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Citogentica de Peces
BOOK JANUARY 2006

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2 AUTHORS:
Mauro Nirchio

Claudio Oliveira

Universidad Tcnica de Machala (Ecua

So Paulo State University

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Available from: Mauro Nirchio

Retrieved on: 03 February 2016

UNESP

UDO
UNIVERSIDAD DE ORIENTE

UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

JULIO DE MESQUITA FILHO

Dr. Mauro Nirchio

Profesor Titular
Departamento de Acuacultura
Escuela de Ciencias Aplicadas del Mar
Isla de Margarita, Venezuela

Dr. Claudio Oliveira

Profesor Titular
Departamento de Morfologia
Instituto de Biocincias
Botucatu, So Paulo, Brasil

Prohibida la reproduccin parcial o total de esta obra por

cualquier medio sin la autorizacin previa de su autor
Derechos reservados 2006

Correccin: Lic. Yaneth Rivas / M.Aq. Juan I. Gaviria / Lic. Ernesto Ron
Diagramacin y composicin: Orangel Hernndez
Cartula: Mauro Nirchio
Editado por la Coordinacin de Publicaciones del
Rectorado de la Universidad de Oriente
Montaje e Impresin: Grficas Internacional
Porlamar, Estado Nueva Esparta, Venezuela
Edicin de 1000 ejemplares

ISBN: 980-234-147-9
Depsito Legal: lf.: 58920056301553
2

CONTENIDO
Prlogo

Introduccin

La regin neotropical y su Ictiofauna

13

Citogentica

15

Principios Generales

17

Mitosis

17

Meiosis

19

Composicin y estructura del cromosoma eucaritico

22

Cambios estructurales en los cromosomas

25

Cariotipo

27

Citogentica de peces neotropicales

27

Polimorfismos cromosmicos en peces

30

Cromosomas supernumerarios

37

Cromosomas sexuales

43

Evolucin cromosmica

50

Citogentica evolutiva de peces

55

Tecnologa cromosmica: la Citogentica aplicada

60

Mtodos Rutinarios empleados en Citogentica de Peces

63
3

ESTIMULACIN DE MITOSIS

63

PREPARACIONES CROMOSMICAS MITTICAS

63

CULTIVOS DE CLULAS DE RIN DE CORTA DURACIN

67

CULTIVOS DE LINFOCITOS DE SANGRE PERIFRICA

68

ESTUDIOS CARIOTPICOS

69

MEDIDAS CROMOSMICAS

69

OBTENCIN DE CROMOSOMAS MEITICOS

71

TCNICA PARA OBTENCIN DE COMPLEJOS SINAPTONMICOS.

72

TCNICAS DE COLORACIN DIFERENCIAL

77

REGIONES ORGANIZADORAS DE NUCLEOLOS (RONs)

77

DETECCIN DE HETEROCROMATINA

79

CONSTITUTIVA (BANDEO C)

79

BANDEO G

81

BANDAS R

83

ENZIMAS DE RESTRICCIN

85

FLUOROCROMOS

87

COLORACIN CON CROMOMICINA A3 (CG ESPECFICO)

87

TCNICA DE COLORACIN CON DISTAMICINA-DAPI

89

TCNICA DE COLORACIN CON DISTAMICINA-MITRAMICINA

90

HIBRIDACIN IN SITU POR FLUORESCENCIA

91

ANEXO 1: BREVE HISTORIA DE LA CITOGENTICA DE PECES

NEOTROPICALES DE AGUA DULCE

96

ANEXO 2: LOS CARACTERES CROMOSMICOS Y LA ACUACULTURA.

100

ANEXO 3: ESTUDIOS CITOGENTICOS EN PECES MEDIANTE

HIBRIDACIN FLUORESCENTE IN SITU

110

BIBLIOGRAFA

134

PREPARACIN DE SOLUCIONES

168

GLOSARIO

172

AGRADECIMIENTOS
Deseamos expresar nuestro agradecimiento a la Secretara de la Universidad
de Oriente y al Consejo de Investigacin por habernos proporcionado las
facilidades para la elaboracin y publicacin de este libro.
Agradecemos a la Universidad de Oriente, Escuela de Ciencias Aplicadas del
Mar y a la Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, Instituto de
Biocincias de Botucatu por brindar apoyo constante y contribuir al
mantenimiento de los laboratorios en los que se han realizado los
experimentos y desarrollado los trabajos a partir de los cuales se ha recabado
la mayora de la informacin incluida en este libro.
De igual modo deseamos expresar nuestro agradecimiento por el constante
apoyo financiero proporcionado por el Consejo de Investigacin de la
Universidad de Oriente a nombre de Mauro Nirchio y a la Fundao de Amparo
Pesquisa do Estado de So Paulo, al Conselho Nacional de
Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico y a la Coordenao de
Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior a nombre de Claudio Oliveira.
A Irani A Ferreira, .Adriana Kazue Takako, Artur Antnio Andreata, Cristiane
Kioko Shimabukuro Dias, dson Luis Maistro, Irani Quagio Grassiotto por la
donacin de parte de las fotografas.
Al Dr. Daro A. Palmieri por la traduccin de parte del material utilizado en el
texto del Portugus al Espaol.
Tambin deseamos agradecer a todos a quellos que directa o indirectamente
colaboraron en la elaboracin de este libro, en particular a todos los
estudiantes que nos estimulan a buscar nuevos conocimientos y nuevas
formas de divulgar esos conocimientos.

PRLOGO
La Citogentica de Peces ha atravesado por un desarrollo considerable,
principalmente en las ltimas dos dcadas, alcanzando los mejores niveles de
competencia, tanto por el desarrollo y aplicacin de tcnicas y metodologas
especficas, como por los resultados tericos y prcticos obtenidos.
Las tcnicas citogenticas, cuando son aplicadas para resolver problemas de
relaciones entre especies de animales y plantas, constituyen un instrumento bastante
confiable y preciso. As, la informacin derivada de esta metodologa permite una
mejor comprensin del proceso biolgico de diversificacin, de las relaciones entre
especies y de los procesos acaecidos en la evolucin de esos grupos de organismos.
El aumento del conocimiento en esta rea se debe principalmente al
perfeccionamiento de tcnicas de obtencin y estudio de los cromosomas. Las
metodologas desarrolladas y aplicadas ms recientemente a los peces, adems de
un conocimiento ms profundo de la estructura de los cromosomas de los
vertebrados, ha permitido tambin el anlisis dinmico de poblaciones salvajes y
stocks cultivados de peces, resultando en mejores condiciones de conservacin,
manejo y exploracin de los potenciales genticos de las especies en programas de
cultivo.
En este contexto, la propuesta de divulgacin de material que contenga
informacin actualizada en el rea de Citogentica de Peces, relacionando protocolos
de tcnicas utilizadas, que de forma rutinaria o para resolver problemas especficos
sobre la estructura cromosmica y dinmica de los procesos resultantes en
polimorfismos cromosmicos en las poblaciones, abarca un sector de creciente inters
y aplicabilidad en las investigaciones con estos organismos.
Este libro constituye una gua fundamental para el estudio los cromosomas de
los peces. Aborda desde aspectos generales de la ictiofauna de la regin Neotropical,
de citogentica y de la estructura y funcionamiento celular, con nfasis en los
principios de divisin celular, hasta la utilizacin de metodologas citogenticas en
programas de inters aplicado a la Acuacultura. A partir de una rpida discusin
sobre la composicin y organizacin del material gentico celular, se llega a la
estructura de los cromosomas y a los mecanismos modificadores que pueden actuar
durante el proceso evolutivo para el establecimiento de diversificacin en la frmula
cariotpica de las especies. En esta discusin se abordan aspectos generales de los
polimorfismos cromosomicos ligados o no al sexo y de los cromosomas
supernumerarios, que constituyen la base del proceso de diversificacin cariotpica y
de de los caminos seguidos por las especies en su proceso evolutivo. Sigue una
descripcin de las tcnicas con la presentacin de los respectivos protocolos e
7

ilustraciones de su empleo en material bastante diversificado, representando la

aplicabilidad de las mismas en diferentes especies de peces. En este sentido, se
verifica la posibilidad de asociacin de diferentes metodologas, cuando son aplicadas
tcnicas bsicas de preparaciones cromosmicas en conjunto con tcnicas modernas
de bandeo e identificacin de segmentos genmicos especficos, como e el caso de
tratamientos con enzimas de restriccin o el uso de tcnicas de Hibridacin in situ
Fluorescente.
Los tpicos relacionados al final del texto relativo a la preparacin de
soluciones utilizadas durante la aplicacin de las tcnicas, as como un glosario de
trminos tcnicos y de uso rutinario en el rea, constituyen complementos de gran
utilidad en este tipo de publicacin y su inclusin enriquece la lectura dando mayores
posibilidades de consulta directa. Por lo tanto, se trata de un material de gran utilidad
tanto para principiantes en esta rea cientfica que buscan orientacin para la
aplicacin de tecnicas de estudio cromosmico, como para investigadores en general
que pueden beneficiarse con la utilizacin de su contenido.

Fausto Foresti

INTRODUCCIN
El conocimiento sobre la diversidad biolgica es el punto de partida para todos
los estudios bsicos o aplicados relacionados con las ciencias de la vida y la
identificacin de las especies, as como tambin la habilidad de identificarlas y/o
nombrarlas es fundamental para estudios de ecologa, comportamiento, evolucin y
todas las otras disciplinas relacionadas con los organismos (Savage, 1995).
La Sistemtica, estudio de las relaciones evolutivas entre los organismos, es el
rea de la Biologa en la que convergen todas las dems reas. Considerando que la
historia evolutiva de los organismos est asociada a los cambios climticos y
geogrficos ocurridos durante la historia del planeta, dilucidar las relaciones
filogenticas entre los seres vivos permite el estudio de su evolucin, as como
tambin brinda la base para estudios biogeogrficos y ecolgicos (Futuyma, 1992).
Por ocupar una posicin bsica en la filogenia de los vertebrados y constituir
casi la mitad de ese grupo; estar distribuidos en una enorme diversidad de hbitats
(Nelson, 1994) y por presentar una serie de peculiaridades citogenticas, los peces
constituyen un grupo ideal para el estudio de problemas evolutivos.
Desde el punto de vista evolutivo los peces forman un grupo polifiltico con
24.618 especies (Nelson, 1994). Este nmero es considerable, pues representa ms
de la mitad del nmero total de vertebrados conocidos, que se encuentra en 48.170
especies. Es importante destacar que, mientras la descripcin de nuevas especies
pertenecientes al grupo de los anfibios, reptiles, aves y mamferos no es muy
frecuente, muchas nuevas especies de peces son descritas continuamente lo cual
puede elevar su nmero total a aproximadamente 28.500.
Adems del gran nmero de especies, otro aspecto relevante relacionado con
los peces es la importancia que revisten para las poblaciones humanas, pues
constituyen la dieta principal de muchas comunidades, ocupan un papel importante en
la economa de muchas naciones y brindan una significativa fuente de trabajo en las
sociedades que dependen en gran medida de la actividad pesquera.
En relacin con la diversidad biolgica, los peces forman tambin un grupo
aparte de los dems grupos de vertebrados, pues presentan formas con los ms
diversos hbitos. As, existen especies altamente especializadas como aqullas que
se alimentan exclusivamente de zooplancton, especies generalizadas, especies
parsitas, etc. Algunas producen venenos, electricidad, luminiscencia. Unas son
bisexuales, mientras otras son protndricas o protoginas. Ciertas especies presentan
fecundacin interna mientras que la mayora presenta fecundacin externa.
En cuanto al hbitat, los peces pueden ser encontrados en todos los ambientes
acuticos concebibles, soportando temperaturas que van desde 44 C, como algunas
9

tilapias de frica, a -2 C en la Antrtica. Desde el punto de vista morfolgico los

peces presentan tamaos que varan de 8 a 10 milmetros hasta 12 metros. Algunas
especies poseen vistosos colores, mientras otras no. Unas presentan formas
graciosas mientras otras, como los peces abisales, presentan formas grotescas.
Cerca de 50 especies carecen de ojos.
Debido a esta amplia diversidad y a los relativamente escasos estudios
realizados hasta el momento, el conocimiento que se tiene de la ictiofauna an es muy
reducido. Este problema se ha agravado en los ltimos tiempos por el hecho de que el
ser humano est daando de forma irreparable el ambiente en muchas reas,
conduciendo a la extincin a muchas especies que an no son conocidas. Por estas
razones se torna cada vez ms importante y urgente la necesidad de estudiar las
especies presentes en nuestros ecosistemas. En este punto es necesario sealar que
los estudios requeridos no se circunscriben a la simple identificacin de especies que
puedan registrarse en un futuro, sino que deben abarcar todos los aspectos posibles,
de manera que las futuras generaciones dispongan de informacin que les permita
aprovechar ese recurso al mximo.
Uno de los aspectos que ha sido objeto de inters por quienes se dedican al
estudio de los peces es la Citogentica. Los estudios citogenticos, en principio,
suministran informacin que contribuye a una mejor identificacin de las diferentes
especies y de sus particularidades cromosmicas, pero adems se han empleado
para mejoramiento gentico de las especies que se cultivan en programas de
piscicultura y de repoblacin de aguas marinas, lagos y ros.
Hasta el inicio de la dcada del 60, pocos trabajos fueron hechos en
citogentica pues los cromosomas apenas eran visualizados mediante el empleo de
cortes histolgicos seriados, lo que adems de laborioso, resultaba en muchos errores
de interpretacin (Nogusa, 1960). Los estudios citogenticos en peces tuvieron inicio
hacia el final del siglo pasado (1890), con el trabajo de Retzius que sugiri la
presencia de 50 cromosomas en Myxine glutinosa y el trabajo de Kastschenko que
insinu la presencia de 30 a 50 cromosomas en Pristiurus melanostomus (ver Denton,
1973), pero la caracterizacin de los cromosomas en los peces se hizo efectiva a partir de
1960, gracias al desarrollo de tcnicas refinadas de cultivos de clulas y tejidos en
mamferos (Clem et al., 1961; Booke, 1968; Wolf y Quimby, 1969; Denton, 1973). Sin
embargo, lo costoso de los medios de cultivo y de los activadores mitticos, las dificultades
en adaptar la composicin de stos a la fisiologa del grupo, y el tiempo que demanda la
aplicacin de las tcnicas in vitro, hace que los mtodos directos (in vivo) continen siendo
comnmente empleados (Osouf-Costaz y Foresti, 1992).
En los ltimos aos la citogentica de peces se ha expandido
significativamente, principalmente a partir de la aplicacin de tcnicas de bandeo que,
entonces usadas de manera rutinaria en investigaciones de citogentica humana y de
10

mamferos, presentaban dificultades para adaptarlas a los cromosomas de peces. La

introduccin en el estudio de los cromosomas de los peces de tcnicas como el
bandeo C, localizacin de regiones organizadoras del nucleolo por impregnacin con
Nitrato de Plata (Ag-NORs), el uso de fluorocromos base-especficos, la incorporacin
de anlogos de bases del ADN en el ciclo celular y, en menor escala, los bandeos G
y R, en conjunto han suministrado importantes resultados en la comparacin de
especies estrechamente emparentadas (Sola et al., 1984; Almeida-Toledo et al.,
1988a), en la visualizacin de estadios iniciales de diferenciacin de cromosomas
sexuales (Phillips e Ihssen, 1985; Almeida-Toledo et al., 2000), en la identificacin de
patrones de replicacin de los cromosomas (Delany y Bloom, 1984) y, ms
recientemente, en la identificacin de secuencias de ADN en los cromosomas
(Martnez et al., 1996; Martins et al., 2002, 2004).
Por otro lado, tambin se evidencia un incremento de los anlisis
cromosmicos en poblaciones de peces y se han tornado cada vez ms frecuentes los
informes de trabajos que comprenden reas geogrficas relativamente amplias. Tales
estudios superan la fase de simple identificacin del nmero y morfologa de los
cromosomas y pasan a abordar aspectos poblacionales en los que se analizan
distintos tipos de polimorfismos. De este modo han sido descritas, por ejemplo,
diferencias cariotpicas en muestras de guabinas (Hoplias malabaricus) colectadas en
45 localidades de Suramrica, lo que ha revelado la existencia de siete citotipos que
difieren en nmero y frmula cromosmica (Bertollo et al., 2000). Estudios realizados
con nueve poblaciones locales de Astyanax scabripinnis paranae, an con diferencias
morfolgicas y mersticas muy poco evidentes entre ellas, han revelado que todas
pueden ser identificadas con base en sus cariotipos, (Maistro et al., 1998a).
Los estudios hasta ahora publicados muestran que los cromosomas de los
peces presentan, en general, entre 1 y 6 m de longitud total, lo cual es un tamao
bastante pequeo si se compara con los cromosomas de otros grupos de vertebrados,
y que el nmero diploide vara entre 2n=12 en Gonostoma bathyphylum (Post, 1974;
citado en Kinkhardt et al., 1995) y 2n=446 en Diptychus dipogon (Jianxun et al., 1991).
La variabilidad cariotpica verificada en estos estudios revela la necesidad de analizar
sistemticamente grupos naturales de peces, teniendo en cuenta su distribucin
geogrfica y utilizando al mximo las facilidades tcnicas y metodolgicas disponibles.
Aunque varias listas que describen el complemento cromosmico de los peces
seos han sido publicadas (Gyldenholm y Scheel, 1971; Gold et al., 1980; Sola et al.,
1981; Hartley, 1987; Klinkhardt et al., 1995), el incremento acelerado de la literatura
cientfica en el tpico obliga a realizar revisiones constantes para actualizar la
informacin. La ltima revisin general publicada (Klinkhardt et al., 1995), indica que
han sido analizados los cromosomas de aproximadamente 2.800 especies de peces
en todo el mundo, lo que representa alrededor del 10% de las especies que se supone
11

existen y pone en evidencia que la citogentica de peces es un campo que requiere

de mayor exploracin. Por esa razn, con esta obra nos hemos propuesto brindar una
visin general de la Citogentica de Peces y de las tcnicas citogenticas ms
comnmente empleadas en este grupo, ofreciendo una gua para introducir y orientar
a quienes se inicien en el campo, fomentando as una lnea de investigacin
prcticamente virgen, que requiere de la formacin de grupos de trabajo que se
dediquen al estudio del complemento cromosmico de la Ictiofauna.

12

LA REGIN NEOTROPICAL Y SU ICTIOFAUNA

Los patrones de distribucin de los animales en el planeta condujeron a dividir
los continentes en seis grandes regiones zoogeogrficas: Australiana, Oriental,
Etipica, Neotropical, Nertica y Palertica (Darlington, 1957). Los lmites de cada
regin y de su fauna reflejan la historia de los grupos animales y tambin de las
modificaciones de la superficie de la tierra que permitieron o impidieron las
migraciones de los animales (Storer y Usinger, 1979).
La regin Neotropical se corresponde casi exactamente con lo que conocemos
como "Latinoamrica", extendindose desde el Desierto de Sonora, en el lmite entre
Estados Unidos y Mxico, hasta el lmite sur de Sudamrica (Fig. 1).

Fig. 1. La Regin Neotropical

Aunque desde el punto de vista taxonmico, muchos trabajos se han realizado
con peces Neotropicales, el conocimiento de las relaciones entre varios grupos an
permanece oscuro. Entre los grupos todava poco conocidos se encuentran muchas
especies de la regin neotropical. Una de las razones de este conocimiento restringido
de la ictiofauna neotropical reside justamente en la enorme diversidad y amplia
distribucin de esta fauna.
Segn el ms reciente inventario realizado por Reis et al. (2003), la ictiofauna
Neotropical de peces dulceacucolas es bastante rica, incluyendo 71 familias y 4.475
especies reconocidas como vlidas. Adicionalmente, una estimacin realizada por
estos autores sugiere la existencia de 6.000 especies en los ros y lagos de la regin
Neotropical, mientras que la estimacin disponible sobre la cantidad de peces de agua
dulce para todo el planeta se encuentra en el orden de 13.000 especies.
13

Schaefer (1998) calcul en un estudio de tendencias histricas de descripcin

de especies de Characidae y Loricariidae, que podan existir aproximadamente 8.000
especies de peces neotropicales de agua continental, lo que correspondera al 25%
de todas las especies de peces dulceacucolas del mundo. Este nmero fue discutido
y aceptado por Vari y Malabarba (1998) quienes sostienen que toda esta diversidad
de peces neotropicales de agua dulce ocurre en menos del 0,003% del agua
continental del planeta.
Con relacin a los peces marinos, an no se dispone de informacin segura
sobre la regin neotropical. Sin embargo, a modo de referencia podemos citar un
estudio realizado en Brasil en el que se indica que, slo en el litoral brasileo existen
por lo menos 1.297 especies, entre ellas cuatro especies de lampreas y peces bruja,
139 de tiburones y rayas y 1.155 de peces seos (Menezes et al., 2003).

