UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE

FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

INSTITUTO DE CIENCIA ANIMAL

EFECTO DE LEPTINA Y GHRELINA SOBRE LA FUNCIN OVRICA EN

OVEJAS TRATADAS CON UNA DIETA GLUCOGNICA

Memoria de Ttulo presentada como parte de

los requisitos para optar al TTULO DE
MDICO VETERINARIO.

CAROLINA ELIANA AVILEZ HAEGER

VALDIVIACHILE
2012

PROFESOR PATROCINANTE
Claudia Letelier V.

PROFESORES INFORMANTES
Rubn Pulido F.

Marcos Moreira E.

FECHA DE APROBACIN:

26 de Octubre del 2012

NDICE

Captulos

Pginas

1. RESUMEN 1
2. SUMMARY 2
3. INTRODUCCIN. 3
4. MATERIAL Y MTODOS 7
5. RESULTADOS.. 12
6. DISCUSIN.. 19
7. REFERENCIAS 23
8. ANEXOS... 26
9. AGRADECIMIENTOS. 27

1. RESUMEN

La alimentacin ultracorta puede ser utilizada para mejorar la actividad ovrica durante la
fase folicular, aumentando la tasa ovulatoria en ovinos. Esta consiste en una suplementacin por 4
a 6 das alrededor del tiempo de seleccin del folculo ovulatorio. El efecto inmediato generado
por el aporte de nutrientes, ha sido relacionado con una gran cantidad de energa digestible,
causando un balance energtico positivo transitorio. Este estudio fue realizado para determinar la
relacin entre ghrelina y leptina, dos hormonas antagonistas, una orexignica y la otra
anorexignica, sobre la funcin ovrica de las ovejas tratadas con una dieta glucognica ultracorta
alrededor del encaste.
Se sincronizaron 30 ovejas adultas con un protocolo corto de progesterona por 7 das (da
-2) y prostaglandina al da del retiro del dispositivo (da 4). Se asignaron al azar las ovejas al grupo
tratado (GT, n=15), que recibi por va oral 200 ml de una solucin glucognica (V/V: 100
gramos del producto comercial Glycoline en 200 ml de agua) y al grupo control (GC, n=15) que
recibi 200 ml de agua 2 veces al da por 4 das. Se obtuvieron muestras de sangre para la
determinacin de las concentraciones plasmticas de leptina y ghrelina, mediante RIA y Elisa,
respectivamente. La dinmica folicular fue monitoreada diariamente desde el primer da de aporte
glucognico (da 1) hasta el da de la presentacin de celo, mediante el uso de ecografa transrectal
y la tasa ovulatoria fue determinada 5 das posterior al estro. La tasa ovulatoria promedio en el GT
fue significativamente mayor que el GC, el cual present un 44% ms de ovulaciones dobles
(1,96+0,7 GT vs 1,36+0,5 GC, P<0,05), en cuanto al tamao del folculo ovulatorio, el estudio
retrospectivo del crecimiento de ste, mostr que al da 4, el GT presentaba un mayor tamao
(3,9+0,9 GT vs. 2,9+0,9 GC mm, P<0,05). Adems, el da 3, el grupo suplementado muestra un
alza en los folculos >4 mm (3,8+1.8 GT vs 2,5+1,6 GC mm, P<0,05) situacin que coincide con
aumentos de las concentraciones plasmticas de leptina y ghrelina respectivamente (P<0,05).
ghrelina presenta una funcin en tejidos perifricos reproductivos que podran estar estimulando
el desarrollo folicular por su accin proliferativa y antiapopttica, en cambio, leptina funciona
estimulando el eje reproductivo. Podra ser que esta relacin establecida entre estas hormonas y la
dinmica folicular generada, sea la forma de cmo el ovario censa el balance energtico,
rescatando de la atresia a ms folculos para ovular y/o estimulando una mayor tasa de seleccin.
La alimentacin focalizada con suplementos energticos por 4 das al final de la fase luteal
influy sobre la dinmica folicular, resultando en un aumento de la tasa ovulatoria y esta respuesta
estara relacionada con las concentraciones de ghrelina y leptina, adems, el da 3 de la
suplementacin parece ser clave en la relacin que se establece entre la sealizacin nutricional y
la funcin ovrica.

Palabras clave: ovejas, tasa ovulatoria, leptina, ghrelina.

El presente estudio fue financiado por el proyecto FONDECYT de Iniciacin N11090363

2. SUMMARY

EFFECT OF LEPTIN AND GHRELIN ON OVARIAN FUNCTION IN SHEEP

TREATED WITH DIET GLYCOGEN
Focus feeding may be applied for enhancement of ovarian activity during the folicular
phase, increasing the ovulation rate in sheep. In brief, supplementation for 4-6 days around the
time of preovulatory follicle selection. The immediate effect generated by the supply of
nutrients, has been to the large amounts of digestible energy, causing a transient positive energy
balance. This study was conducted to determine the relationship between ghrelin and leptin, two
antagonists hormones, one orexigenic and anorexigenic another, on ovarian function in sheep
treated with short-term nutritional supplementation about mating.
Oestrus cycle was synchronized in 30 ewes using progesterone sponges for 7 days (Day 2) and cloprostenol on removal device (day 4). Half of the animals were treated from day 1 to 4
by the oral administration, twice daily, of 200 ml of glucogenic mixture (GT, n = 15); the control
group received 200 ml water (GC, n = 15). The effect of treatment on plasma leptin and ghrelin
levels was assessed, from days 1 to 5, in blood samples taken from the jugular vein every 24h,
coincidentally with the oral treatment (T0). Plasma concentrations were measured with a
commercial available RIA kit and ELISA kit, respectively. Follicular dynamics were monitored
daily from the onset of the treatment (day 1) until the day of the presentation of estrous, using a
real-time B-mode scanner for transrectal ultrasonography and ovulation rate was determined 5
days after estrous. The results indicated that short-term energy inputs modify ovulation rate in
GT (1.96+0.5 vs. 1.36+0.7 in GC, P<0.05), by increasing the number of follicles able to be
selected to ovulate during the period of treatment (>4 mm in size; 3.8+1.8 GT vs. 2.5+1.6 GC at
day 3, P<0.05). After sponge withdrawal, the analysis of the individual development of ovulatory
follicles showed that the size increased during the follicular phase. In addition, on day 3, there
were significant differences between treated and non-treated groups in the patterns of follicular
development during glucogenic infusion coincides with increases concentrations leptin and
ghrelin plasma respectively (P<0.05). Ghrelin has a role in peripheral reproductive tissues that
may stimulate follicular development by its proliferative and anti-apoptotic action, instead, Leptin
stimulating the reproductive axis. Could it be that this relationship established between these
hormones and follicular dynamics generated, is the way how the ovary measured energy balance,
rescuing more follicules from atresia to ovulate and/or stimulating a higher rate of selection.
In summary, the present results indicate that a short-term nutritional supply with energyyielding substrates (glucogenic mixtures) favours follicle development and increased ovulation
rate. Such effects are mediated by the generation of transitory positive energy balance that was
related with changes in ghrelin and leptin secretion. Aditionally, on day 3 appears to be key in
establishing the relationship between nutritional signaling and ovarian function.

