1) La grfica Fig.

2 corresponde al artculo titulado A proficient Enzyme

que esta en la carpeta de clase. Corresponde a una representacin
grfica de la ecuacin de Arrhenius para la reaccin decarboxilacin del
cido 1 metil ortico (crculos) y de la hidrlisis del dimetil fosfato
descritas en la figura 1, ambas de primer orden. Si en una reaccin si
ambos sustratos se encuentran en solucin a la misma concentracin,
del comportamiento descrito en esta grfica, que caracterstica tendra
la reaccin en relacin con el consumo de ambos sustratos, si la
reaccin se lleva a cabo a:
a)90C
b)110C y
c)130C

La grfica representa la ecuacin de Arrhenius, es decir el

logaritmo de la constante de velocidad contra el inverso de la
temperatura. La pendiente depende de la energa de
activacin para cada uno de los dos sustratos. Es evidente
que a mayor temperatura mayor velocidad de reaccin,
misma que depende linealmente de la constante,
considerando que es una reaccin de primer orden. Un hecho
particular ocurre en este sistema: dado que la influencia de la
temperatura es mayor para la decarboxilacin, las rectas se
cruzan en un punto que se ubica aproximadamente a los
110C. Por arriba de esa temperatura la velocidad de
decarboxilacin es mayor que la de hidrlisis, mientras que
por debajo de ella, es la hidrlisis la que sucede con mayor
rapidez.
En ese contexto, si en una reaccin se tienen los dos sustratos
a la misma concentracin, el consumo de los sustratos ser a
la misma velocidad a 110C, consumindose ambos en el
mismo tiempo. Por arriba de 110C la decarboxilacin termina
primero, mientras que por debajo de esa temperatura, es la
hidrlisis la que termina antes.

2. Una reaccin enzimtica que obedece el modelo de

Michaelis Menten tiene valores de k2= 2 x 102 seg -1 de k1 =
2.5 x 107 (M s)-1 y de k-1 = 10 4 seg-1 para la reaccin de la
enzima con su sustrato principal.
a) Ser una reaccin controlada por el equilibrio o se
encontrar en estado estacionario?
La respuesta se puede dar simplemente observando que la
reaccin de descomposicin del complejo ES nuevamente
hacia Enzima (E) y sustrato (S) sucede a una velocidad (k -1 =
10 4 seg-1 ) 100 veces mayor que hacia la formacin de
producto (k2= 2 x 102 seg -1 ).
Pueden tambin calcular la Km ( k-1 + k2/ k1) que resulta
igual a 4.04x10-4 M y compararla con la Ks (k-1/k1) que es
igual a 4 x 10-4 M
Todo para concluir que la reaccin estar controlada por el
equilibrio en la formacin del complejo.
b) Considera que podra mejorarse la actividad especfica de
la enzima mediante algn proyecto de ingeniera de
protenas? (justifique sus respuestas).
La respuesta puede tener diversos mbitos, pero
esencialmente todas basadas en la observacin de que la k2
es muy pequea comparada con k1, o mejor an, que la
relacin k2/Km se encuentra muy lejos de los valores que se
obtienen cuando las reacciones estn controladas por la
difusin.
c) A qu concentracin de sustrato hara el ensayo de
actividad de la enzima?
La actividad con la que se reporta y se caracteriza una enzima
se mide en la saturacin, cuando la velocidad inicial
corresponde a la mxima. Esto sucede a altas
concentraciones de sustrato, pero sealamos que una
referencia puede ser considerar 10 veces el Km cuando vi =
90.9% de Vmax

d) Si la enzima tiene un peso molecular de 10,000 Da y el

producto que Sigma ofrece como Enzima con 98% de
pureza cuenta con 600 U/mg de protena. Cumple la enzima
con la especificacin de pureza?
La enzima tiene una k2 (kcat) de
k2 = 200 mol S/mol E seg
haciendo las conversiones para tener unidad pertinentes:
k2 * (60 seg/min)* (1molg E)*( 103g /mg)
1200 mol S/min mg
Que corresponde dada la definicin de unidad (UI=
1mol/min) a:
1200 U/mg
Si el producto tiene 600 U/mg, en teora no tiene la pureza
sealada (Sigma miente), pero tambin pudo haberse
desnaturalizado y perder la mitad de la actividad.
e) Un mes despus de mantener la enzima en la mesa de
trabajo a temperatura ambiente, realiza usted un ensayo para
medir la actividad a la temperatura y pH ptimos, colocando
la concentracin de sustrato a la que decidi hacer el ensayo
(pregunta c) una concentracin de enzima de 0.1 mg/L de la
enzima de Sigma y encuentra que a los 10min de reaccin la
concentracin de producto es de 72 mg/L (la reaccin es
equimolecular y el peso molecular del producto es de 180
g/mol). Cunto vale la Vmax? Perdi actividad la enzima?
Cuanta?
La medicin de actividad, que corresponde a la Vmax
considerando que la reaccin se encuentra en velocidad inicial
es de:

Vi = Vmax = 72 mg/L / 10 min = 7.2 mg/L min

Haciendo las conversiones pertinentes:
Vmax * (1mmols/180 mgs) * ( L / 0.1 mg E) * (103mol/1mmol)
Vmax = 400 mol S/min mgE
Vmax= 400 U/mgE
Si inicialmente el producto enzimtico tena 600 U/mg, se ha
perdido un 33.3% de la actividad inicial.
f) Si un inhibidor se agrega a una concentracin de 0.1mM en
dos reacciones, una con 0.4mM y otra con 4mM, y en ambos
casos la velocidad inicial cae un 50%, De qu tipo de
inhibicin se trata y cunto vale la constante de inhibicin?
Hay una cada en la velocidad inicial debida a la presencia del
Inhibidor. Si tomamos la relacin velocidad en presencia de
inhibidor entre velocidad sin inhibicin, eso representa la
cada (el % de prdida de actividad en presencia del inhibidor
con respecto a la velocidad inicial en su ausencia), y lo que
buscamos es una relacin en la que ese porcentaje de prdida
NO dependa de cuanto sustrato usamos (el dato del problema
dice que para dos concentraciones la cada fue igual). Por
ejemplo, en la inhibicin competitiva (IC):
vi (IC) / vi = Vmax S / [S + Km (1 + I/Ki)] / Vmax S / [S +
Km]
vi (IC) / vi = [S+Km] / [S + Km (1 + I/Ki)]
Llegamos a una ecuacin en la cual vemos que la cada de
velocidad inicial por la presencia del inhibidor DEPENDE de la
concentracin de sustrato se haga la medicin.
En cambio, para la inhibicin no competitiva (InC):

vi (InC) / vi = Vmax S / [(S + Km )(1 + I/Ki)] / Vmax S / [S +

Km]
vi (InC) / vi = 1 / (1 + I/Ki) no es f(S)
La cada de velocidad (en %) no depende de cunto sustrato
se emplee en la medicin, sino solo de la cantidad de
inhibidor y la constante de inhibicin.
De ah:
0.5 = 1/ (1+ 0.1/Ki)
Ki= 0.1 mM