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Instituto de Capacitacin Profesional

Ingeniera Agrcola

INFORME DE LABORATORIO N2
Mtodo de tincin Gram

Integrantes:
Rodrigo Olivares Lagos
lvaro Santos Ulloa
lvaro Roberto Salgado Suarez
Leo Weinberg

Docente: Mara Anglica Bayer

26 agosto 2016

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INTRODUCCIN
En este informe se dar a conocer la informacin recopilada en el laboratorio que se realiz el da viernes
26 de agosto, aqu se llevaron a cabo dos actividades en relacin a la observacin de bacterias, ocupando
diversas herramientas, que sern especificadas a lo largo del informe.
En relacin a la estructura de este trabajo, se encontrara un marco terico, el cual describe las
bases de un serie de conceptos, que se debieron manejar para la realizacin de la actividad llevada a cabo
en el taller de laboratorio, las cuales a su vez, paso a paso se darn a conocer por medio de fotos del
proceso y de los resultados obtenido en los mismos, dentro de la etapa del desarrollo del escrito.
Siendo parte de la estructura, destaca la presentacin de las actividades llevadas a cabo, la
descripcin de los Materiales utilizados.
Se debe tener en cuenta que la realizacin de estas actividades posee una estrecha relacin con la
observacin de bacterias en una siembra bacteriolgica, permitiendo as un segundo acercamiento al
laboratorio de microbiologa.

OBJETIVO GENERAL
Mostrar la importancia de una tincin para la diferenciacin de bacterias basndose en las
propiedades estructurales de la pared celular, aplicando el mecanismo de la coloracin de Gram, con
microorganismos conocidos y desconocidos.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
-

Reconocer normas de seguridad dentro del laboratorio de microbiologa.

Respetar las normas de seguridad de un laboratorio.
Mantener la higiene en un procedimiento en el laboratorio.
Identificar las etapas del proceso en la realizacin de un experimento.
Observar bacterias en una siembra bacteriolgica.

MARCO TERICO

El trabajo en un laboratorio sin duda requiere de mucha rigurosidad y una serie de reglas que cumplir,
pretendiendo que el trabajo en el mismo se d de forma exitosa, ahora se tiene claro que en un laboratorio
de microbiologa se llevan a cabo una serie de diversos procesos y as como Fernndez; Garca;
Saz(2010, p.3) describen, Una de la tareas fundamentales del laboratorio () es la aplicacin de una
metodologa precisa que permita la identificacin de los microorganismos se debe entonces teneren
cuenta que la seguridad y seguir una estructura adecuada permitir el xito o no de los experimentos
llevados a cabo en el laboratorio.
La tincin de Gram permite conocer la morfologa celular, el tamao, la forma y su clasificacin
taxonmica

(Gram

positivos

Gram

negativos)

de

acuerdo

al

color

que

tornan

las bacterias despus de la tincin, sin embargo no permite conocer la especie o gnero de la bacteria al
cual pertenece.
Tinte primario- Cristal Violeta (CV), tie la bacteria color violeta.
Agente mordante- Yodo, forma un complejo insoluble con CV. Ayuda a adherir el tinte a la clula. Ayuda
a resistir la decoloracin.
Agente decolorizante- alcohol etlico al 95%, sirve como solvente de lpidos y agente deshidratante de
protenas. Remueve el cristal violeta.
Contratinte- Safranina, tie de rojo la bacteria
En la tincin gram pueden haber muchas variaciones en su desarrollo. El factor determinante es su
diferenciacin en la tincin, las que se decolorizan fcilmente son gram negativas, y las que retienen el
tinte primario son gram positiva,.
Las diferentes tinciones en las bacterias se definen por las diferencias fsicas y qumicas de su pared
celular. El cristal violeta tie toda la bacteria. El yodo reacciona al tinte en el citoplasma de la bacteria,
formando cristal violeta-yodo. En las bacterias gram negativas, el agente decolorizador disuelve la capa de
lipopolisacarido exterior y el complejo violeta.yodo es lavado.

METODOLOGA
Insumos o materiales

Microscopio.
Portaobjetos.
Cubreobjetos
Placa de Petri.
Fsforos
Mechero.
Asas de siembra

Paso1.

Reunimos los instrumentos: frotis,

Paso 2.

Agua destilada
Aceite de inmersin
Toalla Nova
Tincin de Gram (Cristal violeta; lugol;

alcohol-acetona; safranina)
Siembra bacterias
Desinfectante

Desinfectamos el lugar de trabajo:

Paso 3.
Verificamos que todos los medios de seguridad estn tomados y buscamos las bacterias a
analizar:

Paso 4.

