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BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR Cdigo 151009

COMPONENTE PRCTICO
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD 2016

ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR


COMPONENTE PRCTICO

Para la realizacin de la presente gua has participado los docentes Carmen Eugenia Pia
Lpez, Yurby Salazar, Bibiana vila y Alberto Garca y la coordinadora de laboratorios
Anglica Yara durante el proceso de construccin se han realizado mejoramientos
acadmico-pedaggicos y didcticos con la incorporacin de Objetos Virtuales de
Aprendizaje. Con el fin de que el estudiante tenga una preparacin previa del material a
utilizar y de los Procedimientos a seguir se incorporaron links a videos demostrativos donde
se muestra paso a paso cada uno de los procedimientos que el estudiante debe realizar en la
prctica presencial.
Cada video cuenta con su respectivo formato de observacin lo cual le facilitar la
comprensin y el desarrollo de la prctica:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201101/curso/.
Se dise una simulacin de microscopa en donde el estudiante puede manipular el
microscopio de manera virtual y de esta manera realizar un entrenamiento previo al
desarrollo de los laboratorios. El link donde est publicado el simulador:
http://canal.unad.edu.co/laboratorio/index/main.html

NDICE

Prctica No. 1: Microscopa


Prctica No. 2: Clula: Crenacin, Hemlisis, Plasmlisis y Turgencia.
Prctica No. 3: Permeabilidad selectiva del eritrocito.
Prctica No. 4: Tejidos vegetales y Aislamiento de cloroplastos.
Prctica No. 5: Accin de lisosomas.
Prctica No. 6: Mitosis y Meiosis.
Prctica No. 7: Separacin de mezclas
Bibliografa

INTRODUCCIN

El estudio de las ciencias biolgicas siempre ha estado acompaado del uso del microscopio;
su uso contribuy en la formulacin de la teora celular. Hooke estudi las clulas de la
superficie de una hoja, y las paredes celulares del corcho, consideradas por primera vez
como unidad del organismo. Durtrochet escribi que todos los tejidos orgnicos estaban
formados por clulas globulosas pequesimas de adhesin simple. Schleiden dijo: Todos
los organismos estn compuestos de clulas; Virchow dijo: Donde haya una clula, debi
haber antes una clula precursora. Los detalles microscpicos de la clula se hicieron
evidentes al mejorar el diseo del microscopio, de tal manera que para el siglo XIX se
lograron identificar casi todas las estructuras o componentes de la clula, las cuales
actualmente pueden describirse con el uso de diferentes tipos de microscopios; sin embargo,
el microscopio de luz es el ms utilizado, permitiendo observar la estructura bsica de la
clula. Con el microscopio compuesto, se pudieron apreciar organismos vivos cuya
existencia era desconocida para los primeros investigadores. Los microscopios estn
formados por tres sistemas fundamentales: 1) el sistema mecnico, que es el sostn de los
sistemas complementarios y que permite el ajuste del punto focal y las dioptras; 2) el
sistema ptico, que permite magnificar a diferentes grados la muestra observada y 3) el
sistema de iluminacin, que permite iluminar y concentrar los haces luminosos en el punto de
inters, as como regular la intensidad de la iluminacin. Esta gua de laboratorio de Biologa
Celular se incluye experimentos y actividades bsicos que por principio debe conocer el
estudiante. La informacin contenida permite vincular los aspectos tericos con las
actividades prcticas propuestas. Aunque esta prctica cumple con las actividades
propuestas, es importante que el estudiante profundice sobre algunos temas sugeridos. La
biologa celular y molecular es una disciplina bsica apoyada en ciencias bsicas y dan
coherencias al entendimiento desde la biologa, bioqumica y gentica a los distintos
fenmenos celulares. El estudio de las propiedades de la clula permite comprender el
funcionamiento y la constitucin de las estructuras y las interacciones celulares, las
aplicaciones de este conocimiento a desarrollo de biotecnolgicos.

OBJETIVO

La gua de prcticas del curso de Biologa Celular y Molecular tiene como objetivo dar
herramientas al estudiante para comprender las interacciones bioqumicas, genticas que se
llevan a cabo en la clula y desarrollar su pensamiento cientfico y crtico respecto a las
relaciones que se dan en la Biologa celular y Molecular.

DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
PRCTICA No. 1
MICROSCOPA

Introduccin

Teniendo en cuenta que el tema del estudio en este curso, ya sea la clula o los genes,
requieren del desarrollo de instrumentos y tecnologas de apoyo entre ellas el uso del
microscopio. Los microscopios permiten obtener la imagen aumentada del objeto.

Objetivo
Comprender el funcionamiento del microscopio y el procedimiento para su manipulacin
correcta.

Material que debe llevar al laboratorio

Agua estancada, Papel milimetrado, Hilos de colores, Tela de cuadros 2 centmetros,


Recorte de peridico con la letra asimtrica.

Material que le ser proporcionado en el Laboratorio

Lamina con extendido coloreada, Microscopio, Aceite de inmersin, Papel de Arroz o de


ptica, Alcohol isoproplico Lminas portaobjetos, Laminillas.

Procedimiento:

1. Realizacin de Montaje hmedo. 1.1. Tome con un gotero una muestra de agua
estancada.
1.2. Coloque la gota de agua estancada sobre una lmina porta-objeto.

1.3. Tome una laminilla cubreobjetos, en posicin oblicua, (45 grados) y apoyando una
arista sobre la lmina al lado de la gota, djela caer suavemente.

1.4. Retire el exceso de agua por los bordes usando papel absorbente
2. Manejo del microscopio.
2.1. Encienda el microscopio.
2.2. Coloque el objetivo de menor aumento 4X.
2.3. Baje la platina completamente girando el tornillo macromtrico.
2.4. Tome la lmina con la preparacin fjese que est completamente seca en la parte
inferior
2.5. Coloque la lmina con la preparacin de agua estancada sobre la platina sujetndola
con las pinzas.
2.6. Procure que la preparacin quede centrada, girando el tornillo para desplazamiento
del carro mvil.
2.7. Gire el tornillo macro mtrico en sentido contrario a las agujas del reloj para subir la
platina hasta el tope.
2.8. Debe hacerlo mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo
de incrustar el objetivo en la preparacin.
2.9. Cierre o abra el diafragma hasta una posicin intermedia, accionando su perilla en
sentido contrario a las agujas del reloj para que la luz no sea ni muy brillante ni
demasiado tenue.
2.10. Inicie la observacin con el objetivo de 4X.
2.11. 2.11. Mirando a travs de los oculares, separe lentamente el objetivo de la preparacin
con el tornillo macro mtrico en sentido de las agujas del reloj hasta ver la imagen.
2.12. Cuando se observe algo ntido la muestra, gire el tornillo micromtrico hasta obtener
un enfoque fino.
2.13. Gire el revlver.
2.14. Coloque el objetivo de 10X 2.15. Visualice con el objetivo de 10X y detalle las
estructuras
2.15. Gire el revlver y visualice con el objetivo de 40X enfoque con el tornillo micromtrico
y detalle las estructuras.
2.16. Detalle como el campo se reduce y el alga y el protozoo se observan mejor.
2.17. Observacin con el objetivo de inmersin 100X: Se utiliza para la observacin de
muestras fijadas, no para muestras frescas.
2.18. Coloque el objetivo de inmersin de manera que el orificio de la platina quede entre el
objetivo de 100X y el de 40X.
2.19. Suba totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica
la zona que se va a visualizar y donde habr que aplicar el aceite.
2.20. Coloque una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin en el crculo de luz.
2.21. Coloque una lmina coloreada sobre la platina.
2.22. Ubique el objetivo de 100x.

2.23. Suba la platina lentamente hasta que la lente toque la gota de aceite.
2.24. Observe la imagen con aumento de 100X.
2.25. En esta preparacin se muestran los glbulos blancos, glbulos rojos y plaquetas
coloreados con colorante de Wright.
2.26. Limpie el objetivo de inmersin con un papel especial para ptica y alcohol
isoproplico.
2.27. Deje el objetivo de menor aumento en posicin de trabajo.
2.28. Comprobacin de los poderes o capacidades del microscopio ptico.
2.29. Realice un montaje hmedo con la letra asimtrica y obsrvela al microscopio
siguiendo los pasos anteriores.
2.30. Calcule el aumento del tamao del objeto observado para cada objetivo del
microscopio con el cual le correspondi trabajar.
2.31. Realice un montaje hmedo con una hebra de hilo y obsrvela al microscopio
siguiendo los pasos anteriores.
2.32. Clculo del dimetro del campo de visin.
2.33. Realice un montaje hmedo con un centmetro cuadrado de papel milimetrado y
obsrvelo al microscopio.
2.34. Calcule el dimetro del campo de visin para un aumento de 4x en un cuadrado de 1
cm de lado de papel milimetrado.

