lie des diffrences de mtabolisme des xnobiotiques. Ensuite, nous dresserons
lhistorique et la nomenclature de la superfamille des cytochromes P450 et nous dcrirons
brivement cinq polymorphismes du P450 humain et plusieurs polymorphismes non lis au
P450, responsables de diffrences de rponse toxique chez lhumain. Puis, la lumire dun
exemple, nous montrerons comment les diffrences gntiques individuelles peuvent se
rpercuter sur lexposition tablie par contrle dambiance. En dernier lieu, nous traiterons du
rle des enzymes mtabolisant les xnobiotiques au niveau de fonctions vitales critiques.
La variation de la rponse toxique dans la population humaine
Les toxicologues et les pharmacologues ont coutume de parler de DL50, de DMA50 et de DE50
pour dsigner respectivement, dans le cas dun mdicament donn, la dose ltale, la dose
maximale admissible et la dose efficace dans 50% dune population. On peut se demander ce
que ces doses signifient pour chacun de nous en tant quindividu. Ce quon entend par l,
cest quun individu trs sensible peut tre 500 fois plus affect ou avoir 500 fois plus de
chances dtre affect que le sujet le plus rsistant dune population donne; dans labsolu, les
valeurs de DL50 (et de DMT50 ou de DE50) ne veulent pas dire grand-chose, elles nont un sens
quen rfrence une population.
La figure 33.3 illustre la relation dose-rponse hypothtique observe chez des individus
appartenant une population donne expose un toxique. Ce diagramme gnral pourrait
reprsenter un carcinome bronchique en fonction du nombre de cigarettes fumes, une acn
chlorique par rapport la concentration de dioxine prsente sur le lieu de travail, un asthme en
fonction des concentrations de lair en ozone ou en aldhyde, un rythme solaire par rapport
aux rayons ultraviolets, la diminution du temps de coagulation en fonction de la
consommation daspirine, ou encore la souffrance gastro-intestinale en raction la quantit
de poivre jalapeo consomme. Gnralement, pour chacun de ces cas, plus lexposition est
importante, plus la rponse toxique est intense. La majorit de la population prsentera une
rponse toxique moyenne avec son cart-type en fonction de la dose. Le sujet
hyperrsistant (en bas droite dans la figure 33.3) est celui qui rpond le moins aux
expositions ou aux doses plus leves, le sujet hypersensible (en haut gauche) tant celui
qui rpond de faon excessive une exposition ou une dose relativement faibles. Ces sujets
hors norme, ragissant de manire trs diffrente par rapport la majorit des individus de la
population, reprsentent des variants gntiques importants qui peuvent aider les scientifiques
comprendre les mcanismes molculaires sous-jacents responsables de la rponse toxique.
Figure 33.3 Relation gnrale entre rponse toxique et dose pour tout agent chimique
ou physique prsent dans l'environnement
Grce ces sujets dexception et dans le cadre dtudes familiales, les scientifiques dun
certain nombre de laboratoires ont pris conscience de limportance de lhrdit mendlienne
dans la rponse un toxique donn. Ils ont ensuite pu faire appel la biologie molculaire et
la gntique pour mettre en vidence le mcanisme sous-jacent au niveau gntique
(gnotype) responsable de laffection provoque par lenvironnement (phnotype).
Les enzymes mtabolisant les xnobiotiques ou les mdicaments
Comment lorganisme rpond-il la multitude de produits chimiques exognes auxquels il est
expos? Ltre humain et les autres mammifres ont dvelopp des systmes enzymatiques
trs complexes comportant plus dune dizaine de superfamilles denzymes. Tous les produits
chimiques auxquels lhumain est expos ou presque subissent une modification enzymatique
qui favorise ensuite leur limination en dehors de lorganisme. Ces enzymes sont souvent
appeles de faon globale enzymes mtabolisant les mdicaments ou enzymes mtabolisant

les xnobiotiques. En fait, lun comme lautre de ces termes sont impropres et ce pour deux
raisons. Premirement, un bon nombre de ces enzymes mtabolisent non seulement les
mdicaments, mais aussi des centaines de milliers de produits chimiques prsents dans
lenvironnement et dans les aliments. Deuximement, toutes ces enzymes ont galement
comme substrat des composs endognes normaux et aucune dentre elles ne mtabolise
uniquement des produits chimiques trangers.
Depuis plus de quatre dcennies, les processus mtaboliques ( mdiation enzymatique)
dpendant de ces enzymes sont classs en ractions de phase I ou de phase II (voir figure
33.4). Les ractions de phase I (fonctionnalisation) correspondent gnralement des
modifications structurales assez peu importantes du produit chimique parent par des ractions
doxydation, de rduction ou dhydrolyse permettant lobtention dun mtabolite plus
hydrosoluble. Les ractions de phase I fournissent une cl sans laquelle les modifications
ultrieures du compos par les ractions de phase II ne peuvent pas se faire. Les ractions de
phase I sont principalement gres par une superfamille denzymes hautement polyvalentes,
appeles cytochromes P450, bien que dautres superfamilles denzymes puissent galement
intervenir (voir figure 33.5).
Figure 33.4 Prsentation classique des enzymes de phase I et de phase II du mtabolisme
des mdicaments ou des xnobiotiques
Figure 33.5 Exemples d'enzymes mtabolisant les mdicaments
Les ractions de phase II supposent le couplage dune molcule endogne hydrosoluble un
produit chimique (produit chimique initial ou mtabolite de phase I) afin den faciliter
lexcrtion. On appelle souvent les ractions de phase II ractions de conjugaison ou de
drivation. Les superfamilles enzymatiques catalysant les ractions de phase II sont
habituellement dsignes selon le type de molcule endogne implique dans la raction de
conjugaison: actylation par les N-actyltransfrases, sulfoconjugaison par les
sulfotransfrases, conjugaison du glutathion par les glutathion-transfrases et glucuronidation
par les UDP glucuronosyltransfrases (voir figure 33.5). Le foie est le principal organe du
mtabolisme des xnobiotiques, bien quon trouve aussi certaines enzymes participant leur
mtabolisme un taux assez lev dans le tractus gastro-intestinal, les gonades, le poumon, le
cerveau et les reins, ainsi quen plus ou moins grande quantit dans toute cellule vivante.
Les enzymes mtabolisant les xnobiotiques: une arme double tranchant
Avec le progrs des connaissances sur les processus chimiques et biologiques conduisant
des manifestations pathologiques, on sest peu peu rendu compte que les enzymes
mtabolisant les xnobiotiques ont un mode de fonctionnement ambivalent (voir figure 33.4).
Le plus souvent, les produits chimiques liposolubles sont transforms en mtabolites
hydrosolubles plus faciles excrter. Cependant, il arrive aussi que ces mmes enzymes
transforment des produits chimiques inertes en molcules intermdiaires hautement ractives.
Ces intermdiaires peuvent ragir avec des macromolcules cellulaires telles que les protines
et lADN. Ainsi, pour chaque produit chimique auquel ltre humain est expos, deux voies
comptitives potentielles coexistent, celle de lactivation mtabolique et celle de la
dtoxification.
Une brve revue de gntique
En gntique humaine, chaque gne (locus) est localis sur lune des 23 paires de
chromosomes. Les deux allles (un prsent sur chaque chromosome de la paire) peuvent tre
identiques, mais ils peuvent aussi tre diffrents lun de lautre. Par exemple, les allles B et b,
o B (yeux marron) est dominant par rapport b (yeux bleus): les individus de phnotype

yeux marron peuvent avoir comme gnotype soit BB soit Bb, alors que les individus de
phnotype yeux bleus peuvent seulement avoir le gnotype bb.
Un polymorphisme correspond la prsence de deux ou de plusieurs phnotypes hrditaires
stables (traits) ayant pour origine le(s) mme(s) gne(s) qui se maintiennent dans la
population, souvent pour des raisons peu videntes. Pour quun gne soit polymorphe, il faut
que son produit ne soit pas essentiel au dveloppement, la reproduction ou dautres
processus vitaux critiques. En fait, on a pris lhabitude dexpliquer par ce phnomne de
polymorphisme quilibr, o lhtrozygote a un avantage net de survie sur lhomozygote
(par exemple, rsistance la malaria et allle de lhmoglobine drpanocytaire), la prsence
dans la population dun allle dont la frquence leve serait autrement inexplicable
(Gonzalez et Nebert, 1990).
Les polymorphismes humains des enzymes mtabolisant les xnobiotiques
Les diffrences gntiques du mtabolisme des mdicaments et produits chimiques
environnementaux sont connues depuis plus dune quarantaine dannes (Kalow, 1962, 1992).
Ces diffrences sont souvent appeles polymorphismes pharmacogntiques ou, de faon plus
gnrale, cogntiques. Ces polymorphismes reprsentent des allles variants survenant
des frquences relativement leves dans la population et gnralement associs des
aberrations dexpression ou de fonction enzymatique. Par le pass, les polymorphismes ont
bien souvent t mis en vidence la suite de rponses inattendues des agents
thrapeutiques. Plus rcemment, la technologie de lADN recombinant a permis aux
scientifiques didentifier les altrations gntiques prcises responsables de certains
polymorphismes. Ces polymorphismes sont maintenant caractriss pour de nombreuses
enzymes du mtabolisme des xnobiotiques, y compris celles de phase I et de phase II. Au fur
et mesure quon dcouvre de nouveaux polymorphismes, on saperoit que chaque individu
possde un effectif distinct denzymes mtabolisant les xnobiotiques. On peut dire de cette
diversit quelle constitue son empreinte mtabolique et que la rponse particulire de
chaque individu un produit chimique dpend de linteraction complexe des superfamilles
denzymes responsables du mtabolisme des xnobiotiques (Kalow, 1962, 1992; Nebert,
1988; Gonzalez et Nebert, 1990; Nebert et Weber, 1990).
Lexpression des enzymes humaines mtabolisant les xnobiotiques en culture cellulaire
Comment amliorer la qualit des facteurs de prdiction des rponses humaines aux produits
chimiques toxiques? Les progrs de nos connaissances sur les systmes enzymatiques
intervenant dans le mtabolisme des mdicaments doivent nous permettre de comprendre de
manire prcise quelles sont les enzymes qui dterminent le devenir mtabolique de tout
produit chimique. Les donnes recueillies partir dtudes exprimentales chez les rongeurs
ont certainement fourni cet gard des informations utiles. Cependant, des diffrences
interespces importantes au niveau des enzymes mtabolisant les xnobiotiques appellent la
prudence dans lextrapolation des donnes animales aux populations humaines. Pour pallier
cette difficult, de nombreux laboratoires ont mis au point des systmes qui utilisent diverses
lignes cellulaires en culture produisant des enzymes humaines fonctionnelles, stables et en
forte concentration (Gonzalez, Crespi et Gelboin, 1991). De telles enzymes ont ainsi t
produites partir de bactries, de levures, dinsectes ou de mammifres.
Afin de mieux prciser le mtabolisme des produits chimiques, des systmes
multienzymatiques ont t galement dvelopps avec succs dans une ligne cellulaire
unique (Gonzalez, Crespi et Gelboin, 1991). Ces lignes cellulaires fournissent des
renseignements prcieux sur les enzymes participant la transformation mtabolique dun
compos donn et des mtabolites ventuellement toxiques. Si cette information peut tre
ensuite recoupe avec la prsence et la concentration dune enzyme au niveau des tissus
humains, elle devrait permettre de prvoir une rponse de faon fiable.

Le cytochrome P450
Histoire et nomenclature
La superfamille des cytochromes P450 est lune des superfamilles denzymes du mtabolisme
des mdicaments qui a t le plus tudie, en raison des disparits individuelles importantes
qui caractrisent la rponse aux produits chimiques. Le terme cytochrome P450 est une
dsignation gnrique commode, employe pour dfinir cette grande superfamille denzymes
essentielles au mtabolisme dinnombrables substrats endognes et exognes. Il a t utilis la
premire fois en 1962 pour dcrire un pigment cellulaire inconnu qui, une fois rduit et li au
monoxyde de carbone, a produit un pic dabsorption caractristique 450 nm. Depuis le dbut
des annes quatre-vingt, la technologie du clonage dADNc a permis davoir un remarquable
aperu de la multiplicit des enzymes du cytochrome P450. Actuellement, plus de 400 gnes
distincts du cytochrome P450 ont t identifis chez les animaux, les plantes, les bactries et
les levures. On estime que toute espce de mammifres, lhumain par exemple, possde pas
moins de 60 gnes diffrents de P450 (Nebert et Nelson, 1991). Cette multiplicit a exig la
mise au point dune nomenclature normalise (Nebert et coll., 1987; Nelson et coll., 1993).
Propos pour la premire fois en 1987 et mis jour deux fois par an, ce systme de
nomenclature est bas sur la comparaison des squences damino-acides entre les protines de
cytochrome P450. Les gnes du P450 sont diviss en familles et en sous-familles: les enzymes
lintrieur dune famille et celles lintrieur dune mme sous-famille prsentent
respectivement une similitude en acides amins de plus de 40% et de 55%. Les gnes du P450
sont caractriss par un symbole commun, CYP, suivi dun chiffre arabe dsignant la famille
P450, puis dune lettre spcifiant la sous-famille et dun autre chiffre arabe propre au gne
individuel (Nelson et coll. 1993; Nebert et coll. 1991). Ainsi, CYP1A1 reprsente le gne
P450 1 dans la famille 1, sous-famille A.
En fvrier 1995, la base de donnes du cytochrome P450 comportait 403 gnes CYP, rpartis
en 59 familles et 105 sous-familles. Les familles sont au nombre de 8 pour les eucaryotes
infrieurs, 15 pour les plantes et 19 pour les bactries. Les 15 familles de gnes P450 humains
comprennent 26 sous-familles; 22 dentre elles ont t localises au niveau chromosomique.
Certaines squences sont nettement orthologues pour de nombreuses espces: un gne CYP17
(strode 17-hydroxylase) a t identifi chez tous les vertbrs examins jusqu ce jour;
dautres squences lintrieur dune sous-famille sont fortement dupliques, ce qui rend
lidentification des paires orthologues impossible (cas de la sous-famille CYP2C).
Curieusement, lhumain et la levure partagent un gne orthologue dans la famille CYP51.
Pour les lecteurs cherchant des informations complmentaires sur la superfamille des
cytochromes P450, il existe de nombreux ouvrages trs bien documents (Nelson et coll.,
1993; Nebert et coll., 1991; Nebert et McKinnon, 1994; Guengerich 1993; Gonzalez 1992).
Le succs du systme de nomenclature des P450 a entran le dveloppement de systmes
terminologiques semblables pour les UDP glucuronosyltransfrases (Burchell et coll., 1991)
et les mono-oxygnases flavine (Lawton et coll., 1994). Des systmes de nomenclature
similaires sont galement en cours de dveloppement pour dautres superfamilles denzymes
mtabolisant les mdicaments (sulfotransfrases, poxyde hydrolases et aldhyde
dshydrognases, par exemple).
Rcemment, la superfamille des gnes P450 des mammifres a t divise en trois groupes
(Nebert et McKinnon, 1994): ceux qui interviennent surtout dans le mtabolisme des
xnobiotiques et ceux qui participent la synthse de diverses hormones strodes dune part,
et dautres fonctions endognes importantes, de lautre. Ce sont les enzymes du P450
mtabolisant les xnobiotiques qui sont les plus intressantes sur le plan de la toxicit.
Les enzymes P450 mtabolisant les xnobiotiques
Les enzymes P450 intervenant dans le mtabolisme des produits exognes et des
mdicaments sont presque toujours prsentes dans les familles CYP1, CYP2, CYP3 et CYP4.

Ces enzymes P450 catalysent de nombreuses ractions mtaboliques, un seul cytochrome


P450 tant souvent capable de mtaboliser plusieurs composs diffrents. De plus, des
enzymes P450 multiples peuvent mtaboliser un compos sur diffrents sites. Un compos
peut galement tre mtabolis au niveau dun site unique par plusieurs P450, mais des
vitesses variables.
Les enzymes P450 mtabolisant les mdicaments sont dots dune proprit importante:
beaucoup de ces gnes sont inductibles par les substances mmes qui leur servent de substrat.
Mais dautres enzymes P450 sont induites par des molcules non substrat. Ce phnomne
dinduction enzymatique est la base de nombreuses interactions mdicamenteuses,
importantes du point de vue thrapeutique.
Bien que prsentes dans de nombreux tissus, cest dans le foie, principal site du mtabolisme
des mdicaments, quon retrouve ces enzymes P450 des taux relativement levs. Certaines
enzymes du P450 mtabolisant les xnobiotiques possdent une activit vis--vis de plusieurs
substrats endognes (acide arachidonique, par exemple). Cependant, on estime en gnral que
la plupart des enzymes P450 mtabolisant les xnobiotiques ne jouent pas un rle
physiologique important, bien quon ne lait pas encore tabli exprimentalement. La rupture
slective de lhomozygotie, ou knock-out, de certains gnes P450 mtabolisant les
xnobiotiques chez la souris permettra dobtenir dans un avenir proche des informations sans
quivoque sur le rle physiologique des P450 mtabolisant les xnobiotiques (pour une
synthse sur le ciblage des gnes, on peut se reporter louvrage de Capecchi, 1994).
Par opposition aux familles de P450 codant pour des enzymes impliques principalement dans
des processus physiologiques, les familles codant pour des enzymes P450 mtabolisant les
xnobiotiques manifestent une spcificit despce marque et comportent frquemment de
nombreux gnes actifs dans chaque sous-famille (Nelson et coll., 1993; Nebert et coll., 1991).
Etant donn leur manque apparent de substrats physiologiques, il est possible que les enzymes
P450 des familles CYP1, CYP2, CYP3 et CYP4, apparues il y a quelques centaines de millions
dannes, aient volu afin de dtoxifier les produits chimiques trangers rencontrs dans
lenvironnement et dans lalimentation. En clair, lvolution des P450 mtabolisant les
xnobiotiques se serait droule une priode bien antrieure celle de la synthse de la
plupart des produits chimiques synthtiques auxquels lhumain est maintenant expos. Les
gnes de ces quatre familles ont vraisemblablement volu et diverg selon les espces en
raison de leur exposition aux mtabolites des vgtaux au cours des 1,2 milliard dannes
passes. Cette guerre animal-plante (Gonzalez et Nebert, 1990), comme on lappelle de
faon image, est un phnomne au cours duquel les plantes ont dvelopp de nouveaux
produits chimiques (phytoalexines) comme mcanisme de dfense pour ne pas tre ingres
par les animaux; les animaux ont ragi ce changement en se dotant de nouveaux gnes P450
pour sadapter la diversification des substrats. Les exemples dcrits rcemment de guerre
chimique plante-insecte et plante-champignon impliquant une dtoxification de substrats
toxiques par les P450 donnent plus de poids cette explication (Nebert, 1994). Nous
consacrons les quelques pages qui suivent plusieurs polymorphismes humains des enzymes
P450 mtabolisant les xnobiotiques dans lesquels les dterminants gntiques de la rponse
toxique semblent avoir une importance capitale. Jusqu tout rcemment, on souponnait
lexistence dun polymorphisme P450 lorsquon observait une variance inattendue dans la
rponse de patients un agent thrapeutique. Cest ainsi que plusieurs polymorphismes
portent le nom du mdicament qui a permis lorigine de les identifier. Plus rcemment, les
efforts de recherche ont surtout port sur lidentification prcise des enzymes P450 impliques
dans le mtabolisme de produits chimiques pour lesquels une variance est observe et sur la
caractrisation exacte des gnes P450 concerns. Comme nous lavons mentionn
prcdemment, lactivit mesurable dune enzyme P450 vis--vis dun produit chimique type
porte le nom de phnotype. Les diffrences allliques du gne P450 pour chaque individu sont

appeles gnotype P450. Avec ltude de plus en plus minutieuse des gnes P450, la base
molculaire prcise de la variance phnotypique prcdemment dcrite devient plus claire.
La sous-famille CYP1A
La sous-famille CYP1A comprend deux enzymes chez lhumain et tous les autres
mammifres. Ces enzymes, appeles CYP1A1 et CYP1A2 dans la nomenclature officielle,
revtent un intrt considrable, car elles participent lactivation mtabolique de nombreux
procancrognes et sont galement induites par plusieurs composs posant des problmes sur
le plan toxicologique, dont la dioxine. Par exemple, la CYP1A1 active, en les mtabolisant, de
nombreux composs quon retrouve dans la fume de cigarette. De mme, la CYP1A2 active
de nombreuses arylamines utilises dans lindustrie des colorants et associes au cancer de la
vessie. Elle active galement le 4-(mthylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK), une
nitrosamine drive du tabac. Les CYP1A1 et CYP1A2, qui sont prsentes des taux trs
levs dans les poumons des fumeurs de cigarettes, sont produites par les hydrocarbures
polycycliques prsents dans la fume. Les niveaux dactivit de ces deux enzymes sont donc
considrs comme des facteurs importants de la raction individuelle de nombreux produits
chimiques potentiellement toxiques.
La sous-famille CYP1A a vu son intrt toxicologique fortement augmenter la suite dun
rapport paru en 1973 tablissant une corrlation entre linduction de la CYP1A1 chez les
fumeurs et la prdisposition individuelle au cancer pulmonaire (Kellermann, Shaw et LuytenKellermann, 1973). De nombreux laboratoires se sont alors intresss aux mcanismes
molculaires de linduction des CYP1A1 et CYP1A2. Le processus dinduction se fait par
lintermdiaire dune protine appele rcepteur Ah laquelle se fixent les dioxines et les
produits chimiques structurellement apparents. Le nom Ah est d au caractre aryl
hydrocarbon de nombreux inducteurs du CYP1A. Prcisons que, selon la souche de souris,
les diffrences au niveau du gne codant pour le rcepteur Ah entranent des disparits
notables dans la toxicit dun produit chimique et dans la rponse cette toxicit. Il semble
exister chez lhumain un polymorphisme du gne du rcepteur Ah: ainsi, environ un dixime
de la population prsente une induction importante du CYP1A1 susceptible de lexposer un
plus grand risque de certains cancers induits chimiquement que les neuf autres diximes de la
population. Le rle que joue le rcepteur Ah dans le contrle des enzymes de la sous-famille
du CYP1A et dans la rponse humaine une exposition chimique a fait lobjet de plusieurs
tudes bibliographiques rcentes (Nebert, Petersen et Puga, 1991; Nebert, Puga et Vasiliou,
1993).
Existe-t-il dautres polymorphismes pouvant dterminer le taux protique de CYP1A dans la
cellule? Un polymorphisme du gne CYP1A1, identifi chez les Japonais fumeurs de
cigarettes, semble avoir une incidence sur le risque de cancer pulmonaire, bien que ce mme
polymorphisme ne paraisse pas exercer dinfluence sur ce risque dans dautres groupes
ethniques (Nebert et McKinnon, 1994).
CYP2C19
On sait depuis longtemps que les individus ne mtabolisent pas tous la mme vitesse le
mdicament anticonvulsivant (S)-mphnytone (Guengerich, 1989). A cause dune
dficience, entre 2 et 5% des Caucasiens et jusqu 25% des Asiatiques prsentent un plus
grand risque de raction toxique ce mdicament. On sait depuis longtemps aussi que cette
anomalie enzymatique est due un membre de la sous-famille CYP2C; cependant, la base
molculaire prcise de cette dficience a donn lieu de nombreuses controverses, la sousfamille CYP2C ne contenant pas moins de six gnes. Rcemment, on a pu dmontrer que la
principale cause de cette dficience tait la mutation dune seule base au niveau du gne
CYP2C19 (Goldstein et de Morais, 1994). Un simple test ADN, par raction en chane de la
polymrase, a galement t mis au point pour identifier rapidement cette mutation dans des
populations humaines (Goldstein et de Morais, 1994).

CYP2D6
La variation sans doute la mieux caractrise dun gne P450 est celle du CYP2D6. Plus
dune dizaine de cas de mutations, de rarrangements et de dltions touchant ce gne ont t
dcrits (Meyer, 1994). Lexistence de ce polymorphisme a t souponne pour la premire
fois il y a une vingtaine dannes lorsquon sest aperu que les patients traits par la
dbrisoquine, mdicament antihypertenseur, ne prsentaient pas tous la mme rponse
clinique. Cest de cette poque que date lexpression polymorphisme de la dbrisoquine pour
dsigner les altrations du gne CYP2D6 lorigine des variations de lactivit enzymatique.
Avant les tudes sur lADN, on classait les individus en mtaboliseurs lents ou rapides de la
dbrisoquine en se fondant sur les concentrations de mtabolites dans les chantillons
urinaires. On sait maintenant que les altrations du gne CYP2D6 permettent non seulement
de distinguer les individus qui mtabolisent lentement ou rapidement la dbrisoquine, mais
aussi ceux qui ont un mtabolisme ultrarapide. La plupart des altrations du gne CYP2D6
sont associes une dficience partielle ou totale de lenzyme; cependant, on a constat
rcemment quil existait des sujets de deux familles possdant de multiples copies
fonctionnelles du gne CYP2D6, altration lorigine dun mtabolisme ultrarapide des
substrats du CYP2D6 (Meyer, 1994). Cette observation remarquable donne un nouvel
clairage la question du large spectre de lactivit du CYP2D6 prcdemment constate dans
des tudes de population. Les altrations de fonction du CYP2D6 revtent un intrt tout
particulier, tant donn que plus de 30 mdicaments prescrits de faon courante sont
mtaboliss par cette enzyme. Le statut individuel du CYP2D6 est donc un facteur
dterminant des rponses thrapeutiques et toxiques aprs administration dune mdication.
Un dbat rcent a dailleurs eu lieu sur la ncessit de prendre en considration ce statut pour
ladministration en toute scurit de mdicaments psychiatriques ou cardio-vasculaires des
patients.
Le rle du polymorphisme du CYP2D6 dans la prdisposition individuelle des maladies
humaines telles que le cancer pulmonaire ou la maladie de Parkinson a fait lobjet dtudes
approfondies (Nebert et McKinnon, 1994; Meyer, 1994). Bien quil soit difficile den tirer des
conclusions tant donn la diversit des protocoles employs, la majorit des tudes semblent
indiquer une association entre les mtaboliseurs rapides de la dbrisoquine et le cancer
pulmonaire. Pour lheure, les raisons dune telle association ne sont pas claires. Nanmoins,
on a dmontr que lenzyme CYP2D6 mtabolise la NNK, nitrosamine produite partir du
tabac.
Lamlioration des techniques dtude de lADN permettra, tout en garantissant une
valuation plus prcise du statut du CYP2D6, de prciser la relation entre le CYP2D6 et le
risque pathogne. Alors que les mtaboliseurs rapides paraissent plus sensibles la survenue
dun cancer pulmonaire, pour une raison encore inconnue, les mtaboliseurs lents semblent
prsenter une plus grande sensibilit la maladie de Parkinson. Bien quil soit difficile de
comparer ces tudes, il apparat que les sujets mtaboliseurs lents prsentent de 2 2,5 fois
plus de risques de dvelopper une maladie de Parkinson.
Le CYP2E1
Le gne CYP2E1 code pour une enzyme qui mtabolise de nombreux produits chimiques, en
particulier des mdicaments et de nombreux cancrognes de faible poids molculaire. Cette
enzyme, fortement inductible par lalcool, peut jouer un rle dans les lsions hpatiques
produites par des produits chimiques tels que le chloroforme, le chlorure de vinyle ou le
ttrachlorure de carbone. On la trouve surtout dans le foie, un taux qui fluctue sensiblement
dun individu lautre. Ltude approfondie du gne CYP2E1 a permis didentifier plusieurs
polymorphismes (Nebert et McKinnon, 1994). La relation entre la prsence de certaines
variations structurelles du gne CYP2E1 et un risque apparemment plus faible de cancer
pulmonaire a t tablie dans certaines tudes; cependant, lexistence de diffrences

interethniques marques exige dtre approfondie pour pouvoir confirmer cette relation
ventuelle.
La sous-famille CYP3A
Chez lhumain, quatre enzymes ont t identifies dans la sous-famille CYP3A en raison de la
similitude de leur squence en acides amins. Les enzymes du CYP3A mtabolisent de
nombreux mdicaments couramment prescrits comme lrythromycine et la cyclosporine.
Laflatoxine B1, contaminant cancrogne des produits alimentaires, est galement un substrat
du CYP3A. Lun des membres de la sous-famille humaine du CYP3A, appel CYP3A4, est le
principal composant de la famille des cytochromes P450 du foie humain; il est galement
prsent au niveau du tractus gastro-intestinal. Comme cest le cas pour de nombreuses
enzymes du cytochrome P450, le taux de CYP3A4 est trs variable selon les individus. Une
seconde enzyme, CYP3A5, est prsente dans le foie de 25% seulement des individus; la cause
gntique de ces variations est inconnue. Limportance de la variabilit du CYP3A4 ou du
CYP3A5 comme facteur gntique dterminant dune rponse toxique na pas encore t
tablie (Nebert et McKinnon, 1994).
Les polymorphismes autres que le P450
De nombreux polymorphismes existent galement dans dautres superfamilles denzymes
mtabolisant les xnobiotiques (glutathion transfrases, UDP glucuronosyltransfrases, poxonases, dshydrognases, N-actyltransfrases ou mono-oxygnases flavine, etc.). Etant
donn que la toxicit finale dun intermdiaire gnr par le cytochrome P450 dpend de
lefficacit des ractions ultrieures de dtoxification lors de la phase II, le rle combin des
multiples polymorphismes enzymatiques revt une importance capitale pour la prdisposition
aux maladies provoques par des produits chimiques. Lquilibre mtabolique entre les
ractions de phase I et de phase II (voir figure 33.4) joue donc selon toute vraisemblance un
rle cl dans la survenue de ce type de pathologies chez lhumain et constitue le facteur
gntique dterminant dune rponse toxique.
Le polymorphisme du gne GSTM1
Un exemple bien tudi de polymorphisme dune enzyme de phase II est celui dun membre
de la superfamille des enzymes glutathion S-transfrases, la GST mu ou GSTM1. Cette
enzyme particulire a un intrt toxicologique considrable, puisquelle parat participer la
dtoxification des mtabolites toxiques produits par lenzyme CYP1A1 partir de la fume de
cigarette. Le polymorphisme du gne de la glutathion transfrase consiste en une absence
totale denzyme fonctionnelle chez la moiti des Caucasiens. Cette absence denzyme de
phase II semble associe une prdisposition accrue au cancer pulmonaire. En groupant les
individus en fonction des variants du gne CYP1A1 et de la dltion ou de la prsence dun
gne GSTM1 fonctionnel, on a pu dmontrer que le risque de cancer pulmonaire d au
tabagisme varie considrablement (Kawajiri, Watanabe et Hayashi, 1994). En particulier, les
sujets prsentant une altration rare du gne CYP1A1, associe labsence de gne GSTM1,
ont un risque accru (neuf fois plus lev) de dvelopper un cancer pulmonaire lorsquils sont
exposs une concentration pourtant relativement faible de fume de cigarette. Prcisons que
des diffrences interethniques semblent intervenir dans ces gnes variants et quil serait
opportun deffectuer des tudes complmentaires pour prciser le rle de telles altrations en
pathologie (Kalow, 1962; Nebert et McKinnon, 1994; Kawajiri, Watanabe et Hayashi, 1994).
Leffet synergique de deux ou de plusieurs polymorphismes sur la rponse toxique
La rponse toxique un agent environnemental peut tre trs fortement augmente lorsquun
mme individu prsente deux anomalies pharmacogntiques comme la combinaison dun
polymorphisme de la N-actyltransfrase (NAT2) et dun polymorphisme de la glucose-6phosphate dshydrognase (G6PD).

Lexposition professionnelle aux arylamines constitue un risque important de cancer de la


vessie. Depuis les tudes remarquables de Cartwright en 1954, on sait que le statut des Nactyleurs est un facteur tiologique du cancer de la vessie induit par les colorants azoques. Il
existe une corrlation trs significative entre le phnotype actyleur lent, lexistence de cancer
de la vessie et le degr dinvasion de ce cancer dans la paroi vsicale. A linverse, on a pu
mettre en vidence une association significative entre le phnotype actyleur rapide et
lincidence de carcinome clo-rectal. Les gnes des N-actyltransfrases (NAT1, NAT2) ont
t clons et squencs et, grce aux techniques ADN, on est maintenant en mesure de
dtecter plus dune dizaine de variants allliques rendant compte du phnotype actyleur lent.
Le gne NAT2 est un gne polymorphe, surtout responsable de la variabilit de la rponse
toxique aux produits chimiques prsents dans lenvironnement (Weber, 1987; Grant, 1993).
La glucose-6-phosphate dshydrognase (G6PD) est une enzyme critique pour la production
et le maintien du NADPH, sa faible activit ou son absence dactivit pouvant conduire une
hmolyse svre induite par des mdicaments ou des xnobiotiques due une mauvaise
concentration du glutathion rduit (GSH) dans les hmaties. Le dficit en G6PD affecte au
moins 300 millions de personnes dans le monde. Plus de 10% des Afro-Amricains de sexe
masculin prsentent le phnotype le moins svre, le type mditerranen le plus svre se
retrouvant une frquence leve (un sujet sur trois) dans certaines communauts sardes. Le
gne G6PD a t clon et localis sur le chromosome X et de nombreuses mutations
ponctuelles expliquent quon constate un tel degr dhtrognit phnotypique chez les
individus souffrant dun tel dficit (Beutler, 1992).
Le thiozalsulfone, mdicament de type sulfarylamine, est lorigine dune anmie
hmolytique qui se manifeste par distribution bimodale dans la population qui on
ladministre. Lorsquils sont traits par certains mdicaments, les individus prsentant la
fois un dficit en G6PD et le phnotype actyleur lent sont plus affects que ceux ayant
seulement une carence en G6PD ou un phnotype actyleur lent. Les actyleurs lents
dficitaires en G6PD sont au moins 40 fois plus sensibles lhmolyse induite par le
thiozalsulfone que les actyleurs rapides statut normal en G6PD.
Leffet des polymorphismes gntiques sur lvaluation dune exposition
Pour assurer lvaluation de lexposition et la surveillance biologique (voir figure 33.2), il faut
aussi disposer dinformations sur la constitution gntique de chaque individu. Pour une
mme exposition un produit chimique dangereux, le taux des adduits lhmoglobine (ou
dautres marqueurs biologiques) peut varier de deux trois ordres de grandeur dun individu
lautre, selon lempreinte mtabolique individuelle.
Des tudes semblables de pharmacogntique ont t effectues chez des travailleurs de
lindustrie chimique en Allemagne (voir tableau 33.3). Par rapport aux autres phnotypes
pharmaco-gntiques combins possibles, les adduits lhmoglobine parmi les sujets
exposs laniline et lactanilide sont de loin les plus levs chez les actyleurs lents
prsentant un dficit en G6PD. Cette tude a dimportantes implications sur le plan de
lvaluation de lexposition. Il peut en effet arriver, compte tenu de la prdisposition
gntique de chacun, que lon sous-estime de deux ou de plusieurs ordres de grandeur
lexposition que subissent rellement deux individus exposs une mme concentration de
produit chimique dangereux sur leur lieu de travail (si lon en juge par des marqueurs
biologiques tels que les adduits lhmoglobine). De mme, le risque rsultant dun effet
nocif pour la sant peut varier de deux ou plusieurs ordres de grandeur.
Tableau 33.3 Adduits l'hmoglobine chez des travailleurs exposs l'aniline et l'actanilide
Type dactyleur
Dficit en G6PD
Rapide

Lent

Non

Oui

Adduits Hb

2
+

+
+

30
20

100

Source: daprs Lewalter et Korallus, 1985.


Les diffrences gntiques au niveau de la liaison et du mtabolisme
Les observations que nous venons de faire pour le mtabolisme valent aussi pour la liaison.
Les diffrences hrditaires qui peuvent exister au niveau de la liaison dagents
environnementaux affectent de faon sensible la rponse toxique. Ainsi, les diffrences au
niveau du gne cdm de la souris modifient fortement la sensibilit individuelle la ncrose
testiculaire induite par le cadmium (Taylor, Heiniger et Meier, 1973). Les diffrences
daffinit de liaison au rcepteur Ah ont probablement une incidence sur la toxicit en cas
dexpositions la dioxine et sur la survenue du cancer (Nebert, Petersen et Puga, 1991;
Nebert, Puga et Vasiliou, 1993).
La figure 33.6 rsume le rle du mtabolisme et de la liaison dans la toxicit et le cancer. Les
agents toxiques, tels quils sont prsents dans lenvironnement, ou en raison de leur
mtabolisme ou de leur liaison, produisent des effets soit par voie gnotoxique (apparition de
lsions au niveau de lADN), soit par voie non gnotoxique (absence de mutagense ou de
lsions au niveau de lADN). Fait intressant, on a tabli rcemment que les agents
gnotoxiques classiques peuvent agir par lintermdiaire dun signal de transduction non
gnotoxique dpendant du glutathion rduit (GSH), initi au niveau de la surface cellulaire ou
dans son voisinage en absence dADN et hors du noyau cellulaire (Devary et coll., 1993).
Cependant, les diffrences gntiques de mtabolisme et de liaison restent les facteurs
dterminants dans la faon dont les individus ragissent aux toxiques.
Figure 33.6 Voies gnrales de la toxicit
Le rle des enzymes mtabolisant les mdicaments dans le fonctionnement cellulaire
Les variations dorigine gntique du fonctionnement des enzymes mtabolisant les
mdicaments revtent une importance capitale dans la rponse individuelle aux produits
chimiques. Ces enzymes sont essentielles pour comprendre le devenir et lvolution dun
produit chimique tranger aprs une exposition.
Comme le montre la figure 33.6, limportance des enzymes mtabolisant les mdicaments
dans la sensibilit individuelle lexposition un produit chimique est en fait beaucoup plus
complexe que ne le laisse penser le prsent expos sur les xnobiotiques. Ainsi, au cours des
deux dernires dcennies, le rle des mcanismes gnotoxiques (mesure des adduits lADN
et aux protines) est apparu clairement. On peut toutefois se demander si les mcanismes non
gnotoxiques ne sont pas aussi importants que les mcanismes gnotoxiques dans la survenue
des rponses toxiques.
Le rle physiologique que de nombreuses enzymes mtabolisant les mdicaments jouent dans
le mtabolisme des xnobiotiques na pas, rappelons-le, t compltement lucid. Selon
Nebert (1994), les enzymes du mtabolisme des mdicaments qui sont prsentes sur notre
plante depuis plus de 3,5 milliards dannes taient responsables lorigine (et le sont
encore, pour une part essentielle) de la rgulation des niveaux cellulaires de nombreux ligands
non peptidiques importants pour lactivation de la transcription de gnes en rapport avec la
croissance, la diffrenciation, lapoptose, lhomostasie et les fonctions neuroendocriniennes.
De plus, la toxicit de la plupart, si ce nest de tous les agents environnementaux, sexerce par

lintermdiaire dune action agoniste ou antagoniste sur ces signaux de transduction (Nebert,
1994). Si lon en croit cette hypothse, la variabilit gntique des enzymes mtabolisant les
mdicaments peut avoir des effets extrmement graves sur de nombreux processus
biochimiques essentiels pour la cellule et tre de ce fait lorigine dimportantes diffrences
dans la rponse toxique. Le mme scnario pourrait galement expliquer de nombreuses
ractions indsirables idiosyncrasiques rencontres chez des patients prenant des mdicaments
prescrits de faon courante.
Conclusion
La dernire dcennie a t marque par des progrs remarquables dans la comprhension des
bases gntiques de la rponse individuelle aux produits chimiques prsents dans les
mdicaments, les aliments et les polluants environnementaux. Les enzymes mtabolisant les
mdicaments ont une profonde influence sur la manire dont les individus ragissent aux
produits chimiques. Lvolution de nos connaissances sur la multiplicit de ce type denzymes
aidant, nous sommes chaque jour un peu mieux en mesure dvaluer le risque toxique de
nombreux mdicaments et produits chimiques environnementaux. Cest le cas en particulier
pour lisoforme CYP2D6 du cytochrome P450. A laide de techniques ADN relativement
simples, il est possible de prvoir la rponse probable nimporte quel mdicament
mtabolis par cette enzyme; cette avance est le gage dune utilisation plus sre de
thrapeutiques indispensables, bien que potentiellement toxiques.
Au cours des annes venir, nous allons sans doute parvenir identifier une multitude
dautres polymorphismes (phnotypes) impliquant des enzymes du mtabolisme des
mdicaments. Ces informations seront le fruit de la mise en uvre de techniques ADN
amliores, peu invasives, permettant didentifier les gnotypes dans la population humaine.
De telles tudes devraient tre particulirement prcieuses pour valuer le rle des produits
chimiques dans de nombreuses maladies environnementales dorigine encore inconnue. La
prise en compte des multiples polymorphismes touchant les enzymes mtabolisant les
mdicaments, agissant de manire combine (voir tableau 33.3), reprsente nen pas douter
un domaine de recherche particulirement fertile. De telles tudes clarifieront la responsabilit
des produits chimiques dans le dveloppement du cancer. Au niveau collectif, cette
information devrait permettre de prodiguer des conseils personnaliss aux individus afin de
leur viter de sexposer aux produits chimiques susceptibles dagir sur eux. Ce type
dinformation et de conseils, qui relve de la toxicologie prventive, nous aidera sans doute
faire face avec succs au nombre sans cesse croissant de produits chimiques auxquels nous
sommes exposs.
LES MCANISMES DE LA TOXICIT
INTRODUCTION ET CONCEPTS
Philip G. Watanabe
La toxicologie mcanistique est ltude du mcanisme par lequel les agents chimiques ou
physiques ragissent avec les organismes vivants pour provoquer une raction toxique. La
connaissance du mcanisme toxique dune substance amliore les possibilits de prvention et
permet de concevoir des produits chimiques mieux tolrs. Elle constitue la base du
traitement lors dune surexposition, permet souvent dviter toute surexposition et garantit
une meilleure comprhension des mcanismes biologiques fondamentaux. Dans la prsente
Encyclopdie, nous privilgions les expriences sur les animaux pour prdire les phnomnes
toxiques chez lhumain. Les diffrents champs de la toxicologie toxicologie mcanistique,
descriptive, rglementaire, lgale et environnementale (Klaassen, Amdur et Doull, 1991)
senrichissent grce la comprhension des mcanismes toxiques fondamentaux.
Lintrt de la comprhension des mcanismes de toxicit

