Espectroscopa RAMAN

El fsico hind C. Raman en 1928 descubri que la longitud de onda visible

de un fraccin de radiacin dispersada por algunas molculas es diferente
a la del haz que incide y los desplazamientos de la longitud de onda
dependen de la estructura qumica de las molculas causantes de la
dispersin, por ello, Raman obtuvo el premio Novel de Fsica.
Teora De La Espectroscopa Raman
Los espectros Raman se observan al irradiar una muestra con una fuente
potente de rayos lser de radiacin monocromtica difundida en la regin
visible o infrarrojo cercano, por lo que se pueden utilizar celdas de vidrio o
de cuarzo y emplear el agua es el solvente ms utilizado. El espectro de
radiacin se registra a 90 grados por lo general y las intensidades de las
lneas son cuando mucho 0.001 % de la intensidad de la fuente. y que
debido a las seales en la regin visible o infrarrojo cercano. Para evitar la
fluorescencia, las longitud de onda de la excitacin se eliminan de una
banda de absorcin del analto. La tcnica Raman es complementaria a la
tcnica de IR.
Excitacin De Los Espectros Raman
Una muestra se puede irradiar con un haz monocromtico de energa
h v ex
, pueden suceder distintos fenmenos, que se representan en sus
espectros obtenidos. Cuando la la longitud de onda de la excitacin est
muy lejos de la banda de absorcin, se afecta un estado virtual del nivel
energtico j. Se denomina difusin de Stokes cuando la radiacin
difundida es de frecuencia ms baja que la radiacin de excitacin. La
radiacin difundida de una forma inelstica con frecuencia ms alta que la
fuente, donde las molculas se encuentran en un estado vibracionalmente
excitado (v=1), se denomina Anti-Stokes. Si no hay cambio en la energa
de la luz incidente y la frecuencia es la misma que la de la fuente, se trata
de una difusin de Rayleigh.
La fluorescencia podra interferir de forma relevante en la observacin de
los desplazamientos Stokes, pero no as en los anti-Stokes. Por ello, en
muestras fluorescentes las seales Anti- Stokes en ocasiones son ms
tiles, a pesar de su menor intensidad. La magnitud de los
desplazamientos Raman es independiente de la longitud de onda de
excitacin.
En el espectro Raman, el eje x, es el desplazamiento del nmero de onda
(cm-1) entre la radiacin observada y la radiacin de la fuente. Las lneas
Anti-Stokes son menos intensas que las lneas Stokes, as que slo se usa
la parte Stokes de un espectro.
En apariencia, los desplazamientos de Stokes y Raman de energas
inferiores (longitudes de onda ms largas) son similares a los
desplazamientos de Stokes que se presentan en la fluorescencia
molecular. Sin embargo, los espectros de ambos Raman y fluorescencia se
producen a partir de procesos en esencia distintos.

Mecanismos de la difusin de Raman y de Rayleigh

En la espectroscopa Raman, la excitacin espectral se realiza
habitualmente con radiacin cuya longitud de onda est muy alejada de la
longitud de onda de las bandas de absorcin del analito. El aumento de
h ex .
energa es igual a la energa del fotn
Es importante saber que el
proceso que se indica no est cuantizado, por ello, en funcin de la
frecuencia de la radiacin de la fuente, la energa de la molcula puede
tomar valores infinitos o estados virtuales entre el estado fundamental y
el primer estado electrnico excitado, que es el ms bajo. Las colisiones
que tienen lugar entre el fotn y la molcula son elsticas. Como el
fenmeno ms probable es la transferencia de energa a molculas en el
estado fundamental y la reemisin al retornar stas al estado
fundamental, es mucho ms probable que ocurra la difusin de Rayleigh
que la dispersin Raman. La relacin entre las intensidades anti-stokes y
Stokes aumenta con la temperatura debido a que en estas circunstancias,
es mayor la fraccin de molculas que est en el primer estado
vibracional excitado.
Modelo ondulatorio de la difusin de Raman y de Rayleigh
Considerando que un haz de radiacin con una frecuencia
sobre una solucin de un analito, el campo elctrico

v ex

incide

de esta radiacin

se puede representar mediante la ecuacin:

2 v
( ex t )
E=E 0 cos

Cuando el campo elctrico de la radiacin interacta con la nube

electrnica de un enlace del analito, se induce un momento dipolar m en
el enlace, que viene dado por:
2 v
( ex t)
m=E= E0 cos

( r )

= 0+ ( rr eq )

La polarizabilidad

mide la deformabilidad del enlace cuando se

encuentra en un campo elctrico, la polarizabilidad 0 del enlace a una

distancia internuclear de equilibrio y r la separacin internuclear vara en
funcin de la distancia entre los ncleos de acuerdo con la ecuacin:
El cambio en la separacin internuclear vara con la frecuencia de la
vv
vibracin
y se observa con la ecuacin:

2 v
( v t)
rr eq=r m cos
La relacin de las dos ecuaciones anteriores queda:
2 v
( v t)

= 0+
r cos
r m

( )

De donde se obtiene una expresin para el momento dipolar

m :

2 v
( ex t)+ E0 r m

( r )cos (2 v t )cos (2 v t )
v

m= 0 E 0 cos
cosx cos y= [ cos ( x+ y ) +cos ( x y ) ] /2
2 v
E0
E

( ex t)+ r m
cos [ 2 ( v ex v v ) t ] + 0 r m
cos [ 2 ( v ex + v v ) t ]
2
r
2
r
m= 0 E0 cos

( )

( )

Se modula la frecuencia de excitacin con la frecuencia vibracional del

enlace.
La difusin Raman requiere que la polarizacin vare durante la vibracin.
La ltima ecuacin debe ser mayor que cero para que la lneas Raman se
puedan observar.
La absorcin en el infrarrojo requiere que haya un cambio en el momento
dipolar o en la distribucin de carga durante la vibracin. En la forma
distorsionada la molcula est temporalmente polarizada, esto es,
produce de forma momentnea un dipolo inducido.
En lo que se refiere a molculas con un centro de simetra, ninguna
transicin activa en el infrarrojo tiene algo en comn con las transiciones
activas en Raman. A menudo, esto se conoce como principio de exclusin
mutua.
Intensidades de las bandas Raman normales
La polarizabilidad de la mlecula, de la intensidad de la fuente y de la
concentracin del grupo activo entre otros factores produce la intensidad
o potencia de una banda Raman normal. La potencia de la emisin de
Raman aumenta con la cuarta potencia de la frecuencia de la fuente si no

hay absorcin; sta se puede utilizar debido a que es posible de que la

radiacin ultravioleta origine fotodescomposicin del analito.
Relaciones de despolarizacin Raman
La espectroscopia Raman proporciona la relacin de despolarizacin que
permite determinar las estructuras moleculares. La polarizabilidad es la
propiedad molecular que determina la deformacin de un enlace y la
polarizacin es una propiedad del haz de radiacin que describe el plano
en el que vibra la radiacin.
En el espectro Raman a incidir un laser en un plano se observa la
radiacin dispersada en diferentes direcciones dependiendo del tipo de
vibracin, una parte se polariza en forma paralela al haz original. El resto
del haz disperso se polariza en direccin xy, perpendicular a ste. La
intensidad de esta radiacin se indica por .
La relacin de despolarizacin depende de la simetra de las vibraciones
causantes de la difusin, su valor es de 0.005, siendo mnima. Vibraciones
no simtricas presentan relaciones de despolarizacin de casi 0.75. La
despolarizacin mxima para las vibraciones no simtricas es de 6/7 y
para las vibraciones simtricas la relacin es siempre menor a este valor.
Instrumentos
Los instrumentos para la espectroscopa Raman moderna constan de una
fuente de lser, un sistema de iluminacin de la muestra y un
espectrmetro apropiado.
Fuentes
Las fuentes utilizadas en la espectrometra Raman son casi siempre rayos
lser porque su alta intensidad se requiere para producir difusin Raman
intensa para medir con una relacin seal-ruido razonable. Como la
intensidad de la dispersin Raman vara con la cuarta potencia de la
frecuencia, las fuentes de ion argn y criptn, que emiten en la regin
azul y verde del espectro, tienen esta ventaja sobre las otras fuentes. Sin
embargo, las fuentes de longitud de onda corta tienen la capacidad de
producir fluorescencia importante, y fotodescomposicin de la muestra.
Se debe seleccionar cuidadosamente una longitud de onda de excitacin
en la espectrometra Raman, puesto que no slo la fotodescomposicin y
la fluorescencia representan problemas, sino que las muestras con color y
algunos solventes son capaces de absorber la radiacin Raman incidente
o dispersada. Por lo tanto, se requiere ms de una fuente o varias fuentes
de longitudes de onda mltiples.
Sistemas de iluminacin de la muestra
Se puede utilizar vidrio, los lentes y otros componentes pticos. Se puede
enfocar directamente el lser y analizar muestras muy pequeas.
Muestras gaseosas