Cuestionario:

a. Qu organismos pueden observarse en la gota de agua estancada?


b. Son todos de igual tamao y forma?
c. Se observan organismos mviles o estticos?
d. Cmo se manifiesta el poder de aumento al observar la letra?
e. Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine:

Cmo se manifiesta el poder de resolucin?


Cmo se manifiesta el poder de aumento?
Cmo se manifiesta el poder de definicin?
Cmo se manifiesta el poder de penetracin o profundidad?

f. Cul es la utilidad del microscopio?


g. En qu montaje se observ mejor el poder de penetracin?
h. Calcule el dimetro del campo de visin para aumentos de 10X, 40X del mismo cuadrado
de 1 cm de lado de papel milimetrado.

DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
PRCTICA No. 2
CLULA: CRENACIN, HEMLISIS, PLASMLISIS Y TURGENCIA

Introduccin

La membrana plasmtica de las clulas vegetales y animales es muy permeable al agua,


siendo pocas las sustancias que la atraviesan con igual facilidad, esto ocasiona que cuando
exista entrada y salida de ella, la clula tambin se altere en su forma, ya que sta, en parte
est determinada por el estado de hidratacin de los coloides celulares.

Objetivo

Observar los fenmenos de hipotona, isotona e hipertona en clulas animales y vegetales.

Material

Microscopio compuesto.
6 portaobjetos y 6 cubreobjetos.
Vasija con agua destilada.
Pipeta Pasteur.
Solucin de NaCl al 0.6%
Solucin de NaCl al 0.9%
Solucin de NaCl al 1.2%
Solucin de NaCl al 10%

No realice las preparaciones al mismo tiempo, para obtener resultados satisfactorios es muy
importante que concluya con la observacin de una muestra antes de preparar la siguiente.

Clulas sanguneas

1.- Empleando una lanceta estril obtenga una gota de sangre, colquela en un portaobjetos
limpio y seco, ponga el cubreobjetos y realice la observacin correspondiente al microscopio.
Nota 1. Evite cualquier tipo de contaminacin de su muestra, por ejemplo con alcohol, agua,
etc.
2.- Repita el paso 1 pero ahora agregando a su muestra de sangre 2 gotas de agua
destilada.
3.- Repita el paso 1, y adicione a la muestra 2 gotas de las siguientes soluciones: NaCl al
0.6% NaCl al 0.9% NaCl al 1.2% NaCl al 10% No realice las preparaciones al mismo
tiempo. Para obtener resultados satisfactorios es muy importante que concluya con la
observacin de una muestra antes de preparar la siguiente.

Clulas vegetales

1.- Seleccione una hoja de Elodea en buen estado y colquela sobre un portaobjetos limpio
y seco, y con el envs de la hoja hacia arriba. Adicione gotas de agua de su medio,
suficientes para cubrir la hoja totalmente y ponga con cuidado el cubreobjetos. Realice las
observaciones correspondientes al microscopio.
2.- Repita el paso 1, pero ahora agregando gotas de agua destilada. 3.- Repita el paso 1 y
adicione a la muestra en lugar de agua, gotas de las siguientes soluciones: NaCl al 0.6%
NaCl al 0.9% NaCl al 1.2% NaCl al 10%.

Presentacin de resultados

Elaborar los esquemas correspondientes para cada una de las preparaciones.


Cada esquema debe incluir: ttulo, aumento y adems sealar las distintas estructuras
celulares que se observen. Anote en un cuadro los resultados de las soluciones hipotnicas,
isotnicas e hipertnicas para los dos tipos de clulas.

Cuestionario

1. Mencione las diferencias observadas entre el comportamiento de la clula vegetal y


animal. Explique.
2. Describe lo que sucede en una clula cuando se coloca en un medio:
a) hipotnico, b) isotnico, c) hipertnico.
3. Explique en qu consisten los fenmenos de smosis y de difusin.
4. Por qu los sueros fisiolgicos que se aplican a pacientes intravenosamente deben ser
isotnicos?
5. Por qu se recomienda usar sangre de carnero en lugar de la sangre humana?

DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
PRCTICA No. 3
PERMEABILIDAD SELECTIVA DE LA MEMBRANA DEL ERITROCITO

Introduccin

Cuando un eritrocito es colocado en una solucin isotnica, que contiene molculas que
pueden atravesar la membrana, la molcula penetrante entra en la clula ocasionando que
sta estalle. Este estallamiento de los eritrocitos es llamado hemlisis y puede ser detectado
por medio de un espectrofotmetro, que mide el cambio en la absorcin de la luz, debido al
paso de la hemoglobina hacia el exterior.

Objetivo

Visualizar y determinar el porcentaje de hemlisis en eritrocitos causada por diferentes


molculas.

Material

4 vasos de precipitados de 100 ml.


6 vasos de precipitado de 250 ml.
Una pipeta de 1 ml.
6 pipetas de 10 ml.
Un agitador de vidrio.
Una pizeta con agua destilada.
Espectrofotmetros.
Celdas para espectrofotmetro.

Reactivos

Solucin de NaCl 0.17 M Solucin de Glicerol 0.32 M


Solucin de Metanol 0.32 M
Solucin de Butanol 0.32 M
Solucin de Oxalato de amonio 0.12 M
Solucin de Fructuosa 0.25 M
Solucin de cido ctrico 0.26 M
Material biolgico Sangre desfibrinada (10 ml) por grupo de trabajo.
Sangre humana con anticoagulante EDTA

Procedimiento

Preparar una solucin STOCK de la siguiente manera: Coloque con una pipeta 5 ml de
sangre desfibrinada en un vaso de precipitados, adicione 45 ml de solucin isotnica de NaCl
0.17 M. Se agita levemente para homogenizar. Para preparar la solucin al 100% de
HEMOLISIS, coloque en un vaso de precipitados 0.5 ml de solucin STOCK y agregue 3 ml
de agua destilada; y luego adicione 26.5 ml de solucin de NaCl 0.17 M. Agite.
Para preparar la solucin de 0% de HEMOLISIS, coloque en un vaso de precipitados 0.5 ml
de solucin STOCK y 29.5 ml de solucin de NaCl 0.17 M. Se agita ligeramente.
Para calibrar el espectrofotmetro primero ajuste a 0% de Transmitancia a una longitud de
onda de 525 nm, y luego llene una celda con la solucin de 100% de HEMOLISIS y calibre a
100% de
Transmitancia a la misma longitud de onda. Una vez calibrado el espectrofotmetro, se
obtiene la lectura de Transmitancia para la solucin de 0% de HEMOLISIS.

Nota.
- Los datos obtenidos servirn para realizar la curva estndar para Hemlisis de la sangre,
graficando % de Transmitancia contra % de Hemlisis.
*Posteriormente en un vaso de precipitados coloque 29.5 ml de una de las soluciones
(Oxalato de amonio, Metanol, Fructosa, Butanol, Glicerol o cido ctrico), en seguida adicione
0.5 ml de solucin STOCK, agitando suavemente y llenando una celda con la mezcla.
Ponga la celda en el espectrofotmetro calibrando de antemano y tome las lecturas cada 60
segundos hasta los 5 minutos o bien hasta obtener una lectura de 100% de Transmitancia.

Cuando haya terminado con la primera solucin problema repita el ltimo paso (*) utilizando
las soluciones problemas restantes.

Presentacin de resultados

Utilizando su curva estndar para Hemlisis, obtenga los valores equivalentes de hemlisis
de cada una de las lecturas de Transmitancia de las soluciones problema. Para cada
solucin problema realice dos grficas: a) % de Transmitancia contra % de Hemlisis. b) %
de Hemlisis contra Tiempo, presentando los valores en forma de barras.
De acuerdo a tus resultados presenta el ordenamiento de las diferentes molculas segn su
velocidad de penetracin al interior de los eritrocitos.

Cuestionario

1.- Describa en detalle la estructura de la membrana plasmtica segn el modelo actual.