Comprendre le mcanisme du pouvoir toxique dune substance permet damliorer les


connaissances dans les diffrents domaines de la toxicologie. La connaissance des
mcanismes daction aide le lgislateur institutionnel tablir des limites de scurit lgales
pour lexposition humaine. Elle aide les toxicologues recommander les moyens daction
ncessaires en vue dassainir ou de rhabiliter les sites contamins. Elle permet aussi, en se
fondant sur les proprits physico-chimiques dune substance ou dun mlange de substances,
de choisir le type dquipement de protection adapt aux besoins. Elle est galement utile
pour dcider de la thrapie qui convient et pour dvelopper de nouveaux mdicaments
permettant de traiter les pathologies humaines. Le mcanisme de toxicit permet souvent au
toxicologue mdico-lgal de comprendre la faon dont un agent physique ou chimique peut
causer le dcs du sujet ou le rendre invalide.
Une fois le mcanisme de toxicit connu, la toxicologie descriptive permet de prvoir les
effets toxiques des produits chimiques en question. Prcisons, cependant, que labsence
dinformation sur le mcanisme daction ne devrait en aucun cas dissuader les professionnels
de la sant de prendre les mesures de protection sanitaire qui simposent. Des dcisions
rflchies sont arrtes partir de donnes chez lanimal et dobservations humaines pour
tablir des niveaux dexposition sans danger. Traditionnellement, on sassure une marge de
scurit en utilisant la concentration sans effet nocif ou la concentration correspondant au
plus faible effet nocif observe dans des tudes sur des animaux de laboratoire (tudes par
administrations rptes) et en divisant cette concentration par un facteur de 100 pour une
exposition professionnelle ou de 1 000 pour les autres expositions humaines dorigine
environnementale. Cette manire de procder a de toute vidence port ses fruits si lon en
croit le peu deffets nocifs observs chez les travailleurs exposs des concentrations de
produits chimiques ne dpassant pas les valeurs limites tablies. De plus, lesprance de vie
humaine continue daugmenter, tout comme la qualit de vie. Dans lensemble, lutilisation
des donnes de la toxicologie a conduit un contrle efficace, quil soit rglementaire ou
spontan. Le dveloppement de la connaissance des mcanismes toxiques permettra
daccrotre le caractre prvisionnel des modles de risque actuels et damliorer sans cesse la
prvention.
Complexe, la comprhension des mcanismes environnementaux suppose la connaissance de
lhomostasie (quilibre) des cosystmes et des conditions entranant la rupture de cet
quilibre. Bien que ce sujet ne soit pas trait dans le prsent article, il va de soi que les
scientifiques seraient mieux en mesure de prendre des dcisions judicieuses dans le domaine
du traitement des dchets municipaux ou industriels sils comprenaient mieux les mcanismes
toxiques et leurs consquences dans un cosystme. La gestion des dchets, domaine de
recherche en pleine expansion lheure actuelle, continuera dtre trs important lavenir.
Les techniques dtude des mcanismes de toxicit
La majorit des tudes mcanistiques commence par une tude toxicologique descriptive chez
lanimal ou par des observations cliniques chez lhumain. Idalement, les tudes animales
devraient comporter des observations cliniques et comportementales minutieuses, un examen
biochimique attentif des paramtres sanguins ou urinaires pour rechercher des signes de
dysfonctionnement des principaux systmes biologiques de lorganisme ainsi quune tude
histologique post mortem de tous les organes en vue de mettre en vidence des lsions (voir
les tests recommands par lOCDE; les directives de la CE sur lvaluation chimique; les
directives de lAgence amricaine de protection de lenvironnement (EPA); la rglementation
japonaise sur les substances chimiques). On peut dire que cela correspondrait un examen
mdical approfondi qui prendrait deux trois jours en milieu hospitalier ( lexception des
examens post mortem).
La comprhension des mcanismes de toxicit repose sur lart et la science de lobservation,
la crativit dans la slection de techniques pour valider les diverses hypothses et

lintgration innovatrice des signes et des symptmes dans une relation de causalit.
Lorsquon fait une tude mcanistique, on commence par tudier lexposition une
substance, la distribution puis son devenir dans lorganisme (pharmacocintique) en fonction
du temps, avant de mettre en vidence leffet toxique qui en rsulte au niveau dun systme et
en fonction de la dose. Les diverses substances peuvent entraner des effets toxiques
diffrents niveaux du systme biologique.
Lexposition
Dans les tudes mcanistiques, la voie dexposition est gnralement la mme que lors de
lexposition humaine. Cette voie est importante car, en dehors des effets systmiques, on peut
observer des effets locaux au niveau du site dexposition, une fois que le produit chimique est
pass dans le sang et sest distribu dans lorganisme. Un exemple simple, mais convaincant,
dun effet local est lirritation et, ventuellement, la corrosion cutane aprs application de
solutions de bases ou dacides forts utilises pour le nettoyage des surfaces dures. De mme,
lirritation et la mort cellulaire peuvent sobserver au niveau des cellules nasales ou
pulmonaires aprs exposition des vapeurs ou des gaz irritants tels que les oxydes dazote
ou lozone (les deux sont des polluants de lair et se retrouvent parmi les composants du
smog (brouillard chimique). Aprs son absorption par voie cutane, pulmonaire ou gastrointestinale et passage dans la circulation sanguine, le produit chimique peut tre mis en
vidence dans les organes ou les tissus une concentration qui dpend de nombreux facteurs
dterminant la pharmacocintique du produit dans lorganisme. Le produit peut ensuite tre
aussi bien activ que dtoxifi dans lorganisme comme indiqu ci-aprs.
Le rle de la pharmacocintique en toxicologie
La pharmacocintique tudie labsorption, la distribution, le mtabolisme (modifications
biochimiques dans lorganisme) et llimination ou lexcrtion du produit chimique en
fonction du temps. Par rapport aux mcanismes de toxicit, ces variables pharmacocintiques
peuvent revtir une trs grande importance et, dans certains cas, tre lorigine de leffet
toxique ou de son absence. Si, par exemple, un produit est absorb en quantit insuffisante, sa
toxicit systmique ( lintrieur de lorganisme) napparatra pas. Inversement, un produit
chimique fortement ractif qui est dtoxifi rapidement (en quelques secondes ou en quelques
minutes) par les enzymes digestives ou hpatiques peut ne pas avoir le temps de manifester sa
toxicit. Certains composs et mlanges halogns polycycliques, de mme que des mtaux
comme le plomb, nentranent pas de toxicit notable si leur excrtion est rapide; par contre,
leur accumulation une concentration suffisamment leve provoque un effet toxique du fait
de la lenteur de leur excrtion (parfois mesure en annes). Heureusement, la dure de
rtention de la plupart des produits chimiques dans lorganisme nest pas trs longue. Mme
sil saccumule, un produit inoffensif naura pas deffet toxique. La vitesse dlimination en
dehors de lorganisme ou de dtoxification dun produit chimique est souvent exprime par sa
demi-vie, qui correspond au temps ncessaire pour que 50% de ce produit soit excrt ou
modifi en une forme non toxique.
Cependant, le fait quun produit chimique saccumule dans une cellule ou un organe doit
inciter examiner attentivement son potentiel de toxicit dans lorgane en question. Plus
rcemment, des modles mathmatiques ont t labors pour extrapoler les variables
pharmacocintiques de lanimal lhumain. Ces modles pharmacocintiques sont
extrmement utiles pour faire des hypothses et vrifier si lanimal dexprience peut servir
de modle prdictif pour lhumain. De nombreux articles et ouvrages ont t publis ce sujet
(Gehring, Watanabe et Blau, 1976; Reitz, Nolan et Schumann, 1987; Nolan, Stott et
Watanabe, 1995). La figure 33.7 montre un modle pharmacocintique simplifi.
Figure 33.7 Modle pharmacocintique simplifi

Les diffrents niveaux et systmes pouvant tre atteints


La toxicit peut sexprimer diffrents niveaux biologiques. La lsion peut tre value
lchelle de la personne entire (ou de lanimal), de lorgane, de la cellule ou de la molcule.
Par systme, il faut entendre les systmes ou appareils immunitaire, respiratoire, cardiovasculaire, rnal, endocrinien, digestif, musculo-squelettique, sanguin, reproducteur et
nerveux central. Les principaux organes sont le foie, les reins, les poumons, le cerveau, la
peau, les yeux, le cur, les testicules et les ovaires. Au niveau cellulaire ou biochimique, les
effets nocifs peuvent perturber le mtabolisme protique normal ou les rcepteurs
endocriniens, inhiber le mtabolisme nergtique ou encore entraver ou favoriser linduction
enzymatique des xnobiotiques (substances trangres). Au niveau molculaire, ils peuvent
perturber la transcription ADN-ARN ou la liaison des rcepteurs spcifiques cytoplasmiques
et nuclaires, ou encore causer des lsions au niveau des gnes ou de leurs produits.
Finalement, le dysfonctionnement dun organe essentiel a de fortes chances dtre la
consquence dune lsion molculaire dans une cellule cible particulire de cet organe. Il nest
toutefois pas toujours faisable, ni ncessaire, de remonter jusquau mcanisme molculaire: il
est possible dintervenir et de traiter sans connatre compltement la cible molculaire.
Nanmoins, la connaissance du mcanisme spcifique de la toxicit accrot la valeur
prdictive et la pertinence dune extrapolation dautres produits chimiques. La figure 33.8
reprsente de faon schmatique les divers niveaux auxquels on peut dtecter une interfrence
avec des processus physiologiques normaux. Les flches montrant les consquences chez un
individu peuvent tre interprtes dans un sens descendant (exposition, pharmacocintique
vers toxicit systmique ou organique) ou ascendant (lsion molculaire, effet cellulaire ou
biochimique vers toxicit systmique ou organique).
Figure 33.8 Reprsentation des mcanismes toxiques
Exemples de mcanismes de toxicit
Les mcanismes de toxicit peuvent tre simples ou complexes. On observe souvent une
diffrence entre le type de toxicit, son mcanisme et le niveau de leffet, selon que les effets
nocifs sont dus une seule exposition dose leve (cas dune intoxication accidentelle), ou
une exposition rpte plus faible dose (cas dune exposition professionnelle ou
environnementale). Traditionnellement, des fins exprimentales, on administre soit une
seule dose leve ou dose aigu par intubation directe dans lestomac dun rongeur, soit un
gaz ou un produit volatil pendant deux quatre heures par voie respiratoire, en choisissant la
mthode qui reproduit le mieux les conditions dune exposition humaine. Les animaux sont
observs pendant une priode de deux semaines aprs lexposition, puis on procde
lexamen des principaux organes externes et internes pour la mise en vidence des lsions.
Les tudes doses rptes durent de quelques mois plusieurs annes. Chez les rongeurs, on
considre quun suivi de deux annes est suffisant pour valuer la toxicit et la
cancrognicit en cas dexposition chronique (sur toute une vie), alors que chez les primates
non humains, on considre que pour une exposition subchronique (infrieure la dure de
vie), deux annes sont la norme pour valuer la toxicit de doses rptes. Aprs exposition,
on effectue un examen complet de tous les tissus, organes et fluides pour dterminer les effets
toxiques.
Les mcanismes de toxicit aigu
Les exemples suivants constituent une bonne illustration des effets aigus que lon peut
observer aprs une dose leve pouvant entraner la mort ou une incapacit grave. Dans
certains cas, les effets peuvent tre transitoires et compltement rversibles aprs traitement.
Ils sont fonction de la dose ou de la svrit de lexposition.

Asphyxiants simples. Le mcanisme de toxicit des gaz inertes et de quelques autres


substances non ractives est d un manque doxygne (anoxie). Ces produits chimiques,
entranant une privation en oxygne au niveau du systme nerveux central (SNC), sont
appels asphyxiants simples. Lorsquun sujet pntre dans un espace clos contenant de lazote
et peu doxygne, il va immdiatement manquer doxygne crbral, ce qui va conduire son
inconscience et son dcs sil nest pas soustrait sur-le-champ lexposition. Dans des cas
extrmes (absence quasiment totale doxygne), cet tat dinconscience peut survenir en
quelques secondes; la survie dpend donc de lvacuation rapide vers un environnement
oxygn. Le sujet peut survivre mais prsenter des dommages irrversibles au niveau crbral
si son sauvetage est retard. Ces dommages irrversibles sont dus la mort des neurones qui
ne peuvent se rgnrer.
Asphyxiants chimiques. Le monoxyde de carbone (CO) entre en concurrence avec loxygne
pour se lier lhmoglobine (dans les hmaties circulantes). Il prive les tissus de loxygne
ncessaire au mtabolisme nergtique, ce qui entrane une mort cellulaire. Lintervention
thrapeutique consiste supprimer la source de CO et traiter par de loxygne. Lutilisation
doxygne est base sur le mcanisme daction toxique du CO. Un autre asphyxiant chimique
puissant, le cyanure, perturbe le mtabolisme cellulaire et lutilisation de loxygne en
formant de lnergie. Le traitement par du nitrite de sodium transforme lhmoglobine des
hmaties en mthmoglobine. Lion cyanure prsente une plus forte affinit pour la
mthmoglobine que pour sa cible cellulaire. Par consquent, la mthmoglobine capte le
cyanure et lloigne des cellules cibles. Cest l la base de la thrapie antidotique.
Les dpresseurs du systme nerveux central (SNC). Un grand nombre de produits, les solvants
par exemple, provoquent, sous leur forme initiale ou aprs transformation en intermdiaires
ractifs, une toxicit aigu caractrise par lapparition dune sdation ou dun tat
dinconscience. On pense que ces tats sont dus linteraction du solvant avec les membranes
cellulaires du SNC qui nuit leur pouvoir de transmission des signaux lectriques et
chimiques. Bien que la sdation puisse paratre comme une forme bnigne de toxicit (on se
souviendra que les premiers anesthsiques ont t dvelopps sur ce principe), seule la dose
fait le poison. Si on administre un animal une dose suffisante par ingestion ou inhalation, il
peut mourir dun arrt respiratoire. Lorsque ladministration dun produit anesthsique
nentrane pas le dcs du sujet, ce type dintoxication est gnralement facilement rversible
si le patient est soustrait lexposition, si le produit chimique est redistribu dans lorganisme
ou sil en est limin.
Effets cutans. Les effets nocifs au niveau de la peau vont, selon la substance en cause, de
lirritation la corrosion. Les solutions acides et basiques fortes sont corrosives pour les tissus
vivants et provoquent des brlures chimiques avec cicatrices rsiduelles. La cicatrisation est
due la mort des cellules dermiques responsables de la rgnration. De plus faibles
concentrations peuvent ne provoquer quune irritation de la premire couche cutane.
La sensibilisation chimique est un autre mcanisme toxique spcifique qui peut toucher la
peau. Supposons, par exemple, que du 2,4-dinitrochlorobenzne se lie certaines protines
cutanes. Le systme immunitaire va alors considrer cette association comme un produit
tranger et activer des cellules spciales pour lliminer en scrtant des mdiateurs
(cytokines), provoquant lapparition dun exanthme ou dune dermatite (voir larticle
Limmunotoxicologie). On assiste au mme type de raction du systme immunitaire en
prsence du sumac vnneux. La sensibilisation immunitaire est trs spcifique dun produit
chimique donn et nintervient quaprs deux expositions au moins. La premire exposition
sensibilise (reconnaissance du produit chimique par les cellules), les expositions suivantes
dclenchant la rponse du systme immunitaire. La suppression du contact et un traitement
symptomatique avec des crmes anti-inflammatoires contenant des strodes suffisent
gnralement pour traiter les individus sensibiliss. Dans les cas srieux ou rfractaires, on

prescrit un immunosuppresseur systmique comme la prednisone ainsi quun traitement


topique.
Sensibilisation pulmonaire. Le diisocyanate de tolune (TDI) provoque une raction de
sensibilisation immunitaire dont la cible est le poumon. Une surexposition au TDI chez des
individus sensibles produit un dme pulmonaire (accumulation liquidienne), une
constriction bronchique et une gne respiratoire. Ces cas, srieux, ncessitent lviction du
sujet de toute exposition potentielle ultrieure. Le traitement est essentiellement
symptomatique. La sensibilisation cutane et pulmonaire obit la relation dose-rponse. En
cas de dpassement du niveau admis pour une exposition professionnelle, des effets nocifs
peuvent apparatre.
Effets oculaires. Latteinte de lil va de la simple rougeur de la couche externe (rougeur due
leau de piscine par exemple) la lsion de la corne ou de liris. Des tests dirritation
oculaire peuvent tre conduits chez les animaux lorsquon pense quils ninduiront pas de
lsion srieuse. De nombreux mcanismes provoquant une corrosion cutane peuvent
galement tre lorigine dune atteinte oculaire. Les substances corrosives pour la peau,
comme les acides forts (pH infrieur 2) et les bases fortes (pH suprieur 11,5), ne sont pas
testes sur les yeux des animaux, car elles entraneraient une corrosion et la ccit par un
mcanisme semblable celui qui provoque la corrosion cutane. Les agents tensioactifs
comme les dtergents et les surfactants peuvent quant eux provoquer une atteinte de lil
allant de lirritation la corrosion. Un groupe de substances utiliser avec prcaution est
constitu des surfactants chargs positivement (cationiques), qui peuvent provoquer des
brlures, une opacit permanente de la corne et une vascularisation (formation de vaisseaux
sanguins). Un autre produit chimique, le dinitrophnol, est connu pour causer la formation de
cataracte; celle-ci parat tre relie une concentration du produit au niveau de lil, ce qui
constitue un exemple de distribution pharmacocintique spcifique.
Bien que la liste ci-dessus soit loin dtre exhaustive, elle doit permettre au lecteur davoir un
aperu des divers mcanismes possibles de toxicit aigu.
Les mcanismes de toxicit subchronique et chronique
Certains produits chimiques ont un mcanisme de toxicit diffrent selon quils sont
administrs dose unitaire leve ou de manire rpte dose plus faible quoique toxique.
Lorsquon donne une forte dose unitaire, le sujet peut ne plus tre en mesure de dtoxifier et
dexcrter le produit chimique et ragir diffremment que si on lui administrait des doses
rptes plus faibles. Le cas de lalcool illustre le propos: de fortes doses dalcool donnent
lieu des effets, principalement au niveau du systme nerveux central, alors que des doses
rptes plus faibles provoquent des lsions hpatiques.
Inhibition des anticholinestrasiques. La plupart des pesticides organophosphors, par
exemple, ont une faible toxicit chez les mammifres tant quils ne sont pas activs par voie
mtabolique, essentiellement au niveau hpatique. Les organophosphors agissent
principalement en inhibant lactylcholinestrase (AChE) dans le cerveau et le systme
nerveux priphrique. LAChE est lenzyme normale qui inactive le neurotransmetteur
actylcholine. Une faible inhibition de lAChE sur une priode prolonge nentrane pas
deffets nocifs. Par contre, lorsque le niveau dexposition est important, lactylcholine en
excs cause une stimulation excessive du systme nerveux cholinergique du fait de la forte
inactivation de lAChE. Celle-ci sassortit de nombreux symptmes, dont larrt respiratoire,
qui peut voluer vers le dcs en cas dabsence de traitement. Pour y remdier, on administre
principalement de latropine, qui bloque les effets de lactylcholine, et du chlorure de
pralidoxime, qui ractive lAChE inhibe. On voit la lumire de cet exemple que la
connaissance du mcanisme daction biochimique des organophosphors permet la fois de
comprendre le mcanisme de leur toxicit et de proposer un traitement spcifique.

Activation mtabolique. De nombreux produits chimiques, dont le ttrachlorure de carbone, le


chloroforme, lactylaminofluorne, les nitrosamines et le paraquat, sont activs par voie
mtabolique en radicaux libres ou intermdiaires ractifs inhibant ou perturbant le
fonctionnement normal de la cellule. La mort cellulaire survient dans les expositions fortes
concentrations (voir larticle La lsion et la mort cellulaires). Bien que lon ne connaisse
pas encore les interactions et les cibles cellulaires spcifiques, tous les organes o a lieu
lactivation de ces toxiques (foie, reins et poumons) constituent des cibles potentielles. Plus
prcisment, des cellules spcifiques lintrieur de ces organes sont doues de la proprit
dactiver ou de dtoxifier ces intermdiaires de faon plus ou moins efficace, proprit dont
va dpendre la sensibilit intracellulaire de lorgane. Il est donc important de connatre la
pharmacocintique de ces produits, particulirement les voies mtaboliques, si lon veut
comprendre leur mcanisme daction.
Mcanismes du cancer. Le cancer est une pathologie trs htrogne, et, bien que lon
commence comprendre certains de ses mcanismes grce aux techniques de biologie
molculaire mises au point depuis 1980, il reste encore beaucoup apprendre. On sait de
faon certaine que le cancer se dveloppe selon un processus multitapes et que des gnes
critiques sont lorigine de diffrents types de cancer. Des lsions de lADN (mutations
somatiques) au niveau de ces gnes critiques peuvent tre responsables dune sensibilit
accrue ou de lapparition de lsions cancreuses (voir larticle La toxicologie gntique).
Lexposition divers produits chimiques dorigine naturelle (par exemple, viande ou poisson
cuisins) ou synthtique (telle que la benzidine utilise comme colorant), ou des agents
physiques (rayonnements ultraviolets, radon du sol, rayonnements gamma dorigine mdicale
ou industrielle) contribue la formation de mutations gniques somatiques. Cependant, il
existe des substances naturelles ou synthtiques (les antioxydants) et des processus de
rparation de lADN qui ont un rle protecteur et assurent lhomostasie. Il est clair que la
gntique est un facteur important dans le cancer, ainsi que le dmontrent certaines maladies
gntiques comme le xeroderma pigmentosum, o labsence de mcanisme de rparation de
lADN accrot sensiblement le risque de cancer cutan aprs une exposition aux
rayonnements ultraviolets.
Mcanismes au niveau des organes reproducteurs. Comme pour le cancer, on sait quil existe
de nombreux mcanismes de toxicit touchant la reproduction ou le dveloppement, mais ces
mcanismes sont encore mal lucids. On sait que des virus (par exemple, la rubole),
certaines infections bactriennes ou des mdicaments (comme le thalidomide, la vitamine A)
ont un effet nocif sur le dveloppement. Une tude de Khera (1991), rapporte par Carney
(1994), a dmontr chez lanimal que les anomalies du dveloppement lies lthylneglycol
sont dues la formation de mtabolites acides chez la mre. Lthylneglycol est mtabolis
en mtabolites acides, en particulier les acides glycolique et oxalique. Les effets sur le
placenta et le ftus paraissent en relation avec ce processus de toxification mtabolique.
Conclusion
Notre propos, dans cet article, tait dexaminer quelques mcanismes toxiques connus et de
dmontrer la ncessit de poursuivre ce type dtudes. Il est noter, cependant, que la
connaissance de ces mcanismes nest pas absolument ncessaire pour assurer la protection de
la sant humaine et lhygine de lenvironnement. Elle permet toutefois aux professionnels de
mieux prvoir et grer la toxicit. Les moyens utiliser pour lucider les mcanismes de
toxicit dpendent la fois des connaissances de la communaut scientifique et de la rflexion
des dcideurs en matire de sant publique.
LA LSION ET LA MORT CELLULAIRES
Benjamin F. Trump et Irene K. Berezesky

La science mdicale dans son ensemble a pour vocation de prvenir la mort cellulaire, par
exemple dans linfarctus du myocarde, les traumatismes et les tats de choc, ou de la
provoquer, en particulier pour lutter contre les maladies infectieuses ou le cancer. Il est par
consquent essentiel de comprendre la nature des phnomnes qui entrent en jeu et leur
mcanisme. On distingue deux types de mort cellulaire: la mort accidentelle due, par
exemple, des agents toxiques ou une ischmie, et la mort programme qui survient au
cours du dveloppement embryonnaire, comme lors de la formation des doigts ou de la
rsorption de la queue du ttard.
La lsion et la mort cellulaires sont donc des vnements importants aussi bien en physiologie
quen physiopathologie. La mort cellulaire physiologique est un phnomne capital pendant
lembryogense et le dveloppement embryonnaire. Ltude de la mort cellulaire durant le
dveloppement a conduit dimportants progrs dans la connaissance des mcanismes de
gntique molculaire, en particulier chez les invertbrs. Chez ces animaux, la localisation
prcise et le rle des cellules entrant dans le processus de mort cellulaire ont fait lobjet de
nombreuses tudes et, grce lutilisation des techniques de mutagense, plusieurs gnes
responsables ont pu tre identifis. Dans un organe adulte, lquilibre entre mort cellulaire et
prolifration cellulaire dtermine la taille de lorgane. Dans certains organes, tels que la peau
et lintestin, les cellules se renouvellent en permanence. Pour prendre lexemple de la peau,
les cellules progressent vers la surface cutane, o elles subissent une diffrenciation
terminale et la mort cellulaire par kratinisation.
De nombreuses catgories de produits chimiques toxiques sont capables dinduire des lsions
cellulaires aigus entranant la mort. On trouve, par exemple, des agents responsables
danoxie et dischmie, tels que le cyanure de potassium; des cancrognes chimiques,
transforms en lectrophiles se liant de manire covalente aux protines des acides
nucliques; des produits chimiques oxydants, lorigine de la formation de radicaux libres
responsables de lsions oxydantes; des produits activant le complment; divers ionophores
calciques. La mort cellulaire est galement un volet important de la cancrogense chimique,
de nombreux cancrognes chimiques complets, doses carcinogniques, produisant une
ncrose et une inflammation aigus suivies dune rgnration et dune prnoplasie.
Dfinitions
La lsion cellulaire
On entend par lsion cellulaire tout phnomne ou stimulus, par exemple un produit
chimique, qui perturbe lhomostasie de la cellule et permet ainsi la survenue dun certain
nombre dvnements. Les principales manifestations des lsions ltales sont linhibition de la
synthse dATP, la rupture de lintgrit de la membrane plasmique ou le dficit en facteurs de
croissance essentiels (voir figure 33.9).
Figure 33.9 Lsion cellulaire
Les lsions ltales entranent la mort cellulaire aprs une priode qui varie en fonction de la
temprature, du type cellulaire et du stimulus; elles peuvent galement tre subltales ou
chroniques la lsion naboutissant pas dans ce cas la mort cellulaire, bien que
lhomostasie soit perturbe (Trump et Arstila, 1971; Trump et Berezesky, 1992; Trump et
Berezesky, 1995; Trump, Berezesky et Osornio-Vargas, 1981). En cas de lsion ltale, il se
produit avant la mort cellulaire une phase appele phase prltale. Si le stimulus lsionnel,
une anoxie par exemple, disparat au cours de cette priode, la cellule peut rcuprer;
cependant, aprs un certain temps (point de non-retour ou point de mort cellulaire), elle
nest plus en mesure de le faire, mais subit au contraire du fait de ce stimulus une dgradation
et une hydrolyse. Ces processus se poursuivent jusqu ce quils atteignent un tat dquilibre
physico-chimique avec lenvironnement; cette phase porte le nom de ncrose. Durant la phase

prltale, des modifications importantes se produisent qui varient en fonction du type de


cellule et de lsion; il sagit de lapoptose et de loncose.
Lapoptose
Le terme apoptose est driv du grec apo, signifiant point loign, et ptosis, chute. Il
dsigne le phnomne de condensation des cellules et de formation de protubrances la
priphrie qui survient la faveur de ce changement prltal. Ces protubrances se dtachent
ensuite et drivent ltat libre. Lapoptose se produit dans divers types de cellules la suite
de lsions toxiques diverses elles aussi (Wyllie, Kerr et Currie, 1980). Elle frappe
particulirement les lymphocytes, o elle constitue le mcanisme prdominant du
renouvellement des clones lymphocytaires. Les fragments rsultant du phnomne forment
des corps basophiles lintrieur des macrophages des ganglions lymphatiques. Dans les
autres organes, lapoptose se produit dans des cellules isoles, les fragments forms sont
rapidement limins par les cellules parenchymateuses adjacentes ou les macrophages, avant
et aprs la mort par phagocytose. Lapoptose de cellules isoles suivie dune phagocytose
nest pas associe un tat inflammatoire. Avant de mourir, les cellules apoptotiques ont un
cytosol trs dense avec des mitochondries normales ou condenses. Le rticulum
endoplasmique est normal ou lgrement dilat. La chromatine nuclaire est trs nettement
agglomre le long de lenveloppe nuclaire et autour du nuclole. Le contour nuclaire est
galement irrgulier et une fragmentation nuclaire se produit. La condensation de la
chromatine saccompagne dune fragmentation de lADN qui, dans la plupart des cas, a lieu
entre les nuclosomes, donnant un aspect caractristique llectrophorse en chelle.
Dans lapoptose, une augmentation du [Ca2+]i stimule la sortie du K+ et produit une
condensation cellulaire, mcanisme ncessitant probablement de lATP. Les lsions qui
inhibent totalement la synthse de lATP entranent donc trs vraisemblablement une
apoptose. Une augmentation prolonge du [Ca2+]i est lorigine de nombreux effets dltres,
en particulier lactivation de protases, dendonuclases et de phospholipases. Lactivation des
endonuclases est responsable de coupures dADN simple ou double brin qui, leur tour,
provoquent une augmentation du taux de p53, de la poly-ADP ribosylation et des protines
nuclaires essentielles la rparation de lADN. Lactivation des protases modifie un certain
nombre de substrats, dont lactine et les protines associes, conduisant la formation des
protubrances. La poly(ADP-ribose) polymrase (PARP), autre substrat important, inhibe la
rparation de lADN. Laugmentation du [Ca2+]i est galement associe lactivation dun
certain nombre de protines kinases, telles que la MAP kinase, la calmoduline kinase, entre
autres. Ces kinases participent lactivation de facteurs de transcription initiant la
transcription de gnes tels que c-fos, c-jun et c-myc et lactivation de la phospholipase A2,
qui provoque une augmentation de la permabilit de la membrane plasmique et des
membranes intracellulaires telles que la membrane mitochondriale interne.
Loncose
Mot driv du grec onkos, qui signifie masse, volume, loncose doit son nom au fait que,
dans ce type de perturbation prltale, la cellule commence par devenir plus volumineuse
presque immdiatement aprs une lsion (Majno et Joris, 1995) en raison dune augmentation
de la concentration en cations dans le cytosol cellulaire. Le principal cation responsable de ce
changement de volume est le sodium, normalement rgul pour maintenir le volume
cellulaire. Cependant, en absence dATP ou si la Na-ATPase du plasmalemme est inhibe, les
protines intracellulaires cessent dassurer le contrle du volume et le sodium cytosolique
augmente. Parmi les phnomnes prcoces de loncose on trouve, par consquent,
laugmentation du [Na+]i qui conduit au changement de volume cellulaire et celle du [Ca2+]i
rsultant soit dun influx partir de lespace extracellulaire, soit de sa libration partir des
lieux de stockage intracellulaires. Il en rsulte un gonflement du cytosol, du rticulum
endoplasmique, de lappareil de Golgi et la formation de vsicules aqueuses autour de la

surface cellulaire. Les mitochondries subissent dans un premier temps une condensation,
suivie ultrieurement dun gonflement trs important li aux lsions de la membrane
mitochondriale interne. Dans ce type de lsion prltale, la chromatine finit par se dgrader
aprs avoir subi une condensation; nanmoins, le profil en chelle caractristique de
lapoptose napparat pas.
La ncrose
La ncrose correspond une srie de modifications se produisant aprs la mort cellulaire
lorsque la cellule est transforme en dbris limins par la rponse inflammatoire. On
distingue deux types de ncrose: la ncrose oncotique et la ncrose apoptotique. La ncrose
oncotique se produit dans des zones tendues, lors dun infarctus du myocarde, par exemple,
ou localement dans un organe aprs une atteinte toxique de nature chimique, notamment au
niveau du tubule rnal proximal aprs administration de HgCl2. Des zones tendues dun
organe sont touches et les cellules ncrotiques induisent rapidement une raction
inflammatoire, dabord aigu puis chronique. Si lorganisme survit, on assiste dans de
nombreux organes llimination des cellules mortes et une rgnration; cest notamment
ce qui se passe dans le foie ou le rein la suite dune intoxication chimique. Au contraire, la
ncrose apoptotique se produit dordinaire dans une cellule unique et les dbris ncrotiques
sont forms lintrieur des phagocytes des macrophages ou des cellules du parenchyme
adjacent. A un stade trs prcoce, les cellules ncrotiques se caractrisent par une interruption
de la continuit de la membrane plasmique et par des densits floconneuses provenant des
protines dnatures de la matrice mitochondriale. Dans certaines formes de lsion
ninterfrant pas avec laccumulation de calcium mitochondrial, des dpts de phosphates de
calcium peuvent tre observs lintrieur des mitochondries. Dautres membranes sont elles
aussi fragmentes: le RE, les lysosomes et lappareil de Golgi. Finalement, la chromatine
nuclaire subit une lyse, rsultant de laction des hydrolases lysosomiales. Aprs la mort
cellulaire, les hydrolases lysosomiales jouent un rle important dans llimination des dbris
par lintermdiaire des cathepsines, nuclolases et lipases qui, en raison de leur pH acide
optimal, peuvent survivre au faible pH des cellules ncrotiques, les autres enzymes cellulaires
tant dnatures et inactives.
Les mcanismes
Le stimulus initial
Lors des atteintes ltales, les interactions initiales les plus habituelles conduisant la mort
cellulaire sont celles qui perturbent dune part le mtabolisme nergtique telles que
lanoxie, lischmie ou les inhibiteurs de la respiration cellulaire et, de lautre, la
glycolyse, comme cest le cas en prsence de cyanure de potassium, de monoxyde de carbone
ou diodo-actate, pour ne citer que ces produits. Nous lavons dj mentionn, les produits
inhibant le mtabolisme nergtique aboutissent loncose sils sont prsents en forte
concentration. Il est un autre type habituel de lsion initiale voluant rapidement vers la mort
cellulaire: la modification des fonctions membranaires plasmiques (Trump et Arstila, 1971;
Trump, Berezesky et Osornio-Vargas, 1981). Ce type de modification peut prendre la forme
dune lsion directe avec augmentation de la permabilit membranaire, cas observ lors de
traumatismes, dune activation du complexe C5b-C9 du complment, dune lsion mcanique
de la membrane cellulaire ou de linhibition de la pompe sodium-potassium (Na+-K+) par des
glucosides tels que louabane. Les ionophores calciques comme lionomycine ou lA23187,
en provoquant une augmentation rapide de la concentration du [Ca2+] intracellulaire, sont
galement responsables dune lsion ltale aigu. Selon les cas, le type de lsion prltale est
soit lapoptose, soit loncose.
Les voies de signalisation
Dans de nombreux types de lsion, la respiration mitochondriale et la phosphorylation
oxydative sont rapidement touches. Dans certaines cellules, il en rsulte une stimulation de la

glycolyse anarobie permettant de maintenir lATP, mais ce processus est inhib lors de
nombreuses atteintes. Un dficit en ATP prive de nombreux processus homostatiques
importants de lnergie ncessaire, en particulier, le contrle de lhomostasie ionique
intracellulaire (Trump et Berezesky, 1992; Trump, Berezesky et Osornio-Vargas, 1981). Ce
dficit provoque une augmentation rapide du [Ca2+]i, du [Na+] et du [Cl-] responsables du
gonflement cellulaire. Llvation du [Ca2+]i entrane lactivation dun certain nombre dautres
mcanismes de signalisation traits ci-aprs, dont diverses kinases, pouvant provoquer une
augmentation rapide de la transcription gnique de proto-oncognes. Laugmentation du
[Ca2+]i modifie galement le fonctionnement du cytosquelette, partiellement responsable de la
formation de protubrances et de lactivation dendonuclases, de protases et de
phospholipases. Celles-ci semblent dclencher un grand nombre des effets importants
mentionns prcdemment: lsions membranaires par suite de lactivation des protases et des
lipases, dgradation directe de lADN par activation des endonuclases et activation des
kinases telles que la MAP kinase et la calmoduline kinase, agissant comme facteurs de
transcription.
Des tudes approfondies chez les invertbrs C. elegans et Drosophila et sur cellules
humaines et animales ont permis didentifier une srie de gnes facteurs de mort. Certains de
ces gnes dinvertbrs ont leurs homologues chez les mammifres. Par exemple, le gne ced3, essentiel la mort cellulaire programme chez C. elegans, possde une activit protasique
et prsente une forte homologie avec lenzyme de conversion de linterleukine des
mammifres. Un gne trs proche appel apopane ou prICE a rcemment t identifi avec
une homologie encore plus troite (Nicholson et coll., 1995). Chez la Drosophila, le gne
facteur de mort semble tre impliqu dans un signal conduisant la mort cellulaire
programme. Les autres gnes facteurs de mort comprennent celui de la protine membranaire
Fas et limportant gne suppresseur de tumeurs quest le p53. La protine p53 est induite la
suite de lsions sur lADN et, une fois phosphoryle, elle agit comme facteur de transcription
pour dautres gnes tels que gadd45 et waf-1, impliqus dans la signalisation de la mort
cellulaire. Dautres proto-oncognes comme c-fos, c-jun et c-myc semblent galement
intervenir dans certains systmes.
De faon parallle, il existe des gnes antimort qui semblent contrecarrer les gnes facteurs de
mort. Le premier dentre eux avoir t identifi est le ced-9 chez C. elegans, homologue du
bcl-2 chez lhumain. Ces gnes agissent de manire encore inconnue pour empcher la mort
cellulaire due soit des mcanismes gntiques, soit des produits chimiques toxiques. De
rcentes dcouvertes montrent que le bcl-2 agirait comme antioxydant. Actuellement, des
efforts importants sont dploys pour mieux comprendre les gnes qui interviennent dans ces
phnomnes et pour trouver les moyens de les activer ou de les inhiber selon le cas.
LA TOXICOLOGIE GNTIQUE
R. Rita Misra et Michael P. Waalkes
La toxicologie gntique est ltude du rle des agents chimiques ou physiques dans le
processus complexe de lhrdit. Les produits chimiques gnotoxiques sont les composs
capables de modifier le matriel hrditaire des cellules vivantes. La probabilit pour quun
produit chimique provoque une lsion gntique dpend ncessairement de plusieurs
variables, en particulier le taux dexposition de lorganisme au produit chimique, sa
distribution et sa rtention une fois quil est entr dans lorganisme, lefficacit de lactivation
mtabolique ou des systmes de dtoxification au niveau des cibles tissulaires et la ractivit
du produit chimique ou de ses mtabolites avec les macromolcules critiques lintrieur des
cellules. La probabilit quune lsion gntique provoque une maladie dpend de plusieurs
facteurs: nature de la lsion, capacit de la cellule de rparer ou damplifier la lsion
gntique, possibilit pour une lsion de sexprimer et aptitude de lorganisme reconnatre et
bloquer la multiplication des cellules aberrantes.

Dans les organismes suprieurs, linformation hrditaire est organise au niveau des
chromosomes. Ceux-ci sont constitus de brins fortement condenss dADN en association
avec des protines. Dans un chromosome, chaque molcule dADN est constitue dune paire
de longues chanes, non ramifies, de sous-units nuclotidiques associes par des liens
phosphodiester joignant le carbone 5 dun dsoxyribose au carbone 3 du dsoxyribose suivant
(voir figure 33.10). De plus, lune des quatre bases nuclotidiques (adnine, cytosine, guanine
ou thymine) est attache chaque sous-unit dsoxyribose linstar des perles dun collier.
Du point de vue tridimensionnel, chaque paire de brins dADN forme une double hlice avec
lensemble des bases orientes vers lintrieur de la spirale. A lintrieur de lhlice, chaque
base est associe sa base complmentaire sur le brin dADN oppos; une liaison hydrogne
impose un appariement solide, non covalent, de ladnine avec la thymine et de la guanine
avec la cytosine (voir figure 33.10). Etant donn que la squence des bases nuclotidiques est
complmentaire sur toute la longueur de la double molcule dADN, les deux brins portent
fondamentalement la mme information gntique. En fait, lors de la rplication de lADN,
chaque brin sert de matrice pour produire un nouveau brin fils.
Figure 33.10 Organisation a) primaire; b) secondaire; c) tertiaire de l'information hrditaire
humaine
A laide de lARN et dune srie de protines, la cellule transcrit finalement linformation
code par la squence linaire des bases au niveau de rgions spcifiques de lADN (gnes) et
produit les protines essentielles la survie cellulaire ainsi qu la croissance ou la
diffrenciation normales. On peut donc dire que les nuclotides font office dalphabet
biologique servant au codage des acides amins, units chimiques de base des protines.
Lorsquil se produit une perte de nuclotides ou une insertion de nuclotides incorrects, ou
encore lorsque des nuclotides inutiles sont ajouts lors de la synthse de lADN, lerreur est
appele une mutation. On estime quil se produit moins dune mutation tous les 109
nuclotides incorpors lors de la rplication cellulaire normale. Bien que les mutations ne
soient pas ncessairement dangereuses, les altrations provoquant linactivation ou la
surexpression de gnes importants peuvent aboutir des troubles divers, dont le cancer, des
maladies hrditaires, des anomalies du dveloppement, une strilit ou la mort embryonnaire
ou prinatale. Il est rare quune mutation entrane un prolongement de la vie; ces vnements
forment la base de la slection naturelle.
Bien que certains produits chimiques ragissent directement avec lADN, la plupart ont
besoin pour cela dune activation mtabolique. Dans ce cas, des intermdiaires lectrophiles
tels que les poxydes ou les ions carbonium sont les responsables ultimes des lsions induites
sur divers sites nuclophiles du matriel gntique (voir figure 33.11). En dautres
circonstances, la gnotoxicit est due des sous-produits de linteraction dune substance
avec les lipides, les protines intracellulaires ou loxygne.
Figure 33.11 Bioactivation du: a) benzo(a)pyrne; b) de la N-nitrosodimthylamine
En raison de leur relative abondance dans les cellules, les protines sont la cible la plus
frquente dune interaction toxique. Cependant, la modification de lADN est plus inquitante
tant donn le rle central que joue cette molcule dans la rgulation de la croissance et de la
diffrenciation tout au long des gnrations cellulaires successives.
Au niveau molculaire, les composs lectrophiles attaquent les atomes doxygne et dazote
sur lADN. La figure 33.12 montre les sites les plus susceptibles de subir de telles
modifications. Bien que les atomes doxygne des groupements phosphates de la chane
principale de lADN soient galement la cible des modifications chimiques, on estime que les

lsions des bases sont plus intressantes du point de vue biologique, car elles sont des
lments dinformation essentiels de la molcule dADN.
Figure 33.12 Sites primaires des lsions sur l'ADN induites chimiquement
Les composs comportant une partie lectrophile ont un pouvoir gnotoxique du fait de la
formation de mono-adduits sur lADN. De la mme faon, les composs ayant deux ou
plusieurs parties ractives peuvent ragir avec deux centres nuclophiles diffrents et
entraner ainsi la formation de ponts intra- ou intermolculaires dans le matriel gntique
(voir figure 33.13). Les pontages interbrins ADN-ADN et les pontages ADN-protine sont
particulirement cytotoxiques puisquils peuvent causer un blocage total de la rplication de
lADN. Pour des raisons videntes, une cellule morte ne peut pas subir de mutation ou devenir
noplasique. Les agents gnotoxiques peuvent aussi provoquer des cassures de lpine dorsale
phosphodiester, ou entre les bases et les sucres (produisant des sites apuriniques ou
apyrimidiques) sur lADN. De telles cassures peuvent tre le rsultat direct de la ractivit
chimique sur un site lsionnel, ou se produire lors de la rparation dun des types de lsions
de lADN mentionns ci-dessus.
Figure 33.13 Types de lsions sur le complexe prot&eacuteine-ADN
Les trente quarante dernires annes ont t marques par la mise au point de toute une srie
de techniques pour surveiller les dommages gntiques induits par divers produits chimiques.
Ces essais sont dtaills dans une autre section du prsent chapitre, ainsi que dans dautres
chapitres de lEncyclopdie.
Les erreurs de rplication des microlsions telles que les mono-adduits, les sites
apuriniques ou apyrimidiques ou les cassures simple brin peuvent conduire finalement des
substitutions de paires de bases nuclotidiques, ou linsertion ou la dltion de fragments
polynuclotidiques courts dans lADN chromosomique. Au contraire, les macrolsions,
telles que les adduits volumineux, les pontages ou les cassures double brin, peuvent
dclencher lacquisition, la perte ou le rarrangement de fragments relativement importants de
chromosomes. Quoi quil en soit, les consquences peuvent tre dvastatrices pour
lorganisme, chacun de ces vnements pouvant conduire la mort cellulaire, la perte dune
fonction ou une transformation cellulaire maligne. On ne sait pratiquement rien de la faon
dont les lsions de lADN induisent un cancer. On pense actuellement quil se produit une
activation inapproprie de proto-oncognes tels que myc et ras, ou linactivation de gnes
suppresseurs de tumeur rcemment identifis tels que le p53. Lexpression anormale de lun
de ces gnes dtruit les mcanismes cellulaires normaux assurant le contrle de la
prolifration ou de la diffrenciation cellulaires.
Les tudes exprimentales montrent pour la plupart que le dveloppement dun cancer aprs
une exposition des composs lectrophiles est un vnement relativement rare. Une des
explications en est que la cellule est doue de la capacit intrinsque de reconnatre et de
rparer lADN endommag ou que les cellules dont lADN est endommag ne sont pas
capables de survivre. Durant la rparation, la base endommage, le nuclotide ou la courte
squence de nuclotides autour du site ls sont supprims et, grce au brin oppos qui sert de
matrice, une nouvelle squence dADN est synthtise et mise en place. Pour tre efficace, la
rparation de lADN doit seffectuer avant la division cellulaire et avoir une grande prcision,
pour viter toute possibilit de propager une mutation.
Des tudes cliniques ont montr que les sujets prsentant des dficits hrditaires des
mcanismes de rparation de lADN manifestent frquemment un cancer ou des anomalies du
dveloppement un ge prcoce (voir tableau 33.4). De tels exemples soulignent le lien

vident entre les lsions de lADN et la pathologie humaine. De la mme faon, des agents
favorisant la prolifration cellulaire (tels que lactate de ttradcanoylphorbol) intensifient
souvent la cancrogense. Pour ces composs, la probabilit leve de transformation
noplasique est sans doute la consquence du temps plus court dont dispose la cellule pour
effectuer une rparation correcte de son ADN.
Tableau 33.4 Maladies prsentant un terrain hrditaire cancreux dans lesquelles des
anomalies de rparation de l'ADN paraissent intervenir
Syndrome
Symptmes
Phnotype cellulaire
Ataxie
tlangiectasique

Atteinte neurologique
Immunodficience
Forte incidence de lymphome

Hypersensibilit aux rayonnements


ionisants et certains agents
alkylants
Troubles de la rplication de lADN
endommag (par rparation trop
rapide de lADN)

Syndrome de
Bloom

Anomalies du dveloppement
Lsions cutanes sur zones exposes
Forte incidence de tumeurs du
systme immunitaire et de lappareil
gastro-intestinal

Frquence leve daberrations


chromosomiques
Rparation dfectueuse des cassures
au niveau de lADN

Anmie de Fanconi Retard de croissance


Forte incidence de leucmie

Hypersensibilit aux agents


intercalants
Frquence leve des aberrations
chromosomiques
Rparation dfectueuse des
pontages au niveau de lADN

