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GUA DE PRCTICAS

BIOQUMICA II MED 222

GESTION II/2016

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NDICE
1. Definicin de la asignatura

PAG. 3

1.1 Cdigo y nombre de la asignatura

PAG. 3

1.2 Carga horaria semanal

PAG. 3

1.3 Objetivos generales y especficos de la asignatura:

PAG. 3

1.3.1. Objetivo general

PAG. 3

1.3.2. Objetivos especficos

PAG. 3

1.3.4. Contenido mnimo

PAG. 3

PRCTICAS
1. Laboratorio de Bioqumica Bioseguridad Goteo

PAG. 4

2. smosis

PAG. 9

3. Oxidacin biolgica Antioxidacin

PAG. 11

4. Agentes tensoactivos

PAG. 15

5. Emulsiones

PAG. 20

6. Digestin de lpidos

PAG. 22

7. Panorama del Metabolismo intermediario

PAG. 24

8. Desnaturalizacin de protenas Casena

PAG. 28

9. Hematocrito Pigmentos biliares

PAG. 30

10. Electroforesis

PAG. 34

FORMATO DE INFORME DE LABORATORIO

PAG. 37

FORMATO DE CUESTIONARIO / EXAMEN

PAG. 38

3
1. Definicin de la asignatura
La Bioqumica, definida como la ciencia que estudia las caractersticas de la materia viva
(estructura, forma, funcin, cambios y transformaciones), nos permite comprender la vida a un
nivel molecular y las caractersticas que permiten que la clula realice sus funciones de forma
adecuada, permitindonos mantener la homeostasis y el estado de salud.
1.1

Cdigo y nombre de la asignatura: MED222 Bioqumica II

1.2 Objetivos generales y especficos de la asignatura:


1.2.1. Objetivo general

El estudiante debe ser capaz de definir a profundidad la biologa molecular de los


compuestos bioqumicos, su estructura, funcin y metabolismo en el cuerpo humano, de
modo que puedan integrar y aplicar su conocimiento bioqumico en la adecuada
comprensin del proceso salud enfermedad y de esta forma brindar una tratamiento
adecuado y oportuno con una atencin de calidad a los pacientes.

1.2.2. Objetivos especficos


Describir conceptos fundamentales de la bioqumica (qumica orgnica e inorgnica)
Comprender la composicin, estructura, metabolismo y funcin de los aminocidos,
pptidos y protenas y su importancia en la homeostasis del ser humano
Describir todos los fenmenos Bioqumicos y su relevancia en la presentacin de
enfermedades cuando existe alteracin del pH y los electrolitos
Explicar los procesos de desaminacin de los aminocidos y la conversin de nitrgeno
en urea.
Analizar la importancia de carbohidratos, protenas y cidos grasos en la mantencin de
procesos vitales y las consecuencias de su alteracin
1.2.3.Contenido mnimo

1.2.4.

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.

Oxidacin de los Grasos y citognesis


Metabolismo de los grasos
Metabolismo de los acilgliceroles
Transporte y almacenamiento de los lpidos
Sntesis, transporte y excrecin del colesterol
Aminocidos: metabolismo
Catabolismo
Conversin de los aminocidos
Porfirinas y pigmentos biliares
Prcticas
Para alcanzar el objetivo enunciado, los estudiantes deben desarrollar como mnimo, las
siguientes prcticas:
Laboratorio de Bioqumica Bioseguridad Goteo
smosis
Oxidacin biolgica Antioxidacin
Agentes tensoactivos
Emulsiones
Digestin de lpidos
Panorama del Metabolismo intermediario
Desnaturalizacin de protenas Casena
Hematocrito Pigmentos biliares
Electroforesis

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PRACTICA No 3

1. DATOS GENERALES
a. Asignatura: BIOQUMICA I

b. Nombre de la prctica: AGENTES TENSOACTIVOS


2. TEMA A DESARROLLAR
Actividad de los tensoactivos, funciones biolgicas y alteraciones.

3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA
A la conclusin de la prctica el estudiante ser capaz de:
Entender las razones de la hidrofobicidad de los lpidos
Describir los tipos de soluciones en los que se solubilizan los lpidos
Propiedades de las cadenas hidrocarbonadas de los lpidos

4. RESPALDO TEORICO:
Los sistemas tensoactivos poseen un enorme inters industrial debido a sus mltiples
aplicaciones tecnolgicas. Todos los sectores de la industria qumica los utilizan en la produccin
o en la aplicacin de sus productos. Son fundamentales en la industria farmacutica, alimentaria,
cosmtica, textil, de pigmentos y pinturas y lubricantes entre otras. La industria de los agentes
tensoactivos consume grandes cantidades de materias primas petroqumicas tales como alcanos
lineales, 1-alquenos, n-alcoholes, alquilbencenos y xido de etileno entre otros y de grasas
naturales.
Aproximadamente se consumen en el mundo unos 6000 millones de toneladas de compuestos
tensoactivos cada ao.
1.- Anfiflicos.
El inters de los compuestos tensoactivos radica en su carcter anfiflico. Una molcula es
anfiflica cuando posee una doble afinidad polar-no polar; es decir, en la presencia en una misma
molcula de dos o ms grupos con propiedades antagnicas respecto de un mismo disolvente.
Todas las sustancias anfiflicas tienen una estructura molecular comn que tiene dos partes: un
grupo polar que contiene heterotomos como O, S, P N que se encuentran en grupos alcohol,
cido, sulfato, sulfonato, fosfato, amina, amida, etc, y un grupo apolar o poco polar que es en
general un grupo hidrocarbonado de tipo alquil o alquil benceno, y que puede contener
eventualmente tomos de halgeno u oxgeno. La parte polar posee afinidad por los disolventes
polares, en particular por el agua, y se denomina comnmente la parte hidrfila o hidroflica. Por
el contrario el grupo apolar se llama la parte hidrfoba o hidrofbica, o bien lipoflica (del griego
"phobos", el miedo, y "lipos", la grasa).
As, las molculas tensoactivas, debido a su carcter anffilico poseen la propiedad de solubilizar
molculas polares y no polares.

En disoluciones diluidas acuosas se forma una capa monomolecular en la superficie. A medida


que aumenta la concentracin de la sustancia tensoactiva, sus molculas se orientan en el seno
del agua formando micelas constituidas por 25 a 200 cadenas.

Debido a esta orientacin algunas molculas anfiflicas tienen la propiedad de disminuir la


tensin superficial en una interfase aire-agua o grasa-agua; estas molculas reciben el nombre
de sustancias tensoactivas. Es necesario hacer resaltar que no todos los anfiflicos poseen tal
actividad, para que esto suceda es necesario que la molcula posea propiedades relativamente
equilibradas, quiere decir, que no sea ni demasiado hidrfila ni demasiado hidrfoba.
Segn el carcter del extremo hidrfilo las molculas tensoactivas se clasifican en aninicas,
catinicas, no inicas y anfteras.
Tensoactivos aninicos.
Los tensoactivos aninicos representan el 55% de los tensoactivos producidos anualmente. Los
ms comunes son las sales de cidos carboxlicos de cadena larga, denominadas jabones, y
diversos sulfonatos y sulfatos de cadena larga, utilizados fundamentalmente como detergentes.
Los jabones son las sales de sodio o de potasio de los cidos grasos de 12 a 18 tomos de
carbono. Se obtienen por hidrlisis de grasas y aceites naturales con NaOH o KOH. Tambin se
usa un proceso en dos pasos, hidrlisis a presin (240 C, 40 atm) con xido de Zn como
catalizador. Despus de la hidrlisis se separan los cidos (fase orgnica) del glicerol (fase
acuosa). Mediante destilacin a vaco se separan las fracciones C12-C-18 y finalmente se tratan
con la base adecuada. Los jabones de C16-C-18 no irritan la piel pero son poco solubles en
agua. Los C-12-C-14 son los ms espumgenos. Las materias primas ms importantes para
fabricar jabn son el sebo y el aceite de coco. Aunque los productos basados en el jabn son
satisfactorios presentan el inconveniente de la precipitacin de los carboxilatos de calcio y
magnesio cuando se utilizan en aguas duras (cortado), de ah su escaso uso como agentes de
limpieza para lavadoras y lavavajillas.
Tensoactivos no inicos.
Durante los ltimos 30 aos, los surfactantes no inicos han alcanzado cada da mayor
importancia, hasta representar hoy ms del 25% de la produccin total de tensoactivos. Los
tensoactivos no inicos estn formados por una cadena alqulica larga y un grupo sin carga pero
muy polar. El grupo polar debe ser lo suficientemente hidrfilo para que la molcula sea soluble
en agua. Los grupos polares ms utilizados son: polioles (a veces azcares naturales),
polioxietilenos (teres de polialcohol), diaminas y aminas etoxiladas.
Estos tensoactivos no producen iones en solucin acuosa y por este hecho son compatibles con
cualquier otro tipo de tensoactivos; es por esto que son excelentes candidatos para
formulaciones complejas que se utilizan, a menudo, en muchas aplicaciones prcticas. Por otra
parte estos tensoactivos al no tener carga son menos sensibles a los electrolitos, especialmente
a los cationes divalentes, que los tensoactivos aninicos, y pueden por lo tanto ser utilizados en
presencia de una salinidad alta. Los tensoactivos no inicos son buenos detergentes,
humectantes y emulsionantes. Algunos poseen excelentes propiedades espumantes. Algunos
presentan un muy bajo nivel de toxicidad y se utilizan en la fabricacin de frmacos, cosmticos
y alimentos. Actualmente, se fabrican tensoactivos no inicos para una gran cantidad de
productos de uso domstico e industrial, condicionados bajo forma de polvo o lquido.
Los compuestos de polioxietileno son los ms utilizados como tensoactivos no inicos
(representan un 80 % del total de no inicos) y tienen aplicacin como detergentes, sobre todo
en formulaciones lquidas, como emulgentes para formulaciones insecticidas y en la fabricacin
de pinturas por emulsin.

Tensoactivos catinicos.
Los tensoactivos catinicos representan un 4% del total de la produccin de agentes
tensoactivos. Su fabricacin es mucho ms cara que la de los anteriores y es por esta razn que
slo se utilizan en aplicaciones especiales. La gran mayora de estos son compuestos
nitrogenados del tipo sal de amina grasa o sal de amonio cuaternario.