Los gases estn contenidos en recipientes de vidrio o tubos capilares y

sellados. En el caso de dispersores dbiles se usa un aparato externo de
pasos multiples con espejos.
Muestras lquidas
Los lquidos se pueden contener en ampollas, recipientes de vidrio o tubos
capilares y sellados. El rayo lser se enfoca en una zona cercana a la
pared para reducir al mnimo la absorcin del rayo incidente.
Muestras slidas
Las muestras slidas se trabajan al llenar una pequea cavidad o capilar
con la muestra fina pulverizada. Los polmeros se examinan sin
tratamiento previo.
Muestreo con fibra ptica
La espectrometra Raman utiliza radiacin visible o infrarroja cercana la
cual puede transmitirse a travs de una distancia considerable (100 m o
ms) por medio de fibra ptica. Estas fibras llevan la radiacin de
excitacin a la muestra y pueden estar sumergidas en muestras lquidas o
utilizarse para iluminar slidos. Las sondas de fibra ptica han
demostrado ser muy tiles para obtener espectros Raman en lugares
alejados del sitio donde se halla la muestra.
Microsondas Raman
La microsonda Raman es un accesorio de gran aceptacin para los
espectrmetros. En stos, la muestra se coloca en el portaobjetos de un
microscopio donde se le ilumina con luz visible. Despus de seleccionar la
regin que se desea analizar, se ajustar el foco, la lmpara de iluminacin
se desactiva y el rayo lser de excitacin se dirige hacia la muestra. Con
los equipos pticos modernos, la microsonda Raman puede conseguir
espectros de alta calidad sin preparacin de la muestra, en cantidades de
picogramos y con una resolucin espacial de 1 m.
Espectrmetros Raman
En la actualidad, la mayora de los espectrmetros Raman que se
comercializan son instrumentos de transformada de Fourier con
transductores de germanio enfriados o instrumentos multicanal con
dispositivos de acoplamiento de carga. En la espectroscopa Raman se
requiere un dispositivo de alta calidad para seleccionar la longitud de
onda con el fin de separar las lneas Raman, relativamente dbiles, de la
intensa radiacin difundida de Rayleigh.
Dispositivos y transductores para seleccionar la longitud de onda
En la espectroscopa Raman se requiere un dispositivo de alta calidad
para seleccionar la longitud de onda con el fin de separar las lneas
Raman, relativamente dbiles, de la intensa radiacin difundida de
Rayleigh. La mayora de los instrumentos dispersivos comerciales se
puede encontrar la combinacin de un filtro de muesca y un
monocromador de red de alta calidad. Los fotodiodos en serie fueron el