Cancer du clon
hrditaire non
polyposique

Forte incidence de cancer du clon

Dfaut de rparation des erreurs


dappariement au niveau de lADN
(erreur dinsertion de nuclotide
lors de la rplication)

Xeroderma
pigmentosum

Forte incidence dpithlioma sur les


zones cutanes exposes
Atteinte neurologique (dans de
nombreux cas)

Hypersensibilit la lumire UV et
de nombreux cancrognes
chimiques
Anomalies de rparation par
excision ou de la rplication de
lADN endommag

Les thories les plus anciennes sur linteraction des produits chimiques avec lADN datent des
tudes conduites lors de la mise au point du gaz moutarde comme gaz de combat. Par la suite,
les efforts dploys pour identifier les agents anticancreux susceptibles de bloquer
slectivement la rplication des cellules tumorales ont peu peu permis de mieux comprendre
cette interaction. Lintrt accru du public pour les risques environnementaux a incit
poursuivre les recherches sur les mcanismes et les consquences de linteraction dun produit
chimique avec le matriel gntique. Le tableau 33.5 recense certains des produits chimiques
ayant un pouvoir gnotoxique.
Tableau 33.5 Exemples de produits chimiques gnotoxiques pour des cellules humaines
Classe du produit
Exemple
Origine de
Lsion gnotoxique probable
chimique
lexposition

Aflatoxines

Aflatoxine B1

Aliments
contamins

Adduits de grande taille sur


lADN

Amines aromatiques 2Environnement


Actylaminofluorne

Adduits de grande taille sur


lADN

Quinones aziridine

Mitomycine C

Chimiothrapie
anticancreuse

Mono-adduits, pontages
interbrins et cassures simple
brin dans lADN

Hydrocarbures
chlors

Chlorure de vinyle

Environnement

Mono-adduits de lADN

Mtaux et composs
mtalliques

Cisplatine

Chimiothrapie
anticancreuse

Pontages intrabrin et interbrins


dans lADN

Composs du nickel

Environnement

Mono-adduits et cassures
simple brin dans lADN

Moutardes azotes

Cyclophosphamide

Chimiothrapie
anticancreuse

Mono-adduits et pontages
interbrins dans lADN

Nitrosamines

NAliments
Nitrosodimthylamine contamins

Mono-adduits de lADN

Hydrocarbures
aromatiques
polycycliques

Benzo(a)pyrne

Adduits de grande taille sur


lADN

Environnement

LIMMUNOTOXICOLOGIE
Joseph G. Vos et Henk van Loveren
Le systme immunitaire a pour fonction de protger lorganisme contre les agents infectieux
qui peuvent lenvahir et dassurer une surveillance immunologique vis--vis des cellules
tumorales naissantes. Il constitue une premire ligne de dfense non spcifique capable
damorcer des ractions effectrices et une voie spcifique acquise dans laquelle les
lymphocytes et les anticorps possdent une spcificit leur permettant de reconnatre
lantigne puis dy ragir.
Limmunotoxicologie est la discipline qui tudie les vnements conduisant des effets nocifs
dus linteraction des xnobiotiques avec le systme immunitaire. Ces vnements
indsirables peuvent rsulter: 1) dun effet direct ou indirect du xnobiotique (ou de son
produit de biotransformation) sur le systme immunitaire; 2) dune rponse immunologique
de lhte au compos ou son (ses) mtabolite(s), ou aux antignes de lhte modifis par le
compos ou ses mtabolites (Berlin et coll., 1987).
Lorsque le systme immunitaire agit comme cible passive des agressions chimiques, il peut
offrir une rsistance moindre aux infections et certaines formes de noplasie, ou tre le sige
dun drglement ou dune stimulation immunitaire pouvant aggraver une allergie ou une
auto-immunit. Lorsquil rpond la spcificit antignique du xnobiotique ou lantigne
de lhte modifi par le toxique, la toxicit sexprime par des allergies ou des maladies autoimmunes.
Des modles animaux, dont certains sont valids, ont t mis au point pour tudier
limmunosuppression induite par un produit chimique (Burleson, Munson et Dean, 1995;
PISSC, 1996). Lors dune valuation, on procde par tapes pour faire une slection parmi les
trs nombreux tests disponibles. Gnralement, lors de la premire tape, on identifie les
immunotoxiques potentiels. En cas de rponse positive, on passe ltape suivante qui

consiste confirmer et mieux caractriser les perturbations observes. La troisime tape


porte spcifiquement sur le mcanisme daction du produit. Des tudes de ce type effectues
sur des animaux de laboratoire ont permis de constater que plusieurs xnobiotiques agissent
comme immunosuppresseurs.
Les informations dont on dispose sur les perturbations de la fonction immunitaire chez
lhumain par des produits chimiques environnementaux ne sont pas trs abondantes
(Descotes, 1986; NRC, 1992). Lutilisation dindicateurs dimmunotoxicit nest pas trs
rpandue dans les tudes cliniques et pidmiologiques concernant leffet des produits
chimiques sur la sant. De telles tudes ne sont pas frquentes, et quand bien mme on en
effectue, leur interprtation ne permet pas toujours de tirer des conclusions sans quivoque,
notamment parce quil savre impossible de contrler les expositions. Par consquent,
jusqu prsent, les dcisions concernant le danger et lestimation du risque sont fondes sur
des valuations de limmunotoxicit chez les rongeurs, avec extrapolation lhumain.
Les ractions dhypersensibilit, notamment lasthme allergique et leczma de contact, sont
des problmes de sant professionnelle importants dans les pays industriels (Vos, Younes et
Smith, 1995). Le phnomne de sensibilisation de contact a t tudi en premier chez le
cobaye (Andersen et Maibach, 1985); jusqu rcemment, ctait lespce de choix pour les
tests prdictifs. De nombreux tests sur cet animal sont disponibles, les plus frquemment
employs tant le test de maximisation et le patch test de Buehler. Les tests sur cobaye et des
mthodes plus rcentes mises au point chez la souris, comme le test de ldme de loreille
ou celui des ganglions lymphatiques locaux, fournissent au toxicologue les outils pour valuer
le risque de sensibilisation cutane. Sagissant de la sensibilisation au niveau de lappareil
respiratoire, la situation est trs diffrente. Actuellement, il nexiste pas encore de mthode
bien valide ou largement accepte pour identifier les produits chimiques allergnes ce
niveau, bien que des progrs aient t accomplis sur des modles animaux faisant appel au
cobaye et la souris.
Des donnes recueillies chez ltre humain montrent que des agents chimiques, des
mdicaments en particulier, peuvent provoquer des maladies auto-immunes (Kammller,
Bloksma et Seinen, 1989). Il existe un certain nombre de modles animaux de maladies autoimmunes humaines, notamment pour des pathologies spontanes (comme le lupus
rythmateux systmique chez la souris New Zealand Black), ou des phnomnes autoimmuns induits par immunisation exprimentale avec un auto-antigne ragissant de faon
croise (arthrite induite par ladjuvant H37Ra chez le rat Lewis). Ces modles sont utiliss
pour lvaluation prclinique de mdicaments immunosuppresseurs. Trs peu dtudes ont fait
appel ces modles pour tablir si un xnobiotique potentialise lauto-immunit induite ou
congnitale. En ralit, les modles animaux dont on peut se servir pour tudier la capacit
des produits chimiques dinduire des maladies auto-immunes sont trs peu nombreux. Un
modle employ de faon limite est le test du ganglion poplit chez la souris. Comme cest le
cas chez ltre humain, les facteurs gntiques jouent un rle capital dans le dveloppement
des maladies auto-immunes chez les animaux de laboratoire, ce qui limite la valeur prdictive
de ces tests.
Le systme immunitaire
Le systme immunitaire a pour principale fonction dassurer la dfense contre les bactries,
virus, parasites, champignons et cellules noplasiques. Cette dfense est confie divers types
cellulaires et leurs mdiateurs solubles dans une harmonie finement rgle. La dfense de
lhte peut tre grossirement divise en rsistance non spcifique ou inne et en immunit
spcifique ou acquise sous la dpendance des lymphocytes (Roitt, Brostoff et Male, 1989).
Les composants du systme immunitaire sont prsents dans lensemble de lorganisme (Jones
et coll., 1990). Le compartiment lymphocytaire se retrouve au niveau des organes lymphodes

(voir figure 33.14). La moelle osseuse et le thymus sont classs comme organes lymphodes
primaires ou centraux; les organes lymphodes secondaires ou priphriques comprennent les
ganglions lymphatiques, la rate et le tissu lymphode situ le long de surfaces scrtoires telles
que les tractus respiratoire et gastro-intestinal, encore appel tissu lymphode associ aux
muqueuses (TLAM). Environ la moiti des lymphocytes de lorganisme sont localiss dans le
TLAM, quel que soit le moment considr. De plus, la peau est un organe important pour
linduction de rponses immunitaires contre les antignes prsents son niveau. Les cellules
pidermiques de Langerhans jouent un rle important dans ce processus du fait de leur rle
dans la prsentation de lantigne.
Figure 33.14 Organes et tissus lymphodes primaires et secondaires
Les cellules phagocytaires de la ligne monocyte/macrophage, ou systme phagocytaire
mononucl (SPM), se trouvent dans les organes lymphodes ainsi que dans des sites
extraganglionnaires; les phagocytes extraganglionnaires comprennent les cellules de Kupffer
du foie, les macrophages alvolaires au niveau pulmonaire et les macrophages msangiaux
respectivement aux niveau pulmonaire et rnal et les cellules gliales dans le cerveau. Les
leucocytes polynuclaires sont localiss principalement dans le sang et la moelle osseuse,
mais saccumulent aux sites dinflammation.
La dfense non spcifique
Une premire ligne de dfense contre les micro-organismes est assure par une barrire
physique et chimique: la peau et le tractus respiratoire ou digestif. Cette barrire est seconde
par des mcanismes de protection non spcifiques comprenant les cellules phagocytaires
(macrophages et leucocytes polynuclaires), capables de tuer les agents pathognes, et les
cellules tueuses naturelles, qui peuvent lyser les cellules tumorales et les cellules infectes par
des virus. Le systme du complment et certains inhibiteurs microbiens (par exemple, le
lysozyme) prennent galement part la rponse immunitaire.
Limmunit spcifique
Aprs un premier contact entre lhte et un agent pathogne, on assiste une srie de rponses
immunitaires spcifiques. Ce qui caractrise cette seconde ligne de dfense cest quelle est
capable de distinguer les dterminants antigniques, ou pitopes, des agents pathognes grce
des rcepteurs prsents la surface des lymphocytes B et T. Aprs interaction avec les
antignes spcifiques, la cellule portant ce rcepteur est stimule, ce qui provoque sa
prolifration et sa diffrenciation et aboutit un clone de cellules filles propres lantigne
responsable. Les rponses immunitaires spcifiques compltent la dfense non spcifique
oppose aux agents pathognes en stimulant lefficacit des rponses non spcifiques.
Limmunit spcifique a pour caractristique fondamentale de crer une mmoire. Une
seconde exposition au mme antigne provoque une rponse mieux rgule, plus rapide et
plus intense.
Le gnome nest pas mme de contenir les codes de lensemble des rcepteurs antigniques
dont il faut disposer pour reconnatre les nombreux antignes pouvant tre rencontrs. Le
rpertoire de spcificit se dveloppe selon un processus de rarrangement gnique qui est le
pur fruit du hasard. Diverses spcificits apparaissent, dont certaines sont indsirables
lorsquelles sont diriges contre les composants du soi. Un processus de slection au niveau
du thymus (cellules T) ou de la moelle osseuse (cellules B) intervient pour liminer ces
spcificits indsirables.
La fonction effectrice immunitaire et la rgulation homostasique de la rponse immunitaire
dpendent dune srie de produits solubles, les cytokines. Synthtises et scrtes par les
lymphocytes et dautres types cellulaires, les cytokines ont des effets pliotropes sur les

rponses immunitaires et inflammatoires. La rponse immunitaire ne peut se faire sans une


coopration entre les diffrentes populations cellulaires. Cette coopration prend diffrentes
formes: rgulation des rponses des anticorps, afflux des cellules et des molcules
immunitaires aux sites inflammatoires, initiation des rponses en phase aigu, contrle de la
fonction cytotoxique des macrophages et nombreux autres processus essentiels la rsistance
de lhte. Ces processus sont influencs par les cytokines agissant individuellement ou en
association et, bien souvent, en dpendent.
Limmunit spcifique comporte deux voies: limmunit mdiation humorale et limmunit
mdiation cellulaire.
Immunit mdiation humorale. Dans cette voie humorale, les lymphocytes B sont stimuls
aprs la reconnaissance de lantigne par les rcepteurs de surface. Les rcepteurs
antigniques sur les lymphocytes B sont des immunoglobulines (Ig). Les cellules B matures
(cellules plasmatiques) commencent produire des immunoglobulines spcifiques de
lantigne, qui agissent comme anticorps au niveau srique et au niveau des surfaces
muqueuses. On distingue cinq catgories principales dimmunoglobulines: 1) lIgM,
immunoglobuline pentamre, capacit optimale dagglutination, la premire tre produite
aprs une stimulation antignique; 2) lIgG, principale immunoglobuline dans la circulation,
qui peut passer dans le placenta; 3) lIgA, immunoglobuline scrtoire pour la protection des
surfaces muqueuses; 4) lIgE, immunoglobuline fixe sur les mastocytes ou les granulocytes
basophiles, implique dans les ractions dhypersensibilit immdiate; 5) lIgD, dont la
fonction essentielle est identique celle dun rcepteur sur les lymphocytes B.
Immunit mdiation cellulaire. La voie cellulaire du systme immunitaire spcifique est
sous la dpendance des lymphocytes T. Ces cellules possdent galement des rcepteurs
antigniques sur leurs membranes. Elles reconnaissent lantigne sil est prsent par les
cellules possdant lantigne (CPA) dans le contexte de lhistocompatibilit antignique. Ces
cellules prsentent donc cette limite qui vient sajouter leur spcificit antignique. Les
cellules T, qui agissent comme cellules auxiliaires dans diverses rponses immunitaires (dont
la rponse humorale), interviennent dans le recrutement des cellules inflammatoires et
peuvent, en tant que cellules T cytotoxiques, tuer les cellules cibles aprs reconnaissance
spcifique de lantigne.
Les mcanismes de limmunotoxicit
Limmunosuppression
La rsistance de lhte dpend de lintgrit fonctionnelle du systme immunitaire, ce qui
suppose que les composants cellulaires et molculaires orchestrant la rponse immunitaire
soient prsents en quantit suffisante et sous une forme oprationnelle. Les
immunodficiences congnitales chez lhumain se traduisent souvent par des anomalies de
certaines souches de lignes cellulaires qui ne produisent pas du tout de cellules immunitaires
ou en produisent en nombre insuffisant. Par analogie avec les maladies immunodficientes
humaines congnitales et acquises, limmunosuppression induite par un produit chimique peut
simplement tre due au fait que le nombre de cellules fonctionnelles nest pas aussi lev quil
devrait ltre (PISSC, 1996). Ces deux phnomnes, absence de lymphocytes ou prsence en
nombre rduit, peut avoir des effets plus ou moins graves sur le statut immunitaire. Certains
tats immunodficients ou une immunosuppression svre, tels quon peut les observer en
transplantation ou aprs un traitement cytostatique, sont responsables en particulier dune
incidence leve dinfections opportunistes ou de pathologies noplasiques. Les infections
peuvent tre bactriennes, virales, fongiques ou dues des protozoaires, le type prdominant
de linfection dpendant de limmunodficience en cause. Lexposition des produits
chimiques immunosuppresseurs de lenvironnement peut tre lorigine de formes plus
discrtes dimmunosuppression, plus difficiles dtecter, pouvant conduire, par exemple,
une incidence accrue dinfections telles que la grippe ou le simple rhume.

Etant donn la complexit du systme immunitaire et sa trs grande diversit de cellules, de


mdiateurs et de fonctions constituant un rseau labor et interactif, les produits
immunotoxiques ont de multiples possibilits dexercer un effet. On ne connat pas encore
parfaitement la nature des lsions initiales induites par de nombreux produits chimiques
immunotoxiques, mais on dispose chaque jour dun peu plus dinformations sur les
modifications immunobiologiques lorigine dune dpression de la fonction immunitaire,
surtout grce aux tudes sur les animaux de laboratoire (Dean et coll., 1994). Des effets
toxiques peuvent se produire au niveau des fonctions critiques ci-aprs (nous illustrons le
propos grce quelques produits immunotoxiques):
dveloppement et multiplication des diffrentes populations de cellules souches (le
benzne a des effets immunotoxiques au niveau des cellules souches qui provoquent
une lymphocytopnie);
prolifration des diverses cellules lymphodes et mylodes ainsi que des tissus de
soutien dans lesquels ces cellules deviennent matures et fonctionnent (les composs
organostanneux immunotoxiques suppriment la prolifration lymphocytaire dans le
cortex thymique par cytotoxicit directe; la thymotoxicit de la 2,3,7,8-ttrachlorodibenzo-p-dioxine (TCDD) et des composs voisins est probablement due un trouble
fonctionnel des cellules pithliales thymiques, plutt qu une toxicit directe vis-vis des thymocytes);
processus de captation, de transformation et de prsentation de lantigne par les
macrophages et les autres cellules prsentatrices de lantigne (une des cibles du 7,12dimthylbenz(a)anthracne [DMBA] et du plomb se situe au niveau de la prsentation
de lantigne par les macrophages; les cellules de Langerhans prsentatrices
dantigne constituent une cible des rayonnements ultraviolets);
fonction rgulatrice des cellules T auxiliaires et T suppressives (la fonction des
cellules T auxiliaires est altre par les organostanneux, laldicarb, les biphnyles
polychlors (PCB), la TCDD et le DMBA; la fonction des cellules T suppressives est
rduite par un traitement au cyclophosphamide faible dose);
production des diverses cytokines ou interleukines (le benzo(a)pyrne supprime la
production dinterleukine-1; les rayonnements ultraviolets altrent la production des
cytokines par les kratinocytes);
synthse des diverses classes dimmunoglobulines (la synthse des IgM et des IgG est
supprime aprs un traitement aux PCB et loxyde de tributyltain, et augmente
aprs une exposition lhexachlorobenzne);
rgulation et activation du complment (altres par la TCDD);
fonction cytotoxique des cellules T (le 3-mthylcholanthrne (3-MC), le DMBA et la
TCDD suppriment lactivit cytotoxique des cellules T);
fonction des cellules tueuses NT (lactivit NT pulmonaire est supprime par lozone
(lactivit NT splnique tant altre par le nickel);
fonctions chimiotactiques et cytotoxiques des macrophages et des leucocytes
polynuclaires (lozone et le dioxyde dazote perturbent lactivit phagocytaire des
macrophages alvolaires).
Lallergie
On peut dire de lallergie quil sagit dun effet indsirable pour la sant rsultant de
linduction excessive dune rponse immunitaire spcifique. Lorsque des ractions
dhypersensibilit se produisent sans la participation du systme immunitaire, on parle de
pseudo-allergie. Dans le contexte de limmunotoxicologie, lallergie est due une rponse
immunitaire spcifique des produits chimiques ou des mdicaments. Le pouvoir de

sensibilisation dun produit chimique chez lindividu est gnralement li sa capacit de


liaison covalente aux protines de lorganisme. Les ractions allergiques peuvent tre de
plusieurs types, qui diffrent selon le mcanisme immunologique sous-jacent et la vitesse de
la raction. On distingue quatre types principaux de ractions allergiques: les ractions
dhypersensibilit de type I, sous la dpendance danticorps IgE, avec une apparition des
symptmes quelques minutes aprs exposition de lindividu sensibilis; les ractions
dhypersensibilit de type II, dues laltration ou la destruction des cellules htes par des
anticorps, les symptmes apparaissant dans ce cas en quelques heures; les ractions
dhypersensibilit de type III, ou phnomne dArthus, sont galement sous la dpendance
danticorps, mais vis--vis dun antigne soluble et rsultent de laction locale ou systmique
de complexes immuns; les ractions de type IV ou dhypersensibilit retarde sont
commands par les lymphocytes T et, chez un sujet sensibilis, les symptmes se dveloppent
de vingt-quatre quarante-huit heures aprs lexposition.
Les deux types dallergie chimique les plus importants pour la sant en milieu de travail sont
la sensibilisation de contact ou allergie cutane et lallergie respiratoire.
Hypersensibilit de contact. Un grand nombre de produits chimiques peuvent tre lorigine
dune sensibilisation de contact. Aprs une exposition topique dun sujet sensible un
allergne chimique, il se produit une rponse lymphocytaire T dans les ganglions
lymphatiques de drainage. Au niveau de la peau, lallergne ragit directement ou
indirectement avec les cellules pidermiques de Langerhans qui transportent le produit
chimique vers les ganglions lymphatiques et le prsentent sous une forme immunogne aux
lymphocytes T sensibles. Les lymphocytes T activs par lallergne prolifrent, provoquant
une expansion clonale. Lindividu est alors sensibilis et rpondra une seconde exposition de
la peau au mme produit chimique par une raction immunitaire plus agressive, responsable
dun eczma allergique de contact. La raction inflammatoire cutane caractristique de ce
type deczma rsulte de la reconnaissance de lallergne au niveau du tissu cutan par des
lymphocytes T spcifiques. Ces lymphocytes deviennent actifs, scrtent des cytokines et
provoquent laccumulation locale dautres leucocytes mononuclaires. Les symptmes se
dveloppent dans les vingt-quatre quarante-huit heures suivant lexposition dun individu
sensible: leczma allergique de contact reprsente donc une forme dhypersensibilit de type
retard. Les causes habituelles de leczma allergique de contact sont des produits chimiques
organiques (tels que le 2,4-dinitrochlorobenzne), des mtaux (tels que le nickel et le chrome)
ou des produits dorigine vgtale (comme lurushiol du sumac vnneux).
Hypersensibilit respiratoire. Lhypersensibilit respiratoire est gnralement considre
comme une raction dhypersensibilit de type I. Cependant, les ractions de phase tardive et
les symptmes chroniques associs lasthme paraissent impliquer des processus
immunitaires de type cellulaire (type IV). Les symptmes aigus associs lallergie
respiratoire sont dus aux anticorps IgE, dont la production est provoque par lexposition du
sujet sensible lallergne chimique inducteur. Les anticorps IgE sont distribus par voie
systmique et se lient, par lintermdiaire des rcepteurs membranaires, aux mastocytes
prsents dans les tissus vasculariss, en particulier dans le tractus respiratoire. Lorsque le
mme produit est inhal de nouveau, une raction dhypersensibilit respiratoire se dclenche.
Lallergne se lie une protine et se fixe en mme temps aux anticorps IgE ports par les
mastocytes. Suivent alors une dgranulation des mastocytes et la scrtion des mdiateurs de
linflammation tels que lhistamine et les leucotrines. Ces mdiateurs sont responsables de la
bronchoconstriction et de la vasodilatation, donnant lieu aux symptmes de lallergie
respiratoire: asthme ou rhinite. Parmi les produits chimiques connus pour induire chez
lhumain une hypersensibilit respiratoire, il faut citer les anhydrides dacides (comme
lanhydride trimellitique), certains diisocyanates (TDI, par exemple), les sels de platine et des

colorants. Lexposition chronique au bryllium est galement connue pour provoquer une
pathologie pulmonaire dhypersensibilit.
Lauto-immunit
On peut dire de lauto-immunit quil sagit de la stimulation de rponses immunitaires
spcifiques diriges contre les antignes endognes du soi. Lauto-immunit induite peut
rsulter dune perturbation de lquilibre des lymphocytes T rgulateurs, ou de la liaison dun
xnobiotique avec des composants tissulaires normaux les rendant immunognes (altration
du soi). Les mdicaments et produits chimiques connus pour induire fortuitement ou
exacerber une maladie auto-immune chez les individus sensibles sont des composs de faible
poids molculaire (100 500 daltons) gnralement considrs comme non immunognes. Le
mcanisme dune maladie auto-immune aprs exposition un produit chimique est en grande
partie inconnu. La maladie peut tre provoque directement par un anticorps circulant,
rsulter indirectement de la formation de complexes immuns, ou tre la consquence dune
raction immunologique de type cellulaire. Il sagit selon toute vraisemblance dun
mcanisme multiple. On connat mieux le mcanisme pathogne des troubles hmolytiques
immunitaires induits par les mdicaments:
le mdicament peut se lier la membrane rythrocytaire et ragir avec un anticorps
dirig contre lui;
le mdicament peut altrer la membrane rythrocytaire de sorte que le systme
immunitaire considre la cellule comme trangre;
le mdicament et son anticorps spcifique forment des complexes immuns qui
adhrent la membrane rythrocytaire pour provoquer une lsion;
la sensibilisation des hmaties survient la suite de la production dauto-anticorps
antihmaties.
Des rponses de type auto-immunitaire ont t observes en prsence de produits chimiques
divers et surtout de mdicaments (Kammller, Bloksma et Seinen, 1989). En milieu de travail,
lexposition des produits chimiques peut parfois conduire des syndromes de caractre
auto-immunitaire, celle des produits comme le chlorure de vinyle monomre, le
trichlorothylne, le perchlorothylne, les rsines poxy ou la poussire de silice pouvant
provoquer des syndromes du type sclrodermie. Lexposition lhydrazine a t associe un
syndrome sapparentant au lupus rythmateux aigu dissmin. On a aussi constat que
lexposition au TDI pouvait induire un purpura thrombocytopnique et que les mtaux lourds
tels que le mercure avaient provoqu des cas de glomrulonphrite complexes immuns.
Lvaluation du risque chez lhumain
Lvaluation du statut immunitaire chez lhumain seffectue en tudiant des points de vue
quantitatif et fonctionnel, principalement sur le sang priphrique, les immunoglobulines et le
complment, ainsi que les sous-populations leucocytaires. Ces mthodes sont gnralement
identiques celles que lon utilise pour tudier limmunit mdiation humorale et cellulaire,
ou la rsistance non spcifique, chez des malades prsentant une immunodficience
congnitale. Pour les tudes pidmiologiques (sur des populations exposes
professionnellement), les paramtres doivent tre slectionns sur la base de leur valeur
prdictive dans une population humaine, de leur validation par des modles animaux et des
indicateurs biologiques correspondants (voir tableau 33.6). La stratgie de dpistage des effets
immunotoxiques aprs une exposition (accidentelle) des polluants environnementaux ou
dautres toxiques dpend davantage des circonstances, comme le type dimmunodficience
attendu, le temps coul entre lexposition et lvaluation du statut immunitaire, le degr
dexposition et le nombre dindividus exposs. Lvaluation du risque immunotoxique dun
xnobiotique particulier chez lhumain est une dmarche extrmement difficile quand elle
nest pas impossible, en raison surtout de la prsence dun mlange de facteurs dorigine

endogne ou exogne qui interviennent dans la rponse des individus une lsion toxique.
Cest vrai en particulier pour les tudes sur le rle dune exposition chimique dans les
maladies auto-immunes, o les facteurs gntiques jouent un rle dterminant.
Tableau 33.6 Marqueurs immunologiques: classification des tests
Catgorie de test
Caractristiques
Tests spcifiques
Tests gnraux de base inclure
dans un groupe de tests

Indicateurs de sant et de ltat


fonctionnel des organes

Ure sanguine, glycmie, etc.

Tests immunologiques de base


inclure dans un groupe de tests

Indicateurs gnraux du statut


immunitaire
Cot relativement faible
Mthodes danalyse normalises
Rsultats interprtables
cliniquement lorsquils se situent
en dehors de la gamme de
rfrence

Numration sanguine complte


Taux sriques dIgG, IgA, IgM
Phnotypes des marqueurs de
surface des principales souspopulations lymphocytaires

Tests spcialiss inclure en


fonction des observations
cliniques, des expositions
suspectes ou des rsultats des
tests antrieurs

Indicateurs de fonctions ou
dvnements immunitaires
spcifiques
Cot variable
Mthodes danalyse normalises
Rsultats interprtables
cliniquement lorsquils sont en
dehors de la gamme de rfrence

Gnotype dhistocompatibilit
Anticorps antiagents infectieux
IgE srique totale
IgE spcifique dallergne
Auto-anticorps
Tests dhypersensibilit cutane
Explosion oxydative
granulocytaire
Histopathologie (biopsie
tissulaire)

Recherche
faire en comparaison avec une
population tmoin
Ncessit dun protocole dtude
bien dfini

Indicateurs de fonctions ou
dvnements immunitaires
gnraux ou spcifiques
Cot variable, souvent lev
Mthodes danalyse
gnralement non normalises
Rsultats hors de la gamme de
rfrence souvent impossibles
interprter du point de vue
clinique

Tests de stimulation in vitro


Marqueurs de surface
dactivation cellulaire
Concentrations sriques de
cytokines
Etudes de clonage (anticorps,
cellulaire, gntique)
Tests de cytotoxicit

Comme on dispose rarement des donnes humaines dont on aurait besoin, on value la plupart
du temps les risques dimmunosuppression induite par un produit chimique chez lhumain en
sappuyant sur des tudes animales. Dans le cas des xnobiotiques, on dtermine leur
potentiel immunotoxique surtout grce des tudes contrles chez les rongeurs. Les tudes
dexposition in vivo sont, cet gard, la meilleure solution en raison de la nature
multifactorielle complexe du systme immunitaire et des rponses immunes. Les tudes in
vitro sont de plus en plus utilises pour lucider un mcanisme dimmunotoxicit. De plus,
ltude des effets dun produit sur des cellules dorigine humaine et animale permet dacqurir
des donnes utiles pour comparer les espces. Ces donnes peuvent alors tre utilises dans
une approche de type paralllogramme afin damliorer lvaluation du risque. Si on
dispose de donnes pour trois des cts du paralllogramme (animal in vivo, animal et humain

in vitro), il est alors plus facile de prvoir le rsultat pour le dernier, cest--dire le risque chez
lhumain.
Lorsque lvaluation dun risque dimmunosuppression induite par un produit chimique
repose uniquement sur des donnes animales, on a la possibilit pour extrapoler lhumain
demployer une technique qui consiste appliquer un facteur dincertitude la NOAEL (No
Observed Adverse Effect Level (niveau sans effet nocif observ)). On peut se fonder pour cela
sur des paramtres tablis dans des modles pertinents, tels que les essais de rsistance de
lhte et lvaluation in vivo des ractions dhypersensibilit et de production danticorps.
Dans lidal, il faut valider la pertinence de cette dmarche dvaluation du risque par des
tudes chez lhumain. De telles tudes devraient associer lidentification et le dosage du
toxique, des donnes pidmiologiques et une valuation du statut immunitaire.
Pour prvoir une hypersensibilit de contact, on dispose depuis les annes soixante-dix de
modles sur cobaye. Bien que sensibles et reproductibles, ces tests ont des limites, car ils
reposent sur une valuation subjective; des mthodes plus rcentes et mieux quantifies
dveloppes chez la souris permettent de pallier cette carence. Sagissant de lhypersensibilit
due aux produits chimiques induite par inhalation ou ingestion dallergnes, il conviendrait de
mettre au point des tests et dvaluer leur valeur prdictive chez lhumain. Lorsquon se
propose dtablir des niveaux de scurit pour des allergnes potentiels en milieu de travail, il
ne faut pas perdre de vue que lallergie est un phnomne biphasique: il y a la phase de
sensibilisation et la phase de dclenchement. Ainsi, la concentration requise pour provoquer
une raction allergique chez un individu pralablement sensibilis est beaucoup plus faible
que celle qui est ncessaire chez un individu neuf du point de vue immunologique, mais
sensible.
Comme il nexiste pratiquement pas de modles animaux pour prvoir lauto-immunit due
aux produits chimiques, il serait bon de semployer en mettre au point. Il faut pour cela
apprendre mieux connatre lauto-immunit induite par les produits chimiques chez
lhumain, en particulier grce ltude de marqueurs gntiques et immunologiques
permettant didentifier les individus sensibles. Les sujets exposs aux mdicaments induisant
une auto-immunit offrent cette possibilit.
LA TOXICOLOGIE AU NIVEAU DES ORGANES CIBLES
Ellen K. Silbergeld
Ltude et la caractrisation des proprits toxiques des produits chimiques et autres agents
reposent souvent sur les organes et systmes atteints. Dans ce chapitre, nous tudierons de
manire approfondie le systme immunitaire et le gne. Si nous avons port notre choix sur
ces deux cibles, cest parce quelles constituent pour lune un modle de cible systmique
complexe, pour lautre un modle de cible molculaire. Le lecteur qui souhaite des
informations dtailles sur la toxicologie au niveau des organes cibles pourra se reporter des
traits de toxicologie comme ceux de Casarett et Doull, ou encore de Hayes. Le Programme
international sur la scurit des substances chimiques (PISSC) a galement publi plusieurs
documents de rfrence classs par systme.
Les tudes de toxicologie au niveau des organes cibles sont entreprises dordinaire au vu des
informations sur les effets toxiques spcifiques dune substance, obtenues partir de donnes
pidmiologiques ou dtudes gnrales de toxicit aigu ou chronique, ou dans le but de
protger certaines fonctions, par exemple la reproduction ou le dveloppement ftal. Dans
certains cas, les autorits comptentes exigent que des tests spcifiques de toxicit sur des
organes cibles soient effectus: cest le cas aux Etats-Unis o la loi sur les pesticides exige
deffectuer une tude de neurotoxicit (voir larticle Lapproche amricaine de lvaluation
du risque des toxiques pour la reproduction et des agents neurotoxiques), ou au Japon o des
dispositions concernant les tests de mutagnicit sont prvues dans la loi sur le contrle des

substances chimiques (voir larticle Les principes didentification du risque: lapproche


japonaise).
Comme nous lexpliquons dans larticle Lorgane cible et les effets critiques,
lidentification dun organe critique consiste dceler lorgane ou le systme o un effet nocif
sobserve en premier, ou celui qui rpond le premier aux doses ou aux expositions les plus
faibles. Cette information est ensuite exploite pour concevoir des investigations
toxicologiques spcifiques ou des tests de toxicit mieux orients capables de mettre en
vidence les signes de toxicit les plus sensibles au niveau de lorgane cible. Les tudes de
toxicologie au niveau de ces organes peuvent galement servir prciser les mcanismes
daction, ncessaires lvaluation du risque (voir larticle Lapproche amricaine de
lvaluation du risque des toxiques pour la reproduction et des agents neurotoxiques).
Les mthodes dtude de la toxicologie au niveau des organes cibles
Ltude des organes cibles peut se faire en exposant des organismes intacts et en analysant trs
prcisment la fonction et lhistopathologie de lorgane cible, ou en maintenant en culture in
vitro pendant des priodes plus ou moins longues des cellules, des coupes tissulaires ou
dorganes entiers (voir larticle Les mcanismes de la toxicologie: introduction et
concepts). Il arrive dans certains cas que lon dispose de tissus dorigine humaine pour ce
type dtudes de toxicit. Il est alors possible de valider les hypothses dextrapolation
interespces. Cependant, on ne doit pas oublier que de telles tudes ne fournissent pas
dinformations sur les toxicocintiques respectives.
En gnral, les tudes de toxicit au niveau des organes cibles comportent toutes les tapes
suivantes: examen histopathologique dtaill de lorgane cible, y compris post mortem, poids
tissulaire, examen des tissus aprs fixation; tudes biochimiques de voies critiques dans
lorgane cible, telles que les systmes enzymatiques importants; tudes fonctionnelles de
laptitude de lorgane et des constituants cellulaires assumer des fonctions spcifiques
mtaboliques ou autres; tude des indicateurs biologiques dexposition et des effets prcoces
dans les cellules de lorgane cible.
Ltude des organes cibles peut aussi avoir pour finalit de chercher mieux connatre leur
physiologie, leur biochimie et leur biologie molculaire. Or, comme la synthse et la scrtion
de protines de faible poids molculaire sont des aspects importants de la fonction rnale, les
tudes de nphrotoxicit sy intressent souvent (PISSC, 1991). De mme, tant donn que les
communications intercellulaires constituent un processus fondamental du fonctionnement du
systme nerveux, les tudes des organes cibles en neurotoxicit comportent des mesures
neurochimiques et biophysiques dtailles de la synthse, de la captation, du stockage, de la
libration et de la liaison au rcepteur des neurotransmetteurs ainsi que des mesures
lectrophysiologiques des modifications des potentiels de membrane qui leur sont associes.
Comme on sefforce par tous les moyens de ne plus employer les animaux de laboratoire ou
de moins les utiliser, on semploie mettre au point des mthodes dtudes in vitro de toxicit
au niveau des organes cibles. Des progrs considrables ont t accomplis en ce sens avec les
toxiques des fonctions de reproduction (Heindell et Chapin, 1993).
En rsum, les tudes de toxicit sur les organes cibles sont gnralement envisages comme
des tudes spcialises de toxicologie. Le choix des organes cibles pour ce type dvaluation
est orient par les rsultats des tests de dpistage, tels que les tests de toxicit aigu ou
subaigu utiliss dans les pays de lOCDE et de lUnion europenne; certains organes cibles
et systmes sont a priori candidats pour ce type dinvestigation en raison de leur intrt dans
la prvention deffets nocifs pour la sant.
LES MTHODES EN TOXICOLOGIE
LES INDICATEURS BIOLOGIQUES
Philippe Grandjean

Un indicateur biologique, ou marqueur biologique, est un paramtre mesurable prsent dans


un systme biologique, par exemple lorganisme humain. Ce paramtre est considr comme
tant le reflet, ou le marqueur, de ltat gnral de lorganisme ou de son esprance de vie.
Dans le domaine de la sant au travail, les indicateurs biologiques sont dordinaire utiliss
comme indicateurs de ltat de sant ou du risque de survenue dune pathologie.
Les indicateurs biologiques servent aussi bien dans les tudes in vitro que dans les tudes in
vivo, lhumain pouvant tre inclus dans celles-ci. On distingue habituellement trois types
dindicateurs biologiques: les indicateurs dexposition, deffet ou de sensibilit/rceptivit
(voir tableau 33.7). Il est noter que certains indicateurs sont difficilement classables.
Tableau 33.7 Exemples d'indicateurs biologiques d'exposition ou d'effet utiliss en
toxicologie professionnelle
Echantillon
Mesure
Objectif
Indicateurs biologiques dexposition
Tissu adipeux