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Estas molculas son de poca utilidad en limpieza porque la mayora de las superficies tienen una
carga negativa y los cationes se adsorben sobre ellas en lugar de solubilizar la suciedad
adherida. Presentan propiedades bactericidas, antispticas y alguicidas (inhiben el crecimiento
de organismos monocelulares como las bacterias y las algas), son agentes antiestticos,
suavizantes, inhibidores de corrosin, agentes de flotacin y puedan ser utilizados tanto en
productos industriales como para uso domstico.
Debido a su poder antisptico, bactericida y alguicida se usan como desinfectantes. Las
molculas se orientan en la interfase entre la membrana bacteriana y el agua o el aire, formando
una pelcula cerrada que impide la respiracin del organismo y ste muere. Uno de los
tensoactivos usados para tal fin es cloruro de benzalconio utilizado en pastillas para la afona y la
polivinilpirrolidona yodada (betadine) utilizada para desinfectar heridas. Tambin son tiles para
desinfectar granjas avcolas, piscinas y material sanitario.
Los tensoactivos catinicos se utilizan como inhibidores de la corrosin en tuberas metlicas o
en los lquidos cidos utilizados para limpiar la herrumbre. La proteccin de la superficie metlica
se debe a que se unen a la superficie metlica por la parte polar formando una capa protectora
hidrfoba de una o dos molculas de espesor. Esta capa es tan cerrada que evita que el cido
corrosivo ataque al metal.
Tensoactivos anfteros.
Los surfactantes llamados anfteros poseen dos grupos funcionales, uno aninico y otro
catinico. En la mayora de casos es el pH quien determina el carcter dominante favoreciendo
una u otra de las posibles disociaciones: aninico a pH alcalino, catinico a pH cido. Cerca de
su punto isoelctrico son realmente anfteros, es decir poseen dos cargas a la vez y presentan a
menudo un mnimo de actividad superficial.
Estos surfactantes son en general muy poco irritantes, compatibles con los otros surfactantes y
en la mayora de los casos ellos pueden utilizarse en frmulas farmacuticas o cosmticas. Estos
tensoactivos a pH cercanos a 7 son poco irritantes y se utilizan en champs y productos para la
limpieza manual de los platos.

a. REQUISITOS
Aprobar el examen previo a prcticas
Entregar el cuestionario correspondiente a la prctica

5. EQUIPO Y MATERIAL NECESARIOS


REACTIVOS- EQUIPOS
Leche
Agua
Lavavajillas
Mondadientes
Pigmentos naturales
Plato plano

CANTIDAD
50 mL
10 mL
10 mL
1 caja
4 colores
4 piezas

MATERIALES
Vaso de precipitado 50mL
Pipetas 10mL
Propipetas
Papel higinico
Libreta de anotaciones

CANTIDAD
4 piezas
4 piezas
4 piezas
1 rollo
1 pieza

6. PROCEDIMIENTO
Planificacin de la prctica: Los estudiantes se organizarn en 4 grupos.
Desarrollo de la prctica:
Se distribuirn los platos a cada grupo.
Se verter la leche sobre los platos aproximadamente 20 mL.
Posteriormente se aadir el colorante vegetal en 4 posiciones distintas.
Sumergir la punta de un mondadientes al detergente lavavajillas.
Introducir a la leche la punta empapada en detergente del detergente.
Mover el mondadientes por todo el plato.
Observar y anotar los cambios.

7. MEDIDAS DE SEGURIDAD

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Utilizacin de Normas de Bioseguridad de Nivel 1.
Mantener el laboratorio con la puerta cerrada.
Contenedores especiales para desechos comunes, de riesgo biolgico y punzocortantes.
Limpieza de Mesones y material utilizado.
Lavado de Manos antes y despus de la prctica.
Utilizacin de Guardapolvo, guantes de ltex u otro material de proteccin, barbijo, gorro
y proteccin ocular si es necesaria.

8. RESULTADOS ESPERADOS
El estudiante entender la actividad soluble de los lpidos, actividad de tensoactivos,
aplicacin clnica en frmacos y en patologas

9. CUESTIONARIO.1.

2.
3.
4.
5.

Esquematice la estructura de los fosfolpidos.


Describa el carcter anfiptico de los fosfolpidos.
Cmo se clasifican los agentes tensoactivos?
Describa los eventos que se suceden en la actividad tensocativa
Esquematizar la estructura de un cido graso insaturado

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PRACTICA No 4

1. DATOS GENERALES
a. Asignatura: BIOQUMICA I

b. Nombre de la prctica: OXIDACIN BIOLGICA ANTIOXIDACIN


JABONES

2. TEMA A DESARROLLAR
Reacciones REDOX, actividad electrnica y su aplicacin clnica en patologas, as como los
mecanismos que evitan y revierten tales reacciones.

3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA
A la conclusin de la prctica el estudiante ser capaz de:
Entender la reaccin REDOX
Explicar la importancia de la antioxidacin
Describir los mecanismos de antioxidacin

4. RESPALDO TEORICO
Qumicamente la Oxidacin se defina como la perdida de electrones y la reduccin como la
ganancia de ellos, esto se ilustra mediante la oxidacin del ion frrico.
Consecuentemente, la oxidacin va siempre acompaada por la reduccin de un aceptor de
electrones. Este principio de oxido-reduccin se aplica igualmente a los sistemas bioqumicos y
es un proceso importante en la comprensin de la Oxidacin Biolgica.
ENZIMAS Y COENZIMAS QUE INTERVUENEN EN LA OXIDACION Y REDUCCION
Todas la enzimas que intervienen en los procesos oxidativos son designados como
oxidoreductasas, que se clasifican en cinco grupos.
1. Oxidasas que catalizan la remocin de hidrogeno de un substrato pero usan solo oxgeno
como aceptor de hidrgenos. Ellas contienen invariablemente Cobre y forman agua como
producto de la reaccin.
2. Deshidrogenasas Aerobias. Las deshidrogenasas son enzimas capaces de catalizar la
oxidacin o reduccin de un sustrato por sustraccin o adicin de dos tomos de hidrgeno
(deshidrogenacin), empleando un par de coenzimas que actan como aceptores o como
donadores de electrones y protones; los principales coenzimas implicados en estas reacciones
redox son los pares NAD+/NADH, NADP+/NADPH, FAD/FADH2 y FMN/FMNH2; en cada par, la
primera es la forma oxidada y la segunda la forma reducida del coenzima.
As, cuando una deshidrogenasa arranca dos tomos de hidrgeno de un substrato, oxidndolo,
los electrones y los protones de dichos tomos de hidrgeno son captados por la forma oxidada
de la coenzima, que se reduce:
A-H2 + FAD A + FADH2
Donde A-H2 es el substrato a oxidar, FAD es la forma oxidada del coenzima, A es el substrato ya
oxidado (porque ha perdido dos electrones -y dos protones-) y FADH2 es la forma reducida del
coenzima (porque ha ganado dos electrones -y dos protones-).
Las deshidrogenasas son enzimas clave en el metabolismo energtico de la clula; varias de
ellas actan en el ciclo de Krebs, ruta metablica esencial en el catabolismo aerobio.
3. Deshidrogenasa Anaerobias

Hidroperoxidasas: Enzimas que utilizan perxido de hidrgeno o un perxido orgnico


como sustrato. Dos tipos de enzimas pertenecen a esta categora: las peroxidasas, que
se encuentran en la leche, vegetales, leucocitos, plaquetas y eritrocitos, ya la Catalasa
que se encuentra en animales y vegetales
Oxigenasas: Una oxigenasa es cualquier enzima que oxida un sustrato mediante la
transferencia de oxgeno presente en el oxgeno molecular (O2, como en el aire). Las
Oxigenasas forman un grupo dentro de las oxidoreductasas. Se distinguen dos tipos de
oxigenasas:

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-

Monooxigenasas, que transfieren un tomo de oxgeno al sustrato, y reducen


el otro oxgeno a agua.
Dioxigenasas, u oxgeno transferasas, que transfieren al sustrato ambos
tomos de oxgeno de la molcula.

Vitaminas y oxidoreductasas antioxidantes:


Defensa ante el estrs oxidativo
Se conoce como estrs oxidativo a los efectos morbosos debidos al desequilibrio entre la accin
de agentes oxidantes sobre las clulas y la respuesta antioxidante de estas. Los agentes
oxidantes pueden ser exgenos (frmacos y venenos) y endgenos (como las especies reactivas
del oxgeno y los perxidos lipdicos). Por otra parte, la dotacin antioxidante del organismo
humano tambin cuenta con miembros externos e internos. Entre los primeros figuran las
vitaminas antioxidantes y minerales como el hierro y el selenio, ingresado formando parte de los
alimentos o como suplemento nutritivo; internamente, se encuentran hemoenzimas
oxidorreductasas y metabolitos intermediarios como el glutatin. Muchos procesos patolgicos
como entidades nosolgicas en s, se acompaan de estrs oxidativo, expresndose en la
peroxidacin de biomembranas y la subsiguiente apoptosis, lo cual podra acarrear la muerte
celular.
Se conoce como estrs oxidativo a los efectos morbosos debidos al desbalance entre la accin
de agentes oxidantes sobre las clulas y la respuesta antioxidante de estas, con una
preponderancia a favor de los primeros.
Los agentes oxidantes pueden ser exgenos (frmacos o venenos) o endgenos (entre los ms
dainos estn las especies reactivas del oxgeno y los perxidos lipdicos).
Por su parte, el equipo antioxidante del organismo humano tiene tambin miembros exgenos y
endgenos. Entre los primeros estn las vitaminas antioxidantes esenciales (A, C, E) y
microelementos, entre los que figuran metales como el hierro (Fe) y el Selenio (Se);
endgenamente tienen un papel protagnico las enzimas oxidorreductasas, tanto las del
metabolismo intermediario como las ligadas al transporte electrnico en las biomembranas, y
ciertos agentes reductores como el glutatin.
Muchos procesos patolgicos tienen como causa el desequilibrio entre los mecanismos
oxidantes y la respuesta antioxidante del organismo, con el resultado altamente daino de las
rupturas de membranas, ya sea la celular o la de algn organelo citoplasmtico.
Concepto de estrs oxidativo
Los compuestos qumicos y las reacciones capaces de generar especies reactivas del oxgeno
con potencial txico pueden reconocerse como prooxidantes. Por otra parte, a los compuestos y
reacciones que eliminan estas especies, disponen de ellas, suprimen su formacin o se oponen
a sus acciones se les conoce como antioxidantes.
En una clula normal existe un equilibrio apropiado entre prooxidantes y antioxidantes. No
obstante, este balance puede desplazarse hacia los prooxidantes cuando la produccin de estas
especies aumenta de modo considerable. Tal circunstancia se presenta despus de la
introduccin en el organismo de ciertos frmacos o venenos insecticidas y/o pesticidas. El
desbalance puede presentarse, adems, cuando la concentracin de antiox

idantes disminuye, ya sea debido a una malnutricin como la hipovitaminosis E, o a un


fallo funcional de alguna de las enzimas involucradas en la respuesta antioxidante del
organismo. A todo este desequilibrio se le conoce como tensin oxidativa o estrs
oxidativo y puede conducir a lesin grave si se manifiesta de forma masiva o prolongada.