Keywords: sheep, ovulation rate, leptin, ghrelin.

3. INTRODUCCIN

Entre los factores ambientales que influyen sobre la reproduccin del ganado ovino, el
nivel nutricional es uno de los ms importantes y la interaccin entre estos tiene importantes
implicancias para el desempeo reproductivo de las ovejas (Scaramuzzi y col 2006). Por esto la
suplementacin estratgica se est utilizando cada vez ms, como herramienta para manipular la
tasa ovulatoria, la cual es de bajo costo y de esta manera se evita el uso de productos qumicos y
hormonas en las hembras ovinas, cumpliendo con las nuevas tendencias del mercado, que exigen
que el producto sea limpio, ecolgico y tico (Martin y col 2004, King y col 2010). Estudios
actuales se basan en establecer y estudiar diferentes fuentes de alimentos y el efecto que tendran
sobre la tasa ovulatoria, creando as una nueva herramienta para los productores ovinos, ya que
tendran la posibilidad de mejorar la prolificidad de sus rebaos y por consecuente su sistema, a
menor costo y de manera inmediata.
3.1. AUMENTO
NUTRICIONAL

DE

LA

TASA

OVULATORIA

MEDIANTE

MANEJO

Hace 20 aos se describieron numerosos factores ambientales y fisiolgicos que podan

influir en la tasa ovulatoria en las ovejas, entre los que se destac el efecto de la nutricin. En la
actualidad se ha observado que las poblaciones foliculares son muy sensibles a la entrada de
nutrientes, donde la foliculognesis y la tasa ovulatoria pueden ser fcilmente incrementadas con
manipulacin nutricional, esto se ve demostrado por experimentos donde se utilizaron alimentos
principalmente altos en energa, y en los cuales se observaba un aumento en la tasa ovulatoria
producto de esta suplementacin por periodos cortos de alimentacin (Scaramuzzi y col 2006).
Con respecto al efecto de la nutricin sobre la tasa ovulatoria, Scaramuzzi y col (2006)
clasifica y caracteriza en tres las formas de estmulo: dinmico, esttico e inmediato. Estas
influencias actan por diferentes mecanismos, el efecto "dinmico" opera a travs de un mayor
plano nutricional, produciendo un aumento no tan evidente del peso vivo durante algunas
semanas antes del encaste, pero si produce un aumento en la condicin corporal. Este efecto es
muy utilizado en producciones ovinas y es conocido como Flushing. El efecto "esttico" se
desarrolla durante un periodo mayor de tiempo antes del encaste, cuando las ovejas se encuentran
en recuperacin y se obtienen aumentos evidentes de peso vivo y condicin corporal y el efecto
"inmediato" de la nutricin, no se observan cambios que puedan ser detectables en el peso vivo o
condicin corporal de las hembras tratadas (Letelier y col 2008b), ya que se suplementa por un
corto periodo de tiempo y opera a travs de una mayor alimentacin por un periodo no superior
de 4-6 das (Scaramuzzi y col 2006). Este tipo de alimentacin a corto plazo preferentemente se
dirige a un periodo crtico de la fase ltea del ciclo estral, en donde los experimentos se enfocan
en dos etapas especficas del ciclo estral de la oveja, entre los das 10 - 14 del ciclo estral, o 6 das
antes de la lutelisis (Violes y col 2005).

El efecto inmediato (Sacaramuzzi y col 2006) o tambin llamado alimentacin

focalizada (AF, Baumert 2011) fue descrito por primera vez en un experimento realizado en los
aos 80 donde se utiliz grano de lupino. A partir de entonces, se han reportado numerosos
estudios en los que se observaron los efectos del balance energtico positivo a corto plazo con
alimentos altamente energticos, en los que se utiliz adems de grano de lupino (MuozGutirrez y col 2002, Muoz-Gutirrez y col 2004, Letelier y col 2008b), grano de maz (Letelier y
col 2008a), infusin de nutrientes, como aminocidos y glucosa (Muoz-Gutirrez y col 2002,
Muoz-Gutirrez y col 2004, Letelier y col 2008b). Los resultados que se obtuvieron en estos
estudios en el momento de la seleccin del folculo preovulatorio, fueron que las tasas de
ovulacin aumentaron (Letelier y col 2008b, King y col 2010), pero esta respuesta es variable.
Otras alternativas de alimentacin que se han proporcionado son suplementacin con otros tipos
de alimentos, como alfalfa (Medicago sativa) y achicorias (Cichorium chicorum) que son suplementos
de buena calidad, donde se observ un aumento en el nmero de ovulaciones dobles en
comparacin con ovejas con pastoreo en gramneas, pero no aumentando la tasa ovulatoria (King
y col 2010).
3.2. SEALES METABLICAS ASOCIADAS A LA HOMEOSTASIS ENERGTICA
Una forma de revisar la relacin entre la nutricin y la reproduccin, es conocer las seales
metablicas asociadas y si stas actan por un mecanismo nico o influenciado por mltiples vas.
Es por esto que se ha observado en diversos estudios la accin de hormonas metablicas y flujos
nutricionales, que seran parte integral para la utilizacin de los nutrientes y la mantencin de la
homeostasis. Muchos de los sistemas hormonales que responden a la suplementacin nutricional
tambin afectan la foliculognesis, es por esto que varios investigadores se han enfocado en
desentraar los mecanismos por los cuales el nivel nutricional afecta al folculo. Es as como se ha
observado, que el balance energtico positivo altera las concentraciones sanguneas de varias
hormonas metablicas como leptina, insulina (Letelier y col 2008a), IGF-1 (Factor de crecimiento
insulnico 1, Scaramuzzi y col 2006), 3-hidroxibutirato (Letelier y col 2008a), ghrelina (Letelier y
col 2008b), entre otros.
3.2.1 Ghrelina y sus funciones asociadas a la reproduccin
Ghrelina, es la hormona ms potente conocida con funcin orexignica y adipognica,
encargada de aumentar el apetito y de regular la homeostasis energtica (Sugino y col 2002, Van
der Lely y col 2004). Es un pptido producido principalmente por el estmago y en menor
cantidad por intestino, pncreas, riones, sistema inmunitario, placenta, testculos, glndula
pituitaria, pulmn e hipotlamo (Barreiro y col 2004, Van der Lely y col 2004, Du y col 2009),
entre otros, por tanto, el receptor de ghrelina (GHS-R) se concentra tanto en el eje hipotlamo
hipfisis, como en tejidos centrales y perifricos, donde genera una accin local. La funcin ms
importante que posee ghrelina es la accin liberadora de la hormona del crecimiento (GH), pero
se describen numerosas actividades biolgicas en otras partes del organismo, como son en los ejes
lactotropo, corticotropo y gonadotropo, estimulacin de la actividad gstrica, control del balance
energtico y el metabolismo de lpidos y glcidos, entre otros (Van der Lely y col 2004). Los