Dioxine

Exposition la dioxine

Sang

Plomb

Exposition au plomb

Os

Aluminium

Exposition laluminium

Air expir

Tolune

Exposition au tolune

Cheveux

Mercure

Exposition au mthylmercure

Srum

Benzne

Exposition au benzne

Urine

Phnol

Exposition au benzne

Indicateurs biologiques deffet


Sang

Carboxyhmoglobine Exposition au monoxyde de carbone

Hmaties

Protoporphyrine-zinc Exposition au plomb

Srum

Cholinestrase

Exposition aux organo-phosphors

Urine

Microglobulines

Exposition un nphrotoxique

Leucocytes

Adduits lADN

Exposition un mutagne

Sous rserve dun degr de validit acceptable, les indicateurs biologiques peuvent avoir
plusieurs finalits. A lchelle individuelle, un indicateur biologique peut servir valider ou
rcuser un diagnostic dintoxication ou deffets indsirables lis un produit chimique. Chez
un sujet en bonne sant, il peut traduire une hypersensibilit individuelle lexposition un
produit chimique donn et permettre ainsi de prvoir le risque et denvisager des mesures de
prvention. Dans un groupe de travailleurs exposs, certains indicateurs biologiques
dexposition peuvent tre utiliss pour valuer si la rglementation antipollution est
effectivement respecte ou encore dans quelle mesure les efforts de prvention gnrale sont
efficaces.
Les indicateurs biologiques dexposition
Un indicateur biologique dexposition peut impliquer un xnobiotique (ou son mtabolite)
prsent dans lorganisme, un produit dinteraction entre le xnobiotique (ou son mtabolite) et
un constituant endogne, ou un autre paramtre li lexposition. Plus frquemment, les
indicateurs biologiques dexposition pour des produits stables tels que les mtaux consistent
mesurer la concentration de ces produits dans des chantillons appropris: sang, srum ou
urine. Dans le cas des produits chimiques volatils inhals avec lair contamin, on peut

valuer leur concentration dans lair exhal. Si le produit est mtabolis dans lorganisme, on
peut choisir un ou plusieurs mtabolites comme indicateurs biologiques dexposition, les
mtabolites tant souvent doss dans des chantillons urinaires.
Les techniques modernes danalyse permettent de sparer les isomres ou les homologues de
produits organiques, de dterminer la spciation des produits mtalliques ou les isotopes de
certains lments. Des mthodes trs perfectionnes permettent dtablir les modifications que
la fixation de produits chimiques ractifs fait subir la structure de lADN ou dautres
macromolcules. Ces nouvelles techniques dtude des indicateurs biologiques sont sans nul
doute appeles se dvelopper, car elles permettent damliorer les limites de dtection et la
validit analytique.
Des progrs trs prometteurs ont t raliss dans le cas des produits chimiques mutagnes.
Ces produits, qui sont des intermdiaires ractifs, peuvent former des adduits avec les
macromolcules, telles que protines ou ADN. Les adduits lADN sont mis en vidence
dans les leucocytes ou les biopsies tissulaires. Des fragments spcifiques dADN peuvent tre
excrts dans lurine. Ainsi, une exposition loxyde dthylne est responsable de
llimination urinaire de N-(2-hydroxythyl)guanine, du fait de la raction de loxyde
dthylne avec lADN, aprs excision des bases endommages. Certains adduits peuvent ne
pas tre directement relis une exposition prcise. Par exemple, la 8-hydrox-2dsoxyguanosine, tmoin dun processus oxydatif sur lADN, doit sa formation plusieurs
produits chimiques, la plupart dentre eux agissant galement comme inducteurs de
peroxydation lipidique.
Dautres macromolcules sont galement susceptibles dtre modifies par formation
dadduits ou par oxydation. En particulier, les produits intermdiaires ractifs peuvent
entraner la formation dadduits lhmoglobine que lon peut utiliser comme indicateurs
biologiques dexposition. Lavantage est quon peut obtenir une quantit importante
dhmoglobine partir dun chantillon sanguin et que, comme les hmaties ont une dure de
vie de quatre mois, les adduits forms avec les acides amins de lhmoglobine permettent
dvaluer lexposition totale durant cette priode.
Les adduits peuvent tre mesurs par des techniques sensibles telles que la chromatographie
liquide haute performance ou des mthodes immunologiques. En gnral, ces mthodes
analytiques rcentes sont coteuses et ncessitent dtre amliores et valides. Une meilleure
sensibilit est obtenue en utilisant la technique du postmarquage au 32P, qui est une mesure non
spcifique des lsions de lADN. Toutes ces techniques trouvent leur application en
surveillance biologique et ont du reste t employes dans de nombreuses tudes. Cependant,
on a besoin de mthodes analytiques plus simples et plus sensibles. Etant donn la spcificit
limite de certaines de ces mthodes pour les expositions de faible niveau, certains facteurs
tels que le tabagisme peuvent avoir une incidence significative sur les rsultats des mesures et
poser de ce fait des difficults dinterprtation.
Lexposition des produits mutagnes ou des composs mtaboliss en produits mutagnes
peut tre value grce lanalyse des urines. Un chantillon prlev chez un sujet expos est
mis incuber avec une souche bactrienne chez laquelle une mutation ponctuelle spcifique
sexprime dune manire facile mesurer. Si des produits chimiques mutagnes sont prsents
dans lchantillon urinaire, un taux accru de mutations sobserve chez la bactrie.
Les indicateurs biologiques dexposition doivent tre valus en tenant compte de la variation
de la dure de lexposition et des relations entre les divers compartiments. Ainsi, lchelle de
temps reprsente par lindicateur biologique, autrement dit la mesure dans laquelle
lindicateur biologique peut reflter les expositions passes ou la charge corporelle
accumule, doit tre dtermine partir de donnes toxicocintiques afin dinterprter le
rsultat. En particulier, on doit prendre en compte la faon dont lindicateur biologique reflte

lintensit de la rtention dun produit au niveau des organes cibles spcifiques. Les
chantillons sanguins sont souvent utiliss dans les tudes dindicateur biologique; cependant,
le sang priphrique nest gnralement pas considr comme un compartiment en soi, bien
quil serve de transporteur entre les compartiments. La relation entre la concentration
sanguine et le niveau atteint dans les diffrents organes varie de manire importante en
fonction du produit chimique, de la dure de lexposition et du temps coul depuis la fin de
lexposition.
Ce type de raisonnement est parfois utilis pour classer un indicateur biologique comme
indicateur de dose (totale) absorbe ou comme indicateur de dose efficace (cest--dire de la
quantit qui a atteint le tissu cible). Par exemple, lexposition un solvant donn peut tre
value par le dosage de sa concentration sanguine un moment donn aprs lexposition. Ce
dosage reflte alors la quantit de solvant absorbe par lorganisme. En raison de sa pression
de vapeur, une partie est exhale. Pendant quil circule par voie sanguine, le solvant ragit
avec divers composants de lorganisme et subit ventuellement une dgradation enzymatique.
Ces processus mtaboliques peuvent tre estims en dosant les acides mercapturiques produits
par conjugaison avec le glutathion. Lexcrtion cumule de ces acides refltera mieux la dose
efficace que la concentration sanguine.
Des vnements de la vie, tels que la reproduction ou la snescence, sont susceptibles de
modifier la distribution dun produit chimique. Ainsi, au cours de la grossesse, de nombreux
produits chimiques peuvent franchir la barrire placentaire, provoquant ainsi lexposition du
ftus. La lactation entrane lexcrtion de produits chimiques liposolubles, ce qui diminue la
rtention chez la mre et augmente la captation chez lenfant. En cas de perte de poids ou
dostoporose, les produits chimiques stocks peuvent tre librs et causer une augmentation
et une prolongation de lexposition endogne des organes cibles. Dautres facteurs, pour
lesquels on dispose dindicateurs biologiques de sensibilit, peuvent modifier labsorption, le
mtabolisme, la rtention et la distribution dun produit chimique chez un individu (voir ciaprs).
Les indicateurs biologiques deffet
Un indicateur biologique deffet peut tre un composant endogne, une mesure de capacit
fonctionnelle ou tout autre indice de ltat ou de lquilibre de lorganisme ou dun organe,
modifi par une exposition. Les indicateurs biologiques deffet sont gnralement des indices
danomalies prcliniques.
Ils peuvent tre spcifiques ou non. Les indicateurs biologiques spcifiques peuvent tre
utiliss des fins prventives, car ils permettent de relier un effet biologique donn une
exposition dfinie. Les indicateurs biologiques non spcifiques ne permettent pas de relier un
effet une cause particulire, car ils peuvent reflter leffet global intgr en relation avec des
expositions composites. Ces deux types dindicateurs biologiques peuvent ainsi tre trs utiles
en sant au travail.
Il nexiste pas de distinction claire entre les indicateurs biologiques dexposition et les
indicateurs biologiques deffet. On peut dire par exemple que la formation dadduits est plus
un indicateur deffet quun indicateur dexposition. Cependant, les indicateurs biologiques
deffet correspondent en gnral des altrations de fonctions au niveau de cellules, de tissus
ou mme de lorganisme dans son ensemble. Certains chercheurs considrent comme
indicateurs biologiques deffet des modifications importantes, comme une hpatomgalie chez
les animaux de laboratoire exposs ou une diminution de croissance chez les enfants. En ce
qui concerne la sant au travail, les indicateurs biologiques deffet devraient tre limits
ceux qui permettent de rvler des modifications biochimiques subcliniques ou rversibles
(une inhibition enzymatique, par exemple). Lindicateur biologique deffet le plus
frquemment utilis est certainement linhibition des cholinestrases provoque par certains

insecticides, nommment les organophosphors et les carbamates. Dans la plupart des cas, cet
effet est totalement rversible et linhibition de lenzyme reflte lexposition globale ce
groupe particulier dinsecticides.
Certaines expositions nentranent pas une inhibition enzymatique, mais plutt une induction.
Cest le cas de plusieurs enzymes appartenant la famille du cytochrome P450 (voir larticle
Les dterminants gntiques de la rponse toxique) qui peuvent tre induites la suite de
lexposition certains solvants et hydrocarbures aromatiques polycycliques. Comme ces
enzymes sexpriment surtout dans des tissus dont il est difficile dobtenir une biopsie,
lactivit enzymatique est dtermine in vivo de faon indirecte en administrant au sujet un
produit quelles mtabolisent puis en dosant le produit dgrad dans lurine ou le plasma.
Dautres expositions peuvent induire la synthse dune protine protectrice. Le meilleur
exemple de ce phnomne est sans doute celui de la mtallothionine, qui fixe le cadmium et
assure lexcrtion de ce mtal; lexposition au cadmium est lun des facteurs qui provoquent
une augmentation de lexpression du gne de la mtallothionine. Il existe dautres protines
protectrices du mme type, mais elles nont pas encore t suffisamment tudies pour tre
considres comme des indicateurs biologiques. Parmi les candidats possibles, on trouve les
protines dites de stress, appeles anciennement protines du choc thermique. Ces protines
sont produites par toute une gamme dorganismes en rponse diverses expositions nocives.
Les lsions oxydatives peuvent tre values par le dosage de la concentration srique du
malondialdhyde ou celle de lthane dans lair expir. De mme, lexcrtion urinaire de
protines de faible poids molculaire, lalbumine par exemple, peut tre utilise comme
indicateur biologique prcoce dune lsion rnale. Plusieurs paramtres utiliss en routine
clinique (comme les taux dhormones ou les activits enzymatiques sriques) peuvent aussi
constituer des indicateurs biologiques prcieux. Cependant, beaucoup de ces paramtres ne
sont pas suffisamment sensibles pour permettre la dtection dune lsion prcoce.
Un autre groupe dindicateurs deffet concerne les effets gnotoxiques (modifications de
structure des chromosomes). Ces effets peuvent tre mis en vidence par examen au
microscope des leucocytes en priode de division. Des lsions importantes sur les
chromosomes aberrations chromosomiques ou formation de micronoyaux sont en effet
observables au microscope. Ces lsions peuvent galement tre observes laide dun
colorant ajout aux cellules pendant leur division. On peut ainsi visualiser lexposition un
agent gnotoxique par une augmentation de lchange de colorant entre les deux chromatides
de chaque chromosome (test des changes de chromatides surs (ECS)). Si les aberrations
chromosomiques sont le signe dun risque accru de dvelopper un cancer, le test des ECS est
de signification moins nette.
La gnotoxicit peut aussi tre value grce une technique plus complexe reposant sur
lexistence de mutations ponctuelles dans des cellules somatiques, notamment les leucocytes
ou les cellules pithliales de la muqueuse buccale. Une mutation sur un locus spcifique peut
rendre les cellules capables de crotre dans un milieu de culture contenant un produit
chimique normalement toxique (par exemple, la 6-thioguanine). On peut galement valuer le
produit spcifique dun gne (comme les concentrations sriques ou tissulaires
doncoprotines codes par des oncognes particuliers). Bien entendu, ces mutations refltent
une lsion gnotoxique globale et ne permettent pas dattribuer la cause une exposition
particulire. Ces mthodes ne sont pas encore suffisamment au point pour avoir une utilisation
pratique en sant au travail, mais de rapides progrs dans cette voie de recherche laissent
penser quelles seront disponibles dans quelques annes.
Les indicateurs biologiques de sensibilit ou de rceptivit
Un indicateur de sensibilit, hrditaire ou induite, est un indice permettant de dterminer si
un sujet est particulirement sensible leffet dun xnobiotique ou dun groupe de

xnobiotiques. La sensibilit dorigine gntique a suscit beaucoup dintrt, alors que


dautres facteurs sont au moins aussi importants. Lhypersensibilit peut tre la consquence
dun facteur hrditaire, tre lie lenvironnement ou encore tre constitutionnelle.
Laptitude mtaboliser certains produits chimiques varie dun individu lautre en fonction
de facteurs gntiques (voir larticle Les dterminants gntiques de la rponse toxique).
Plusieurs enzymes importantes paraissent tre contrles par un seul gne. Par exemple,
loxydation des xnobiotiques est assure principalement par une famille denzymes
appartenant au cytochrome P450. Dautres enzymes se chargent de rendre les mtabolites plus
hydrosolubles par conjugaison (par exemple, la N-actyltransfrase et la -glutathion-Stransfrase). Lactivit de ces enzymes, qui est contrle gntiquement, varie
considrablement. Comme mentionn prcdemment, lactivit peut tre value en
administrant une petite dose dun mdicament puis en mesurant la quantit de mtabolite dans
lurine. Certains des gnes correspondants sont maintenant bien identifis, et on dispose de
techniques pour dterminer le gnotype. Dimportantes tudes suggrent que le risque de
dvelopper certaines formes de cancer est en relation avec la capacit de mtaboliser des
xnobiotiques. De nombreuses questions restent encore sans rponse, ce qui limite lheure
actuelle lutilisation de ces indicateurs biologiques de sensibilit en sant au travail.
Dautres facteurs hrditaires, comme les dficiences en alpha1-antitrypsine ou en glucose-6phosphate dshydrognase, sont galement responsables dune diminution des mcanismes de
dfense, expliquant une hypersensibilit certaines expositions.
Pour lessentiel, la recherche relative la sensibilit sest intresse la prdisposition
gntique alors que dautres facteurs qui jouent pourtant un rle ont t ngligs. Ainsi, les
individus ayant une maladie chronique peuvent tre plus sensibles une exposition
professionnelle. De mme, lorsquune maladie en cours ou une exposition antrieure un
produit toxique ont provoqu des lsions organiques subcliniques, la rsistance une nouvelle
exposition toxique est assurment diminue. Des paramtres biochimiques peuvent dans ce
cas tre utiliss comme indicateurs biologiques de sensibilit. Les rponses allergiques
constituent sans doute le meilleur exemple dhypersensibilit. Lorsquun individu est
sensibilis une exposition particulire, on peut dceler chez lui des anticorps spcifiques au
niveau srique. Mme si le sujet nest pas devenu sensible, les expositions actuelles ou
antrieures font augmenter le risque de dvelopper un effet indsirable sil est soumis une
exposition professionnelle.
Lvaluation de leffet additif des expositions des mlanges en milieu professionnel
reprsente un dfi de taille. De plus, les habitudes personnelles et la prise de mdicaments
peuvent accrotre la sensibilit. Par exemple, la fume de tabac contient gnralement une
quantit importante de cadmium. Ainsi, en cas dexposition professionnelle au cadmium, un
gros fumeur qui a accumul dans son organisme des quantits importantes de ce mtal
prsente un risque accru de dvelopper une maladie rnale lie au cadmium.
Lapplication en sant au travail
Les indicateurs biologiques sont extrmement utiles en recherche toxicologique et beaucoup
peuvent tre utiliss en surveillance biologique. Il faut cependant en connatre les limites. De
nombreux indicateurs biologiques ont t tudis uniquement chez les animaux de laboratoire.
Un modle toxicocintique valable pour une espce ne lest pas ncessairement chez
lhumain, et avant de procder des extrapolations ce dernier, il est indispensable de
confirmer les rsultats par des tudes sur des volontaires. On doit prendre aussi en compte les
variations individuelles dues des facteurs gntiques ou constitutionnels.
Dans certains cas, les indicateurs biologiques dexposition sont impossibles utiliser (comme
dans le cas des produits chimiques ayant une dure de vie in vivo trs courte). Certains de ces
produits peuvent saccumuler et provoquer des lsions dans des organes inaccessibles aux

techniques de routine, par exemple le systme nerveux. La distribution dun produit dans
lorganisme, et de ce fait la mesure et linterprtation dun indicateur biologique, peuvent
aussi varier en fonction de la voie dexposition. Ainsi, une exposition crbrale par voie
olfactive directe chappe toute possibilit de dtection par indicateurs biologiques
dexposition. Sagissant des indicateurs biologiques deffet, beaucoup dentre eux ne sont pas
spcifiques, pour des raisons trs diverses, dont le mode de vie. Linterprtation doit tre
extrmement prudente lheure actuelle en ce qui concerne les indicateurs biologiques de
sensibilit, car on ne connat pas encore lincidence des gnotypes individuels sur la sant.
En sant au travail, lindicateur biologique idal devrait satisfaire plusieurs exigences. Le
recueil des chantillons et lanalyse doivent tout dabord tre simples et fiables. Les
indicateurs doivent tre normaliss pour assurer une qualit analytique optimale en tenant
compte des conditions spcifiques qui sont trs variables. Parmi les difficults surmonter, il
faut citer la prparation du sujet, la procdure dchantillonnage, la manipulation des
chantillons et la technique de dosage; celle-ci comporte des facteurs techniques, comme le
calibrage ou les procdures dassurance qualit, et des variables individuelles telles que le
niveau dinstruction et la formation des techniciens de laboratoire.
En ce qui concerne la validit analytique et la traabilit des rsultats, les matriaux de
rfrence doivent tre choisis de faon pertinente, avec des concentrations appropries en
substances toxiques ou en mtabolites significatifs. Les laboratoires chargs de lvaluation
des indicateurs utiliss en surveillance biologique ou des fins diagnostiques doivent
employer des procdures analytiques bien documentes, aux performances bien dfinies, et
archiver les rsultats pour quil soit facile de les vrifier. Laspect financier des matriaux de
rfrence utiliss pour assurer la qualit ne doit pas non plus tre oubli. La qualit des
rsultats obtenus et lusage qui en est fait doivent tre mis en quilibre avec le surcot de
lassurance qualit, qui inclut les matriaux de rfrence, la main-duvre et le matriel.
Un indicateur biologique doit satisfaire une autre exigence: il doit tre spcifique, du moins
dans les conditions de ltude et pour un type particulier dexposition. Lindicateur biologique
choisi doit permettre dtablir une relation claire avec le degr dexposition pour viter tout
problme dinterprtation. De plus, si on veut pouvoir interprter correctement un rsultat, il
est essentiel de bien connatre son intrt diagnostique (autrement dit, la traduction de la
valeur de lindicateur biologique en intensit de risque ventuel pour la sant). Dans ce
domaine, les mtaux servent de paradigme pour les indicateurs biologiques. Les recherches
rcentes ont montr combien la relation dose-rponse est complexe et subtile et combien il est
difficile de dterminer des niveaux sans effet et, par consquent, de fixer une exposition
admissible. Ces recherches ont nanmoins eu le mrite dindiquer le type dinvestigation et
les amliorations ncessaires pour parvenir des informations utiles. Les relations
quantitatives entre exposition et effets nocifs pour la sant ne sont pas encore connues pour la
plupart des produits organiques; dans de nombreux cas, les organes cibles primaires ne sont
pas tablis de faon certaine. De plus, lvaluation des donnes sur la toxicit et les
concentrations des indicateurs biologiques est souvent complique parce que le sujet nest pas
expos un seul produit, mais un mlange de substances.
Avant quon puisse utiliser un indicateur biologique en sant au travail, il faut rpondre un
certain nombre dexigences. Tout dabord, il faut que lindicateur reflte uniquement une
modification subclinique et encore rversible. Ensuite, tant donn que les rsultats dun
indicateur biologique peuvent tre interprts en terme de risque pour la sant, on doit
disposer de moyens de prvention et tre en mesure de les appliquer si les rsultats indiquent
quil est ncessaire de rduire lexposition. Enfin, lutilisation pratique dun indicateur
biologique doit tre considre comme acceptable du point de vue de lthique.

Les rsultats des mesures effectues en hygine du travail peuvent tre compares aux limites
dexposition applicables. De mme, les rsultats des indicateurs biologiques dexposition ou
deffet peuvent tre compars aux limites dactivit biologique, parfois assimiles des
indices biologiques dexposition. Ces limites doivent tre fondes sur les avis clairs de
cliniciens et de scientifiques des disciplines concernes, et les administrateurs responsables,
en leur qualit de gestionnaires du risque, devraient prendre en compte les facteurs
thiques, sociaux, culturels et conomiques pertinents. La base scientifique doit, si possible,
inclure les relations dose-rponse compltes par des informations sur les variations de
sensibilit dans la population soumise au risque. Dans certains pays, les travailleurs et des
reprsentants de la socit civile participent de faon active ltablissement des normes,
surtout lorsque les donnes scientifiques sont insuffisantes. Lune des principales incertitudes
rside dans la dfinition des effets nocifs viter. Peut-on dire, par exemple, que la formation
dadduits en tant quindicateur biologique dexposition reprsente un tel effet nocif (cest-dire un indicateur biologique deffet) qui doit tre prvenu? Il est difficile du point de vue de
lthique de dcider sil est dfendable de fixer, pour un mme produit, des limites diffrentes
dans le cas dune exposition fortuite ou dune exposition professionnelle.
Linformation concernant lutilisation des indicateurs biologiques doit tre transmise dans le
cadre de la relation mdecin-patient aux individus suivis. Il faut tenir compte en particulier
des questions thiques que posent les indicateurs biologiques exprimentaux qui ne sont pas
interprtables actuellement du point de vue des risques rels pour la sant. Ainsi, en dehors
des valeurs normales de la plombmie, les directives qui existent en ce qui concerne
linterprtation des indicateurs biologiques dexposition lchelle de la population gnrale
sont limites. La confiance dans les donnes obtenues est galement importante. Il faut se
demander si lchantillonnage a t bien fait et si le laboratoire a appliqu des procdures
dment valides dassurance qualit. Autre domaine de proccupation: celui de
lhypersensibilit individuelle. Toutes ces donnes doivent tre prises en compte avant
dexploiter les rsultats dune tude.
Les secteurs de la socit touchs ou intresss par la ralisation dune tude dindicateur
biologique doivent tous pouvoir participer aux dcisions devant tre prises sur la faon
dutiliser linformation qui en ressort. Des procdures spcifiques pour prvenir ou surmonter
les conflits thiques invitables doivent tre prvues dans les structures lgales et sociales de
la rgion ou du pays. Cependant, chaque situation est particulire du fait des questions quelle
soulve et des piges quelle comporte, et le problme de la participation de la socit civile
ne saurait tre rsolu par une procdure unique qui engloberait toutes les applications des
indicateurs biologiques dexposition.
LVALUATION DE LA TOXICIT GNTIQUE
David M. DeMarini et James Huff
Lvaluation de la toxicit gntique est ltude de la facult quont certains agents dinduire,
au niveau du matriel gntique (ADN), des lsions ou des mutations de lun des trois types
suivants: gnique, chromosomique ou gnomique. Chez ltre humain, les gnes sont
composs dADN, ensemble constitu dunits appeles bases nuclotidiques, et sont
organiss en structures physiques appeles chromosomes. La gnotoxicit peut entraner des
effets significatifs et irrversibles sur la sant humaine. Les lsions gnotoxiques constituent
une tape critique dans linduction dun cancer et sont galement responsables de
malformations congnitales et de mort ftale. Les trois types de mutations mentionnes cidessus peuvent se produire au niveau des cellules germinales ou somatiques.
Les tests utiliss dans le domaine des mutations gniques permettent de dceler trois types
deffet: la substitution, laddition ou la dltion de nuclotides lintrieur dun gne. Ceux
utiliss pour dtecter des mutations chromosomiques mettent en vidence les cassures ou les

rarrangements chromosomiques impliquant un ou plusieurs chromosomes. Les tests portant


sur les mutations gnomiques dclent les modifications du nombre de chromosomes ou
aneuplodie. Lvaluation de la toxicit gntique a considrablement volu avec la mise au
point en 1927, par Hermann Mller, du premier test de dtection dagents gnotoxiques
(mutagnes). Depuis, plus de 200 tests ont t mis au point pour dceler les mutations sur
lADN, mais on en utilise aujourdhui moins dune dizaine de faon courante. Le prsent
article dresse un inventaire de ces tests, du type de mesures quils permettent deffectuer et
explique leur rle dans lvaluation de la toxicit.
Lidentification du risque cancrogne avant le dveloppement de la toxicologie gntique
La toxicologie gntique fait maintenant partie intgrante du processus dvaluation du risque
en gnral et son pouvoir prdictif en termes de risque cancrogne a rcemment gagn en
importance. Cependant, avant lavnement de la toxicologie gntique (avant 1970), on
employait dautres mthodes, et on le fait encore, pour identifier le risque cancrogne
potentiel chez lhumain. Il faut citer ici les tudes pidmiologiques, les tudes in vivo long
terme, les tudes in vivo moyen terme, les tudes in vivo et in vitro court terme, ltude
des relations structure-activit (intelligence artificielle) et les tudes bases sur le mcanisme
daction.
Le tableau 33.8 prsente les avantages et les inconvnients de ces diverses mthodes.
Tableau 33.8 Avantages et inconvnients des mthodes actuelles d'identification du risque
cancrogne pour l'humain
Avantages
Inconvnients
Etudes
pidmiologiques

1) lhumain est lindicateur ultime de la


maladie;
2) valuation des populations sensibles
ou vulnrables;
3) cohortes dexposition professionnelle;
4) vnements sentinelles
environnementaux.

1) caractre gnralement rtrospectif


(actes de dcs, etc.);
2) manque de sensibilit, cot lev,
lenteur;
3) parfois absence de donnes
dexposition fiables ou difficult les
obtenir;
4) expositions combines, multiples et
complexes; absence de cohortes tmoins
appropries;
5) absence dexprimentation sur
lhumain;
6) dtection du cancer, pas de prvention.

Etudes in vivo
long terme

1) valuation prospective et rtrospective


(validation);
2) excellente corrlation avec des
cancrognes humains connus;
3) niveaux et conditions dexposition
connus;
4) identification des effets toxiques et
cancrognes du produit
chimique;
5) rsultats obtenus assez rapidement;
6) comparaisons qualitatives entre
classes chimiques;
7) systmes biologiques intgrs et
interactifs proches de lhumain.

1) rarement reproduites, moyens


ncessaires importants;
2) limitation des ressources pour de telles
expriences;
3) problme de lextrapolation
lhumain;
4) niveaux dexposition souvent trs
suprieurs ceux auxquels est soumis
lhumain;
5) exposition un seul produit chimique
contrairement aux expositions humaines
qui sont gnralement des expositions
multiples.

Etudes in vivo et in 1) plus rapides et moins coteuses que


vitro court et
les autres tudes;
moyen terme
2) chantillons importants facilement
rpliqus;
3) mesure de paramtres significatifs du
point de vue biologique (mutation, etc.);
4) utilisation possible comme tests de
dpistage pour slectionner les produits
chimiques tudier dans une tude
long terme.

1) donnes in vitro nassurant pas une


bonne prdiction des donnes in vivo;
2) spcificit limite en gnral un
organisme ou un organe;
3) absence de comparaison avec lanimal
entier ou lhumain.

Associations
structure
chimique activit
biologique

1) assez faciles, rapides, et peu


coteuses;
2) fiables pour certaines catgories de
produits chimiques (par exemple,
nitrosamines, benzidine);
3) associes certaines donnes
biologiques, mais indpendantes des
tudes biologiques ultrieures.

1) non biologiques;
2) nombreuses exceptions la rgle;
3) rtrospectives et rarement
prospectives (mais commencent ltre).

Dductions bases
sur le mcanisme
daction

1) assez exactes pour certaines catgories 1) mcanismes de cancrogense


de produits chimiques;
chimique non dfinis, multiples et
2) permettent de confirmer une
probablement spcifiques dun produit
hypothse;
chimique ou dune catgorie;
3) permettent dorienter lvaluation du 2) peuvent ne pas mettre en vidence les
risque des populations sensibles.
exceptions aux mcanismes gnraux.

Les bases rationnelle et conceptuelle des tests de toxicologie gntique


Bien que le type et le nombre de techniques employes pour valuer la toxicit gntique
soient en volution constante et varient dun pays lautre, les plus utilises font appel des
tests: 1) de mutation gnique chez les bactries ou sur des cultures de cellules de mammifres;
2) de mutation chromosomique sur des cultures de cellules de mammifres ou sur moelle
osseuse de souris in vivo. Certains des tests de la seconde catgorie peuvent galement
dtecter une aneuplodie. Mme sils ne dclent pas les mutations germinales, ces tests nen
sont pas moins utiliss surtout en raison du cot lev et de la complexit des mthodes sur
cellules germinales. Malgr ces deux inconvnients, on recourt cependant aux tests sur
cellules germinales de souris lorsquon dsire obtenir une information sur les effets au niveau
de ces cellules.
Des tudes systmatiques sur vingt-cinq ans (1970-1995), effectues en particulier dans le
cadre du Programme national amricain de toxicologie en Caroline du Nord, ont permis de
conclure lutilit dun petit nombre de tests pour mettre en vidence une activit mutagne.
Lintrt dun test tait tabli sur la base de son aptitude dtecter des agents cancrognes
chez les rongeurs et donc susceptibles de provoquer un cancer chez lhumain. Ainsi, les
tudes de ces dernires dcennies ont montr que les cellules cancreuses portent des
mutations sur certains gnes et que de nombreux cancrognes sont galement mutagnes. On
considre les cellules cancreuses comme des cellules somatiques portant des mutations, et la
cancrogense comme un type de mutagense de cellules somatiques.
Les tests de toxicit gntique utiliss le plus couramment aujourdhui ont t slectionns
non seulement en raison de limportance de leur base de donnes, de leur cot relativement
faible et de leur facilit dexcution, mais aussi parce quils ont permis de dtecter de
nombreux cancrognes chez les rongeurs et, on le prsume, chez lhumain. Les tests de

toxicit gntique servent donc prvoir le pouvoir cancrogne potentiel des agents
chimiques.
La toxicologie gntique a fait un progrs important sur les plans conceptuel et pratique
lorsquon sest aperu que les enzymes de lorganisme modifient de nombreux cancrognes
en les transformant en formes dgrades (mtabolites) qui, bien souvent, reprsentent la forme
mutagne et cancrogne ultime du produit chimique initial. Heinrich Malling a montr que
linclusion dune prparation de foie de rongeur, qui apporte la plupart des enzymes
ncessaires cette transformation ou activation mtabolique, permet de reproduire ce
mtabolisme en bote de Ptri. De nombreux tests de toxicologie gntique raliss en botes
ou en tubes (in vitro) utilisent donc un ajout de prparations enzymatiques similaires. Les
prparations simples sont appeles mlanges S9, et les prparations purifies, microsomes.
Des bactries ou des cellules de mammifres gntiquement modifies contiennent certains
gnes humains ou des gnes de rongeurs les rendant capables de produire ces enzymes, ce qui
supprime la ncessit demployer le mlange S9 ou des microsomes.
Les tests de toxicologie gntique
Les systmes bactriens primaires qui servent au dpistage de la toxicit gntique sont les
tests de mutagense sur Salmonella (Ames) et, dans une moindre mesure, sur la souche WP2
dEscherichia coli. Les tudes ralises aux alentours de 1985 montrent quil suffit dutiliser
deux souches du type Salmonella (TA98 et TA100) pour dceler 90% environ des mutagnes
connus chez Salmonella. Aussi ces deux souches sont-elles employes pour la plupart des
dpistages, mme si on peut faire appel dautres souches pour une dtection plus
approfondie.
Ces tests sont raliss de diverses faons, mais les deux procds de base sont les tests
dinclusion en bote de Ptri et de suspension en phase liquide. Dans le test dinclusion en
bote de Ptri, les cellules, le produit chimique test et (si ncessaire) le mlange S9 sont
ajouts ensemble de lagarose liqufi et couls la surface dune bote de Ptri. La couche
dagarose suprieure durcit en quelques minutes et les botes sont mises incuber pendant
deux trois jours; aprs ce temps, les cellules mutantes ont pouss pour former des groupes
de cellules visibles lil nu ou colonies, qui sont alors comptes. Lagarose contient des
agents slectifs ou des composants tels que seules les cellules nouvellement mutes seront
susceptibles dy crotre. Le test par incubation en phase liquide est similaire, mais les cellules,
le produit test et le mlange S9 sont mis incuber ensemble dans une phase liquide ne
contenant pas dagarose liqufi; les cellules sont ensuite laves pour liminer le produit test
et le mlange S9, puis ensemences sur de lagarose.
Les mutations sur cultures de cellules de mammifres sont tudies essentiellement sur lun
des deux gnes: hprt et tk. De mme que pour les tests bactriens, les lignes cellulaires de
mammifres (dveloppes partir de cellules de rongeurs ou de cellules humaines) sont
exposes au produit tudier dans des botes de culture en plastique ou dans des tubes, puis
sont ensemences dans des botes de culture contenant un milieu avec un agent slectif qui
permet aux seules cellules mutantes de se dvelopper. Les tests employs sont les tests
CHO/HPRT, TK6 et L5178Y/TK+/ du lymphome de souris. On utilise aussi dautres lignes
cellulaires prsentant diverses mutations au niveau de la rparation de lADN ou contenant
certains gnes humains participant au mtabolisme. Ces systmes permettent une rversion
des mutations lintrieur du gne (mutation gnique) ainsi que des mutations impliquant les
rgions du chromosome encadrant le gne (mutation chromosomique). Nanmoins, ce dernier
type de mutation concerne davantage le systme tk que le systme hprt du fait de la
localisation du gne tk.
Comme pour les tests dincubation en phase liquide pour la mutagense bactrienne, les tests
de mutagense sur cellules de mammifres exigent gnralement quon expose des cellules

(dans des botes de culture ou dans des tubes) au produit tudier en prsence du mlange S9
pendant plusieurs heures. Les cellules sont ensuite laves et cultives pendant quelques jours
supplmentaires afin de permettre aux produits du gne normal (type sauvage) dtre dgrads
et aux produits du gne nouvellement mut dtre exprims et accumuls, puis elles sont
ensemences dans un milieu contenant un agent slectif qui permet aux seules cellules
mutantes de crotre. Comme pour les tests bactriens, les cellules mutantes se dveloppent en
colonies visibles lil nu qui sont ensuite comptes.
La mutation chromosomique est mise en vidence principalement par des tests cytogntiques
qui consistent exposer des rongeurs, des cellules de rongeurs ou des cellules humaines en
botes de culture un produit chimique pour le tester. On laisse scouler le temps ncessaire
une ou plusieurs divisions cellulaires et on colore les chromosomes avant de les examiner
au microscope pour dtecter les modifications de structure ou du nombre des chromosomes.
Bien que de nombreuses anomalies puissent tre observes, les plus couramment retenues par
les agences rglementaires comme tant les plus fiables sont les aberrations chromosomiques
et le test du micronoyau.
Lexamen des cellules prsentant des aberrations chromosomiques exige un bon entranement
et une grande comptence, ce qui rend cette procdure coteuse et longue. Au contraire, le test
du micronoyau requiert peu dexprience, et la dtection peut tre automatise. Les
micronoyaux apparaissent comme de petites taches ponctuelles lintrieur de la cellule,
distinctes du noyau o se trouvent les chromosomes. Ils rsultent soit dune cassure de
chromosome, soit dune aneuplodie. Comme ils sont plus faciles observer que les
aberrations chromosomiques, et comme des tudes rcentes ont montr que les agents causant
des aberrations chromosomiques dans la moelle osseuse de souris in vivo induisent en gnral
des micronoyaux dans ce tissu, il est maintenant courant de les mesurer pour dterminer
laptitude dun produit provoquer une mutation chromosomique.
Bien que les tests sur cellules germinales soient utiliss beaucoup moins frquemment que les
tests dcrits ci-dessus, ils sont indispensables pour tablir si un produit reprsente un risque
pour les cellules germinales, des mutations au niveau de ces cellules pouvant entraner des
effets sur la sant des gnrations suivantes. Les tests sur cellules germinales les plus
communment utiliss le sont chez la souris et supposent lemploi de systmes permettant la
dtection de: 1) translocations (changes) hrditaires entre chromosomes (test de
translocation hrditaire); 2) mutations gniques ou chromosomiques impliquant des gnes
spcifiques (tests du locus spcifique, visuels ou biochimiques); 3) mutations affectant la
viabilit (test du dominant ltal). Comme pour les tests sur cellules somatiques, lutilisation
des tests sur cellules germinales repose sur lhypothse de travail que les produits donnant une
rponse positive dans ces tests sont des mutagnes potentiels pour les cellules germinales
humaines.
La situation actuelle et les perspectives davenir
Des tudes rcentes effectues sur 41 produits cancrognes pour les rongeurs (cancrognes
et mutagnes somatiques potentiels pour lhumain) ont montr quil suffit de disposer de trois
types dinformation pour en caractriser environ 90%: 1) la connaissance de la structure
chimique du produit, en particulier le fait quil soit lectrophile (voir larticle La relation
structure-activit); 2) les tests de mutagense sur Salmonella; 3) un test de toxicit chronique
sur 90 jours chez le rongeur (souris et rat). De fait, le caractre mutagne de la totalit des
cancrognes humains recenss par le CIRC peut tre mis en vidence en utilisant uniquement
le test sur Salmonella et le test du micronoyau sur moelle osseuse de souris. Lutilisation de
ces tests de mutagense pour la dtection des cancrognes humains potentiels se justifie
dautant plus que la plupart des cancrognes humains sont cancrognes chez la souris et le
rat (cancrognes transespces) et que la plupart des cancrognes transespces sont

mutagnes sur Salmonella ou induisent des micronoyaux au niveau de la moelle osseuse de


souris.
Avec les progrs raliss en technologie de lADN, dans la connaissance du gnome humain
et dans la comprhension du rle des mutations dans le cancer, il est probable que des tests de
gnotoxicit en cours de dveloppement seront intgrs aux protocoles standards de dtection.
Il faut citer en particulier les tests sur cellules ou rongeurs transgniques. Les systmes
transgniques sont des systmes o un gne dune espce diffrente est introduit dans une
cellule ou un organisme. Par exemple, des souris transgniques, obtenues aprs introduction
dun gne bactrien, sont maintenant utilises de faon exprimentale pour dceler une
mutation dans un organe ou un tissu de lanimal. On dispose actuellement de cellules
bactriennes telles que Salmonella et de cellules de mammifres (y compris des lignes
cellulaires humaines) contenant des gnes participant au mtabolisme dagents
cancrognes/mutagnes, tels que les gnes du cytochrome P450. Il est ainsi possible
deffectuer lanalyse molculaire des mutations induites au niveau du transgne chez le
rongeur transgnique, ou dans les gnes natifs tels que hprt, ou dans les gnes cibles chez
Salmonella, ce qui permet de dterminer la nature exacte des mutations induites par les
produits chimiques et de donner un aperu du mcanisme daction du produit chimique tout
en facilitant les comparaisons avec les mutations chez lhumain susceptible dtre expos
lagent.
Les avances molculaires en cytogntique permettent dsormais une valuation plus fine
des mutations chromosomiques. On peut citer lutilisation de sondes (petits morceaux
dADN) qui sattachent (shybrident) des gnes spcifiques. Les rarrangements des gnes
sur le chromosome peuvent alors tre rvls par la modification de localisation des sondes,
facilement visualises en raison de leur fluorescence. Llectrophorse sur gel pour mettre en
vidence les cassures dADN (communment appele test des comtes) permet leur
dtection dans une cellule isole et peut tre un outil extrmement prcieux si on lassocie aux
techniques cytogntiques pour dceler des lsions chromosomiques.
Aprs de nombreuses annes dutilisation et de dveloppement systmatique dune importante
base de donnes, on peut maintenant procder lvaluation de la toxicit gntique avec
quelques tests seulement, pour un cot relativement faible et en peu de temps (quelques
semaines). Les donnes obtenues peuvent tre utilises pour prvoir le caractre cancrogne
dun produit chez les rongeurs ou potentiellement cancrogne ou mutagne somatique chez
lhumain. Grce cette possibilit, on est en mesure de limiter lintroduction dans
lenvironnement dagents mutagnes et cancrognes et de dvelopper des produits de
remplacement non mutagnes. Les tudes futures devraient conduire des mthodes encore
plus perfectionnes ayant un pouvoir prdictif suprieur aux mthodes actuellement utilises.
LES TESTS DE TOXICIT IN VITRO
Joanne Zurlo
Lmergence de techniques sophistiques en biologie molculaire et cellulaire a favoris une
rapide volution des sciences de la vie et en particulier de la toxicologie. Dans la pratique,
cette volution sest traduite par un dplacement du centre dintrt de la toxicologie qui se
consacre non plus lanimal entier ou des groupes danimaux, mais aux cellules ou aux
molcules issues dun seul sujet, quil soit animal ou humain. Depuis le milieu des annes
quatre-vingt, les toxicologues emploient ces nouvelles mthodes pour valuer les effets de
produits chimiques sur les systmes vivants. Selon une progression logique, ces techniques se
sont adaptes aux objectifs de la toxicologie exprimentale et ont volu la fois en fonction
de ces progrs scientifiques et des proccupations dordre conomique et sociologique.
Compte tenu du nombre important de substances tester, laspect conomique est
dterminant. Une plthore de nouveaux produits cosmtiques, pharmaceutiques, pesticides,

chimiques et mnagers, dont il faut valuer la toxicit potentielle, sont mis chaque anne sur
le march. Ajoutons cela que de trs nombreux produits dutilisation courante nont pas
encore t correctement tests. Le recueil dinformations dtailles sur la scurit de tous ces
produits chimiques grce aux mthodes traditionnelles dtude sur animal entier serait
extrmement coteux et long, en admettant mme que cette tche titanesque soit ralisable.
Notre socit est de plus en plus exigeante face aux problmes de sant publique et de scurit
et la population remet en question le bien-fond de lemploi des animaux pour tester les
produits chimiques. Sagissant de la scurit des produits chimiques pour lhumain, le public
et les cologistes exercent une pression soutenue sur les instances gouvernementales pour
quelles appliquent une rglementation plus rigoureuse. On peut citer ici le mouvement quont
lanc les cologistes aux Etats-Unis pour obtenir linterdiction du chlore et des composs
chlors en arguant que la plupart de ces composs navaient jamais t tests de manire
suffisante. Du point de vue toxicologique, le fait dinterdire une classe entire de produits
chimiques uniquement parce quils contiennent du chlore est la fois irresponsable et non
rationnel scientifiquement. Cependant, on peut comprendre que le public veuille sassurer que
les produits chimiques librs dans lenvironnement ne prsentent pas de risque pour la sant.
Cet exemple illustre bien la ncessit demployer des mthodes plus efficaces et plus rapides
pour valuer la toxicit.
Autre problme de socit dont les consquences sont importantes pour les tudes
toxicologiques: le bien-tre des animaux. De par le monde, les associations de protection des
animaux sont de plus en plus nombreuses sopposer farouchement lutilisation danimaux
vivants pour les tudes de scurit chimique. Elles ont organis des campagnes actives contre
les fabricants de produits cosmtiques, mnagers ou pharmaceutiques pour faire interdire les
exprimentations animales. En Europe, ces efforts ont abouti ladoption du sixime
amendement de la directive 76/768/CEE (directive sur les produits cosmtiques). Aux termes
de cette directive, les produits et les ingrdients cosmtiques tests sur des animaux vivants ne
pourront plus tre vendus dans lUnion europenne aprs le 1er janvier 1998, sauf lorsquil
nexiste pas de solution de remplacement suffisamment valide. Cette directive ne sapplique
pas aux produits commercialiss sur le march amricain et dans dautres pays, mais elle aura
nanmoins des rpercussions considrables sur les socits internationales qui
commercialisent ce type de produits, notamment en Europe.
Le concept de solutions de remplacement, base du dveloppement des tests autres que ceux
raliss sur animal entier, est dfini par la rgle dite des trois R: rduction du nombre
danimaux utiliss; raffinement des protocoles, afin que les animaux soient soumis moins de
stress et dinconfort; et remplacement des tests actuels sur animal entier par des tests in vitro
(cest--dire des tests qui ne sont pas raliss sur des animaux vivants), ou par des modles
informatiques, ou encore par des tests sur vertbrs infrieurs ou invertbrs. Cette thorie des
trois R a t prsente pour la premire fois en 1959 dans un ouvrage publi par deux
scientifiques britanniques, W.M.S. Russell et Rex Burch, The Principles of Humane
Experimental Technique. Pour ces deux chercheurs, seul un traitement humain des animaux
permet dobtenir des rsultats scientifiques valables. Ils proposaient pour cela de dvelopper
des mthodes propres rduire le nombre danimaux ncessaires ces expriences dans le but
ultime de les remplacer. Il est intressant de noter que les principes noncs par Russell et
Burch ont eu peu dcho au dbut et quil a fallu attendre le milieu des annes soixante-dix
pour quon assiste la renaissance du mouvement en faveur de la protection des animaux de
laboratoire. Aujourdhui, le principe des trois R est bien ancr dans les domaines de la
recherche, de lexprimentation et de lducation.
On peut dire pour rsumer que le dveloppement des mthodologies in vitro rsulte dune
srie de facteurs qui ont converg vers le mme but au cours des deux dernires dcennies. Il

est difficile de dire si un seul de ces facteurs aurait permis dexercer une telle pression sur la
stratgie de lvaluation toxicologique.
Le concept des tests de toxicit in vitro
Dans cette section, il est uniquement question des mthodes in vitro dvaluation de la toxicit
qui sont destines remplacer lexprimentation sur animal entier. Les autres mthodes de
substitution telles que les modles informatiques ou les relations quantitatives structureactivit sont abordes dans dautres parties du prsent chapitre.
Les tudes in vitro sont gnralement conduites sur des cellules ou des tissus dorigine
animale ou humaine. Lexpression in vitro, qui signifie littralement dans du verre, renvoie
aux expriences ralises sur du matriel vivant ou des composants de matriel vivant cultivs
en botes de Ptri ou dans des tubes essai dans des conditions bien dfinies. Ces procdures
sopposent aux tudes in vivo ralises sur des animaux vivants. Bien quil soit difficile,
sinon impossible, de prvoir les effets dun produit chimique sur un organisme complexe
lorsquon limite lobservation un seul type de cellules dans une bote, les tudes in vitro
livrent une grande quantit dinformations sur la toxicit intrinsque dun produit ou sur son
mcanisme de toxicit cellulaire et molculaire. De plus, elles offrent de nombreux avantages
sur les tudes in vivo, car elles sont gnralement moins coteuses et peuvent tre ralises
dans des conditions mieux contrles. En outre, bien quon ait encore besoin dun petit
nombre danimaux vivants pour obtenir les cellules ncessaires et les cultiver in vitro, on peut
nanmoins considrer que ces mthodes constituent des solutions de remplacement
puisquelles rpondent aux exigences de rduction (utilisation dun petit nombre danimaux
par rapport aux tudes in vivo) et de raffinement (les animaux ne sont plus soumis aux effets
toxiques observs lors des expriences in vivo).
Pour interprter les rsultats dun test de toxicit in vitro, dcider sil prsente de lintrt aux
fins de lvaluation de la toxicit et le rapporter au processus toxicologique gnral in vivo, il
est ncessaire de savoir quelle partie du processus toxicologique ce test permet dtudier. Ce
processus comporte en effet une succession dvnements qui dbutent par lexposition de
lorganisme un agent physique ou chimique et donnent lieu des interactions cellulaires et
molculaires qui finalement se manifestent dans la rponse de lorganisme entier. Les tests in
vitro sont gnralement limits la partie du processus toxicologique qui se produit aux
niveaux cellulaire et molculaire. Les informations recueillies partir de telles tudes vont de
la voie mtabolique et de linteraction de mtabolites actifs avec des cibles cellulaires et
molculaires aux paramtres toxiques potentiellement quantifiables qui peuvent servir
dindicateurs biologiques molculaires de lexposition. Dans lidal, il faut connatre le
mcanisme toxique dun produit chimique depuis lexposition jusquaux manifestations de
lorganisme, si lon veut que les informations obtenues lors de tests in vitro puissent tre
interprtes et mises en relation avec la rponse de lorganisme entier. Cependant, cest
pratiquement impossible, puisque les mcanismes toxicologiques qui ont t totalement
lucids sont assez rares. Les toxicologues se trouvent donc dans la situation o les rsultats
dun test in vitro ne permettent pas de prvoir exactement la toxicit in vivo puisque les
mcanismes toxicologiques restent inconnus. Il existe cependant quelques cas o un test in
vitro permet dlucider le(s) mcanisme(s) cellulaires et molculaires de toxicit.
Reste un problme majeur concernant le dveloppement et la ralisation de tests in vitro:
doivent-ils tre fonds sur le mcanisme daction ou suffit-il quils soient descriptifs? Du
point de vue scientifique, il est de loin prfrable demployer des tests in vitro fonds sur le
mcanisme daction. Lespoir de dvelopper, dans un avenir proche, un test in vitro capable de
remplacer totalement un test sur animal entier est pratiquement nul, si on ne connat pas
parfaitement le mcanisme daction. Mais cela ne doit pas exclure lutilisation de tests
descriptifs comme outils de dpistage prcoce, ce qui est le cas actuellement. Ces tests in vitro
ont abouti une rduction significative du nombre danimaux utiliss et, tant que le