Radicales libres:
Mecanismo oxidante
Un radical libre es un tomo o molcula que tiene, al menos, un electrn sin neutralizar. Su
tendencia natural a ceder ese electrn o adquirir uno con el que pueda parearlo lo hace
sumamente reactivo.

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Entre los radicales libres, por su importancia, estn algunas especies reactivas del oxgeno
(ERO) y los lipoperxidos o perxidos lipdicos.
Las ERO con alto potencial reactivo oxidante son: el anin sper xido (O22-), el perxido de
hidrgeno (H2O2) y el radical hidroxilo (OH.). Por su parte, los lipoperxidos (R-COO.) son
molculas de cidos grasos en las que el grupo hidroxilo de la formacin carboxilo se halla en un
estado de singlete activado, confirindole propiedades de radical libre.
El mecanismo oxidante de los radicales libres est ntimamente ligado a su gnesis, la cual sigue
una secuencia de reacciones en cadena. En estas reacciones, una molcula previamente
alterada (con un electrn sin parear), y por tanto muy reactiva, es capaz de reaccionar con otra
molcula no reactiva, induciendo en esta ltima la formacin de un radical libre listo para iniciar
un nuevo ataque nucleoflico, y as de manera sucesiva. La cadena de reacciones terminara si,
en medio de la aleatoriedad del evento, se encontrasen 2 molculas altamente reactivas,
anulndose la potencialidad nucleoflica del ataque.
Los lipoperxidos se originan, a su vez, a partir del ataque de radicales libres de ERO a las
biomembranas, en un proceso morboso conocido como peroxidacin lipdica, el cual es tambin
responsable del deterioro progresivo que sufren los alimentos cuando se produce la rancidez de
las grasas.
Los efectos deletreos se inician por los radicales libres (ROO., RO., OH.) producidos durante la
formacin de perxidos a partir de cidos grasos (radicales perxido) que contienen enlaces
dobles interrumpidos entre grupos metilenos , es decir, los presentes en los cidos grasos
poliinsaturados que se encuentran tanto en membranas biolgicas como en los alimentos.
La agresin de estas especies reactivas (tanto las del oxgeno como los lipoperxidos) en las
biomembranas constituye la esencia del dao en el estrs oxidativo, porque desestabiliza la
estructura y funcin de la clula y sus organelos, debido a que puede constituir causa, en unos
casos, y consecuencia en otros de la activacin de sealizaciones para la autodestruccin de
membranas y muerte celular (apoptosis).
Mecanismo antioxidante de las vitaminas C y E
Las vitaminas antioxidantes, junto con el glutatin, conforman un grupo de agentes reductores
capaces de donar electrones a especies oxidadas como los radicales libres y los lipoperxidos,
neutralizando
de
esta
manera
el
potencial
oxidativo
destructor
de
estos.
Adems de las 2 que se han considerado en esta revisin, tienen efecto antioxidante la vitamina
A (beta carotenos) y un grupo de quinonas que conforma la vitamina K.
La vitamina E es un lpido isoprenoide sustituido, de la familia de los tocoferoles. Su forma
biolgicamente activa es el D alfa tocoferol, cuyo hidroxilo fenlico en el anillo de cromano es
responsable de la reduccin antioxidante. Esta vitamina es abundante en la yema de huevos, la
leche entera, las vsceras de mamferos y los aceites de pescados; el hombre debe ingerirla de
modo esencial.
La actividad vitamnica E es una de las primeras barreras de la peroxidacin de los cidos grasos
poliinsaturados. Los fosfolpidos de las membranas mitocondrial, del retculo endoplasmtico y
plasmtica poseen afinidades para el alfa-tocoferol, por lo que est muy concentrado en estos
sitios. Los tocoferoles actan interrumpiendo reacciones de cadena con radicales libres como
resultado de su capacidad de transferir el hidrgeno fenlico a un radical perxido libre,
quedando, a la vez, en la forma de radical libre fenoxi o fenoxilo, en reacciones intermedias no
reversibles que presuponen la transformacin de la vitamina hasta su producto final inocuo:
ROO. + Toc- OH ROOH + Toc- O
ROO. + Toc- O ROOH + radical no libre
Los tocoferoles y el selenio actan sinrgicamente, lo que permite al organismo disponer de su
actividad antioxidante aunque uno est disminuido. De hecho, el selenio es requerido para la
funcin pancretica normal, la cual es necesaria para la correcta digestin de los lpidos. Por otra
parte, aunque ya es conocido que la apropiacin de vitamina E est en franca correlacin con la
disponibilidad para digerir y absorber lpidos debido a su naturaleza hidrofbica (se ha
comprobado la deficiencia de tocoferoles en procesos morbosos como la colestasis heptica y la
fibrosis qustica o en la reseccin intestinal), trabajos recientes demuestran la estrecha relacin
del incremento del requerimiento de la vitamina (y del selenio) con la ingestin de cidos grasos
insaturados, el envejecimiento y el padecimiento de patologas crnico-degenerativas como la

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aterosclerosis,
el
mal
de
Alzheimer
o
el
carcinoma
prosttico.
La vitamina C es un derivado cido de la glucosa. Su obtencin en la dieta es esencial para el
hombre (y los primates en general, adems de cobayos, murcilagos y algunas aves y peces).
Presenta una configuracin de lactona, en la que los grupos hidroxilos asociados al doble enlace
funcionan como agentes con alto potencial reductor, lo que le permite, incluso, participar en la
reduccin directa del oxgeno, funcionando as como sustrato donante en las reacciones de las
peroxidasas.
El mecanismo molecular de accin de esta vitamina la sita en un nivel antioxidante de alta
jerarqua, pues incluye la inhibicin de la formacin de radicales superxido, o de nitrosaminas
durante la digestin; adems, es el agente que reduce los radicales fenoxilo formados durante la
actividad vitamnica E, restablecindola.
Las vitaminas C y E, as como la A, clasifican como antioxidantes interruptores, porque actan
interrumpiendo la reaccin en cadena de formacin de radicales libres, atrapndolos y
reducindolos, a diferencia de los antioxidantes preventivos (entre los que se encuentran
las enzimas peroxidasas), que evitan la iniciacin de la secuencia de reacciones.
Los tocoferoles funcionan en un ambiente de alta presin parcial de oxgeno, mientras que los
betacarotenos lo hacen a presiones bajas.
El glutatin es un tripptido, gamma glutamil-cisteinil-glicina, que participa en las reacciones del
metabolismo de aminocidos como donante de grupos gamma glutamilos. Desde el punto de
vista de la oxidorreduccin, el glutatin reducido (G-SH) es capaz de ceder electrones desde su
grupo sulfidrilo (SH) a una especie oxidada, como podra ser un lipoperxido de las membranas,
funcionando as como un potente agente antioxidante y rindiendo el producto oxidado (GSSG).
Reacciones enzimticas de la defensa antioxidante
Las enzimas ms importantes que participan en la defensa antioxidante son las
hidroperoxidasas, la glutatin peroxidasa y la superxido dismutasa. Estas hemoprotenas
catalticas son el producto evolutivo devenido con la necesidad de la asimilacin del oxgeno por
parte de los organismos eucariontes. Otras enzimas involucradas en el consumo de oxgeno son
las piridn y flavo deshidrogenasas del ciclo de Krebs, as como las hemoenzimas del transporte
electrnico (citocromos).
La acumulacin de perxido de hidrgeno es fuente de radicales libres. Las hidroperoxidasas lo
eliminan (as como a los lipoperxidos) mediante la reduccin irreversible. Este grupo general de
enzimas se subdivide en 2 subgrupos: las peroxidasas y la catalasa.
Las peroxidasas requieren de un donante de electrones, que dependiendo del tipo de reaccin
puede ser la vitamina C, alguna quinona o el citocromo C (todos en estado reducido). La
reaccin general que se verifica es la siguiente:
H2O2 + AH2 2 H2O + A en la cual AH2 es el agente reductor.
Consideradas originalmente como enzimas vegetales, las peroxidasas se hallan, adems, en la
leche (lactoperoxidasa), plaquetas y leucocitos (mieloperoxidasa), en el hgado y en otros tejidos.
La catalasa, con estructura tetra hemnica, participa en la eliminacin del perxido de hidrgeno
formado como producto de la actividad de enzimas oxidasas (por ejemplo, la xantina oxidasa).
En su mecanismo de accin, la propia molcula de agua acta como donante de electrones:
2 H2O2 2 H2O + O2
Esta importante enzima se encuentra en sangre, mdula sea, mucosas, rin e hgado.
La glutatin peroxidasa, dependiente de selenio para su funcin, utiliza glutatin reducido como
donante de electrones:
2H2O2 + 2 G SH 2 H2O + GSSG
La enzima est presente, fundamentalmente, en eritrocitos y otras especies formes de la sangre,
protegiendo a sus membranas y a la hemoglobina de la accin de los perxidos. Esta enzima es
tambin dependiente de la accin de otra, la glutatin reductasa, la cual le garantiza el estado
reducido del glutatin.
La enzima superxido dismutasa est altamente distribuida en todos las clulas aerobias y su
concentracin aumenta adaptativamente con la exposicin de la clula a gradientes superiores
de presin de oxgeno. La actividad cataltica neutraliza la capacidad reactiva del radical
superxido, al reducirlo a perxido:

12
O2.- + O2.- + 2H+ H2O2 + O2
Evidentemente, la cadena antioxidante debe continuar con la reduccin definitiva a agua, por
parte de peroxidasas o catalasa, del perxido aqu producido.
Esta enzima establece una vigilancia bioqumica, porque el anin superxido generalmente se
forma como intermediario en las reacciones de oxigenacin de sustratos; de esta manera se
protegen los tejidos de la accin deletrea potencial de este radical libre.
Estructuralmente, la enzima es una metaloprotena y se presenta en 2 isoformas. La isoenzima
citoslica est formada por 2 subunidades, cada una contiene un equivalente de cobre (Cu2+) y
de zinc (Zn2+); la isoforma mitocondrial contiene manganeso (Mn2+), lo cual la hace semejante
a la isoenzima presente en algunas especies procariontes, hecho que apoya las hiptesis que
sealan la mitocondria como una adquisicin simbitica procarionte por parte de las clulas
eucariontes en el proceso evolutivo.