14

CITOGENTICA
La Citogentica se basa en el hecho de que el material hereditario se
encuentra organizado en unidades de informacin denominadas cromosomas. La
ocurrencia universal de cromosomas como unidades de la herencia sugiere que estos
hayan aparecido muy temprano en la Historia de la vida. Tal organizacin posee
ventajas obvias, haciendo posible la economa en un nmero de unidades
segregacionales, aumentando la eficiencia en la segregacin con reducido peligro de
ganancia o prdida de otras unidades individuales, e introduce la posibilidad de una
divisin funcional entre los componentes cromosmicos (Swanson et al., 1969).
Histricamente la citogentica es una ciencia hbrida, originalmente constituida
por la citologa y la gentica. La citologa tuvo su inicio con la invencin del
microscopio en el siglo XVII. Los estudios iniciales indicaron la existencia de unidades
elementales en los seres vivos, lo que culmin con el desarrollo de la teora celular en
1850, segn la cual los seres vivos estn formados por clulas y productos celulares.
Durante el perodo comprendido entre 1850 y 1900, hubo un gran avance en la
identificacin de los constituyentes celulares y de sus procesos biolgicos. En ese
perodo fueron descubiertos y descritos los procesos de mitosis y meiosis. En 1888
Waldeyer cre el trmino cromosoma para identificar las pequeas unidades
estructurales que se formaban en el ncleo en un determinado perodo del ciclo
celular (Cremer y Cremer, 1988).
En 1859 la ms importante teora biolgica, la teora de la evolucin por
seleccin natural, fue presentada por Darwin y Wallace. En el proceso de evolucin
encontramos el principio de continuidad biolgica enriquecido por la variacin, porque
la evolucin slo es posible en presencia de una diversidad heredable. Por tanto, una
de las caractersticas fundamentales de la vida se resume en dos aspectos: la
capacidad de reproduccin para conservar la especie y la mutacin para producir la
variacin. Al ser la clula la unidad fundamental de la estructura biolgica, estas dos
caractersticas deberan tener una base celular (Swanson et al., 1969).
Las leyes que rigen los procesos de la herencia, a su vez, fueron descubiertas
apenas en 1885 por Gregor Mendel, pero permanecieron ignoradas hasta inicio del
siglo XX, cuando fueron redescubiertas. Ya que en ese perodo la comprensin de la
clula, del ncleo y de los cromosomas se encontraba bastante avanzada, la teora
cromosmica de la herencia formulada en 1902-1903 por Wilson, Sutton y Boveri,
permiti realizar una brillante sntesis que correlacionaba la teora celular, la teora de
la evolucin y las leyes de la herencia, dando origen as a la ciencia de la citogentica.
La comprobacin experimental de que los genes se encuentran en los cromosomas

15

fue aportada por Morgan y sus alumnos en trabajos realizados entre 1910 y 1920
(Wagner et al., 1993).
La citogentica, por lo tanto, centra su atencin en los cromosomas. Se
relaciona con su organizacin qumica y gentica y con la manera segn la cual esa
organizacin determina su comportamiento, tanto en las clulas en divisin como en
aqullas que no lo estn (Swanson et al., 1969).

16

PRINCIPIOS GENERALES
A continuacin se describen algunos principios generales con relacin a la
divisin celular y a la organizacin del material gentico en los cromosomas.

MITOSIS
Las plantas y los animales estn formados por miles de millones de clulas
individuales organizadas en tejidos y rganos que cumplen funciones especficas.
Todas las clulas de cualquier planta o animal han surgido por un proceso de divisin
a partir de una nica clula inicial el vulo fecundado. El vulo fecundado se
divide y forma dos clulas hijas idnticas, cada una de las cuales contiene un juego de
cromosomas idntico al de la clula parental. Despus, cada una de las clulas hijas
vuelve a dividirse de nuevo, y as contina el proceso. Salvo en la primera divisin del
cigoto, todas las clulas crecen hasta alcanzar un tamao aproximado al doble del
inicial antes de dividirse. En este proceso, llamado mitosis, se duplica el nmero de
cromosomas (es decir, el ADN) y cada uno de los juegos duplicados se desplaza
sobre una matriz de microtbulos hacia un polo de la clula la cual se divide, y
constituiye la dotacin cromosmica de cada una de las dos clulas hijas en
formacin.
Aunque la mitosis es un proceso continuo, ciertos eventos claramente
definidos, permiten identificar cuatro etapas o estados denominados: Profase,
Metafase, Anafase, Telofase. La etapa durante la cual una clula no se divide se
llama Interfase, perodo durante el cual se efecta la sntesis del ADN y
consecuentemente la duplicacin de los cromosomas (Fig. 2). Al perodo de
duplicacin cromosmica se le llama S (por sntesis). Este perodo es precedido por
un perodo G1 (por gap, espacio hueco en ingls) y seguido por un perodo G2,
durante los cuales la clula presenta actividad metablica y crecimiento, pero no
duplicacin de cromosomas. Si se designa la mitosis por M, el ciclo celular es una
secuencia que puede representarse por Mitosis G1 S G2, en donde G1 S
G2 corresponde a la interfase.
Profase: Est caracterizada por la condensacin gradual y el enrollamiento de los
cromosomas, los cuales se hacen visibles al microscopio como estructuras en forma
de filamento. Cada cromosoma parece estar constituido por dos copias, una junto a la
otra y unidas por el centrmero. Los duplicados se llaman cromtidas hermanas
durante el tiempo que permanecen unidas. Durante esta etapa es caracterstica la
desaparicin gradual del nuclolo, a la vez que la membrana nuclear inicia su
desintegracin.
17

Metafase: La membrana nuclear se fragmenta, dejando los cromosomas libres en el

citoplasma. Los cromosomas se unen por su centrmero a las fibras del huso y se
desplazan agrupndose finalmente en un plano equidistante de los dos polos del
huso. Los cromosomas que se muestran en un cariotipo son cromosomas en
metafase mittica, cada uno de los cuales consiste en dos cromtidas hermanas
unidas en sus centrmeros.
Anafase: Es generalmente la etapa ms corta de la mitosis. Cada centrmero se
divide en dos, por lo cual las dos cromtidas se convierten en cromosomas y los
centrmeros inician su movimiento hacia los polos opuestos del huso, cada uno
llevando consigo uno de los cromosomas.
Telofase: Las nuevas dotaciones cromosmicas se agrupan en los polos opuestos
del huso, donde comienzan a desenrollarse y vuelven a adoptar la forma alargada de
los cromosomas interfsicos. Se forma una membrana nuclear alrededor de cada
conjunto de cromosomas y se reconstituyen los nuclolos. La divisin de la clula
(citocinesis) se completa tambin durante esta etapa.

1) Interfase

2) Profase temprana

5) Anafase

6) Anafase tarda

3) Profase tarda

7) Telofase temprana

4) Metafase

8)Telofase

Fig. 2. Fases de la Mitosis

18

MEIOSIS
La conservacin de la informacin gentica al dividirse las clulas, se efecta
mediante la autoreproduccin de las molculas de ADN. En la reproduccin sexual,
los organismos surgen del cigoto (vulo fecundado) que se forma al fusionarse los
gametos, vale decir, las clulas sexuales masculina y femenina.
Si cada una de las clulas sexuales introdujera en el cigoto todas las molculas
de ADN de la clula (todos los cromosomas), entonces el volumen de estas molculas
aumentara el doble cada generacin. Existe un mecanismo regulador, la Meiosis, que
permite conservar la constancia del volumen de la informacin gentica a travs de
las generaciones de los organismos.
La meiosis precede a la formacin de las clulas sexuales, lo mismo femeninas
que masculinas, y consta de dos divisiones celulares despus de una sntesis de
ADN. Como resultado, el nmero de cromosomas en las clulas de las cuales se
forman los gametos se reduce exactamente a la mitad. Adems se produce una
distribucin de los componentes de las parejas cromosmicas.
Cada pareja se comporta independientemente y as surgen todas las
combinaciones posibles de cromosomas de las diferentes parejas. Finalmente, en el
proceso de sinapsis de los homlogos en cada pareja, stos intercambian segmentos
creando una potente reserva adicional de combinaciones hereditarias. Aunque a las
etapas de la meiosis se les ha asignado los mismos trminos que a sus equivalentes
en la mitosis, se emplean nmeros romanos para distinguir las fases de cada divisin
nuclear.
La profase de la primera divisin meitica es mucho ms prolongada y
compleja que la de la mitosis. Puede subdividirse en:
- Leptoteno (filamento delgado)
- Cigoteno (filamento acoplado)
- Paquiteno (filamento grueso)
- Diploteno (filamento doble)
- Diacinesis (Esencialmente el final del Diploteno y de la Profase I).
Leptoteno: El leptoteno es la primera etapa meitica que difiere de la interfase previa.
Los cromosomas aparecen como filamentos largos y delgados, con numerosas
estructuras en forma de cuentas de collar (crommeros) en toda su longitud. Los
crommeros son de forma y distribucin irregular e intensamente teidos. Si los
cromosomas no estuviesen divididos en el estado leptotnico las roturas
cromosmicas inducidas por rayos X en este estado se traduciran luego en lesiones
de ambas cromtidas, y si, por el contrario, ya hubiese ocurrido la duplicacin, una
19

lesin afectara solamente a una de las cromtidas del par. Por tanto, los cromosomas
en el estado leptotnico han de constar de dos cromtidas, pero tan estrechamente
unidas entre s que dan el aspecto de una estructura simple. En esta etapa se forman
los elementos laterales del Complejo Sinaptonmico.
Zigoteno: Durante el zigoteno los cromosomas homlogos se atraen entre s e inician
un apareamiento muy ntimo a modo de cremallera (sinapsis). Este apareamiento se
produce entre todas las regiones de los cromosomas homlogos. Un examen
cuidadoso de los segmentos apareados, en material favorable, revela un
apareamiento preciso de los crommeros de cada segmento. En esta etapa se forma
el elemento central del Complejo Sinaptonmico que es el responsable del
apareamiento de los cromosomas
homlogos.
Paquiteno: Una vez que se han
apareado todos los segmentos
homlogos, los cromosomas en
sinapsis son ms cortos y ms
gruesos que en las subfases
anteriores. Durante el paquiteno, las
cromtidas
hermanas
de
un
cromosoma se asocian a las dos
cromtidas
hermanas
de
su
homlogo. A este grupo de cuatro
cromtidas se le conoce como
bivalente o ttrada. En estos puntos
de asociacin pueden producirse o ya
se han producido una serie de
intercambios de material gentico
entre cromtidas homlogas. Tales
intercambios
constituyen
el
mecanismo gentico del crossing-over
o recombinacin. En esta etapa
surgen
los
Ndulos
de
Recombinacin que promueven la
recombinacin entre cromosomas
homlogos.

Fig 3. Corte de un par de cromosomas de

Serrasalmus
spilopleura
en
fase
de
diploteno/diacinesis mostrando dos "crossingovers" (flechas). Aumento 15.000 X. Fotografa
proporcionada por la Dra. Irani Quagio-Grassiotto.

Diploteno: En el diploteno cada

cromosoma
acta
como
sii
experimentase una repulsin frente al homlogo al que estaba ntimamente apareado.
En este momento se producen separaciones perfectamente visibles entre los dos
20

cromosomas homlogos con excepcin de regiones especficas en las que parece

haberse producido un verdadero entrecruzamiento entre cromtidas homlogas. Estas
zonas cruzadas o quiasmas son uniones entre los cromosomas que tienen forma de X
y parecen ser las nicas fuerzas que quedan para mantener unidos los bivalentes
hasta la metafase (Fig. 3. En muchos organismos parece que su posicin y nmero
sean constantes para cada cromosoma en particular. En esta etapa el Complejo
Sinaptonmico se deshace y los cromosomas homlogos permanecen unidos por los
quiasmas.
Diacinecis: En la diacinesis contina el arrollamiento y la contraccin de los
cromosomas hasta que se convierten en cuerpos gruesos que se tien intensamente.
Durante este proceso los bivalentes suelen emigrar a una zona prxima a la
membrana nuclear y quedan distribuidos en una forma regular. El nuclolo
desaparece y se disuelve la membrana nuclear. Los bivalentes se unen por el
centrmero al huso que se ha formado con toda rapidez.
METAFASE I
Los bivalentes se adhieren por su centrmero a las fibras del huso y se mueven
hacia la placa metafsica, con los dos centrmeros de cada par de homlogos en los
lados opuestos de la placa. El apareamiento de los cromosomas homlogos diferencia
la Metafase I de la meiosis de la Metafase mittica, en donde tal apareamiento no
existe.
ANAFASE I
Los centrmeros de cada par de cromosomas homlogos se mueven hacia los
polos opuestos del huso, llevando consigo dos cromtidas de cada cromosoma. Los
quiasmas se deslizan hacia los extremos de los cromosomas homlogos a medida
que estos se separan. Una diferencia importante con la Anafase mittica es que en la
Anafase I de la meiosis los centrmeros no se dividen. Cada miembro del par de
cromosomas homlogos se mueve a uno de los dos polos de la clula
TELOFASE I
Mientras se completa la migracin de los cromosomas hacia los polos del huso,
se forma una membrana nuclear alrededor de cada conjunto de cromosomas.
SEGUNDA DIVISIN MEITICA.
Al igual que en la mitosis, la segunda divisin meitica no est precedida de
una nueva interfase, por lo tanto no hay duplicacin de material gentico. Los
cromosomas entran en la profase de la segunda divisin meitica (Profase II) como
21

dadas o como cromtidas hermanas conectadas entre s por un solo centrmero

funcional. Cuando la membrana nuclear se desintegra, los cromosomas se encuentran
unidos al huso meitico y se posicionan en el ecuador de la clula (Metafase II).Tan
pronto como el centrmero se divide, cada cromtida (mnada) se separa de su
hermana y se desplaza hacia el polo opuesto durante la Anafase II. Inmediatamente a
continuacin se produce la Telofase II y la citocinesis, dando lugar a cuatro clulas
haploides a partir de cada clula diploide inicial que comenz la meiosis.

COMPOSICIN Y ESTRUCTURA DEL CROMOSOMA

EUCARITICO
Han transcurrido ms de 100 aos desde que la palabra cromosoma apareci
por primera vez en la literatura y ms de 50 desde que fue establecida la estructura
del ADN.
El cromosoma es el estadio visible del material gentico durante la fase de
divisin celular. Durante el ciclo celular la cromatina presenta distintos aspectos que
se ilustran mediante un esquema del ciclo de condensacin descondensacin de los
cromosomas. En G1 los cromosomas estn descondensados y compuestos apenas
por una cromtida; en S ocurre la duplicacin de cromosomas con la sntesis de
nuevas molculas de ADN; en G2 la clula concluye los preparativos para la divisin
celular. En la metafase, M, y en la anafase, A, la condensacin es mxima y se ven
los dos centrmeros.
El ncleo de las clulas somticas humanas tiene un dimetro aproximado de
58 m y el ADN contenido en l es de 7,0 pg de ADN/ncleo y el tamao total de las
46 molculas de ADN es de 1,0 m. Luego de la fase S el ncleo de cada clula
somtica contiene 14,0 pg ADN/ncleo y 2 m de ADN.
El cromosoma eucaritico est constituido por cromatina, la cual es un
complejo de ADN, protenas cromosmicas y de ARN. Para comprender cmo llega el
cromosoma de una fibra altamente desplegada al estado de mxima condensacin es
necesario conocer la composicin molecular y los niveles de organizacin de la
cromatina. Las protenas de la cromatina son de dos tipos:
Histonas: tienen bajo peso molecular y son muy bsicas, y se distribuyen en
paquetes de 8 molculas (octmero de histonas) constituidos por cuatro tipos
diferentes de histonas (H2A, H2B H3 y H4). El filamento de ADN envuelve los
octmeros de histonas, y el conjunto de un octmero con el filamento de ADN se
llama nucleosoma. Entre cada dos nucleosomas hay un fragmento de ADN llamado
ADN espaciador. Adems, hay otro tipo de histona (H1) que se fija al ADN espaciador
22

y a la parte externa del ADN de los nucleosomas. Todo el conjunto forma un filamento
con aspecto de rosario.
Protenas no histnicas: Son un grupo heterogneo de protenas, algunas de
las cuales contribuyen a dar forma a la estructura de los cromosomas, mientras que
otras se relacionan de un modo u otro con la transcripcin y la replicacin.
La cromatina se puede encontrar de dos formas. La heterocromatina, es una
forma inactiva, condensada, localizada sobre todo en la periferia del ncleo, que se
tie intensamente con las coloraciones. La heterocromatina puede ser de dos tipos
diferentes: la constitutiva, idntica para todas las clulas del organismo, que carece de
informacin gentica y est compuesta por secuencias repetidas de ADN (cerca de
100 a 2.000 pares de bases) llamadas secuencias satlites, y la heterocromatina
facultativa, que est compuesta por regiones eucromticas que contienen genes que
no se estn expresando en un determinado linaje celular.
La eucromatina, diseminada
por el resto del ncleo y no visible con
el microscopio de luz, representa la
forma activa de la cromatina en la que
se est transcribiendo el material
gentico de las molculas de ADN a
molculas de ARNm.
El examen de la cromatina
interfsica con el microscopio
electrnico ha permitido verificar que
las fibras poseen una estructura en
forma de cuentas de collar. Cada
cuenta posee un dimetro de
aproximada-mente 10 nm, y se
encuentra conectada a la adyacente
mediante un filamento de 14 nm de
Fig. 4. Organizacin de la cromatina en el cromosoma
longitud y de 3 nm de espesor.
Cuando los nucleosomas se
encuentran adheridos uno a otro, la fibra de cromatina posee un dimetro de 10-11
nm. Esta fibra se espiraliza como solenoide, adoptando la forma de fibra de 25-30 nm
de dimetro y es compactada varias veces ms hasta formar las estructuras altamente
condensadas de aproximadamente 700 nm de grosor que se observan como los
brazos de un cromosoma (Fig. 4).
Al microscopio, el cromosoma metafsico tpico se observa como dos
cromtidas unidas en una constriccin primaria o centrmero, estructura de primera
23

importancia durante la divisin celular (mitosis y meiosis) debido a que es aqu donde
se unen las fibras del huso para garantizar la correcta segregacin de los
cromosomas que se han replicado. El centrmero est flanqueado por secuencias
repetitivas que son tpicamente especie-especficos, cromosoma-especfico o ambos.
Los cromosomas, a menudo, pueden poseer una constriccin secundaria,
visibles como los huecos no teidos a lo largo del brazo del cromosoma y
comnmente constituyen los sitios donde se localizan mltiples copias de los cistrones
de ARN ribosomal (rADN) y forman las Regiones Organizadoras del Nuclolo (NOR).
Con frecuencia las constricciones secundarias se localizan en la porcin terminal del
cromosoma de donde se distinguen como un pequeo segmento llamado satlite. Las
regiones de ADN al final de los cromosomas se denominan telmeros y, a escala
molecular, son complejas y a menudo contienen copias en tndem de ADN repetitivo.
Adems, contienen mltiples copias de secuencias (Timina [T]-T-Adenina [A]-Guanina
[G]-G-G)n, requeridas para la estabilidad del cromosoma y completa replicacin del
ADN cromosmico.

24

CAMBIOS ESTRUCTURALES EN LOS

CROMOSOMAS
Los cambios estructurales de los cromosomas pueden ocurrir en un solo
cromosoma (reordenacin intracromosmica) o entre cromosomas (reordenacin
intercromosmica).
Las reordenaciones intracromosmicas incluyen duplicaciones, delecciones,
inversiones y transposiciones cntricas, mientras que las intercromosmicas son de
dos tipos: fusinfisin (Robertsonianas y en tndem) y translocaciones.
Las delecciones (prdida de segmentos cromosmicos) y las duplicaciones
(repeticiones de segmentos cromosmicos) resultan en cambios en la longitud del
cromosoma.

Deleccin

Duplicacin

Aqullas que involucran a la eucromatina tienden a ser letales a menos que

estn involucrados slo pequeos segmentos.
Cuando la parte involucrada es la heterocromatina, estos cambios
cromosmicos son tpicamente neutrales, aunque ellos pueden resultar en
alteraciones de los patrones de recombinacin.
En el caso de inversiones, un segmento del cromosoma es escindido, rotado
en 180 , y reinsertado en el cromosoma.
Inversin
Si el segmento invertido no incluye el centrmero, la inversin se denomina
paracntrica. Si por el contrario incluye el centrmero, se llama pericntrica.
Las transposiciones cntricas producen un cambio en la posicin del
centrmero. Esta reordenacin que implica mltiples fracturas es rara y
probablemente resultado de reordenaciones secuenciales.
Las fusiones o fisiones Robertsonianas ocurren cuando dos cromosomas de un
solo brazo se fusionan (fusin) para formar un cromosoma de dos brazos
(metacntrico o submetacntrico) o cuando un cromosoma de dos brazos se fractura
(fisin) en el centrmero para producir dos cromosomas de un solo brazo. Las
fusiones en tndem son fusiones que se producen entre los extremos terminales (end-

25

to-end) de dos cromosomas para formar un solo elemento y tpicamente involucran la

prdida o silenciamiento de un centrmero.
Las Translocaciones son reorganizaciones que cambian la posicin de un
segmento cromosmico dentro del genoma. La insercin de una porcin de cromatina
desde un cromosoma en otro se denomina translocacin insercional (los cambios
cntricos son esencialmente translocaciones intracromosmicas).

Translocacin
Las translocaciones recprocas son intercambios de segmentos entre
cromosomas no homlogos. stas pueden involucrar slo una porcin de un
cromosoma o pueden involucrar el intercambio del brazo completo del cromosoma
(Translocacin de brazo entero).

26

CARIOTIPO
En los organismos superiores los cromosomas de cada clula somtica ocurren
en pares que confieren una constitucin diploide caracterstica a cada especie y que
se indica con el nmero 2n. Las clulas sexuales (gametos) contienen un solo
miembro del par y por lo tanto el nmero haploide de cromosomas se indica como n.
La descripcin del nmero, tamao y forma de cada tipo de cromosoma del set
completo de cromosomas de un organismo se denomina cariotipo. Los cromosomas
en un cariotipo pueden diferir entre s con respecto al tamao, la morfologa, y patrn
de bandas. Los cromosomas son agrupados en pares homlogos y ordenados segn
el tamao del ms grande al ms pequeo (Fig. 5)
Un descriptor comn del cariotipo es el nmero total de brazos NF (nmero
fundamental). El NF puede variar dependiendo del criterio adoptado para su
determinacin. Algunos autores cuentan todos los brazos visibles en los cromosomas.
La mayora de los autores consideran en el clculo del NF los brazos cortos y largos
de los cromosomas metacntricos (M) y submetacntricos (SM), y solamente los
brazos largos de los cromosomas subtelocntricos (ST) y acrocntricos (A).

CITOGENTICA DE PECES NEOTROPICALES

Fig. 5. Foto de de un ejemplar macho de Corydoras sp.