mcanisme daction nest pas bien connu, il peut savrer ncessaire demployer, de faon
plus limite, des tests in vitro dont les rsultats sont en bonne corrlation avec ceux que lon
peut obtenir in vivo.
Les tests de cytotoxicit in vitro
Nous dcrirons dans cette section plusieurs tests in vitro labors pour valuer le potentiel
cytotoxique dun produit chimique. Ils sont, pour la plupart, faciles raliser et
automatisables. Lun deux, quon emploie couramment, est le test au rouge neutre. Ce test est
ralis sur des cultures de cellules: dans la plupart des applications, les cellules sont places
dans des botes de culture comportant 96 puits de 6,4 mm de diamtre. Chaque puits ne
pouvant tre utilis que pour une seule dtermination, cette disposition permet de tester en
double chantillon de multiples concentrations du produit chimique avec des contrles positifs
et ngatifs. Aprs traitement des cellules par des concentrations du produit chimique tester
croissantes dau moins deux ordres de grandeur (de 0,01 mM 1 mM, par exemple) et par des
produits chimiques contrles positifs et ngatifs, les cellules sont rinces et traites au rouge
neutre, colorant absorb et retenu par les cellules vivantes uniquement. Le colorant peut tre
ajout immdiatement aprs limination du produit chimique test pour dterminer les effets
immdiats, ou des intervalles variables aprs son limination pour prciser les effets
cumulatifs ou diffrs. Lintensit de la coloration correspond au nombre de cellules vivantes
dans chaque puits. On utilise pour cela un spectrophotomtre quip dun lecteur de plaque
programm qui mesure lintensit de chacun des 96 puits de la bote de culture. Cette mthode
automatise permet de raliser rapidement une tude concentration-rponse et dobtenir des
donnes statistiques.
Une autre mthode dtude de la cytotoxicit relativement simple est le test au MTT. Le MTT
(3[4,5-dimthylthiazol-2-yl]-2,5-diphnylttrazolium bromure) est un colorant de type
ttrazolium qui est rduit par les enzymes mitochondriales en un compos color en bleu.
Seules les cellules dont les mitochondries sont viables vont donner cette raction; en
consquence, lintensit de la couleur est directement proportionnelle au degr dintgrit des
mitochondries. Il sagit dun test utile pour dtecter des composs cytotoxiques en gnral
ainsi que les agents ayant les mitochondries pour cible spcifique.
La mesure de lactivit de la lactico-dshydrognase (LDH) est galement trs utilise pour
tudier la cytotoxicit. Cette enzyme, normalement prsente dans le cytoplasme des cellules
vivantes, est libre dans le milieu de culture lorsque les membranes cellulaires sont lses
par un agent toxique. Des prlvements de petites quantits de milieu de culture effectus
diffrents moments aprs le traitement chimique des cellules permettent de mesurer la
quantit de LDH libre dans le milieu et de suivre le droulement de la toxicit en fonction
du temps. Bien que la libration de LDH constitue une valuation trs gnrale de la
cytotoxicit, elle nen est pas moins utile parce quelle est facile raliser, et ce en temps rel.
De nombreuses mthodes sont mises au point actuellement pour dtecter une lsion cellulaire.
Les plus complexes font appel des sondes fluorescentes pour mesurer divers paramtres
intracellulaires: libration de calcium, modifications du pH ou du potentiel de membrane. Ces
sondes, en gnral trs sensibles, permettent de dceler des modifications cellulaires minimes,
bien antrieures la mort cellulaire. De plus, ces mthodes fluorescentes sont pour la plupart
automatisables grce lutilisation des plaques 96 puits et de lecteurs de plaque.
Aprs avoir recueilli, par lune de ces mthodes, des donnes sur une srie de produits
chimiques, il est possible de dterminer leur toxicit relative. La toxicit relative dun agent
chimique, dans un test in vitro, est exprime par la concentration permettant dobtenir 50% de
rponses par rapport des cellules non traites. Cette dtermination, qui reprsente la CE50
(concentration efficace pour 50% des cellules), est utilise pour comparer la toxicit in vitro
de diffrents produits chimiques (on emploie galement un terme semblable pour valuer la

toxicit relative, la CI50, qui correspond la concentration de produit entranant une inhibition
de 50% dun processus cellulaire, par exemple la capacit dabsorption du rouge neutre). Il
nest pas facile de comparer la toxicit relative in vitro dun produit chimique sa toxicit
relative in vivo, car de nombreux facteurs de confusion interviennent in vivo, tels que la
toxicocintique, le mtabolisme, les mcanismes de rparation ou de dfense. De plus, la
plupart de ces mthodes mesurent une cytotoxicit gnrale et ne sont pas bases sur le
mcanisme daction. Par consquent, il est seulement possible dtablir une corrlation entre
les toxicits relatives in vitro et in vivo. En dpit de la complexit et des nombreuses
difficults que prsente lextrapolation des donnes obtenues in vitro aux fins dune
exploitation in vivo, ces tests in vitro se sont rvls trs utiles en raison de leur simplicit et
de leur faible cot. Ils peuvent tre employs comme tests de dpistage pour dtecter les
mdicaments ou les produits chimiques trs toxiques ds le dbut des travaux de
dveloppement.
La toxicit au niveau de lorgane cible
On peut galement utiliser les tests in vitro pour valuer la toxicit au niveau dun organe
cible. La conception de ces tests pose de nombreuses difficults, la plus notable tant
limpossibilit de maintenir les particularits de lorgane in vivo au moyen dun systme in
vitro. Il arrive trs souvent quune fois prleves sur lanimal et mises en cultures, les cellules
se dgradent rapidement ou quelles se diffrencient, cest--dire quelles perdent les
fonctions spcifiques de lorgane pour reprendre un tat indiffrenci. En trs peu de temps,
gnralement quelques jours, les cultures ne permettent plus dvaluer les effets toxiques
spcifiques dune substance sur un organe donn.
La plupart de ces problmes sont en voie dtre rgls grce aux rcentes avances de la
biologie cellulaire et molculaire. Les informations recueillies sur lenvironnement cellulaire
in vivo peuvent servir modifier les conditions de culture in vitro. Depuis le milieu des
annes quatre-vingt, de nouveaux facteurs de croissance et cytokines ont t dcouverts qui
sont pour la plupart disponibles dans le commerce. Grce laddition de ces facteurs, on
parvient maintenant prserver lintgrit cellulaire des cultures et conserver leurs fonctions
diffrencies pendant des priodes plus longues. Les progrs dans la connaissance des besoins
nutritifs et hormonaux des cultures de cellules ont galement contribu mettre au point de
nouveaux milieux de culture. Il est maintenant possible de cultiver les cellules sur des
matrices extracellulaires naturelles ou artificielles. Ces matrices ont une influence
considrable sur la structure et la fonction des cellules en culture. Lun de leurs grands
avantages est quelles permettent de contrler de faon prcise lenvironnement de ces
cellules et dexaminer les effets de chacun des facteurs sur les processus cellulaires de base et
sur leurs rponses aux diffrents agents chimiques. En un mot, ces systmes sont le gage
dune meilleure comprhension des mcanismes de toxicit spcifiques de lorgane.
De nombreuses tudes de toxicit au niveau dun organe cible sont conduites sur des cellules
primaires, qui sont par dfinition des cellules frachement prleves sur un organe et ont
gnralement un temps de vie limit en culture. Lemploi de cultures primaires dun seul type
cellulaire dun organe pour valuer une toxicit prsente bien des avantages. Du point de vue
du mcanisme daction, ces cultures sont utiles pour tudier la cible cellulaire spcifique dun
produit chimique. Dans certains cas, deux ou plusieurs types cellulaires dun organe peuvent
tre cultivs ensemble, ce qui permet en plus ltude des interactions cellulaires dans la
rponse un toxique. Certains systmes de coculture de cellules cutanes ont t mis au point
pour reproduire une structure tridimensionnelle ressemblant la peau in vivo. Il est galement
possible de raliser une coculture de cellules venant de diffrents organes, par exemple, foie et
rein. Ce type de coculture parat utile pour valuer les effets spcifiques sur les cellules
rnales dun produit chimique mtabolis au niveau hpatique.

Les outils de biologie molculaire ont galement jou un rle important dans le
dveloppement de lignes cellulaires continues utiles ltude de la toxicit au niveau dun
organe cible. Ces lignes cellulaires sont fabriques en transfectant lADN de cellules
primaires. Lors dune procdure de transfection, les cellules et lADN sont traites de faon
que lADN soit capt par les cellules. LADN est gnralement issu dun virus et contient un
ou plusieurs gnes qui, une fois exprims, rendent les cellules immortelles (cest--dire
capables de vivre et de crotre en culture pendant de longues priodes). LADN peut
galement tre manipul de sorte que le gne immortalisant soit contrl par un promoteur
inductible. Grce ce type de construction, les cellules se divisent uniquement lorsquelles
reoivent le stimulus chimique adquat pour permettre lexpression du gne immortalisant.
Citons titre dexemple le grand gne de lantigne T issu du virus simien no 40 (SV40) (gne
immortalisant), prcd par la rgion promoteur du gne de la mtallothionine, induit par la
prsence dun mtal dans le milieu de culture. Aprs transfection de ce gne dans les cellules,
leur traitement par de faibles concentrations de zinc stimule le promoteur de la
mtallothionine et permet au gne de lantigne T de sexprimer, ce qui entrane une
prolifration cellulaire. Lorsque le zinc est limin du milieu, les cellules cessent de se diviser
et, dans les meilleures conditions, retournent un tat o elles expriment leurs fonctions
tissulaires spcifiques.
La possibilit de fabriquer des cellules immortalises, allie aux progrs des techniques de
culture cellulaire, a fortement contribu crer des lignes cellulaires de nombreux organes
diffrents, dont le cerveau, le rein et le foie. Cependant, avant de pouvoir utiliser en toute
scurit ces lignes cellulaires comme substituts des lignes cellulaires vritables, on doit
tudier avec soin leurs caractristiques pour sassurer quelles sont bien normales.
Les autres systmes in vitro utiliss pour tudier la toxicit au niveau dun organe cible sont
beaucoup plus complexes. Au fur et mesure que ces systmes gagnent en complexit, allant
de la culture cellulaire simple celle dun organe entier, ils se rapprochent des systmes in
vivo, tout en restant beaucoup plus difficiles contrler en raison du nombre de variables
matriser. Par consquent, lavantage que lon tire de laugmentation du niveau dorganisation
peut tre compromis du fait que le chercheur manque de contrle sur lenvironnement
exprimental. Le tableau 33.9 compare quelques-unes des caractristiques des systmes in
vitro utiliss pour ltude de lhpatotoxicit.
Tableau 33.9 Comparaison des systmes in vitro utiliss pour l'tude de l'hpatotoxicit
Systme
Complexit (niveau de Conservation des
Dure
Contrle de
linteraction)
fonctions hpatiques
potentielle de lenvironnement
spcifiques
la culture
Lignes
cellulaires
immortalises

En partie intercellulaire
(varie selon la ligne
cellulaire)

Faible bonne
(varie selon la ligne
cellulaire)

Illimite

Excellent

Cultures
primaires
dhpatocytes

Intercellulaire

Moyenne excellente
De quelques
(varie avec les conditions jours
de culture)
quelques
semaines

Cocultures de
cellules
hpatiques

Intercellulaire (entre
Bonne excellente
types cellulaires
identiques ou diffrents)

Quelques
semaines

Excellent

Coupes de foie

Intercellulaire (entre les Bonne excellente


divers types cellulaires)

De quelques
heures

Bon

Excellent

quelques jours
Foie isol perfus Intercellulaire (entre les Excellente
divers types cellulaires)
et lintrieur de
lorgane

Quelques
heures

Moyen

En exprimentation toxicologique, lemploi des coupes tissulaires fines est de plus en plus
rpandu. Le chercheur dispose pour les raliser de nouveaux instruments permettant dobtenir
des coupes homognes en milieu strile. Ces coupes prsentent des avantages sur les cultures
cellulaires, car les diffrents types cellulaires de lorgane y sont prsents et larchitecture in
vivo ainsi que les communications intercellulaires y sont maintenues. Des tudes in vitro
peuvent alors tre conduites pour dterminer aussi bien le type cellulaire cible dans un organe
que pour rechercher la toxicit spcifique au niveau de lorgane cible. Linconvnient de ces
coupes est quelles se dgradent rapidement aprs vingt-quatre heures de culture, surtout
cause dune oxygnation insuffisante des cellules dans la partie intrieure des coupes.
Cependant, de rcentes tudes ont montr quon peut assurer une aration plus efficace par
rotation douce. Cette solution, de mme que lutilisation dun milieu de culture plus
complexe, permet aux coupes de survivre jusqu quatre-vingt-seize heures.
Pour tudier la toxicit de produits chimiques au niveau des organes cibles spcifiques, on
peut aussi se servir dexplants tissulaires, dont le principe sapparente celui des coupes
tissulaires. Ces explants sont raliss en prlevant une petite quantit de tissu (un embryon
entier dans le cas des tudes de tratogense) et en la mettant en culture pour ltudier. Les
cultures dexplants ont t notamment utilises pour les tudes de toxicit court terme, du
type tudes dirritation et de corrosion cutane, tudes de toxicit de lamiante sur la trache
ou encore tudes de neurotoxicit sur le tissu crbral.
Autre solution: les organes isols perfuss. Ces organes offrent un avantage comparable
celui des coupes tissulaires et des explants puisque tous les types cellulaires dun organe y
sont prsents, sans le stress tissulaire quimposent les manipulations pour prparer les coupes.
De plus, ils permettent le maintien des interactions lintrieur de lorgane. Mais ils
prsentent un grave inconvnient: ils nont quune faible viabilit, ce qui limite leur utilisation
pour une tude toxicologique in vitro. Du point de vue solution de remplacement, ces cultures
peuvent tre considres comme un raffinement puisque les animaux ne souffrent pas des
consquences nfastes du traitement par un toxique in vivo. Leur utilisation ne fait cependant
pas diminuer de faon trs sensible le nombre de sujets ncessaires.
En rsum, on dispose de plusieurs sortes de systmes in vitro que lon peut conjuguer pour
valuer la toxicit au niveau des organes cibles. Une difficult subsiste: lextrapolation des
rsultats obtenus dans un systme in vitro, partie relativement mineure dun processus
toxicologique, au processus entier qui a lieu in vivo.
Les tests dirritation oculaire in vitro
Le test de toxicit sur animal entier sans doute le plus contest du point de vue du bien-tre de
lanimal est le test de Draize quon utilise pour tudier lirritation oculaire sur le lapin. Pour
cela, on place une dose donne du produit chimique dans lun des yeux du lapin, lautre il
servant de tmoin. Le degr dirritation et dinflammation est valu des intervalles de
temps donns aprs le dbut de lexposition. Des efforts importants sont dploys pour
trouver des solutions permettant de remplacer ce test, critiqu non seulement pour des raisons
humanitaires, mais aussi cause de la subjectivit des observations et de la variabilit des
rsultats. Prcisons quen dpit des violentes critiques quil a suscites, le test de Draize est
dune remarquable efficacit pour identifier les irritants oculaires pour lhumain, notamment
les substances de lgrement modrment irritantes dont le pouvoir est difficile tablir par

dautres mthodes. Il simpose donc de dvelopper le plus vite possible des solutions de
remplacement in vitro.
La recherche de mthodes susceptibles de remplacer le test de Draize est difficile, mme si
tout porte croire quelle sera fructueuse. De nombreuses techniques in vitro et dautres
solutions de remplacement ont t dveloppes et, dans certains cas, mises en pratique. Parmi
les solutions de raffinement du test de Draize, donc moins douloureuses ou pnibles pour les
animaux, on peut citer le test oculaire faible volume, qui consiste placer de plus petites
quantits du produit test dans les yeux du lapin, non seulement pour des raisons
humanitaires, mais aussi pour reproduire de faon plus raliste les quantits relles auxquelles
lindividu peut tre expos accidentellement. Autre amlioration: celle qui consiste ne plus
tester sur lanimal des substances dont le pH est infrieur 2 ou suprieur 11,5, car on sait
quelles sont extrmement irritantes pour lil.
Entre 1980 et 1989, on estime que le nombre de lapins utiliss pour tester lirritation oculaire
de produits cosmtiques a diminu de 87%. Cette rduction draconienne des tests sur animal
entier sexplique par lincorporation de tests in vitro dans une approche par tapes. Cette
dmarche fait appel un processus plusieurs tapes qui dbute par lexamen minutieux des
donnes historiques du pouvoir irritant oculaire et lanalyse physico-chimique du produit
valuer. Si ces deux tapes ne fournissent pas assez dinformations, on procde alors une
srie de tests in vitro. Les donnes supplmentaires obtenues partir des tests in vitro peuvent
alors tre suffisantes pour valuer la scurit de la substance, sinon on ralise en dernier
recours des tests in vivo en les limitant le plus possible. On voit quon peut ainsi se passer
compltement des animaux ou du moins rduire considrablement leur nombre.
La batterie de tests in vitro utilise dans cette stratgie par tapes dpend des exigences de la
branche concerne. Le test dirritation oculaire est en effet pratiqu dans des branches trs
diverses, depuis celle des cosmtiques jusquaux produits industriels en passant par lindustrie
pharmaceutique. Vu la diversit des informations recherches, il nest pas possible de dfinir
une batterie unique de tests in vitro. En principe, une batterie de tests sert valuer cinq
paramtres: la cytotoxicit, les modifications physiologiques et biochimiques tissulaires, la
relation quantitative structure-activit, les mdiateurs de linflammation, la gurison et la
rparation. Un exemple de test de cytotoxicit, cause possible dirritation, est le test au rouge
neutre sur cultures de cellules (voir ci-dessus). Les modifications physiologiques et
biochimiques cellulaires rsultant dune exposition un produit chimique peuvent tre
tudies sur des cultures de cellules pithliales de corne humaine. Comme alternative, les
chercheurs ont galement utilis des globes oculaires intacts ou dissqus de buf ou de
poulet obtenus auprs des abattoirs. Les paramtres mesurs dans ces cultures dorgane entier
sont souvent les mmes que ceux mesurs in vivo, par exemple lopacit ou le gonflement de
la corne.
Linflammation oculaire est lun des troubles frquents de lexposition aux produits
chimiques. On dispose de nombreux moyens pour ltudier. Diverses mthodes biochimiques
permettent de dceler la prsence de mdiateurs librs durant le processus inflammatoire, tels
que lacide arachidonique et les cytokines. La membrane chorio-allantodienne duf de
poulet peut galement tre utilise comme indicateur de linflammation. Dans ce test, une
petite partie de la coquille dun embryon de poulet de 10 14 jours est enleve, afin
dappliquer le produit chimique sur la membrane, aprs quoi on tudie intervalles les signes
dinflammation, comme lhmorragie vasculaire.
La gurison et la rparation dune lsion oculaire font partie des paramtres in vivo les plus
difficiles valuer in vitro. On dispose dun nouvel instrument, le microphysiomtre au
silicium, qui permet de mesurer de faibles variations du pH extracellulaire et peut tre utilis
pour contrler in situ les cultures cellulaires. Cette tude montre une assez bonne corrlation

avec la gurison in vivo et est donc utilise comme test in vitro. Tel se prsente aujourdhui
linventaire succinct des tests actuellement employs en lieu et place du test de Draize pour
lirritation oculaire. Il est probable quau cours des prochaines annes, on parviendra mettre
au point et valider toute une srie de tests in vitro pour chaque type dutilisation spcifique.
La validation
Pour quun test in vitro soit agr par les instances rglementaires, il faut dabord et avant tout
quil soit valid. Ce processus permet en effet dtablir sa fiabilit dans un but spcifique. Des
efforts ont t entrepris, aux Etats-Unis comme en Europe, pour dfinir et coordonner les
processus de validation. En 1993, lUnion europenne a cr le Centre europen pour la
validation des mthodes alternatives afin de coordonner les efforts en Europe et dagir en
association avec des organismes amricains tels que le Centre universitaire Johns Hopkins de
recherche sur les mthodes alternatives de test sur les animaux (CAAT) et le Comit de
coordination interagences pour la validation des mthodes alternatives (ICCVAM), compos
de reprsentants des Instituts nationaux de la sant (NHI), de lAgence amricaine de
protection de lenvironnement (EPA), de lAdministration amricaine de rglementation des
denres alimentaires et des produits pharmaceutiques (Food and Drug Administration (FDA))
et de la Commission pour la scurit des produits de consommation (Consumer Products
Safety Commission).
La validation des tests in vitro requiert une organisation et une planification considrables
pour que les instances rglementaires et les scientifiques sentendent sur des procdures
acceptables. Il faut aussi quun organisme consultatif scientifique assure un contrle suffisant
et garantisse que les protocoles satisfont certaines normes. Les tudes de validation
devraient tre ralises dans des laboratoires de rfrence utilisant des agents chimiques
homologus distribus par une banque unique de produits chimiques, de cellules et de tissus.
Lorsquon cherche faire agrer un test, il faut apporter la preuve, au moyen dune analyse
statistique srieuse, que ses rsultats sont reproductibles au sein dun mme laboratoire et
dun laboratoire lautre. Une fois que les rsultats des diffrents volets des tudes de
validation ont t rassembls, lorganisme consultatif peut se prononcer sur la validit du(es)
test(s). De plus, les rsultats des tudes devraient tre diffuss dans des publications rvises
par des pairs et tre consigns dans des bases de donnes.
La dfinition du processus de validation est engage dans la bonne voie. Chaque nouvelle
tude de validation fournit des informations utiles ltude suivante. La communication et la
coopration internationales sont essentielles au dveloppement rapide dune srie de
protocoles auxquels de nombreuses personnes pourront souscrire, tant donn en particulier
lurgence impose par ladoption de la directive sur les cosmtiques de la Communaut
europenne. Cette mesure lgislative peut en effet donner llan ncessaire un effort de
validation srieux. Cest seulement lissue de ce processus que les instances rglementaires
pourront envisager daccepter les mthodes in vitro.
Conclusion
Cet article dresse un bilan succinct de ltat actuel de lexprimentation toxicologique in vitro.
Cette discipline scientifique est encore relativement rcente, mais elle connat un
dveloppement exponentiel. Le dfi pour les annes venir sera dintgrer au vaste fonds des
donnes in vivo les connaissances sur le mcanisme daction que les tudes cellulaires et
molculaires auront permis daccumuler. On pourra ainsi mieux dfinir les mcanismes de la
toxicit et tablir un paradigme qui permettra de tirer parti des donnes in vitro pour prvoir la
toxicit in vivo. Cest seulement grce aux efforts conjugus des toxicologues et des instances
gouvernementales que la valeur intrinsque de ces mthodes in vitro pourra trouver une
application concrte.
LA RELATION STRUCTURE-ACTIVIT

Ellen K. Silbergeld
On entend par tude de la relation structure-activit lanalyse de la structure molculaire dun
produit chimique pour en tirer des informations prdictives sur ses proprits essentielles
telles que sa stabilit, sa distribution, sa captation, son absorption et sa toxicit. Ltude de la
relation structure-activit est lune des mthodes didentification des produits chimiques
potentiellement dangereux. Elle permet disoler les substances exigeant une valuation
complmentaire ou de prendre une dcision un stade prcoce pour un produit chimique
nouveau et peut, de ce fait, rpondre aux attentes de lindustrie et des pouvoirs publics. Les
tudes toxicologiques sont de plus en plus onreuses et ncessitent des moyens sans cesse
plus importants. Proccups par le potentiel toxique des produits chimiques auxquels les
populations humaines sont exposes, les organismes rglementaires et sanitaires ont cherch
tendre la gamme et la sensibilit des tests pour mettre en vidence le risque toxique.
Paralllement, le poids, rel ou vcu, de la rglementation impose lindustrie a amen
sinterroger sur la faisabilit des mthodes dtude et de lanalyse des donnes en toxicologie.
Actuellement, une tude de cancrogense chimique ncessite une exprimentation sur au
moins deux espces, durant leur vie entire, sur les deux sexes, plusieurs niveaux de doses,
laquelle il faut ajouter lanalyse histopathologique soigneuse de multiples organes sans
oublier la dtection des lsions prnoplasiques au niveau des cellules et des organes cibles.
Aux Etats-Unis, on estime que les tests de cancrogense cotent plus de 3 millions de dollars
(valeur 1995).
Mme avec des ressources financires illimites, tous les toxicologues comptents dans le
monde ne seraient pas assez nombreux pour tester les quelque 70 000 produits chimiques
existant aujourdhui. Il faudrait des sicles pour achever ne serait-ce que la premire tape de
lvaluation de ces agents chimiques (NRC, 1984). Dans de nombreux pays, lemploi des
animaux pour les expriences de laboratoire a donn lieu une vague de proccupations
thiques et de nouvelles pressions en faveur de lutilisation des mthodes classiques en
exprimentation toxicologique. Lindustrie pharmaceutique sest beaucoup servie des tudes
de la relation structure-activit pour identifier les molcules ayant un potentiel thrapeutique
(Hansch et Zhang, 1993). Dans le domaine de lenvironnement et de la sant au travail, cette
mthode est utilise pour prvoir la dispersion des produits chimiques dans lenvironnement
physico-chimique et rechercher les produits chimiques nouveaux ou anciens ncessitant une
tude plus approfondie. Aux termes de la loi amricaine sur le contrle des substances
toxiques (TSCA), lEPA applique depuis 1979 la mthode structure-activit comme premier
moyen de dpistage des nouveaux produits chimiques dans les avis de prfabrication
(Premanufacture Notification (PMN)); lAustralie adopte une dmarche semblable avec sa
procdure NICNAS de dclaration des nouveaux produits chimiques. Aux Etats-Unis, ltude
de la relation structure-activit constitue une tape importante du processus permettant de
dcider si la fabrication, le traitement, la distribution, lusage ou la destruction dune
substance prsentent un risque excessif pour la sant humaine ou lenvironnement, comme le
prvoit larticle 5 f) de la TSCA. Sur la base de ses conclusions, lEPA peut alors exiger, aux
termes de larticle 6 du texte de loi prcit, que des tests complets de la substance en cause
soient effectus.
La raison dtre de la relation structure-activit
Sur le plan scientifique, la thorie de la relation structure-activit repose sur le principe selon
lequel la structure molculaire dun produit chimique permet de prvoir dimportants aspects
de son comportement dans les systmes physico-chimiques et biologiques (Hansch et Leo,
1979).
Le processus dtude de la relation structure-activit
Ltude de la relation structure-activit comporte les tapes suivantes: identification de la
structure chimique, depuis la formule empirique jusquau produit pur; identification des

analogues structuraux; recherche dinformations dans des bases de donnes et dans la


littrature sur les analogues structuraux; tude de la toxicit et des autres donnes concernant
les analogues structuraux. Il arrive bien que ce soit assez rare que linformation sur la
structure du produit suffise elle seule pour justifier la tenue dune telle tude compte tenu de
la bonne comprhension quon a des mcanismes de toxicit. Il existe plusieurs bases de
donnes sur les relations structure-activit, de mme que des mthodes informatises de
prvision de la structure molculaire.
A partir de ces informations, la relation structure-activit permet dvaluer:
les paramtres physico-chimiques: point dbullition, pression de vapeur, solubilit
dans leau, coefficient de partage octanol/eau;
les paramtres du devenir biologique/environnemental: biodgradation, sorption par le
sol, photodgradation, pharmacocintique;
les paramtres de toxicit: toxicit sur les organismes aquatiques, absorption, toxicit
aigu pour les mammifres (test limite ou DL50), irritation dermique, pulmonaire et
oculaire, sensibilisation, toxicit subchronique, mutagnicit.
Il est remarquer que la relation structure-activit ne permet pas didentifier des lments
pourtant importants sur le plan de la sant comme la cancrognicit, la toxicit du
dveloppement, la toxicit de la reproduction, la neurotoxicit, limmunotoxicit, etc., et ce
pour trois raisons: labsence de bases de donnes importantes permettant de vrifier les
hypothses sur la relation structure-activit, le manque de connaissances sur les facteurs de
nature structurelle induisant une action toxique et la multiplicit des cellules cibles et des
mcanismes participant ces phnomnes (voir larticle Lapproche amricaine de
lvaluation du risque des toxiques pour la reproduction et des agents neurotoxiques).
Quelques tentatives limites dutilisation de cette mthode ont t faites pour prvoir la
pharmacocintique en se basant sur les coefficients de partage et la solubilit (Johanson et
Naslund, 1988). Une tude structure-activit quantitative plus dtaille a t effectue pour
prvoir le mtabolisme P450-dpendant dune srie de produits et la liaison, au rcepteur
cytosolique de la dioxine, de molcules de type dioxine ou PCB (Hansch et Zhang, 1993).
La relation structure-activit permet de prdire pas toujours de manire trs sre
certains des paramtres numrs ci-dessus, comme le montre le tableau 33.10. Ce tableau
compare les rsultats que lon escompte tirer dune tude structure-activit ceux
effectivement obtenus grce des mthodes exprimentales ou toxicologiques. Des experts de
lEPA ont montr que les tudes de la relation structure-activit conduites sont plus utiles pour
prvoir certaines activits biologiques, en particulier la biodgradation, que pour les
proprits physico-chimiques. Sagissant des diffrents types de toxicit, la relation structureactivit permet une meilleure prvision de la mutagnicit. Ashby et Tennant (1991), dans une
tude plus exhaustive ralise dans le cadre du programme NTP, montrent galement quelle
garantit une bonne prvisibilit de la gnotoxicit court terme. Ces constatations nont rien
de surprenant, compte tenu de nos connaissances actuelles sur les mcanismes molculaires
de la gnotoxicit (voir larticle La toxicologie gntique) et le rle de llectrophilie sur la
liaison lADN. En revanche, ils font remarquer que la relation structure-activit tend sousestimer la toxicit systmique et subchronique chez les mammifres et surestimer la toxicit
aigu pour les organismes aquatiques.
Tableau 33.10 Comparaison des donnes provenant d'tudes sur la relation structure-activit
et d'tudes exprimentales: OCDE/NTP
Paramtre
Concordance (%) Discordance (%) Nombre
Point dbullition

50

50

30

Pression de vapeur

63

37

113

Solubilit dans leau

68

32

133

Coefficient de partage

61

39

82

Biodgradation

93

107

Toxicit sur les poissons

77

22

130

Toxicit sur Daphnia

67

33

127

Toxicit aigu chez les mammifres (DL50 ) 80

201

142

Irritation cutane

82

18

144

Irritation oculaire

78

22

144

Sensibilisation cutane

84

16

144

Toxicit subchronique

57

32

143

Mutagnicit 2

88

12

139

Mutagnicit 3

82944

110

301

Cancrognicit 3: tude sur 2 ans

72954

301

La relation structure-activit ne permet pas de prvoir la toxicit aigu pour 12% des
produits chimiques tests. 2 Donnes de lOCDE fondes sur la concordance entre le test de
Ames et la relation structure-activit. 3 Donnes NTP fondes sur des tudes de gnotoxicit
compares aux prvisions des tudes de la relation structure-activit pour plusieurs catgories
de produits chimiques de structure dalarme. 4 La concordance varie selon la catgorie:
concordance la plus forte avec les produits aromatiques amins et nitrs; concordance la plus
faible avec les structures entrant dans la catgorie divers.
Source: donnes de lOCDE, communication personnelle C. Auer, EPA (Etats-Unis). Dans
cette analyse, seuls ont t utiliss les paramtres pour lesquels on disposait de donnes
comparables obtenues par tude de la relation structure-activit et par tudes exprimentales.
Les donnes NTP sont extraites de Ashby et Tennant, 1991.
Pour les autres types de toxicit, nous lavons dj dit, cette mthode a une utilit moins
vidente. Les prvisions de toxicit chez les mammifres sont rendues difficiles en raison de
labsence dtudes sur la relation structure-activit pour la toxicocintique des molcules
complexes. Nanmoins, quelques tentatives ont t faites afin de proposer des principes de
relation structure-activit pour certains types complexes de toxicit chez les mammifres
(voir, par exemple, Bernstein, 1984, pour une tude de ce type concernant les toxiques
potentiels sur la reproduction mle). Dans la plupart des cas, les bases de donnes ne sont pas
suffisamment abondantes pour permettre une analyse rigoureuse des prvisions fondes sur la
structure.
A ce stade, on peut conclure que ltude de la relation structure-activit peut surtout servir
laffectation de ressources des investigations toxicologiques plus approfondies ou lever, un
stade prcoce, des inquitudes sur un risque potentiel. Ce type dtude peut tre utilise de
faon fiable comme base dinformation pour les dcisions ultrieures uniquement dans le cas
de la mutagnse. Mais, comme nous lexpliquons par ailleurs dans ce chapitre et dans
lEncyclopdie, la relation structure-activit ne semble pas pouvoir fournir les informations
quantitatives ncessaires lvaluation dun risque, quel quil soit.
LA TOXICOLOGIE RGLEMENTAIRE

LA TOXICOLOGIE ET LES RGLEMENTATIONS EN MATIRE DE SCURIT ET DE


SANT
Ellen K. Silbergeld
La toxicologie joue un rle de premier plan dans llaboration des rglementations et des
politiques en matire de scurit et de sant au travail. En effet, pour prvenir les accidents du
travail et les maladies professionnelles, on est de plus en plus appel prendre des dcisions
en sappuyant sur des informations obtenues avant toute exposition humaine ou en labsence
dune telle exposition. Or, ce type dinformations, comme celles quon peut tirer dtudes
pidmiologiques, renseignerait pourtant de manire dfinitive sur le risque. De plus, les
tudes toxicologiques, telles quelles sont dcrites dans ce chapitre, fournissent des donnes
prcises sur la dose et le type de rponse dans des conditions contrles de laboratoire,
informations quil est souvent difficile dobtenir dans le milieu de travail. Cependant, elles
doivent tre soigneusement values pour estimer la probabilit deffets nocifs chez lhumain,
leur nature et la relation quantitative entre les expositions et les effets.
De nombreux pays semploient activement, depuis les annes quatre-vingt, dvelopper des
mthodes objectives permettant dutiliser les informations toxicologiques dans les prises de
dcisions rglementaires. Des mthodes lefficacit prouve, souvent appeles valuation
du risque, ont t proposes et utilises dans ces pays la fois par des instances
gouvernementales et non gouvernementales. Pour simplifier les choses, on peut dire de
lvaluation du risque quil sagit dun processus consistant apprcier les informations
toxicologiques et pidmiologiques et les expositions pour identifier et valuer la probabilit
de survenue deffets nocifs en association avec lexposition des substances ou des
conditions dangereuses. Lvaluation du risque peut avoir un caractre qualitatif, et donc
prciser la nature dun effet nocif et donner une estimation de sa probabilit, ou elle peut avoir
un caractre quantitatif et spcifier alors le nombre de personnes affectes un niveau donn
dexposition. Dans de nombreux systmes rglementaires, lvaluation du risque est scinde
en quatre tapes: identification du risque, description de la nature de leffet toxique;
valuation de la relation dose-effet, analyse semi-quantitative ou quantitative de la relation
entre lexposition (ou la dose) et la svrit ou la probabilit de leffet toxique; valuation de
lexposition, valuation de linformation sur la gamme des expositions pouvant se produire
sur une population gnrale ou sur des sous-groupes lintrieur dune population;
caractrisation du risque, compilation de toutes les informations ci-dessus et expression du
risque attendu dans des conditions dexposition spcifiques (voir NRC, 1983, pour lnonc
de ces principes).
Nous allons prsenter titre dexemples trois dmarches dvaluation du risque.
Il nest pas possible de recenser de manire exhaustive toutes les mthodes qui ont cours dans
ce domaine travers le monde, et la slection propose ici ne saurait tre rigide. Notons que
lon a cherch, notamment sous limpulsion du GATT, harmoniser les mthodes
dvaluation du risque. Deux initiatives dharmonisation internationale ont lieu actuellement,
lune dans le cadre du Programme international sur la scurit des substances chimiques
(PISSC) et lautre dans celui de lOrganisation pour la coopration et le dveloppement
conomiques (OCDE). Ces organisations assurent aussi la mise jour des informations sur les
dmarches nationales en matire dvaluation du risque.
LES PRINCIPES DIDENTIFICATION DU RISQUE: LAPPROCHE JAPONAISE
Masayuki Ikeda
Comme dans beaucoup dautres pays, le risque d aux produits chimiques est rglement au
Japon en fonction de la catgorie des agents (voir tableau 33.11) par un ministre ou un
organisme qui varie selon les cas. Pour les produits chimiques industriels en gnral, la loi de
base qui sapplique est la loi relative lexamen et la rglementation de la fabrication, etc.,

des substances chimiques, ou pour citer son titre abrg, la loi sur le contrle des substances
chimiques. Les organismes de tutelle sont le ministre du Commerce international et de
lIndustrie et le ministre de la Sant et du Bien-tre social. La loi sur la scurit et la sant au
travail (qui relve du ministre du Travail) dispose que le pouvoir mutagne des produits
chimiques industriels doit tre tudi et que lexposition des travailleurs ces produits doit
tre rduite le plus possible grce lencoffrement des installations de production,
lamnagement de systmes dvacuation ou au port dun quipement de protection, etc. sil
est tabli que le produit est effectivement mutagne.
Tableau 33.11 Rglementation des substances chimiques aux termes de la lgislation
japonaise
Catgorie
Loi
Ministre
Aliments et additifs
alimentaires

Loi sur lhygine des produits alimentaires

MSB

Produits pharmaceutiques

Loi sur les produits pharmaceutiques

MSB

Stupfiants

Loi sur le contrle des stupfiants

MSB

Produits chimiques agricoles Loi sur le contrle des produits chimiques


agricoles

MAFP

Produits chimiques industriels Loi sur le contrle des produits chimiques


industriels

MSB et MCII

Tous produits chimiques


lexception des substances
radioactives

Loi rglementant les produits mnagers


contenant des substances dangereuses
Loi sur le contrle des substances toxiques et
dangereuses
Loi sur la scurit et la sant au travail

MSB

Loi sur les substances radioactives

AST

Substances radioactives

MSB
MDT

Abrviations: MSB: ministre de la Sant et du Bien-tre; MAFP: ministre de lAgriculture,


des Forts et de la Pche; MCII: ministre du Commerce international et de lIndustrie; MDT:
ministre du Travail; AST: Agence de la science et de la technologie.
Comme lidentification des produits chimiques industriels dangereux relve, pour lessentiel,
de la loi sur le contrle des substances chimiques, nous dcrirons dans le prsent article la
srie de tests prvus cette fin aux termes de cette loi.
La loi sur le contrle des substances chimiques
Adopte lorigine en 1973 par le parlement japonais (la Dite), entre en vigueur le 16 avril
1974, la loi sur le contrle des substances chimiques avait pour principal objectif de prvenir
la pollution environnementale et les effets des biphniles polychlors (PCB) et substances
apparentes sur la sant humaine. Les PCB sont connus pour 1) leur rmanence dans
lenvironnement (faible biodgradabilit); 2) laugmentation de leur concentration tout au
long de la chane alimentaire (bioaccumulation); 3) leur toxicit chronique chez lhumain. En
consquence, la loi impose lobligation dtudier ces trois paramtres pour tout produit
chimique industriel avant sa commercialisation au Japon. Paralllement ladoption de la loi,
la Dite a dcid que lAgence pour lenvironnement devait surveiller le milieu ambiant pour
prvenir une ventuelle pollution chimique. La loi a t ensuite modifie par la Dite en 1986
(modification entre en vigueur en 1987) pour lharmoniser avec les dcisions de lOCDE sur
la sant et lenvironnement, avec labaissement des barrires tarifaires en matire de
commerce et en particulier avec les directives concernant la mise en place dune srie

minimale de donnes avant commercialisation et les lignes directrices y relatives. Cet


amendement prenait en fait acte des conclusions dune tude de lenvironnement ralise
lpoque et selon laquelle des produits ne saccumulant pas beaucoup, peu biodgradables et
toxiques long terme, tels que le trichlorothylne et le ttrachlorothylne, taient
susceptibles de polluer lenvironnement puisquon en avait retrouv la trace dans la nappe
phratique du pays.
La loi classe les produits chimiques industriels en deux catgories: les produits chimiques
existants et les nouveaux produits chimiques. Les premiers, rpertoris dans linventaire des
produits chimiques existants (tabli lors de ladoption de la loi dorigine), sont environ au
nombre de 20 000, nombre qui dpend de la dnomination qui leur a t donne dans
linventaire. Les produits chimiques absents de linventaire sont appels nouveaux produits
chimiques. Le gouvernement est charg de lidentification du risque des produits chimiques
existants, tandis que toute compagnie ou tout organisme dsirant commercialiser un nouveau
produit chimique au Japon est responsable de lidentification du risque pour ce produit. Deux
ministres, celui de la Sant et du Bien-tre (MSB) et celui du Commerce international et de
lIndustrie (MCII) sont chargs de lapplication de la loi, lAgence pour lenvironnement
pouvant au besoin exprimer son opinion. Les substances radioactives, les toxiques spcifis,
les stimulants et les stupfiants, rglements par dautres lois, ne sont pas viss.
Les tudes exprimentales effectues aux termes de la loi sur le contrle des substances
chimiques
Le schma dinvestigation est reprsent la figure 33.15. Il sagit, quant au principe, dun
systme par tapes qui consiste tudier la biodgradabilit in vitro de tous les produits
chimiques (pour les exceptions, voir ci-aprs). Si un produit chimique est rapidement
biodgradable, il est considr comme tant sans danger. Dans le cas contraire, on doit
tudier sa bioaccumulation; en cas de forte accumulation, une tude complte de toxicit
est exige. Sur la base des rsultats obtenus, le produit chimique sera class comme
substance chimique spcifie de classe 1 lorsque sa toxicit est confirme, ou alors comme
substance sans danger. Les produits dont laccumulation est faible ou nulle font lobjet
dtudes de toxicit, consistant en des tests de mutagense et en une administration de doses
rptes pendant vingt-huit jours des animaux (voir tableau 33.12). Aprs une valuation
complte des donnes de toxicit, le produit chimique est class comme substance chimique
dsigne si les rsultats mettent en vidence un risque toxique. Sinon, il est considr
comme tant sans danger. Lorsque dautres rsultats donnent penser que le produit
prsente un risque important de pollution environnementale, des donnes compltes de
toxicit sont exiges, partir desquelles le produit chimique dsign est reclass comme
substance chimique spcifie de classe 2 si elles sont positives. Dans le cas contraire, il est
considr comme sans danger. Le tableau 33.13 indique, outre les grandes lignes de la
rglementation, les caractristiques toxicologiques et cotoxicologiques des diffrentes
catgories de substances: substance chimique spcifie de classe 1, substance chimique
spcifie de classe 2 et substance chimique dsigne.
Figure 33.15 Schma d'expertise
Tableau 33.12 Liste des tests prvus aux termes de la loi japonaise sur le contrle
des substances chimiques
Paramtre
Plan du test
Biodgradation

Sur 2 semaines en principe, in vitro, sur des boues actives

Bioaccumulation

Sur 8 semaines en principe, sur la carpe

Dpistage de la toxicit
Tests de mutagnicit
Systme bactrien
Test de Ames et test sur E. coli, S9 mix
Aberrations chromosomiques Cellules CHL, etc., S9 mix
Administration doses
rptes 28 jours

Rats, 3 niveaux de dose, plus lot tmoin, pour ltablissement du


NOEL,
plus tude de rversibilit sur 2 semaines vec la dose la plus leve

Tableau 33.13 Caractristiques des substances chimiques en fonction de la classe et


rglementation aux termes de la loi japonaise sur le contrle des substances chimiques
Substance chimique Caractristiques
Rglementation
Substances chimiques Aucune biodgradabilit
spcifies de classe 1 Forte bioaccumulation
Toxicit chronique

Ncessit dune autorisation pour la


fabrication ou limportation 1
Restriction dutilisation

Substances chimiques Aucune biodgradabilit


spcifies de classe 2 Aucune bioaccumulation ou
accumulation faible
Toxicit chronique
Pollution environnementale
suspecte

Dclaration sur la quantit fabrique ou


importe prvue
Directive technique pour prvenir la
pollution ou les effets sur la sant

Substances chimiques Aucune biodgradabilit


dsignes
Aucune bioaccumulation ou
bioaccumulation faible
Toxicit chronique suspecte

Rapport sur la fabrication ou la quantit


importe
Etudes exprimentales et
bibliographiques

En pratique, aucune autorisation.