5. EQUIPO Y MATERIAL NECESARIOS


REACTIVOS- EQUIPOS
Papel blanco
Zumo de Limn
Pinceles
Encendedor

CANTIDAD
1 hoja
50 mL
2 piezas
1 pieza

MATERIALES
Mechero de alcohol
Vaso de precipitado 250 mL
Libreta de anotaciones

CANTIDAD
1 pieza
4 piezas
1 pieza

a. REQUISITOS
Aprobar el examen previo a prcticas
Entregar el cuestionario correspondiente a la prctica

6. PROCEDIMIENTO
Planificacin de la prctica: La prctica ser individual.
Desarrollo de la prctica:
Con los pinceles, se proceder a realizar dibujos sobre las hojas de papel, utilizando el
zumo de limn como tinta.
Dejar secar el papel
Someter las hojas de papel al fuego, moviendo la hoja, para evitar combustin de la hoja.
Observar y anotar transformaciones

7. MEDIDAS DE SEGURIDAD
Utilizacin de Normas de Bioseguridad de Nivel 1.
Mantener el laboratorio con la puerta cerrada.
Contenedores especiales para desechos comunes, de riesgo biolgico y punzocortantes.
Limpieza de Mesones y material utilizado.
Lavado de Manos antes y despus de la prctica.
Utilizacin de Guardapolvo, guantes de ltex u otro material de proteccin, barbijo, gorro
y proteccin ocular si es necesaria.

8. RESULTADOS ESPERADOS
Los estudiantes comprendern gracias a las reacciones obtenidas la actividad oxidacinantioxidacin de los sistemas, as como analizarn los mecanismos involucrados en tales
reacciones

9. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.

A qu se denomina reaccin REDOX?


Cules son las teoras fsicas del mecanismo REDOX?
Cules son los radicales libres del oxgeno?
Describa lo que es la peroxidacin Lipdica
A qu se denomina potencial reductor y potencial oxidante?

13
PRACTICA No 5

1. DATOS GENERALES
a. Asignatura: BIOQUMICA I
b. Nombre de la prctica: SAPONIFICACIN EMULSIONES

2. TEMA A DESARROLLAR
Fuerzas involucradas en la formacin de emulsiones, actividad del pH para generar hidrlisis
de lpidos.

3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA
Al finalizar la prctica el estudiante ser capaz de:
Explicar lo que son las emulsiones y saponificacin
Relacionar la emulsin con presentaciones farmacolgicas
Comprender el fundamento de la clasificacin de lpidos

4. RESPALDO TEORICO: .EMULSIN


Mezcla formada por dos lquidos inmiscibles entre s que se encuentran uniformemente
distribuidos uno en el otro en forma de pequeas gotas.
Termodinmicamente inestables
Una emulsin se puede definir como una preparacin compuesta a base de dos lquidos
inmiscibles de los cuales uno est distribuido en el otro en forma de pequeas gotas
estabilizadas por un tercer componente, el agente emulsionante.
Emulsionante
Sustancia que facilita la formacin de una emulsin y ayuda a retrasar la separacin de las fases.
Las fases de una emulsin reciben el nombre de fase acuosa (Ag o W del ingls water) y fase
oleosa (Ac u O del ingls oil). Se conoce como fase externa, continua o dispersante a aquella
que se encuentra alrededor de las gotculas de fase interna, discontinua o dispersa. Se dice que
las emulsiones tienen un tercer componente conocido como agente emulsificante, cuya funcin
es mantener la estabilidad de la emulsin y evitar que los dos lquidos se separen
Tipos De Emulsiones
Emulsiones agua en aceite o acuo-oleosas (Ag/Ac): son aquellas en las que la fase interna es
agua y se encuentra en forma de gotas rodeadas por la fase oleosa

Emulsiones aceite en agua u oleo-acuosas: son las emulsiones en las que la fase
continua es agua y en ella se encuentra disperso un aceite u otra sustancia similar

Emulsiones mltiples: se pueden considerar como la emulsin de una emulsin, en otras


palabras, la fase interna es una emulsin, y la fase externa puede ser dependiendo de la
emulsin, de naturaleza acuosa u oleosa, de tal forma que tenemos las emulsiones
w/o/w (agua/aceite/agua) y o/w/o (aceite/agua/aceite)
Estabilidad fsica de emulsiones
La separacin de fases puede ocurrir va distintos procesos, algunos de ellos son reversibles
como el cremado y la floculacin, que permiten regresar a la forma original si se administra la
suficiente cantidad de energa mediante agitacin; y otros son irreversibles como la coalescencia
SAPONIFICACIN
La saponificacin es una reaccin qumica entre un cido graso (o un lpido saponificable,
portador de residuos de cidos grasos) y una base o alcalino, la que se obtiene como principal
producto la sal de dicho cido y dicha base. Estos compuestos tiene la particularidad de ser
antipticos, es decir tiene una parte polar y otra apolar (o no polar), con la cual puede interactuar
con substancias de propiedades dispares. Por ejemplo, los jabones son sales de cidos grasos y
metales alcalinos que se obtienen mediante este proceso.
En el mtodo de saponificacin y en el aspecto industrial consiste en hervir la grasa en grandes

14
calderas, aadiendo lentamente sosa custica (NaOH), agitndose continuamente la mezcla
hasta que comience este a ponerse pastosa.
Si hay un concepto inequivocadamente ligado al apalabra jabn, es la llamada
SAPONIFICACION. En trminos muy sencillos podramos definir la saponificacin como el
proceso que convierte "mgicamente" la grasa o el aceite en jabn limpiador. Esta
transformacin mgica no es otra cosa que una reaccin qumica muy comn, y que consiste
bsicamente en:

a. REQUISITOS
Aprobar el examen previo a prcticas
Entregar el cuestionario correspondiente a la prctica

5. EQUIPO Y MATERIAL NECESARIOS


REACTIVOS
Aceite vegetal
Hidrxido de sodio 20%
Huevo

CANTIDAD
MATERIALES
Envase
ancho
250 mL
Vaso de precipitado 50 mL
Tubos de ensayo
10 mL
Gradilla
1
Pipetas 10mL
Propipetas
Bao Mara
Cepillos para tubos
Papel higinico
Libreta de anotaciones

CANTIDAD
1 piezas
1 pieza
2 piezas
2 piezas
2 piezas
2 piezas
1 pieza
4 piezas
1 rollo
1 pieza

6. PROCEDIMIENTO
Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos
de 5 personas.
1. Desarrollo de la prctica:
SAPONIFICACIN
Colocar en un tubo de ensayo 2mL de aceite vegetal
Aadir 2mL de una solucin de hidrxido sdico al 20%.
Agitar enrgicamente
Colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
Observar y anotar las modificaciones
EMULSIN
Vaciar un huevo en el envase ancho
Batir el huevo con la batidora
Aadir paulatinamente 200mL de aceite al envase, no dejar de batir
Observar los cambios, anotar las transformaciones

7. MEDIDAS DE SEGURIDAD
Utilizacin de Normas de Bioseguridad de Nivel 1.
Mantener el laboratorio con la puerta cerrada.
Contenedores especiales para desechos comunes, de riesgo biolgico y punzocortantes.
Limpieza de Mesones y material utilizado.
Lavado de Manos antes y despus de la prctica.
Utilizacin de Guardapolvo, guantes de ltex u otro material de proteccin, barbijo, gorro
y proteccin ocular si es necesaria.

15

8. RESULTADOS ESPERADOS
EL estudiante realizar una aplicacin clnica de emulsiones con ejemplos de reacciones
en la digestin, ejemplos de frmacos y alteraciones de tales reacciones.

9. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.

Qu es la saponificacin?
Cules son los lpidos saponificables y cules los insaponificables?
A qu se denomina emulsin?
Cite frmacos cuya presentacin es de emulsin
Diferencias entre emulsin y suspensin

16
PRACTICA No 6
1. DATOS GENERALES
b. Asignatura: BIOQUMICA I
c. Nombre de la prctica: METABOLISMO DE CIDOS GRASOS (SEMINARIO)
2. TEMA A DESARROLLAR
Transformaciones de los lpidos, desde el punto de vista anablico, catablico y anfiblico,
termodinmica y aspectos aplicados a la clnica
3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA
Al finalizar la prctica el estudiante ser capaz de:
Interpretar los mecanismos de degradacin lipdica
Describir la funcin de la bilis en la absorcin de lpidos.
Identificar las enfermedades derivadas de la alteracin de absorcin de lpidos .
4. RESPALDO TEORICO:
DIGESTIN DE LPDIOS
Digestion es la conversin de los alimentos en sustancias absorbibles en el tracto
gastrointestinal. Se realiza por el desdoblamiento, mecnico y qumico de los alimentos, en
molculas. En resumen, la digestin se inicia en la boca, contina en el esfago y en el
estmago y sigue en el intestino delgado favorecida por secreciones biliares, pancreticas y por
el moco y lquido extracelular segregado por las criptas de Lieberkuhn de la mucosa del intestino
delgado. Adems, una serie de enzimas de las microvellosidades de la superficie intestinal
realizan una degradacin de los carbohidratos y de las protenas, que son absorbidos en el
epitelio intestinal.
La digestin de las grasas comienza en la boca con la secrecin de lipasa bucal, un componente
de la saliva, y su actividad aumenta cuando el conjunto saliva-alimento entra en el estmago y el
pH se hace ms cido. La digestin de esta lipasa no es tan importante como la que realizan en
el intestino delgado las lipasas secretadas en la mucosa gstrica e intestinal
Fase intraluminal
La parte ms activa de la digestin de los lpidos tiene lugar en la porcin superior del yeyuno. El
proceso comienza ya con la formacin del quimo, que despus se mezcla con las secreciones
pancreticas segn se vaca el estmago. La liberacin de lecitina por la bilis facilita el proceso
de emulsificacin, para que los tres tipos de lipasas pancreticas y una coenzima hidrolicen los
lpidos. La liberacin de estas enzimas se encuentra bajo el control de CCK, hormona que
facilita,
adems,
la
salida
de
bilis
de
la
vescular
biliar.
La lipasa pancretica es responsable de la mayor parte de la hidrlisis y del fraccionamiento de
los cidos grasos, al actuar sobre la superficie de las micelas que engloban a los triglicridos. La
enzima pancretica colipasa, favorece la formacin del complejo sales biliares lipasa-colipasa
que interviene en la hidrlisis. Como resultado de la actividad de la lipasa, monoglicridos, cidos
grasos, y glicerol se reparten por el ambiente acuoso de la luz intestinal y posteriormente son
solubilizados por las sales biliares. Los productos finales se ponen en contacto con la superficie
de los microvilli.
Colesterol esterasa es otra enzima pancretica que hidroliza los steres de colesterol.
Fosfolipasa es otra enzima pancretica, de la que existen dos formas A1 y A2, que hidroliza
cidos grasos de los fosfolpidos. Fosfolipasa A2 hidroliza tambin la lecitina y se produce
lisolecitina y un cido graso, que son absorbidos con facilidad. Para la formacin de
quilomicrones es necesaria la presencia de fosfolpidos.
La bilis, es un factor importante en la digestin de las grasas. Adems de factores
emusificadores, como los cidos y las sales biliares, los fosfolpidos y el colesterol contiene
bilirrubina, producto derivado de la hemoglobina. La bilis es secretada por el hgado y se
deposita entre las comidas en la vescula biliar, donde se concentra 5-10 veces, vertindose
posteriormente al intestino delgado para tomar activa en el proceso digestivo.