(Siluriformes, Callichthyidae) y su cariotipo 2n=120. Longitud total
del espcimen: 43 mm. Barra fina = 10 m, barra gruesa 1 cm
27

El estudio citogentico de peces neotropicales ha presentado una considerable

expansin en los ltimos aos. La primera revisin sobre datos citogenticos de peces
neotropicales dulceacucolas, realizada por Almeida-Toledo (1978), incluye los
nmeros haploides y/o diploides de 252 formas de agua dulce de las divisiones
primarias y secundarias de Amrica del Sur y Central. En una revisin realizada 10
aos despus (Oliveira et al., 1988a), se indican los nmeros haploides y/o diploides
de 421 especies, distribuidas en 141 gneros y 32 familias. Para el ao 2000 los datos
disponibles para peces de agua dulce (Oliveira et al., 2000a), recopilan los nmeros
diploides y/o haploides de 921 especies (113% ms que en 1988), 252 gneros (74%
ms que en 1988) y 44 familias (33% ms que en 1988). Para la fecha de publicacin
de este libro se registran 47 familias, 278 gneros y 1.047 especies dulceacucolas y
39 familias, 73 gneros y 109 especies marinas (Estas listas son actualizadas
peridicamente y se encuentran disponibles en Internet en el sitio:
www.ibb.unesp.br/lbgpe).
Entre los peces neotropicales los nmeros diploides varan entre 2n=20 para
Pterolebias longipinnis a 2n=134 para Corydoras aeneus. Sin embargo, hay una gran
discrepancia respecto a la naturaleza de los datos disponibles para cada grupo. As,
por ejemplo, para el gnero Hyphessobrycon se conocen los nmeros diploides y/o
haploides de 35 especies/subespecies pero apenas seis tienen su cariotipo descrito,
mientras que para el gnero Leporinus son conocidos los nmeros haploide y/o
diploide de 37 especies, de las cuales apenas para tres de ellas no hay datos respecto
a su estructura cariotpica. El gnero ms estudiado ha sido Corydoras para el cual se
conocan los nmeros haploide y/o diploide de 43 especies. Cromosomas sexuales
fueron descritos para 51 especies o poblaciones locales (5,75% del total de especies
analizadas) englobando 36 informes de heterogamia femenina (68%) y 17 de
heterogamia masculina (32%). Cromosomas supernumerarios fueron encontrados en
41 especies (4,45%) del total de especies analizadas. El contenido de ADN nuclear
era conocido para 174 especies y/o poblaciones, siendo que el mismo vara de
1,04 0,09 pg en Corydoras cf. simulatus (2n=62) a 248,0 pg por ncleo diploide en
Lepidosiren paradoxa (Ohno y Atkin, 1966). El nmero y/o la localizacin de las
regiones organizadoras del nuclolo (NORs) fue descrito para 1.205 especies y/o
poblaciones, variando entre 1 y 13 pares de cromosomas (con una moda de 1 par)
portadores de NORs. Los estudios que involucran la aplicacin de tcnicas de bandeo
cromosmico fueron realizados con 1.032 especies y/o poblaciones locales,
destacndose un creciente aumento de la aplicacin de tcnicas de hibridacin in situ
con sondas fluorescentes (FISH).
En cuanto al estudio de peces Neotropicales marinos, ste se inici a principio
de la dcada de los 80, con el estudio de los cariotipos de Mentichirrus americanus y
Micropogonias furnieri (Gomes et al., 1983a, 1983b). Actualmente el estudio de estos
peces se encuentra en franca expansin. El anlisis general de estos datos muestra
28

que el conocimiento citogentico de estos peces es bastante fragmentado, de modo

que para casi todas las familias analizadas solamente existen unas pocas especies
estudiadas. Las familias ms extensamente estudiada son Carangidae y Mugilidae
para la cual se conoce los nmeros haploide y/o diploide de 10 y 5 especies
respectivamente. Los nmeros diploides varan de 2n=28 para Mugil curema y M.
incilis a 2n=100/102 para Prionotus punctatus. Del total de especies analizadas,
49(60%) presentan 2n=48 cromosomas siendo que en 28 (35%) todos los
cromosomas son acrocntricos. Cromosomas sexuales han sido descritos para tres
especies (3,7% del total de especies analizadas) y cromosomas supernumerarios han
sido descritos para una especie (1,2% del total de especies analizadas). Se conoce el
contenido de ADN nuclear para dos especies (2,5% del total de especies analizadas)
siendo que el mismo vara de 1,24 0,01 pg en Micropogonias furnieri (2n=48) a
1,57 0,03 pg en Menticirrhus americanus (2n=48). El nmero y localizacin de las
regiones organizadoras del nuclolo (NORs) han sido descritos para 79 especies y/o
poblaciones, y todas presentaron NOR simples. Otras tcnicas de bandeo
cromosmico han sido aplicadas en 56 especies y/o poblaciones. Considerando que
la ictiofauna de aguas marinas de la regin Neotropical es bastante diversificada, se
puede decir que el estado actual del conocimiento en esta rea es an muy limitado,
aunque los datos obtenidos son promisorios, inclusive en el sentido de identificar
importantes caracteres citogenticos.

29

POLIMORFISMOS CROMOSMICOS EN PECES

Hasta hace pocos aos, existan escasos informes sobre la ocurrencia de
polimorfismos cromosmicos en peces. Esto se deba, posiblemente, al hecho de que
las tcnicas empleadas en los estudios citogenticos de este grupo no ofrecan la
suficiente resolucin de la estructura cromosmica y tambin por el hecho de que el
nmero de individuos analizados por poblacin era pequeo (Gold, 1979). Hasta
1980, de aproximadamente 1.100 especies a las que se les ha determinado el
cariotipo, se conocan polimorfismos intrapoblacionales solamente en dos o tres
especies y polimorfismos interpoblacionales en 11 (Vasiliev, 1980). La expansin de
los estudios poblacionales y el uso de las tcnicas de bandeo han alterado
significativamente estos nmeros, mostrando que la variabilidad es casi una constante
entre los peces. De esa manera, los polimorfismos intrapoblacionales e
interpoblacionales han sido descritos.
La ocurrencia de linajes celulares con diferentes arreglos cromosmicos
(polimorfismos intraindividuales) es debida a reorganizaciones cromosmicas que
ocurren en los estadios iniciales de la vida embrionaria. Aun cuando esos
polimorfismos sean considerados como muy raros, existen algunos ejemplos. As, en
diferentes tejidos de la trucha arco-iris (Onchorhynchus mykiss) de ejemplares de 1
mes, 8 meses y 18 meses, Ohno et al. (1965) verificaron que un nmero especfico de
cromosomas tenda a predominar en cada linaje de clulas somticas. Las clulas
hematopoyticas del bazo y del rin presentaban frecuentemente 59 cromosomas,
mientras que en clulas del parnquima del hgado el nmero usual era 61 o 62,
aunque el nmero de brazos era constante (NF=104). Mediante el examen de las
figuras meiticas, los autores concluyeron que ocurra un tipo de polimorfismo
Robertsoniano dentro de los individuos. Ciertos brazos cromosmicos deban sufrir
fusiones y/o disociaciones en los estadios iniciales de la vida embrionaria, lo que
subsecuentemente produca clulas somticas con diferentes nmeros y tipos
cromosmicos.
El anlisis de 61 metafases de un ejemplar de Trichomycterus paolence
proveniente del arroyo de Quinta (Itatinga, So Paulo, Brasil), mostr que al lado de
clulas con 2n=54 cromosomas (el nmero diploide normal de la especie), haba
otros cuatro tipos celulares: 1) con 2n=55 (54 ms un microcromosoma); 2) 2n=55 (54
ms un pequeo cromosoma subtelocntrico); 3) 2n=56 (54 ms un cromosoma
subtelocntrico y un microcromosoma); y 4) 2n=57 (54 ms un subtelocntrico y un
par de microcromosomas), lo que caracteriza la ocurrencia de un mosaicismo
cromosmico en este individuo (Torres et al., 2002). Otro caso de mosaicismo
cromosmico en el gnero Trichomycterus fue descrito por Borin y Martins-Santos
(2000).
30

Tambin han sido indicadas diferencias en cuanto al nmero de cromosomas

entre los linajes somticos y germinales. En Eptatretus burgeri (Agnatha,
Cyclostomata) el nmero cromosmico modal en las clulas somticas fue 2n=36
(81,8% de las clulas), 2n=52 (30,2% de las clulas) en las espermatogonias y n=25
(46,8%) n=26 (40,3%) en espermatocitos primarios (Kohno et al., 1986). Las clulas
somticas presentan solamente 79,2% de la cantidad de ADN nuclear de las clulas
espermatogoniales. Diecisis cromosomas totalmente banda C positivos fueron
encontrados en metafases espermatogoniales; en metafases de espermatocitos
primarios tambin fueron encontrados bivalentes casi completamente banda C
positivos. En contraste, cromatina banda C positiva fue raramente observada en
metafases somticas. Los resultados llevaron a los autores a concluir que la
eliminacin de cromosomas en E. burgeri debe ocurrir en los estadios iniciales de
segmentacin del embrin, en todas las clulas, con excepcin de las clulas
ancestrales del linaje germinativo. As, entre el ADN eliminado, se encuentra
principalmente la fraccin constituida por secuencias banda C positivas.
En Gymnogeophagus balzanii (Perciformes, Cichlidae) fue verificada la
ocurrencia de diferentes nmeros de cromosomas entre el linaje somtico de tres
ejemplares machos, en los que fue encontrado un nmero diploide 2n=48 para rin y
branquias, mientras que las clulas germinales en metafase II tenan n=24, 25 y 26
cromosomas (Feldberg y Bertollo, 1984). Los autores sugirieron que estos
cromosomas podran ser cromosomas supernumerarios restringidos al linaje germinal.
Adems, la ocurrencia de variabilidad cromosmica entre individuos de una
misma poblacin, no relacionada con mecanismos cromosmicos de determinacin
sexual ha sido informada en algunas especies de peces. En Gobius paganellus, entre
46 especmenes de ambos sexos de una misma poblacin se encontraron siete
cariotipos distintos. Tres nmeros diploides diferentes (2n=46, 47 y 48) y cuatro
nmeros fundamentales (NF= 46, 47, 48 y 49) fueron encontrados. Esta variacin
parece ser debida a fusiones/fisiones cntricas y aneuploidias o translocaciones
(Thode et al., 1985). Giles et al. (1985), al analizar 67 ejemplares de G. paganellus
capturados en una franja de 60 Km a lo largo de la costa Sur de Espaa, encontraron
tres nuevos cariotipos para esa especie. Los polimorfismos descritos parecen ser
debidos a fusiones cntricas, tal como ha sido demostrado por los datos de bandas C.
Luego de analizar varias muestras de Ilyodon furcidens (2n=48) de diferentes
localidades de la cuenca del ro Coahuayana, Turner et al. (1985) encontraron una
extensa variacin en los cariotipos analizados. Las muestras estudiadas comprendan
cuatro citotipos que presentaban los siguientes nmeros de cromosomas
metacntricos: 0 a 2, 0 a 4, 6 y 10 a 16; esta variacin no era del tipo Robertsoniano.
Estudios citogenticos de cuatro muestras de Corydoras aeneus colectadas en
tributarios del ro Tiet, regin de la cuenca superior del Paran, Brasil (ros Araqu,
31

Corumbata, Capivara y Alambari) mostraron la ocurrencia de nmeros diploides

2n=60 y 2n=61 ms un nmero variable de 0 a 3 pequeos supernumerarios o
cromosomas B (Oliveira et al., 1988b). La variabilidad del complemento A era debida a
la ocurrencia de un rearreglo Robertsoniano que involucraba el par de cromosomas
metacntricos ms grande (Fig. 6). El anlisis de las clulas meiticas de machos
mostr la ocurrencia de 29 bivalentes y un trivalente en los individuos heterocigotos
para un rearreglo Robertsoniano y de univalentes en los individuos con cromosomas
supernumerarios (Oliveira et al., 1988b). Polimorfismos debidos a la ocurrencia de
rearreglos Robertsonianos tambin fueron verificados en dos especies de peces
marinos, Chromis insolata y C. flavicauda (Molina y Galetti-Jr., 2002).
En ejemplares de Hoplerythrinus unitaeniatus (Erythrinidae), colectados en el
ro Negro (Manaus, Amazonia, Brasil), fueron encontrados cuatro citotipos con 2n=48.
La diferencia entre los citotipos parece ser debida a la ocurrencia de un rearreglo
estructural que involucra algunos pares de cromosomas, lo que se refleja en la
variacin del NF de 96 a 94. La elevada frecuencia observada de individuos
portadores de rearreglos (18 individuos de 22), sugiere que ellas puedan conferir
ventajas adaptativas a los individuos que las poseen (Giuliano-Caetano y Bertollo,
1988).

Fig. 6. Cariotipo de Corydoras aeneus (Siluriformes, Callichthyidae), 2n=62, con un

polimorfismo Robertsoniano en el primer par M (par 1) y con un cromosoma
supernumerario de tamao medio (B).

El anlisis de las regiones organizadoras del nuclolo (NORs) han mostrado

que esos segmentos cromosmicos son altamente polimrficos, habindose
32

detectado polimorfismos intraindividuales, aunque ms comnmente intra e

interpoblacionalmente.
Un extenso estudio realizado con seis poblaciones de Gymnotus carapo mostr
que haba cinco fenotipos diferentes con relacin al par cromosmico portador de
NORs en esa especie (Fernandes-Matioli et al., 1997). Los resultados mostraron que
la frecuencia de los diferentes fenotipos era variable dentro y entre las poblaciones
pero que todas se encontraban en equilibrio de Hardy-Weinberg.
Un tipo de variacin cromosmica encontrada en diversas poblaciones
naturales de peces es la presencia de individuos triploides. La presencia de triploides
en poblaciones diploides ha sido informada para Salmo gairdneri (Cullar y Uyeno,
1972; Thorgaard, 1983), Astyanax schubarti (Morelli et al., 1983), Curimata modesta
(Vnere y Galetti Jr., 1985), Eigenmannia sp. (Almeida-Toledo et al., 1985),
Hoplerythrinus unitaeniatus (Giuliano-Caetano y Bertollo, 1990) y Astyanax
scabripinnis (Maistro et al., 1994a).
Borin et al. (2002), al analizar el cariotipo de 50 individuos de Trichomycterus
davisi, 2n=54, encontraron un individuo triploide macho con 3n=81 cromosomas. El
anlisis de apareamiento de cromosomas de este animal triploide a travs de la
tcnica del complejo sinaptonmico mostr que haba un apareamiento normal de los
diferentes genomas lo que probablemente llevara a la esterilidad de ese macho.
Los resultados antes citados indican que la triploida, de modo general, es
tolerada en diferentes grados entre los vertebrados, siendo mucho ms viable entre
los vertebrados inferiores, tal como ha sido sugerido por Thorgaard y Gall (1979). Por
otro lado los estudios meiticos muestran que los individuos triploides no presentan
apareamiento normal de los cromosomas y, por lo tanto, son estriles.
La ocurrencia de variabilidad dentro de las poblaciones pone al descubierto que
los estudios detallados son de suma importancia para el anlisis de la descripcin
cariotpica de las especies. Adems, abren un nuevo campo de investigacin dentro
de la citogentica de peces, incluyendo no slo el anlisis de la frecuencia poblacional
de las variantes cromosmicas, sino tambin de sus posibles efectos fenotpicos y
valores adaptativos.
El estudio de diferentes poblaciones de una misma especie de peces ha hecho
posible la identificacin de diferencias cariotpicas entre poblaciones. La especie
Gambusia affinis clsicamente ha sido dividida por los taxnomos en dos
subespecies, G. a. affinis y G. a. holbrooki, que habitan diferentes sistemas de ros en
los Estados Unidos y poseen algunas regiones de contacto. En esas regiones de
contacto se han producido hbridos que presentan caractersticas de las dos
poblaciones. Estudios citogenticos realizados por Black y Howell (1979), mostraron
que G. a. affinis posee un sistema de determinacin sexual cromosmica del tipo
33

ZZ/ZW mientras G. a. holbrooki no posee cromosomas sexuales morfolgicamente

distinguibles. Al cruzar hembras de G. a. holbrooki (sin ZW) con machos de G. a.
affinis (ZZ), se obtuvo una generacin F1 aparentemente normal en el aspecto
fenotpico; al cruzar machos de G. a. holbrooki (sin ZZ) con hembras de G. a. affinis
(con ZW), todos los individuos observados en F1 estaban severamente deformados y
moran en pocos das. Los autores sugieren que durante el perodo interglaciar del
Pleistoceno las dos poblaciones permanecieron aisladas y expuestas a diferentes
presiones selectivas, lo que habra llevado a la fijacin del carcter de cromosomas
sexuales morfolgicamente distintos en G. a. affinis y no en G. a. holbrooki. Estos
cromosomas sexuales se habran originado a partir de autosomas que habran sufrido
rearreglos involucrando inversiones y duplicaciones o delecciones.
Estudios realizados en el gnero Corydoras han mostrado la ocurrencia de
diversos citotipos. As, en la especie C. nattereri fueron encontrados tres citotipos, con
2n=40, 2n=42 y 2n=44 (Oliveira et al. 1990); en C. barbatus fueron encontrados dos
citotipos, con 2n=64 y 2n=66 y en C. cf. prionotos fueron encontrados dos citotipos
con 2n=68 y 2n=86 (Oliveira et al., 1993b). En la familia Callichthyidae, diversos
citotipos han sido hallados hasta el momento para la especie Callichthys callichhtys,
con nmeros diploides variando de 2n=52 a 2n=58 (Shimabukuro-Dias et al., en
prensa).
Entre los peces de Brasil una extensa variacin ha sido encontrada en
Gymnotus carapo. En cinco muestras estudiadas se encontr una variacin en el
nmero diploide de 2n=42 y 2n=48 en la Cuenca Amaznica, 2n=52 y 2n=54 en la
Cuenca del Alto Paran y 2n=54 en la cuenca de Leste (Foresti et al., 1984). Otro
estudio realizado en 11 poblaciones de los Estados So Paulo y Paran mostr la
presencia de cinco citotipos con una variacin en el nmero diploide de 2n=40 a
2n=54 (Fernandes-Matioli, 1996). Una gran variacin fenotpica fue encontrada
tambin en Hoplerythrinus unitaeniatus (Giuliano-Caetano y Bertollo, 1988);
ejemplares colectados en el ro Negro (Manaus, AM) presentaron 2n=48 y ejemplares
del valle del ro Doce (MG) y el lago Juturnaba (RJ) presentaron 2n=52 (NF=96) y
2n=52 (NF=95), respectivamente. Estos resultados sugieren que en H. unitaeniatus,
una especie que presenta amplia distribucin geogrfica, un cierto grado de
diferenciacin subespecfica o an especfica habra ocurrido a nivel de algunas
poblaciones, lo que estara reflejado en las variaciones cromosmicas observadas, de
tal forma que el gnero Hoplerythrinus no sera monotpico como corrientemente se
admite (Giuliano-Caetano y Bertollo, 1988). En la especie Serrasalmus rhombeus
fueron encontrados dos citotipos, con 2n=58 y 2n=60, que se encuentran parcialmente
aislados pero en simpatra en dos lagos amaznicos (Nakayama et al., 2001).
Adems, un tercer citotipo que presenta 2n=60 pero con una frmula cariotpica
diferente a la de la poblacin amaznica fue encontrado en Venezuela (Nirchio et al.,
2002)
34

Se ha reportado que M. curema del Golfo de Mxico y de Brasil poseen un

cariotipo 2n=28 y FN=48 (Le Grande y Fitzsimons, 1976; Nirchio et al., 2005),
mientras que para especmenes de Venezuela se ha reportado un nmero diploide
2n=24 y un FN conservado (48) (Nirchio y Cequea, 1998; Nirchio et al., 2001). Aunque
a primera vista esta variacin (Fig. 7) sugiera la presencia de variabilidad
cromosmica intraespecfica (interpoblacional), se ha explorado la posibilidad de que
se trate de dos especies diferentes. De hecho, la nueva informacin de bandeo-C y
localizacin de NORs, indica que, adems de las discrepancias en el nmero diploide,
la distribucin de heterocromatina constitutiva y localizacin de las NOR establecen

Fig 7. Cariotipo de Mugil curema y clulas metafsicas tratadas para bandas C y Ag-NOR en
muestras de Brasil (A-C) y Venezuela (D-F). En el recuadro se muestra una ampliacin del par
de cromosomas portadores de las NOR en C y E.

diferencias citogenticas adicionales entre M. curema con el Citotipo 1 (2n=28;

FN=48) y con el Citotipo 2 (2n=24; NF=48). Adems, la comparacin merstica y
morfomtrica ha revelado discrepancias en el recuento de escamas y en el nmero de
radios de la aleta pectoral: 35 escamas en la lnea lateral y 15 radios en la aleta
pectoral en especmenes con un cariotipo 2n=28, mientras que en los especmenes
con cariotipo 2n=24 se determinaron 37-39 escamas en la lnea lateral y 17 radios en
la aleta pectoral. Estas diferencias conducen a sugerir que ambos citotipos no se
encuentran relacionados simplemente con una variacin geogrfica politpica sino que
podran corresponder, de hecho, a especies diferentes (Nirchio et al., 2005).
El verdadero significado de la mayora de las variaciones cariotpicas no es
conocido. Solamente incluyendo en la aproximacin otros anlisis, adems de los
citogenticos, podra obtenerse informacin adicional en el sentido de conocer si esas
35

variantes constituyen simplemente polimorfismos poblacionales, razas cromosmicas

de una misma especie o incluso especies diferentes.
Como ejemplo consideremos el caso de Mugil curema y M. gaimardianus,
especies que poseen la mayor similaridad morfolgica dentro de la familia Mugilidae,
pues coinciden con exactitud en casi todos los caracteres mersticos, excepto en el
nmero de escamas en series laterales, aunque esta caracterstica puede prestarse a
confusin, sobre todo en estados juveniles, lo que las hace muy difciles de
diferenciar. La gran similitud entre estas dos especies ha originado una gran confusin
que ha traido como consecuencia que el nombre M. gaimardianus haya sido
considerado como una sinonmia de M. curema lo que, aunado al hecho de que la
descripcin original de M. gaimardianus realizada por Desmarest no permite
establecer con certeza la diferenciacin respecto a M. curema y condujo a que el
Comit Internacional de Nomenclatura Zoolgica suprimiera el nombre M.
gaimardianus de la lista de nombres vlidos (Opinin 1787 in BZN, 1994). Sin
embargo, el simple anlisis del cariotipo convencional de especmenes que
concuerdan con la descripcin de M. curema con aquellos que pudieran ser
clasificados como M. gaimardianus, revel que M. curema posee un cariotipo 2n=24
compuesto por 22 cromosomas metacntricos y 2 submetacntricos mientras que M.
gaimardianus posee un cariotipo 2n=48 constituido por cromosomas enteramente
acrocntricos (Nirchio et al., 2003 b). Estas caractersticas cromosmicas son los
suficientemente marcadas e indican que ambas entidades deberan ser consideradas
como especies nominales vlidas y no como sinnimas y sugieren la posibilidad de
emplear la citogentica como una poderosa herramienta para establecer caracteres
diagnsticos que permitan distinguir, sin dudas, estas dos especies.