Au Japon, la loi nexige pas deffectuer une tude dans le cas dun nouveau produit chimique
dont la quantit utilise ne dpasse pas un certain niveau (moins de 1 000 kg/compagnie/an et
moins de 1 000 kg/an pour lensemble du pays). Les polymres sont examins selon le
schma des produits de haut poids molculaire, schma reposant sur le principe selon lequel
les risques dabsorption dans lorganisme sont faibles lorsque le produit chimique a un poids
molculaire suprieur 1 000 et demeure stable dans lenvironnement.
Rsultats du classement des produits chimiques industriels (en 1996)
Au cours des vingt-six annes qui ont suivi lentre en vigueur de la loi sur le contrle des
substances chimiques, soit de 1973 la fin de 1996, 1 087 produits chimiques existants ont
t examins aux termes de la loi originale puis modifie. Parmi ces produits, 9 (certains sont
identifis par leur nom gnrique) ont t classs comme substance chimique spcifie de
classe 1. Parmi les autres, 36 ont dabord t placs dans la catgorie des agents dsigns,
23 dentre eux ont t reclasss comme substance chimique spcifie de classe 2 et les 13
autres sont rests dsigns. La figure 33.16 recense les noms des produits chimiques
spcifis de classe 1 et 2. Il en ressort que la plupart des produits chimiques de classe 1 sont
des pesticides organochlors, en dehors des PCB et de leurs substituts et dun driv de ltain
toxique pour les algues. Une majorit de produits chimiques de classe 2 sont des algicides,
lexception de trois solvants utiliss largement autrefois.
Figure 33.16 Substances chimiques spcifies et dsignes aux termes de la loi japonaise
sur le contrle des substances chimiques

Pendant cette mme priode de 1973 la fin 1996, 2 335 nouveaux produits chimiques ont t
mis ltude, 221 (environ 9,5%) ont t dsigns, mais aucun na t rang dans la
catgorie des produits chimiques de classe 1 ou 2. Les autres produits chimiques ont t
considrs comme tant sans danger et leur fabrication et leur importation ont t
autorises.
LAPPROCHE AMRICAINE DE LVALUATION DU RISQUE DES TOXIQUES POUR
LA REPRODUCTION ET DES AGENTS NEUROTOXIQUES
Ellen K. Silbergeld
Les systmes nerveux et reproducteur tant trs sensibles aux effets des xnobiotiques, la
neurotoxicit et la toxicit sur les fonctions de reproduction sont des domaines importants de
lvaluation du risque. De nombreux produits ont t identifis comme tant toxiques pour ces
systmes chez lhumain (Barlow et Sullivan, 1982; OTA, 1990) ce qui nest pas surprenant
puisque de nombreux pesticides sont dlibrment conus pour perturber la reproduction et la
fonction nerveuse dans des organismes cibles, tels que les insectes, en intervenant dans la
biochimie hormonale et la neurotransmission.
Il est difficile didentifier les substances potentiellement toxiques pour ces systmes pour trois
raisons intimement lies: premirement, ceux-ci font partie des systmes biologiques les plus
complexes chez lhumain, et on estime gnralement que les modles animaux des fonctions
reproductrice et neurologique ne reprsentent pas de manire adquate les vnements
critiques tels que la cognition ou le dveloppement prcoce embryo-ftal; deuximement, il
nexiste pas de tests simples pour identifier les produits potentiellement toxiques pour la
reproduction ou le systme nerveux; troisimement, ces systmes renferment de multiples
types cellulaires et de multiples organes, de sorte quil nest pas possible denvisager un
mcanisme de toxicit unique pour en infrer une relation dose-rponse ou prvoir une
relation structure-activit. On sait, de plus, que la sensibilit du systme nerveux et du
systme reproducteur varie en fonction de lge, et que lexposition peut avoir des effets plus
svres certaines priodes critiques qu dautres.
Lvaluation du risque neurotoxique
La neurotoxicit est un problme de sant publique important. Comme le montre le tableau
33.14, plusieurs accidents neurotoxiques graves se sont produits qui ont touch des milliers de
travailleurs et diverses populations loccasion de pollutions industrielles ou de la
contamination daliments, deau ou dautres vecteurs. On sait aussi que les expositions
professionnelles des neurotoxiques tels que le plomb, le mercure, les insecticides
organophosphors et les solvants chlors sont largement rpandues travers le monde (OTA,
1990; Johnson, 1978).
Tableau 33.14 Accidents neurotoxiques graves
Anne(s)
Lieu
Substance
Observations
400 avant J.-C. Rome

Plomb

Hippocrate dcouvre la toxicit du plomb dans


lindustrie minire

Annes 1930

Etats-Unis
(sud-est)

TOCP

Compos souvent ajout aux huiles de lubrification:


contamination du Ginger Jake, boisson alcoolise,
20 000 100 000 cas, dont plus de 5 000 personnes
paralyses

Annes 1930

Europe

Apiol (avec
TOCP)

Mdicament abortif contenant du TOCP: 60 cas de


neuropathie

1932

Etats-Unis
(Californie)

Thallium

Vol dorge trait par du sulfate de thallium, utilis


comme rodenticide, puis utilisation pour la

confection de tortillas; hospitalisation de


13 membres dune famille prsentant des symptmes
neurologiques; 6 dentre eux dcdent
1937

Afrique du
Sud

TOCP

Soixante Sud-Africains sont victimes dune paralysie


aprs avoir employ une huile alimentaire
contamine

1946

Ttrathylplomb Plus de 25 individus prsentent des troubles


neurologiques aprs nettoyage de rservoirs
dessence

Annes 1950

Japon
(Minimata)

Mercure

Annes 1950

France

Organostanneux Contamination du Stalinon par du trithyltain


responsable de plus de 100 morts

Annes 1950

Maroc

Manganse

Cent cinquante mineurs prsentent une intoxication


chronique au manganse avec troubles
neurocomportementaux svres

Annes 1950 Etats-Unis


1970

AETT

Composant de parfums, neurotoxique, retir du


march en 1978; effets sur la sant humaine non
connus

1956

Endrine

Quarante-neuf personnes tombent malades aprs


avoir consomm des produits de boulangerie
confectionns avec de la farine contamine par un
insecticide, lendrine; quelques cas de convulsions

1956

Turquie

HCB

Hexachlorobenzne, fongicide de graines de


semences, intoxication de 3 000 4 000 personnes;
10% dentre elles dcdent

1956-1977

Japon

Clioquinol

Mdicament utilis pour traiter la diarrhe des


voyageurs: neuropathie ayant touch 10 000
personnes en 20 ans

1959

Maroc

TOCP

Huile alimentaire contamine par de lhuile de


moteur: environ 10 000 individus atteints

1960

Iraq

Mercure

Graines de semence traites par du mercure


fongicide et utilises pour faire du pain; plus de
1 000 personnes atteintes

1964

Japon

Mercure

Mthylmercure: intoxication de 646 personnes

1968

Japon

PCB

Biphnyles polychlors dans un produit base de riz:


1 665 personnes atteintes

1969

Japon

n-Hexane

Quatre-vingt-treize cas de neuropathie aprs


exposition au n-hexane entrant dans la fabrication de

Ingestion de poissons et de crustacs contamins par


du mercure provenant dune usine chimique;
121 personnes intoxiques, 46 morts, nombreux
enfants prsentant de graves lsions du systme
nerveux

sandales en vinyle
1971

Etats-Unis

Hexachlorophne Produit utilis pendant des annes comme


dsinfectant en solution 3% pour la toilette des
nourrissons: toxique du systme nerveux et dautres
systmes

1971

Iraq

Mercure

Graines de semence, traites par un compos


mercuriel fongicide et utilises pour faire du pain:
plus de 5 000 cas dintoxications svres, 450 morts,
effets non documents sur de nombreux nourrissons
exposs en priode prnatale

1973

Etats-Unis
(Ohio)

MIBK

Employs dune usine textile exposs ce solvant;


plus de 80 travailleurs atteints de neuropathie,
180 prsentant des atteintes moins graves

1974-1975

Etats-Unis
(Hopewell,
Virginie)

Chlordcone
(Kpone)

Employs dune usine chimique exposs cet


insecticide; plus de 20 travailleurs prsentent des
problmes neurologiques svres, plus de 40 des
troubles moins graves

1976

Etats-Unis
(Texas)

Leptophos
(Phosvel)

Neuf employs au moins souffrent de problmes


neurologiques svres par suite de lexposition lors
de la fabrication

1977

Etats-Unis
(Californie)

Dichloropropne Vingt-quatre sujets hospitaliss aprs exposition au


(Tlone II)
pesticide Tlone la suite dun accident de
circulation

1979-1980

Etats-Unis
(Lancaster,
Texas)

BHMH (Lucel-7) Sept employs dune fabrique de douches en


plastique prsentent des troubles neurologiques aprs
une exposition au BHMH

Annes 1980

Etats-Unis

MPTP

Impuret de synthse dune drogue illicite


provoquant des symptmes identiques ceux de la
maladie de Parkinson

1981

Espagne

Huile toxique
contamine

Quelque 20 000 personnes intoxiques par une


substance toxique dans de lhuile: plus de 500 morts;
de nombreuses personnes prsentent une neuropathie
grave

1985

Etats-Unis et Aldicarb
Canada

1987

Canada

Plus de 1 000 personnes en Californie et dans


dautres Etats de louest et en Colombie-Britannique
prsentent des problmes neuromusculaires et
cardiaques par suite de lingestion de melons
contamins par ce pesticide

Acide domoque Ingestion de moules contamines par de lacide


domoque: 129 malades et 2 morts; symptmes: perte
de mmoire, dsorientation et convulsions

Source: OTA, 1990.


Les produits chimiques peuvent atteindre lune des nombreuses cibles cellulaires ou
biochimiques prsentes dans le systme nerveux central ou priphrique. Des effets toxiques

sexerant sur dautres organes peuvent galement affecter le systme nerveux, comme le
montre lexemple de lencphalopathie hpatique. La neurotoxicit se manifeste par des effets
sur les processus dapprentissage (incluant mmoire, facult cognitive et performance
intellectuelle), les processus somato-sensoriels (dont la sensibilit et la proprioception), la
fonction motrice (quilibre, dmarche, contrle fin des mouvements, etc.), laffect
(notamment la personnalit et lmotivit) et la fonction autonome (contrle nerveux de la
fonction endocrine et des organes internes). Les effets toxiques des produits chimiques sur le
systme nerveux sont plus ou moins intenses et se manifestent de faon diffrente selon lge
du sujet: au cours du dveloppement, le systme nerveux central est particulirement
vulnrable en raison du processus de la diffrenciation cellulaire, de la migration et du contact
intercellulaire qui prend place chez lhumain (OTA, 1990). De plus, les lsions cytotoxiques
sur le systme nerveux sont souvent irrversibles, les neurones ntant pas remplacs aprs
lembryogense. Bien que le systme nerveux central (SNC) soit relativement protg du
contact avec les produits absorbs grce un rempart trs tanche (la barrire hmatoencphalique, forme de cellules capillaires endothliales qui tapissent le systme vasculaire
crbral), les produits chimiques toxiques sont nanmoins susceptibles datteindre le SNC par
trois mcanismes: les solvants et les composs lipophiles peuvent passer travers les
membranes cellulaires; certains produits peuvent se fixer aux protines de transport
endognes qui fournissent des nutriments et des molcules biologiques au SNC; enfin, de
petites molcules, si elles sont inhales, vont tre directement absorbes par le nerf olfactif et
transportes au cerveau.
Les instances rglementaires amricaines
Aux Etats-Unis, quatre organismes ont le pouvoir de rglementer les substances
neurotoxiques: la FDA, lEPA, lOSHA et la CPSC. LOSHA rglemente gnralement les
expositions professionnelles aux produits chimiques neurotoxiques (entre autres), lEPA ayant
comptence pour les expositions professionnelles et non professionnelles aux pesticides, aux
termes de la loi fdrale sur les insecticides, fongicides et rodenticides (Federal Insecticide,
Fungicide and Rodenticide Act (FIFRA)), mais aussi pour les nouveaux produits chimiques.
Cest elle qui intervient avant leur fabrication et leur commercialisation et, ce titre, elle doit
tenir compte la fois des risques professionnels et non professionnels.
Lidentification du risque
Les agents qui ont un effet nocif sur la physiologie, la biochimie ou lintgrit structurale du
systme nerveux ou son fonctionnement au niveau comportemental sont considrs comme
des produits prsentant un risque neurotoxique (EPA, 1993). Il nest pas facile dtablir le
pouvoir neurotoxique dun produit, en raison notamment de la complexit du systme nerveux
et des multiples expressions de la neurotoxicit. Certains effets peuvent paratre retards,
comme la neurotoxicit diffre de certains insecticides organophosphors. Il faut donc faire
montre de prudence et de discernement lorsquon doit se prononcer sur un tel risque et tenir
compte des conditions de lexposition, de la dose, de la dure et du rythme.
Lidentification du risque se fait gnralement partir dtudes toxicologiques sur des
organismes intacts, chez lesquels les fonctions comportementale, cognitive, somato-motrice et
somato-sensorielle sont values grce toute une panoplie doutils dinvestigation dont la
biochimie, llectrophysiologie et la morphologie (Tilson et Cabe, 1978; Spencer et
Schaumberg, 1980). On ne saurait assez insister sur limportance de lobservation attentive du
comportement de lorganisme entier. La toxicit doit aussi tre jauge diffrentes tapes du
dveloppement, y compris aux premiers stades de la vie (intra-utrine et nonatale) et celui
de la snescence. Chez ltre humain, la mise en vidence de la neurotoxicit suppose quon
effectue une apprciation clinique grce des mthodes dvaluation neurologique de la
fonction motrice, du langage, des rflexes, de la fonction sensorielle, de llectrophysiologie,
de ltude neuropsychologique et, dans certains cas, grce des techniques avances

dimagerie du cerveau et dlectroencphalographie quantitative. LOMS a mis au point une


batterie de tests neurocomportementaux, incluant des tmoins de la fonction motrice, de la
coordination main-il, du temps de raction, de la mmoire immdiate, de lattention et de
lhumeur. Cette batterie a t valide au niveau international dans le cadre dune initiative
coordonne (Johnson, 1978).
Chez les animaux aussi, lidentification du risque doit se faire au moyen de mthodes
dobservation minutieuses. LEPA a dvelopp une batterie dobservations fonctionnelles qui
constitue une premire tape la fois pour dceler et quantifier les effets neurotoxiques
majeurs patents (Moser, 1990). Ces paramtres sont inclus dans les tests de toxicit
subchronique et chronique de lOCDE. Une batterie typique porte sur les paramtres suivants:
posture; dmarche; mobilit; fonction dveil et ractivit; prsence ou absence de
tremblements, convulsions, larmes, horripilation, salivation, miction ou dfcation excessives,
strotypie, mouvements rotatoires ou autres comportements anormaux. Les comportements
provoqus incluent la rponse la manipulation, au pincement de la queue, ou aux
claquements; quilibre, rflexe de redressement et force dagrippement du membre postrieur.
Le tableau 33.15 dresse la liste dun certain nombre de tests reprsentatifs accompagne
dexemples de produits quils permettent didentifier.
Tableau 33.15 Exemples de tests spcialiss pour mesurer la neurotoxicit
Fonction
Procd
Agents responsables
Neuromusculaire
Faiblesse

Force de prhension; endurance la nage;


suspension une barre; fonction motrice
discriminante; cartement des membres
postrieurs

n-Hexane, mthylbutylctone,
carbaryle

Incoordination

Rotarod, aspect de la dmarche

3-Actylpyridine, thanol

Tremblement

Echelle dvaluation, analyse spectrale

Chlordcone, pyrthrodes de
type 1, DDT

Myoclonie, spasmes

Echelle dvaluation, analyse spectrale

DDT, pyrthrodes de type 2

Sensorielle
Audition

Conditionnement discriminant, modification Tolune, trimthyltain


de rflexe

Toxicit visuelle

Conditionnement discriminant

Mthylmercure

Toxicit
somatosensorielle

Conditionnement discriminant

Acrylamide

Sensibilit la douleur Conditionnement discriminant; batterie


dobservation fonctionnelle

Parathion

Toxicit olfactive

3-Mthylindole mthylbromure

Conditionnement discriminant

Apprentissage, mmoire
Accoutumance

Rflexe de sursaut

Diisopropylfluorophosphate
(DFP)

Conditionnement
classique

Membrane nictitante, aversion du got


conditionn, vitement passif,

Aluminium, carbaryle,
trimthyltain, IDPN,

conditionnement olfactif
Conditionnement
Evitement une voie, vitement deux voies,
oprant ou instrumental vitement de labyrinthe Y, labyrinthe deau
Biol, labyrinthe deau Morris, labyrinthe de
bras radial, appariement diffr
lchantillon, acquisition rpte,
apprentissage de discrimination visuelle

trimthyltain (nonatal)
Chlordcone, plomb (nonatal),
hypervitaminose A, styrne,
DFP, trimthyltain, DFP,
carbaryle, plomb

Source: EPA, 1993.


Une fois ces tests effectus, on peut procder des valuations plus complexes, rserves en
gnral aux tudes de mcanisme plutt que didentification du risque. Les mthodes in vitro
pour lidentification du risque neurotoxique sont dune application limite, car elles ne
renseignent aucunement sur les effets au niveau des fonctions complexes, telles que
lapprentissage. Par contre, elles peuvent tre trs utiles pour dfinir les cibles de la toxicit et
amliorer la prcision des tudes dose-rponse au niveau des cibles (voir OMS, 1986 et EPA,
1993 pour des observations dtailles des principes et des mthodes didentification des
neurotoxiques potentiels).
Lvaluation dose-rponse
Nous avons expliqu que la relation entre la toxicit et la dose peut tre tablie partir de
donnes humaines, quand elles existent, ou partir dtudes sur animaux. Aux Etats-Unis, on
emploie en gnral pour les neurotoxiques une approche de type facteur dincertitude ou de
scurit. Pour cela, on fixe un niveau sans effet nocif observ (No Observed Adverse Effect
Level (NOAEL)) ou le niveau du plus faible effet nocif observ (Lowest Observed Adverse
Effect Level (LOAEL)), le rsultat obtenu tant ensuite divis par un facteur dincertitude ou
de scurit (gnralement un multiple de 10), qui permet de tenir compte de limperfection
des donnes, de la sensibilit potentielle plus leve chez lhumain et de la variabilit de la
rponse humaine en fonction de lge ou dautres paramtres. Le nombre qui rsulte de ce
calcul est appel dose de rfrence (DRf) ou concentration de rfrence (CRf). Pour tablir le
LOAEL ou le NOAEL, on se fonde en gnral sur leffet produit la dose la plus faible chez
lespce animale et le sexe les plus sensibles. La conversion de la dose animale lexposition
humaine est effectue grce des mthodes normalises de dosimtrie interespces qui
tiennent compte des diffrences de dure de vie et de dure dexposition.
Lutilisation dun facteur de scurit suppose quil existe un seuil ou une dose au-dessous
desquels aucun effet nocif ne se produit. Il peut savrer difficile dtablir des seuils pour des
neurotoxiques spcifiques par la voie exprimentale; ces seuils sont bass sur des hypothses
relatives au mcanisme daction qui peuvent ne pas convenir pour tous les neurotoxiques
(Silbergeld, 1990).
Lvaluation de lexposition
A ce stade, les sources, les voies, les doses et les temps dexposition un neurotoxique sont
values dans une population humaine, une sous-population ou mme chez des individus.
Cette information peut tre obtenue grce des contrles dambiance ou partir
dchantillons humains, par des estimations bases sur des conditions normalises
dexposition (telles que les conditions du lieu de travail et les tches effectues) ou encore
partir de modles sur le devenir et la dispersion dans lenvironnement (voir EPA, 1992, pour
les directives gnrales relatives aux mthodes dvaluation de lexposition). Dans quelques
cas limits, on peut recourir aux indicateurs biologiques pour valider les conclusions et les
estimations sur lexposition, bien que les indicateurs utilisables pour les neurotoxiques soient
assez peu nombreux.
La caractrisation du risque

Pour caractriser le risque, on doit lidentifier et valuer la relation dose-rponse et


lexposition. Pour cela, on est appel faire des hypothses sur lextrapolation des fortes
doses aux faibles doses ou de lanimal lhumain, ainsi que sur ladquation des hypothses
de seuil et des facteurs de scurit.
La toxicologie de la reproduction Les mthodes dvaluation du risque
Les risques pour la reproduction peuvent concerner de multiples paramtres fonctionnels et
cibles cellulaires chez lhumain et se traduire par des effets au niveau du sujet atteint et de sa
descendance. Ces risques peuvent affecter le dveloppement du systme reproducteur chez le
mle ou la femelle, les comportements sexuels, la fonction hormonale, lhypothalamus et
lhypophyse, les gonades et les cellules germinales, la fertilit, la gestation et la dure de la
fonction de reproduction (OTA, 1985). De plus, les produits chimiques mutagnes peuvent
galement affecter la fonction reproductrice en lsant lintgrit des cellules germinales
(Dixon, 1985).
La nature et ltendue des effets nocifs dune exposition chimique sur les fonctions de
reproduction dans les populations humaines sont encore trs peu connues. On dispose dassez
peu dinformations sur la surveillance de paramtres tels que la fertilit de lhomme ou de la
femme, lge de la mnopause chez la femme, ou la numration spermatique chez lhomme.
Pourtant, des hommes et des femmes sont employs dans des branches o ils sont exposs
des produits prsentant un danger pour la fonction de reproduction (OTA, 1985).
La prsente rubrique met laccent sur les problmes spcifiques lvaluation du risque des
toxiques pour la reproduction, sans revenir sur les aspects communs lvaluation des risques
touchant la fois le systme reproducteur et le systme nerveux. Comme pour les
neurotoxiques, la responsabilit en matire de rglementation des produits affectant la
fonction de reproduction incombe lEPA, lOSHA, la FDA et le CPSC. Parmi ces
organismes, seule lEPA sest dote de lignes directrices permettant lvaluation du risque
pour les fonctions de reproduction. Aux Etats-Unis, lEtat de Californie a lui aussi labor des
mthodes pour valuer le risque toxique sur les fonctions de reproduction, aux termes dune
loi dEtat, la proposition 65 (Pease et coll., 1991).
Les agents toxiques pour les fonctions reproductrices, comme les neurotoxiques, peuvent
affecter lun des nombreux organes cibles ou sites molculaires de cette fonction. Leur
valuation est complexe puisquil est ncessaire dvaluer sparment et simultanment trois
organismes distincts: le mle, la femelle et la descendance (Mattison et Thomford, 1989).
Alors que lun des critres essentiels de la fonction reproductrice est la conception dun enfant
sain, la biologie de la reproduction intervient galement dans la sant des organismes en
dveloppement ou matures indpendamment de leur implication dans la procration. Par
exemple, la perte de la fonction ovulatoire par dpltion naturelle ou ablation chirurgicale des
ovaires influe sur la sant des femmes, puisquelle entrane des modifications de la pression
sanguine, du mtabolisme lipidique et de la physiologie osseuse. Les modifications
biochimiques hormonales peuvent tre lorigine dune plus grande prdisposition au cancer.
Lidentification du risque
Lidentification dun risque sur les fonctions de reproduction peut se faire partir de donnes
humaines ou animales. En gnral, les donnes humaines sont assez peu nombreuses, car elles
ne peuvent tre obtenues quau prix dune surveillance astreignante pour dtecter les troubles
de la fonction reproductrice, tels que le spermogramme, la frquence ovulatoire et la longueur
du cycle, ou lge de la pubert. La dtection dun risque sur la reproduction partir
dinformations sur les taux de fertilit ou de donnes sur le nombre de grossesses peut tre
bouleverse par la suppression intentionnelle de fertilit exerce par beaucoup de couples
dans le cadre des mesures de planification familiale. La surveillance minutieuse de certaines

populations montre que le taux dchec de la reproduction (avortements) peut tre trs lev,
lorsquon value des indicateurs biologiques de dbut de grossesse (Sweeney et coll., 1988).
Les protocoles dtude faisant appel aux animaux dexprience sont largement employs pour
identifier les toxiques agissant sur la reproduction. Dans la plupart de ces tudes, comme
celles effectues aux Etats-Unis par la FDA et lEPA et, au niveau international, selon les
directives de lOCDE, les effets dagents suspects sont mis en vidence daprs: la fertilit
aprs exposition du mle ou de la femelle; lobservation des comportements sexuels au
moment de laccouplement; et lexamen histopathologique des gonades et des glandes
sexuelles accessoires, telles que les glandes mammaires (EPA, 1994). Les tudes de toxicit
sur les fonctions de reproduction impliquent souvent ladministration du produit aux animaux
sur une ou plusieurs gnrations afin de dceler les effets sur le processus de la reproduction
dans son intgralit et dtudier les effets sur les organes spcifiques de la reproduction. Il est
recommand de faire porter les tudes sur plusieurs gnrations, car elles permettent de
dtecter des effets induits par une exposition lors du dveloppement du systme reproducteur
in utero. Un protocole spcial, le protocole dvaluation de la toxicit sur la reproduction par
administration continue (RACB), a t mis au point aux Etats-Unis dans le cadre du
Programme national de toxicologie. Ce test fournit des donnes sur les modifications de
lespacement temporel des parturitions (refltant la fonction ovulatoire) et sur le nombre et la
taille des portes pendant toute la priode du test. Quand le test est effectu tout au long de la
vie de la femelle, il donne des informations sur les premiers troubles de reproduction. Les
mesures sur le sperme peuvent tre ajoutes au RACB pour dceler les modifications de la
fonction reproductrice chez le mle. Le test du dominant ltal, qui est un test spcial pour
dtecter la perte de pr- ou postimplantation, contribue mettre en vidence les effets
mutagnes sur la spermatogense.
Des tests in vitro ont galement t mis au point comme tests de dpistage de la toxicit sur
les fonctions de reproduction (et sur le dveloppement) (Heindell et Chapin, 1993). Ces tests,
qui sont gnralement utiliss en complment des tests in vivo, fournissent davantage
dinformations sur la cible et sur le mcanisme des effets observs.
Le tableau 33.16 montre les trois types de paramtres dvaluation de la toxicit sur les
fonctions de reproduction reprsentatifs du couple ou spcifiques de la femelle ou du mle.
Les paramtres reprsentatifs du couple incluent ceux qui sont tudis sur plusieurs
gnrations et sur lorganisme seul. Ils incluent galement en gnral lvaluation de la
porte. A noter que la mesure de la fertilit chez les rongeurs manque gnralement de
sensibilit, par rapport aux mesures effectues chez lhumain et que les effets nocifs sur la
fonction reproductrice peuvent se produire de bien plus faibles doses que celles qui affectent
la fertilit de manire significative (EPA, 1994). Les paramtres spcifiques du mle peuvent
inclure les tests du dominant ltal de mme que lvaluation histopathologique des organes et
du sperme, le dosage des hormones et des marqueurs du dveloppement sexuel. La
fonctionnalit du sperme peut galement tre value par des mthodes de fertilisation in vitro
pour dtecter les proprits de pntration et les aptitudes des cellules germinales; ces tests
sont prcieux parce quils sont directement comparables aux valuations in vitro conduites
dans les centres de fertilit humaine, mme sils ne fournissent pas par eux-mmes une
information dose-rponse. Les paramtres propres la femelle incluent, en plus de
lhistopathologie des organes et des dosages hormonaux, lvaluation des suites de la
reproduction, dont la lactation et la croissance de la porte.
Tableau 33.16 Paramtres utiliss en toxicologie des fonctions de reproduction
Paramtres lis au couple
Etudes multignrations

Autres paramtres de la reproduction

Taux et dure daccouplement


(temps de gestation1)

Taux dovulation

Taux de gestation1

Taux de fcondation

Taux de dlivrance1

Perte avant implantation

Dure de gestation1

Nombre dimplantations

Taille de la porte (totale et


vivante)

Perte aprs implantation1

Nombre de petits vivants et morts Malformations et modifications internes1


(taux de mortalit ftale)1
Sexe de la progniture

Dveloppement structurel et fonctionnel postnatal1

Poids la naissance1
Poids postnatal1
Survie de la progniture1
Malformations et modifications
externes1
Reproduction de la progniture1
Paramtres spcifiques du mle
Poids des organes

Testicules, pididyme, vsicules sminales, prostate,


hypophyse

Examen visuel et histopathologie Testicules, pididyme, vsicules sminales, prostate,


hypophyse
Evaluation du sperme1

Numration spermatique et qualit (morphologie, motilit)

Taux hormonaux1

Hormone lutinisante, FSH, testostrone, strogne,


prolactine

Dveloppement

Descente des testicules1, sparation prputiale, production


de sperme1, distance ano-gnitale, aspect des organes
gnitaux externes1
Paramtres spcifiques de la femelle

Poids corporel
Poids des organes

Ovaire, utrus, vagin, hypophyse

Examen visuel et histopathologie Ovaire, utrus, vagin, hypophyse, oviducte, glande


mammaire
Normalit du cycle stral
(menstruel1)

Cytologie du frottis vaginal

Taux hormonaux1

LH, FSH, strogne, progestrone, prolactine

Lactation1

Croissance de la progniture

Dveloppement

Normalit des organes gnitaux externes1, ouverture

vaginale, cytologie du frottis vaginal, dbut du


fonctionnement de lstrus (menstruation1)
Snescence (mnopause1)
1

Cytologie du frottis vaginal, histologie ovarienne

Paramtres pouvant tre obtenus de manire relativement non invasive chez lhumain.
Source: EPA, 1994.
Aux Etats-Unis, lidentification du risque se termine par une valuation qualitative des
donnes sur la toxicit qui permet de classer les produits chimiques selon quils prsentent ou
non une preuve suffisante de risque (EPA, 1994). Par preuve suffisante, on entend des
donnes pidmiologiques fournissant des arguments convaincants de la relation causale (ou
de son absence), bass sur des tudes cas-tmoins ou de cohortes, ou des sries de cas bien
tays. Des donnes suffisantes sur les animaux peuvent tre couples des donnes limites
chez lhumain pour confirmer lexistence dun risque sur la reproduction: pour tre
suffisantes, les tudes exprimentales doivent en gnral appliquer les directives de lEPA sur
deux gnrations et comporter un minimum de donnes dmontrant un effet nocif sur la
fonction reproductrice dans une tude bien conduite sur une espce approprie. Des donnes
humaines limites peuvent tre disponibles ou non; elles ne sont pas ncessaires aux fins de
lidentification du risque. Pour exclure un risque potentiel sur la reproduction, les donnes
animales doivent inclure un ensemble de paramtres tabli partir de plusieurs tudes
montrant labsence deffet nocif sur la reproduction aux doses minimales toxiques pour
lanimal (EPA, 1994).
Lvaluation dose-rponse
Comme dans le cas de lvaluation des agents neurotoxiques, la dmonstration deffets lis
la dose constitue une partie importante de lvaluation du risque pour les toxiques de la
reproduction. Les analyses dose-rponse achoppent sur deux difficults: la toxicocintique
complexe lors de la gestation, et limportance de distinguer la toxicit qui affecte
vritablement la reproduction de la toxicit gnrale sur lorganisme. Les animaux affaiblis,
ou ceux prsentant une toxicit non spcifique notable (une perte de poids par exemple)
peuvent ne pas ovuler ou saccoupler. Une toxicit maternelle peut affecter la viabilit de la
gestation ou la possibilit de lactation. Ces effets, bien que rvlateurs dune toxicit, ne sont
pas spcifiques de la reproduction (Kimmel et coll., 1986). Lvaluation de la relation doserponse pour un paramtre spcifique, tel que la fertilit, doit seffectuer dans le cadre dune
tude gnrale de la reproduction et du dveloppement. Les relations dose-rponse pour
diffrents effets peuvent tre individuellement significatives, mais interfrer entre elles. Ainsi,
des agents qui rduisent la taille de la porte peuvent ne pas avoir deffet sur le poids de celleci en raison dune faible interfrence sur la nutrition intra-utrine.
Lvaluation de lexposition
Le moment et la dure des expositions sont des facteurs qui revtent une grande importance
lorsquon se propose dvaluer la toxicit sur la reproduction. Selon le processus biologique
en cause, les mesures cumulatives de lexposition peuvent ne pas tre suffisamment prcises.
On sait que lexposition peut avoir des consquences variables aussi bien chez lhumain que
chez lanimal selon le stade de dveloppement auquel elle se produit chez le mle et chez la
femelle (Gray et coll., 1988). Les consquences dun effet toxique au niveau de la
spermatogense ou de lovulation dpendent galement du moment o elles se produisent. Les
effets sur la spermatogense peuvent tre rversibles si lexposition cesse, alors que la toxicit
sur lovocyte nest pas rversible puisque le nombre de cellules germinales utilisables pour
lovulation est fixe (Mattison et Thomford, 1989).
La caractrisation du risque

Comme pour les neurotoxiques, on suppose quil existe de faon gnrale un seuil pour les
toxiques de la reproduction. Cependant, laction des agents mutagnes sur les cellules
germinales peut tre considre comme une exception cette hypothse gnrale. Pour les
autres paramtres, on calcule une DRf (dose de rfrence) ou une CRf (concentration de
rfrence) comme pour les neurotoxiques en dterminant le NOAEL ou le LOAEL et en
appliquant un facteur de scurit. Leffet utilis pour tablir le NOAEL ou le LOAEL est le
paramtre le plus sensible chez lespce mammifre la plus approprie et la plus sensible
(EPA, 1994). Le facteur de scurit prend en compte les variations interespces et intraespce,
la possibilit de dfinir un vritable NOAEL ainsi que la sensibilit du paramtre dtect.
La caractrisation du risque devrait galement sintresser des groupes spcifiques de
population soumis au risque, en tenant notamment compte des diffrences mle-femelle, de
ltat de la gestation et de lge. On devra prendre en considration les sujets particulirement
sensibles, comme les femmes allaitant, celles dont le nombre dovocytes est rduit, les
hommes faible numration spermatique, ou encore les adolescents prpubres.
LES APPROCHES DE LIDENTIFICATION DU RISQUE: LE CIRC
Harri Vainio et Julian Wilbourn
Depuis 1971, le Centre international de recherche sur le cancer (CIRC) publie, dans le cadre
de son programme didentification du risque cancrogne chez ltre humain, une srie de
monographies sous le titre Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans
(Monographies du CIRC sur lvaluation des risques de cancrognicit pour lhomme). A ce
jour, 73 volumes ont paru ou sont sous presse et 833 agents ou circonstances dexposition ont
fait lobjet dune tude de cancrognicit (voir annexe).
Ces valuations qualitatives du risque cancrogne chez lhumain correspondent la phase
didentification dans le schma gnralement admis dvaluation du risque qui comprend,
outre lidentification du risque proprement parler, lvaluation de la relation dose-rponse
(avec une extrapolation des valeurs pour lesquelles on ne dispose pas de donnes),
lvaluation de lexposition et la caractrisation du risque en question.
Le programme du CIRC a pour but de procder avec laide de groupes de travail composs
dexperts internationaux lexamen critique et lvaluation des donnes concernant le
pouvoir cancrogne dagents (produits chimiques, groupes de produits chimiques, mlanges,
facteurs physiques ou biologiques) ou de circonstances dexposition (expositions
professionnelles, habitudes culturelles), puis de les publier. Les groupes de travail prparent
des monographies sur les agents individuels ou les expositions et chaque volume est publi et
diffus le plus largement possible. Chaque monographie contient une rubrique sur les
proprits physico-chimiques de lagent, les mthodes danalyse, le mode de production, la
quantit produite, lutilisation, les conditions dexposition et lexposition humaine, et des
rsums de cas isols et dtudes pidmiologiques de cancer humain. On y trouve galement
des rsums des tests de cancrogense exprimentale, une brve description des autres
donnes biologiques importantes, telles que la toxicit et les effets gntiques, qui peuvent
orienter sur le mcanisme daction et, enfin, une valuation globale du pouvoir cancrogne.
La premire partie de ce schma gnral peut tre adapte lorsquil sagit dagents autres que
des produits chimiques ou de mlanges de produits chimiques.
Les principes directeurs de lvaluation des agents cancrognes, qui ont t arrts par divers
groupes dexperts spciaux, figurent dans le prambule des monographies (CIRC, 1994a).
Les outils didentification qualitative du risque (danger) cancrogne
Les donnes obtenues lors dtudes ralises chez des sujets exposs, lors dexpriences sur
des animaux de laboratoire ou encore loccasion dtudes sur lexposition, le mtabolisme,
la toxicit et les effets gntiques chez lhumain et les animaux sont dpouilles, aprs quoi
des corrlations sont tablies.

Ltude du cancer chez lhumain


Trois types dtudes pidmiologiques contribuent lvaluation de la cancrognicit pour
lhumain: les tudes de cohortes, les tudes cas-tmoins et les tudes de corrlation (ou
cologiques). A ces trois types dtudes peut sajouter lexamen de cas isols de cancer.
Les tudes de cohortes et les tudes cas-tmoins associent les diffrentes expositions tudies
lapparition de cancer chez les sujets et donnent une estimation du risque relatif (rapport
entre lincidence ou la mortalit chez les personnes exposes et lincidence ou la mortalit
chez les personnes non exposes) comme principale mesure dassociation.
Dans les tudes de corrlation, les units dinvestigation sont le plus souvent des populations
entires (comme par exemple dans des secteurs gographiques particuliers) et la frquence
des cancers est associe une mesure globale de lexposition de la population lagent, au
mlange ou la circonstance dexposition tudis. Comme lexposition individuelle nest pas
connue, un rapport de cause effet est cependant moins facile prouver partir dtudes de
corrlation qu partir dtudes de cohortes ou dtudes cas-tmoins. Les rapports de cas
isols se basent gnralement sur un soupon, fond sur lexprience clinique, de ce que la
concidence de deux vnements savoir une exposition particulire et la survenue dun
cancer a t plus frquente que ce que lon aurait pu attendre du seul fait du hasard. Les
incertitudes entourant linterprtation des rapports de cas et des tudes de corrlation les
rendent, sauf exception, insuffisants pour constituer la seule base permettant de conclure un
rapport causal.
Il est ncessaire de prendre en compte le rle possible de biais et de facteurs de confusion
dans linterprtation des tudes pidmiologiques. Par biais, on entend lintervention, dans
le protocole dune tude ou son droulement, de facteurs qui mneraient de faon errone
surestimer ou sous-estimer lassociation entre la maladie et un agent, un mlange ou une
circonstance dexposition. Par confusion, on entend une situation dans laquelle la relation
avec la maladie apparat plus troite ou moins troite quelle nest rellement en raison dune
association entre le facteur causal apparent et un autre facteur associ une augmentation ou
une diminution de lincidence de la maladie.
Dans lvaluation des tudes pidmiologiques, une association franche ( savoir un risque
relatif lev) est un meilleur indicateur de causalit quune association lche, bien que lon
sache quun risque relatif faible nimplique pas ncessairement une absence de causalit et
quil peut tre important si la maladie est courante. Les associations rptes, dans plusieurs
tudes de protocole identique ou utilisant diffrentes mthodes pidmiologiques, ou encore
menes dans diffrents contextes dexposition, ont plus de chance de mettre en vidence une
relation de cause effet que des observations isoles tires dtudes uniques. Si le risque de la
maladie en question crot avec le degr dexposition, on considre quil y a une forte
indication de causalit, bien que labsence dune rponse proportionnelle ne prouve pas
ncessairement labsence dune relation de causalit. La dmonstration dune diminution du
risque aprs larrt ou la diminution de lexposition des individus ou des populations entires
est galement en faveur dune interprtation de causalit des rsultats.
Lorsque plusieurs tudes pidmiologiques fournissent peu ou pas dindications dune
association entre une exposition et un cancer, on peut en dduire que, dans lensemble, elles
donnent une indication dabsence de cancrognicit. Il faut que la possibilit que le biais, la
confusion ou la mauvaise classification de lexposition ou de son effet puisse expliquer les
rsultats observs soit examine et exclue avec une certitude raisonnable. Il est important de
noter quune indication dabsence de pouvoir cancrogne obtenue de cette faon partir de
plusieurs tudes pidmiologiques ne peut sappliquer quau(x) type(s) de cancer tudi(s) et
aux niveaux de doses et aux intervalles entre la premire exposition et lobservation de la
maladie semblables ou infrieurs ceux observs dans toutes les tudes. Lexprience avec le

cancer humain montre que, dans certains cas, la priode allant de la premire exposition au
dveloppement dun cancer clinique est rarement infrieure vingt ans; les priodes de
latence de beaucoup infrieures trente ans ne peuvent pas constituer une indication dune
absence de cancrognicit.
Les donnes relatives la cancrognicit drives dtudes chez lhumain sont classes selon
les catgories suivantes:
Indications de cancrognicit suffisantes: une relation de cause effet a t tablie entre
lexposition lagent, au mlange ou aux circonstances dexposition examins et le cancer
chez lhumain. Une relation positive a t mise en vidence entre lexposition et la survenue
de cancers dans le cadre dtudes o les effets du hasard, de biais ou de facteurs de confusion
ont pu tre exclus avec suffisamment de certitude.
Indications de cancrognicit limites: une association positive a t tablie entre
lexposition lagent, au mlange ou aux circonstances dexposition considrs et la survenue
de cancers. Une interprtation causale de cette association est crdible, mais il na pas t
possible dexclure avec suffisamment de certitude que le hasard, un biais ou un facteur de
confusion aient pu jouer un rle.
Indications de cancrognicit insuffisantes: les tudes ralises ne sont pas dune qualit,
dune concordance ou dune puissance statistique suffisantes pour permettre de conclure
lexistence ou non dune relation de cause effet, ou bien on ne dispose daucune donne sur
le cancer chez lhumain.
Indications dune absence de cancrognicit: on dispose de plusieurs tudes suffisantes,
couvrant la totalit des niveaux dexposition connus pour tre rencontrs chez lhumain et
dont les rsultats, concordants, ne font pas ressortir dassociation positive entre lexposition
lagent, au mlange ou aux circonstances dexposition considrs et le cancer tudi et ce,
quel que soit le niveau dexposition examin. Une conclusion de ce type ne peut sappliquer
quaux localisations tumorales, aux conditions et niveaux dexposition et la dure
dobservation pris en considration dans les tudes dont on dispose.
La faisabilit de lvaluation du risque cancrogne prsent par un mlange, un processus,
une activit professionnelle ou industrielle partir dtudes pidmiologiques dpend du
moment et du lieu. Lexposition, le processus ou lactivit spcifiques considrs comme
probablement responsables dun risque excessif doivent tre recherchs et lvaluation doit en
tre effectue de la manire la plus prcise possible. La longue priode de latence des cancers
humains complique linterprtation des tudes pidmiologiques. Autre difficult: le fait que
lhumain soit expos simultanment plusieurs produits chimiques qui, par leurs interactions,
peuvent soit augmenter le risque de noplasie, soit le diminuer.
Les tudes du cancer chez lanimal de laboratoire
Il y a une cinquantaine dannes environ que lon a commenc faire des tudes consistant
exposer des animaux de laboratoire (gnralement souris et rats) des cancrognes
potentiels pour donner une orientation scientifique ltude de la cancrogense chimique et
pallier les inconvnients de lutilisation exclusive des donnes pidmiologiques humaines.
Dans les monographies du CIRC, les donnes relatives la cancrognicit pour lanimal de
laboratoire sont classes selon les catgories suivantes:
Indications de cancrognicit suffisantes: une relation de cause effet a t tablie entre
lagent ou le mlange examin et une incidence accrue de noplasmes malins ou dune
combinaison approprie de noplasmes bnins et malins: a) chez deux espces animales ou
plus; ou b) dans le cadre de deux tudes distinctes ou plus, portant sur une mme espce,
effectues des moments diffrents, ou dans des laboratoires diffrents, ou selon des
protocoles diffrents. Exceptionnellement, une seule tude portant sur une seule espce peut
tre considre comme apportant des indications suffisantes de cancrognicit lorsquune

proportion inhabituelle de noplasmes malins a t observe tant du point de vue de leur


incidence que de leur localisation, du type de tumeur ou de lge auquel ils apparaissent.
Indications de cancrognicit limites: les donnes dont on dispose laissent penser quil
existe un effet cancrogne, mais elles sont limites et ne permettent pas une valuation
dfinitive parce que: a) les indications de cancrognicit se limitent une seule exprience;
ou b) des questions restent en suspens en ce qui concerne la justesse du protocole, de la
conduite ou de linterprtation de ltude; ou c) lagent ou le mlange considr fait
augmenter seulement lincidence des noplasmes bnins ou des lsions dont le potentiel
noplasique est incertain, ou encore des tumeurs dont la frquence peut tre naturellement
leve chez certaines souches.
Indications de cancrognicit insuffisantes: les tudes ne peuvent tre interprtes comme
prouvant la prsence ou labsence dun effet cancrogne, parce quelles prsentent
dimportantes faiblesses dordre qualitatif ou quantitatif, ou quon ne dispose pas de donnes
sur le cancer chez lanimal de laboratoire.
Indications dune absence de cancrognicit: on dispose dun nombre suffisant dtudes,
portant sur deux espces au moins, qui montrent que, dans les limites des expriences
ralises, lagent ou le mlange nest pas cancrogne. Lorsque les renseignements obtenus
suggrent une absence de cancrognicit, cette conclusion ne peut sappliquer quaux
espces, aux localisations tumorales et aux niveaux dexposition tudis.
Les autres donnes pertinentes pour une valuation de la cancrognicit et de ses
mcanismes
Les donnes sur les effets biologiques chez lhumain qui sont considres comme utiles sont
rsumes. Il peut sagir de donnes dordre toxicologique, pharmacocintique et mtabolique
et dindices de liaisons avec lADN, de la persistance de lsions de lADN ou daltrations
gntiques chez les sujets exposs. Les donnes toxicologiques (comme celles sur la
cytotoxicit et la rgnration, les liaisons aux rcepteurs et les effets hormonaux et
immunologiques) et celles qui concernent la pharmacocintique et le mtabolisme chez
lanimal de laboratoire sont rsumes lorsquon considre quelles jouent un rle dans
lventuel mcanisme de laction cancrogne de lagent. Les rsultats des tests concernant
les effets gntiques et apparents sont rcapituls pour les mammifres, dont lhumain, les
cellules de mammifres en culture et les systmes cellulaires non mammaliens. Les relations
structure-activit sont mentionnes lorsquelles prsentent un intrt particulier.
Pour lvaluation de lagent, du mlange ou de la circonstance dexposition, toutes les
donnes disponibles portant sur le mcanisme de la cancrogense, provenant dtudes chez
lhumain ou lanimal de laboratoire ou de tests tissulaires et cellulaires, sont rcapitules dans
une ou plusieurs des catgories ci-aprs:
indications de gnotoxicit ( savoir modification de la structure du gne); par
exemple, la relation structure-activit, la formation dadduits, la mutagense (effet sur
des gnes particuliers), la mutation chromosomique/laneuplodie, etc.;
indications de lexistence deffets sur lexpression des gnes en cause ( savoir
modifications fonctionnelles au niveau intracellulaire): par exemple, altrations de la
structure ou de la quantit produite dun proto-oncogne ou dun gne tumorosuppresseur, altrations de lactivation/inactivation mtabolique/rparation de lADN,
etc.;
indications de lexistence deffets spcifiques sur le comportement cellulaire ( savoir
modifications morphologiques ou comportementales au niveau des cellules ou des
tissus): par exemple, induction de mitogense, prolifration de cellules de
compensation, prnoplasie et hyperplasie, survie de cellules prcancreuses ou

