UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

ECBTI CEAD JOS ACEVEDO Y GOMZ

PROGRAMA DE QUMICA
PRODUCTOS NATURALES

PREINFORMES DE LABORATORIO PRCTICAS UNO Y DOS

PRODUCTOS NATURALES

ANA MARA MILLN RINCN

CD. 1.014.195.821

CURSO: 401551_3

TUTOR DE CAMPUS
FREY JARAMILLO HERNANDEZ

TUTOR LABORATORIO

Santa Fe de Bogot D.C.

Marzo 07 de 2015

PREINFORME PRIMERA PRCTICA DE LABORATORIO

REVISIN DE MTODOS BSICOS DE EXTRACCIN: OPERACIONES BSICAS DE
SEPARACIN DE SUSTANCIAS QUMICAS PARA LA OBTENCIN DE PRODUCTOS
NATURALES
OBJETIVOS
1. Aplicar conceptos tericos en los procesos experimentales para identificar las
caractersticas bsicas de la qumica inorgnica.
2. Identificar cualitativamente las reacciones de compuestos inorgnicos mediante
tcnicas de coloracin a la flama.
3. Identificar las caractersticas bsicas de los compuestos orgnicos y sus iones.
4. Comprender mediante ensayos de laboratorio el concepto bsico de compuesto
inorgnico y sus principales caractersticas.
FUNDAMENTO TERICO
Un problema que con frecuencia se encuentra en las investigaciones con productos
naturales es la identificacin de sustancias y la determinacin de su pureza. Una primera
aproximacin para determinar la pureza de los compuestos qumicos es la determinacin
de constantes fsicas como punto de fusin, punto de ebullicin, densidad, ndice de
refraccin, etc. Los puntos de fusin y ebullicin son especialmente tiles para la
identificacin de compuestos orgnicos. Actualmente para caracterizar substancias se
emplean tcnicas modernas de anlisis, tales como espectroscopia en sus diversas
modalidades Ultravioleta-Visible (UV-Vis), Infrarrojo (IR), Resonancia Nuclear Magntica
(RNM)), Espectrometra de masas (EM), cromatografa de gases (CG) y cromatografa de
lquidos de alta resolucin (HPLC, por sus siglas en ingls).
Punto de fusin
El punto de fusin de un compuesto se puede definir, como la temperatura a la cual un
slido pasa al estado lquido y por lo tanto en el punto de fusin el estado slido y lquido
estn en equilibrio. Se usa en la identificacin de compuestos desconocidos y tambin
como un criterio de pureza. Los compuestos puros tienen un punto de fusin definido con
un intervalo de 0.5 a 1 C. La presencia de impurezas abate el punto de fusin y amplia
dicho rango en ocasiones en ms de 4 C. Para el caso de los compuestos orgnicos
slidos, la determinacin del punto de fusin del compuesto (Tf) es una tcnica muy
utilizada. Varias razones prcticas la justifican: es rpida y requiere temperaturas
moderadas (100-200 C), los cambios de Tf con la presin son muy pequeos, Tf es muy
fcil de detectar experimentalmente, y se utiliza muy poca cantidad de muestra.
Concepto de decantacin
La decantacin se utiliza para separar mezclas heterogneas, que pueden estar
conformadas por una sustancia lquida y una slida, o por dos sustancias lquidas.
Significa sedimentar, colocarse una de las sustancias en la base de la otra, por efecto de
sus distintas densidades, lo que permite separarlas.