36

CROMOSOMAS SUPERNUMERARIOS
Los cromosomas supernumerarios o B se definen como cromosomas
adicionales al complemento normal (llamados cromosomas A). Aqullos no son
homlogos y no se aparean con los cromosomas A (Jones y Rees, 1982). Desde su
descubrimiento, los cromosomas supernumerarios han atrado mucha atencin, ya
que ocurren en todos los grupos mayores de organismos, siendo ocurrencia comn en
muchas familias, gneros, especies y poblaciones (Jones, 1991). Actualmente se
conoce que cerca de 15% de las especies poseen tales cromosomas y, debido al
avance de tcnicas y mtodos de estudio, continuamente estn siendo encontrados
en especies recientemente estudiadas. Segn Beukeboom (1994), con algunas
excepciones, los cromosomas B tienen las siguientes caractersticas: 1. Son
morfolgicamente diferentes de los cromosomas A (usualmente de menor tamao); 2.
No siguen un patrn de segregacin Mendeliana; 3. No poseen (o raramente)
organizadores nucleolares; 4. Frecuentemente presentan no-disyuncin en anafase de
la mitosis, resultando en frecuencias variadas entre rganos de un mismo individuo; 5.
Reducen la fertilidad y el crecimiento cuando estn presentes en gran nmero; y 6. No
son portadores de genes con efectos mayores.
Por definicin los cromosomas B generalmente no muestran grandes efectos
sobre el fenotipo y no son indispensables. No obstante, se nota que la frecuencia de
Bs en las poblaciones se mantiene, resultando en un balance entre acumulacin por
transmisin no Mendeliana y eliminacin, por reduccin en el xito reproductivo de
aquellos que lo poseen (Beukeboom, 1994).
En peces, Taylor (1967)
sugiri la existencia de
supernumerarios en Eptatretus
stoitii. Mientras tanto, entre los
telesteos, los dos primeros
trabajos detallados sobre estos
cromosomas fueron realizados
en Alburnus alburnus por Hafez
et al. (1981) y por Pauls y
Bertollo (1983) en Prochilodus
scrofa (hoy denominada P.
lineatus Fig. 8). Mientras que
los cromosomas B de A.
alburnus son ms grandes que
el resto de su complemento en
el cariotipo normal, los
cromosomas B de P. lineatus

Fig. 8. Metafase de Prochilodus lineatus (Characiformes,

Prochilodontidae), 2n=58 (2n=54 + 4 cromosomas Bs),
coloreada con la tcnica de banda C. Las flechas
sealan cuatro microcromosomas supernumerarios
banda C positivos.

37

son de menor tamao que los cromosomas ms pequeos del complemento

cariotpico patrn. Estos Bs se presentaron heterocromticos, adems de poseer
variabilidad numrica inter e intra-individual.
A partir de esos trabajos, muchas descripciones de supernumerarios han sido
realizadas por diversos autores, principalmente con peces de la regin Neotropical. Al
analizar la Tabla 1 se observa que, con relacin al tamao, los cromosomas B en
peces son bastante variados. Pueden ser muy pequeos, y por eso llamados
microcromosomas, como en Prochilodus scrofa (Pauls y Bertollo, 1983) (Figura 3),
Moenkhausia sanctaefilomenae (Foresti et al., 1989) y en una poblacin de Astyanax
scabripinnis (Rocon-Stange y Almeida-Toledo, 1993). Presentar tamao pequeo,
similar al menor tamao del complemento A, como en Corydoras aeneus (Oliveira et
al., 1988b) (Figura 2) y en Rhamdia quelen (Fenocchio y Bertollo, 1990). O aparecer
como grandes cromosomas, an ms grandes que los cromosomas A de la especie, y
por eso son llamados macrocromosomas, como en Astyanax scabripinnis (Salvador y
Moreira Filho, 1992; Maistro et al., 1992, 1994b) y en Hisonotus leucofrenatus
(=Microlepidogaster leucofrenatus) (Andreata et al., 1993) (Figura 9).
Hay una predominancia del
tipo
metacntrico,
pero
en
Prochilodus lineatus diversas formas
de Bs han sido observadas por
Cavallaro et al. (2000).
Respecto a la frecuencia,
tenemos que en algunas poblaciones
los Bs son de ocurrencia espordica
entre los individuos de las muestras
analizadas, mientras que en otras se
encuentran con cierta frecuencia. En
relacin con el nmero de Bs por
individuo, cerca de 45 por ciento de
los
peces
portadores
de
supernumerarios poseen apenas un
nico cromosoma de este tipo,
Fig. 9. Metafase de Hisonotus leucofrenatus aunque en otras especies este
es variable, pudiendo
(Siluriformes, Loricariidae), 2n=55, coloreada con la nmero
tcnica de bandas C. La flecha seala un cromosoma alcanzar hasta 16 cromosomas B,
supernumerario grande banda C positivo. Fotografa
como en Callichthys callichthys
suministrada por el Dr. Artur A. Andreata
(Erdtmann et al., 1990). En algunas
especies, como en Prochilodus lineatus, este nmero puede variar de 0 a 7, con una
predominancia de individuos portadores de 2 a 3 cromosomas B (Oliveira et al., 1997).
38

Aunque los cromosomas B en general no presentan herencia Mendeliana

(Beukeboom, 1994), un trabajo realizado en peces con el objetivo de estudiar el
mecanismo de herencia de los cromosomas B usando como modelo experimental a
Prochilodus lineatus, permiti verificar que en esa especie los cromosomas
supernumerarios presentaban un mecanismo de herencia Mendeliano (Oliveira et al.,
1997).
En la familia Pimelodidae, el gnero Rhamdia se destaca por la frecuente
ocurrencia de cromosomas supernumerarios en los cariotipos de las especies que lo
componen. Hochberg y Erdtmann (1988) analizaron dos poblaciones de Rhamdia
quelen y constataron la presencia de pequeos B en ambas poblaciones. Fenocchio y
Bertollo (1990) observaron hasta cinco cromosomas B en Rhamdia hilarii. Fenocchio
(1993), present sus estudios en diversas poblaciones de Rhamdia hilarii y Rhamdia
quelen. De las seis poblaciones analizadas, cuatro presentaron cromosomas de
pequeo tamao que variaban en nmero de 0 a 5. Las tres poblaciones de Rhamdia
quelen analizadas por Fenocchio (1993) presentaron pequeos cromosomas B, cuyos
individuos presentaban variacin en relacin a la presencia de estos cromosomas (0 a
1). El estudios realizado por Valcarcel et al. (1993) en Rhamdia sapo tambin ha
puesto en evidencia la presencia de un pequeo cromosoma B en el cariotipo de esta
especie. En los dems gneros de la familia Heptapteridae, hasta el momento, apenas
Pimelodella kronei, present un microcromosoma B en su cariotipo (Almeida-Toledo et
al., 1992). De la familia Pimelodidae apenas Bergiaria westermani present de 0 a 5
pequeos cromosomas supernumerarios (Dias y Foresti, 1993).
Respecto al estudio de la frecuencia de cromosomas Bs con relacin a la
altitud, Porto-Foresti et al. (1997), al analizar ejemplares de Astyanax scabripinnis
paranae en diferentes altitudes de Crrego da Cascatinha (Botucatu, SP, Brasil),
observaron que 65,7% de los ejemplares examinados en el primer trecho (880 m de
altitud) present 1 cromosoma B; 10,0% de los ejemplares del segundo trecho (860 m)
era portadores de supernumerarios y 10,0% de los ejemplares del tercer trecho (820
m) posean 1 cromosoma B. Estos resultados sugieren la existencia de un posible
efecto adaptativo conferido por estos cromosomas en los animales principalmente del
primer trecho.
Hay algunas caractersticas muy interesantes que destacan en los estudios de
cromosomas B en peces. As, de 55 ejemplares de Astyanax scabripinnis estudiados
por Rocon-Stange y Almeida-Toledo (1993), 36 eran machos, y entre stos 34
presentaron cromosomas B. Mientras que en las hembras, no fueron encontrados
cromosomas supernumerarios. De 56 ejemplares de Astyanax scabripinnis portadores
de cromosomas B estudiados por Fauaz et al. (1994), uno se present triploide,
siendo el nico ejemplar que present dos cromosomas B. Tales cromosomas B
fueron idnticos en tamao y forma.
39

Estudios sobre la constitucin molecular de los cromosomas B en peces han

sido realizados con pocas especies hasta ahora, aunque los datos disponibles son
muy interesantes. As, en Astyanax scabripinnis, el trabajo realizado por Mestriner et
al. (2000), mostr que los macrocromosomas B de una poblacin de esta especie
estaban constituidos casi enteramente por una secuencia satlite de apenas 51 pares
de bases, encontrada tambin en algunos cromosomas A. Con base en la distribucin
de este ADN satlite en los cromosomas B y en los resultados obtenidos mediante el
anlisis del complejo sinaptonmico de estos individuos con B, los autores sugirieron
que los macrocromosomas B en A. scabripinnis podran ser isocromosomas derivados
de cromosomas del complemento A. La presencia de secuencias satlites,
compartidas con cromosomas A, tambin fue demostrada en los microcromosomas B
de Prochilodus lineatus (Jesus et al., 2003).
Los estudios moleculares realizados con los macrocromosomas B de Alburnus
alburnus mostraron que stos estaban constituidos por secuencias repetidas que
presentaron grandes homologas con un retrotransposn identificado en Drosophila
(llamado Gypsy/Ty3) y en Oryzias latipes (Ziegler et al., 2003). Otra caracterstica
interesante de esta secuencia es que ella est presente apenas en los cromosomas B
de A. alburnus y no en los cromosomas A. Los resultados obtenidos por Ziegler et al.
(2003) sugieren que los cromosomas B de A. alburnus no derivaron de cromosomas
A, pero s evolucionaron independientemente.

40

Tabla 1. Lista de especies Neotropicales que poseen cromosomas supernumerarios.

Familia/especie

Individuos Individuos
analizados
con Bs

2n

Nmero
de Bs

Tamao

Tipo

Referencia

ANOSTOMIDAE
Leporinus friderici
Leporinus aff. friderici
Leporinus sp

16
2
3

1
1
1

54
54
54

1
1
1

micro
micro
micro

a
a
a

27
27
27

CHARACIDAE
Astyanax eigenmanniorum
A. scabripinnis
A. scabripinnis
A. scabripinnis
A. scabripinnis paranae
Characidium cf. zebra
Moenkhausia intermedia
M. sanctafilomenae
Oligosarcus pintoi
Piabina argentea

3
55
32
74
17
28
14
30
19
12

1
34
28
56
3
1
8
30
2
1

50
50
50
50
50
50
50
50
50
52

0-1
0-4
0-2
0-2
0-1
0-1
0-1
1-8
0-1
0-1

grande
micro
grande
grande
grande
pequeo
pequeo
micro
grande
pequeo

22
19
20
8
13
14
18
11
7
26

10

3x=81

pequeo

25

17
11

1
3

54
54

1
0-2

micro
pequeos

24
15

PARODONTIDAE
Apareidon piracicabae

20

54

0-1

grande

PROCHILODONTIDAE
Prochilodus cearensis
P. lineatus
P. lineatus
P. lineatus
P. mariae

7
62
185
147
21

5
61
171
146
16

54
54
54
54
54

0-2
0-5
0-7
0-7
0-3

micro
micro
pequeo
micro
micro

m,sm, a
m
m

17
17
3
28
29

CALLICHTHYDAE
Corydoras aeneus
Callichthys callichthys

33
27

9
18

60
58

0-3
0-16

pequeo
mdio

M/sm

16
6

HEPTAPTERIDAE
Iheringichthys labrosus
Pimelodella kronei

4
8

56
58

0-2
0-1

micro
micro

4
1

Rhamdia hilarii

51

50

58

0-5

pequeo

10

CURIMATIDAE
Cyphocharax modesta
(citada como Curimata
modesta)
Cyphocharax modesta
Steindachnerina insculpta

m
m
m
a
m

41

Familia/especie
R. quelen
R. sapo

Individuos Individuos
analizados
con Bs
30
13
12
3

2n
58
58

Nmero
de Bs
0-2
0-1

Tamao

Tipo

Referencia

pequeo
pequeo

A/m

12
23

LORICARIIDAE
Hisonotus leucofrenatus

34

54

0-2

grande

PIMELODIDAE
Bergiaria westermani

56

0-5

pequeo

POECILIDAE
Poecilia formosa

46

0-1

micro

21

CICHLIDAE
Gymnogeophagus balzanii
4
3
48
0-4
micro
m=metacntrico; m/sm=metacntrico o submetacntrico; a=acrocntrico

Referencias:
1. Almeida Toledo et al. (1992); 2. Andreata et al. (1993); 3. Cavallaro et al. (2000); 4. Dias y Foresti
(1990); 5. Dias y Foresti (1993); 6. Erdtmann et al. (1990); 7. Falco et al. (1984); 8. Fauaz et al.
(1994); 9. Feldberg y Bertollo (1984); 10. Fenocchio y Bertollo (1990); 11. Foresti et al. (1989); 12.
Hochberg y Erdtmann (1988); 13. Maistro et al. (1994b); 14. Miyazawa (1991); 15. Oliveira y Foresti
(1993); 16. Oliveira et al. (1988b); 17. Pauls y Bertollo (1990); 18. Portela et al. (1988); 19. RoconStange y Almeida-Toledo (1993); 20. Salvador y Moreira-Filho (1992); 21. Sola et al. (1993); 22.
Stripeck et al. (1985); 23. Valcarcel et al. (1993); 24. Vnere (1991); 25. Vnere y Galetti Jr. (1985);
26. Wasko et al (1996); 27. Vnere et al., (1996); 28. Oliveira et al. (1997); 29. Oliveira et al.
(2003a).

42

CROMOSOMAS SEXUALES
Los cromosomas sexuales son conocidos para aproximadamente 50 especies
y/o poblaciones locales de peces de la regin Neotropical, incluyendo 36 informes de
heterogamia femenina y 20 informes de heterogamia masculina (Tabla 3). Para cuatro
casos, ms de un tipo de mecanismo cromosmico de determinacin sexual ha sido
identificado. Sin embargo, este porcentaje constituye una subestimacin, toda vez que
se ha demostrado ms recientemente que especies cuyos cromosomas sexuales son
aparentemente indistinguibles morfolgicamente, pero presentan bloques de
heterocromatina constitutiva limitados a un solo sexo cuando se analizan por la
tcnica de bandeo C (Almeida-Toledo et al., 1988b).
Segn los estudios realizados por Singh et al. (1980), en cromosomas sexuales

Fig. 10. Cariotipo de Triportheus venezuelensis (Characiformes, Triportheinae) mostrando

la presencia de um sistema cromosmico de determinacin del sexo del tipo ZZ/ZW.
Hembra (A), Macho (B)

de serpientes, el primer estadio en la diferenciacin entre los cromosomas Z y W en

este grupo es el desarrollo de secuencias de ADN altamente repetitivas en el
cromosoma W. La presencia de regiones heteromrficas resulta en una restriccin en
el proceso de recombinacin entre los originalmente homlogos, aislando la regin
que incluye genes involucrados en la determinacin.
43

Los casos de diferenciacin sexual en peces Neotropicales han sido

progresivamente informados desde las primeras descripciones en los gneros Hoplias
(Bertollo, 1978), Eigenmannia (Almeida-Toledo, 1978), Leporinus (Galetti Jr., 1979) y
Apareidon (Moreira-Filho et al., 1980).
Cinco diferentes sistemas de determinacin sexual han sido detectados en peces
Neotropicales: ZZ/ZW, XX/XY, X1X1X2X2/X1X2Y, XX/XY1Y2 y ZZ/ZW1W2 (Tabla 2),
cada uno caracterizndose por determinadas lneas generales de eventos evolutivos.
As, la diferenciacin del sistema ZW est frecuentemente correlacionada con
mecanismos de heterocromatizacin, mientras que la evolucin de sistemas mltiples
resulta de reordenaciones estructurales de cromosomas, principalmente del tipo
translocacin. En los casos donde hay cromosomas XY, el cromosoma Y exhibe, en
general, un tamao menor que el X en la mayora de los casos estudiados, y no se
evidencia una aparente heterocromatinizacin del Y (Bertollo et al., 1990).

Fig. 11. Cariotipo de Pseudotocinclus tietensis (Siluriformes, Loricariidae) mostrando la

presencia de un sistema cromosmico de determinacin sexual de tipo XX/XY. Cariotipos
preparados y cedidos por Adriana Kazue Takako.

En la familia Loricariidae, han sido descritos los sistemas de determinacin

sexual del tipo XX/XY y ZZ/ZW (Tabla 2). Particularmente en la subfamilia
Hypoptopomatinae fue descrita la ocurrencia de un sistema ZZ/ZW, con un
44

cromosoma W portando un segmento heterocromtico diferencial, en las especies

identificadas como Hisonotus leucofrenatus y en Hisonotus sp (Andreata et al., 1993,
1999) y un sistema XX/XY, con el cromosoma Y portando un segmento
heterocromtico diferencial, en Pseudotocinclus tietensis (Andreata et al., 1992).
En el gnero Eigenmannia, tres diferentes situaciones han sido descritas: la
presencia de un sistema ZZ/ZW, la presencia de un sistema X1X1X2X2/X1X2Y y la
ausencia de cromosomas sexuales diferenciados (Foresti, 1987). La ocurrencia de
diferentes mecanismos de cromosomas sexuales en especies de un mismo gnero
sugiere que esta caracterstica debe haberse desarrollado independientemente, en
varios momentos, en diferentes grupos.
A pesar del gran nmero de especies de bagres a las que se les ha
determinado el cariotipo, han sido pocos los casos donde hubo evidencia de
heterogamia, probablemente debido a la dificultad de obtener preparaciones
cromosmicas, principalmente bandas C de buena calidad. Entre los Hepapteridae
apenas dos casos de cromosomas sexuales han sido descritos hasta el momento.
Pimelodella sp del Ro Mogui-Guau (Dias, 1987) present un nmero cromosmico
2n = 46, tanto para machos como para hembras, aunque en el cariotipo masculino fue
evidenciado un par heteromrfico formado por un submetacntrico grande,
posiblemente el X y por un cromosoma submetacntrico pequeo, probablemente el
Y. Un mecanismo de determinacin del sexo del ZZ/ZW fue sugerido para Imparfinis
mirini con base en datos obtenidos a travs de bandeo C, una vez que todas las
hembras analizadas presentaron un par heteromrfico con un bloque adicional de
heterocromatina (Vissotto et al., 1997).
El estudio de dos poblaciones de Eigenmannia virescens involucrando diversas
tcnicas citogenticas mostr que, mientras los animales de una poblacin no
presentaban cromosomas sexuales, en los individuos de otra poblacin haba un
sistema XX/XY de determinacin del sexo (Almeida-Toledo et al., 2001). En el trabajo
citado, los autores discuten la hiptesis de que los cromosomas sexuales observados
pueden representar un caso de diferenciacin inicial de cromosomas sexuales. La
presencia de poblaciones con diferentes sistemas cromosmicos de determinacin del
sexo ha sido verificada tambin en Apareiodon affinis (Jorge y Moreira-Filho, 2000).
Recientemente fueron encontradas dos especies del gnero Parodon, P.
tortuosus y Parodon sp. viviendo en simpatra y sintopia en un pequeo riachuelo en
el municipio de So Bento do Sapuca (So Paulo, Brasil). La caracterizacin
citogentica de estas especies mostr que ambas presentaban el mismo nmero de
cromosomas aunque P. tortuosos no presentaba cromosomas sexuales; la nueva
especie Parodon sp. presentaba un sistema ZZ/ZW de cromosomas sexuales
(Centofante et al., 2002).

45

Ms recientemente, han sido usadas enzimas de restriccin en el anlisis de

secuencias satlites de ADN en el estudio de los cromosomas sexuales en peces, con
resultados bastante significativos. En Poecilia reticulata, un par de cromosomas fue
identificado como un par sexual del tipo XX/XY por coloracin especfica de
heterocromatina constitutiva (bandas C). Todos los machos analizados exhibieron en
el cromosoma Y una gran regin telomrica heterocromtica. Una sonda que contena
nuecletidos en el orden GACA revel la existencia de secuencias repetitivas
especficas del cromosoma Y en machos de poblaciones naturales. La hibridacin in
situ de esta serie, ahora marcada con biotina, en cromosomas metafsicos de machos
de Poecilia reticulata, localiz las repeticiones GACA en la regin heterocromtica del
cromosoma Y, anteriormente revelada mediante la tcnica de bandeo C (Nanda et al.,
1990). De esta manera se confirm la relacin de las sucesiones GACA, localizadas
en la porcin heterocromtica del cromosoma Y, con la determinacin del sexo en
esta especie de pez.
El estudio de secuencias de ADN clonadas de individuos de sexo femenino de
la especie Leporinus elongatus (con cromosomas ZW) permitieron la identificacin de
una secuencia especfica de los cromosomas W, llamada L46 (Nakayama et al.,
1994). Experimentos de hibridacin in situ de esta secuencia con los cromosomas de
L. elongatus mostraron que la misma estaba presente apenas en los cromosomas W.
Por otro lado, experimentos de hibridacin en membrana mostraron que en todas las
hembras se presentaba esa secuencia, lo que condujo a los autores del estudio a
sugerir la posible existencia de ms de un tipo de cromosoma W en esta especie.
El estudio de secuencias satlites de Parodon hilarii, acompaado del anlisis
de bandas C y G, mostr que haba una secuencia compuesta de 200 pares de bases
que estaba presente en los autosomas y en los cromosomas sexuales (Vicente et al.,
2003). Los anlisis permitieron a los autores sugerir que el cromosoma W de esta
especie se origin luego de varios eventos de duplicacin de una pequea regin
heterocromtica presente en el brazo corto de un cromosoma similar al cromosoma Z.
Un estudio ms detallado de un mayor nmero de especies de peces podra
brindar informacin interesante, en el sentido de entender mejor la heterogeneidad en
cuanto a los mecanismos de determinacin sexual y los procesos evolutivos
involucrados en tales diferenciaciones.

46

Tabla 2. Casos de heterogamia cromosmica descritos en peces Neotropicales

y mtodos de anlisis utilizados en su identificacin.
Especie

2n

Sistema
Cromosmico

Tipo de
Anlisis

Ref.