cancreuses (immortalisation, immunosuppression), effets sur le pouvoir mtastasique,


etc.;
indications de lexistence dune relation dose-dure dans les effets cancrognes et
dans les interactions entre les agents en cause: par exemple, effet prcoce ou tardif
dduit des tudes pidmiologiques; initiation, promotion, progression ou conversion
maligne, dfinies dans les expriences de cancrognicit chez lanimal;
toxicocintique, etc.
Ces indications ne sexcluent pas les unes les autres, et un agent peut appartenir plusieurs
dentre elles. Cest ainsi que lon pourrait rpertorier laction dun agent sur lexpression de
gnes spcifiques la fois dans la premire et dans la seconde catgorie, mme si lon sait de
faon assez certaine que ces effets rsultent dune toxicit gntique.
Les valuations globales
Enfin, tous les lments dapprciation sont examins dans leur ensemble, afin darriver une
valuation globale de la cancrognicit pour lhumain de lagent, du mlange ou des
circonstances dexposition considrs. En outre, lorsque des donnes complmentaires
incitent penser que dautres produits apparents, pour lesquels on ne dispose pas
dindications directes de leur capacit dinduire des cancers chez lhumain ou chez lanimal
de laboratoire, sont peut-tre aussi cancrognes, on ajoute au compte rendu de lvaluation
un expos des raisons sur lesquelles se fonde cette conclusion.
Lagent, le mlange ou les circonstances dexposition sont dcrits au moyen des termes
dsignant lune des trois catgories ci-aprs, et lappartenance lun des groupes est tablie.
Le classement dun agent, dun mlange ou de circonstances dexposition est affaire de
jugement scientifique et sappuie sur le caractre plus ou moins probant des lments
dapprciation tirs dtudes sur lhumain ou lanimal de laboratoire et dautres informations
pertinentes.
Groupe 1
Lagent (ou le mlange) est cancrogne pour lhumain. Les circonstances dexposition
donnent lieu des expositions qui sont cancrognes pour lhumain.
Cette catgorie nest utilise que lorsquon dispose dindications suffisantes de
cancrognicit chez ltre humain. Exceptionnellement, un agent (mlange) peut tre plac
dans cette catgorie lorsque les indications de cancrognicit pour lhumain ne sont pas tout
fait suffisantes, mais quil existe des indications suffisantes de sa cancrognicit chez
lanimal de laboratoire et de fortes prsomptions que lagent (mlange) agit suivant un
mcanisme de cancrognicit reconnu.
Groupe 2
Cette catgorie comporte les agents, mlanges et circonstances dexposition pour lesquels, au
maximum, on a obtenu des indications de cancrognicit chez lhumain presque suffisantes
et, au minimum, on ne dispose daucune donne concernant lhumain, mais on dtient des
indications suffisantes de cancrognicit pour lanimal de laboratoire. Lesdits agents,
mlanges et circonstances dexposition sont classs soit dans le groupe 2A (probablement
cancrognes pour lhumain), soit dans le groupe 2B (peut-tre cancrognes pour lhumain)
sur la base dindications pidmiologiques et exprimentales de cancrognicit et autres
renseignements pertinents.
Groupe 2A. Lagent (ou le mlange) est probablement cancrogne pour lhumain. Les
circonstances dexposition donnent lieu des expositions qui sont probablement cancrognes
pour lhumain. On fait appel cette catgorie lorsquon dispose dindications limites de
cancrognicit chez ltre humain et dindications suffisantes de cancrognicit chez
lanimal de laboratoire. Dans certains cas, un agent (mlange) peut tre class dans cette
catgorie lorsquon dispose dindications insuffisantes de cancrognicit pour lhumain et

dindications suffisantes de cancrognicit pour lanimal de laboratoire, et de fortes


prsomptions que la cancrogense seffectue par un mcanisme qui fonctionne galement
chez lhumain. Exceptionnellement, un agent, un mlange ou une circonstance dexposition
peuvent tre classs dans cette catgorie si lon ne dispose que dindications limites de
cancrognicit pour lhumain.
Groupe 2B. Lagent (ou le mlange) est peut-tre cancrogne pour lhumain. Les
circonstances dexposition cet agent donnent lieu des expositions qui sont peut-tre
cancrognes pour lhumain. Cette catgorie est employe lorsquon dispose dindications
limites de cancrognicit chez lhumain et dindications insuffisantes de cancrognicit
chez lanimal de laboratoire. On peut aussi y faire appel lorsquon dispose dindications
insuffisantes de cancrognicit pour lhumain, mais dindications suffisantes pour lanimal
de laboratoire. Dans certains cas, on peut classer dans ce groupe un agent, un mlange ou des
circonstances dexposition pour lesquels on a des indications insuffisantes dune action
cancrogne chez lhumain, mais pour lesquels on dispose dindications limites de
cancrognicit chez lanimal de laboratoire, corrobores par dautres donnes pertinentes.
Groupe 3
Lagent (ou le mlange ou les circonstances dexposition) ne peut pas tre class quant sa
cancrognicit pour lhumain. Cette catgorie comprend essentiellement les agents, les
mlanges et les circonstances dexposition pour lesquels les indications de cancrognicit
sont insuffisantes chez lhumain et insuffisantes ou limites chez lanimal de laboratoire.
Exceptionnellement, les agents (ou mlanges) pour lesquels les indications de cancrognicit
sont insuffisantes chez lhumain, mais suffisantes chez lanimal de laboratoire, peuvent tre
classs dans cette catgorie lorsquil existe de fortes prsomptions que le mcanisme de
cancrognicit chez lanimal de laboratoire ne fonctionne pas chez lhumain.
Groupe 4
Lagent (ou le mlange) nest probablement pas cancrogne pour lhumain. Relvent de cette
catgorie les agents et mlanges pour lesquels on dispose dindications suggrant une absence
de cancrognicit chez lhumain ainsi que chez lanimal de laboratoire. Dans certains cas,
peuvent tre classs dans ce groupe des agents ou des mlanges pour lesquels les indications
de cancrognicit pour lhumain sont insuffisants, mais pour lesquels on dispose
dindications suggrant une absence de cancrognicit chez lanimal de laboratoire,
invariablement et fortement corrobores par une large gamme dautres donnes pertinentes.
Les systmes de classement existants sont encore imparfaits et ne permettent pas de rendre
compte de la complexit de la biologie. Ils nen demeurent pas moins des principes directeurs
utiles qui peuvent tre modifis au fur et mesure que nos connaissances en cancrogense
progressent. Dans ce classement par catgorie, il est essentiel de faire confiance aux
jugements scientifiques tablis par les groupes dexperts.
Les rsultats du programme
A ce jour on la vu, 73 monographies du CIRC ont t publies ou sont sous presse et 833
agents ou circonstances dexposition ont t tudis quant leur pouvoir cancrogne.
Soixante-quinze agents ou expositions ont t classs comme cancrognes pour lhumain
(groupe 1), 59 comme probablement cancrognes pour lhumain (groupe 2A), 227 comme
tant peut-tre cancrognes pour lhumain (groupe 2B) et un comme ntant probablement
pas cancrogne pour lhumain (groupe 4). Pour 471 produits ou expositions, les donnes
pidmiologiques et exprimentales disponibles ne permettent pas dvaluer leur pouvoir
cancrogne chez lhumain (groupe 3).
Limportance des donnes sur le mcanisme daction
La modification du prambule, dite pour la premire fois dans le volume 54 des
monographies susmentionnes, donne la possibilit de placer dans le groupe 1 un produit dont

le pouvoir cancrogne nest pas suffisamment prouv du point de vue pidmiologique, alors
quon dispose dindications suffisantes de sa cancrognicit pour lanimal de laboratoire et
quon le souponne fortement dagir chez lhumain selon un mcanisme en rapport avec la
cancrogense. Inversement, un agent pour lequel on dispose dindications insuffisantes de sa
cancrognicit chez lhumain et dindications suffisantes de sa cancrognicit chez lanimal
de laboratoire, associes de fortes prsomptions que le mcanisme de cancrogense ne joue
pas chez lhumain, peut tre plac dans le groupe 3 au lieu du groupe 2B peut-tre
cancrogne pour lhumain dans lequel il aurait d normalement tre rang.
Lutilisation des informations concernant le mcanisme daction a fait lobjet de discussions
loccasion de trois cas rcents: alors quon admet gnralement que le rayonnement solaire est
cancrogne pour lhumain (groupe 1), les tudes pidmiologiques sur le rle des
rayonnements UVA et UVB des lampes solaires napportent quune preuve limite de ce
pouvoir cancrogne chez lhumain. Des substitutions spciales de paires de bases (GCTT)
ont t observes au niveau des gnes suppresseurs de tumeur p53 dans les tumeurs
pithliales des sites exposs au soleil chez lhumain. Bien que les rayonnements UV
puissent induire des transitions similaires dans certains systmes exprimentaux et que les
UVB, UVA et UVC soient cancrognes chez lanimal de laboratoire, les donnes disponibles
sur leur mcanisme daction nont pas t considres comme tant suffisamment probantes
pour permettre au groupe de travail de classer les UVB, UVA et UVC dans un groupe
suprieur au groupe 2A (CIRC, 1992). Dans une tude publie aprs la runion du groupe de
travail (Kress et coll., 1992), des transitions CCTT au niveau du gne p53 ont t mises en
vidence dans les tumeurs cutanes induites par les UVB chez la souris, ce qui donne penser
que les UVB devraient galement tre classs comme cancrognes pour lhumain (groupe 1).
Le second cas o on a envisag de placer un agent dans le groupe 1 en labsence de preuve
pidmiologique suffisante est celui du 4,4-mthylne-bis(2-chloroaniline) (MOCA). Le
MOCA est cancrogne chez le chien et les rongeurs et a un pouvoir gnotoxique significatif.
Il se lie lADN par raction avec le N-hydroxy MOCA et les adduits forms dans les tissus
cibles chez lanimal ont t retrouvs galement au niveau des cellules urothliales dun petit
nombre de personnes exposes. Aprs de longues discussions sur la possibilit dun
reclassement, le groupe de travail a finalement dcid de ranger le produit dans le groupe 2A,
probablement cancrogne pour lhumain (CIRC, 1993).
Troisime et dernier exemple, celui de loxyde dthylne (CIRC, 1994b). Les tudes
pidmiologiques dont on disposait fournissaient des indications limites de sa
cancrognicit pour lhumain, les tudes chez lanimal ayant apport des indications
suffisantes de son pouvoir cancrogne. Au vu des autres donnes pertinentes, loxyde
dthylne a t class comme cancrogne chez lhumain (groupe 1) pour les raisons
suivantes: 1) il induit une augmentation sensible, persistante et dose-dpendante de la
frquence des aberrations chromosomiques et des changes de chromatides surs dans les
lymphocytes priphriques, et de micronoyaux dans les cellules de la moelle osseuse des
travailleurs exposs; 2) il est associ des tumeurs malignes du systme lymphatique et
hmatopotique chez lhumain et chez lanimal de laboratoire; 3) il induit une augmentation
dose-dpendante de la frquence des adduits lhmoglobine chez les personnes exposes et
des augmentations, dose-dpendantes elles aussi, du nombre dadduits lADN et
lhmoglobine chez les rongeurs exposs; 4) il induit des mutations gniques et des
translocations hrditaires dans les cellules germinales de rongeurs exposs; et 5) cest un
mutagne et un clastogne puissant tous les niveaux phylogniques. Pour toutes ces raisons,
loxyde dthylne a donc t class dans la catgorie des agents cancrognes pour lhomme
(groupe 1).
Le prambule prcit donne la possibilit de classer un agent dans le groupe 3 (au lieu du
groupe 2B o il devrait tre normalement rang). Aucun groupe de travail ne sest prvalu de

cette possibilit lorsquil existait la fois des indications suffisantes de cancrognicit dun
agent pour lanimal de laboratoire et une forte prsomption que le mcanisme daction
responsable chez lanimal ne pouvait se produire chez lhumain. Une telle possibilit aurait pu
tre envisage pour le d-limonne si on avait eu des indications suffisantes de sa
cancrognicit chez lanimal, puisquon dispose de donnes donnant penser que les
tumeurs rnales observes chez le rat mle apparaissent lies la production d2microglobuline non synthtise.
Parmi les nombreux produits chimiques classs comme prioritaires par un groupe de travail
spcial en dcembre 1993, on a mis en vidence des mcanismes daction communs supposs
intrinsques ou identifi certaines classes de produits sur la base de leurs proprits
biologiques. Le groupe de travail a recommand, quavant de procder lvaluation de
produits tels que les prolifrateurs de peroxysomes, les fibres, les poussires et les agents
thyrostatiques dans le programme des monographies, il convenait de crer des groupes
spciaux qui seraient chargs de dresser un bilan des connaissances sur les mcanismes
daction particuliers de ces agents.
ANNEXE: VALUATIONS GLOBALES DE LA CANCROGNICIT POUR
LHUMAIN DAPRS LES VOLUMES 1-73 DES MONOGRAPHIES DU CIRC (833
AGENTS, MLANGES ET EXPOSITIONS)
Groupe 1: cancrognes pour lhumain (75)
Agents et groupes dagents
Aflatoxines, mlanges naturels [1402-68-2] (1993)
Amiante [1332-21-4] (1987)
4-Aminobiphnyle [92-67-1] (1987)
Arsenic [7440-38-2] et ses composs (1987)2
Azathioprine [446-86-6] (1987)
Benzne [71-43-2] (1987)
Benzidine [92-87-5] (1987)
Bryllium [7440-41-7] et ses composs (1993)3
Bis(2-chlorothyl)-2-naphthylamine (Chlornaphazine) [494-03-1] (1987)
Bis(chloromthyl)ther [542-88-1] et chloromthyl- mthylther [107-30-2] (qualit
technique) (1987)
Cadmium [7440-43-9] et ses composs (1993)3
Chlorambucile [305-03-3] (1987)
1-(2-Chlorothyl)-3-(4-mthylcyclohexyl)-1-nitrosoure (Mthyl-CCNU; Smustine) [1390909-6] (1987)
Chlorure de vinyle [75-01-4] (1987)
Ciclosporine [79217-60-0] (1990)
Composs du chrome [VI] (1990)3
Composs du nickel (1990) 3
Contraceptifs oraux en association (1999)4
Contraceptifs oraux squentiels (1987)
Cyclophosphamide [50-18-0] [6055-19-2] (1987)
Dithylstilbstrol [56-53-1] (1987)
Dimthanesulfonate de 1,4-butanediol (Busulphan; Myleran) [55-98-1] (1987)
Erionite [66733-21-9] (1987)
Gaz moutarde (Moutarde sulfure) [505-60-2] (1987)

Helicobacter pylori (infection) (1994)


Melphalane [148-82-3] (1987)
8-Mthoxypsoralne (Mthoxsalne) [298-81-7] associ au rayonnement ultraviolet A (1987)
MOPP (traitement associ utilisant moutarde azote, vincristine, procarbazine et prednisone)
et autres chimio- thrapies associes utilisant des agents alkylants (1987)
2-Naphtylamine [91-59-8] (1987)
strognothrapie de substitution (1999)
strognes non strodiens (1987)2
strognes strodiens (1987)2
Opistorchis viverrini (infestation) (1994)
Oxyde dthylne [75-21-8] (1994)6
Radon [10043-92-2] et ses produits de filiation (1988)
Rayonnement solaire (1992)
Schistosoma hmatobium (infestation) (1994)
Silice cristalline [14808-60-7] (inhale sous forme de quartz ou de cristobalite de source
professionnelle) (1997)
Talc contenant des fibres asbestiformes (1987)
Tamoxifne [10540-29-1] (1996)5
Ttrachloro-2,3,7,8 dibenzo-p-dioxine [1746-01-6] (1997)6
Thiotpa [52-24-4] (1990)
Trosulfan [299-75-2] (1987)
Virus dEpstein-Barr (1997)
Virus de lhpatite B (VHB) (infection chronique) (1994)
Virus de lhpatite C (VHC) (infection chronique) (1994)
Virus de limmunodficience humaine de type 1 (VIH 1) (infection) (1996)
Virus du papillome humain de type 16 (VPH 16) (1995)
Virus du papillome humain de type 18 (VPH 18) (1995)
Virus humain de la leucmie cellules T, type I (HTLV-1) (1996)
Mlanges
Boissons alcooliques (1988)
Brais de houille [65996-93-2] (1987)
Fume de tabac (1987)
Goudrons de houille [8007-45-2] (1987)
Huiles de schiste [68308-34-9] (1987)
Huiles minrales, peu ou non raffines (1987)
Mastication de btel avec tabac (1987)
Mlanges analgsiques contenant de la phnactine (1987)
Poisson sal (faon chinoise) (1993)
Poussires de bois (1995)
Produits du tabac non fum (1987)
Suies (1987)
Expositions professionnelles
Aluminium (production) (1987)

Auramine (fabrication) (1987)


Brouillards dacides inorganiques forts contenant de lacide sulfurique (exposition
professionnelle) (1992)
Caoutchouc (industrie) (1987)
Charbon (gasification) (1987)
Chaussures (fabrication et rparation) (1987)
Coke (production) (1987)
Ebnisterie et menuiserie (1987)
Hmatite (extraction souterraine avec exposition concomitante au radon) (1987)
Isopropanol (fabrication) (procd aux acides forts) (1987)
Magenta (fabrication) (1993)
Mtallurgie du fer et de lacier (1987)
Peintres (exposition professionnelle) (1989)
Groupe 2A: probablement cancrognes pour lhumain (59)
Agents et groupes dagents
Acrylamide [79-06-1] (1994)7
Adriamycine [23214-92-8] (1987)7
Azacitidine [320-67-2] (1990)7
Benzo[a]anthracne [56-55-3] (1987)7
Benzo[a]pyrne [50-32-8] (1987)7
Bischlorothyl-nitrosoure (BCNU) [154-93-8] (1987)
Bromure de vinyle [593-60-2] (1999)7
1,3-Butadine [106-99-0] (1999)
Captafol [2425-06-1] (1991)7
Chloramphnicol [56-75-7] (1990)7
1-(2-Chlorothyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosoure (CCNU) [13010-47-4] (1987)7
p-Chloro-o-toluidine [95-69-2] et ses sels dacides forts (1990)3
Chlorozotocine [54749-90-5] (1990)7
Chlorure de dimthylcarbamoyle [79-44-7] (1999)7
Cisplatine [15663-27-1] (1987)7
Clonorchis sinensis (infestation) (1994)7
Colorants base de benzidine (1987)7
Dibenzo[a,h]anthracne [53-70-3] (1987)7
1,2-Dibromothane [106-93-4] (1999)7
1,2-Dimthylhydrazine [540-73-8] (1999)
Epichlorohydrine [106-89-8] (1999)7
N-Ethyl-N-nitrosoure [759-73-9] (1987)7
Fluorure de vinyle [75-02-5] (1995)
Formaldhyde [50-00-0] (1995)
Herps virus du sarcome de Kaposi/herps virus humain no 8 (1997)
Hydrochlorure de procarbazine [366-70-1] (1987)7
IQ (2-Amino-3-mthylimidazo[4,5-f]quinoline) [76180-96-6] (1993)7
Mthanesulfonate de mthyle [66-27-3] (1999)7

5-Mthoxypsoralne [484-20-8] (1987)7


4,4-Mthylne bis(2-chloroaniline) (MOCA) [101-14-4] (1993)7
N-Mthyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) [70-25-7] (1987)7
N-Mthyl-N-nitrosoure [684-93-5] (1987)7
Moutarde azote [51-75-2] (1987)
N-Nitrosodithylamine [55-18-5] (1987)7
N-Nitrosodimthylamine [62-75-9] (1987)7
7,8-Oxyde de styrne [96-09-3] (1994)7
Phnactine [62-44-2] (1987)
Phosphate de tris(2,3 dibromopropyle) [126-72-7] (1999)7
Rayonnements ultraviolets A (1992)7
Rayonnements ultraviolets B (1992)7
Rayonnements ultraviolets C (1992)7
Strodes androgniques (anabolisants) (1987)
Sulfate de dithyle [64-67-5] (1999)
Sulfate de dimthyle [77-78-1] (1999)7
Ttrachlorothylne [127-18-4] (1995)
Tolunes -chlors (benzotrichlorure [98-07-7], chlorure de benzal [98-87-3], chlorure de
benzyle [100-44-7]) et chlorure de benzoyle [98-88-4] (expositions mixtes) (1999)
Trichlorothylne [79-01-6] (1995)
1,2,3-Trichloropropane [96-18-4] (1995)
Virus du papillome humain de type 31 (1995)
Virus du papillome humain de type 33 (1995)
Mlanges
Biphnyles polychlors [1336-36-3] (1987)
Crosotes [8001-58-9] (1987)
Gaz dchappement de moteur diesel (1989)
Insecticides non arsenicaux (expositions professionnelles lors de la pulvrisation et de
lapplication) (1991)
Mat chaud (1991)
Expositions professionnelles et autres
Coiffeurs (exposition professionnelle) (1993)
Lampes et tables bronzer (utilisation) (1992)
Raffinage du ptrole (exposition professionnelle) (1989)
Verrerie dart, verre creux et verre moul (fabrication) (1993)
Groupe 2B: peut-tre cancrognes pour lhumain (227)
Agents et groupes dagents
A--C (2-Amino-9H-pyrido[2,3-b]indole) [26148-68-5] (1987)
Actaldhyde [75-07-0] (1999)
Actamide [60-35-5] (1999)
Actate de mdroxyprogestrone [71-58-9] (1987)
Actate de mthylazoxymthanol [592-62-1] (1987)
Actate de vinyle [108-05-4] (1995)
Acide cafique [331-39-5] (1993)

Acide chlorendique [115-28-6] (1990)


Acide nitrilotriactique [139-13-9] et ses sels (1999)3
Acrylate dthyle [140-88-5] (1999)
Acrylonitrile [107-13-1] (1999)
AF-2 [2-(2-Furyl)-3 (5-nitro-2-furyl)acrylamide] [3688-53-7] (1987)
Aflatoxine M1 [6795-23-9] (1993)
p-Aminoazobenzne [60-09-3] (1987)
o-Aminoazotolune [97-56-3] (1987)
2-Amino-5-(5-nitro-2- furyl)-1,3,4-thiadiazole [712-68-5] (1987)
Amitrole [61-82-5] (1987)
o-Anisidine [90-04-0] (1999)
Aramite [140-57-8] (1987)
Auramine [492-80-8] (qualit technique) (1987)
Azasrine [115-02-6] (1987)
Aziridine [151-56-4] (1999)
Benzo[b]fluoranthne [205-99-2] (1987)
Benzo[j]fluoranthne [205-82-3] (1987)
Benzo[k]fluoranthne [207-08-9] (1987)
Benzofuranne [271-89-6] (1995)
Blomycines [11056-06-7] (1987)8
Bleu direct CI-15 [2429-74-5] (1993)
Bleu dispers 1 [2475-45-8] (1990)
Bleu HC 1 [2784-94-3] (1993)
Bleu Trypan [72-57-1] (1987)
Bromate de potassium [7758-01-2] (1999)
Bromodichloromthane [75-27-4] (1999)
Butyl hydroxyanisole (BHA) [25013-16-5] (1987)
-Butyrolactone [3068-88-0] (1999)
Catchol [120-80-9] (1999)
Chlordane [57-74-9] (1991)
Chlordcone (Kpone) [143-50-0] (1987)
Chlorhydrate de phnazopyridine [136-40-3] (1987)
Chlorhydrate de phnoxybenzamine [63-92-3] (1987)
p-Chloroaniline [106-47-8] (1993)
Chloroforme [67-66-3] (1999)
1-Chloro-2-mthylpropne [513-37-1] (1995)
4-Chloro-o-phnylnediamine [95-83-0] (1987)
Chloroprne [126-99-8] (1999)
Cobalt [7440-48-4] et ses composs (1991)3
Complexe fer-dextran [9004-66-4] (1987)
Composs de mthylmercure (1993)3
Contraceptifs, uniquement progestatifs (1999)
p-Crsidine [120-71-8] (1987)

Cycasine [14901-08-7] (1987)


Dacarbazine [4342-03-4] (1987)
Dantrone (Chrysazine; 1,8-Dihydroxyanthraquinone) [117-10-2] (1990)
Daunomycine [20830-81-3] (1987)
DDT [p,p-DDT, 50-29-3] (1991)
N,N-Diactylbenzidine [613-35-4] (1987)
2-4-Diaminoanisole [615-05-4] (1987)
4,4-Diaminodiphnylther [101-80-4] (1987)
2,4-Diaminotolune [95-80-7] (1987)
Dibenzo[a,h]acridine [226-36-8] (1987)
Dibenzo[a,j]acridine [224-42-0] (1987)
7H-Dibenzo[c,g]carbazole [194-59-2] (1987)
Dibenzo[a,e]pyrne [192-65-4] (1987)
Dibenzo[a,h]pyrne [189-64-0] (1987)
Dibenzo[a,i]pyrne [189-55-9] (1987)
Dibenzo[a,l]pyrne [191-30-0] (1987)
1,2-Dibromo-3-chloropropane [96-12-8] (1999)
p-Dichlorobenzne [106-46-7] (1999)10
3,3-Dichlorobenzidine [91-94-1] (1987)
3,3-Dichloro-4,4-diaminodiphnylther [28434-86-8] (1987)
1,2-Dichlorothane [107-06-2] (1999)
Dichloromthane (Chlorure de mthylne) [75-09-2] (1999)
1,3-Dichloropropne [542-75-6] (qualit technique) (1999)
Dichlorvos [62-73-7] (1991)
1,2-Dithylhydrazine [1615-80-1] (1999)
Diglycidylrsorcinolther [101-90-6] (1999)
Dihydrosafrol [94-58-6] (1987)
Diisocyanates de tolune [26471-62-5] (1999)
3,3-Dimthoxybenzidine (o-Dianisidine) [119-90-4] (1987)
p-Dimthylaminoazobenzne [60-11-7] (1987)
trans-2[(Dimthylamino)mthylimino]5-[2-(5-nitro-2-furyl)- vinyle]-1,3,4-oxadiazole
[25962-77-0] (1987)
2,6-Dimthylaniline (2,6-Xylidine) [87-62-7] (1993)
3,3-Dimthylbenzidine (o-Toluidine) [119-93-7] (1987)
1,1-Dimthylhydrazine [57-14-7] (1999)
3,7-Dinitrofluoranthne [105735-71-5] (1996)
3,9-Dinitrofluoranthne [22506-53-2] (1996)
1,6-Dinitropyrne [42397-64-8] (1989)
1,8-Dinitropyrne [42397-65-9] (1989)
2,4-Dinitrotolune [121-14-2] (1996)
2,6-Dinitrotolune [606-20-2] (1996)
1,4-Dioxane [123-91-1] (1999)
1,2-Epoxybutane [106-88-7] (1999)8

Ethylnethioure [96-45-7] (1987)


Fibres cramiques (1988)
2-(2-Formylhydrazino)-4-(5-nitro-2-furyl)thiazole [3570-75-0] (1987)
Fougre arborescente (1987)
Furanne [110-00-9] (1995)
Glu-P-1 (2-Amino-6-mthyldipyrido[1,2-a:3,2-d]imidazole) [67730-11-4] (1987)
Glu-P-2 (2-Aminodipyrido[1,2-a:3,2-d]imidazole) [67730-10-3] (1987)
Glycidaldhyde [765-34-4] (1999)
Grisofulvine [126-07-8] (1987)
Heptachlore [76-44-8] (1991)
Herbicides chlorophnoxy (1987)
Hexachlorobenzne [118-74-1] (1987)
Hexachlorocyclohexanes (1987)
Hexachlorothane [67-72-1] (1999)
Hexamthylphosphoramide [680-31-9] (1999)
Hydrazine [302-01-2] (1999)
Indeno[1,2,3-cd]pyrne [193-39-5] (1987)
Isoprne [78-79-5] (1999)
Laine de laitier (1988)
Laine de roche (1988)
Laine de verre (1988)
Lasiocarpine [303-34-4] (1987)
Magenta [632-99-5] (contenant du Rouge basique CI-9) (1993)
MeA--C (2-Amino-3-mthyl-9H-pyrido[2,3-b]indole) [68006-83-7] (1987)
MeIQ (2-Amino-3,4-dimthylimidazo[4,5-f]quinoline) [77094-11-2] (1993)
MeIQx (2-Amino-3,8-dimthylimidazo[4,5-f]quinoxaline) [77500-04-0] (1993)
Merphalane [531-76-0] (1987)
Mthanesulfonate dthyle [62-50-0] (1987)
2-Mthylaziridine (Propylneimine) [75-55-8] (1999)
5-Mthylchrysne [3697-24-3] (1987)
4,4-Mthylne-bis(2-mthylaniline) [838-88-0] (1987)
4,4-Mthylnedianiline [101-77-9] (1987)
2-Mthyl-1-nitroanthraquinone [129-15-7] (puret non connue) (1987)
N-Mthyl-N-nitrosourthane [615-53-2] (1987)
Mthylthiouracile [56-04-2] (1987)
Mtronidazole [443-48-1] (1987)
Mirex [2385-85-5] (1987)
Mitomycine C [50-07-7] (1987)
Monocrotaline [315-22-0] (1987)
5-(Morpholinomthyl)-3-[(5-nitrofurfurylidne)amino]-2- oxazolidinone [3795-88-8] (1987)
Moutarde duracile [66-75-1] (1987)
Nafnopine [3771-19-5] (1987)
Nickel (mtal) [7440-02-0] (1990)

Niridazole [61-57-4] (1987)


5-Nitroacnaphthne [602-87-9] (1987)
2-Nitroanisole [91-23-6] (1996)
Nitrobenzne [98-95-3] (1996)
6-Nitrochrysne [7496-02-8] (1989)
Nitrofne [1836-75-5] (qualit technique) (1987)
2-Nitrofluorne [607-57-8] (1989)
1-[(5-Nitrofurfurylidne)amino]-2-imidazolidinone [555-84-0] (1987)
N-[4-(5-Nitro-2-furyl)-2-thiazolyl]actamide [531-82-8] (1987)
2-Nitropropane [79-46-9] (1999)
1-Nitropyrne [5522-43-0] (1989)
4-Nitropyrne [57835-92-4] (1989)
N-Nitrosodi-n-butylamine [924-16-3] (1987)
N-Nitrosodithanolamine [1116-54-7] (1987)
N-Nitrosodi-n-propylamine [621-64-7] (1987)
3-(N-Nitrosomthylamino)propionitrile [60153-49-3] (1987)
4-(N-Nitrosomthylamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK) [64091-91-4] (1987)
N-Nitrosomthylthylamine [10595-95-6] (1987)
N-Nitrosomthylvinylamine [4549-40-0] (1987)
N-Nitrosomorpholine [59-89-2] (1987)
N-Nitrosonornicotine [16543-55-8] (1987)
N-Nitrosopipridine [100-75-4] (1987)
N-Nitrosopyrrolidine [930-55-2] (1987)
N-Nitrososarcosine [13256-22-9] (1987)
Noir de carbone [1333-86-4] (1996)
Ochratoxine A [303-47-9] (1993)
Orang huileux SS [2646-17-5] (1987)
Oxazpam [604-75-1] (1996)
N-Oxyde de moutarde azote [126-85-2] (1987)
Oxyde de propylne [75-56-9] (1994)
Palygorskite (attapulgite) [12174-11-7] (fibres longues (> 5 m) (1997)
Panfuran-S [794-93-4] (contenant de la dihydroxymthyl- furatrizine) (1987)
Phnobarbital [50-06-6] (1987)
Phnylglycidylther [122-60-1] (1999)
o-Phnylphnate de sodium [132-27-4] (1999)
Phnytone [57-41-0] (1996)
PhIP (2-Amino-1-mthyl-6-phnylimidazo[4,5-b]pyridine) [105650-23-5] (1993)
Phtalate de di(2-thylhexyle) [117-81-7] (1987)
Plomb [7439-92-1] et drivs inorganiques du plomb (1987)3
Polychlorophnols et leurs sels de sodium (expositions mixtes) (1999)
Ponceau MX [3761-53-3] (1987)
Ponceau 3R [3564-09-8] (1987)
Progestatifs (1987)

1,3-Propanesultone [1120-71-4] (1999)


-Propiolactone [57-57-8] (1999)
Propylthiouracile [51-52-5] (1987)
Rouge acide CI-114 [6459-94-5] (1993)
Rouge basique CI-9 [569-61-9] (1993)
Rouge citrus 2 [6358-53-8] (1987)
Safrole [94-59-7] (1987)
Schistosoma japonicum (infestation) (1994)
Strigmatocystine [10048-13-2] (1987)
Streptozotocine [18883-66-4] (1987)
Styrne [100-42-5] (1994)8
Sulfallate [95-06-7] (1987)
Sulfate de diisopropyle [2973-10-6] (1999)
Ttrachloroisophtalonitrile (Chlorothalonil) [1897-45-6] (1999)
Ttrachlorure de carbone [56-23-5] (1999)
Ttrafluorothylne [116-14-3] (1999)
Ttranitromthane [509-14-8] (1996)
Thrapie strogno-progestative de substitution (1999)
Thioactamide [62-55-5] (1987)
4,4-Thiodianiline [139-65-1] (1987)
Thioure [62-56-6] (1987)
o-Toluidine [95-53-4] (1987)
Toxines drives du Fusarium moniliforme (1993)
Trichloromthine (Chlorhydrate de trimustine) [817-09-4] (1990)
Trioxyde dantimoine [1309-64-4] (1989)
Trp-P-1 (3-Amino-1,4-dimthyl-5H-pyrido[4,3-b]indole) [62450-06-0] (1987)
Trp-P-2 (3-Amino-1-mthyl-5H-pyrido[4,3-b]indole) [62450-07-1] (1987)
Urthane [51-79-6] (1987)
4-Vinylcyclohexne [100-40-3] (1994)
4-Vinylcyclohexne dipoxyde [106-87-6] (1994)
Violet de benzyle 4B [1694-09-3] (1987)
Virus de limmunodficience humaine (VIH) de type 2 (infection) (1996)
Virus du papillome humain (VPH) autres que les types 16, 18, 31 et 33 (1995)
Mlanges
Biphnyles polybroms [Firemaster BP-6, 59536-65-1] (1987)
Bitumes [8052-42-4], extraits, raffins la vapeur et raffins lair (1987)
Caf (vessie urinaire) (1991)9
Carburants diesel marins (1989)8
Carrageenan [9000-07-1] dgrad (1987)
Essence (1989)8
Fuel rsiduel (lourd) (1989)
Fumes de soudage (1990)
Gaz dchappement de moteur, essence (1989)

Lgumes au vinaigre (condiment asiatique traditionnel) (1993)


Paraffines chlores dont la longueur moyenne de la chane carbone est de C12 et le taux
moyen de chloration de 60% environ (1990)
Toxaphne (camphnes polychlors) [8001-35-2] (1987)
Expositions professionnelles
Charpenterie et menuiserie (1987)
Industrie textile (fabrication) (exposition professionnelle) (1990)
Nettoyage sec (exposition professionnelle) (1995)
Procds dimpression (exposition professionnelle) (1996)
Groupe 3: inclassables quant leur cancrognicit pour lhumain (471)
Agents et groupes dagents
Actate de benzyle [140-11-4] (1999)
Acide acrylique [79-10-7] (1999)
p-Acide aminobenzoque (4-Acide aminobenzoque) [150-13-0] (1987)
Acide 11-aminoundcanoque [2432-99-7] (1987)
Acide anthranilique [118-92-3] (1987)
Acide chlorhydrique [7647-01-0] (1992)
Acide dichloroactique [79-43-6] (1995)
Acide cis-9,10-poxystarique [2443-39-2] (1999)
N-Acide nitrosofolique [29291-35-8] (1987)
Acide parasorbique [10048-32-5] (1987)
Acide pnicillique [90-65-3] (1987)
Acide polyacrylique [9003-01-4] (1987)
Acide shikimique [138-59-0] (1987)
Acide tannique [1401-55-4] et tanins (1987)
Acide trichloroactique [76-03-9] (1995)
Acroline [107-02-8] (1995)
Acrylate de n-butyle [141-32-2] (1999)
Acrylate de 2-thylhexyle [103-11-7] (1994)
Acrylate de mthyle [96-33-3] (1999)
Actinomycine D [50-76-0] (1987)
Agaritine [2757-90-6] (1987)
Aldicarb [116-06-3] (1991)
Aldrine [309-00-2] (1987)
Amarante [915-67-3] (1987)
5-Aminoacnaphtne [4657-93-6] (1987)
2-Aminoanthraquinone [117-79-3] (1987)
1-Amino-2-mthylanthraquinone [82-28-0] (1987)
2-Amino-4-nitrophnol [99-57-0] (1993)
2-Amino-5-nitrophnol [121-88-0] (1993)
4-Amino-2-nitrophnol [119-34-6] (1987)
2-Amino-5-nitrothiazole [121-66-4] (1987)
Ampicilline [69-53-4] (1990)

Anesthsiques volatils (1987)


Anglicine [523-50-2] et exposition aux rayonnements ultraviolets A (1987)
Anhydride succinique [108-30-5] (1987)
Aniline [62-53-3] (1987)
p-Anisidine [104-94-9] (1987)
Anthanthrne [191-26-4] (1987)
Anthracne [120-12-7] (1987)
Anthranilate de cinnamyle [87-29-6] (1987)
Apholate [52-46-0] (1987)
Atrazine [1912-24-9] (1999)11
Aurothioglucose [12192-57-3] (1987)
2-(1-Aziridinyl)thanol [1072-52-2] (1987)
Aziridylbenzoquinone [800-24-8] (1987)
Azobenzne [103-33-3] (1987)
Benzo[a]acridine [225-11-6] (1987)
Benzo[c]acridine [225-51-4] (1987)
Benzo[ghi]fluoranthne [203-12-3] (1987)
Benzo[a]fluorne [238-84-6] (1987)
Benzo[b]fluorne [243-17-4] (1987)
Benzo[c]fluorne [205-12-9] (1987)
Benzo[ghi]prylne [191-24-2] (1987)
Benzo[c]phnanthrne [195-19-7] (1987)
Benzo[e]pyrne [192-97-2] (1987)
1,4-Benzoquinone-dioxine [105-11-3] (1999)
Bis(2-chloro-1-mthylthyl)ther [108-60-1] (1999)
Bis(2-chlorothyl)ther [111-44-4] (1999)
1,2-Bis-(chloromthoxy)thane [13483-18-6] (1999)
1,4-Bis-(chloromthoxymthyl)benzne [56894-91-8] (1999)
Bis-(2,3-poxycyclopentyl)ther [2386-90-5] (1999)
Bisulfites (1992)
Bleu brillant FCF (sel disodique) [3844-45-9] (1987)
Bleu Evans [314-13-6] (1987)
Bleu HC 2 [33229-34-4] (1993)
Bleu VRS [129-17-9] (1987)
Bromochloroactonitrile [83463-62-1] (1999)
Bromothane [74-96-4] (1999)
Bromoforme [75-25-2] (1999)
Bromure de mthyle [74-83-9] (1999)
Brun Soudan RR [6416-57-5] (1987)
Butoxyde de pipronyle [51-03-6] (1987)
-Butyrolactone [96-48-0] (1999)
Cafine [58-08-2] (1991)
Cantharidine [56-25-7] (1987)

Captan [133-06-2] (1987)


Carbamate de mthyle [598-55-0] (1987)
Carbaryle [63-25-2] (1987)
Carbazole [86-74-8] (1999)
3-Carbthoxypsoralne [20073-24-9] (1987)
Carmoisine [3567-69-9] (1987)
Carrageenan naturel [9000-07-1] (1987)
Chloral [75-87-6] (1995)
Chlordimform [6164-98-3] (1987)
Chlorhydrate de prontalol [51-02-5] (1987)
Chlorhydrate de semicarbazide [563-41-7] (1987)
Chlorite de sodium [7758-19-2] (1991)
Chloroactonitrile [107-14-2] (1999)
Chlorodibromomthane [124-48-1] (1999)
Chlorodifluoromthane [75-45-6] (1999)
Chlorothane [75-00-3] (1999)
Chlorofluoromthane [593-70-4] (1999)
3-Chloro-2-mthylpropylne [563-47-3] (1995)
Chloronitrobenznes (mlange disomres) [88-73-3; 121-73-3; 100-00-5] (1996)
4-Chloro-m-phnylnediamine [5131-60-2] (1987)
Chloropropham [101-21-3] (1987)
Chloroquine [54-05-7] (1987)
2-Chloro-1,1,1-trifluorothane [75-88-7] (1999)
Chlorure dacriflavinium [8018-07-3] (1987)
Chlorure dallyle [107-05-1] (1999)
Chlorure de mthyle [74-87-3] (1999)
Chlorure de vinylidne [75-35-4] (1999)
Cholestrol [57-88-5] (1987)
Chrome mtallique [7440-47-3] (1990)
Chrysne [218-01-9] (1987)
Chrysodine [532-82-1] (1987)
Cimtidine [51481-61-9] (1990)
Citrate de clomiphne [50-41-9] (1987)
Citrinine [518-75-2] (1987)
Clofibrate [637-07-0] (1996)
Complexe fer-dextrine [9004-51-7] (1987)
Complexe-fer-sorbitol-acide citrique [1338-16-5] (1987)
Composs du chrome III (1990)
Composs organiques du plomb [75-74-1], [78-00-2] (1987)
Copolymres acrylonitrile-butadine-styrne (1987)
Copolymres chlorure de vinyle-actate de vinyle [9003-22-9] (1987)
Copolymres chlorure de vinylidne-chlorure de vinyle [9011-06-7] (1987)
Copolymres styrne-acrylonitrile [9003-54-7] (1987)

Copolymres styrne-1,3-butadine [9003-55-8] (1987)


Coronne [191-07-1] (1987)
Coumarine [91-64-5] (1987)
m-Crsidine [102-50-1] (1987)
Crotonaldhyde [4170-30-3] (1995)
Cyclamates [cyclamate de sodium, 139-05-9] (1999)
Cyclochlorotine [12663-46-6] (1987)
Cyclohexanone [108-94-1] (1999)
Cyclopenta[cd]pyrne [27208-37-3] (1987)
Dapsone [80-08-0] (1987)
Deltamthrine [52918-63-5] (1991)
Diactylaminoazotolune [83-63-6] (1987)
Diallate [2303-16-4] (1987)
1,5-Diaminonaphtalne [2243-62-1] (1987)
1,2-Diamino-4-nitrobenzne [99-56-9] (1987)
1,4-Diamino-2-nitrobenzne [5307-14-2] (1993)
2,5-Diaminotolune [95-70-5] (1987)
Diazpam [439-14-5] (1996)
Diazomthane [334-88-3] (1987)
Dibenzo[a,c]anthracne [215-58-7] (1987)
Dibenzo[a,j]anthracne [224-41-9] (1987)
Dibenzo-p-dioxine (1997)
Dibenzo-p-dioxines polychlores (autres que 2,3,7,8-ttra-chlorodibenzo-p-dioxine) (1997)
Dibenzo[a,e]fluoranthne [5385-75-1] (1987)
Dibenzofuranes polychlors (1997)
Dibenzo[h,rst]pentaphne [192-47-2] (1987)
Dibromoactonitrile [3252-43-5] (1999)
Dichlorhydrate de mannomustine [551-74-6] (1987)
Dichloroactonitrile [3018-12-0] (1999)
Dichloroactylne [7572-29-4] (1999)
1,2-Dichlorobenzne [95-50-1] (1999)
1,3-Dichlorobenzne [541-73-1] (1999)
4,4-Dichlorobenzilate dthyle (Chlorobenzilate) [510-15-6] (1987)
trans-1,4-Dichloro-2-butne [110-57-6] (1999)
2,6-Dichloro-p-phnylnediamine [609-20-1] (1987)
1,2-Dichloropropane [78-87-5] (1999)
Dicofol [115-32-2] (1987)
Dieldrine [60-57-1] (1987)
Dithyldithiocarbamate de slnium [5456-28-0] (1987)
Dithyldithiocarbamate de sodium [148-18-5] (1987)
Dithyldithiocarbamate de tellure [20941-65-5] (1987)
Di(2-thylhexyle)adipate [103-23-1] (1987)
Diglycidylther du bisphnol A (Araldite) [1675-54-3] (1999)