primer detector que se utiliz; facilitan la recoleccin simultnea de

espectros de Raman completos. Los fotodiodos en serie se usan junto con
un intensificador de imgenes para amplificar la dbil seal Raman. En
tiempo reciente, los dispositivos de transferencia de carga, como los
dispositivos de acoplamiento de carga y de inyeccin de carga, se han
utilizado en los espectrmetros Raman. El dispositivo de acoplamiento de
carga puede ser bidimensional o, en algunos casos, lineal.
Espectros Raman de especies inorgnicas
La tcnica Raman es superior a la espectroscopa de infrarrojo para la
investigacin de sistemas inorgnicos, debido a que se pueden utilizar
soluciones acuosas. Adems, las energas de vibracin de los enlaces
metal-ligando se encuentran por lo general entre 100 y 700 cm-1 , una
regin del infrarrojo que es difcil de estudiar experimentalmente.
Estas vibraciones son a menudo activas en Raman, y las lneas con
valores v en este intervalo se observan con facilidad. Los estudios
Raman son fuentes de informacin potencialmente tiles respecto a la
composicin, estructura y estabilidad de los compuestos de coordinacin.
Espectros Raman de especies orgnicas
Los espectros Raman proporcionan ms informacin acerca de ciertos
tipos de compuestos orgnicos que los correspondientes espectros de
infrarrojo.
Aplicaciones biolgicas de la Epectroscopa Raman
Esta tcnica es muy utilizada en sistemas biolgicos, ya que requiere
tamaos de muestra pequeos, el agua interfiere poco en el espectro, los
detalles y la sensibilidad son las grandes ventajas de esta tcnica.
Aplicaciones Cuantitativas
La microsonda Raman se usa en la determinacin de analitos en clulas
bacterianas aisladas, componentes en partculas individuales de humo y
cenizas en suspensin, y especies en incrustaciones microscpicas en
minerales. Esto resulta en una imagen de las regiones sobre una
superficie en las que est presente un enlace particular o un grupo
funcional.
Espectroscopa Raman de resonancia
Hace referencia a un fenmeno en el cual las intensidades de las lneas
Raman son realzadas en gran manera al excitarlas con longitudes de onda
que se aproximan mucho a la banda de absorcin electrnica de un
analito. La dispersin Raman de resonancia se diferencia de la
fluorescencia porque la relajacin al estado fundamental no est
precedida de una relajacin hacia el nivel vibracional ms bajo del estado
electrnico excitado. La intensidad de las lneas en un experimento
Raman de resonancia aumenta con rapidez cuando la longitud de onda de
excitacin se aproxima a la longitud de onda de la banda de absorcin
electrnica. Por consiguiente, se necesita un lser sintonizable para

conseguir el mayor incremento de seal en un intervalo ancho de

mximos de absorcin.
Al excitar las muestras con longitudes de onda que se aproximan a su
banda de absorcin electrnica, se presenta el fenmeno de Raman de
resonancia. Las lneas asociadas con las vibraciones, aumentan en
magnitud, de 102 a 106. En el caso de la resonancia Raman, el electrn
excitado se relaja de inmediato a un nivel de vibracin del estado
electrnico fundamental al ceder un fotn de Stokes. Con Raman de
resonancia,
se
estudian
molculas
biolgicas
en
condiciones
fisiolgicamente importantes. En Raman de resonancia es casi
instantnea, y las bandas espectrales son muy angostas.
Espectroscopa Raman de superficie aumentada
La espectroscopa Raman de superficie aumentada supone la obtencin
de espectros Raman, a la manera usual, de muestras que se adsorben
sobre la superficie de partculas metlicas coloidales, casi siempre plata,
oro o cobre; o bien, sobre superficies rugosas de trozos de estos metales.
Se han utilizado varias tcnicas para la manipulacin de la muestra en la
espectroscopa de superficie aumentada.
Espectroscopa Raman no lineal
Se le llama as a la tcnica Raman que depende de la polarizacin
inducida por intensidades de campo de segundo orden y de rdenes
superiores. Otros mtodos que se pueden mencionar son dispersin
Raman estimulada, efecto hiperRaman, ganancia Raman estimulada,
espectroscopa Raman inversa, espectroscopa Raman anti-stokes
coherente y espectroscopa Raman Stokes coherente. El ms utilizado de
estos mtodos es la espectroscopa Raman anti-stokes coherente. Las
tcnicas no lineales se utilizan para superar algunos de los inconvenientes
de la espectroscopa Raman ordinaria, entre ellos, su baja eficiencia, su
limitacin a las regiones visible y del ultravioleta cercano, as como su
susceptibilidad a la interferencia de la fluorescencia.