niveles sanguneos de mRNA y de ghrelina se incrementan por la privacin de alimentos y

parecen ser disminuido despus de la ingestin (Sugino y col 2002, Van der Lely y col 2004).
Entre los determinantes de la secrecin de ghrelina, los ms importantes seran insulina, glucosa, y
somatostatina, GH, leptina, melatonina, hormonas tiroideas, el glucagn y se describe al sistema
nervioso parasimptico jugando un papel en el metabolismo de la ghrelina. (Van der Lely y col
2004).
Los experimentos realizados sugieren que ghrelina podra actuar como modulador de las
funciones reproductivas tanto en machos como en hembras, mostrando que es capaz de ejercer
una accin en diferentes niveles del eje hipotlamo-hipfisis-gnada (Dupont y col 2010). En
animales mamferos y no mamferos, ghrelina afecta la liberacin de gonadotropina actuando a
nivel hipotalmico como en la glndula pituitaria, adems en sta suprime la pulsatibilidad de LH
en ratas, ovejas, monos y seres humanos. Hay pruebas en ratas y humanos, en donde se observ
que ghrelina puede suprimir no slo la LH, sino tambin la secrecin de FSH en machos y
hembras (Barreiro y col 2004, Dupont y col 2010). Los efectos notificados de ghrelina en la
secrecin de LH y FSH, sugieren que este pptido tiene un papel clave en las funciones
reproductivas (Dupont y col 2010). Se describe que adems de las acciones a nivel central en las
funciones reproductivas, ghrelina podra ejercer una accin directa (paracrina o autocrina) sobre
las gnadas femeninas y masculinas ya que es sintetizada en stas. Los experimentos existentes
indican que tanto el receptor de ghrelina como ghrelina estn presentes en el ovario de
mamferos, como la oveja (Du y col 2009), rata, cerdo, humano, y no mamferos, como las aves
(Sirotkin y col 2006). En el ovario de oveja, ghrelina se expresa durante todo el ciclo estral y la
preez, donde los niveles de mRNA dependen de la etapa del ciclo, con la mxima expresin
durante el desarrollo del cuerpo lteo (CL) y la mnima expresin cuando el CL est en regresin.
Estas observaciones indican que los folculos y las clulas luteales son blancos potenciales de la
produccin sistmica o local de ghrelina (Barreiro y col 2004, Du y col 2009, Dupont y col 2010).
3.2.2 Leptina y sus funciones asociadas a la reproduccin
Leptina es una hormona encargada de suprimir el consumo o de ser anorexignica,
adems se describe como un poderoso factor de saciedad (Ahima y Osei 2004, Tena-Sempere
2007). Es notablemente similar a travs de las especies, pero se ha demostrado que posee un
dimorfismo sexual. Es sintetizada principalmente por el tejido adiposo y en menor cantidad en
epitelio gstrico, msculo esqueltico, placenta, cerebro, entre otros, lo que sugiere que poseera
una accin paracrina y autocrina en estos rganos. La expresin de leptina en el estmago es
estimulada por la alimentacin, colecistoquinina y gastrina, lo que sugiere un papel en la
regulacin del balance energtico (Ahima y Osei 2004). Las concentraciones de esta hormona
caen durante el ayuno y se incrementan durante varias horas despus de comer (Marie y col 2001,
Ahima y Osei 2004), su regulacin est dada por hormonas esteroides y la exposicin al fro,
catecolaminas y melatonina que disminuyen las concentraciones sanguneas (Ahima y Osei 2004).
La leptina estimula la sntesis y liberacin de LH y FSH (Ahima y Osei 2004) y tiene un rol
importante en el inicio de la pubertad, especialmente en hembras (Tena-Sempere 2007). Por otra
parte, estimula la sntesis de GnRH (Tena-Sempere 2007) y potencia el efecto de la insulina sobre
la liberacin de GnRH (Ahima y Osei 2004). Se sabe que las clulas foliculares se regulan

directamente por la leptina, lo que confirma la presencia de receptores para leptina en el ovario
siendo capaz de controlar el eje hipotlamo-hipfisis-gonadal en mltiples niveles (Tena-Sempere
2007). Es capaz de restaurar la funcin reproductiva en roedores y humanos privados de
alimentacin, y acelera el inicio de la maduracin sexual en ratones alimentados ad libitum despus
de nacidos. El conocimiento actual se basa principalmente sobre las asociaciones entre leptina y
las hormonas reproductivas, demostrado por la positiva y alta correlacin entre la pulsatilidad de
leptina y los niveles de LH (Ahima y Osei 2004), pero a la vez se postula que altas
concentraciones plasmticas de leptina causaran efectos inhibitorios sobre la ovulacin (TenaSempere 2007).
El estudio del posible vnculo existente entre la secrecin de ghrelina y leptina, la cual
debera comportarse diferente dependiendo del tipo de nutrientes incorporados, podra ayudar
para elucidar la sealizacin de la nutricin sobre el eje hipotlamo-hipfisis-gnada, y sobre todo,
mejorar la comprensin sobre el manejo de la funcin gonadal.
3.3. HIPTESIS
Las concentraciones de ghrelina y leptina son influenciadas por un aporte energtico
ultracorto produciendo un estmulo sobre la funcin ovrica.
3.4. OBJETIVOS
3.4.1. Objetivo general
Determinar el efecto existente entre dos hormonas antagonistas, orexignica como
ghrelina y anorexignica como leptina, sobre la funcin ovrica de las ovejas tratadas con una
suplementacin glucognica ultracorta.
3.4.2. Objetivos especficos
1) Determinar y caracterizar los efectos de la suplementacin glucognica sobre la funcin
ovrica.
2) Determinar y caracterizar los efectos de la suplementacin glucognica sobre los niveles
plasmticos de ghrelina y leptina.
3) Determinar la relacin entre estas hormonas y la respuesta ovrica.