17

Fase mucosa
Las micelas favorecen que los productos de fraccionamiento de los lpidos se difundan por la
superficie del epitelio intestinal. Y la absorcin de las sustancias ligadas a las micelas se debe a
que se difunden por la capa acuosa, proceso que va seguido de su captacin por parte de la
membrana plasmtica. Los cidos grasos libres y los monoglicridos pasan a travs de los
microvilli de la membrana por un proceso pasivo, el glicerol necesita un mecanismo
transportador.
Una protena de bajo peso molecular, presente en el citoplasma de las clulas de la mucosa,
protena ligadora de cidos grasos (FABP), transporta cidos grasos de cadena larga al retculo
endoplsmico liso en donde se resintetizan en triglicridos. Tambin, parte del colesterol es
reesterificado por acil-CoA-colesterol aciltransferasa (ACAT) o por la colesterol esterasa de la
mucosa. Los triglicridos reesterificados se incorporan a las lipoprotenas junto con los
fosfolipidos, colesterol, steres de colesterol y apoprotena B. Los quilomicrones migran al
aparato de Golgi en donde pueden unirse glicoprotenas. Otros cidos grasos, con diez o menos
tomos de carbono, se transportan sin esterificar y pasan al sistema porta, unidos, generalmente
a albmina.

a.
REQUISITOS
Aprobar el examen previo a prcticas
Entregar el cuestionario correspondiente a la prctica

5. EQUIPO Y MATERIALES REQUERDOS


REACTIVOS
Manteca
Bilis de buey 10%
Bicarbonato de sodio 3%
Agua destilada
Regla (mm)

CANTIDAD
250 mL
50 mL
50 mL
100 mL
4 piezas

MATERIALES
Vaso de precipitado 50 mL
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas 10mL
Mechero Bunsen
Cuentagotas
Pinza para tubos
Libreta de anotaciones

CANTIDAD
4 pieza
24 piezas
2 piezas
4 piezas
2 piezas
4 unidades
4 unidades
1 pieza

6. PROCEDIMIENTO
Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos
de 5 personas.
Desarrollo de la prctica:
Distribuir los tubos
Enumerar los tubos del 1 al 5
En el tubo extra, colocar la manteca, aproximadamente 3g. y calentar hasta fusin.
Aadir 5mL de agua destilada al resto de los tubos
Agregar a cada tubo 5 mL de bicarbonato de sodio 3%Agitar enrgicamente
Al tubo Nro. 2 se adicionar 2 gotas de bilis al nmero 3 agregar 4 gotas de bilis, al
nmero 4 se adicionaran 8 gotas de bilis y al Nro. 5 se colocarn 16 gotas de bilis
Posteriormente se agregar 1 mL de manteca lquida a cada tubo
Agitar los tubos.
Dejar reposar 10 minutos.
Medir el volumen perceptible de manteca
Observar y anotar las modificaciones
7. MEDIDAS DE SEGURIDAD
Utilizacin de Normas de Bioseguridad de Nivel 1.
Mantener el laboratorio con la puerta cerrada.
Contenedores especiales para desechos comunes, de riesgo biolgico y punzocortantes.
Limpieza de Mesones y material utilizado.

18
Lavado de Manos antes y despus de la prctica.
Utilizacin de Guardapolvo, guantes de ltex u otro material de proteccin, barbijo, gorro
y proteccin ocular si es necesaria.
8. RESULTADOS ESPERADOS
Los estudiantes comprendern las reacciones involucradas en el metabolismo de lpidos,
as como las repercusiones de las alteraciones
9.
1.
2.
3.
4.
5.

CUESTIONARIO
Describa resumidamente la sntesis de hemoglobina
Qu es la bilirrubina?
Qu actividad importante cumple el cido glucurnico?
Cul es la composicin de la bilis?
Qu funcin cumple la bilis en la digestin de lpidos?

19
PRACTICA No 7

1. DATOS GENERALES
a. Asignatura: BIOQUMICA I

b. Nombre de la prctica: PANORAMA DEL METABOLISMO INTERMEDIARIO


2. TEMA A DESARROLLAR
Descripcin de las fases que experimentan las biomolculas desde su incorporacin,
metabolismo, asimilacin y excrecin.

3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA
Al finalizar la prctica el estudiante ser capaz de:
Interpretar los mecanismos involucrados en la degradacin de biomolculas ingeridas
Describir los pasos de absorcin intestinal de biomolculas.
Identificar las rutas metablicas involucradas en el metabolismo intermediario
4. RESPALDO TEORICO: .SINTESIS DE COLESTEROL
En los seres humanos el colesterol se sintetiza prcticamente en todos los tejidos.
Hgado, intestino, la corteza suprarrenal y los tejidos reproductores (ovario, testculos y
placenta), son los que ms contribuyen a la reserva de colesterol en el organismo.
La sntesis se produce en el citoplasma con enzimas que se encuentran en el citosol
como en la membrana del RE.
Todos los tomos del colesterol provienen del acetato.
La biosntesis de colesterol sigue a una va larga en la que el acetato se convierte en
unidades isopreno.
Luego las unidades de isopreno se condensan para formar una molcula lineal con 30
carbonos que se cierra en un ciclo para formar la estructura de cuatro anillos del
colesterol(27C)
PASOS
1. Formacin del mevalonato a partir de acetato.
2. Conversin de mevalonato a dos isoprenos activados.
3. Condensacin de 6unidades de isopreno activado para formar escualeno.
4. Conversin de escualeno aun ncleo esteroideo de cuatro anillos (colesterol).
HMG-CoA es un precursor clave del colesterol.
La acetil-CoA se convierte en unidades de isopreno por una serie de reacciones que
comienzan con la formacin dehidroximetilglutaril-CoA (HMG-CoA).
La sntesis de HMG-CoA requiere la tiolasa y la HMG-CoA sintasa.
En las mitocondrias, estas dos enzimas se utilizan para la sntesis de cuerpos cetnicos.
Las isoenzimas citoslicas de estas dos protenas generan laHMG-CoA que se usa en la
biosntesis de colesterol.
Sntesis del 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA.
Condensacin de dos molculas de acetil-CoA para dar aceto acetil-CoA.
La acetoacetil reacciona con una tercera molcula de Acetil-CoA para dar 3-hidroxi-3metilglutaril-CoA (HMG-CoA).
Sntesis demevalonato.
La HMG-CoA reductasa cataliza la reduccin de cuatro electrones, que transforma la
HMG-CoA en mevalonato (C6).
El grupo tioster se reduce a alcohol.
Etapa clave reguladora ylimitante de la velocidad en la sntesis de colesterol.
El grupo OH nuevo se fosforila por la mevalonato-5-fosfotransferasa se convierte en 5pirofosfomevalonato.
El grupo fosfato se convierte en pirofosfato por la fosfomevalonato cinasa (5Pirofosfomevalonato).

20

La molcula sufre una reaccin de deshidratacin-descarboxilacin dependiente de ATP


catalizada por la pirofosfomevalonato descarboxilasa.
Se forma una unidad de isopreno de 5C, el isopentenil pirofosfato (IPP).
El isopentil pirofosfato se convierte en dimetilalil pirofosfato por la isopentenil pirofosfato
isomerasa.
Cuatro isopentenil pirofosfatos se condensan para formar el escualeno precursor del
colesterol de C30 en tres reacciones.
1. La prenililtransferasa cataliza la condensacin cabeza-cola del dimetilalil pirofosfato y
el isopentenil pirofosfato para generar el compuesto de C10 geranil pirofosfato.
2. La prenililtransferasa cataliza una segunda condensacin cabeza-cola de geranil
pirofosfato e isopentenil pirofosfato para generar el compuesto de C15 farnesil
pirofosfato.
3. La escualeno sintasa cataliza la condensacin cabeza-cabeza de dos molculas de
farnesil pirofosfato para formar escualeno. El farnesil pirofosfato tambin es el precursor
de otros compuestos isoprenoides en los mamferos (ubiquinona)
El escualeno, un hidrocarburo lineal, se cierra en un ciclo para formar el esqueleto
esteroide tetracclico en dos pasos. La escualeno epoxidasa cataliza la oxidacin del
escualeno para formar 2,3-oxidoescualeno. La oxidoescualeno ciclasa convierte este
epxido en el esteroide lanosterol.
La conversin de lanosterol en colesterol es un proceso de 19pasos que involucra y la
prdida de tres grupos metilo. Para este proceso las enzimas necesitan estar enclavadas
en la membrana del RE. El colesterol sintetizado porel hgado puede esterificarse por la
acil-CoA: colesterolacil tranferasa (ACAT) para formar steres del colesterol.

REGULACIN
La etapa regulatoria y limitante de la velocidad en la sntesisdel colesterol es catalizada
por la Hidroximetilglutaril (HMG)-CoA reductasa, que produce cido mevalnico a partir
deHMG-CoA.
Regulada por varios mecanismos:
1. La expresin del gen de la HMG-CoA reductasa se activa cuando los niveles de
colesterol son bajos, lo que produce un aumento de la enzima y por lo tanto la sntesis
de colesterol.
2. La actividad de la HMG-CoA reductasa est controlada mediante las acciones del
AMPc (fosforila e inactiva) y una protena fosfatasa activada por insulina (activa).
3. Las estatinas son inhibidores competitivos de la HMG-CoAreductasa. Las estatinas
inhiben la HMG-CoA reductasa y se utilizan para tratar la hipercolesterolemia.
DEGRADACIN
Los seres humanos no pueden metabolizar la estructura del anillo del colesterol a CO2 y
H2O.
El ncleo esterol intacto se elimina del organismo por conversin en cidos y sales
biliares, que se excretan con las heces, y por secrecin de colesterol a la bilis, que lo
transporta al intestino para su eliminacin.
Una parte del colesterol presente en el intestino es modificado por bacterias antes de su
excrecin.
Los compuestos principales generados son los ismeros coprostanol y colestanol.
Sales biliares.
Son derivados esteroideos (24Ccon 2 o 3 grupos OH, anfipticos)con propiedades
detergentes, que emulsionan los lpidos del alimento en el intestino, facilitando con ello la
digestin y absorcin de las grasas. Se segregan en el hgado, se almacenan en la
vescula biliar y se trasladan al intestino a travs del conducto biliar.
Los ms abundantes en el ser humano son el cido clico y el cido quenodesoxiclico
(colato y quenodesoxicolato).
Generalmente estn conjugados por un enlace amida con el aminocido glicina y taurina,
dando lugar a las sales biliares.
Los conjugados de cido clico con glicina y taurina se denominan glucolato y
taurocolato.