CHARACIFORMES
ANOSTOMIDAE
Leporinus cf. bruneus
Leporinus conirostris
Leporinus elongatus
Leporinus cf. elongatus
Leporinus macrocephalus
Leporinus obtusidens
Leporinus reinhardti
Leporinus trifasciatus

54
54
54
54
54
54
54
54

54
54
54
54
54
54
54
54

ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW

G,C,F
G,C
G,C,F
G,C,F
G,C
G,C,F
G,C,F
G,C,F

32
43
14, 15
14
15
14, 15
14,15
32,43

CHARACIDAE
Cheirodon notomelas
Cheirodon sp
Odontostilbe cf. microcephala
Triportheus albus
Triportheus elongatus
Triportheus cf. elongatus
Triportheus flavus
Triportheus guentheri
Triportheus paranensis (MT)
Triportheus paranensis (MS)
Triportheus paranensis (Argentina)
Triportheus signatus

52
52
52
52
52
52
52
52
52
52
52
52

52
52
52
52
52
52
52
52
52
52
52
52

ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW

G
G
G
G,C
G,C
G,C,H,F
G,C
G,CH,F
G,C,H,F
G,C,H,F
G,C
G,C

33
33
38
11
11
29,44
11
5,29,44
29,44
29,44
42
11

CRENUCHIDAE
Characidium cf. fasciatum
Characidium gomesi

50
50

50
50

ZZ/ZW
ZZ/ZW

G,C
G,C

25
39

CURIMATIDAE
Potamorhina squamoralevis

102 102

ZZ/ZW

G,C

34

ERYTHRINIDAE
Erythrinus erythinus
Hoplias cf. lacerdae
Hoplias cf. malabaricus (Vale R. Doce)
Hoplias cf. malabaricus (rio Ribeira)
Hoplias cf. malabaricus (Alto Paran)
Hoplias cf. malabaricus (rio Aripuan)

52
50
42
42
40
40

51 X1X1X2X2/X1X2Y
G,M,C
50,51
50
XX/XY
G,C
6
42
XX/XY
G,C,M,H,F,B 7,46
42
XX/XY
G,M
7
39 X1X1X2X2/X1X2Y G,C,M,B
8,9,45
41
XX/XY1Y2
G,M
8

GASTEROPELECIDAE
Thoracocharax cf. stellatus

52

52

ZZ/ZW

G,C

40

PARODONTIDAE
47

Especie

2n

M
54
54
54

Sistema
Cromosmico
ZZ/ZW1W2
ZZ/ZW
ZZ/ZW

Tipo de
Anlisis
G,C,F
G,C,H,F,B
G,C,H

Ref.
17,48
18,47
41

Apareiodon affinis
Parodon hilarii
Parodon sp

F
55
54
54

PROCHILODONTIDAE
Semaprochilodus taeniurus

54

54

ZZ/ZW

G,C

12

SILURIFORMES
DORADIDAE
Opsodoras sp

58

58

ZZ/ZW

G,C,F

31,32

HEPAPTERIDAE
Pimelodella sp
Imparfinis mirini

46
58

46
58

XX/XY
ZZ/ZW

G
C

10
35

LORICARIIDAE
Hypostomus ancistroides
Hypostomus macrops
Hypostomus sp
Hisonotus leucofrenatus
Hisonotus sp
Pseudotocinclus tietensis
Loricariichthys platymetopon

68
68
64
54
54
54
54

68
68
64
54
54
54
54

XX/XY
XX/XY
ZZ/ZW
ZZ/ZW
ZZ/ZW
XX/XY
ZZ/ZW

G
G
G,C
G,C
G,C
G,C
G,C

16
16
26
4
37
3
27

GYMNOTIFORMES
STERNOPYGIDAE
Brachyhypopomus pinnicaudatus
Eigenmannia virescens
Eigenmannia virescens
Eigenmannia sp.
Hypopomus sp

38
32
42

- X1X1X2X2/X1X2Y
XX/XY
38
ZZ/ZW
31 X1X1X2X2/X1X2Y
41 X1X1X2X2/X1X2Y

G,C,H,F
G,C
G,C
G,C,M,F
G,C

36
2
13
1,49
28

CYPRINODONTIFORMES
CYPRINODONTIDAE
Espcies Mexicana annims

48

47 X1X1X2X2/X1X2Y

G,M

22

GOODEIDAE
Espcies Mexicana annimas

48

47 X1X1X2X2/X1X2Y

G,M

23

POECILIIDAE
Poecilia reticulata
Gambusia p. puncticulata

__
48

__
48

XX/XY
ZZ/ZW

G,C,H
G,M

19
21

PERCIFORMES
ELEOTRIDIDAE
Dormitador maculatus

48

48

XX/XY

G,M

20

GOBIIDAE
Awaous strigatus

46

45 X1X1X2X2/X1X2Y

G,C

30
48

Especie
CLULPEIFORMES
CLUPEIDAE
Brevoortia aurea

46

2n

Sistema
Cromosmico

45 X1X1X2X2/X1X2Y

Tipo de
Anlisis

Ref.

G,M

24

G = coloracin convencional con Giemsa; C = banda C; M = anlisis de meiosis; H = hibridacin in situ;

F = fluorocromo; B= banda G y/o R; M = macho; F = hembra.

Referencias:
1. Almeida-Toledo et al. (1984); 2. Almeida-Toledo et al. (1988b); 3. Andreata et al. (1992);
4. Andreata et al. (1993); 5. Bertollo y Cavallaro (1992); 6. Bertollo et al. (1978); 7. Bertollo
et al. (1979); 8. Bertollo et al. (1983); 9. Bertollo et al. (1997); 10. Dias y Foresti (1993); 11.
Falco (1988); 12. Feldberg et al. (1987); 13. Foresti (1987); 14. Molina et al. (1998); 15.
Galetti Jr. y Foresti (1987); 16. Michele et al. (1977); 17. Moreira-Filho et al. (1980); 18.
Moreira-Filho et al. (1993); 19. Nanda et al. (1990); 20. Oliveira y Almeida-Toledo (1985);
21. Rab (1984); 22. Uyeno y Miller (1971); 23. Uyeno y Miller (1972); 24. Brum et al. (1992);
25. Maistro et al. (1998b); 26. Artoni et al. (1998); 27. Scavone y Jlio Jr. (1995); 28.
Almeida-Toledo et al. (1995); 29. Artoni et al. (2001); 30. Souza et al. (1998); 31. Vnere y
Galetti Jr. (1998); 32. Vnere (1998); 33. Nishiyama y Martins-Santos (1996); 34. Navarrete
y Jlio Jr. (1996); 35. Vissoto et al. (1997); 36. Almeida-Toledo et al. (1998); 37. Andreata et
al. (1999); 38. Sato y Martins-Santos (1999); 39. Centofante et al. (2001); 40. Carvalho et
al. (2002); 41. Centofante et al. (2002); 42. Sanchez y Jorge (1999); 43. Galetti Jr. et al.
(1995); 44. Artoni (1999); 45. Bertollo y Mestriner (1998); 46. Born y Bertollo (2000); 47.
Vicente et al. (2003); 48. Jesus y Moreira-Filho (2000); 49. Almeida-Toledo et al. (2000); 50.
Bertollo et al. (2002); 51. Silvestro y Margarido (2001).

49

EVOLUCIN CROMOSMICA
Los cariotipos pueden sufrir transformaciones estructurales (duplicaciones,
delecciones, inversiones) y numricas (fusiones, fisiones y poliploida) que alteran su
estructura y generan nuevos genes o nuevas combinaciones de genes (Figura 12).
En las ltimas tres dcadas se ha acumulado una considerable cantidad de
informacin sobre el papel evolutivo de los rearreglos cromosmicos. En ese sentido,
fueron presentados modelos tericos, tanto sobre el papel de los rearreglos
cromosmicos en la especiacin (Modelos de Especiacin Cromosmica) as como
tambin sobre la funcin adaptativa de las alteraciones cromosmicas (Modelo de
Canalizacin).
El significado de los rearreglos cromosmicos en la evolucin es un tema
controversial toda vez que, por un lado, las mutaciones cromosmicas no pueden ser
consideradas como condicin sine qua non para la especiacin y, por el otro, el hecho
de que muchas especies ntimamente relacionadas y tambin muy semejantes
poseen cariotipos diferentes, constituye una fuerte evidencia de que, por lo menos en
algunos, y tal vez en la mayora de los eventos de especiacin, una reestructuracin

Fig. 12. Esquema de evolucin cromosmica

cromossomica cromosmica.

de los cariotipos estara involucrada (Baker y Bikcham, 1986).

50

Esa alta incidencia de especies ntimamente relacionadas con cariotipos

diferentes estimul la idea de que los rearreglos cromosmicos pueden ser la causa
primaria del aislamiento reproductivo (Sites y Moritz, 1987). Evidencias en ese sentido
llevaron a proponer varios Modelos de Especiacin Cromosmica, en los cuales el
objetivo principal de las discusiones es la determinacin del modo por el cual esos
rearreglos podran crear barreras reproductivas entre poblaciones.
Sites y Moritz (1987) dividieron los modelos cromosmicos de especiacin en
tres clases:
Clase I: abarca los modelos en los cuales el efecto de rearreglos individuales
disminuye la fertilidad de los heterocigotos por alteracin de los patrones de
segregacin en la meiosis. Los modelos que asumen tal premisa difieren por el
contexto geogrfico que presuponen y por la manera segn la cual los nuevos
rearreglos se distribuyen y fijan en la poblacin. Todos los modelos de esta clase
admiten rearreglos que son individualmente recesivos y todos enfrentan la misma
paradoja: La ms eficiente de las alteraciones cromosmicas que servira como
barrera al flujo gnico es al mismo tiempo la que presenta la menor probabilidad de
sobrevivir y de fijarse dentro de una poblacin.
Clase II: el modelo admite mltiples fusiones cntricas involucrando diferentes pares
cromosmicos en diferentes poblaciones, donde cada una puede causar poca o
ninguna anomala en la meiosis, fijndose en un deme de tamao moderado por una
deriva gentica poco eficiente. Su papel slo se torna evidente cuando ocurre
contacto secundario entre poblaciones que tengan, en la forma fijada, combinaciones
diferentes pero que involucren algunos brazos cromosmicos en comn. En este
caso, los hbridos mostrarn una fuerte reduccin en la fertilidad. En contraste con los
modelos de la clase I, un hecho nuevo en el modelo de clase II es que los rearreglos
cromosmicos implicados en el proceso de especiacin pueden ser neutros o casi
neutros;
Clase III: el modelo admite que la barrera al flujo gnico deriva de la modificacin de
complejos gnicos coadaptados por alteraciones en los patrones de recombinacin de
los hbridos F1 cromosmicamente heterocigotos. El modelo sugiere que alteraciones
cromosmicas que modifican los patrones de recombinacin (tales como inversiones
pericntricas), se fijan en la poblacin. En cada poblacin, un grupo de ligamiento
distinto, adaptado a un determinado ambiente es gradualmente seleccionado. Hbridos
formados como consecuencia de un contacto secundario muestran alteraciones en la
localizacin de los quiasmas en los bivalentes estructuralmente heterocigotos y eso
acaba rompiendo el balance interno de los cromosomas.
Los modelos se diferencian bsicamente en dos aspectos: la naturaleza de la
barrera al flujo gnico y la estructura poblacional de la especie. La aplicacin de la
teora de gentica de poblaciones en los modelos de especiacin cromosmica
51

(revisada por Sites y Moritz, 1987), sugiere que la especiacin cromosmica va

rearreglos individualmente recesivos (clase I) requiere demes muy pequeos (N<10) y
genticamente aislados. Los dems modelos de especiacin (clases II y III) presentan
una gran variacin en el tamao de las poblaciones requeridas y en los parmetros de
flujo gnico, pero son facilitados por la deriva gentica.
Con relacin a los modelos de las clases II y III, Walsh (1982) confirm
especulaciones iniciales de White (1978b) en relacin a que el aislamiento
reproductivo tiene mayores probabilidades de resultar de un cmulo de varios
rearreglos dbilmente recesivos que de una nica mutacin cromosmica altamente
recesiva. Adems de eso, si algn rearreglo ocurre reiteradamente, su probabilidad de
fijarse aumentar (Shaw et al., 1983).
Bush (1981) propuso que elementos transponibles podran ser los
responsables por el fenmeno antes citado. Esta teora es apoyada por los datos
obtenidos en el estudio de los sndromes de disgenesia que ocurren en hbridos de
Drosophila melanogaster (Engels y Preston, 1984). Tambin la ocurrencia de varios
tipos de stress genmico puede, aparentemente, inducir rearreglos cromosmicos
(McClintock, 1984); y un intenso endocruzamiento asociado a eventos de colonizacin
puede, posiblemente, ocasionar los mismos efectos.
Los modelos cromosmicos de especiacin pueden ser probados de varias
maneras: 1- observacin directa del comportamiento de los cromosomas en la meiosis
de hbridos o heterocigotos; 2- evaluacin del contexto geogrfico donde ocurri la
especiacin; 3- evaluacin de la estructura poblacional del taxn en cuestin; 4examen de la estructura gentica esperada en las poblaciones descendientes.
Otro modelo bastante discutido sobre el papel evolutivo de los rearreglos
cromosmicos es el Modelo de Canalizacin, propuesto por Bickham y Baker (1979),
que considera el cariotipo como una variable significativa en la "estrategia adaptativa"
de un organismo, siendo que para cada "zona adaptativa" hay un cariotipo ptimo que
puede ser alcanzado por mutaciones cromosmicas. Este modelo propone la
ocurrencia de tres fases durante la diversificacin de un grupo, despus de la invasin
de una nueva "zona adaptativa": fase 1- los individuos estn inicialmente mal
adaptados, morfolgica y cariotpicamente, a un nuevo ambiente; en esa fase, ocurre
una rpida diversificacin morfolgica y cromosmica, incluyendo rearreglos,
principalmente no-Robertsonianos, que alteran los grupos de ligacin de los genes y
pueden afectar sus procesos regulatorios; fase 2- ocurren modificaciones ms
restringidas en la organizacin del cariotipo (canalizacin), debido principalmente a
rearreglos Robertsonianos o fusiones punta-a-punta que no alteran ntidamente el
orden gnico y el patrn de bandas; fase 3- se llega a una estabilidad cariotpica
debido a que el cariotipo alcanz una configuracin optimizada; en esta fase la
evolucin y la especiacin se procesan primeramente por medios que no involucran
52

alteraciones cariotpicas. El principio ms importante del Modelo de Canalizacin es

que el cariotipo contribuye significativamente en la adaptabilidad de los individuos y
que, para un determinado conjunto de parmetros biolgicos dentro de un linaje, hay
un cariotipo ptimo (Sites y Moritz, 1987).
Bickham y Baker (1979) destacan dos predicciones del Modelo de
Canalizacin: 1- diferencias cromosmicas en niveles taxonmicos altos deberan ser
numerosas y primeramente del tipo no-Robertsoniano; y 2- debera haber una
correlacin inversa entre la edad de un grupo y su variabilidad cariotpica. Sites y
Moritz (1987) colocan otras dos consecuencias del Modelo de Canalizacin: 3rearreglos no-Robertsonianos deberan ser la principal forma de alteracin
cromosmica en caso que est sufriendo un proceso de radiacin adaptativa; 4- casos
cuyos cariotipos difieren por numerosos rearreglos no-Robertsonianos deberan
tambin diferir en fenotipo y/o patrn de utilizacin de recursos del medio.
Varias objeciones fueron levantadas con relacin a esas predicciones
(resumidas en Sites y Moritz, 1987): con relacin a la prediccin 1, los estudios de
varios grupos de primates no muestran la distribucin jerrquica predicha en las
alteraciones cromosmicas; en realidad hay poca regularidad en el tipo de
alteraciones que ocurren dentro y entre familias. Con relacin a la prediccin 3, es
difcil determinar si un determinado grupo est sufriendo un proceso de radiacin; y,
en general, los grupos que aparentemente estn en esa situacin presentan poca
regularidad en los tipos de alteraciones cromosmicas encontradas. Con relacin a la
prediccin 4, hay algunos gneros en que especies ntimamente relacionadas difieren
radicalmente en la constitucin cariotpica, an cuando esas especies no parezcan
haber divergido en forma o nicho ecolgico.
A pesar de que todas las excepciones antes mencionadas son importantes, el
Modelo de Canalizacin es difcil de verificar, y, en los casos en que eso fue posible,
los datos empricos parecen no apoyar el Modelo. Sin embargo, hay pocos conjuntos
de datos adecuados disponibles para probar esa hiptesis y solamente nuevos
estudios podrn evaluarla mejor (Sites y Moritz, 1987).
Otra interpretacin sobre el papel de las alteraciones cromosmicas durante la
evolucin fue propuesta por Dutrillaux y Rumpler (1987). Los autores parten de la idea
segn la cual el nmero de segregaciones meiticas posibles de los cromosomas
paternos y maternos es 2n (n= nmero haploide de cromosomas). En los mamferos
euterios el nmero haploide puede ser muy diferente en especies, gneros o familias
relacionadas. Por ejemplo, en Cercopithecidae, las especies con valores ms altos
(n=36) realizan 215= 32.768 veces ms combinaciones genticas que aqullas con
valores ms bajos (n=21). Ya que el nmero de quiasmas, vara entre especies y es
proporcional al nmero haploide de brazos del cariotipo (NF/2), el aumento o la
disminucin de n y NF/2, aumenta o disminuye respectivamente la recombinacin
53

gnica. De esta forma los cariotipos con un gran nmero de cromosomas y alta tasa
de recombinacin pueden dificultar una evolucin dicotmica, por el hecho de poder
suprimir, en pocas generaciones, la ligacin de la mayora de los grupos de alelos
mutantes que podran tener un papel en la especiacin. Por otro lado, cariotipos con
nmeros cromosmicos bajos y baja tasa de recombinacin quebraran menos
frecuentemente los grupos de alelos mutantes, y la ocurrencia de grupos de nuevos
caracteres seria menos improbable.
Un tipo de Especiacin Cromosmica que fue reconocido como modelo distinto
hace cerca de 60 aos es el origen de los organismos poliploides (White, 1978a).
Como los individuos poliploides estn reproductivamente aislados de sus ancestrales
no poliploides, la poliploida representa una forma de especiacin casi instantnea
(Orr, 1990).
Desde el punto de vista evolutivo, la poliploida es mucho ms comn entre
especies de plantas que entre animales. En animales, la poliploida parece estar
restringida a formas hermafroditas y partenogenticas, a pesar de conocerse algunos
casos genuinos en grupos bisexuales (White, 1978a; Orr, 1990).
En su evaluacin final, Sites y Moritz (1987) concluyen que nuestro
conocimiento del origen y del significado evolutivo de las alteraciones cromosmicas
es muy fragmentado para poder hacer inferencias sobre cul es la principal
consecuencia de esas alteraciones cromosmicas en la cladognesis y en la
divergencia filtica, siendo necesarios nuevos y ms completos estudios para
solucionar las dudas que todava existen.

54

CITOGENTICA EVOLUTIVA DE PECES

Los estudios cariotpicos en peces han estado restringidos, de un modo
general, a la caracterizacin del nmero cromosmico de las especies (Gold, 1979;
Sola et al., 1981; Yu et al., 1987; Oliveira et al., 1988a; Klinkhardt et al., 1995), aunque
intentos de anlisis de modelos de evolucin, utilizando datos de gentica y
citogentica de peces, han sido realizados por Avise y Gold (1977) y Gold (1980).
Una gran dificultad encontrada en el estudio de la evolucin cromosmica de
los peces se debe al hecho de no conocer el valor adaptativo conferido a una especie
por un cariotipo dado. Pocos estudios se han realizado utilizando este enfoque.
Un importante trabajo dentro de esta lnea de investigacin fue realizado por
Vasiliev (1980) con Spicara flexuosa. Tres nmeros cromosmicos son encontrados
en esta especie: 2n=46, 45 y 44, siendo esa variacin debida a un rearreglo
Robertsoniano. Una muestra de 120 especmenes fue dividida en 13 grupos, de
acuerdo con la longitud del cuerpo y en cada grupo fue analizada la frecuencia relativa
de individuos con los nmeros cromosmicos mencionados. Los resultados muestran
que hay un aumento significativo de la frecuencia de cariotipos con 2n=44 y
consecuentemente un descenso de la frecuencia de cariotipos con 2n=46 e 45 con
relacin al aumento de longitud. Estos resultados, segn el autor, indican que la
seleccin debe actuar en favor de la forma con 44 cromosomas. El gran cambio en la
frecuencia de los citotipos se encontr en los grupos con menor longitud (hasta 8,5
cm), correspondiendo al primer ao de vida de S. flexuosa. As, la presin selectiva
contra los citotipos con 2n=45 y 46 no parece ser constante durante el ciclo de vida de
la especie. Vasiliev (1980) discute cul es el tipo de polimorfismo que debe estar
involucrado, si direccional o balanceado. Como las frecuencias de los citotipos
variaran regularmente entre las generaciones, podra esperarse que despus de
algn tiempo la poblacin presentara solamente especmenes con 2n=44. Por otro
lado, existe una buena correspondencia entre las frecuencias observadas y
esperadas, de acuerdo al principio de Hardy-Weinberg. Esto no prueba que el
polimorfismo sea balanceado, pero en el contexto de otros hechos es importante. En
S. flexuosa es tpico el hermafroditismo de tipo protogino. As, los individuos ms
jvenes son casi todas hembras y los ms viejos casi todos machos: con un ao de
vida, 93% de los ejemplares son hembras y 7% son machos, y con dos o tres aos,
esas frecuencias son inversas. De este modo, cuando los grupos ms jvenes se
cruzan con los ms viejos las formas cromosmicas 2n=45 y 46 son repuestas,
reaparecindo con alta frecuencia en la poblacin. Como resultado, el efecto de
seleccin est compensado por el sistema de cruzamiento, parcial o completamente.

