TP 1 : ENZYMES DE RESTRICTION, OUTILS DE LA

BIOLOGIE MOLECULAIRE
Principe
Les enzymes de restriction sont des protines capables de coup lADN
des sites spcifique de lADN, cest enzyme reprsente le moyen de
dfense majeur des bactries contre les phages. Pour ce TP deux enzymes
de restriction en tais choisi :
Site de coupure pour lenzyme de restriction
ECOR 1
HINDIII

But
Etudier les effets de deux enzymes de restriction ECOR1 et HINDIII sur
lADN dun phage lambda en utilisant une lectrophorse sur gel
dagarose.

Mode opratoire
Prparation de la chambre dlectrophorse
Aprs la prparation du gel dagarose et la fixation du peigne sur le
plateau le gel est vers dans le plateau puis solidifi. Aprs avoir enleve
le peigne le gel plac dans la chambre dlectrophorse puits lextrmit
cathode et la solution tampon et verse enfin les puits sont remplies par
les chantillons

Prparation des chantillons

Chaque chantillon est constitu de 10l de colorant de charge et 10l
dADN vers sur un parafilm mlang et charg dans les puits.

4 puits sont chargs : 1-marqueur de taille lextrmit, 2 ADN lambda,

3-ADN lambda+HINDIII, 4- lambda+ECOR1

Interprtation
La bande dADN du phage lambda (48502 paires de bases) est une bande
assez paisse, par ailleurs, 6 fragments sont observs dus aux 5 coupures
dECOR1 sur lADN de phage lambda. Taille des fragments obtenu : 21226
; 7421 ; 5804 ; 5643 ; 4878 ; 3530, 7 fragments dus aux 6 coupures de
HindIII sur lADN de phage lambda. Taille des fragments obtenus : 23130 ;
9416 ; 6557 ; 4361 ; 2322 ; 2027 ; 564 ; 125 et 12 fragments dus aux 11
coupures de EcoRI et HindIII sur lADN de phage lambda. Taille des
fragments obtenus : 21226 ; 5148 ; 4973 ; 4268 ; 3530 ; 2027 ; 1904 ;
1584 ;1375 ; 947 ; 831 ; 564 ; 125.
Les fragments dADN sont spars par lectrophorse sur gel. Le
mouvement des fragments sera toujours vers l'lectrode positive parce
que l'ADN est une molcule charge ngativement.
Les fragments se dplacent travers le gel une vitesse qui est
dtermine par leur taille et forme, les plus petites molcules se dplaant
le plus vite.

Enzymes de
restriction
Fragment
dADN du
phage Lambda
(48502 pb)

+ECOR 1

+HINDIII

+ECOR1
+HINDIII

21226
7421
5804
5643

23130
9416
6557
4361

21226
5148-4973
4268-3530
2027-1904

4878
3530

2322
2027
564
125

1584-1375
947-831
564

Le tableau montre que lADN du phage a t fragment par les deux

enzymes a leurs sites spcifique et que lajout simultane de lenzyme
ECOR1 et HINDIII provoque la fragmentation de lADN du phage au sites
des enzymes donc 5 coupure pour ECOR1 plus 7 coupure de HINDIII se qui
fait 11 coupure des deux.