Esquematcelo.
2.- Explique las caractersticas que debe presentar una molcula para que pueda atravesar
fcilmente la membrana plasmtica.
3.- Con qu finalidad se usa sangre desfibrinada en los experimentos.
4.- Si hubiramos utilizado sangre de otro animal mamfero, esperaramos los mismos
resultados? , explquelo en funcin de la permeabilidad de la membrana.

DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
PRCTICA No. 4
Accin de lisosomas

Introduccin

Las sustancias que penetran en la clula por fagocitosis o pinocitosis van a experimentar la
accin de las enzimas digestivas intracelulares, contenidas en orgnulos llamados lisosomas.
Estos orgnulos son corpsculos esfricos que miden aproximadamente 0.5 micrmetros,
estn delimitados por una unidad de membrana y contienen enzimas hidrolticas. Se han
encontrado lisosomas en todas las clulas animales y vegetales.
Los lisosomas promueven la digestin intracelular, tanto del material exgeno que penetra en
la clula por pinocitosis, como tambin el material endgeno. Este ltimo puede estar
constituido por orgnulos degenerados o por productos de desasimilacin del metabolismo
celular.

Objetivo

Que el alumno observe la funcin de los lisosomas de manera anloga en ciliados.

Material

Microscopio compuesto Porta y cubreobjetos.


Pipeta de un ml.
Mechero de Bunsen
6 tubos de ensaye 15 x 150 mm.
Gradilla.
Pinzas
Tela de asbesto.
Tripie Recipiente para bao Mara.
Pipeta Pasteur con goma.
Termmetro.
Hoja de papel aluminio.

Reactivos

Solucin de Rojo Congo al 0.4%


Material biolgico
Cultivo de levaduras de pan. (30 ml.)
Cultivo de ciliados (Paramecium spp.) por cada equipo.

Procedimiento

1.- En tres tubos de ensayo, coloque en cada uno de ellos un mililitro del cultivo de
levaduras. Un tubo se pone en el refrigerador durante 10 minutos. Otro se coloca en el bao
Mara a 30C, y el ltimo se tapa con papel aluminio y se pone en un bao Mara hirviendo
durante 10 minutos.
2.- Al trmino de la exposicin de cada temperatura, se coloca de inmediato en cada tubo 0.5
ml de rojo de Congo al 0.4%. Agite cada tubo y deje en reposo durante 5 minutos. Realice las
observaciones al microscopio de cada uno de los tubos, poniendo atencin al grado de
tincin que se presenta.
3.- En base en sus observaciones seleccione el cultivo de levaduras para cumplir mejor el
objetivo de su prctica. Coloque sobre un portaobjetos unas gotas del cultivo de levaduras
con gotas del cultivo de ciliados. Observe al microscopio y realice un esquema inicial. Siga
observando cuidadosamente hasta visualizar de manera anloga la funcin de los lisosomas
en ciliados (cambio de color).

Presentacin de resultados Presentar los siguientes esquemas:

a).- Cultivo de levaduras a 0-4C


b).- Cultivo de levaduras a 30C
c).- Cultivo de levaduras a 100C
d).- Esquema inicial del cultivo de ciliados con levaduras.
e).- Esquema final del cultivo de ciliados con levaduras.

Cuestionario
1.- Tomando en cuenta tus observaciones experimentales, Qu ocurre con las clulas de
levadura dentro de los ciliados y porque?
2.- Discuta el mecanismo que ocurre al calentar las levaduras y al agregar el colorante.
3.- Realice en esquemas, el origen y las funciones de los diversos tipos de lisosomas.

DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
PRCTICA No 7
Tejidos vegetales: Aislamiento de cloroplastos intactos