55

Turner et al. (1985), trabajando con varias muestras de Ilyodon furcidens de un

pequeo sistema de ros de la cuenca del Rio Coahuayana (centro-sur de Mxico),
encontraron una extensa variacin intraespecfica. Esta variacin parece involucrar de
dos a ocho pares de cromosomas y parece ser debida a rearreglos no
Robertsonianos. La distribucin de los citotipos en la Cuenca del Ro Coahuyana
muestra una variacin clinal con respecto al nmero de cromosomas metacntricos.
Hbridos intercitotipos obtenidos en el laboratorio (F1, retrocruzamientos y F2) son
completamente viables y son indistinguibles, en cuanto a la fertilidad, de stocks
derivados de una nica poblacin. Esos resultados, sumados a los datos de los
patrones de distribucin de aloenzimas, sugieren que los rearreglos cromosmicos no
funcionan en este caso como un mecanismo eficiente de aislamiento. As, la evolucin
cromosmica ocurrida en I. furcidens no llev aparentemente a la especiacin. Sin
embargo, nuevos datos son requeridos para confirmar o no esta propuesta.
Entre los Cyprinidae y los Centrarchidae, los datos sobre estabilidad cariotpica
sugieren que la especiacin en peces podra haber ocurrido, muchas veces, en
ausencia de rearreglos cromosmicos (Gold, 1979). Mientras tanto, esos datos
solamente pueden ser considerados interesantes, una vez que importantes
alteraciones cromosmicas estructurales podran haber ocurrido en niveles no
detectables, debido a la baja resolucin de las tcnicas citogenticas utilizadas. En
efecto, la localizacin de las NORs mediante las tcnicas de marcacin con plata
(Gold, 1984) mostr que existe variacin en los patrones de marcacin entre seis
especies de ciprnidos estudiadas. De manera que la diferencia estructural en los
cromosomas de los ciprnidos de Amrica del Norte no debe ser tan rara como fue
previamente supuesto.
El estudio morfolgico y citogentico de siete poblaciones de Astyanax
scabripinnis, provenientes de poblaciones restringidas a las cabeceras de pequeos
tributarios, de las Cuencas del Ro San Francisco y el Alto Paran (Brasil) mostr que
seis de las siete poblaciones, presentan caracteres nicos o exclusivos, morfolgicos
o cromosmicos, que permiten distinguirlas entre s (Moreira-Filho y Bertollo, 1991a).
Es importante resaltar que, segn los autores, algunas poblaciones fueron
distinguibles por los caracteres morfolgicos, otras por los caracteres cromosmicos,
mientras que, an otras, se separan completamente por los dos tipos de
caractersticas. En un anlisis ms reciente de la misma especie, A. scabripinnis, de
un rea ms restringida, mostr que todas las nueve muestras analizadas podan ser
caracterizadas exclusivamente por los caracteres cromosmicos, y no por los anlisis
morfolgicos (Maistro et al., 1998a).
Varios trabajos han tratado de establecer relaciones entre diferentes grupos de
peces a partir de similitudes cariotpicas (LeGrande, 1981; Galetti Jr., 1984; Yu et al.,
1987; Phillips et al., 1989; Oliveira et al., 1992). Algunos de estos trabajos han
56

intentado inclusive la utilizacin de metodologas de sistemtica filogentica propuesta

por Hennig (1966) para los caracteres cromosmicos (Amemiya y Gold, 1990a y
1990b, Gold et al., 1990).
Un intento de relacionar nmeros cromosmicos y filogenia dentro de un grupo
fue presentado por Oliveira et al. (1988a) para los Ostariophysi. Con relacin a este
grupo, fue verificada una tendencia de aumento en el nmero cromosmico en los
linajes ms derivados. Por otro lado, fue posible observar que, mientras algunos
grupos presentan una gran cantidad de nmeros cromosmicos, otros poseen una
constitucin cariotpica bastante estable. Esa estructura cariotpica parece estar, de un
modo general, relacionada con la estructura poblacional de las especies. As, grupos
caracterizados por una gran movilidad y por poblaciones compuestas de un gran
nmero de individuos, como por ejemplo los Prochilodontidae (Pauls y Bertollo, 1990;
Oliveira et al., 2003a), muestran una constitucin cariotpica estable. En contraste,
grupos con reducidas movilidades y pequeos nmeros de individuos en las
poblaciones, como los Gymnotiformes (Foresti, 1987), presentan una gran variabilidad
cariotpica interespecfica e interpoblacional. Un tercer grupo formado por peces con
reducida movilidad, pero con un nmero elevado de individuos en las poblaciones,
como los Callichthyidae, presenta en general especies con diferentes nmeros
cromosmicos.
En Anostomidae (2n=54) la evolucin cariotpica que acompa la divergencia
del grupo, involucr, segn Galetti Jr. (1984), la evolucin de los cromosomas
sexuales, la transposicin de NORs y la diferenciacin de los patrones de distribucin
de heterocromatina constitutiva. Con base en estos datos el autor present un
diagrama, sugiriendo posibles relaciones cariotpicas entre algunas especies de
gneros pertenecientes a esta familia.
Qumsiyeh (1994) propuso que una seleccin relacionada para el aumento o
disminucin de la recombinacin gentica podra explicar algunos aspectos de la
evolucin cromosmica en mamferos. Dos estrategias fueron propuestas: La primera
estara caracterizada por reorganizaciones cromosmicas que llevan a un incremento
de recombinacin, a travs de um aumento en el nmero diploide o del nmero de
brazos, aumento de la variacin y adaptacin a ambientes ms variables, y una
diminucin en la probabilidad de fijacin de nuevas mutaciones (cromosmicas y
gnicas). La segunda estrategia se caracterizara por reorganizaciones
cromosmicas que conducen a una disminucin de la recombinacin a travs de una
reduccin del nmero diploide o del nmero de brazos cromosmicos, disminucin de
la variacin y, por consiguiente adaptacin a ambientes ms constantes o
especializados y un aumento en la probabilidad de fijacin de nuevas mutaciones
(cromosmicas y gnicas).

57

En una reciente revisin de la evolucin cromosmica en salmnidos se

encontr que la hiptesis de Qumsiyeh (1994) concordaba con los datos disponibles
para el grupo (Phillips & Rb, 2001). El anlisis de nuevos grupos de peces permitir
en un futuro poner a pueba esa hiptesis.
Estudios recientes ha mostrado que los reordenamientos cromosmicos del
tipo inversin pueden ser muy importantes en la evolucin cariotpica de las especies
y, probablemente, tambin en los procesos de especiacin una vez que se pueden
aislar grupos gnicos que pueden evolucionar sin las dificultades causadas por la
recombinacin (Livingstone & Rieseberg 2003; Navarro & Barton 2003). El anlisis del
cariotipo
de
varios
grupos
con
nmeros
dilpodes
constantes
frecuentemente indica la ocurrencia de diferentes frmulas cariotpicas reforzando
esta hiptesis.
En la subfamilia Serrasalminae hay indicaciones de que el nmero diploide
bsico corresponde a 2n=54 cromosomas (metacntricos y submetacntricos) y que
mecanismos Robertsonianos, seguidos o no por nuevas inversiones, podran haber
elevado el nmero diploide en 2n=58, 60, 62 y 64, y alterado la morfologa del
cariotipo (Cestari, 1989). Segn la autora, esta hiptesis no encuentra una buena
concordancia con el esquema filogentico propuesto anteriormente para el grupo, lo
que podra indicar la necesidad de revisin del mismo.
La utilizacin de NORs en la construccin de cladograms para algunos grupos
de Cypriniformes fue experimentada por Amemiya y Gold (1990a, b) y Gold et al.
(1990). A pesar de que los datos se ajustaran razonablemente bien a las hipteis
anteriores, construidas con base en caracteres morfolgicos, en algunos casos
especficos, utilizando esa metodologa, fue posible sugerir nuevas hiptesis. El uso
de NORs para construccin de filogenias presenta dos problemas bsicos, que son
las dificultades para el establecimiento de homeologias cromosmicas entre los taxa
(Amemiya y Gold, 1990a, b) y para la polarizacin de los caracteres (Gold et al.,
1990).
Estudios citogenticos, involucrando la coloracin convencional con Giemsa,
banda C, coloracin con Plata de las NORs y determinacin de la cantidad de ADN
nuclear por espectrofotometra, realizados en especies pertenecientes a seis gneros
de la familia Callichthyidae mostraron la ocurrencia de una extensa variabilidad
cariotpica en la familia (Oliveira et al., 1992; Oliveira et al., 1993a,b). El nmero
diploide vara de 2n=40 a 2n=120, el nmero de pares cromosmicos con NORs vara
de 1 a 4 y la heterocromatina constitutiva se encuentra principalmente en posicin
centromrica y/o pericentromrica. El anlisis del contenido de ADN de eritrocitos
mostr que ese valor variaba de 1,04 0,09 a 8,75 1,50 pg/ncleo. La alta
58

variabilidad encontrada en el cariotipo y en el contenido de ADN entre las especies

analizadas sugiere que en la historia evolutiva de los diferentes gneros de la familia
Callichthyidae se produjo la fijacin del resultado de eventos de poliploida y
reorganizaciones cromosmicas (Oliveira et al., 1992; Oliveira et al., 1993a, b).
Estudios detallados utilizando diversas tcnicas citogenticas, como el bandeo
R y la hibridacin in situ con sondas fluorescentes (genes 5S y 28S), realizados con
varias especies del gnero Astyanax, mostraron que, aunque algunas de las especies
presentasen diferentes nmeros cromosmicos los cariotipos se presentaban
organizados de manera muy similar (Almeida-Toledo et al., 2002).
La ocurrencia de variabilidad cromosmica detectada en los diferentes grupos
de peces muestra que hay necesidad, como ya ha enfatizado Sola et al. (1981), de
estudiar sistemticamente grupos homogneos, con especial atencin en cuanto a su
distribucin geogrfica. Por otro lado, deben ser utilizadas tcnicas refinadas que
podran auxiliar en el mejor entendimiento de las principales lneas de evolucin entre
los peces y en la identificacin de las caractersticas citogenticas, que podran ser
tiles en la eventual construccin de modelos citogenticos de especiacin.

59

TECNOLOGA CROMOSMICA: LA CITOGENTICA

APLICADA
La aplicacin de los conocimientos citogenticos en proyectos de piscicultura
que hace algunos aos atrs constitua una posibilidad promisoria, hoy puede ser
considerada como una realidad, como muestran los trabajos de Toledo-Filho et al.
(1996; 1998). Las tcnicas de manipulacin cromosmica pueden ser aplicadas
fcilmente en peces, ya que estos organismos presentan generalmente fecundacin
externa.
La aplicacin ms directa del conocimiento citogentico en piscicultura es la
identificacin de hbridos entre especies diferentes. As, por ejemplo, los estudios de
Almeida-Toledo et al. (1987, 1988a) mostraron que era posible distinguir los cariotipos
de pacu (Piaractus mesopotamicus) y de tambaqui (Colossoma macropomum), de

Fig. 13. Complemento cromosmico de Colossoma macropomum (A, B); Piaractus

brachypomus (C, D) y su Hbrido (E, F). Las flechas indican los cromosomas portadores de
regiones organizadoras del Nuclolo reveladas con Nitrato de Plata (arriba) y FISH (abajo).

forma que los hbridos entre esas especies (tambacu y paqui) podan ser fcilmente
60

caracterizados, pues presentaban cromosomas de las dos especies parentales.

Recientemente, Nirchio et al. (2003a) tambin demostraron que las especies
parentales C. macropomum y P. brachypomus pueden ser perfectamente
identificables y distinguidas del hbrido C. macropomum x P. brachypomus mediante la
tincin convencional con Giemsa, la impregnacin con Nitrato de plata y la Hibridacin
Fluorescente in situ (Fig. 13). En otro trabajo fue realizado un retrocruzamiento entre
un hbrido (tambaqui) con el pacu parental y los individuos sobrevivientes presentaron
cromosomas exclusivamente de pacu, demostrando que esos individuos eran
ginogenticos (Almeida-Toledo et al., 1996).
Otra lnea de trabajo bastante interesante se relaciona con la produccin de
linajes poliploides. En este caso, tambin se han obtenido triploides sometiendo
vulos
recin
fertilizados
a
tratamientos fsicos (choques de
temperatura y de presin) o
qumicos (tratamiento con drogas
como colchicina). Esos tratamientos
inhiben la liberacin del segundo
corpsculo polar, haciendo que en
los embriones se produzca la
presencia de tres conjuntos
cromosmicos. Esta tcnica ha sido
aplicada en diversas especies de
peces de inters comercial (Fig. 14),
incluyendo tambaqui Colossoma
macropomum y pacu, Piaractus
mesopotamicus (Carvalho, 1992).
Fig. 14. Metafase de ejemplar triploide de Piaractus
mesopotamicus (Characiformes, Serrasalminae), 3n=81, Para verificar la efectividad de los
producido por aplicacin de choque de presin. tratamientos para produccin de
triploides se pueden utilizar las
tcnicas de determinacin del cariotipo, recuento de nuclolos en ncleos interfsicos
o medicin del tamao de los eritrocitos (Foresti et al. 1994).
La produccin de tetraploides es realizada utilizando tratamientos fsicos o
qumicos que impidan la ocurrencia de la primera segmentacin en el embrin. La
fusin de las dos clulas originales (blastmeros) resulta en un embrin tetraploide.
Mientras desde el punto de vista terico la produccin linajes tetraploides es muy
interesante pues permite producir triploides haciendo cruzamientos con individuos
diploides, en la prctica la produccin de tetraploides es mucho ms difcil que la
produccin de triploides. De esta manera, los pocos resultados positivos fueron
61

descritos para dos especies de tilapia (Myers, 1986) y en la trucha arco iris (Chourrout
et al., 1986).
Otra tcnica interesante es la produccin de ginogenticos (con genes
exclusivamente maternos) o androgenticos (con genes exclusivamente paternos). En
este tipo de experimento uno de los dos gametos es inactivado, generalmente por
radiacin ultravioleta y utilizado apenas para iniciar el proceso de desarrollo
embrionario. Para evitar que los embriones permanezcan haploides, luego de la
fecundacin se aplica algn tratamiento fsico (choque de presin o temperatura) o
qumico (tratamiento con drogas como colchicina). La produccin de ginogenticos o
androgenticos permite la obtencin de linajes con reducida variabilidad gentica que
puede ser utilizada en diversos experimentos de mejoramiento gentico (Purdom,
1993).

62

MTODOS RUTINARIOS EMPLEADOS

EN CITOGENTICA DE PECES
ESTIMULACIN DE MITOSIS
Esta tcnica se emplea para obtener un mayor nmero de clulas mitticas a
travs de la inyeccin de una suspensin de levadura. Fue inicialmente descrita por Cole y
Leavens (1971) para anfibios y reptiles y utilizada por Lee y Elder (1980) para pequeos
mamferos y por Oliveira et al. (1988 a, b) y Lozano et al. (1988) para peces. Consiste en:
1- Preparar una solucin de levadura (Fleischmann) en la siguiente proporcin: 0,5
g de levadura, 0,5 g de azcar y 7 ml de agua destilada;
2- Incubar la solucin en bao-mara (40 C) durante 20 min;
3- Inyectar la solucin dorso-lateralmente en el pez en proporcin de 1ml por 100g
de peso del animal;
4- Dejar al pez en un acuario bien aireado durante 48h -72h.
Algunas variaciones de este procedimiento han sido probadas y se han mostrado
tiles, tales como: a) Inyectar la solucin dos veces (cada 24 h) en el animal, en lugar de
una sola vez, b) inyectar la suspensin en la cavidad abdominal del animal, c) dejar el
animal permanentemente iluminado hasta su procesamiento. Estos procedimientos
proporcionan mejores resultados en cuanto al aumento del ndice mittico pero son
adecuados slo para especies resistentes, capaces de tolerar el tratamiento.

PREPARACIONES CROMOSMICAS
MITTICAS
Las preparaciones cromosmicas en peces pueden ser obtenidas mediante
tcnicas directas (Bertollo et al., 1978) y de cultivos cortos (Fenocchio et al., 1991; Foresti
et al., 1993) o cultivos de clulas (Fenocchio y Bertollo, 1988). A continuacin se describen
en lneas generales las tcnicas directas y de cultivo celular. Cabe destacar que las
mismas ofrecen condiciones y tiempos medios, los que pueden ser adecuados al material
a ser estudiado en cada caso.
El mtodo de preparacin directa descrito por Bertollo et al., (1978), ha sido
intensivamente utilizado en peces neotropicales con excelentes resultados y consiste en:
63

1.
Inyectar intraabdominalmente entre las
aletas pectorales y ventrales, solucin acuosa
de colchicina 0,0125% en proporcin de
1ml/100gr de peso del animal (Fig. 15). La
colchicina es un alcaloide que se extrae de la
semilla de Colchicum autumnale, y su efecto
es bloquear la mitosis en metafase. La
concentracin de alcaloides en las semillas es
muy variable (0,3-1,2%).
2.
Actualmente la colchicina tambin se Fig.15. Inyeccin de colchicina por via intraabdominal
extrae industrialmente a partir de Gloriosa
superba L. (Liliceas), con un mayor contenido en este alcaloide (9%).Dejar el pez en el
acuario durante 50 min, lapso durante el cual las clulas en mitosis sufren una detencin
de la divisin celular en la etapa de metafase.

Fig.16. Localizacin del rinn

3.
Sacrificar el animal y extraer las porciones ceflica y
dorsal del rin, rgano de eleccin en este grupo animal
por presentar actividad hematopoytica. El mismo se
encuentra en posicin retroperitoneal, puede ser
encontrado adosado a la columna vertebral (Fig. 16).
Algunos estudios indican que la porcin anterior muestra
mayor actividad proliferativa (Moreira-Filho y Bertollo,
1991).
4.
Colocar el material en una capsula de Petri de vidrio
que contenga Solucin de Hank y desmenuzarlo con
ayuda de un par de pinzas. Luego disgregarlo con jeringa
hipodrmica (de preferencia de vidrio) sin aguja o con
Fig.17. Disgregacin de tejido renal
pipeta Pasteur, mediante movimientos leves de aspiracin y expiracin (Fig 17).

64

5.
Transferir el material a un tubo de centrfuga y centrifugar durante 10 a 1.000
r.p.m., descartando el sobrenadante con pipeta Pasteur.
6.
Agregar 7 ml de solucin hipotnica de KCL 0,075 M, resuspender y colocar en
estufa a 37 C, durante 20 a 40. Puede ser obviado el paso de lavado e/o incubacin en
solucin de Hank, colocando y disgregando la porcin de rin a ser utilizada
directamente en solucin hipotnica.
7.
Transcurrido este tiempo, retirar la suspensin de la estufa, colocar 6 gotas de
fijador (metanol-cido actico 3:1) esperar 5 min, al cabo de los cuales se aade 7 ml de
fijador y, luego de mezclar bien con la pipeta pasteur, centrifugar durante 10 min. a 1.000
r.p.m. (Prefijacin)
8.
Descartar el sobrenadante y adicionar 5-6 ml de fijador y centrifugar. Repetir este
paso 2 veces. Con cada cambio de fijador es recomendable homogeneizar aspirando y
expirando la suspensin con pipeta pasteur unas 100 veces. De esta manera, adems de
lograr una mejor disgregacin de las clulas, se promueve una mejor y ms uniforme
penetracin del fijador, lo cual mejora sustancialmente la calidad de los preparados.
9.
Despus de la ltima centrifugacin y eliminacin del sobrenadante, adicionar 1 ml
de fijador y resuspender el material. La suspensin celular se puede almacenar en
congelador por tiempo indefinido, en tubos Eppendorf bien tapados y rotulados.
10.
Dejar caer 2 gotas de la suspensin final sobre un portaobjetos limpio y
desengrasado. Dejar secar.
11.
Colorear con Giemsa en tampn fosfato al 5-10% durante 10-20 min. Enjuagar,
dejar secar y observar al microscopio ptico para ubicar las figuras metafsicas (Fig. 18).

Fig. 18. Diferentes estadios de la divisin mittica en clulas de rin de Mugil curema,
despus del proceso de obtencin de suspensin celular. a) interfase, b) profase temprana, c)
profase tarda, d) metafase temprana, e) cromosomas metafsicos

65

Otra variante para la preparacin de cromosomas mitticos usada con mucha

frecuencia ha sido descrita por Foresti et al. (1993) y consiste en:
1- Sacrificar el animal, retirando riones, branquias y testculos en el caso de
los machos.
2- Colocar los tejidos en placas de Petri conteniendo 6 ml de solucin de Hanks
a temperatura ambiente.
3- Disociar el material, procurando obtener una suspensin de clulas, primero
con pinzas de punta fina y, despus, homogeneizar con auxilio de una pipeta
Pasteur.
4- Retirar la suspensin de la placa de Petri y colocar en un tubo de centrfuga.
Agregar una gota de solucin de colchicina 0,05% y agitar levemente.
5- Incubar el tubo en el interior de una estufa a 37 C por 15 min.;
6- Centrifugar a 1.000 r.p.m. por 8 min. Retirar el sobrenadante, agregar 6 ml
de solucin hipotnica (KCl 0,075 M) y agitar levemente.
7- Incubar el tubo en el interior de una estufa a 37 C por 30 min.
8- Retirar de la estufa, colocar 5 gotas de fijador recientemente preparado y
previamente enfriado en el congelador (metanol y cido actico 3:1 V:V). Agitar
levemente la mezcla con una pipeta Pasteur y dejar reposar por 5 min a
temperatura ambiente.
9- Adicionar cerca de 6 ml de fijador y nuevamente agitar la mezcla. Llevar a la
centrfuga (1.000 100 r.p.m.) por 10 min.
10- Retirar el sobrenadante y resuspender el precipitado en 6 ml de fijador.
Centrifugar por 7 min a 1.000 100 r.p.m.
11- Repetir el paso 8 dos o tres veces.
12- Gotear el material en lminas colocadas sobre un soporte en el interior de
un bao-mara a 60 C.
Para colorear con Giemsa, utilizar el siguiente procedimento:
1- Hidrolizar e material en HCl 1N a 60 C por cerca de 3 min.
2- Colorear con solucin de Giemsa a 5% en tampn fosfato (pH = 6,7) por 10
min.