21

HORMONAS ESTEROIDEAS
El colesterol es el origen biosinttico de todas las hormonas esteroideas, los mensajeros
extracelulares elaborados por las gnadas y la corteza suprarrenal, ms la placenta en
las mujeres embarazadas.
Las hormonas esteroideas, controlan el metabolismo a nivel de los genes.
Reaccionan con receptores proteicos intracelulares, y los complejos hormona-receptor
se unen a lugares especficos del genoma y afectan la transcripcin de los genes
prximos.
Cinco clases principales de hormonas
1. Prostgenos: progesterona, que regulan los fenmenos que se producen durante el
embarazo y son los percusores de todas las dems hormonas esteroideas.
2. Glucocorticoides: cortisol y corticosterona, que estimulan la gluconeognesis y, a dosis
farmacolgicas, suprimen las reacciones inflamatorias.
3. Mineralocorticoides: Aldosterona, que regulan el equilibrio inico mediante la activacin
de la reabsorcin de Na+, Cl-, HCO3- en el rin.
4. Andrgenos: androstenediona y testosterona, que favorecen el desarrollo sexual
masculino y mantiene los caracteres sexuales masculinos.
5. Estrgenos: estrona y estradiol u hormonas sexuales femeninas, que mantienen las
caractersticas sexuales femeninas.
Una caracterstica general de las hormonas esteroideas es que no se almacenan para su
liberacin tras la sntesis.
En consecuencia, la concentracin de una hormona circulante se controla
fundamentalmente mediante su tasa de sntesis, la cual en ltima instancia se controla
por seales procedentes del cerebro.
Normalmente estas seales actan a travs de hormonas intermediarias.
La activacin de la sntesis de las hormonas esteroideas comporta la estimulacin de la
hidrlisis de los steres de colesterol y una captacin de colesterol en las mitocondrias
de las clulas del rgano diana
Una enzima citoromo P450 denominada colesterol desmolasa hidroliza la cadena lateral
en C-20 y C-22 y la rompe, para dar pregnenolona, la precursora de todas las dems
hormonas esteroideas.
La pregnenolona se convierte en la hormona estroideaprogesterona mediante una
deshidrogenacin y la isomerizacin de un doble enlace.
La hidroxilacin en C-21 por una enzima de la corteza suprarrenal, seguida de otras dos
hidroxilaciones y una deshidrogenacin para formar un grupo aldehdo, da aldosterona,
un mineralocorticoide.
La hidroxilacin de la progesterona en C-17 da 17 -hidroxiprogesterona, el precursor de
todos los demsesteroides.
Dos hidroxilaciones de este intermediario dan cortisol, en la glndula suprarrenal. Una
enzima de la corteza suprarrenal y de las gnadas rompe la cadena lateral de la 17hidroxiprogesterona en C-17, dando adrostenediona, un precursor de los andrgenosy
los estrgenos
Las enzimas de estos procesos forman un complejo denominado aromatasa.
La testosterona sufre una reduccin en C-5, dando 5 -dihridotestosterona, que es un
andrgeno ms potente.
Un deficit de la 17-hidroxilasa reduce las concentraciones de cortisol, andrgenos y
estrgenos, con efectos graves en la maduracin sexual.
Un deficit de la 21-hidroxilasa inhibe la sntesis de los glucocorticoides y los
mineralocorticoides, dando lugar a una sobreproduccin de testoterona en las
glndulassuprarreanales.
Al mismo tiempo, la produccin insuficiente de cortisol interfiere en un bucle de
retroaccin del control hormonal en la que intervienen el factor liberador de corticotropina
y la ACTH (hormona adenocorticotrpica).
a. REQUISITOS

22

Aprobar el examen previo a prcticas


Entregar el cuestionario correspondiente a la prctica

5. EQUIPO Y MATERIALES REQUERIDOS


REACTIVOS
Jeringa 5mL
Ligadura
Algodn
Alcohol
Alimentos

CANTIDAD
1 pieza
50 mL
50 mL
100 mL
4 piezas

MATERIALES
Tubos de hemlisis
Gradilla
Centrifuga p/ hemlisis
Libreta de anotaciones

CANTIDAD
23 piezas
2 piezas
1 pieza
1 pieza

6. PROCEDIMIENTO
Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en parejas.
Desarrollo de la prctica:
Distribuir los tubos e identificarlos
Tomar muestra de sangre perifrica
Verter la sangre por la pared del tubo de hemlisis con cuidado.
Centrifugar por 5 minutos a 30000 r.p.m.
Observar el contenido del tubo
Ingerir los alimentos requeridos
Proceder de la misma forma previamente descrita
Observar y anotar los cambios

7. MEDIDAS DE SEGURIDAD
Utilizacin de Normas de Bioseguridad de Nivel 1.
Mantener el laboratorio con la puerta cerrada.
Contenedores especiales para desechos comunes, de riesgo biolgico y punzocortantes.
Limpieza de Mesones y material utilizado.
Lavado de Manos antes y despus de la prctica.
Utilizacin de Guardapolvo, guantes de ltex u otro material de proteccin, barbijo, gorro
y proteccin ocular si es necesaria.

8. RESULTADOS ESPERADOS
Los estudiantes comprendern de mejor forma las fases de transformacin de las
biomolculas, as como la articulacin de rutas metablicas en las que se involucran a
nivel celular y tisular, as como los niveles vasculares y el control de tales niveles
mediante rutas.

9. CUESTIONARIO
1. Realice un esquema sinttico sobre el panorama del metabolismo intemediario,
especificando rutas metablicas involucradas

PRACTICA N 8

1. DATOS GENERALES
a. Asignatura: BIOQUMICA I
b. Nombre de la prctica: DESNATURALIZACIN DE PROTENAS

23
2. TEMA A DESARROLLAR
Transformaciones de las protenas relacionadas a alteraciones o mecanismos de inactivacin
proteica como las que afectan a la cintica enzimtica.

3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA
A la conclusin de la prctica el estudiante ser capaz de:
Entender lo que son las estructuras de las protenas
Comprender las reacciones producidas en la desnaturalizacin de protenas
Identificar los factores que desencadenan la desnaturalizacin de protenas.

4. RESPALDO TEORICO:
ESTRUCTURA DE LAS PROTENAS
La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales denominados:
estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y estructura cuaternaria. Cada una
de estas estructuras informa de la disposicin de la anterior en el espacio.
Estructura primaria
La estructura primaria es la secuencia de aminocidos de la protena. Nos indica qu
aminocidos componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aminocidos se
encuentran. La funcin de una protena depende de su secuencia y de la forma que sta
adopte.
Estructura Secundaria.
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio. Los
aminocidos, a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas y gracias a la
capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, la estructura
secundaria.
Existen dos tipos de estructura secundaria:
La a(alfa)-hlice
La conformacin
Estructura terciaria
La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un polipptido
al plegarse sobre s misma originando una conformacin globular.
En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por tanto la
terciaria..
Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as realizar funciones de transporte ,
enzimticas , hormonales, etc.
Esta conformacin globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces entre los
radicales R de los aminocidos. Aparecen varios tipos de enlaces:

el puente disulfuro entre los radicales de aminocidos que tiene azufre.

los puentes de hidrgeno.

los puentes elctricos.

las interacciones hifrfobas.


Estructura Cuaternaria
Esta estructura informa de la unin , mediante enlaces dbiles ( no covalentes) de varias
cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una de
estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero.
PROPIEDADES DE PROTENAS
Desnaturalizacin.
Consiste en la prdida de la estructura terciaria, por romperse los puentes que forman dicha
estructura. Todas las protenas desnaturalizadas tienen la misma conformacin, muy abierta y
con una interaccin mxima con el disolvente, por lo que una protena soluble en agua cuando

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se desnaturaliza se hace insoluble en agua y precipita.
La desnaturalizacin se puede producir por cambios de temperatura, ( huevo cocido o frito ),
variaciones del pH. En algunos casos, si las condiciones se restablecen, una protena
desnaturalizada puede volver a su anterior plegamiento o conformacin, proceso que se
denomina renaturalizacin

a. REQUISITOS
Aprobar el examen previo a prcticas
Entregar el cuestionario correspondiente a la prctica

5. EQUIPO Y MATERIALES REQUERIDOS


REACTIVOS
Leche
cido actico
Encendedor

CANTIDAD
500 mL
20 mL
1 pieza

MATERIALES EQUIPOS
Vaso de precipitado 500mL
Vaso de precipitado 100mL
Pipetas 10mL
Propipetas
Mechero bunsen/de alcohol
Libreta de anotaciones

CANTIDAD
4 piezas
4 piezas
5 piezas
2 piezas
4 piezas
1 pieza

6. PROCEDIMIENTO

Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos


de 5 personas.
Desarrollo de la prctica:
Se distribuirn los vasos de precipitado.
En el vaso de 500 mL, vaciar la leche
Calentar la leche hasta llegar casi a ebullicin.
Retirar del fuego y agregar el cido actico.
Esperar a que enfre el compuesto.
Observar y anotar los cambios.

7. MEDIDAS DE SEGURIDAD
Utilizacin de Normas de Bioseguridad de Nivel 1.
Mantener el laboratorio con la puerta cerrada.
Contenedores especiales para desechos comunes, de riesgo biolgico y punzocortantes.
Limpieza de Mesones y material utilizado.
Lavado de Manos antes y despus de la prctica.
Utilizacin de Guardapolvo, guantes de ltex u otro material de proteccin, barbijo, gorro
y proteccin ocular si es necesaria.

8. RESULTADOS ESPERADOS
Los estudiantes comprendern de mejor forma los mecanismos involucrados en la
desnaturalizacin proteica, as como la aplicacin clnica de tales transformaciones.

9. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.