El caso de decantacin de un slido en un lquido, es muy comn en los procesos de

potabilizacin del agua, para extraer las partculas ms pesadas, antes de la filtracin. Se
lo deja reposar, y al cabo de un tiempo, las partculas del slido suspendidas en el lquido
se depositarn en el fondo del recipiente. Cuando esto sucede, el lquido se pasa a otro
recipiente, dejando en la base el slido, que podr extraerse con facilidad.
En el caso en que quiera procederse a la decantacin de dos lquidos, stos no deben
formar solucin, o sea deben ser inmiscibles. No puede emplearse por lo tanto en el caso
del agua y el alcohol, que forman una mezcla homognea, pero s en el agua y el aceite,
que es heterognea.
Se usa para este proceso fsico una ampolla de decantacin, donde se coloca la mezcla.
El agua descender y se colocar en la base, mientras el aceite estar en la superficie.
Se abre la llave de la ampolla y entonces el lquido se trasvasa a un recipiente colocado
debajo. Luego se cierra la llave y as se logra la separacin1.
Concepto de centrifugacin
La centrifugacin se puede llevar a cabo a escala preparativa o escala analtica. La
primera se utiliza para aislar partculas para su aprovechamiento posterior y la segunda
permite determinar propiedades fsicas como la velocidad de sedimentacin o el peso
molecular.
La centrifugacin preparativa se utiliza para separar partculas segn la velocidad de
sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la densidad
(centrifugacin isopcnica). En el primer caso se obtiene un lquido sobrenadante y un
material sedimentado. En los otros dos casos las partculas se distribuyen en fracciones
de diferentes densidades de un fluido lquido (centrifugacin mediante un gradiente de
densidades).
Las partculas se pueden separar en funcin de la velocidad de sedimentacin
(centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la densidad (centrifugacin
isopcnica). La centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica constituyen ejemplos
de centrifugacin mediante un gradiente de densidades2.
Concepto de cristalizacin
La cristalizacin es un proceso de formacin de un slido cristalino a partir de un producto
fundido o a partir de una disolucin. En este segundo caso, los cristales se obtienen al
enfriar una disolucin saturada en caliente del compuesto slido en un disolvente
adecuado. El disolvente o mezcla de disolventes ser seleccionado de acuerdo con la
solubilidad del slido y de las impurezas (Es necesario que stas no cristalicen en las
mismas condiciones).
1 Concepto de decantacin - Definicin en DeConceptos.com http://deconceptos.com/cienciasnaturales/decantacion#ixzz3TiaIwF4p.

2 http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/centrifugacio_tipus.html

As, es necesario encontrar un disolvente en el que el compuesto slido que queremos

cristalizar sea soluble en caliente e insoluble en frio. Si en una primera cristalizacin no
se consigue la purificacin completa, el proceso se puede repetir y hablaremos
de recristalizacin3.
Destilacin y tipos de destilacin
Destilacin, proceso que consiste en calentar un lquido hasta que sus componentes ms
voltiles pasan a la fase de vapor y, a continuacin, enfriar el vapor para recuperar dichos
componentes en forma lquida por medio de la condensacin. El objetivo principal de la
destilacin es separar una mezcla de varios componentes aprovechando sus distintas
volatilidades, o bien separar los materiales voltiles de los no voltiles. En la evaporacin
y en el secado, normalmente el objetivo es obtener el componente menos voltil; el
componente ms voltil, casi siempre agua, se desecha. Sin embargo, la finalidad
principal de la destilacin es obtener el componente ms voltil en forma pura. Por
ejemplo, la eliminacin del agua de la glicerina evaporando el agua, se llama evaporacin,
pero la eliminacin del agua del alcohol evaporando el alcohol se llama destilacin,
aunque se usan mecanismos similares en ambos casos.
Si la diferencia en volatilidad (y por tanto en punto de ebullicin) entre los dos
componentes es grande, puede realizarse fcilmente la separacin completa en una
destilacin individual. El agua del mar, por ejemplo, que contiene un 4% de slidos
disueltos (principalmente sal comn), puede purificarse fcilmente evaporando el agua, y
condensando despus el vapor para recoger el producto: agua destilada. Para la mayora
de los propsitos, este producto es equivalente al agua pura, aunque en realidad contiene
algunas impurezas en forma de gases disueltos, siendo la ms importante el dixido de
carbono.
Si los puntos de ebullicin de los componentes de una mezcla slo difieren ligeramente,
no se puede conseguir la separacin total en una destilacin individual. Un ejemplo
importante es la separacin de agua, que hierve a 100 C, y alcohol, que hierve a 78,5 C.
Si se hierve una mezcla de estos dos lquidos, el vapor que sale es ms rico en alcohol y
ms pobre en agua que el lquido del que procede, pero no es alcohol puro. Con el fin de
concentrar una disolucin que contenga un 10% de alcohol (como la que puede obtenerse
por fermentacin) para obtener una disolucin que contenga un 50% de alcohol (frecuente
en el whisky), el destilado ha de destilarse una o dos veces ms, y si se desea alcohol
industrial (95%) son necesarias varias destilaciones.
Teora de la destilacin
En la mezcla simple de dos lquidos solubles entre s, la volatilidad de cada uno es
perturbada por la presencia del otro. En este caso, el punto de ebullicin de una mezcla al
50%, por ejemplo, estara a mitad de camino entre los puntos de ebullicin de las
sustancias puras, y el grado de separacin producido por una destilacin individual
dependera solamente de la presin de vapor, o volatilidad de los componentes separados
a esa temperatura. Esta sencilla relacin fue anunciada por vez primera por el qumico
francs Franois Marie Raoult (1830-1901) y se llama ley de Raoult. Esta ley slo se
3 http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/precipitacio_cristal.html