66

CULTIVOS DE CLULAS DE RIN DE CORTA

DURACIN
Esta tcnica de cultivo ha sido descrita por Fenocchio et al. (1991), permitiendo
obtener buenos resultados e inclusive incorporar elementos a las clulas en divisin, por
ejemplo, anlogos de base.
1-Sacrificar el ejemplar y extraer el rin (porciones dorsal y/o ceflica).
2-Disgregarlo y cultivar en una caja de Petri pequea que contenga de 8-10 ml de
medio de cultivo completo (medio de cultivo TC 199, RPMI1640 -Suero sanguneo
bovino fetal o humano inactivado 20%, solucin de Antibitico - Antimictico).
3-Cultivar de 6 a 18 h. en estufa a 27-30 C.
4-Antes de realizar la cosecha de las clulas, agregar 3 a 4 gotas (0,1 ml) de
colchicina al 0,05% durante 15 a 40 min.
5-Cosechar las clulas y colocar el material en un tubo de centrfuga. Centrifugar a
1.000 r.p.m. durante 10 min.
6-Descartar el sobrenadante y agregar 8-10 ml de KCL 0,075 M (solucin
hipotnica). Resuspender y colocar los tubos en estufa a 37 C durante 20-30min.
Colocar 5 gotas de fijador y centrifugar 10 min. a 1.000 r.p.m. (Prefijacin).
7-Descartar el sobrenadante y agregar de 8-10 ml de fijador (metanol cido
actico 3:1). Resuspender el botn de clulas y centrifugar a 1.000 r.p.m. durante
10 min. Repetir este paso 2 veces ms.
8-Descartar el sobrenadante y agregar fijador de acuerdo con el tamao del
sedimento celular para la suspensin final a utilizar.
9-Gotear de la solucin final con una pipeta Pasteur sobre un portaobjetos limpio y
desengrasado. Dejar secar.
10- Colorear con Giemsa en tampn fosfato al 5% durante 5-10 min. Enjuagar con
agua de chorro o destilada. Dejar secar y observar.

67

CULTIVOS DE LINFOCITOS DE SANGRE

PERIFRICA
Las preparaciones cromosmicas por medio de cultivo de linfocitos pueden
obtenerse segn la tcnica modificada de Fenocchio y Bertollo (1988). Este procedimiento
puede aplicarse a peces de gran porte o a aqullos que por algn motivo no puedan ser
sacrificados:
1. Tomar 5 ml de sangre perifrica con jeringa descartable heparinizada. La sangre
puede ser obtenida mediante puncin en la arteria que pasa por el arco hemal, a
nivel del pednculo caudal.
2. Transferir, en condiciones de esterilidad, algunas gotas de sangre a un frasco
con 5 ml de medio de cultivo (RPMI 1640 o TC 199), 2 ml de suero fetal de bovino
y 0,2 ml de fitohemaglutinina.
La sangre que se cultiva puede ser entera o en todo caso puede usarse el plasma
obtenido por sedimentacin de los hemates en la propia jeringa.
3. Mantener el frasco en estufa con temperatura constante entre 27 a 30 C
durante 72 h (tiempo dependiente de la especie).
4. Adicionar 0,1 ml de solucin de colchicina 0,017% al frasco de cultivo.
5. Despus de tiempos variables de incubacin (entre 30 min. y 3 h dependiendo
de la especie), transferir el contenido del frasco a un tubo de centrfuga y
centrifugar a 900 r.p.m. durante 10 min.
6. Eliminar el sobrenadante y adicionar aproximadamente 8 ml de solucin
hipotnica de KCl (0,075M) a 37C, resuspender suavemente las clulas
sedimentadas, con una pipeta Pasteur e incubar el material en estufa a 37C por
30 min.
7. Adicionar 5 gotas de fijador (metanol - cido actico/ 3:1) recin preparado,
resuspender cuidadosamente, centrifugar durante 10 min, a 900 r.p.m. y,
enseguida, descartar el sobrenadante, con el auxilio de una pipeta Pasteur.
8. Adicionar cuidadosamente, 5 a 6 ml de fijador (metanol y cido actico 3:1),
dejndolo escurrir por las paredes del tubo.
9. Resuspender el material, con el auxilio de pipeta Pasteur, centrifugando durante
10 min.

68

10. Repetir los tems 8 y 9 por 2 a 3 veces. Despus de la ltima centrifugacin y

eliminacin del sobrenadante, adicionar 1 a 2 ml de fijador, dependiendo de la
cantidad de sedimento y resuspender bien el material.
11. Dejar caer 2 gotas de suspensin, sobre diferentes regiones de un portaobjetos
limpio.
12. Dejar directamente al aire para completar el secado.
13. Colorear con Giemsa 5% diluido en tampn fosfato, pH 6,8 por 10 min y lavar
con agua destilada.

ESTUDIOS CARIOTPICOS
Despus de analizar y contar los cromosomas en aproximadamente 30 clulas
metafsicas por individuo, se intenta establecer el nmero modal para los ejemplares
de cada especie.
Para establecer el nmero modal de las NORs se emplean solamente
metafases completas (con nmero de cromosomas igual a la moda para cada
individuo) y que presenten al menos un cromosoma marcado.
Las mejores metafases, es decir, las que presentan la mayor dispersin y los
cromosomas con morfologa ms ntida, son fotografiadas en un fotomicroscopio con
el objetivo de inmersin, empleando pelcula Copex-Pan, de Agfa Gevaert. Las copias
de los negativos se hacen en papel Kodak F4 o F3. Actualmente, con el desarrollo de
la fotografa digital, muchas imgenes son capturadas con cmaras de alta resolucin
(ms de 3 Megapixeles) y procesadas con software que permiten editar las imgenes
con un ahorro considerable de dinero y tiempo, brindando adems la facilidad de
reduccin de volumen de almacenamiento, reproducibilidad y portabilidad de las
imgenes. Estos softwares, como el Adobe Photoshop, por ejemplo, permiten adems
realizar la medicin de los cromosomas con herramientas fciles de manejar y de
mayor precisin (0,01 mm) que el sistema convencional, que emplea vernier de 0,1
mm de apreciacin.

MEDIDAS CROMOSMICAS
La morfologa del cromosoma se encuentra determinada por la localizacin del
centrmero, el cual puede estar ubicado en cualquier parte a lo largo del cromosoma.
Dependiendo de su posicin el cromosoma es clasificado en una de cuatro clases
principales: un cromosoma metacntrico presenta el centrmero en aproximadamente
el centro del cromosoma de tal manera que lo divide en dos brazos de longitud similar.
69

En un cromosoma submetacntrico el centrmero se encuentra desplazado hacia un

extremo de tal forma que presenta brazos de distinta longitud llamados brazo largo (l)
y brazo corto (s). Los cromosomas con brazos muy cortos son denominados
subtelocntricos y aquellos en los que es visible solo un brazo con el centrmero en el
extremo terminal se denominan acrocntricos.
Tabla 3 . Clasificacin de los cromosomas segn el valor r

Posicin centromrica

Designacin

1.0---1.7

Metacntrico

Submedia

1.71-3.0

Submetacntrico

Subterminal

3.01-6.99

Subtelocntrico

7.0-

Acrocntrico

Media sensu stricto

Regin Media

Regin Terminal
Terminal sensu stricto

A los fines de reducir la subjetividad a la hora de clasificar los cromosomas, se

ha extendido el uso de la nomenclatura propuesta por Levan et al. (1969), que
consiste en calcular el ndice centromrico (r), obtenido dividiendo el tamao del brazo
largo entre el tamao del brazo corto (r =p/q). Dependiendo del valor del ndice se
clasifican segn se indica en la Tabla 1 en metacntricos (r de 1,00 a 1,70),
submetacntricos (r de 1,71 a 3,00), subtelocntrico (r de 3,01 a 7,00) y acrocntricos
(r mayor que 7,00).
El procedimiento a seguir para realizar las mediciones cromosmicas es el
siguiente:
1- Copiar todas las metafases a ser analizadas, en la misma escala.
2- Hacer una fotocopia ampliada de cada metafase. Todas las copias deben estar
tambin en la misma escala.
3- Numerar los cromosomas en la fotocopia.
4- Delimitar el centrmero y trazar una lnea mediana en el interior de cada cromtida.
70

5- Medir la longitud de cada lnea mediana con un paqumetro y calcular el tamao del
brazo mayor, brazo menor, longitud total y relacin de brazos de cada cromosoma.
6- Establecer el nmero de cromosomas metacntricos, submetacntricos,
subtelocntricos y acrocntricos de cada metafase.
7- Repetir los pasos 3 a 6 hasta el valor de cada tipo de cromosmico (M, SM, ST e A)
presente un valor modal frecuente (el que ms se repita).
8- Recortar los cromosomas de las fotografas y numerarlos de la misma forma que en
las fotocopias.
9- Montar preliminarmente los cariotipos de acuerdo a las categorias encontradas.
10- Una vez ordenados todos los cariotipos, calcular los valores medios del brazo
mayor (BM), brazo menor (Bm), longitud total (CT), longitud relativa (CR), y relacin de
brazos (RB), de cada par cromosmico.
11.- Despus de realizadas las medidas cromosmicas y establecido el nmero de
cada tipo cromosmico, los mismos son ordenados segn cada tipo (M, SM, ST e A)
en orden de tamao decreciente.

OBTENCIN DE CROMOSOMAS
MEITICOS
Los estudios de clulas meiticas en peces no han recibido la debida atencin
en los ltimos aos, aunque las tcnicas para preparacin de clulas meiticas son
bastante simples. Es importante sealar que estos estudios son de gran importancia
en los casos en que se estudie la presencia de cromosomas sexuales o de
supernumerarios.
As, por ejemplo, el estudio de clulas meiticas de Gymnogeophagus balzanii
realizado por Feldberg y Bertollo (1984), permiti la identificacin de cromosomas
supernumerarios que estaban restringidos a las clulas del linaje germinal. El anlisis
efectuado por Oliveira et al. (1988b) con clulas meiticas de Corydoras aeneus
permiti la identifcacin de cromosomas supernumerarios en esa especie, as como la
confirmacin de la ocurrencia de un polimorfismo Robertsoniano involucrando el par
cromosmico nmero 1. El estudio de clulas meiticas tambin ha sido til en la
identificacin de cromosomas sexuales, tal como puede ser verificado en el estudio
reciente de Liu et al. (2002) con la especie Mastacembelus aculeatus.
Para obtener las figuras meiticas se utiliza la tcnica descrita por Kligerman y
Bloom (1977) que consiste en:
1- Inyectar intraperitonealmente colchicina (0,05%) en proporcin de 1 ml por cada
100 g de peso del animal. Dejarlo nadando libremente por 50 min.
71

2- Sacrificar el animal retirando riones branquias y testculos u ovario.

3- Cortar la gnada en pequeos trozos que son colocados en solucin hipotnica de
KCl (0,075 M) por 30 min a temperatura ambiente.
4- Colocar el material en fijador (metanol y cido actico glacial en proporcin de 3:1
por 30 min.
5- Repetir el procedimiento anterior 3 veces, luego de las cuales el material puede ser
guardado en nevera o utilizarlo segn la metodologa siguiente:
6- Transferir algunos fragmentos del rgano a una lmina o placa escavada,
adicionando 2 o 3 gotas de cido actico al 50%.
7- Fragmentar el material con cuidado a fin de se obtener una suspensin celular.
8- Con una pipeta Pasteur de punta fina colocar una gota de suspensin sobre una
lmina apoyada sobre una placa calentada a 40 C, reaspirndola inmediatamente.
9- Repetir el tem anterior en 2 o 3 campos diferentes de la lmina.
10- Deja secar y colorear con Giemsa para observar las figuras meiticas (Fig. 19 y
20) o proceder con otra tcnica de coloracin como bandeo C o bandeo NOR.

Fig. 19. Metafases meiticas de

Dormitator
maculatus
(Perciformes,
Eleotrididae). a) metafase I con 23
bivalentes; b) metafase II con 23
cromosomas.

Fig. 20. Metafases I de Cyprinodon

dearborni (Perciformes, Cyprinodontidae) mostrando 24 bivalentes.

TCNICA PARA OBTENCIN DE COMPLEJOS

SINAPTONMICOS.
Una de las caractersticas ms importantes de la profase I de la Meiosis es la
presencia del Complejo Sinaptonmico (CS), una estructura proteica formada en el
inicio de la profase I entre las cromtidas hermanas de cada bivalente. La posibilidad
de analizar esta estructura con microscopia electrnica permite la identificacin segura
de muchos detalles que son imposibles de ser visualizados con el microscopio de luz.
72

El estudio del CS ha permitido la identificacin segura de la presencia y del

comportamiento de cromosomas sexuales (Foresti et al., 1993; Oliveira et al., 1995 a),
el comportamiento de cromosomas supernumerarios (Dias et al., 1998), la ocurrencia
de rearreglos cromosmicos (Oliveira et al., 1996) y de los procesos meiticos en
animales triploides (Oliveira et al., 1995 b; Borin et al., 2002).
La tcnica utilizada para la observacin del CS, denominada Tcnica de
Microextendidos Celulares ha sido descrita por Santos et al. (1994) y consiste en:
1. Anestesiar los animales y abrirlos por la regin ventral. Retirar los testculos o
fragmentos de los testculos (Aprox. de 0,5 cm3) colocndolos en un frasco con
solucin de Hank (o en medio de cultivo 1X Dulbeccos en PBS) a temperatura
ambiente.
2. Colocar los testculos o partes de ellos (si estuvieran bastante desarrollados) en
placa de Petri recubierta con Parafilm.
3. Desmenuzar con ayuda de una hojilla de afeitar, agregando gotas de solucin de
Hanks a medida que se va cortando el tejido hasta que el material adquiera una
apariencia lechosa, homogenea y sin grumos.
4. Aspirar el material con pipeta Pasteur y transferirlo a un tubo de centrfuga que
debe estar previamente en hielo.
5. Centrifugar durante 10 a 15 min a
1.500 r.p.m. (344 g).
6. Retirar el sobrenadante y
resuspender el pellet en 1 ml de
Hanks.
7. Retirar 100 l de suspensin y
transferirlo a otro tubo con 0,5 ml de
Hanks.
8. Verificar la densidad de las
clulas en el microscopio y ajustar
colocando ms o menos clulas
segn el caso.
9. Colocar una gota (aprox. de 100
l) en el centro de una lmina
plastificada.

Fig. 21. Clula paquinica de trucha arco-ris

(Oncorhynchus mykiss) mostrando la distribucin del
Complexo Sinaptonmico en bivalentes. La flecha
seala el par sexual XY.

10. Colocar dos gotas de detergente Triton X100 al 0,03% (pH=7,5) al lado de la gota
de la suspensin.

73

11. Agitar bien la lmina en sentido horizontal para mezclar las dos gotas. Esperar 1015 min.
12. Adicionar 5 a 6 gotas de fijador, agitar bien la lmina y colocarla en estufa para
secar durante 12-24 h a 40-50 C (43).
13. Lavar durante 1,5 min en agua destilada. Usar cubeta Coplin y no agitar.
14. Secar en posicin vertical, a temperatura ambiente.
Coloracin con Nitrato de Plata
Colocar sobre la lmina una gota de gelatina (mezclar 0,5 g de gelatina en 25
ml de agua destilada y mezclar hasta completa disolucin, lo que puede ser hecho en
bao-mara a 60 C, enfriar y agregar 0,25 ml de cido frmico) y dos gotas de nitrato
de plata al 50% (disolver 0,5 g de nitrato de plata en 1 ml de agua destilada y filtrar en
milipore). Cubrir con una lmina cubreobjetos y dejar en el interior de una cmara
hmeda en bao-mara a 60 C por unos 7 min. Lavar en agua destilada y secar al
aire.
Alternativamente preparar una solucin de nitrato de plata al 50% y colocar 1
ml en un recipiente pequeo (como una tapa de una caja de cubreobjetos). Dejar caer
2 o 3 gotas da solucin de nitrato de plata en la lmina; tomar una tela del tipo silkscreen, mojar con nitrato de plata y colocar sobre la lmina; incubar durante 10 min a
60 C.
Transferencia a rejilla de microscopio electrnico
1. Localizar los paquitenos en un microscopio de luz.
2. Colocar las rejillas de ME (de 50 a 100 mesh) con auxilio de una pinza y ajustar su
posicin con auxilio de un pincel con un solo pelo.
3. Sobre la lmina plastificada, dibujar un rectngulo alrededor de la rejilla con la
ayuda de una pinza de puntas finas o una aguja de diseccin.
4. Calentar la superficie donde se encuentra la rejilla con aire caliente (aliento)
exhalado de la boca.
5. Sumergir la lmina en posicin inclinada (ngulo de 45 ) en una cubeta con agua
para que el plstico con las rejillas se desprenda y flote.
6. Retirar de la cubeta la pelcula de plstico con ayuda de un pedazo de papel
resistente y dejar secar en placa de Petri.

74

7. Con auxilio de un bistur, separar cada una de las rejillas cortando la seccin del
plstico sobre la cual se encuentra localizada.
8. Colocar la rejilla en una lmina limpia y verificar la existencia de paquitenos que se
encuentren en posicin adecuada, vale decir, que no se encuentren tapadas por los
filamentos metlicos de la rejilla.
9. Obtener las figuras meiticas (paquitenos) mediante fotografas en el ME.
Soluciones empleadas en la tcnica del Complejo Sinaptonmico
1. Tampn Borato
250 ml agua destilada.
3,1 g de cido brico.
Ajustar el pH a 9,0 con NaOH 10N.
2. Fijador
100 ml de agua destilada.
Aadir tampn borato hasta que el valor del pH sea superior a 9,0 (son suficientes
algunas gotas) y calentar sobre un mechero hasta 70 C.
Diluir 4 g de paraformaldedo agitando constantemente hasta que se torne
transparente.
Enfriar, agregar 1,7 g de sacarosa y ajustar el pH a 8,9 con NaOH. Este fijador puede
almacenarse en nevera hasta por 1 mes, pero debe verificarse el pH antes de ser
utilizado.
3. Triton X100 0,03%
Tomar 100 ml de agua destilada.
Dissolver 0,03 ml (30 l) de Triton X100.
Ajustar a pH=7,5.
4. Solucin para plastificacin de las lminas:
Cortar 1 g de plstico (transparencias para retroproyetor Tri-Acetat marca Schwan &
Stabilo ref. 7280/100) en pedazos muy pequeos.
75

Disolver en 100 ml de cloroformo en Erlenmeyer, tapar con Parafilm y almacenar en

nevera. Puede usarse muchas veces.
Para plastificar usar cubeta tipo Coplin de vidro (o en probeta). Sumergir la lmina
rpidamente, por muy poco tiempo y retirar.
Colocar la lmina en posicin vertical para secar.
Sellar los bordes con esmalte.
Almacenar las lminas en cajas en nevera.

76

TCNICAS DE COLORACIN DIFERENCIAL

REGIONES ORGANIZADORAS DE
NUCLEOLOS (RONs)
Las regiones organizadoras del nuclolo (NORs) estn constituidas por mltiples
copias de genes ribosomales (18S, 5,8S e 28S), siendo, por lo tanto los sitios de
trascripcin del rADN. Estos sitios pueden estar localizados en un solo par o distribuidos
en varios cromosomas del complemento.
El mtodo ms comnmente empleado para detectar la posicin de las NORs es la
impregnacin con sales de
plata. Las observaciones
disponibles en la literatura
muestran que la coloracin
con sales de plata pueden
probablemente ser utilizadas universalmente para
demostrar la localizacin de
las NORs en los eucariotas
(Sumner, 1990). Sin embargo, su significado biolgico
no est an completamente
comprendido y ha sido objeto de un fuerte debate. En
general se ha asumido que
para que la tincin con plata
ocurra, slo se requiere que
la cromatina nucleolar se
encuentre en estado descondensado (constriccin
nucleolar). Sin embargo,
otros han demostrado que
tal descondensacin es necesaria pero no suficiente y
sugirieron que se requiere
tambin que haya ocurrido
Fig. 22. Metafases de Pygocentrus cariba teidas
secuencialmente con Giemsa (arriba) y nitrato de plata (abajo).
actividad transcripcional preLas flechas indican los cromosomas portadores de las NORs.
via (Guilln et al., 2004)
77

Las NORs en peces generalmente estn ubicadas en constricciones secundarias

en los cromosomas y son identificadas, de forma indirecta, a travs de la tcnica de
impregnacin por sales de plata (AgNO3), pues el material coloreado no es el rADN, sino
protenas cidas asociadas a l, tales como la nucleolina asociada a la estructura fibrilar
del nuclolo y el pre-ARN naciente. De acuerdo con Miller et al. (1976), la impregnacin de
las NORs por sales de plata se restringe a aquellas regiones que estuvieron activas en la
interfase precedente. Estudios sobre las regiones organizadoras nucleolares han revelado
que su localizacin es especie-especifica para varios grupos de peces (Galetti et al, 1984;
1991; Venere y Galetti, 1989).Tambin debe tenerse en mente que otras estructuras,
adems de las NORs, pueden ser coloreadas con las sales de palta como: algunas
heterocromatinas, histonas, ncleos cromosmicos, complejos sinaptonmicos y
principalmente cinetocoros (Sumner, 1990). Por lo tanto, debe tenerse precaucin al
interpretar las impregnaciones observadas en los cromosomas.
Las bandas NORs, se pueden visualizar por el mtodo de paso nico de Howell y
Black (1980). Esta tcnica se basa en la afinidad que presenta el Nitrato de Plata por las
protenas nucleolares, las cuales, como se expres antes, probablemente persistan en la
regin de la constriccin secundaria durante todo el ciclo celular, permitiendo colorear los
nuclolos en interfase y dichas regiones en cromosomas metafsicos.
La tcnica consta de los siguientes pasos:
1. Sobre un portaobjetos previamente preparado con el material a analizar, colocar
una gota de gelatina al 2% (comercial normal, sin sabor) ajustada (mediante cido
frmico) a pH 4-4,5 y dos de Nitrato de Plata al 50% (1g/2ml de agua destilada).
Mezclar bien con el extremo de un portaobjetos.
2. Colocar sobre el colorante un cubreobjetos de 40 x 22mm y llevar la preparacin,
en cmara hmeda, a una estufa o bao termosttico a 60-65 C.
3. Dejar durante el tiempo necesario hasta que la coloracin tome color amarillo
mbar o amarillo oro (aproximadamente 3 min).
4. Enjuagar con agua de grifo y dejar deslizar el cubreobjetos. Secar, colorear con
solucin de Giemsa (5%) por 10-15 s y observar.