Cite la clasificacin de protenas segn funcin


Describa la formacin de el enlace peptdico
Esquematice el ciclo de la Urea
Describa el mecanismo de ubiquitinizacin de protenas
Cite enfermedades relacionadas con el metabolismo de protenas

25

26
PRACTICA N 9

1. DATOS GENERALES
a. Asignatura: BIOQUMICA I

b. Nombre de la prctica: HEMATOCRITO PIGMENTOS BILIARES


2. TEMA A DESARROLLAR
Metabolismo de la hemoglobina y metabolismo de pigmentos biliares y patologas asociadas.

3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA
A la conclusin de la prctica el estudiante ser capaz de:
Comprender los mecanismos de degradacin de hematocrito
Describir la sntesis de porfirinas y pigmentos biliares.
Identificar patologas asociadas a la bilirrubina

4. RESPALDO TEORICO: .ALTERACIONES EN EL METABOLISMO DE LOS PIGMENTOS BILIARES HIPERBILIRRUBINEMIA


La bilirrubina normal del adulto y del nio mayor es menor de 1 mg/dl. Cuando la cifra de
bilirrubina en la sangre excede de 1 mg/dl, existe hiperbilirrubinemia. La bilirrubina se acumula en
sangre, y cuando alcanza una cierta concentracin difunde a los tejidos. Este signo se denomina
ICTERICIA y se evidencia por la coloracin amarilla en piel y mucosas, manifestacin clnica muy
comn. La hiperbilirrubinemia puede deberse a una produccin excesiva de este pigmento o a
una deficiencia en su excrecin y se observa en numerosas enfermedades, que van desde la
hepatitis viral hasta cncer de pncreas.
La ictericia en los adultos aparece con valores de bilirrubina mayores de 2 mg/dl. Para que un
recin nacido est ictrico la bilirrubina debe ser mayor de 7 mg/dl. Ms del 50% de todos los
recin nacidos y un porcentaje ms alto de prematuros desarrollan ictericia. Ms del 5% de los
recin nacidos a trmino normales presentan valores de bilirrubina mayores de 13 mg/dl.
La hiperbilirrubinemia puede deberse a la produccin excesiva de bilirrubina que el hgado
normal puede excretar o puede resultar de la insuficiencia del hgado daado para excretar la
bilirrubina producida en cantidades normales. La obstruccin de conductos excretorios del
hgado, tambin causar hiperbilirrubinemia.
TIPOS DE ICTERICIAS
El aumento de la bilirrubina srica puede ocurrir por cuatro mecanismos:
sobreproduccin,
disminucin de captacin heptica,
disminucin en la conjugacin y
disminucin en la excrecin de la bilis (intra o extraheptica).
Esto ha ayudado a clasificar las ictericias en:
Pre-hepticas o Hemolticas,
Hepticas o Hepotocelulares y
Post-hepticas u Obstructivas o colestticas
Ictericia pre-heptica
La hemlisis es la causa ms comn del exceso de bilirrubina indirecta.
Tambin si existe dificultad en la captacin de la bilirrubina plasmtica por el hgado, se producir
una hiperbilirrubinemia a expensas de la bilirrubina no conjugada.
Existe un aumento de la produccin de bilirrubina por una destruccin excesiva de los eritrocitos.
Predomina la bilirrubina indirecta o no conjugada y las pruebas de funcin heptica son
normales.
En estos casos existe un aumento de la bilirrubina en sangre, a expensas de su forma no
conjugada y no existe coluria (coloracin en orina). Hay coloracin oscura de las heces fecales
por acmulo de estercobilingeno (hipercolia).

27
Las causas ms frecuentes de ictericia pre-heptica son:
1) Hemlisis por reaccin transfusional
2) Desrdenes hereditarios de glbulos rojos: incluyen los siguientes fenmenos:
a) anemia de clulas falciformes (ms frecuente en la raza negra)
b) talasemia
c) esferocitosis: fragilidad de la pared del glbulo rojo por deficiencias enzimticas
3) Desrdenes hemolticos adquiridos: como en el paludismo, la enfermedad hemoltica
del recin nacido por incompatibilidad de los Rh madre-hijo
4) Enfermedades hemolticas del Sistema Reticuloendotelial
5) Anemia hemoltica autoinmune
Ictericia fisiolgica neonatal:
Esta hiperbilirrubinemia resulta de una hemlisis acelerada y de un sistema heptico inmaduro
para la captacin, conjugacin y secrecin de la bilirrubina. Debido a que est elevada la
bilirrubina no conjugada, esta puede penetrar la barrera hemoenceflica. Esto puede resultar en
un quernctero (encefalopata txica hiperbilirrubinmica).
Enfermedades que pueden producir ictericia
Anemia de clulas falciformes
La anemia falciforme es una enfermedad hereditaria de los glbulos rojos. Se caracteriza por la
presencia de una hemoglobina de estructura anmala, que precipita en el glbulo rojo,
disminuyendo la vida media del eritrocito.
Deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH)
Esta deficiencia tiene carcter congnito. En la mayor parte de los casos se requiere la presencia
de un agente desencadenante para que la hemlisis se presente. La deficiencia de G6PDH
produce carencia del NADPH necesario para mantener el estado redox en el eritrocito
Ictericia Heptica
Este tipo de ictericia puede deberse a fallas en la captacin, conjugacin o excrecin de
Bilirrubina por el hgado. A este tipo de ictericias se las denomina tambin mixtas ya que pueden
cursar con incremento de la bilirrubina no conjugada, de la conjugada, o de ambas, dependiendo
de la alteracin primaria.
Las causas de la ictericia heptica son:
1) Disminucin de la captacin de bilirrubina por el hgado (poco frecuentes, son
desordenes genticos)
2) Disminucin de la conjugacin de bilirrubina (deficiencia de glucuroniltransferasa)
3) Dao hepatocelular (muy frecuentes):
a)
hepatitis
b)
cirrosis
c)
cncer del hgado
Sndrome de Crigler-Najjar:
Se caracteriza por ictericia congnita grave debida a la ausencia hereditaria de actividad de
bilirrubina UDP-glucuroniltransferasa en el hgado
Enfermedad de Gilbert:
Parece haber un trastorno en la depuracin heptica de la bilirrubina, posiblemente por un
defecto en su absorcin por las clulas parenquimatosas del hgado. Sin embargo, tambin la
bilirrubina UDP glucuroniltransferasa tiene actividad reducida en el hgado de estos enfermos.
Sndrome de Dubin-Johnson (ictericia idioptica crnica):
Se presenta en la niez o durante la edad adulta. Es provocada aparentemente por un defecto
en la secrecin heptica de la bilirrubina conjugada en la bilis.

Ictericia post-heptica
Se debe al fallo para excretar la bilirrubina desde el hepatocito al duodeno. Se diagnostica por va
lores de bilirrubina directa mayores de 2 mg/dl o por una bilirrubina directa mayor del 15% de la
bilirrubina total. Es siempre patolgica.
Se caracteriza porque la bilis no llega al duodeno. No hay coloracin en materia fecal (acolia),
hay coloracin excesiva en orina (coluria).
Las causas de la ictericia post-heptica son:

28
1)
2)
3)
4)

Desrdenes estructurales del tracto biliar.


Colelitiasis (clculos en la vescula): el clculo obstruye el paso de la bilis.
Atresia congnita de las vas biliares extrahepticas.
Obstruccin biliar por tumores: principalmente causados tumores en la cabeza de
pncreas y en la ampolla de Vater.
Generalmente los pacientes con ictericia obstructiva (post-heptica) tienen una coloracin
amarillo-verdosa. Adems hay prurito debido a que la bilirrubina se fija en la grasa de los tejidos.
Obstruccin del rbol biliar:
Resulta del bloqueo de los conductos hepticos o del coldoco. El pigmento biliar pasa de la
sangre al interior de los hepatocitos como lo hace en forma habitual, pero no se excreta. Como
consecuencia de esto, la bilirrubina conjugada es absorbida al interior de las venas hepticas y
de los vasos linfticos.

a. REQUISITOS
Aprobar el examen previo a prcticas
Entregar el cuestionario correspondiente a la prctica

5. EQUIPO Y MATERIALES REQUERIDOS


Cada uno de los estudiantes deber preparar el tema.
Se realizarn exposiciones individuales
Los estudiantes realizarn una mesa redonda, en la que se debatir el tema.
REACTIVOS
Alcohol
Detergente

CANTIDAD
20 mL
200 g

MATERIALES EQUIPOS
Capilares de microhematocrito
Jeringas
Torundas de algodn
Ligadura
Almohadn
Tubos de hemlisis
Gradilla para tubos de hemlisis
Centrifuga para microhematocrito
Reglas de microhematocrito
Masilla para capilares de microHTO
Cepillos para tubos
Papel higinico
Libreta de anotaciones

CANTIDAD
10 piezas
10 piezas
30 piezas
10 piezas
2 piezas
10 piezas
2 piezas
5 piezas
2 piezas
2 piezas
4 piezas
1 rollo
1 pieza

6. PROCEDIMIENTO

Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en parejas.


Desarrollo de la prctica:
Se distribuir un tubo de hemlisis para cada estudiante.
Cada tubo se enumerar del 1 al 10
Cada pareja deber extraer una muestra de sangre perifrica.
Colocarn al paciente en un lugar cmodo, con el codo sobre un almohadn.
Se elegir la vena ms apta a nivel de la M venosa de la flexura del codo.
Realizar la asepsia y antisepsia de la regin con alcohol.
Se colocar la ligadura, solicitando flexin palmar de los dedos.
Puncionar la vena siguiendo una direccin a 45C.
Traccionar el mbolo de la jeringa.

29

Una vez obtenido el volumen adecuado, retirar la ligadura, cubrir la regin de puncin
con una torunda con alcohol, retirar la aguja.
Transferir la sangre a un tubo de hemlisis.
Cargar los capilares y cubrirlos con masilla
Llevar a centrifugacin a 30000 rpm durante 5 minutos
Medir con la regla, determinar el porcentaje del hematocrito
Observar y anotar los cambios

7. MEDIDAS DE SEGURIDAD
Utilizacin de Normas de Bioseguridad de Nivel 1.
Mantener el laboratorio con la puerta cerrada.
Contenedores especiales para desechos comunes, de riesgo biolgico y punzocortantes.
Limpieza de Mesones y material utilizado.
Lavado de Manos antes y despus de la prctica.
Utilizacin de Guardapolvo, guantes de ltex u otro material de proteccin, barbijo, gorro
y proteccin ocular si es necesaria.

8. RESULTADOS ESPERADOS
Los estudiantes comprendern las transformaciones involucrados en el metabolismo de
porfirinas, transformacin de hemoglobina a bilirrubina.

9. CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.

Describa la sntesis de hemoglobina


Explique las razones por los que la hemoglobina se degrada
Cite los tipos de bilirrubina que existen
Esquematice la excrecin de bilirrubina
Describa patologas asociadas a ictericia

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PRACTICA N 10

1. DATOS GENERALES
a. Asignatura: BIOQUMICA I
b. Nombre de la prctica: ELECTROFORESIS

2. TEMA A DESARROLLAR
Migracin de biomolculas a travs de un campo electro-magntico, como fundamento de
diagnstico molecular.