aplica a mezclas de lquidos muy similares en su estructura qumica, como el benceno y el

tolueno. En la mayora de los casos se producen amplias desviaciones de esta ley. Si un
componente slo es ligeramente soluble en el otro, su volatilidad aumenta anormalmente.
En el ejemplo anterior, la volatilidad del alcohol en disolucin acuosa diluida es varias
veces mayor que la predicha por la ley de Raoult. En disoluciones de alcohol muy
concentradas, la desviacin es an mayor: la destilacin de alcohol de 99% produce un
vapor de menos de 99% de alcohol. Por esta razn el alcohol no puede ser concentrado
por destilacin ms de un 97%, aunque se realice un nmero infinito de destilaciones.
Destilacin fraccionada
En el ejemplo anterior, si se consigue que una parte del destilado vuelva del condensador
y gotee por una larga columna a una serie de placas, y que al mismo tiempo el vapor que
se dirige al condensador burbujee en el lquido de esas placas, el vapor y el lquido
interaccionarn de forma que parte del agua del vapor se condensar y parte del alcohol
del lquido se evaporar. As pues, la interaccin en cada placa es equivalente a una re
destilacin, y construyendo una columna con el suficiente nmero de placas, se puede
obtener alcohol de 95% en una operacin individual. Adems, introduciendo gradualmente
la disolucin original de 10% de alcohol en un punto en mitad de la columna, se podr
extraer prcticamente todo el alcohol del agua mientras desciende hasta la placa inferior,
de forma que no se desperdicie nada de alcohol.
Este proceso, conocido como rectificacin o destilacin fraccionada, se utiliza mucho en la
industria, no slo para mezclas simples de dos componentes (como alcohol y agua en los
productos de fermentacin, u oxgeno y nitrgeno en el aire lquido), sino tambin para
mezclas ms complejas como las que se encuentran en el alquitrn de hulla y en el
petrleo.
La columna fraccionadora que se usa con ms frecuencia es la llamada torre de burbujeo,
en la que las placas estn dispuestas horizontalmente, separadas unos centmetros, y los
vapores ascendentes suben por unas cpsulas de burbujeo a cada placa, donde
burbujean a travs del lquido.
Las placas estn escalonadas de forma que el lquido fluye de izquierda a derecha en una
placa, luego cae a la placa de abajo y all fluye de derecha a izquierda. La interaccin
entre el lquido y el vapor puede ser incompleta debido a que puede producirse espuma y
arrastre de forma que parte del lquido sea transportado por el vapor a la placa superior.
En este caso, pueden ser necesarias cinco placas para hacer el trabajo de cuatro placas
tericas, que realizan cuatro destilaciones. Un equivalente barato de la torre de burbujeo
es la llamada columna apilada, en la que el lquido fluye hacia abajo sobre una pila de
anillos de barro o trocitos de tuberas de vidrio.
La nica desventaja de la destilacin fraccionada es que una gran fraccin (ms o menos
la mitad) del destilado condensado debe volver a la parte superior de la torre y
eventualmente debe hervirse otra vez, con lo cual hay que suministrar ms calor. Por otra
parte, el funcionamiento continuo permite grandes ahorros de calor, porque el destilado
que sale puede ser utilizado para precalentar el material que entra.
Cuando la mezcla est formada por varios componentes, estos se extraen en distintos
puntos a lo largo de la torre. Las torres de destilacin industrial para petrleo tienen a