4. MATERIAL Y MTODOS

4.1. ANIMALES
En el estudio se utilizaron 30 ovejas adultas, no preadas, de entre 3 y 5 aos de edad, de
las cuales 14 eran raza Austral (AU) y 16 raza Romney Marsh (RM) y un carnero adulto de raza
Texel. El estudio se realiz durante la estacin reproductiva de los ovinos, la cual se desarrolla
entre los meses de marzo-mayo. Se identific a todos los animales con su respectivo nmero de
arete. Al inicio del estudio se determin la condicin corporal de los animales los cuales se
encontraban entre 2,5 y 3,0 en una escala de 1-5, siendo 1, un animal caquctico y 5, un animal
muy gordo. Durante el desarrollo del experimento, las ovejas se encontraban en las dependencias
de la Unidad Ovina del Predio Experimental Santa Rosa, perteneciente a la Universidad Austral
de Chile, ubicada a 13 kilmetros al norte de Valdivia, en el sector de Cabo Blanco (39 45 5
latitud sur y 73 14 latitud oeste). A lo largo del periodo experimental, las ovejas se mantuvieron a
pastoreo en los potreros con una disponibilidad de forraje de entre 1200-1800 kg/MS/h y agua
ad libitum, mientras que durante la noche, los animales eran alojados en galpones para evitar
ataques de predadores. Todo el protocolo experimental se realiz de acuerdo a los protocolos de
cuidado de los animales establecidos por la Universidad1.
4.2. SINCRONIZACIN DE ESTROS
Antes del comienzo del estudio, las ovejas fueron ecografiadas para determinar si estaban
ciclando, revisando ambos ovarios y determinando la presencia de cuerpo lteo (CL), como es
signo de ciclicidad. Las ovejas fueron sincronizadas para inducir la presentacin de estros, a travs
de un protocolo corto de progesterona (Letelier y col 2008b), el que consisti en la insercin de un
dispositivo intravaginal impregnado con 0,3 gr de progesterona natural2 durante 7 das, el da -2
del estudio experimental. Luego al momento del retiro del dispositivo (da 4) se aplic una
inyeccin intramuscular de 125 mg de cloprostenol3 para inducir lutelisis. Doce horas posteriores
al retiro del dispositivo, las ovejas fueron llevadas junto al carnero adulto raza Texel, el cual
contaba con un arns marcador, provisto de una tiza de color, para detectar las hembras en celo,
luego de lo cual, se registraba en una planilla el da de presentacin de estro de cada oveja (Figura
1).

Fuente: www.uach.cl/direccin/investigacin/uso_animales.htm (consultado en marzo de 2012)

Easy-Breed, Nueva Zelanda
3 D-Cloprostenol, Ovulate, Drag Pharma
1
2

Figura 1. Representacin esquemtica del diseo experimental.

4.3. DISEO EXPERIMENTAL
El da 0 del diseo experimental se determin la CC de todas las ovejas para luego ser
asignadas aleatoriamente en dos grupos experimentales: al grupo control (GC) se asign 7 ovejas
AU y 8 ovejas RM las que recibieron dos veces al da durante 4 das 200 ml de agua y al grupo
tratado (GT), se asignaron 7 ovejas AU y 8 ovejas RM las que recibieron dos veces al da durante
4 das por va oral 200 ml de una solucin glucognica. El aporte glucognico consisti en una
solucin de 100 gramos del producto comercial Glycoline4 en 200 ml de agua (V/V) y la
administracin de la solucin y del agua se realiz mediante jeringas de 60 ml por va oral.
4.4. DETERMINACIN DE GHRELINA Y LEPTINA PLASMTICA
Para evaluar los efectos del tratamiento glucognico sobre las concentraciones plasmticas
de las hormonas ghrelina, biotipos acetilada (Acyl), y leptina se extrajeron muestras de sangre a
travs de puncin de la vena yugular con jeringas desechables de 5 ml y agujas hipodrmicas
desechables de 18G x 1.
Para determinar ghrelina se extrajeron muestras de sangre desde el da 3 al 5 de todas las
ovejas. Se utiliz un protocolo en el cual se extrajeron cinco muestras diarias de sangre. Durante la
maana se obtuvieron 2 muestras de sangre: la muestra 0 al momento de administrar la solucin y
la muestra 1 una hora pos administrar. Por la tarde se obtuvieron 3 muestras de sangre: la muestra
-1 una hora antes de administrar la solucin, la muestra 0 al momento de administrar la solucin y
la muestra 1 una hora despus de administrar la solucin glucognica. Para la extraccin de la
protena, la sangre se deposit en tubos con 500 l de EDTA mas 50 l de PHMB, luego fueron
centrifugados a 3500 rpm durante 10 minutos a 4 C, se transfirieron 2 ml del sobrenadante a otro

Glycoline, ACQ Nutrition, Espaa

tubo al que se adicionaron 200 l de HCl1N, y se centrifugaron a 3500 rpm durante 5 minutos a
4 C. El sobrenadante obtenido se separ en tubos eppendorf de 1,5 ml y se almacen a -20 C
hasta su anlisis.
Para la determinacin de las concentraciones plasmticas de ghrelina Acyl se utiliz el
sistema de enzima-inmuno anlisis5, el cual est basado en la tcnica del doble anticuerpo, en
donde el pocillo est recubierto por un anticuerpo monoclonal especfico para la parte C-terminal
de ghrelina, luego se dispensa en el pocillo AChE conjugado el cual reconoce la parte N-terminal.
Se dispensa el reactivo el cual forma un compuesto de color, se incuba por 20 horas a 4 C, se
lava y se vuelve a incubar 30 minutos a temperatura ambiente en una habitacin oscura. La
intensidad del color, es determinado por el espectrofotmetro6 a una longitud de onda de 405 nm,
el cual es proporcional a la cantidad de ghrelina Acyl presente, el resultado obtenido de las
muestras problemas fue entregado en pg/ml. De igual forma se realiz una curva de calibracin
con soluciones estndar de ghrelina.
Para determinar hormona leptina, se obtuvieron muestras de sangre una vez al da durante
los das 1 al 5. La sangre se deposit en tubos con heparina, los cuales fueron centrifugados a
1500 rpm durante 15 minutos. El plasma obtenido se separ en tubos eppendorf de 1,5 ml y se
almacen a -20 C hasta su anlisis.
Para la determinacin de las concentraciones plasmticas de leptina se utiliz el sistema
radioinmuno ensayo7, el cual ha sido desarrollado para cuantificar leptina en plasma o suero de
distintos animales. Se debieron marcar 250 tubos, de los cuales 227 tubos se utilizaron para las
muestras problemas. El procedimiento consisti en tres das. El primer da se pipetearon 300 l
de tampn de ensayo en los tubos 3 y 4 con un ligado inespecfico (NSB), 200 l en los tubos 5 y
6 para referencia (B0), y 100 l desde el tubo 7 hasta el fin del ensayo. Luego se pipetearon 100 l
de la curva estndar y control de calidad en duplicado. Posteriormente se pipetearon 100 l de
cada muestra problema por duplicado y por ltimo se pipetearon 100 l del anticuerpo de Multiespecies leptina en todos los tubos excepto los tubos 1 y 2 y los tubos con marca no especfica 3 y
4, se cubrieron y se incubaron durante 20-24 hrs a 4 C. El segundo da se pipetearon 100 l de
125
I-Human Leptina a todos los tubos y luego se cubrieron y se incubaron durante 20-24 hrs a 4
C. El tercer da se adicion 1 ml de reactivo precipitante a todos los tubos excepto los tubos 1 y 2,
luego se incubaron durante 20 minutos a 4 C, posteriormente se centrifugaron a 3500 rpm por
20 minutos a 4 C, todos los tubos excepto 1 y 2. Se esper que decantara el sobrenadante de
todos los tubos durante 15-60 segundos y se leyeron todos los tubos en un contador gamma por
un minuto, los resultados obtenidos de las muestras problemas fueron entregadas en ng/ml.

acylated Ghrelin ELISA Kit, SPIbio, Francia

Thermo Scientific Multiskan FC, Thermo Fisher Scientific, Finlandia
7 Multi-species Leptin RIA kit, Millipore Corporation, EEUU.
5Human
6