Tomamos una asa bacteriolgica la desinfectamos por medio de calor para asegurarnos que este
100 % esterilizada para as no alterar nuestra muestra, luego destapamos la capsula Petri frotamos
el asa y consecutivamente pasamos el asa por la lmina porta objeto (frotis).

Paso 5.
A la muestra ya realizada le agregamos unas gotas de cristal violeta y consecutivamente lavamos
para retirar el exceso de colorante que pueda quedar en nuestra muestra.

Paso 6.

Luego a nuestra muestra le agregaremos unas gotas de lugol (yodo), esto nos permitir tener una
mejora observacin de nuestra muestra a la hora de observarlo por el microscopio.

Paso 7.
Nuevamente tomamos nuestra muestra y le agregamos alcohol etlico, este actuara como
solvente y continuamente agregamos alcohol-acetona, esto nos ayudara para mantener el color.

Paso 8.

Ya para terminar nuestra muestra nos queda agregar safranina.

Paso 9.
Ya teniendo terminada nuestra muestra, est en condiciones apropiadas para poder observar
nuestra bacteria por medio del microscopio.

RESULTADOS

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CUESTIONARIO

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Expliqu por qu es importante utilizar la tincin de gram

Los principios de la tincin de Gram estn basados en las caractersticas de la pared celular de las
bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo (1)

En microbiologa clnica resulta de gran utilidad, ya que a partir de muestras clnicas directas
provenientes de sitios estriles se puede saber de manera rpida las caractersticas de la muestra y hacer
una diferencia de los potenciales microorganismos causantes de una infeccin.(1)

Cules son las fuentes de error ms comunes en la tincin de gram

El error ms comn es el tiempo de exposicin de las bacterias con las tinciones y una cantidad
excesiva de tincin.
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Investigue qu reaccin de gram darn los cultivos de levadura. Estos resultados tendrn la
misma importancia que para las bacterias? Porqu?

Las levaduras, con esta tincin, suelen comportarse como gram positivas. El color de la pared celular no
es tan relevante como en las bacterias ya que las levaduras no poseen una clasificacin por medio del gran.

Explique cmo se tien las endosporas?, qu dificultades se tendran si no se adiciona safranina

al final de la tincin?

La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:

Verde malaquita; capaz de teir las esporas en caliente y Safranina; colorante de contraste que tie las
formas vegetativas. Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con
agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante.

Mencione tres bacterias que tien Gram positivas y escriba la enfermedad que causa en vegetales,
investigue sus sntomas.
Streptomycesscabies: causa sarna comn en papa, necrosis.

Mencione tres bacterias que tien Gram negativas y escriba la enfermedad que causa en vegetales,
investigue sus sntomas.

Erwiniachrysanthemi: Tizon bacteriano. Causa muerte del follaje

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Pseudomonas syringae patovar syringae : Manchas marrones. Pudricion de la cebolla

xanthomonasvesicatoria : causa la mancha bacterial del tomate. Lesiones de color negro en hojas y fruto
del tomate
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Qu funcin tiene la solucin de lugol en la tincin de Gram?

Impide la salida del cristal violeta utilizado previamente.

Posteriormente, se coloca lugol, el cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal
violeta por la formacin de un complejo cristal violeta yodo que satura los espacios del
peptidoglicano de la pared bacteriana(1)

CONCLUSIONES

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Se logra clasificar distintos tipos de microorganismos y sus estructuras a travs de la afinidad del
colorante cristal violeta.
Los microorganismos deben ser manejados con precaucin y alrededor de la llama por su
potencial patogenicidad..
Aunque las bacterias no aparecen en diferentes medio que las rodea, difieren
mucho qumicamente esta diferencia qumica es los que permite distinguir las bacterias
por Tincin, pues generalmente, el colorante reacciona con la clula bacteriana, pero no reacciona
con su medio exterior.

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REFERENCIAS

1.- Lpez-Jcome, L. E., Hernndez-Durn, M., Coln-Castro, C. A., Ortega-Pea, S., CernGonzlez, G., & Franco-Cendejas, R. (2014). Las tincionesbsicasen el laboratorio de
microbiologa. Laboratorio de Infectologa, Centro Nacional de Investigacin y Atencin a
Quemados (CENIAQ), Instituto Nacional de Rehabilitacin, 3, 10-18.