Dihydroxymthylfuratrizine [794-93-4] (1987)


Dimthoxane [828-00-2] (1987)
3,3-Dimthoxybenzidine-4-4-diisocyanate [91-93-0] (1987)
p-Dimthylaminoazobenznediazosulfonate de sodium [140-56-7] (1987)
4,4-Dimthylanglicine [22975-76-4] et exposition aux rayonnements ultraviolets A (1987)
4,5-Dimthylanglicine [4063-41-6] et exposition aux rayonnements ultraviolets A (1987)
N,N-Dimthylaniline [121-69-7] (1993)
Dimthyldithiocarbamate de slnium [144-34-3] (1987)
Dimthylformamide [68-12-2] (1999)
1,4-Dimthylphnanthrne [22349-59-3] (1987)
1,3-Dinitropyrne [75321-20-9] (1989)
Dinitrosopentamthylnettramine [101-25-7] (1987)
3,5-Dinitrotolune [618-85-9] (1996)
Dioxyde de soufre [7446-09-5] (1992)
Dioxyde de titane [13463-67-7] (1989)
2,4-Diphnyldiamine [492-17-1] (1987)
Disulfiram [97-77-8] (1987)
Dithranol [1143-38-0] (1987)
Doxfazpam [40762-15-0] (1996)
Droloxifne [82413-20-5] (1996)
Dulcine [150-69-6] (1987)
Eau potable chlore (1991)
Eclairage fluorescent (1992)
Endrine [72-20-8] (1987)
Eosine [15086-94-9] (1987)
Epithiothane [420-12-2] (1987)
3,4-Epoxy-6-mthylcyclohexylmthyl-3,4-poxy-6-mthyl-cyclohexane carboxylate [141-377] (1999)
Estazolam [29975-16-4] (1996)
Ethionamide [536-33-4] (1987)
Ethylne [74-85-1] (1994)
Eugnol [97-53-0] (1987)
Fenvalrate [51630-58-1] (1991)
Ferbam [14484-64-1] (1987)
Fibres acryliques (1987)
Fibres modacryliques (1987)
Fibrilles de p-aramide [24938-64-5] (1997)
Filaments de verre (1988)
Fluomturon [2164-17-2] (1987)
Fluoranthne [206-44-0] (1987)
Fluorne [86-73-7] (1987)
5-Fluorouracile [51-21-8] (1987)
Fluorure de vinylidne [75-38-7] (1999)

Fluorures (inorganiques, utiliss dans leau potable) (1987)


Furazolidone [67-45-8] (1987)
Furfural [98-01-1] (1995)
Furosmide (Frusmide) [54-31-9] (1990)
Gemfibrozil [25812-30-0] (1996)
Gyromitrine [16568-02-8] (1987)
Hmatite [1317-60-8] (1987)
Hexachlorobutadine [87-68-3] (1999)
Hexachlorophne [70-30-4] (1987)
Huiles isopropyliques (1999)
Hydralazine [86-54-4] (1987)
Hydrate de chloral [302-17-0] (1995)
Hydrazide de lacide isonicotinique (Isoniazide) [54-85-3] (1987)
Hydrazide malique [123-33-1] (1987)
Hydrochlorothiazide [58-93-5] (1990)
Hydroquinone [123-31-9] (1999)
4-Hydroxyazobenzne [1689-82-3] (1987)
8-Hydroxyquinoline [148-24-3] (1987)
8-Hydroxyquinoline de cuivre [10380-28-6] (1987)
Hydroxysenkirkine [26782-43-4] (1987)
Hydroxytolune butyl (BHT) [128-37-0] (1987)
Hypochlorites (1991)
Iodure de mthyle [74-88-4] (1999)
Isatidine [15503-86-3] (1987)
Isocyanate dallyle [57-06-7] (1999)
Isophosphamide [3778-73-2] (1987)
Isopropanol [67-63-0] (1999)
Isosafrol [120-58-1] (1987)
Isothiocyanate dallyle [57-06-7] (1999)
Isovalrate dallyle [2835-39-4] (1999)
Jacobine [6870-67-3] (1987)
Jaune AB [85-84-7] (1987)
Jaune dispers 3 [2832-40-8] (1990)
Jaune HC 4 [59820-43-8] (1993)
Jaune OB [131-79-3] (1987)
Jaune Sunset FCF [2783-94-0] (1987)
Jaune Vat 4 [128-66-5] (1990)
Kaempfrol [520-18-3] (1987)
d-Limonne [5989-27-5] (1999)10
Lutoskyrine [21884-44-6] (1987)
Malathion [121-75-5] (1987)
Malonaldhyde [542-78-9] (1999)
Manbe [12427-38-2] (1987)

Medphalane [13045-94-8] (1987)


Mlamine [108-78-1] (1999)10
6-Mercaptopurine [50-44-2] (1987)
Mercure [7439-97-6] et composs du mercure inorganique (1993)
Msylate dhycanthone [23255-93-8] (1987)
Mtabisulfites (1992)
Mthacrylate de mthyle [80-62-6] (1994)
Mthotrexate [59-05-2] (1987)
Mthoxychlore [72-43-5] (1987)
5-Mthylanglicine [73459-03-7] et exposition aux rayonnements ultraviolets A (1987)
Mthyl-tert-butylther [1634-04-4] (1999)
1-Mthylchrysne [3351-28-8] (1987)
2-Mthylchrysne [3351-32-4] (1987)
3-Mthylchrysne [3351-31-3] (1987)
4-Mthylchrysne [3351-30-2] (1987)
6-Mthylchrysne [1705-85-7] (1987)
N-Mthyl-N,4-dinitrosoaniline [99-80-9] (1987)
4,4-Mthylnebis (N,N-dimthylaniline) [101-61-1] (1987)
4-4-Mthylnediphnyl diisocyanate [101-68-8] (1999)
2-Mthylfluoranthne [33543-31-6] (1987)
3-Mthylfluoranthne [1706-01-0] (1987)
Mthylglyoxal [78-98-8] (1991)
N-Mthylolacrylamide [90456-67-0] (1994)
Mthylparathion [298-00-0] (1987)
1-Mthylphnanthrne [832-69-9] (1987)
7-Mthylpirido[3,4-c]psoralne [85878-63-3] (1987)
Monuron [150-68-5] (1991)
Morpholine [110-91-8] (1999)
Mousses de polyurthane [9009-54-5] (1987)
Moutarde dstradiol [22966-79-6] (1987)
Musc ambrette [83-66-9] (1996)
Musc xylne [81-15-2] (1996)
1,5-Naphtalne diisocyanate [3173-72-6] (1999)
1-Naphtylamine [134-32-7] (1987)
1-Naphtylthioure (ANTU) [86-88-4] (1987)
Nithiazide [139-94-6] (1987)
5-Nitro-o-anisidine [99-59-2] (1987)
9-Nitroanthracne [602-60-8] (1987)
7-Nitrobenzo[a]anthracne [20268-51-3] (1989)
6-Nitrobenzo[a]pyrne [63041-90-7] (1989)
4-Nitrobiphnyle [92-93-3] (1987)
3-Nitrofluoranthne [892-21-7] (1987)
Nitrofural (Nitrofurazone) [59-87-0] (1990)

Nitrofurantone [67-20-9] (1990)


1-Nitronaphtalne [86-57-7] (1989)
2-Nitronaphtalne [581-89-5] (1989)
3-Nitroprylne [20589-63-3] (1989)
2-Nitropyrne [789-07-1] (1989)
N-Nitrosoanabasine [37620-20-5] (1987)
N-Nitrosoanatabine [71267-22-6] (1987)
N-Nitrosodiphnylamine [86-30-6] (1987)
p-Nitrosodiphnylamine [156-10-5] (1987)
N-Nitrosoguvacine [55557-01-2] (1987)
N-Nitrosoguvacoline [55557-02-3] (1987)
N-Nitrosohydroxyproline [30310-80-6] (1987)
3-(N-Nitrosomthylamino)propionaldhyde [85502-23-4] (1987)
4-(N-Nitrosomthylamino)-4-(3-pyridyl)-1-butanal (NNA) [64091-90-3] (1987)
N-Nitrosoproline [7519-36-0] (1987)
Nitrotolunes (mlange disomres) [88-72-2; 99-08-1; 99-99-0] (1996)
5-Nitro-o-toluidine [99-55-8] (1990)
Nitrovine [804-36-4] (1987)
Nylon 6 [25038-54-4] (1987)
Olate de glycidyle [5431-33-4] (1987)
Opisthorchis felineus (infection) (1994)
Orang acide CI-3 [6373-74-6] (1993)
Orang dacridine [494-38-2] (1987)
Orang G [1936-15-8] (1987)
Orang I [523-44-4] (1987)
Oxyde de dcabromodiphnyle [1163-19-5] (1999)
Oxyde de fer saccharique [8047-67-4] (1987)
Oxyde de tris(1-aziridinyl)phosphine [545-55-1] (1987)
Oxyde de tris(2-mthyl-1-aziridinyl)phosphine [57-39-6] (1987)
Oxyde ferrique (III) [1309-37-1] (1987)
Oxyphenbutazone [129-20-4] (1987)
Palygorskite (attapulgite) [12174-11-7] (fibres courtes, < 5 m) (1997)
Paractamol (Actaminophne) [103-90-2] (1999)
Parathion [56-38-2] (1987)
Patuline [149-29-1] (1987)
Pentachlorothane [76-01-7] (1999)
Permthrine [52645-53-1] (1991)
Peroxyde de benzoyle [94-36-0] (1999)
Peroxyde de lauroyle [105-74-8] (1999)
Peroxyde dhydrogne [7722-84-1] (1999)
Prylne [198-55-0] (1987)
Ptasitnine [60102-37-6] (1987)
Phnanthrne [85-01-8] (1987)

Phnicarbazide [103-03-7] (1987)


Phnol [108-95-2] (1999)
Phnylbutazone [50-33-9] (1987)
m-Phnylnediamine [108-45-2] (1987)
p-Phnylnediamine [106-50-3] (1987)
N-Phnyl-2-naphtylamine [135-88-6] (1987)
o-Phnylphnol [90-43-7] (1999)
Phosphate de tris(2-chlorthyle) [115-96-8] (1999)
Phosphite acide de dimthyle [868-85-9] (1999)
Phtalate de butylbenzyle [85-68-7] (1999)
Picloram [1918-02-1] (1991)
Pirido [3,4-c]psoralne [85878-62-2] (1987)
Poly(actate de vinyle) [9003-20-7] (1987)
Poly(alcool vinylique) [9002-89-5] (1987)
Polychloroprne [9010-98-4] (1987)
Poly(chlorure de vinyle) [9002-86-2] (1987)
Polythne [9002-88-4] (1987)
Poly(mthacrylate de mthyle) [9011-14-7] (1987)
Polymthylne polyphnyle isocyanate [9016-87-9] (1987)
Polypropylne [9003-07-0] (1987)
Polystyrne [9003-53-6] (1987)
Polyttrafluorothylne [9002-84-0] (1987)
Polyvinylpyrrolidone [9003-39-8] (1999)
Ponceau SX [4548-53-2] (1987)
Potassium bis(2-hydroxythyle)dithiocarbamate [23746-34-1] (1987)
Poussires de charbon (1997)
Prazpam [2955-38-6] (1996)
Prednimustine [29069-24-7] (1990)
Prednisone [53-03-2] (1987)
Propham [122-42-9] (1987)
n-Propyle carbamate [627-12-3] (1987)
Propylne [115-07-1] (1994)
Ptaquiloside [87625-62-5] (1987)
Pyrne [129-00-0] (1987)
Pyrimthamine [58-14-0] (1987)
Querctine [117-39-5] (1999)
p-Quinone [106-51-4] (1999)
Quintozne (Pentachloronitrobenzne) [82-68-8] (1987)
Rserpine [50-55-5] (1987)
Rsorcinol [108-46-3] (1999)
Rtrorsine [480-54-6] (1987)
Rhodamine B [81-88-9] (1987)
Rhodamine 6G [989-38-8] (1987)

Riddelliine [23246-96-0] (1987)


Rifampicine [13292-46-1] (1987)
Ripazpam [26308-28-1] (1996)
Rouge D et C 9 [5160-02-1] (1993)
Rouge de mthyle [493-52-7] (1987)
Rouge carlate [85-83-6] (1987)
Rouge HC 3 [2871-01-4] (1993)
Rouge pigment CI-3 [2425-85-6] (1993)
Rouge Soudan 7B [6368-72-5] (1987)
Rugulosine [23537-16-8] (1987)
Saccharine [81-07-2] et ses sels (1999)11
Schistosoma mansoni (infection) (1994)
Slnium [7782-49-2] et composs du slnium (1987)
Sels de proflavine (1987)
Sels de ttrakis (hydroxymthyl) phosphonium (1999)
Snciphylline [480-81-9] (1987)
Senkirkine [2318-18-5] (1987)
Spiolite [15501-74-3] (1997)
Silice amorphe [7631-86-9] (1997)
Simazine [122-34-9] (1999)
Soudan I [842-07-9] (1987)
Soudan II [3118-97-6] (1987)
Soudan III [85-86-9] (1987)
Spironolactone [52-01-7] (1987)
Starate de glycidyle [7460-84-6] (1987)
Sulfafurazole (Sulfisoxazole) [127-69-5] (1987)
Sulfamthoxazole [723-46-6] (1987)
Sulfate de phnelzine [156-51-4] (1987)
Sulfate de vinblastine [143-67-9] (1987)
Sulfate de vincristine [2068-78-2] (1987)
Sulfites (1992)
Sulfure de bis(1-aziridinyl)morpholinophosphine [2168-68-5] (1987)
Symphytine [22571-95-5] (1987)
Talc [14807-96-6] sans fibres asbestiformes (1987)
Tmazpam [846-50-4] (1996)
2,2 ,5,5-Ttrachlorobenzidine [15721-02-5] (1987)
1,1,1,2-Ttrachlorothane [630-20-6] (1999)
1,1,2,2-Ttrachlorothane [79-34-5] (1999)
Ttrachlorvinphos [22248-79-9] (1987)
Thobromine [83-67-0] (1991)
Thophylline [58-55-9] (1991)
Thiouracile [141-90-2] (1987)
Thiram [137-26-8] (1991)

Tolune [108-88-3] (1999)


Tormifne [89778-26-7] (1996)
Toxines drives du Fusarium graminearum, du F. culmorum et du F. crookwellense (1993)
Toxines drives du Fusarium sporotrichioides (1993)
Trichlorfon [52-68-6] (1987)
Trichloroactonitrile [545-06-2] (1999)
1,1,1-Trichlorothane [71-55-6] (1999)
1,1,2-Trichlorothane [79-00-5] (1999)
Trithylneglycol diglydicylther [1954-28-5] (1999)
Trifluraline [1582-09-8] (1991)
4,4,6-Trimthylanglicine [90370-29-9] et exposition aux rayonnements ultraviolets A (1987)
2,4,5-Trimthylaniline [137-17-7] (1987)
2,4,6-Trimthylaniline [88-05-1] (1987)
4,5 ,8-Trimthylpsoralne [3902-71-4] (1987)
2,4,6-Trinitrotolune [118-96-7] (1996)
Triphnylne [217-59-4] (1987)
Tris(aziridinyl)-p-benzoquinone (Triaziquone) [68-76-8] (1987)
2,4,6-Tris(1-aziridinyl)-s-triazine [51-18-3] (1987)
1,2,3-Tris-(chloromthoxy)propane [38571-73-2] (1999)
Trisulfure dantimoine [1345-04-6] (1989)
Vert Guine B [4680-78-8] (1987)
Vert intense FCF [2353-45-9] (1987)
Vert lumire SF [5141-20-8] (1987)
N-Vinyl-2-pyrrolidone [88-12-0] (1999)
Vinyltolune [25013-15-4] (1994)
Virus de lhpatite D (1994)
Virus humain de la leucmie cellules T, type II (1996)
Wollastonite [13983-17-0] (1997)
Xylne [1330-20-7] (1999)
2,4-Xylidine [95-68-1] (1987)
2,5-Xylidine [95-78-3] (1987)
Zectrane [315-18-4] (1987)
Zolites [1318-02-1] autres que rionite (clinoptilolite, phillipsite, mordnite, zolite non
fibreux japonais, zolites synthtiques) (1997)
Zinbe [12122-67-7] (1987)
Ziram [137-30-4] (1991)
Mlanges
Bitumes [8052-42-4] raffins la vapeur ou lair, rsidus du crackage (1987)
Carburants diesel, distillat (lger) (1989)
Carburacteur (1989)
Encres dimprimerie (1996)
Fuels, distillat (lger) (1989)
Huiles minrales, hautement raffines (1987)

Mastication de btel sans tabac (1987)


Mat (1991)
Ptrole brut [8002-05-9] (1989)
Solvants de ptrole (1989)
Terpnes polychlors (Strobane) [8001-50-1] (1987)
Th (1991)
Circonstances dexposition
Articles en cuir (fabrication) (1987)
Bois duvre et bois de sciage (industries) (y compris exploitation du bois) (1987)
Colorants capillaires (usage personnel) (1993)
Papier et de pte papier (fabrication) (1987)
Peinture (fabrication) (exposition professionnelle) (1989)
Tannage et traitement du cuir (1987)
Verre ordinaire et verres spciaux (fabrication) (1993)
Groupe 4: Probablement non cancrogne pour lhumain (1)
Caprolactame [105-60-2] (1998)
1
Lorsqu'il y a lieu, le numro CAS (Chemical Abstracts Registry) figure entre crochets;
l'anne indique entre parenthses correspond l'anne de publication de l'valuation la plus
rcente (pour plus de dtails, consultez la monographie pertinente (publie en anglais
seulement)).
2
Cette valuation s'applique l'ensemble du groupe, mais pas ncessairement chacun des
agents du groupe.
3
Evalus en groupe.
4
On dispose galement d'indications qui permettent de conclure que ces agents jouent un rle
protecteur contre les cancers de l'ovaire et de l'endomtre.
5
On dispose galement d'indications qui permettent de conclure que cet agent rduit le risque
de cancer du sein controlatral.
6
Modification de l'valuation globale, du groupe 2A au groupe 1, sur la base de donnes
complmentaires relatives l'valuation de la cancrognicit et ses mcanismes.
7
Modification de l'valuation globale, du groupe 2B au groupe 2A, sur la base de donnes
complmentaires relatives l'valuation de la cancrognicit et ses mcanismes.
8
Modifications de l'valuation globale, du groupe 3 au groupe 2B, sur la base de donnes
complmentaires relatives l'valuation de la cancrognicit et ses mcanismes.
9
Il existe certaines indications selon lesquelles le risque de cancer du clon serait inversement
proportionnel la consommation de caf; il n'a pas t possible de classer la consommation
de caf quant sa cancrognicit pour d'autres organes.
10
Donnes complmentaires relatives l'valuation de la cancrognicit et ses mcanismes
prises en complte dans l'valuation globale.
11
Modification de l'valuation globale, du groupe 2B au groupe 3 sut la case de donnes
complmentaires relatives l'valuation de la cancrognicit et ses mcanismes.
LVALUATION DU RISQUE CANCROGNE: AUTRES APPROCHES
Cees A. van der Heijden
Les principes et les mthodes employs pour valuer le risque que prsentent les produits
chimiques non cancrognes sont semblables dans les diffrentes parties du monde, mais il est
frappant de constater combien ces approches sont disparates dans le cas des agents chimiques
cancrognes. Dun pays lautre, on constate des diffrences marques et, dans un mme

pays, les organismes de rglementation, les comits et les scientifiques spcialiss dans
lvaluation du risque appliquent ou recommandent dappliquer des dmarches diffrentes.
Lvaluation du risque pour les substances non cancrognes est une pratique relativement
bien tablie et assez cohrente, notamment parce que contrairement ce qui se passe dans
le cas des agents cancrognes on lapplique depuis longtemps et parce quon connat bien
leur toxicit; de plus, les mthodes utilises et les informations quon en tire font la quasiunanimit chez les scientifiques et dans lopinion publique et leur inspirent confiance.
Pour pallier les incertitudes dont souffrent les donnes toxicologiques sur les agents non
cancrognes (obtenues essentiellement partir dexpriences animales) et permettre leur
application grande chelle des populations humaines htrognes, on a introduit des
facteurs de scurit (appels aussi coefficients de scurit). On a ensuite fix grce cette
mthode du facteur de scurit ou dincertitude des valeurs limites recommandes ou
obligatoires qui assurent ltre humain une exposition dpourvue de danger et qui
correspondaient en gnral une fraction de la dose dexposition chez lanimal ne comportant
aucun effet nocif observable (NOAEL) ou de la plus faible dose (ou premire dose) induisant
un effet nocif observable (LOAEL). On estimait que tant que lexposition humaine nexcdait
pas ces limites recommandes, les substances chimiques dangereuses ne pouvaient avoir
deffets nocifs. On applique toujours la mme technique, sous une forme plus affine, pour
valuer le risque toxique de nombreux produits chimiques.
De la fin des annes soixante au dbut des annes soixante-dix, les organismes
rglementaires, aux Etats-Unis tout dabord, ont t confronts un problme de plus en plus
proccupant que de nombreux scientifiques estimaient ne pouvoir rsoudre grce lapproche
base sur un facteur de scurit. Ils allaient mme jusqu penser que cette technique tait
inadapte, pour ne pas dire dangereuse. En effet, il existe des produits chimiques qui, dans des
conditions bien prcises, font augmenter le risque de cancer chez lhumain ou lanimal. Pour
des raisons pratiques, ces substances ont t rattaches aux cancrognes. De nos jours
encore, la dfinition des produits cancrognes fait lobjet de dbats et de controverses et les
avis divergent quant la faon de les identifier et de les classer; il en est de mme pour les
mcanismes dinduction du cancer par les produits chimiques.
Ce dbat avait dbut bien avant, lorsque les scientifiques ont dcouvert dans les annes
quarante que les cancrognes chimiques dterminent des lsions par un mcanisme
biologique dun genre totalement diffrent des autres formes de toxicit. Partant des principes
de la biologie des cancers induits par les rayonnements, ces scientifiques ont avanc
lhypothse de lexistence dun non-seuil applicable la fois aux rayonnements et aux
agents chimiques cancrognes. Pour eux, toute exposition un agent cancrogne augmente
la probabilit (le risque) de dvelopper un cancer, ds lors que le produit atteint sa cible
biologique critique, le matriel gntique en particulier, et interagit avec elle.
Paralllement ce dbat scientifique sur les seuils, on a vu le public se proccuper chaque
jour un peu plus du risque chimique cancrogne et vouloir sans dlai se protger des diverses
pathologies rassembles sous le terme de cancer. Le cancer, avec son caractre insidieux, sa
longue priode de latence et sa tendance augmenter dans la population, tait considr par le
grand public et par les politiciens comme une affaire srieuse qui mritait la plus grande
attention. Les instances rglementaires se trouvaient donc confrontes une situation o un
grand nombre de personnes, parfois la presque totalit dune population, taient ou pouvaient
tre exposes des concentrations relativement faibles de substances chimiques (dans les
produits de consommation, les mdicaments, sur le lieu de travail ou encore dans lair, leau,
la nourriture et le sol) dont on avait tabli le pouvoir cancrogne chez lhumain ou chez
lanimal de laboratoire aprs des expositions des concentrations relativement leves.

Ces responsables de la rglementation devaient donc faire face deux questions


fondamentales auxquelles on ne pouvait rpondre de manire satisfaisante compte tenu des
connaissances scientifiques de lpoque:
1. Quel est le risque pour la sant humaine de produits chimiques dans une zone
dexposition infrieure celle qui permet dtablir directement un risque de cancer?
2. Que peut-on dire du risque de cancer chez lhumain lorsque ce risque na t tabli
que chez lanimal de laboratoire?
Les autorits rglementaires ont admis quil tait ncessaire de pouvoir sappuyer sur des
hypothses tablies parfois sur des bases scientifiques, mais souvent aussi en labsence de
preuve exprimentale. Dans un but de cohrence, des dfinitions et une srie dhypothses ont
donc t labores en vue dune application lensemble des produits cancrognes.
La cancrogense: un processus tapes multiples
De nombreux arguments tendent prouver que la cancrogense chimique est un processus
tapes multiples sous la dpendance de lsions gntiques et pigntiques. Cette thorie est
avalise par bien des membres de la communaut scientifique travers le monde (Barrett,
1993). On a pris lhabitude de distinguer trois tapes dans le processus de cancrogense
chimique: linitiation, la promotion et la progression, mais on ne connat pas le nombre exact
des modifications gntiques impliques dans ce processus.
Linitiation suppose linduction dune modification cellulaire irrversible; pour les
cancrognes gnotoxiques, cette modification est toujours assimile un vnement
mutationnel. Theodor Boveri, dont bien des hypothses et des prdictions se sont rvles
exactes par la suite, souponnait dj en 1914 que la mutagense tait un mcanisme de la
cancrogense. Du fait que la plus petite quantit dun cancrogne modifiant lADN peut
provoquer des mutations irrversibles et autorplicatives, on estime quil nexiste aucun seuil.
La promotion est le processus par lequel une cellule initie se dveloppe (formation dun
clone) grce une srie de divisions et forme des lsions (pr)noplasiques. De nombreux
dbats ont lieu pour savoir si les cellules inities subissent dautres modifications gntiques
au cours de cette phase de transition.
Enfin, lors de ltape de progression, limmortalit est atteinte et des tumeurs malignes
peuvent se dvelopper en induisant une angiogense et en chappant aux systmes de contrle
de lhte. Cette tape est caractrise par une croissance invasive et frquemment par une
propagation mtastasique de la tumeur. La progression saccompagne dautres modifications
gntiques du fait de linstabilit des cellules en prolifration et de la slection.
On distingue donc trois mcanismes gnraux par lesquels une substance peut influencer ce
processus cancrogne multitapes. Un produit chimique peut induire une lsion gntique
dterminante, promouvoir ou faciliter lexpansion clonale dune cellule initie ou encore
stimuler la progression vers la malignit par des modifications somatiques ou gntiques.
Le processus dvaluation du risque
On peut dire du risque quil sagit de la frquence de survenue, prvue ou relle, dun effet
nocif pour lhumain ou lenvironnement, par suite de lexposition un danger. Lvaluation
du risque est une mthode dorganisation systmatique de linformation scientifique avec ses
incertitudes pour dcrire et qualifier les risques que des substances, des processus, des actions
ou des vnements dangereux prsentent pour la sant. Elle ncessite une valuation des
informations pertinentes et la slection de modles permettant den tirer des conclusions. De
plus, elle requiert la prise en considration des incertitudes, tout en gardant lesprit quune
interprtation diffrente des donnes disponibles reste plausible du point de vue scientifique.
La terminologie utilise actuellement pour lvaluation du risque a t propose en 1984 par
lAcadmie nationale des sciences des Etats-Unis (NAS). Lvaluation qualitative du risque
est devenue la caractrisation ou lidentification du danger, et lvaluation quantitative du

risque a t scinde en trois: relation dose-rponse, valuation de lexposition et


caractrisation du risque.
Dans la rubrique suivante, nous abordons ces diffrents aspects en nous fondant sur nos
connaissances actuelles du processus de cancrogense (chimique). Il apparatra clairement
que la principale incertitude pour valuer un risque cancrogne concerne la relation doserponse aux faibles concentrations telles quon les rencontre lors dune exposition
environnementale.
Lidentification du danger
Ce processus consiste rechercher les produits susceptibles de provoquer un cancer chez
lhumain ou, si lon veut, dterminer leurs proprits gnotoxiques intrinsques. Les agents
cancrognes sont classs sur la base de leurs proprits et dinformations dorigine diverse et
notamment:
des donnes pidmiologiques (par exemple, chlorure de vinyle, arsenic, amiante);
des donnes de cancrogense animale;
de leur activit gnotoxique/de formation dadduits lADN;
des mcanismes daction;
de leur pharmacocintique;
de la relation structure-activit.
Pour identifier un danger, il faut classer les produits chimiques en groupes en se basant sur
leur caractre cancrogne chez lanimal, ou sur des donnes pidmiologiques dans lespce
humaine lorsquelles sont disponibles. Les mthodes de classification des agents chimiques
cancrognes les plus connues sont celles du CIRC (1987), de lUnion europenne (1991) et
de lAgence amricaine de protection de lenvironnement (EPA) (1986). Le tableau 33.17
rsume les critres utiliss pour le classement (en particulier les mthodes dextrapolation aux
faibles doses).
Tableau 33.17 Comparaison des processus d'extrapolation aux faibles doses
EPA (Etats- Danemark
CEE
Royaume-Uni Pays-Bas
Norvge
Unis) actuel
Cancrogne
gnotoxique

Processus
multitapes
linariss
utilisant le
modle le plus
appropri

MLE partir Aucune


des modles 1- procdure
et 2-tapes
spcifie
avec
estimation du
meilleur
rsultat

Aucun
modle,
expertise
scientifique et
jugement
partir de toutes
les donnes
valables

Modle
Aucune
linaire
procdure
utilisant la
spcifie
DT50 (mthode
Peto) ou
Mthode
nerlandaise
simple en
labsence de
DT50

Cancrogne
non
gnotoxique

Idem

Modle
biologique de
Thorslund ou
modle
multitapes ou
modle de
Mantel-Bryan,
bas sur
lorigine

Utilisation du
NOEL et de
facteurs de
scurit pour
dterminer la
dose
journalire
admissible

Utilisation du
NOEL et de
facteurs de
scurit pour
dterminer la
dose
journalire
admissible

Utilisation du
NOAEL et de
facteurs de
scurit

tumorale et la
relation doserponse
La classification des agents cancrognes soulve un problme important, dont les
consquences sont parfois dterminantes pour la rglementation: celui de la distinction entre
les mcanismes daction gnotoxiques et non gnotoxiques. Lhypothse par dfaut de lEPA
aux Etats-Unis est quil nexiste pas de seuil pour les substances ayant une activit
cancrogne chez les animaux de laboratoire (ou du moins lexistence dun seuil ne peut tre
dmontre): quelle que soit lexposition, le risque est toujours prsent. Cette position
correspond ce que lon a pris lhabitude dappeler lhypothse de non-seuil ou dabsence de
seuil pour les composs gnotoxiques (produisant des lsions de lADN). LUnion europenne
et bon nombre de ses Etats membres, comme le Danemark, les Pays-Bas et le Royaume-Uni,
font une distinction entre les cancrognes gnotoxiques et ceux quon souponne de produire
des tumeurs par des mcanismes non gnotoxiques. Pour les agents cancrognes
gnotoxiques, les procdures dvaluation quantitative dose-rponse supposent galement
labsence de seuil, bien que les procdures diffrent de celles utilises par lEPA. Pour les
substances non gnotoxiques, on suppose quil existe un seuil, et les procdures dose-rponse
utilises en supposent lexistence. Pour ces substances, comme pour les produits non
cancrognes, lvaluation du risque est gnralement effectue en appliquant un facteur de
scurit.
Il est utile de rappeler que les procdures dvaluation du risque ont t dveloppes dans un
contexte et un cadre diffrents. Celles du CIRC nont pas t proposes dans un but
rglementaire, bien quon sen soit servi pour tablir des lignes directrices vise
rglementaire. La procdure de lEPA a t conue comme une base de dcision pour laborer
une valuation quantitative du risque, alors que celle de lUnion europenne est utilise
actuellement aux fins de ltiquetage des produits chimiques (symbole classe de risque et
phrase dcrivant le risque). Moolenaar a publi (Moolenaar, 1994) une synthse
bibliographique de toutes les mthodes employes par huit agences gouvernementales et deux
organismes indpendants souvent cits: le Centre international de recherche sur le cancer
(CIRC) et la Confrence amricaine des hyginistes gouvernementaux du travail (ACGIH).
Les procdures de classification ne prennent gnralement pas en compte lensemble des
lments ngatifs disponibles. Depuis quelques annes, on commence mieux comprendre le
mcanisme daction des cancrognes. On sait maintenant que certains de ces mcanismes
sont spcifiques des espces particulires et ne se retrouvent pas chez ltre humain. Il faut
citer ici deux exemples pour illustrer le propos. Premirement, des tudes rcentes sur le
pouvoir cancrogne des particules de carburant diesel ont montr que le rat dveloppe des
tumeurs pulmonaires en rponse laccumulation de ces particules dans les poumons, alors
quon na jamais observ de cancer pulmonaire chez les mineurs de charbon ayant une charge
importante ce niveau. Deuximement, les tumeurs rnales observes chez le rat mle ne sont
pas considres comme pertinentes du fait quelles rsultent de laccumulation rnale de l-2
microglobuline, protine qui nexiste pas dans lespce humaine (Borghoff, Short et
Swenberg, 1990). Dautres exemples de ce type peuvent tre mentionns: perturbations de la
fonction thyrodienne ou de la prolifration des peroxysomes chez les rongeurs, ou anomalies
de la mitose au niveau hpatique chez la souris.
Ces notions permettent une interprtation plus perspicace des tudes de cancrogense. On
doit encourager les recherches conduisant une meilleure comprhension des mcanismes
daction de la cancrogense, car elles permettront damliorer la classification des produits et
dajouter une catgorie o pourront tre classs les produits chimiques non cancrognes pour
lhumain.

Lvaluation de lexposition
Dans lvaluation de lexposition, on considre souvent que lvaluation du risque est le
facteur le moins incertain pour deux raisons: parce quil est possible dans certains cas de
contrler les expositions et parce quil existe des modles dexposition assez bien valids. Ce
nest vrai quen partie puisque la plupart des valuations dexposition ne tirent pas
suffisamment parti de lensemble des informations disponibles. Il reste donc encore beaucoup
faire pour amliorer lvaluation de lexposition, quelle soit externe ou interne. Dans le cas
des agents cancrognes, en particulier, ltablissement des relations dose-rponse partir des
concentrations atteintes au niveau des cibles tissulaires plutt qu partir des niveaux
dexposition extrieure devrait conduire une meilleure prvision du risque, bien quon soit
alors appel faire de nombreuses hypothses par dfaut. Les modles pharmacocintiques
bass sur la physiologie permettant de dterminer la concentration des mtabolites ractifs au
niveau des tissus cibles revtent cet gard un trs grand intrt.
La caractrisation du risque
Les approches actuelles
La dose ou le niveau dexposition responsable dun effet dans une tude chez lanimal et la
dose susceptible de produire un effet semblable dans lespce humaine sont des paramtres
essentiels la caractrisation du risque. Ces paramtres incluent la fois lvaluation de la
relation dose-rponse depuis les doses leves jusquaux faibles doses et lextrapolation
interespces. Lextrapolation pose un problme de logique: les donnes sont extrapoles de
plusieurs ordres de grandeur au-dessous des taux dexposition exprimentaux au moyen de
modles empiriques qui ne refltent pas les mcanismes sous-jacents de la cancrogense.
Cette manire de procder enfreint donc un principe de base lors de lapplication dun modle
empirique, selon lequel on ne doit pas extrapoler en dehors de la gamme des donnes
observes. Par consquent, cette extrapolation empirique entrane un degr dincertitude
important, tant du point de vue statistique que du point de vue biologique. Actuellement,
aucun modle mathmatique nest reconnu comme tant le plus adapt lextrapolation aux
faibles doses en cancrogense. Les modles mathmatiques utiliss pour dfinir la relation
existant entre la dose externe administre, le temps et la survenue dune tumeur sont bass sur
des hypothses probabilistes ou mcanistiques, parfois sur les deux. On trouve au tableau
33.18 une liste des modles les plus frquemment cits (Kramer et coll., 1995).
Tableau 33.18 Modles frquemment cits pour caractriser le risque cancrogne
Modles probabilistes Modles mcanistiques
Modles par atteintes

Modles biologiques

Logit

Modle monoatteinte

Modles temps/tumeur (MVK)1

Probit

Modle atteintes multiples

Cohen et Ellwein

Mantel-Bryan

Weibull (Pike)1

Weibull

Modle tapes multiples


(Armitage-Doll)1

Modle Gamma atteintes Modle multitapes


multiples
linaris
1

MVK = Moolgavkar-Venzon-Knudson.
Ces modles dose-rponse sont en gnral appliqus des tudes de cancrogense effectues
selon un protocole standard comportant un nombre limit de doses exprimentales. Au lieu
dtablir la courbe dose-rponse complte, une tude du pouvoir cancrogne est en gnral
limite trois (ou deux) doses relativement fortes, la dose la plus leve correspondant la

dose maximale admissible. Lutilisation de fortes doses permet de surmonter la faible


sensibilit statistique (10 15% au-dessus du bruit de fond) inhrente de telles tudes, due
(notamment pour des raisons pratiques) au nombre relativement restreint danimaux utiliss.
Etant donn labsence de rsultats dans la zone des faibles doses (ils ne sont pas dtermins
exprimentalement), il est ncessaire dextrapoler au-del de la gamme dobservation. Pour la
plupart des rsultats, les modles mentionns ci-dessus conviennent tous bien la gamme des
doses tudies, en raison du nombre limit de doses et danimaux. Nanmoins, dans la zone
des faibles doses, ces modles divergent de plusieurs ordres de grandeur, ce qui introduit une
marge importante dincertitude dans lestimation du risque pour de tels niveaux dexposition.
La forme relle de la courbe dose-rponse dans la gamme des faibles doses ne pouvant tre
obtenue exprimentalement, il est indispensable de connatre le mcanisme de la
cancrogense si lon veut pouvoir choisir bon escient le modle qui convient le mieux.
Kramer et coll. (1995) et Park et Hawkins (1993) ont effectu des synthses bibliographiques
dtailles sur les divers aspects des modles dextrapolation mathmatiques.
Les autres approches
A ct des modles mathmatiques utiliss de nos jours, plusieurs autres approches ont t
proposes rcemment.
Les modles biologiques
Actuellement, les modles biologiques tels que le modle de Moolgavkar-Venzon-Knudson
(MVK) sont trs prometteurs, mais ils ne sont pas encore suffisamment volus pour une
utilisation en routine et ncessitent des informations spcifiques que ne peuvent fournir les
tudes exprimentales. Des tudes trs pousses (sur 4 000 rats) comme celles ralises avec
les N-nitrosoalkylamines donnent une ide de la dimension des travaux ncessaires au recueil
de ces informations. Cependant, ces tudes ne permettent toujours pas une extrapolation aux
faibles doses. Tant que ces modles ne seront pas plus labors, ils ne pourront tre utiliss
que pour des applications ponctuelles.
Lapproche du facteur dvaluation
Lutilisation de modles mathmatiques pour extrapoler en dessous de la gamme des doses
exprimentales est en fait lquivalent dune approche par facteur de scurit, avec un facteur
dincertitude important et mal dfini. Lalternative la plus simple serait dappliquer un facteur
dvaluation au niveau sans effet observ ou au plus faible niveau test. Le niveau utilis
pour ce facteur dvaluation devrait tre dtermin cas par cas en considrant la nature du
produit chimique et la population expose.
La dose de rfrence
Cette approche, base sur un modle mathmatique adapt aux donnes exprimentales
lintrieur de la gamme dobservation, est employ pour estimer ou interpoler une dose
correspondant un niveau donn deffet, tel que 1%, 5% ou 10% daugmentation dincidence
tumorale (DE01, DE05, DE10). Une augmentation de 10% correspondant au plus petit
changement pouvant tre dtermin statistiquement dans une tude exprimentale standard, la
DE10 convient donc bien aux donnes de cancrogense. Le fait dutiliser une dose de
rfrence qui se trouve lintrieur de la gamme dobservation exprimentale vite les
problmes que peut poser lextrapolation de la dose. La dose de rfrence ou sa limite de
confiance infrieure refltent les doses auxquelles surviennent des changements dincidence
tumorale et sont totalement indpendantes du modle mathmatique utilis. On peut employer
la dose de rfrence comme mesure du potentiel tumoral dans lvaluation du risque et, en
lassociant des facteurs dvaluation appropris, sen servir pour fixer des niveaux
admissibles pour une exposition humaine.
Le seuil de rglementation

Krewski et coll. (1990) ont effectu une synthse bibliographique des tudes sur le seuil de
rglementation pour les produits chimiques cancrognes. Ils ont constat, partir des
rsultats de 585 expriences sur le potentiel cancrogne, que la dose correspondant au niveau
de risque 106 a une distribution approximativement log-normale autour dune mdiane de 70
90 ng/kg/jour. Toute exposition des doses suprieures doit donc tre considre comme
inacceptable. Cette dose est obtenue par extrapolation linaire partir de la DT50 (dose
toxique pour 50% des animaux traits) et se trouve dans les limites dun facteur de cinq dix
par rapport au rsultat que donne le modle multitapes linaris. Cependant, les valeurs de la
TD50 sont relies la dose maximale admissible, ce qui jette un doute sur la validit de la
mesure. En dpit de cela, la DT50 est souvent trs proche ou mme lintrieur de la gamme
des donnes exprimentales.
Avant de pouvoir envisager lutilisation dun tel seuil de rglementation, il serait ncessaire de
tenir davantage compte des donnes biologiques, analytiques et mathmatiques et de disposer
dune base de donnes beaucoup plus fournie. Des recherches complmentaires sur le pouvoir
de divers agents cancrognes permettront dapporter un meilleur clairage dans ce domaine.
Les objectifs et lavenir de lvaluation du risque cancrogne
Si lon considre les espoirs qui ont t lorigine de la rglementation sur les produits
cancrognes (de lenvironnement), essentiellement une rduction sensible du nombre de
cancers, les rsultats sont plutt dcevants. Au fil des ans, on sest aperu que le nombre des
cas de cancers attribus des cancrognes rglements tait tonnamment faible. Malgr les
efforts de rglementation entrepris dans les annes soixante-dix, aucune rduction notoire du
taux de mortalit par cancer dorigine environnementale na pu tre obtenue, mme si lon
sen tient aux valuations les plus modres. Les procdures de lEPA sont conues de telle
faon que les extrapolations aux faibles doses sont ralises de la mme manire pour tous les
produits chimiques quel que soit leur mcanisme cancrogne. Cette approche se dmarque
nettement de celle des autres agences gouvernementales. Comme nous lavons mentionn,
lUnion europenne et plusieurs gouvernements europens lAllemagne, le Danemark, la
France, lItalie, les Pays-Bas, le Royaume-Uni, la Sude, et la Suisse font une distinction
entre les cancrognes qui sont gnotoxiques et ceux qui ne le sont pas et envisagent
lvaluation du risque diffremment dans lun et lautre cas. En gnral, les cancrognes non
gnotoxiques sont traits comme des toxiques seuil. Des seuils sans effet sont dfinis et des
facteurs de scurit sont appliqus pour assurer une grande marge de scurit. Dterminer si
un produit chimique doit tre considr ou non comme gnotoxique doit faire lobjet dun
dbat scientifique et requiert le jugement clair des experts.
La question fondamentale laquelle il appartient de rpondre est la suivante: quelle est la
cause du cancer chez lhumain et quel est le rle des cancrognes environnementaux? Les
facteurs hrditaires du cancer humain sont beaucoup plus importants quon ne le prvoyait
initialement. Si lon veut faire de rels progrs dans lvaluation du risque cancrogne, il
importe de mieux comprendre et les causes et les mcanismes du cancer. La recherche sur le
cancer entre dans un champ dinvestigation passionnant. La biologie molculaire peut
modifier radicalement nos conceptions sur les cancrognes environnementaux, ainsi que la
manire den assurer le contrle et la prvention dans le milieu de travail comme dans
lenvironnement gnral. Il faut valuer le risque cancrogne en tudiant les mcanismes
daction, qui sont des concepts totalement nouveaux, en particulier le mcanisme des cancers
hrditaires et linteraction des cancrognes sur ce processus. Cette notion devra tre prise en
compte dans lvaluation du risque des cancrognes.
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Partie IV. Instruments et approches

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