10

4.5. EVALUACIN DEL ESTATUS OVRICO

Se realiz diariamente un examen ultrasonogrfco para determinar el efecto del
tratamiento glucognico sobre la poblacin folicular de cada oveja. En este examen se
identificaron el nmero total de folculos 2 mm de dimetro que se presentaron en ambos
ovarios durante el periodo de aporte glucognico (da 1) hasta el da de presentacin del estro (da
6). Para realizar el examen, las ovejas eran trasladadas a la manga donde se les administraba la
solucin glucognica y se obtenan las muestras de sangre, luego eran derribadas y colocadas en la
camilla metlica de sujecin utilizada para laparoscopia, debidamente acolchonada para el
bienestar animal. La identificacin de las estructuras ovricas se realiz a travs de ecografa
transrectal a tiempo real, con un ecgrafo porttil8 con una sonda lineal prosttica de 7,5 MHz.
Previo a la ultrasonografa, se removan las heces de la ampolla rectal, luego se lubricaba el
transductor con gel de contacto hidrosoluble, lo que facilita el ingreso del transductor al recto,
adems de impedir daos a la mucosa y facilitar la visualizacin de las estructuras mejorando la
transmisin de las ondas sonoras. Se introduca el transductor lentamente, se orientaba
cranealmente, ubicndose la vejiga urinaria como punto de referencia, observando la imagen
anecoica (color negro) ovalada debido al contenido lquido de sta. Cranealmente a esta estructura
anatmica se podan observar diferentes cortes, tanto transversales como longitudinales, de
cuernos uterinos y asas intestinales. Ubicando estas estructuras, el transductor se rotaba
lateralmente desde el centro de la pared abdominal, 90 en contra de las manecillas de reloj y 90 a
favor de las manecillas del reloj tratando de ubicar los ovarios e identificar sus estructuras
presentes, a travs del monitor. Es as como se diferenciaban en el monitor los folculos (imagen
redonda anecoica en relacin al estroma ovrico debido al lquido folicular presente), de los
cuerpos lteos (imagen hipoecoica homognea en relacin al estroma ovrico). En cada
observacin, cada ovario fue escaneado varias veces desde diferentes ngulos con el fin de
determinar el nmero, posicin y tamao de todos los folculos 2 mm y los cuerpos lteos.
Los tamaos de las estructuras ovricas se obtuvieron posicionando los calibradores
(calipers) electrnicos del ecgrafo, en los folculos en el lmite de la pared folicular y el estroma
ovrico y en el caso de los cuerpos lteos la imagen ecogrfica donde se observaba el mayor
dimetro era congelada y se posicionaban los calibradores entre el lmite del tejido luteal y el
estroma ovrico. Es as como todas las estructuras identificadas fueron registradas en diagramas
ovricos diariamente. En estos diagramas se registraban todos los folculos 2 mm de dimetro y
el folculo ovulatorio se calificaba por el folculo con mayor dimetro al momento de la
presentacin de celo en las hembras. Al momento de analizar los diagramas los folculos fueron
agrupados en cuatro categoras: folculos totales todos 2 mm de dimetro, folculos pequeos de
entre 23 mm de dimetro, folculos medianos de entre 45 mm de dimetro y folculos grandes
6 mm de dimetro y el folculo ovulatorio fue diferenciado en el folculo que ovul con mayor
dimetro (FO1) y el segundo que ovul (FO2).

Aloka SSD-500; Aloka Ltda, Japn.

11

4.6. ANLISIS ESTADSTICO

Los efectos de la alimentacin focalizada sobre las concentraciones plasmticas de
ghrelina y leptina, de la media de cada categora folicular, tamao promedio del folculo
ovulatorio, tiempo promedio a la presentacin del estro y la TO fueron evaluados mediante el
anlisis de comparacin de medias de ambos grupos a travs de la prueba t de Student para
muestras independientes. El programa estadstico utilizado para ello fue IBM SPSS Statistics
versin 19. Todos los resultados obtenidos se expresaron como media EE y la significacin
estadstica utilizada fue P<0,05.

12

5. RESULTADOS

5.1. EFECTOS DE LA ALIMENTACIN FOCALIZADA SOBRE LA TASA

OVULATORIA (TO)
El aporte de un suplemento altamente energtico no modific la actividad estral en las
hembras tratadas, pero si caus un significativo incremento en la tasa ovulatoria, donde el grupo
tratado present un 44% ms de ovulaciones que el grupo control (1,96+0,7 GT vs 1,36+0,5 GC,
P<0,05, Figura 2). Con respecto al nmero de ovulaciones, el GT present un 23% de
ovulaciones simples, un 62% de ovulaciones dobles y 15% de ovejas con ms de 2 ovulaciones, en
comparacin al GC que present una distribucin de 64% de ovulaciones simples y 36% de
ovulaciones dobles.
Al observar el efecto de la raza, las ovejas AU tratadas, presentaron un 60% ms de
ovulaciones multiples que las AU control (2,13+0,8 GT vs. 1,33+0,5 GC, P<0,05, Figura 2),
mientras que las ovejas RM tratadas presentaron un 21% ms de ovulaciones que las RM control
(1,7+0,5 GT vs. 1,4+0,5 GC, P<0,05), tal y como lo indica la Figura 2. Con respecto al nmero
de ovulaciones en ovejas AU que recibieron el aporte, se pudo observar un 19% de ovulaciones
simples, 56% de ovulaciones dobles y 25% ms de 2 ovulaciones, en contraste con las ovejas AU
control que presentaron un 67% de ovulaciones simples y solo un 33% de ovulaciones dobles. Al
evaluar las ovejas RM tratadas presentaron un 30% de ovulaciones simples y 70% de ovulaciones
dobles en comparacin a las ovejas RM control que presentaron un 60% de ovulaciones simples y
40% de ovulaciones dobles, pero estas diferencias no fueron significativas.

13

Figura 2. Tasa ovulatoria (X+EE) en ovejas que recibieron por 4 das alimentacin focalizada
(barra negra) y ovejas control (barra blanca). *, P<0,05.
5.2. EFECTOS DE LA ALIMENTACIN FOCALIZADA SOBRE LA DINMICA
FOLICULAR
Los folculos medianos (4-5 mm) no presentaron diferencias significativas entre los
grupos, pero se observ que desde el tercer da de suplementacin glucognica el nmero de estos
folculos fue siempre superior al grupo control, mantenindose hasta el fin del aporte glucognico
(Figura 3A). Con respecto a los folculos mayores o iguales a 4 mm de dimetro, se puede
observar que durante la suplementacin glucognica la curva es similar a la anterior, pero esta vez
las diferencias son significativas el da 3 siendo mayor en el grupo tratado comparado con las
ovejas del grupo control (3,8+1,8 GT vs 2,5+1,6 GC, P<0,05, Figura 3B).
Con respecto a la dinmica folicular generada despus del retiro del dispositivo de
progesterona, los folculos medianos si bien estn en el grupo tratado por sobre el nmero de
folculos de las control, estas diferencias no fueron significativas (Figura 3A), sin embargo, al
analizar los folculos mayores o iguales a 4 mm se observ que el da 5 el GT present un mayor
nmero de esta categora de folculos con respecto al GC (5,2+2,2 GT vs 3,8+1,2 GC , P<0,05,
Figura 3B), volviendo a valores similares en ambos grupos el da 6, alrededor de la presentacin
de celo.