3. OBJETIVOS DE LA PRCTICA
A la conclusin de la prctica el estudiante ser capaz de:
Entender la estructura del DNA
Explicar la importancia del DNA
Describir las fases de la replicacin del ADN y de la sntesis de protenas

4. FUNDAMENTO TEORICO
La electroforesis es un mtodo de laboratorio en el que se utiliza una corriente elctrica
controlada con la finalidad de separar biomoleculas segn su tamao y carga elctrica a travs
de una matriz gelatinosa.
Fue empleado por primera vez por en el ao 1937, pero su importancia vino a incrementarse
cuando en los aos cincuenta E. L.Durrum y Arne W.K. Tiselius , impulsaron la electroforesis de
zona, nombre que se asigno a la separacin de materiales en un campo elctrico en presencia
de algn tipo de soporte; aunque este termino se limito originalmente al anlisis de coloides y
partculas submicroscopicas , se ha convertido en estos ltimos aos en una metodologa
aplicada a sustancias de bajo peso molecular.
Fundamento.
Cuando una mezcla de molculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo
elctrico, estas experimentan una fuerza de atraccin hacia el polo que posee carga opuesta,
dejando transcurrir cierto tiempo las molculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el
ctodo (el polo negativo) y aquellas cargadas positivamente se desplazaran hacia el nodo (el
polo positivo).
El movimiento de las molculas est gobernado tambin por dos fuerzas adicionales;
inicialmente la friccin con el solvente dificultar este movimiento originando una fuerza que se
opone , por otro lado las molculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento
browniano debido a que poseen energa cintica propia denominado difusin. La energa
cintica de las molculas aumenta con la temperatura, por ello a mayor temperatura mayor
difusin.
La suma de todas estas fuerzas provoca que las molculas no migren de una manera
homognea, de tal manera que, si las molculas son colocadas en un cierto lugar de solucin,
los iones comenzaran a moverse formando un frente cuya anchura aumentara con el tiempo.
Para reducir la anchura de este frente podemos reducir el movimiento de las molculas
empleando un medio que oponga mas resistencia a dicho movimiento. Una forma comn de
hacer esto es formar un gel. El gel consiste de un polmero soluble de muy alto peso molecular
que atrapa molculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos,
consecuentemente, la migracin electrofortica de las molculas ser mas lenta, pero el
ensanchamiento del frente se vera reducido tambin.
Mtodos electroforeticos zonales.
Son los ms comunes, dada su alta aplicabilidad en diferentes campos. Son tiles para lograr la
separacin de mezclas complejas. Se aplican pequeas cantidades de la disolucin de protenas
a un soporte slido, que se impregna con una solucin tampn. Los soportes son en general

31
polmeros y forman un gel poroso que restringe el movimiento de las molculas a travs del
medio durante la electroforesis y disminuyen los flujos de conveccin del solvente.
Como soporte han sido utilizados papel (celulosa), almidn, poliacrilamida, agarosa y acetato de
celulosa, entre otros. Este mtodo tiene gran poder resolutivo por que se aplica una cantidad
pequea de protena a una zona estrecha, mientras que la longitud del trayecto es mucho
mayor que la zona de aplicacin. El equipamiento requerido es simple, fuente de poder, cubeta
vertical u horizontal donde se colocan el soporte y dos electrodos
Electroforesis en gel de poliacrilamida.
Los geles de poliacrilamida se forman por polimerizacin de la acrilamida por accin de un
agente entrecuzador, es qumicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser
preparado de forma rpida y reproducible. Forma, adems, geles transparentes con estabilidad
mecnica, insolubles en agua, relativamente no inicos y que permiten buena visualizacin de
las bandas durante un tiempo prolongado. Adems tiene la ventaja de que variando la
concentracin de polmeros, se puede modificar de manera controlada en el tamao del poro,
lamentablemente cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxocidad.
Electroforesis en geles de gradientes.
El uso de geles de poliacrilamida que tienen un gradiente creciente de concentracin de
archilamida + bisacrilamida, y en consecuencia un gradiente decreciente en el tamao del poro,
pueden tener ventajas sobre los geles de concentraciones uniformes de acrilamida. En un gel en
gradiente la protena migra hasta alcanzar una zona donde el tamao de poro impida cualquier
avance. Una vez se alcanza el limite del poro no se produce una migracin apreciable aunque no
se detiene completamente. Una de las ventajas de este tipo de geles es que resuelve mejor las
bandas pues las concentra en regiones mas estrechas, adems de incrementar el rango de
pesos moleculares que se pueden resolver en un mismo gel comparado con los de una
concentracin fija. (Diapositiva n 9)
Electroforesis en geles de agarosa.
La agarosa es un polisacrido (originalmente obtenido de algas, como el agar-agar, pero de
composicin homognea), cuyas disoluciones (tpicamente de 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de
permanecer liquidas por encima de 50 grados C y formar un gel, semislido al enfriarse. Este gel
esta constituido por una matriz o trama tridimensional de fibras polimricas embebida en gran
cantidad de medio lquido, que retarda el paso de las molculas, se usa usualmente para separar
molculas grandes de alrededor 20.000 nucletidos.
Electroforesis capilar.
La electroforesis capilar se basa en los mismos principios de las tcnicas electroforeticas
convencionales, pero utiliza condiciones y tecnologa distinta que nos permiten obtener una serie
de ventajas al respecto, Esta separacin de pptidos realizada sobre un capilar de silica fundida
a potenciales elevados 20 a 30 Kv en un campo de 400 a 500 v/cm refrigerados por aire. La
corriente electroendosmtica (FEO) generada por los grupos silanol de la superficie interna del
capilar da como resultado una corriente plana del frente del lquido que contrasta con el frente
parablico de la cromatografa lquida de alta resolucin. La ventaja de esta tcnica es que el
capilar de silica fundida que generalmente se cubre con una capa de polimina para darle mayor
rigidez y resistencia, tiene una ventaja a travs de ella que permite el pasaje de la luz UV de tal
manera que la visualizacin es on-line. Con esta tcnica descripta es posible separar cationes,
aniones, protenas, macromolculas y sustancias no cargadas en forma simultnea.
Isoelectroenfoque.
Esta tcnica, habitualmente denominada electroenfoque se basa en el desplazamiento de las
molculas en un gradiente de pH. Las molculas amfotricas, como los aminocidos, se
separan en un medio en el que existe una diferencia de potencial y un gradiente de pH . La
regin del nodo es cida y la del ctodo es alcalina. Entre ambos se establece un gradiente de
pH tal que las molculas que se han de separar tenga su punto isoelctrico dentro del rango.
Las sustancias que inicialmente se encuentran en regiones de pH inferior a su punto isoelctrico
estarn cargadas positivamente y migraran hacia el ctodo, mientras aquellas que se encuentran
en medios con pH ms bajos que su punto isoelctrico tendrn carga negativa y migraran hacia
el nodo. La migracin les conducir a una regin dnde el pH coincidir con su punto

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isolctrico, tendrn una carga neta nula y se detendrn. De esta forma las molculas
amfotricas se sitan en estrechas bandas donde coincide su punto isoelctrico con el pH.
Electroforesis bidimensional.
La electroforesis bidimensional se basa en separar las protenas en una mezcla segn sus dos
propiedades moleculares, una en cada dimensin. El procedimiento ms usado se basa en la
separacin en una primera dimensin mediante isoelectroenfoque y la segunda dimensin segn
peso molecular mediante electroforesis en poliacrilamida.
Fuentes de error en la electroforesis.
La electroforesis es una tcnica muy sensible y puede ser afectada por muchos errores
experimentales, como la temperatura durante la polimerizacin y la corrida del gel, velocidad de
la polimerizacin, niveles de catalizador, pureza del reactivo, tiempo de corrida y preparacin de
las muestras.

a. REQUISITOS
Aprobar el examen previo a prcticas
Entregar el cuestionario correspondiente a la prctica

5. EQUIPO Y MATERIALES REQUERIDOS


REACTIVOS- EQUIPOS
Recipientes anchos
Sal de mesa
Bicarbonato de sodio
Baterias 9V
Papel filtro
Agua

CANTIDAD
2 piezas
5g
5g
3 piezas
1 pieza
100

MATERIALES
Vasos de precipitado 250 mL

CANTIDAD
2 piezas

6. Planificacin de la prctica: Los estudiantes de la prctica se organizarn en grupos


de 5 personas.
Desarrollo de la prctica:
Colocar los dos recipientes uno al lado de otro
Vaciar el agua hasta casi llenar los recipientes
Agregar una cucharada de sal y bicarbonato de sodio a cada recipiente
Colocar el papel filtro transversalmente a los envases, de tal forma que se empapen de
agua
Conectar los cables a las bateras, formando circuitos entre las bateras uno de polaridad
positiva y otro de polaridad negativa
Introducir el otro extremo de cada uno de los cables en un envase distinto.
Agregar una gota de sangre en la parte media del papel filtro
Observar y anotar cambios

7. MEDIDAS DE SEGURIDAD
Utilizacin de Normas de Bioseguridad de Nivel 1.
Mantener el laboratorio con la puerta cerrada.
Contenedores especiales para desechos comunes, de riesgo biolgico y punzocortantes.
Limpieza de Mesones y material utilizado.
Lavado de Manos antes y despus de la prctica.
Utilizacin de Guardapolvo, guantes de ltex u otro material de proteccin, barbijo, gorro
y proteccin ocular si es necesaria.

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8. RESULTADOS ESPERADOS
Los estudiantes sern capaces de generar una electroforesis y describir el fundamento
electro-magntico de las tcnicas moleculares de diagnstico.

9. CUESTIONARIO
1. Qu son las tcnicas moleculares?
2. Por qu existe migracin de molculas a los polos, ya sean positivos o negativos
durante la electroforesis?
3. Qu carga tiene el DNA y a qu molcula se debe?
4. Qu son los iones y cmo se forman?
5. Qu tipos de electroforesis existen?

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UNIVERSIDAD TCNICA PRIVADA COSMOS EL ALTO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA
CUARTO SEMESTRE
CTEDRA DE BIOQUMICA II

INFORME DE LABORATORIO
(FORMATO)
1. Introduccin
2. Objetivos
2.1. Objetivo general
2.2. Objetivos especficos
3. Marco terico
4. Materiales
5. Procedimiento
6. Resultados
7. Conclusiones y Discusin
8. Bibliografa

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UNIVERSIDAD TCNICA PRIVADA COSMOS EL ALTO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA DE MEDICINA
CUARTO SEMESTRE
CTEDRA DE BIOQUMICA II
APELLIDOS Y NOMBRES:..
TEMA: ..
FECHA:

CUESTIONARIO

Bibliografa

NOTA:

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