Introduccin

La clula es la unidad bsica de la vida que contiene una amplia variedad de distintos tipos
de orgnulos. Si se requiere estudiar la funcin particular de los cloroplastos u otro orgnulo
resulta de gran valor poder aislar en estado puro el orgnulo que interesa. La separacin de
un orgnulo, por lo general se hace mediante la tcnica de centrifugacin diferencial, la cual
depende del principio de que las partculas de tamao diverso se desplazan hacia el fondo
del tubo de centrifuga a diferentes velocidades cuando se les coloca en un campo
centrfugo.
Una suspensin de material de clulas rotas se somete al principio de la fuerza centrfuga
muy baja durante un corto perodo de tiempo, de modo que solo los ncleos y las clulas
ntegras se sedimentan formando un precipitado. Con fuerzas centrfugas cada vez mayores
se pueden separar los cloroplastos y las mitocondrias en suspensin, luego los microsomas y
para finalizar los ribosomas. Este ltimo paso requiere de una ultracentrfuga, la cual genera
velocidades que producen hasta 100 000 veces la fuerza de la velocidad.
Los cloroplastos cuando son aislados cuidadosamente son capaces de reducir el colorante
2,6-Diclorofenol-Indo fenol (DCPIP), lo cual debe ser medido espectrofotomtricamente
comparado con una muestra control. La reduccin se debe a que capta los electrones en
lugar del
NADPox en la parte no cclica de la fotosntesis.

Ensayar un mtodo de aislamiento de cloroplastos y observar su funcionamiento en


condiciones ptimas y con SHOCK osmtico.

Materiales y Reactivos

Lmpara con foco. Mortero y pistilo Pipeta de 10 ml.


Pipeta de un ml.

Vaso de precipitados de 100 ml. Tijeras.


6 tubos de ensaye 15mm X 150 mm. Gradilla.
Embudo. Bolsa de hielo.
Sobre de gasas. Papel milimtrico. Charola metlica.
Pipeta Pasteur con goma. Cubeta con agua destilada. 3 espectrofotmetros.
6 celdas para espectrofotmetro. Una centrfuga clnica.
6 tubos para centrfuga.
Solucin de NaCl 0.35 M en Buffer de fosfatos 0.02 M, pH 8. Solucin de DCPIP 0.3
mM.

Material biolgico
Hojas de espinacas o de acelgas ( 3 o 4 por equipo)

Procedimiento

l.- Enfri con anticipacin el mortero con hielo, agregue 20 ml de buffer salino fro y las
partes verdes de sus hojas de espinacas.
Tritrelas durante 5 minutos como mximo y en seguida filtre el homogenizado a travs de
gasa doble previamente humedecida con 10 ml de buffer salino.
ll.- El filtrado se distribuye de manera equitativa en dos tubos de ensaye y se centrifuga a
1000 rpm. Durante tres minutos (recuerde que los tubos deben tener la misma cantidad de
lquido al centrifugar por lo que hay que agregarle solucin buffer si es necesario para
igualarlos), se obtienen dos fases:
El sobrenadante: que contiene los cloroplastos en suspensin. El precipitado: que tiene
clulas intactas y ncleos.
El sobrenadante obtenido se coloca en tubos de ensaye fros. Se desecha el precipitado. Se
coloca de nuevo el sobrenadante en tubos de centrfuga y se centrifuga a 3000rpm durante 5
minutos.
Al final de este tiempo se descarta el sobrenadante y el precipitado se suspende en buffer
salino fro utilizando en total 2 ml por cada tubo.
De esta manera se tiene preparada la suspensin de cloroplastos intactos.
Para preparar la suspensin de cloroplastos con SHOCK osmtico se coloca en un tubo 1
ml de la suspensin de cloroplastos intactos y 4 ml de agua destilada.

III.- Envuelva 4 tubos de ensaye con papel aluminio, y despus se preparan los tubos de la
siguiente manera:

Tubo 1
0.5 ml de DCPIP
9.3 ml de buffer salino.
0.2 ml de la suspensin de los cloroplastos con SHOCK osmtico.

Tubo 2
0.5 ml de DCPIP.
9.3 ml de buffer salino.
0.2 ml de la suspensin de cloroplastos intactos.

Tubo 3

(ESTE TUBO NO EXPONE A LA LUZ.)

0.5 ml de DCPIP.
9.3 ml de buffer salino.
0.2 ml de la suspensin de cloroplastos intactos.

Tubo 4 (TUBO BLANCO.)


0.5 ml de DCPIP.
9.5 ml de buffer salino.
lV.- Antes de proceder a tomar las lecturas correspondientes debe agitar perfectamente bien
todos los tubos.
V.- Para calibrar el espectrofotmetro primero ajuste a 0% de absorbancia a una longitud de
onda de 450 nm, luego llene una celda con el contenido del tubo No. 4 (TUBO BLANCO) y
calibre a 0% de absorbancia a la misma longitud de onda. Una vez calibrado el
espectrofotmetro obtenga las lecturas de absorbancia a 450 nm de los tubos 1, 2 y 3 al
tiempo de 0 minutos de exposicin a la luz.