14

A)

B)

Figura 3. Nmero promedio (XEE) de folculos en ovejas que recibieron durante 4 das
alimentacin focalizada (crculo negro con lnea continua) y en ovejas control (crculo blanco con
lnea punteada). Folculos (A) 4-5 mm de dimetro y (B) 4 mm de dimetro. *, P<0,05.
Al evaluar los efectos de la alimentacin focalizada sobre el o los folculos que ovularon,
se observ que al momento del retiro de dispositivo intravaginal, da -3, el 50% de los folculos
ovulatorios estaban presentes en el ovario de las ovejas tratadas, mientras que en el caso de las
ovejas control solo se encontraba el 40%. Con respecto al seguimiento del folculo hasta la fase
folicular, se puede observar que al momento del retiro del dispositivo las ovejas tratadas
presentaban un tamao mayor que las ovejas control (3,9+0,9 GT vs. 2,9+0,9 GC mm, P<0,05,
Figura 4A), el cual coincida con el ltimo da de aporte glucognico. Mientras que estas
diferencias no se encontraron al momento del celo, alcanzando el mismo tamao en ambos
grupos. Al hacer el anlisis por raza, se observ que esta diferencia solo la presentan las ovejas
tratadas de la raza AU (4,0+1,1 GT vs. 2,5+0,5 GC mm, P<0,05, Figura 4B).

15

A)

B)

C)

Figura 4. Tamao promedio (X+EE) del folculo ovulatorio con respecto al da de

comportamiento de estro, en ovejas que recibieron alimentacin focalizada (crculo negro con
lnea continua) durante 4 das y en ovejas control (crculo blanco con lnea punteada). Folculo
ovulatorio (A) de todas las ovejas, (B) de ovejas raza AU y (C) de ovejas raza RO. *, P<0,05.
Al analizar las ovejas que ovularon doble, se puede observar que la tasa de crecimiento del
FO1, durante la fase folicular, fue similar en ambos grupos (Figura 5A), lo mismo ocurre con el
FO2 (Figura 5B).

16

A)

B)

Figura 5. Dimetro promedio (X+EE) de los folculos ovulatorios durante la fase folicular
sincronizada en ovejas que recibieron alimentacin focalizada (crculo negro con lnea continua)
durante 4 das y en ovejas control (crculo blanco con lnea punteada). (A) FO1 y (B) FO2. *,
P<0,05.
5.3. EFECTOS DE LA ALIMENTACIN FOCALIZADA SOBRE EL ESTATUS
METABLICO
Las concentraciones plasmticas de ghrelina aumentaron en el grupo tratado el da 3 de la
suplementacin (17,8+0,2 GT vs. 12,8+0,0 GC pg/ml, P<0,05, Figura 6A), alcanzando valores
similares al grupo control el da 4 y 5. Con respecto a las concentraciones plasmticas de leptina,
el da 2 comienza un incremento en los valores, siendo estos significativos el da 2 y 5 (P<0,05,
Figura 6B), en cambio en grupo control present variaciones en sus concentraciones a lo largo del
estudio y siempre se encontr por debajo de las concentraciones plasmticas del grupo tratado.

17

A)

B)

Figura 6. Concentraciones plasmticas de (A) ghrelina y (B) leptina (X+EE) cada 24 horas en
ovejas que recibieron durante 4 das alimentacin focalizada (crculo negro con lnea continua) y
ovejas control (crculo blanco con lnea punteada). Barra ploma simboliza los das de aporte
glucognico. *, P<0,05.
Con respecto a las concentraciones plasmticas de ghrelina presentadas alrededor de la
ingesta, se puede observar que al momento 0, independiente si la suplementacin es AM o PM
son siempre mayores que las concentraciones encontradas pre-ingesta (-1) y post-ingesta (1). Esto
se observa claramente durante el da 3, durante las muestras de la tarde, donde todas las muestras
presentan resultados significativos (muestra 1: 9,9+0,0 GT vs 3,2+0,0 GC; muestra 0: 17,8+0,2
GT vs 12,8+0,0 GC; muestra 1: 14,0+0,0 GT vs 9,1+0,0 GC pg/ml, P<0,05, Figura 7).

18

AM

PM

AM

PM

AM

Figura 7. Concentraciones plasmticas de ghrelina (X+EE) durante 3 das (AM y PM), segn las
horas de administracin del suplemento a las ovejas tratadas (crculo negro con lnea continua) y
ovejas control (crculo blanco con lnea punteada). Muestra 0 (ingesta), muesta 1(post ingesta) y
muestra -1 (pre ingesta). *, P<0,05.
Al observar las concentraciones sanguneas de leptina segn las horas, con respecto a la
administracin del aporte glucognico, se observa que este provoc un aumento constante de las
concentraciones de leptina en el grupo tratado, presentando siempre mayores niveles que el grupo
control, siendo esta diferencia significativa a las 2 horas de la suplementacin (P<0,05, Figura 8).

Figura 8. Concentraciones plasmticas de leptina (X+EE) desde 1 hora antes hasta 2 horas
despus de la administracin del suplemento en las ovejas tratadas (crculo negro con lnea
continua) y ovejas control (crculo blanco con lnea punteada). *, P<0,05.

19

6. DISCUSIN

La suplementacin por 4 das de un aporte glucognico rico en energa, permite aumentar