menudo 100 placas, con al menos diez fracciones diferentes que son extradas en los
puntos adecuados. Se han utilizado torres de ms de 500 placas para separar istopos
por destilacin.
Destilacin por vapor
Si dos lquidos insolubles se calientan, ninguno de los dos es afectado por la presencia
del otro (mientras se les remueva para que el lquido ms ligero no forme una capa
impenetrable sobre el ms pesado) y se evaporan en un grado determinado solamente
por su propia volatilidad. Por lo tanto, dicha mezcla siempre hierve a una temperatura
menor que la de cada componente por separado. El porcentaje de cada componente en el
vapor slo depende de su presin de vapor a esa temperatura. Este principio puede
aplicarse a sustancias que podran verse perjudicadas por el exceso de calor si fueran
destiladas en la forma habitual.
Destilacin al vaco
Otro mtodo para destilar sustancias a temperaturas por debajo de su punto normal de
ebullicin es evacuar parcialmente el alambique. Por ejemplo, la anilina puede ser
destilada a 100 C extrayendo el 93% del aire del alambique. Este mtodo es tan efectivo
como la destilacin por vapor, pero ms caro. Cuanto mayor es el grado de vaco, menor
es la temperatura de destilacin. Si la destilacin se efecta en un vaco prcticamente
perfecto, el proceso se llama destilacin molecular. Este proceso se usa normalmente en
la industria para purificar vitaminas y otros productos inestables. Se coloca la sustancia en
una placa dentro de un espacio evacuado y se calienta. El condensador es una placa fra,
colocada tan cerca de la primera como sea posible. La mayora del material pasa por el
espacio entre las dos placas, y por lo tanto se pierde muy poco4.
MATERIALES

Equipo de seguridad (Anteojos de policarbonato; protector facial de cara completa;

guantes de neopreno; bata de algodn).
1 Cristalizador.
1 Vaso de precipitados de 50 mL.
2 Parrillas elctricas.
1 Equipo para determinar el punto de fusin.
1 Termmetro.
1 Equipo Soxhlet.
1 Equipo para destilacin a presin reducida o rota vapor.
1 Equipo para destilacin por arrastre de vapor.
1 Equipo de destilacin simple.
3 Matraces Erlenmeyer de 25 mL.
1 Matraz Erlenmeyer de 125 mL.
2 Matraces Erlenmeyer de 250 mL.
1 Probeta graduada de 25 mL.

4 http://www.alambiques.com/tecnicas_destilacion.htm

1 Probeta graduada de 100 mL.

2 Probetas Pasteur con bulbo.
1 Bomba para vaco.
Mechero Bunsen.
3 Embudos de separacin.
2 Frasquitos con tapa.
1 Embudo de tallo recto.
1 Matraz de bola de 250 mL.
Piedras de ebullicin.
1 Embudo de tallo corto.
Esptula.

REACTIVOS

Acetona.
Pastillas de ibuprofeno.
Hojas de eucalipto, u hojas de t de limn, o canela.
Piedras de ebullicin.
Acetato de etilo.
Papel aluminio.
Sulfato de sodio anhidro.
Papel filtro.

PROCEDIMIENTO
Parte I Cristalizacin.
REVISIN MTODOS BSICOS DE
EXTRACCIN: Operaciones bsicas de
separacin de sustancias qumicas para la
obtencin de productos naturales

1. Pesar una tableta de frmaco

comercial y calcular la cantidad
equivalente a 0,5 g de paracetamol.
Guardar
la
cantidad
sobrante para determinar
el punto de fusin.

2. Triturar en un mortero las tabletas

necesarias,
pesar
la
cantidad
equivalente antes calculada de
material pulverizado.
3. Disolver el equivalente a los 0,5 g
de paracetamol en 10-20 mL de
etanol, agitar y filtrar.
4. Evaporar el filtrado hasta
sequedad calentando en bao de
Mara.
5. Cristalizar el residuo con 10 mL de
acetona, separar los cristales, dejar
secar al aire.
6. Determinarle el punto de fusin a
la pastilla completa (Sustancia
problema 1-2), al residuo del papel
filtro (Sustancia problema 2) y a los
cristales
obtenidos
(Sustancia
problema 1).
7. Determine el punto de fusin del
compuesto
impuro
y
del
recristalizado.
FIN DE LA PRCTICA

Utilizar el residuo como

sustancia problema.

Parte II Destilacin: Por arrastre de vapor.

REVISIN MTODOS BSICOS DE
EXTRACCIN: Operaciones bsicas de
separacin de sustancias qumicas para la
obtencin de productos naturales

1. Montar el aparato por destilacin

por arrastre de vapor.
2. Colocar 700 mL de agua destilada
en el matraz N 1: Generador de
vapor. Agregar cuerpos de ebullicin.
Al tapar el matraz cuidar
que la conexin de vidrio
no se obstruya con trozos
de material biolgico.

