UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Per, Decana de Amrica

Facultad de Qumica e Ingeniera Qumica
Escuela Acadmico Profesional de Ingeniera Agroindustrial

Asignatura: Tecnologa Agroindustrial II

PRACTICA:
Produccin de bioetanol
Objetivos
Evaluar la produccin de etanol por levaduras Saccharomyces cerevisiae
utilizando residuos y materias primas disponibles.
Determinar el rendimiento, la velocidad de fermentacin y la productividad de
etanol.

Marco terico
Produccin de etanol y metabolismo de azcares
La mayora de microorganismos entre ellos las levaduras utilizan
azcares fermentables como fuente de carbono y energa. A condiciones
aerobias la glucosa es completamente oxidada a CO2 y H2O. El proceso de
disimilacin completa de la glucosa a condiciones aerobias se conoce como
respiracin y genera la mayor cantidad de energa (3638 moles de ATP) por
unidad de glucosa utilizada. A condiciones anaerobias de severa limitacin de
oxgeno sucede la fermentacin, es un proceso que genera poca energa que
conlleva a la produccin de etanol, CO2 y otros compuestos propios de la
fermentacin de azcares.
Algunos microorganismos tales como bacterias lcticas, clostridios, bacterias
metanognicas, etc., solo obtienen energa mediante procesos de fermentacin
de azcares. Por otro lado, microorganismos como levaduras, a condiciones
anaerobias los azcares como glucosa, fructosa, sacarosa son utilizados para
producir etanol va la gluclisis. Las reacciones enzimticas de esta va forman
piruvato. En la gluclisis un mol de glucosa es convertido mediante una serie
de reacciones enzimticas a dos moles piruvato. En la fermentacin alcohlica
el acetaldehdo sirve como precursor para la sntesis de etanol.
Gay-Lussac fue el primero en mostrar que la fermentacin de glucosa rinde
aproximadamente iguales cantidades de etanol y CO2. Pasteur encontr que
100 partes de sacarosa rinde 51.1 partes de etanol, 49.4 partes de CO2, 3.2
partes de glicerol y 1.7 partes de cido succnico.
Sin embargo, el rendimiento en fermentaciones reales no alcanza siempre el
valor terico, el cual debera ser 51.1% en peso basado en glucosa
fermentada. Este rendimiento es debido a la formacin de sub-productos
durante la fermentacin alcohlica y a la asimilacin de azcar por la levadura,

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adems de ello el rendimiento es afectado por diversas variables que incluye el

pH, cantidad de inculo y presencia de oxigeno. El etanol producido al final del
proceso fermentativo se recupera por destilacin y puede ser utilizado como
biocombustible.

Materiales y reactivos

Levadura de pan
Melaza de caa de azcar
Extracto de levadura
KH2PO4
HCl al 5%
NaOH al 5%
Agua destilada
Matraces Erlenmeyer de 0,5L
Pipetas de 5 ml
Picnmetro

2g
1kg
1 g/L
1 g/L
------02
03
01

Balanza digital
Algodn
Mechero Bunsen
Autoclave
pH metro
Bageta
Lapicero rotulador
Cinta mazkin
Cuello de cisne

01
3 paquetes
02
01
01
01
01
01
02

Metodologa
Medio de fermentacin: Se diluye melaza de caa de azcar con agua
destilada hasta obtener una concentracin de 15Brix. A 1L de melaza diluida
se adiciona extracto de levadura 1g/L; 0.1 g/L; KH2PO4. Se ajusta el pH a 5.0
con HCl NaOH.
Microorganismos: Se utilizar levaduras Saccharomyces cerevisiae (levadura
de pan) preparada como inculo diluyendo 5g levadura de pan en 50ml de
agua destilada estril.
Fermentacin y produccin de etanol: en dos matraces Erlenmeyer de 0.5L
verter 0.35L de melaza de caa diluida y ajustada el pH previamente. Esterilizar
durante 15 minutos a 15psi y 121C. Inocular aspticamente en la cmara de
inoculacin con 5ml de inoculo y agitar cuidadosamente. Incubar los matraces
a 30C durante la fermentacin.
Recuperacin de etanol: el etanol producido durante la fermentacin
recupera destilando el fermentado. Durante el destilado se permite
separacin de agua, etanol y otros compuestos de la fermentacin de
slidos restantes. El etanol es separado del resto de los componentes
sucesivos tratamientos de purificacin.

se
la
los
en

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Mediciones
Determinacin de slidos solubles
Un matraz se usar para la toma de muestras y as evaluar la variacin de
slidos solubles. Se toma aspticamente 1 ml de medio de fermentacin al
inicio y cada 24 horas y se medir los grados Brix con un refractmetro. Los
datos servirn para construir una curva Brix versus tiempo.
Determinacin de la velocidad de fermentacin
El segundo matraz servir para realizar esta determinacin. Luego de la
inoculacin se determinar el peso del medio de fermentacin descontando el
peso del matraz y accesorios. Repetir esta medicin cada 24 horas durante el
tiempo de fermentacin hasta que en dos mediciones consecutivas no haya
diferencia significativa en la variacin del peso. Estos datos servirn para
construir una grfica entre peso versus tiempo de fermentacin. Calcular la
pendiente y ello corresponder a la velocidad de fermentacin.
Evaluacin de la variacin del pH
Durante la fermentacin se tomar una muestra para medir el pH cada 24
horas. Los datos obtenidos se colocarn en una grfica considerando el
tiempo.
Determinacin de la concentracin final de etanol
Al trmino de la fermentacin, cuando no se observe la produccin de CO2 se
determinar por picnometra la concentracin de etanol producido. Esta
determinacin se realiza luego de destilar un volumen de fermento y recibirlo
en un picnmetro de 50ml. La determinacin se realiza por diferencia de
densidades y encontrando el valor correspondiente a la concentracin de
etanol en tablas. Pesar cuidadosamente tanto el picnmetro vaco y lleno
teniendo en cuenta la exactitud.

Cuestionario
1. Cul es el principio de produccin de etanol a partir de melaza de caa? Qu
componentes contiene la melaza?
2. Cul es la importancia de controlar el desprendimiento de CO2 en una
fermentacin?
3. De qu otras residuos puede producirse etanol y cules seran los
tratamientos previos antes de usarse en la fermentacin?
4. Cul es la importancia de adicionar extracto de levadura y KH2PO4 al medio
de fermentacin?
5. Qu estrategia utilizara para incrementar la produccin de etanol durante la
fermentacin? justifique sus comentarios.

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Referencia bibliogrfica
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Mansouri, A., Rihani, R., Laoufi, A.N., Ozkan, M. 2016. Production of bioethanol
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metabolismo de glucosa en un mutante piruvato-dehidrogenasa negativo de
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Wang, M., Zhou, D., Wang, Y., Wei, S., Yang, W., Kuang, M., Ma, L., Fang, D.,
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