la tasa ovulatoria en las ovejas tratadas similar a lo reportado por Letelier y col (2008b) alcanzando
un 44% ms de ovejas que producen ovulaciones mltiples. Este aumento en la tasa ovulatoria
fue mayor a los resultados reportados por Violes y col (2009) que si bien presenta aumentos en
este parmetro, las ovejas slo alcanzan un 14% ms de ovulaciones dobles, versus un 46% en el
trabajo de Letelier y col (2008b). Podra ser que este aumento moderado, reportado en el estudio
de Violes y col (2009), donde la suplementacin focalizada fue entregada de manera ms prctica
y asociado al pastoreo ad libitum de forrajes frescos (leguminosas), y un concentrado rico en
energa y protena, se deba a que los animales deben competir al momento de consumir el
suplemento, a diferencia de lo que ocurre en los trabajos donde las TO fueron mayores. En estos
casos los aportes suplementarios eran en base a fuentes glucognicas y la forma de entrega del
suplemento era por va oral, asegurando que todos los animales lo consuman dos veces al da,
estas variaciones podran ser parte de la causa de esta mayor o menor respuesta presentada entre
los estudios.
Al realizar un anlisis de las respuestas de los diversos trabajos con alimentacin focalizada
y como el actual estudio utiliza dos razas, una montoca (RM) y una ms prolfica (AU), es
posible apreciar que hay diferencias al estimular estas ovejas, presentand una mayor respuesta la
raza prolfica, debido probablemente a que su condicin gentica sera ms sensible a la
modulacin de la nutricin, que la raza que ovula generalmente un vulo. Al revisar los trabajos
presentados en este estudio (Downing y col 1995, Williams y col 2001, Violes 2003, Letelier y col
2008a, Letelier y col 2008b, Violes y col 2005, 2009 y 2010), slo el 25% de los trabajos logran
incidir positivamente sobre la TO, y estos incluan razas ms prolficas (Manchega), a diferencia
de los trabajos que no aumentan este parmetro (Merino y Corriedale). Pero tambin estas
diferencias en la respuesta, pueden ser relacionadas con el hecho que la tasa ovulatoria es una
variable discontinua, que estara influenciada por el estado folicular al inicio de la suplementacin
nutricional, las concentraciones plasmticas de glucosa y hormonas metablicas, los patrones
hormonales y el grupo de folculos disponibles para la accin de estas hormonas, al momento de
la suplementacin (Violes y col 2005).
El efecto inmediato de la nutricin est asociado con un incremento en la tasa ovulatoria
(Scaramuzzi y col 2006), observndose un aumento del reclutamiento de folculos o una
disminucin en la tasa de atresia de estos (Letelier y col 2008b). Esta situacin podra explicar el
aumento en la tasa ovulatoria del estudio, ya que al observar la dinmica folicular generada
durante la entrega del aporte glucognico, se observa un significativo aumento de los folculos de
ms de 4 mm de dimetro, permitiendo un aumento del pool de posibles folculos ovulatorios
(Ying y col 2011). Resultados semejantes a los reportados en este estudio fueron observados por
Baumert (2011) y Letelier y col (2008b) donde al suplementar las ovejas con una mezcla
glucognica hipercalrica, se observ un aumento en el nmero promedio de folculos mayores o

20

iguales a 4 mm de dimetro, presentndose estos aumentos desde el primer da de estmulo.

Igualmente en otro experimento realizado por Letelier y col (2008a), utilizando como suplemento
energtico maz roleado, se observ un incremento de un 60% en los folculos con mayores
posibilidades de ovular (> 4 mm), resultado mayor al aumento observado en este estudio, donde
el incremento fue de alrededor de un 30%. Al analizar la dinmica folicular durante la fase
folicular sincronizada, se obtuvieron resultados similares a los reportados por Letelier y col
(2008b), existiendo un mayor pool de folculos mayores o iguales a 4 mm de dimetro, teniendo
un mayor nmero de folculos con capacidades de ser folculos ovulatorios. En cuanto al tamao
del folculo ovulatorio al momento de la presentacin de celo, se observ que al momento de la
ovulacin, el tamao del folculo ovulatorio fue similar en ambos grupos y al separar y analizar el
crecimiento individual del FO1 y FO2, estos poseen una tasa de crecimiento similar entre los
grupos. A diferencia de lo que reporta Letelier y col (2008b), donde el FO2 presenta una mayor
tasa de crecimiento, ya que parte de una categora ms baja, pero ovula con el mismo dimetro de
FO1.
En estudios realizados en ovejas se ha demostrado, que las concentraciones plasmticas de
ghrelina aumentan transitoriamente antes de una suplementacin programada (Sugino y col 2002)
y los resultados obtenidos coinciden con los observados en este estudio, donde las mayores
concentraciones son observadas previo a la administracin del suplemento. Por lo tanto, los
resultados de este estudio y los obtenidos por Sugino y col (2002) sugieren que el aumento en la
secrecin de ghrelina no solo es debido al contacto de la mucosa gstrica con el alimento, sino
que sera un efecto producido por un reflejo fisiolgico condicionado en las ovejas tratadas, ya
que estas variaciones en las concentraciones de ghrelina no han sido observadas en ovejas
alimentadas ad libitum, lo que supondra que la ingesta de alimentos estara influenciada por la
expresin de hambre a nivel hipotalmico en los animales (Sugino y col 2002). Tambin se
describe que las concentraciones plasmticas no solo poseen una accin a nivel central, regulando
la ingesta, sino que adems, actuaran a nivel perifrico, estimulando a nivel ovrico la
proliferacin celular y disminuyendo la apoptosis celular (Sirotkin y col 2006, Dupont y col 2010).
Esta funcin perifrica, atribuida a ghrelina, explicara lo sucedido el da 3 de suplementacin, en
donde las concentraciones de ghrelina son mayores en las ovejas tratadas y las cadas producidas
pre y pos-prandial son menores al grupo control, observndose adems una correlacin positiva
entre el aumento de los folculos mayores o iguales a 4 mm de dimetro, lo que hara suponer que
estas concentraciones estaran asociadas a un efecto perifrico sobre estos folculos, produciendo
un aumento de las posibilidades de ovular de los nuevos folculos, lo cual se refleja en el aumento
de la TO presentada en este estudio. Adems, las concentraciones plasmticas de ghrelina post
ingesta en el grupo tratado caen menos brusco que el grupo control, pudiendo esto mantener el
efecto perifrico sobre las gnadas (Sugino y col 2002).
Con respecto a las variaciones en las concentraciones plasmticas de leptina, alrededor de
la ingesta, se observ que en este estudio los valores fueron similares a los reportados por Marie y
col (2001) en carneros, donde se observ que se producan aumentos post-prandiales en las
concentraciones de leptina (15-36%) de 2 a 8 horas posteriores a la entrega del alimento, situacin
que en este estudio ocurre alrededor de las 2 horas, aunque este parmetro no fue seguido en el
tiempo en el actual estudio. Sin embargo, al seguir las concentraciones plasmticas de leptina

21

durante el periodo de suplementacin energtica, se observ que aumentaba en las ovejas tratadas,
similar a lo reportado por Muoz-Gutirrez y col (2002) que observ que al suplementar con
granos de lupino, se produca un aumento en las concentraciones de leptina 24 horas posterior a
la suplementacin y que estas se mantenan por sobre el grupo control hasta pasadas las 72 horas
de estmulo, teniendo en promedio, durante los 5 das, un 20% ms que el grupo control. Violes
y col (2010), observaron que al suplementar grupos de ovejas con distinta CC (alta y baja), las
concentraciones plasmticas de leptina eran mayores en el grupo suplementado y en las ovejas que
tenan una ptima CC (alrededor de 3,0). Por tanto, estos aumentos producidos luego de la
suplementacin, podran ser influenciados por el nivel de adiposidad presente y la sensibilidad que
presentara leptina, frente a alteraciones producidas en la ingesta de alimentos por los animales
(Marie y col 2001). Como se sabe, leptina es una hormona encargada de informar el estado
metablico del organismo, actuando como una seal que regula la funcin reproductiva,
directamente a nivel hipotalmico, como lo que sucede alrededor de la pubertad (Tena-Sempere
2007), por lo cual su accin podra causar que mas folculos fueran seleccionados en la onda
ovulatoria, reforzando la opinin de que el impacto de la nutricin sobre la tasa ovulatoria
dependera de la persistencia de altas concentraciones de hormonas metablicas en el organismo
del animal (Violes y col 2010), esto se explica muy bien para el caso del efecto dinmico y
esttico de la suplementacin y la TO, pero en trabajos con alimentacin focalizada, a pesar de
que aumentaban los niveles de leptina, no siempre aumentaba la TO, a diferencia de este trabajo
que logra aumentar la leptina y la TO.
Segn los resultados obtenidos en este estudio, se observa que posiblemente el da 3 de la
suplementacin ultra corta, sera un da clave en el rescate de la atresia de los folculos con
posibilidades de ovular (> 4 mm de dimetro), ya que coinciden los aumentos de esta categora de
folculos y su relacin con altos niveles de las hormonas metablicas, ghrelina y leptina,
plantendose un efecto directo sobre el ovario, concordante con lo descrito por Scaramuzzi y col
(2006). Similares observaciones en hormonas sensadoras del metabolismo fueron realizadas por
Letelier y col (2008a), al observar las variaciones en las concentraciones plasmticas de insulina,
describi que luego del tercer da de suplementacin estas disminuan a valores normales,
plantendose que posterior a 3 das de suplementacin las hormonas sensadoras del metabolismo
lograran ser controladas de forma natural por el organismo.