3. En el matraz N 2: Colocar 65
gramos de hojas cortadas en trozos
pequeos o la cantidad equivalente
para que se cubran partes del
matraz.
4. Calentar con el mechero el matraz
N 1 hasta ebullicin, con el fin de
generar el vapor que pasar al
matraz N2, extrayndose de esta
manera el aceite esencial de material
biolgico utilizado.
5. Suspender el calentamiento
cuando el volumen del destilado sea
de 100 o 150 mL aproximadamente.
6.
Del co destilado,
extraer
totalmente
el
aceite
esencial,
mediante extracciones con acetato
de etilo en un embudo de separacin.
7. Las fases acuosas se desechan y
los extractos orgnicos se colectan
en un matraz Erlenmeyer o vaso de
precipitados.
8. Agregar la cantidad necesaria de
sulfato de sodio anhidro para eliminar
el agua remanente. Eliminar el
disolvente con el rota vapor.

El aceite esencial es
inmediatamente arrastrado
por el vapor de agua en un
proceso de co destilacin.

9. Determinar el volumen obtenido y

el rendimiento. Conservar la muestra
obtenida
en
refrigeracin
perfectamente tapada.
10. Con el extracto obtenido y los
otros que se extraigan de los
siguientes experimentos, haga una
cromatografa en capa fina (c.c.f.)
para comparar resultados.
FIN DE LA PRCTICA

Parte III Destilacin: Extraccin contina con equipo Soxhlet.

REVISIN MTODOS BSICOS DE
EXTRACCIN: Operaciones bsicas de
separacin de sustancias qumicas para la
obtencin de productos naturales

1. Montar el equipo Soxhlet de

extraccin continua.
2. En el matraz redondo de 500 mL
colocar 300 mL de acetato de etilo.
3. Llenar el cartucho de celulosa con
6,5 gramos de t limn cortado en
pequeos trozos y colocarlo en la
cmara de extraccin.
4. Calentar cuidadosamente hasta la
ebullicin del acetato de etilo, cuyos
vapores debern condensarse en el
refrigerante para caer sobre el
material biolgico.
5. En el momento en que la cmara
de extraccin se llena con el acetato
de etilo, este cae por diferencia de
presiones al matraz.

Se considera que una gota

por
segundo
en
el
condensado es idnea para
la extraccin.

El nmero de descargas
del extracto puede variar
en funcin de la cantidad y
calidad de la muestra.

6.
Este
proceso
se
repite
continuamente de tal manera que
cada vez se extrae mayor cantidad
del aceite esencial.
7. Suspender el calentamiento
cuando ya no observe coloracin del
destilado
en
la
cmara
de
calentamiento.

Aqu se dar por terminada

la extraccin. Se debe
desmontar el equipo.

8. Pasar a un vaso de precipitados

de 500 mL, por medio de
decantacin y filtracin el extracto
obtenido y secarlo con sulfato de
sodio anhidro.
9. Decantar el solvente, concentrarlo
a presin reducida con ayuda del rota
vapor, hasta que ya no se tenga
solvente.
10. Colocar el extracto en un vial y
utilizarlo para la c.c.f. comparativa.
FIN DE LA PRCTICA

Parte IV Destilacin: Extraccin contina directa.

REVISIN MTODOS BSICOS DE
EXTRACCIN: Operaciones bsicas de
separacin de sustancias qumicas para la
obtencin de productos naturales

1. Montar el equipo para destilacin

simple, con el refrigerante colocado
en forma vertical.
2. Agregar en el matraz redondo de
500 mL, 300 mL de acetato de etilo y
65 g de t limn cortado en trozos.
Agregar cuerpos de ebullicin.

El
tiempo
de
reflujo
empieza a partir de que cae
la
primera
gota
de
disolvente condensado.

3. Calentar a reflujo durante 30

minutos para extraer el aceite
esencial.
4. Desmontar el equipo, decantar y
filtrar el extracto obtenido. Secarlo
con sulfato de sodio anhidro y
decantarlo en un matraz limpio y
seco.
5. Concentrar el extracto a presin
reducida con ayuda del rota vapor,
dejando aproximadamente 5 mL del
solvente concentrado.
10. Colocar el extracto en un vial y
utilizarlo para la c.c.f. comparativa.
FIN DE LA PRCTICA

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. http://www.biblioteca.upibi.ipn.mx/Archivos/Material
%20Didactico/ManualProdNaturalesagosto2010.pdf
2. Concepto
de
decantacin
Definicin
DeConceptos.com http://deconceptos.com/cienciasnaturales/decantacion#ixzz3TiaIwF4p.
3. http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/centrifugacio_tipus.html
4. http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/precipitacio_cristal.html
5. http://www.alambiques.com/tecnicas_destilacion.htm