Enseguida exponga los tubos 1, 2 y 4 a la luz, colocndolos a una distancia aproximada de


15 cm del foco durante un minuto. Al trmino de este tiempo tpelos nuevamente con papel
aluminio y proceda a realizar las lecturas de absorbancia a 450 nm de los tubos 1, 2 y 3
en el espectrofotmetro ya calibrado como en el paso 4.
V1.- Repita el paso V, cuatro veces ms, es decir, los tubos son expuestos a la luz por un
tiempo total de 5 minutos, en intervalos de un minuto de exposicin.

Presentacin de resultados

1.- Presente una tabla con los datos experimentales obtenidos.


2.- Realice una grfica de absorbancia (450 nm) contra tiempo de exposicin a la luz.

Cuestionario

1.- Explique porque durante el aislamiento de cloroplastos se trabaja a bajas temperaturas y


adems porque se utiliza una solucin buffer salina.

2.- Analice en detalle los resultados obtenidos para cada tubo.

3.- Describir brevemente otra tcnica para determinar fotosntesis.

4.- Nombre la materia prima y los productos para cada fase de la fotosntesis.

DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
PRCTICA No 5
Meiosis y Mitosis

Objetivo

Aprender a diferenciar los periodos del ciclo celular.

Material

Microscopio.
Aceite de inmersin.
Acetocarmn
Metanol,
Bistur
Micropreparados que ilustran los procesos de mitosis y meiosis.

Procedimiento
1. Con ayuda de una pinza retire la capa externa marronacea o roscea y lave con
abundante agua, esto se realiza para eliminar restos de sustancias con las que
frecuentemente han sido tratadas para inhibir o retardar la germinacin de las raicillas.
2. Llene un vaso de precipitados con agua y coloque un bulbo de cebolla sujeto con dos o
tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua.
3. Pngalo a germinar a 25C o a temperatura ambiente durante 3 das, al cabo de estos
aparecern numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm. de longitud.
4. Revise diariamente y procure que la corona no se deseque para lo cual es necesario
rellenar con agua cada 24 horas.
5. Cuando las races tengan entre 0.5 y 1 cm de longitud, realice cortes de raz de
aproximadamente 2 3 mm a partir del pice.
6. Colquelas en una lmina portaobjetos. Adiciona una gota del colorante acetocarmn.
7. Coloque el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con ayuda de la punta de una
lanceta, de unos golpecitos sobre el cubre objetos sin romperlo, de modo que la raz quede
extendida.

8. Use papel absorbente para retirar el exceso de colorante realice una suave presin,
evitando que l cubre objetos resbale. Si la preparacin est bien asentada no hay peligro de
rotura por mucha presin que se realice.
9. Selle todos los bordes del cubre objetos con esmalte transparente, para evitar que se
seque y de esta manera conservar la preparacin durante varios das.
10. Coloque la preparacin al microscopio e inicie la observacin con el objetivo de 10x e
identifique las clulas.
11. Cambie al objetivo de 40X para detallar las clulas. Observe los ncleos y cromosomas
en color rosceo morado.
12. Ubique el objetivo de 100 x y escriba sus observaciones anotando las diferencias en cada
uno de los aumentos mencionados.
13. Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga clulas en interfase y
clulas en divisin y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosis.

Presentacin de resultados

Realice dibujos de todas las fases observadas.

Cuestionario
a. Qu etapas de la meiosis y mitosis observo?
b. Qu proceso se est desarrollando en las etapas observadas?
c. Qu tipo de clulas se estn observando?
d. Cuntos cromosomas poseen las clulas en mitosis?
e. Cuntos cromosomas poseen las clulas en meiosis?

DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD
PRCTICA No 6

SEPARACIN DE MEZCLAS
Tu objetivo es obtener por separado cada uno de los componentes que componen la mezcla 1. Para
ello, de los instrumentos de laboratorio que tienes frente a ti, puedes usar los que consideres
necesarios para lograr tu objetivo.
Repite el experimento una segunda vez usando el frasco que contiene la mezcla nmero 2, esta
mezcla contienen las mismas sustancias que componen la mezcla 1. De nuevo tu objetivo es separar
los componentes de la mezcla. Puedes cambiar el procedimiento si lo consideras necesario.
Finalmente, realiza una recomendacin sobre el procedimiento ms eficiente y preciso para separar
los componentes de la mezcla.
Ahora, observa cada una de los instrumentos de laboratorio que tienes frente a ti. Piensa acerca de
cmo puedes usar algunos de ellos para solucionar el problema. T no tienes porque usar todos los
instrumentos que estn sobre el mesn.
ADELANTE

PROBLEMA 1: SEPARACIN DE LA MEZCLA 1


Toma la mezcla 1 y realiza el procedimiento para separar sus componentes.
Despus de realizar el experimento, por favor responde las siguientes preguntas con tus compaeros
y enva en un archivo pdf, esta gua diligenciada. Ten en cuenta la redaccin y ortografa para
entregar el informe. Enva adems fotos o videos del cada uno de los dos problemas.
1. Qu instrumentos de laboratorio usaron para separar la mezcla del frasco 1?
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2. Cules sustancias lograron separar por completo de la mezcla inicial? (puedes seleccionar varias)
_______ Agua _______ Arena _______ Limaduras de hierro
3. Usen el platillo para pesar cada una de las sustancias que lograron separar y escriban abajo el
valor que obtuvieron.
Agua _______g. Arena

_______g. Limaduras de hierro _______g.

4. Por favor, usa este resto de hoja para escribir los pasos que seguiste para separar la mezcla 1.
Usa nicamente el espacio que necesites.

Pasos: Por favor enumera cada paso en el orden que seguiste en el experimento.
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PROBLEMA 2: SEPARACIN DE LA MEZCLA 2
En este momento, nosotros necesitamos que t encuentres otra forma de separar la mezcla 2. Ahora
toma la mezcla 2 y seprala. Despus de terminar el experimento responde las siguientes preguntas.
5. Qu instrumentos de laboratorio usaron para separar la mezcla del frasco 2?
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6. Por qu elegiste esos instrumentos? Ocurri algo en la primera separacin que les hizo decidir
utilizar ahora los nuevos instrumentos?
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7. Cules sustancias lograron separar por completo de la mezcla inicial? (puedes seleccionar varias)
_______ Agua _______ Arena _______ Limaduras de hierro
8. Usen el platillo para pesar cada una de las sustancias que lograron separar y escriban abajo el
valor que obtuvieron.
Agua _______g. Arena

_______g. Limaduras de hierro _______g.

9. Por favor, usa este resto de hoja para escribir los pasos que seguiste para separar la mezcla 1.
Usa nicamente el espacio que necesites.
Pasos: Por favor enumera cada paso en el orden que seguiste en el experimento
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PROBLEMA 3: TUS RECOMENDACIONES
Revisa los apuntes que tomaste y los instrumentos que usaste para separar las dos mezclas y
responde las siguientes preguntas:
10. Cul de los dos procedimientos que seguiste fue el ms rpido para separar los componentes de
la mezcla, basado en lo que hiciste en los problemas 1 y 2?
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11. Qu instrumentos de laboratorio t le recomendaras a tus amigos usar si ellos debieran separar
esta misma mezcla? Por qu?
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12. Si t debieras repetir esta investigacin una tercera vez, haras algo diferente?
S _____ NO _____

12a. Si s, qu haras diferente, y por qu?


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12b. Si no, por qu mantendras el procedimiento igual?
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FUENTES DE APOYO DOCUMENTAL

Prez Avila, J., Valenciaga Rodrguez, J. L., Acosta, A., Nicolau Mena, O., Turcios Trist, S.
E. & Navaroli Fernndez, F. (2012). MECANISMOS DE ACCIN HORMONAL A TRAVS
DE RECEPTORES UBICADOS EN LA MEMBRANA CELULAR.. Retrieved 11/27, 2013, from
http://www.cpicmha.sld.cu/hab/pdf/vol11_1_05/hab08105.pdf
Bruce , A., Lewis J. , Raff, M. , Roberts K.& Walter P. (2004). Biologa Molecular De La
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Un enfoque conceptual. Mxico. Editorial Mdica Panamericana.
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