22

6.1. CONCLUSIONES
Segn los resultados obtenidos en este estudio se puede concluir:
1. La suplementacin focalizada posee un efecto sobre la dinmica folicular y aumenta la tasa
ovulatoria.
2. Ghrelina y leptina influiran sobre la funcin ovrica.
3. Al analizar las concentraciones de leptina y ghrelina y la funcin ovrica, se observ que el
da 3 es un da clave para la estimulacin por parte de la suplementacin focalizada.

23

7. REFERENCIAS

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sheep during the luteal phase. Reproduction 142, 699710.

26

8. ANEXOS
Anexo 1. Resumen aceptado en el 17 Congreso Chileno de Medicina Veterinaria, Valdivia 2012.

Relacin entre las concentraciones de leptina y ghrelina y la funcin ovrica en ovejas

tratadas con una dieta glucognica*
Avilez C1, Arroyo C1, Jimnez A1, Letelier C1
1
Instituto de Ciencia Animal, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile,
Valdivia, Chile. e-mail: uach.claudialetelier@gmail.com
Introduccin. Entre los factores ambientales que influyen sobre la reproduccin, la nutricin, es
uno de los ms importantes y en el ovino, es un manejo utilizado por su impacto sobre la
prolificidad. Muchos de los sistemas hormonales que responden a la suplementacin nutricional
afectan tambin la foliculognesis. El objetivo del estudio fue establecer la relacin entre ghrelina
y leptina, dos hormonas antagonistas, una orexignica y la otra anorexignica, sobre la funcin
ovrica de las ovejas tratadas con una dieta glucognica ultracorta. Material y Mtodos. Se
utilizaron 30 ovejas adultas, que fueron sincronizadas con un protocolo corto de progesterona por
7 das (da -2) y prostaglandina al da del retiro del dispositivo (da 4). Se asignaron al azar las
ovejas al grupo tratado (GT, n=15) donde se le administraron 200 ml de una solucin glucognica
y al grupo control (GC, n=15) 200ml de agua 2 veces al da por 4 das. La mezcla glucognica fue
una solucin de 100 gramos del producto comercial Glycoline en 100ml de agua. Se obtuvieron
muestras de sangre para la determinacin de las concentraciones plasmticas de leptina y ghrelina,
mediante RIA (Multi-species Leptin RIA Kit, Millipore, EEUU) y Elisa (Human acylated
Ghrelin ELISA Kit, SPIbio, Francia), respectivamente. La dinmica folicular fue monitoreada
diariamente desde el primer da de aporte glucognico (da 1) hasta el da de la presentacin de
celo mediante el uso de ecografa transrectal (Aloka SSD-500, con sonda de 7,5 MHz) y la tasa
ovulatoria fue medida 5 das posterior al estro (N cuerpos lteos/oveja). Resultados y
Discusin. La tasa ovulatoria promedio en el GT fue significativamente mayor que el GC, el cual
present un 44% ms de ovulaciones dobles (1,96+0,7 GT vs 1,36+0,5 GC, P<0,05), en cuanto al
tamao del folculo ovulatorio, el estudio retrospectivo del crecimiento de este, mostr que el
ltimo da de estmulo (da 4) el GT present un mayor tamao de este (3,9+0,9 GT vs. 2,9+0,9
GC, P<0,05). El da 3, el grupo suplementado muestra una alza en los folculos >4mm de
dimetro (3,8+1.8 GT vs 2,5+1,6 GC, P<0,05). Las concentraciones plasmticas de leptina en el
GT fueron mayores desde el da 2 al 5, siendo estas significativas los das 3 y 5 (P<0,05). Las
concentraciones de ghrelina en cambio, fueron superiores el da 3 en el GT (17,8+0,1 GT vs.
12,8+0,1 pg/ml GC, P<0,05), coincidiendo con el alza de los folculos con mayores posibilidades
de ovular (>4mm, P<0,05) y se observa una correlacin entre ghrelina y esta categora de
folculos. Ghrelina puede suprimir, no solo la LH, sino tambin, la FSH, en cambio, leptina
funciona estimulando el eje. Podra ser que la relacin entre estas hormonas sea la forma de sensar
el balance energtico y rescatar de la atresia a ms folculos para ovular. Conclusiones. La
alimentacin focalizada con suplementos energticos por 4 das al final de la fase luteal influye
sobre la dinmica folicular, resultando en un aumento en tasa ovulatoria y esta respuesta estara
relacionada con los niveles de dos hormonas sensadoras del balance energtico como son ghrelina
y leptina.
*Agradecimientos: Proyecto Fondecyt de Iniciacin N 11090363.

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9. AGRADECIMIENTOS

Quisiera agradecerle especialmente a mi mamita, que ha sido un pilar fundamental en mi

vida, gracias por tu apoyo incondicional en todo lo que he querido hacer y por apoyarme en todo
sin reclamos, por estar siempre ah cuando te necesit, sin importar la distancia entre las dos. A mi
tata y mi mami ocha, ya que sin ustedes y sus enseanzas no hubiera estado contando esta historia
hoy. Tambin a mi ta Ana y Felipe quienes siempre han estado a mi lado apoyndome en los
momentos difciles. Sin ustedes, que son mis pilares fundamentales, sin su apoyo y sus consejos
no lo hubiera logrado, as que muchsimas gracias por todo! Y los amo demasiado!.
Por su puesto agradecer a mi profesora patrocinante Dra. Claudia Letelier, gracias por su
paciencia, por la confianza entregada y por ayudarme a realizar este lindo trabajo.
Por ltimo, pero no menos importante, agradecer a todas las personas que me ayudaron a
realizar este trabajo a Carolina Arroyo, Francois Codjambassis, Don Omer y Angela Jimnez,
muchas gracias por todo ya que sin su apoyo y ayuda no hubiera podido realizar este trabajo.