PREINFORME SEGUNDA PRCTICA DE LABORATORIO

RECONOCIMIENTO DE METABOLITOS SECUNDARIOS

en

OBJETIVOS
1. Apropiar tcnicas de identificacin preliminar (Marcha fitoqumica preliminar) de
metabolitos secundarios presentes en fuentes biolgicas.
2. Distinguir y clasificar los principales metabolitos secundarios presentes en tejidos
vegetales por medio de pruebas qumicas de coloracin.
3. Identificar y caracterizar los principales metabolitos secundarios presentes en los
tejidos vegetales mediante tcnicas propias de marcha fitoqumica preliminar.
4. Adquirir habilidades bsicas en los procesos de identificacin preliminar de
metabolitos secundarios presentes en tejidos.
FUNDAMENTO TEORICO
Definicin Metabolitos Secundarios
Los metabolitos secundarios son aquellos compuestos orgnicos sintetizados por el
organismo que no tienen un rol directo en el crecimiento o reproduccin del mismo. A
diferencia de lo que sucede con los metabolitos primarios, la ausencia de algn metabolito
secundario no le impide la supervivencia, si bien se ver afectado por ella, a veces
gravemente. Las caractersticas bsicas son:

Se producen por rutas anablicas especializadas cuando no hay crecimiento.

Significado evolutivo controvertido por ser imprescindibles. Pueden ser una estrategia
para mantener en funcionamiento los sistemas metablicos cuando no hay
crecimiento.
Son indicativos de diferenciacin y se producen durante la idiofase de los cultivos.

Los metabolitos secundarios se definen por las siguientes caractersticas:

Productos naturales que tienen una distribucin taxonmica restringida.

Se forman una vez que el crecimiento se ha detenido.
Suelen sintetizarse como una mezcla de compuestos qumicamente relacionados.
No se encuentran aparentemente relacionados con los productos de las vas
biosintticas del tipo II y III.
Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un grupo de
estructuras estrechamente relacionadas.
Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el crecimiento y
la reproduccin.

Tienden a producirse cuando el crecimiento est limitado (cultivo continuo).

-

Se forman por enzimas especficos a partir del metabolismo central.

No son esenciales para el crecimiento o para el metabolismo central.
Son especficos para cada especie, y a veces, de cada cepa.

MATERIALES

Equipo de seguridad (Anteojos de policarbonato; protector facial de cara completa;

guantes de neopreno; bata de algodn).
Centrifuga 2000 RPM y 2-4 tubos.
Cuchillo.

MATERIAL VEGETAL

Plantas con alcaloides: Datura sp. (Borrachero), hojas y flores.

Catharantus roseus (Cortejo), hojas.
Hojas de tabaco, t.
Plantas con flavonoides: Ptalos de rosas rojas y amarillas.
Ptalos de lirio africano.
Plantas con saponinas: Hojas de Agave so. (Penca de sbila).
Fruto de Solanum quitoense (Lulo).
Cscara de Dioscorea ssp. (ame).
Plantas con taninos: Hojas de plantago (Llantn). Hojas de guayaba.
T (Thea sinensis), hojas.
Uvas (Vitis vinfera).
Pltano o guineo (Musa ssp.).

Agallas de Alepo (Querquis ssp.)

Corteza de casco de vaca (Bahuinia picta).
Plantas con esteroides: Semillas de Glicine max. (Soya).
Aceite de oliva (Olea europeae).
Plantas con cardiotnicos: Azuceno de la habana, hojas.
Plantas con antocianinas: Repollo morado.
Hojas de guarda parque.
Moras.
Uvas sin hollejo.
Plantas con quinonas: Ruibarbo (Rizomas).

REACTIVOS

150 mL de HCl 5%.

1 mL de Perxido de hidrgeno al 20%.
50 mL de Acetato de plomo al 4% con cido actico al 0,5%.
2 mL de Urea 10 M.
10 gotas de FeCl3 al 10%.
2 mL de cido sulfrico al 50%
2 mL de solucin NaOH al 5% con Amonaco al 2%.
Reactivo de Dragendorff, Valser, Mayer y Reineckato de amonio.
Reactivo gelatina-sal.
Reactivo Kedde soluciones A y B.
200 mL de Etanol.
50 mL de Diclorometano.
5 mL de Benceno.
2 mL de Anhdrido actico.
cido sulfrico concentrado.
cido clorhdrico concentrado.
5 Papeles de filtro.
Limaduras de magnesio.
Sulfato de sodio anhidro.

PROCEDIMIENTO
Parte I Reconocimiento de alcaloides.
RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Desmenuzar finamente en un
mortero, unos 10 gramos de muestra
fresca y colocarla en un Erlenmeyer.
2. Aadir un volumen suficiente de
HCl al 5% para que toda la muestra
est en contacto con la solucin
cida.
3. Calentar con agitacin al bao
Mara durante unos 5 minutos.
Enfriar. Filtrar.
4. Colocar en 4 tubos de ensayo 2
mL de filtrado cido fro.
5. Aadir a cada tubo 2 gotas de los
reactivos de Dragendorff, Mayer,
Valser y Reineckato de amonio.
6. Si se observa turbidez o
precipitados en por lo menos 3 tubos,
se considera que la muestra contiene
alcaloides.
FIN DE LA PRCTICA

Parte II Flavonoides. Leucoantocianidinas y Cardiotnicos.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. En un Erlenmeyer colocar unos 10

gramos de muestra fresca finamente
desmenuzada.

Antes de realizar el ensayo

con la muestra biolgica,
ensayar con un estndar de
quinina en solucin cida.

2. Aadir un volumen suficiente de

alcohol etlico que cubra toda la
muestra y le confiera fluidez.
3. Calentar al bao Mara durante
unos 5 minutos, con agitacin.
Enfriar. Filtrar.
4. Si hay presencia de clorofilas, al
filtrado aadirle un volumen igual de
solucin de acetato de plomo al 4%
que contenga cido actico al 0.5 %.
5. Con el filtrado realizar ensayos de
reconocimiento
de
flavonoides,
leucoantocianidinas y cardiotnicos.
FIN DE LA PRCTICA

Parte III Ensayo para flavonoides.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Colocar varias limaduras

magnesio en un tubo de ensayo.

de

2. Aadir unos 2 mL del filtrado,

obtenido en la parte II y por la pared
del tubo, gota a gota dejar caer varias
gotas de HCl concentrado.
3. La aparicin de colores naranja,
rosado, rojo o violeta es prueba
positiva para la existencia de
flavonoides en la muestra.
FIN DE LA PRCTICA

Antes de realizar el ensayo

con la muestra biolgica,
ensayar con un estndar de
rutina o Quercetina en
solucin acuo -alcohlica.

Parte IV Ensayo para Leucoantocianidinas.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Colocar unos 2 mL del filtrado,

obtenido en la parte II, en un tubo de
ensayo.
2. Aadir 1 mL de cido clorhdrico
concentrado.
3. Calentar en bao de
hirviendo durante 15 minutos.

agua

4. La aparicin de coloraciones rojas

es prueba positiva de la existencia de
leucoantocianidinas en la muestra.
FIN DE LA PRCTICA

Parte V Ensayo para Cardiotnicos.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. En un tubo de ensayo colocar 1

mL del filtrado obtenido en la parte II.
2. Aadir 0.5 ml de Reactivo de
Kedde.
3. La aparicin de coloraciones
violetas o prpuras es prueba
positiva de la existencia de
cardiotnicos en la muestra.
FIN DE LA PRCTICA

Parte VI Ensayo para Saponinas.

Mezclar 1 mL de solucin A
con 1 mL de solucin B
para preparar este reactivo
antes de su uso.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Desmenuzar con ayuda de un

mortero unos 10 gramos de muestra
fresca.

Hacer el preparado con

ayuda de unos pocos mL
de agua.

2. Filtrar y luego agitar en un tubo de

ensayo tapado, unos 4 mL de filtrado
acuoso, vigorosamente durante un
minuto.
3. La formacin de una espuma
abundante y estable es prueba
presuntiva de la presencia de
saponinas en la muestra.
FIN DE LA PRCTICA

Parte VII Ensayo para Taninos.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Desmenuzar con ayuda de un

mortero unos 10 gramos de muestra
fresca.
2. Filtrar y luego Tomar 1 mL de
filtrado acuoso en un tubo de ensayo.

Desechar
sobrenadante.

el

3.
Aadir 1 mL del Reactivo
Gelatina-Sal y si se forma un
precipitado, centrifugar a 2000 RPM
durante 5 minutos.
4. Re disolver el precipitado en 2 mL
de Urea 10M.
5. Aadir 2 -3 gotas de solucin de
cloruro frrico al 10%.

Hacer el preparado con

ayuda de unos pocos mL
de agua.

6. La formacin de precipitado al
agregar el reactivo de gelatina, y la
aparicin de colores o precipitados
verdes, azules o negros es prueba
positiva de la presencia de taninos en
la muestra.
FIN DE LA PRCTICA

Parte VIII Ensayo para Triterpenoides y/o esteroides.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Moler la muestra vegetal seca.

Agregar un volumen suficiente de
Cloroformo o Diclorometano.

Extraer por agitacin.

2. Filtrar y luego si el filtrado es turbio

y
contiene
humedad,
secarlo
agregando sulfato de sodio anhidro y
filtrar.
3. En un tubo de ensayo limpio y
completamente seco, colocar 1 mL
de filtrado orgnico.
4. Aadir 1 mL de anhdrido actico.
5. Por la pared del tubo y con mucha
precaucin, dejar resbalar 1-2 gotas
de cido sulfrico concentrado.
6. La formacin de colores azules,
violetas, rojos o verdes es prueba
positiva de que la muestra contiene
Esteroides y/o Triterpenoides.

Parte IX Ensayo para Quinonas Ensayo con una fraccin.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Colocar en un tubo de ensayo

unos 5 mL de filtrado acuoso.

FIN DE LA PRCTICA

2. Aadir 1 mL de perxido de
hidrgeno al 20% y 1 mL de cido
sulfrico al 50%.
3. Calentar la mezcla en un bao de
agua hirviendo durante 15 minutos.
4. Enfriar y aadir 5 mL de tolueno.
5. Agitar sin emulsionar. Recuperar la
fase tolunica y trasvasar 2 mL a un
tubo de ensayo.
6. Aadirle 1 mL de una solucin de
NaOH al 5% con amoniaco al 2%.
7. Agitar sin emulsionar.
8. Si la capa acuosa toma una
coloracin rosada a roja intensa es
prueba positiva de la presencia de
quinonas en la muestra.

FIN DE LA PRCTICA

Parte IX Ensayo para Quinonas Ensayo directo.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. Colocar 5 gramos de muestra

fresca.
2. En un sistema de reflujo, agregar
25 ml de HCl 5% y reflujar 5 minutos.
3. Calentar la mezcla en un bao de
agua hirviendo durante 15 minutos.
4. Dejar enfriar y filtrar.

Tambin se puede
utilizar 1 g de muestra
seca y molida.

5. Con el filtrado acuoso proceder

como se describe para el ensayo con
una fraccin acuosa.
FIN DE LA PRCTICA

Parte X Reconocimiento de Antocianinas.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. En un Erlenmeyer colocar unos

100 gramos de muestra fresca
finamente desmenuzada.
2. Aadir unos 200 mL de agua.
Calentar a ebullicin durante unos 5
minutos y filtrar.
3. En un tubo de ensayo colocar 2
ml de filtrado. Aadir 1 mL de NaOH
diluido.
Observar
formado.

el

color

Observar
formado.

el

color

4. En otro tubo de ensayo colocar

otros 2 ml de filtrado. Aadir unas 6
gotas de un cido mineral diluido.
5. Las antocianinas se reconocen por
producir diferentes color es a
diferentes pH.

Parte XI Reconocimiento de Cumarinas.

RECONOCIMIENTO DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

1. En un tubo de ensayo grande

colocar 1 gramo de material vegetal
fresco y macerado y agregar
cantidad
suficiente
de
etanol
comercial que cubra el material
vegetal.
2. Cubrir la boca del tubo de ensayo
con un papel filtro blanco y sujetarlo
con unas pinzas para tubo de ensayo
o con una banda elstica.

FIN DE LA PRCTICA

3. Agregarle unas gotas de NaOH

diluido en el papel filtro que cubre la
boca del tubo de ensayo.
4. Calentar hasta ebullicin el tubo
de ensayo por 5 minutos, enfriar y
retirar el papel filtro.
5. Observar bajo luz ultravioleta a
365 nm la aparicin de una
coloracin fluorescente que puede
ser: verde, amarilla, roja en el papel
filtro.

El
papel
filtro
normalmente se observa
azul fluorescente bajo la
luz ultravioleta de 365
nm.

FIN DE LA PRCTICA

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. http://www.revistareduca.es/index.php/biologia/article/viewFile/798/814
2. http://www.ugr.es/~quiored/pnatu/terpenoides.htm
3. http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_Investi
gacion/Octubre_2011/IF_DECHECO%20EGUSQUIZA_FIPA/CAPITULO%20N%BA
%2011.pdf
4. http://www.botanical-online.com/col/manapuya19.htm