78

Decoloracin de las preparaciones teidas con Nitrato de Plata

Tcnica A.
-Lavar la lmina por aproximadamente 15 s en una solucin de cido peridico al 1%
(1 g de H5IO6 en 100 ml de agua destilada). La cantidad de plata a ser removida
puede ser controlada empleando diluciones sucesivas de la solucin al 1%.
Tcnica B.
-Lavar a lmina secuencialmente en una solucin al 0,5% de Na2S2O3 por 4 min y en
una solucin al 0,5% de K3[Fe(CN)6] por 4 min. Lavar y secar al aire.

DETECCIN DE HETEROCROMATINA
CONSTITUTIVA (BANDEO C)
La tcnica de bandeo C se ha mostrado muy til en los estudios citogenticos de
peces, permitiendo la identificacin de las regiones de heterocromatina constitutiva,
formadas por ADN altamente repetitivo. El mtodo comnmente usado ha sido el de
Sumner (1972), en el cual se emplean el hidrxido de bario, la solucin salina (2XSSC) y el
colorante de Giemsa (Sumner, 1990).
Todas las bandas (Bandas C) reveladas por esta tcnica estn compuestas de
heterocromatina. Aunque la tcnica de bandeo C sea adecuada para identificar regiones
heterocromticas en los cromosomas hay algunos tipos de heterocromatina que no
presentan coloracin diferencial con la tcnica de bandeo C usual (Sumner, 1990).
Adems, hay pocas especies para las que se ha confirmado que las bandas reveladas por
el mtodo de banda C se comportan de cuerdo con la definicin clsica de
heterocromatina, esto es, segmentos de cromatina que permanecen condensados durante
la interfase (Sumner, 1990). Debe tenerse en cuenta tambin que las bandas
heterocromticas son por lo general muy heterogneas en composicin o que no pueden
fijar ntidamente cuando se aplica slo la tcnica de bandas C convencional (Sumner,
1990). As, para referirnos de forma segura a las bandas producidas despus de la
aplicacin de la tcnica de banda C podemos utilizar los terminos Banda C positiva y
Banda C negativa.
Esta heterocromatina generalmente no contiene genes mendelianos, no es
transcripta y se replica tardamente en la fase S, lo que explica el hecho de que
variaciones en las bandas C parecen no afectar el fenotipo. En trminos de composicin,
las bandas C estn normalmente constituidas por secuencias satlites, mientras que
algunos segmentos banda C positivos estn constituidos por retroelementos (Ziegler et al.,
2003). Las bandas C son, por lo tanto, importantes marcadores cromosmicos debido su
79

universalidad, diversidad y variabilidad, posibilitando la identificacin de cromosomas

homlogos en el cariotipo, la identificacin de patrones diferenciales de heterocromatina
constitutiva entre individuos, poblaciones y/o especies. Adems representan una tcnica
simple para diferenciar los cromosomas del complemento A de los supernumerarios.
El bandeo C, se obtiene mediante la tcnica de Sumner (1972), la cual consta de
los siguientes pasos:
1. Tratar el material previamente goteado sobre un portaobjetos, con HCl 0,2 N a
temperatura ambiente por 10 a 30 min.
2. Lavar con agua destilada.
3. Incubar la lmina por 10 a 60 s en Solucin de Ba(HO)2 a 60 C.
4. Lavar rpidamente con HCl 1N a 60 C.
5. Incubar la lmina por 30 min en Solucin de 2xSSC a 60 C.
6. Lavar en agua destilada.
7. Colorear con Giemsa al 2 - 5% durante 5 - 20 min.
8. Lavar con agua corriente y dejar secar.

80

BANDEO G
El bandeo G revela las
bandas eucromticas (regiones
relativamente ricas en AT) en los
cromosomas, principalmente en
mamferos.
El mecanismo
exacto por el cual las bandas G
son producidas an no est
completamente elucidado y
varias hiptesis han sido
propuestas, no obstante, para
obtener el patrn de bandas G
se puede aplicar un tratamiento
con tripsina o solucin salina.
Las dificultades encontradas en
la aplicacin de la tcnica de
bandeo G en cromosomas de
23. Metafase de Astyanax scabripinnis paranae coloreada
peces estn, probablemente, Fig.
con la tcnica de banda G. La flecha seala a un cromosoma
relacionadas a la composicin supernumerario. Fotografa proporcionada por el Dr. dson Luis
del ADN (Medrano et al., 1988). Maistro.
Otros autores (Ozouf-Costaz y Foresti, 1992) consideran que cuanto ms pequeos y
numerosos son los cromosomas, mayor es la dificultad de desnaturalizacin, las bandas
aparecen difusas en los cromosomas, no son repetibles o stos son completamente
resistentes al bandeo G. Una cuestin a ser discutida es si las bandas G estn realmente
ausentes en varios grupos, excepto mamferos, o si su ausencia es simplemente una
consecuencia de factores tcnicos (Oliveira et al., 2002, 2003b).
Cuando es posible la aplicacin del bandeo G, la gran informacin contenida facilita
una caracterizacin cromosmica ms precisa, permitiendo visualizar mejor los patrones
de bandas y rearreglos cromosmicos y compararlos con los de otras especies, para
entender como puede haber ocurrido el proceso evolutivo.
En peces, este procedimiento ha presentado, generalmente, resultados poco
satisfactorios. Sin embargo, en aquellos casos donde se observa un patrn de bandas G,
el mismo es aparentemente consistente (Gold et al., 1990; Abun et al., 1996; Bertollo et
al., 1997; Vasconcelos y Martins-Santos, 2000, Nirchio et al., 2004 entre otros).
Para obtener el bandeo G recomendamos la tcnica descrita por Cano et al.
(1996), con algunas modificaciones:

81

1. Incubar los portaobjetos en una solucin de tripsina/EDTA (50 ml de agua

destilada, 0,03 gr de tripsina, 0,5 ml de EDTA 0,5 mM-pH 8.00) y dejar por lo
menos tres s y como mximo 15 s.
2. Lavar en agua destilada y secar al aire.
3. Colorear con solucin de Giemsa 5%, preparado con Buffer fosfato pH 7,2 por 5
min.
4. Lavar en agua destilada y secar al aire.
Nota: Los portaobjetos deben ser goteados el mismo da o dejados en el congelador como
mximo una semana.

82

BANDAS R
La produccin de bandas R mediante tratamientos qumicos, como la
realizada en cromosomas humanos o de mamferos, no resulta en un patrn de
bandas comparables en los peces.
Tratando de resolver este problema algunos autores emplearon una
metodologa diferente, que utiliza el 5-BrdU (un anlogo de timina). Este compuesto
es inyectado en los animales e
incorporado en los cromosomas que
se encuentran replicando en la fase
S del ciclo celular. Las clulas que
se encuentran aproximadamente en
la fase S y reciben el 5-BrdU
incorporan este compuesto en
algunas regiones cromosmicas que
aparecen, en los cromosomas
metafsicos, como bandas que son
similares a las llamadas bandas R.
Esta tcnica no es de fcil
aplicacin, razn por la que ha sido
poco empleada en el estudio de los
peces. Por otro lado, algunos
resultados
publicados
son
Fig. 24. Metafase de Astyanax scabripinnis paranae interesantes y bastante informativos
coloreada con la tcnica de bandeo R. Fotografa
(Almeida-Toledo et al., 1988b;
suministrada por el Dr. dson Luis Maistro.
Bertollo et al., 1997; entre otros).
Para la obtencin de bandas R normalmente se emplea el procedimiento
descrito por Almeida-Toledo et al. (1988) que consiste en:
1- Inyectar una solucin de 5-BrdU (100 mg de 5-BrdU en 20 ml de solucin de
NaCl al 0,9%) en la proporcin de 1ml/100 g de peso corporal y dejar al animal
en acuario aireado por unas 6,5 h.
2- Aproximadamente 50 min antes de completar el tiempo de tratamiento con 5BrdU inyectar una solucin al 0,05% de colchicina en proporcin de 0,5ml/100
g de peso corporal.
3- Al terminar el tiempo de tratamiento con las drogas sacrificar el animal y
preparar los cromosomas segn el procedimiento descrito en la seccin 3.2.
Para el tratamiento con la solucin de Hoechst 33258 y luz ultravioleta (o luz
negra) y posterior coloracin con Giemsa (mtodo FPG) se debe seguir los siguientes
procedimientos:
83

1- Colocar las lminas durante 20 min en Hoescht 33258 a 10 g/ml (diluir la

solucin madre 1:10).
2- Lavar en agua destilada y transferir a 2xSSC y montar las lminas con 2 o 4
gotas de solucin.
3- Preparar las cmaras hmedas usando placas de Petri grandes con papel de
filtro humedecido con 2xSSC.
4- Cubrir con papel Magiplack y dejar secar a 10 cm de distancia de una fuente
de luz ultravioleta durante 30 min o de luz negra por 2 h. Dependiendo de cuan
nueva es la fuente de luz, el tiempo de exposicin puede variar.
5- Retirar los cubreobjetos pasando la lmina por agua de grifo e incubar durante
20 min con 2xSSC a 60 C.
6- Colorear con Giemsa diluido 1:30 en tampn fosfato pH=6,7 por 7 min.
Para coloracin con Naranja de Acridina se debe seguir el siguiente
procedimiento:
1- Tomar 2,5 ml de solucin madre y completar con tampn fosfato pH=6,7 hasta
50 ml. Usar por 1 semana;
2- Pasar las lminas por alcohol 90%, 70% y 50% durante 5 min y lavar en agua
destilada;
3- Colorear las lminas durante 20 min;
4- Lavar las lminas coloreada con agua de chorro;
5- Montar con 1 gota de tampn fosfato;
6- Sellar con esmalte y observar al microscopio.

84

ENZIMAS DE RESTRICCIN
En vista de las dificultades que, de una manera general, presentan para su
aplicacin en peces los bandeos C (en menor medida) y G (principalmente), en algunas
especies se hace necesaria la utilizacin de otras metodologas para detectar la
microestructura (bandas mltiples) cromosmica para lo cual una alternativa puede ser la
utilizacin de enzimas de restriccin.
Las
endonucleasas
de
restriccin son enzimas que
reconocen y cortan el ADN en sitios
especficos. Cuando son utilizadas
sobre preparaciones cromosmicas,
pueden producir patrones de
bandeos altamente especficos para
cada tipo de enzima. El anlisis de
estos patrones facilita la clasificacin
cromosmica, la diferenciacin de la
heterocromatina y el estudio de los
polimorfismos cromosmicos.
Ciertas enzimas como, AluI,
MboI y HinfI, entre otras, producen
en eucariotos una diferenciacin
longitudinal semejante al bandeo C,
Fig. 25. Metafase de Astyanax scabripinnis paranae
coloreada con Giemsa luego de tratar el material con la
siendo ese patrn ms definido que
enzima de restriccin AluI. La flecha seala un
aquellos obtenidos por las tcnicas
cromosoma supernumerario grande. Fotografia
convencionales (Mezzanotte et al,
proporcionada por el Dr. dson Luis Maistro.
1984; Lozano et al, 1991; LpezFernndez et al., 1991, Swara et al. 1999; 2001a). A su vez, las enzimas BamHI, HaeIII y
HindIII producen un patrn semejante al bandeo G en algunos organismos, como por
ejemplo en peces (Beak et al, 1988; Snchez et al, 1990, 1993; Lozano et al, 1991, Vias
et al. 1994; Maistro et al., 1999, 2000).
Los procedimientos descritos a continuacin sern realizados segn la tcnica de
Mezzanotte et al. (1983), con algunas adaptaciones de Maistro (1996) para las
preparaciones cromosmicas de peces.

A- Preparacin de la solucin de enzima:

85

1. Establecer la concentracin deseada (C2), por ej.: 0,3 Unidades de la enzima

AluI.
2. Observar en el rtulo o en las instrucciones del frasco de enzima la
concentracin en que la misma es ofrecida (C1), por ej.: AluI, 5 Unidades/ l.
3. Establecer el nmero de gotas de suspensin celular que sern tratadas sobre el
portaobjetos, usando una gota en cada portaobjeto debern ser utilizados 30 l
(V2).
4. Calcular el volumen total de la solucin de enzima que debe ser retirado del
frasco (V1) usando la siguiente ecuacin:
V1 x C1 = V2 x C2

V1 = (V2 x C2)/C1

V1=(30 x 0,3)/5
V2 = 1,8 l
5. Preparar la solucin da enzima de la siguiente manera:
5.1. Colocar en un tubo Eppendorf 27 l de agua destilada para cada gota de
suspensin celular a ser tratada.
5.2. Adicionar 3 l de tampn para cada gota de suspensin celular a ser tratada.
Observar que esa cantidad slo es vlida cuando el tampn viene concentrado 10
veces de fbrica, lo que es usual. Despus del uso, la solucin tampn debe ser
colocada inmediatamente de vuelta en el congelador.
5.3. Adicionar la cantidad de enzima calculada segn el tem anterior (variable V2),
en el ejemplo 1,8 l. La enzima slo debe ser retirada del congelador en el
momento de su utilizacin y debe ser mantenida en un frasco con hielo. Si estas
observaciones no son seguidas, hay serios riesgos de destruir la estructura
molecular de la enzima, tornndola ineficaz.
B- Tratamiento con las enzimas de restriccin:
1. Preparar la solucin de enzima de acuerdo con el tem anterior;
2. Colocar una gota de solucin de enzima para cada gota de suspensin celular y
cubrir con cubreobjetos limpio;
3. Colocar el preparado en cmara hmeda bien cerrada e incubar a 37C por
tiempos variables dependiendo de la especie.
C- Observaciones:
86

1. Usar preparados envejecidos por lo menos durante un da.

2. La concentracin de la enzima y el tiempo de tratamiento parecen estar
directamente relacionados con el tamao de los cromosomas y con la actividad
de la enzima.

FLUOROCROMOS
Otras tcnicas ms avanzadas han sido utilizadas, como los tratamientos de las
preparaciones cromosmicas mediante fluorocromos (Quinacrina, DAPI, Cromomicina A3
y Mitramicina). Estos colorantes permiten identificar regiones ricas en A-T (DAPI,
Quinacrina) o G-C (Cromomicina A3, Mitramicina), dependiendo de su especificidad.
Fluorocromos base-especficos, en especial Mitramicina y Cromomicina A3 (CMA3),
fueron ampliamente utilizados en el estudio de NORs en peces, ya que la asociacin de
regiones ricas en CG y genes ribosomales es considerada comn en telesteos (Amemiya
y Gold, 1986).

COLORACIN CON CROMOMICINA A3 (CG

ESPECFICO)
Esta tcnica usada de manera rutinaria es la descrita por Bella (1993):
Soluciones
1. Cl2Mg 1M
2. Tampn McIlvaine
cido ctrico ......................................... 0,378g
Na2HPO4 12H2O................................. 5,873g
H2O deionizada ................................. 100,00 ml
Ajustar a pH 7,0 con NaOH
3. Un (1) ml de solucin 2 + 5 l da solucin 1 + 1ml de glicerina para fluorescencia.

87

Fig. 26. Metafase de Corydoras aeneus coloreada con

Cromomicina A3. Fotografa proporcionada por la Dra.
Cristiane Kioko Shimabukuro Dias.

Tampn para CMA3

47 l de solucin 1 + 10 ml de solucin 2 + 10ml de H2O deionizada
1- Tomar los 20 ml de tampn para CMA3 y adicionar muy lentamente sobre 10
mg de CMA3 (polvo) sin agitar. Dejar toda la noche en la nevera donde se
disolver lentamente. Puede dejarse muchos meses en la nevera y mientras
ms tiempo, la solucin es mejor. Esta solucin de CMA3 se utiliza
directamente como colorante.
2- Para contracolorear DA-CMA3, se incuban las preparaciones hechas 2 3
das antes en la solucin de CMA3 indicada anteriormente, por 60 min, en la
oscuridad y a temperatura ambiente.
3- Lavar con agua deionizada y secar al aire en la oscuridad;
4- Incubar durante 15-20 min en la oscuridad y a temperatura ambiente con
una solucin recin preparada de (0,05-0,1mg/ml) de distamicina A en agua
demonizada.
5- Lavar con agua deionizada y secar al aire en la oscuridad.
6- Montar las preparaciones con solucin 3 e incubar a 37 C en la oscuridad
por pelo menos 20 das. Observar al microscopio de fluorescencia a 436 nm.
La fluorescencia de CMA3 decae rpidamente durante la observacin; la misma
se restablece repitiendo los dos ltimos pasos.
88

TCNICA DE COLORACIN CON DISTAMICINA-DAPI

Esta tcnica usada de manera rutinaria es la descrita por Bella (1993):

Fig. 27. Metafase de Hisonotus leucofrenatus coloreada con

DAPI. Fotografa suministrada por el Dr. Artur Antonio

Andreata.
Soluciones
1. DAPI Solucin madre
DAPI ............................................. 0,1 mg
Agua deionizada .............................. 1 ml
Cubrir con papel de aluminio y congelar en el freezer.
2. DAPI - Solucin de trabajo
DAPI (Solucin madre) .................... 10 l
Agua deionizada .............................. 1 ml
Coloracin
1- Colocar aproximadamente 150 l (3 gotas) de solucin de Distamicina A recin
preparada con agua deionizada (0,05-0,1mg/ml) sobre la lmina. Cubrir con
cubreobjetos (utilizar, si es posible, portaobjetos grandes). Atencin, manipular con
guantes ya que estos compuestos son peligrosos! Incubar por 15-20 min a
temperatura ambiente.
2- Lavar con agua deionizada y secar al aire en la oscuridad.
89

3- Colorear con DAPI (1 g/ml em agua deionizada) durante 30 min en la oscuridad a

temperatura ambiente. La concentracin final de DAPI se obtiene de una solucin
madre (0,1mg/ml en agua deionizada) que se mantiene congelada en alcuotas
durante meses (tomar 10 l da solucin madre y disolver en 1 ml de agua
deionizada).
4- Montar la preparacin con glicerina para fluorescencia/agua deionizada (1:4) y
observar en microscopio de fluorescencia a 365nm.

TCNICA DE COLORACIN CON DISTAMICINAMITRAMICINA

Esta tcnica ha sido descrita por Bella (1993):
Soluciones
1. Distamicina
Distamicina ................................ 300,00 g
Tampn McIlvaine ....................... 1,00 ml
Preparar en el momento. No puede ser almacenada. Rinde hasta 7 lminas.
2. Mitramicina
Mitramicina .................................... 0,10 mg
Tampn McIlvaine ....................... 1,00 ml
Adicionar MgCl2.6H2O 10 mM (concentracin final)
Puede ser guardada en el refrigerador, cubierta con papel de aluminio.
3. Mitramicina (Solucin para mayor cantidad))
Mitramicina ..............................1,00 mg
Tampn McIlvaine .........................10,00 ml
MgCl2.6H2O .................................. 20,33 mg

90

Coloracin:
1- Colocar 50 l de Distamicina sobre la lmina seca, cubrir con un cubreobjetos
cuidadosamente para no dejar burbujas de aire. Precaucin: estos fluorocromos son
altamente peligrosos, usar guantes. Dejar 15 min a temperatura ambiente;
2- Retirar el cubreobjetos con un golpe.
4- Lavar dos veces en tampn McIlvaine (el tampn est en una jarra de coplin,
sacudir bien las lminas, unos 30 s cada vez).
5- Secar al aire.
6- Colocar 150 l de mitramicina sobre la lmina. Cubrir con un cubreobjetos y dejar
por 30 min a temperatura ambiente.
7- Retirar el cubreobjetos.
8- Lavar dos vecesen tampn McIlvaine (30 s cada vez, sacudiendo).
9- Secar al aire.
10- Agregar solucion acuosa de sacarosa saturada y colocar un cubreobjetos.
Nota: La Distamicina es utilizada para contracolorear los cromosomas.

HIBRIDACIN IN SITU POR FLUORESCENCIA

La Hibridacin in situ por Fluorescencia (FISH) es una tcnica que permite la
deteccin de un cromosoma, de una regin cromosmica, de un gen o grupo de genes o
an de secuencias particulares, con sondas especficas de ADN.

Fig. 28. A) Metafase de Triportheus orinocensis hibridada con sonda 18S. B) Metafase de
Oreochromis niloticus hibridada con una sonda de ADN satlite (SATA).

Como se expres en apartados anteriores, algunas de las tcnicas convencionales

permiten detectar regiones especficas en los cromosomas, como por ejemplo las NORs,
sin embargo, el nico procedimiento capaz de revelar su localizacin y la cantidad de
cromosomas portadores de genes ribosomales es la hibridacin in situ, en este caso, con
sondas de ADNr.
91

Primero, la muestra de ADN (cromosomas metafsicos o ncleos en interfase)

se desnaturaliza, proceso que separa las hebras complementarias de la estructura en
doble hlice del ADN. A la muestra desnaturalizada se le aade entonces la sonda de
inters (tambin desnaturalizada), marcada con fluorescencia, que se hibridar al
ADN de la muestra en el sitio diana, en el proceso denominado templado, donde se
vuelve a formar una doble hlice. La seal de la sonda se observa mediante un
microscopio de fluorescencia y el diagnstico se realiza segn la presencia o ausencia
de la seal.
La FISH puede usarse sobre clulas en metafase para detectar
microdeleciones especficas ms all de la resolucin de la citogentica de rutina o
para identificar material extra de origen desconocido. Puede tambin ser de ayuda en
casos donde es difcil determinar mediante la citogentica de rutina si un cromosoma
tiene una deleccin simple o est implicado en una reorganizacin sutil o compleja.
Utilizando esta tcnica en peces neotropicales, han sido localizadas secuencias de
ADN satlite en Hoplias malabaricus (Haaf et al, 1993) y en Astyanax scabripinnis
(Mestriner et al., 2000) y ADNr 5S en Oreochromis niloticus (Martins et al., 2002).
La metodologa de coloracin con FISH est descrita en varios trabajos (Pinkel
et al. 1986; Hamkalo y Elgin 1991; Oliveira y Wright, 1998; Martins & Galetti, 1999;
Wasko & Galetti, 2000; entre otros). La tcnica comnmente empleada consiste en:
Marcacin de la sonda
Marcar la sonda con biotina-11-dATP, mediante el mtodo de nick translation,
utilizando cualquiera de los kits disponibles en el mercado (por ejemplo, el kit
BionickTM Labeling System (Gibco.BRL):
1. En un tubo de 1,5 ml, mantenido en hielo, mezclar:
- 5 l de dNTP mix 10x
- aproximadamente 1 g de ADN (sonda) cantidad para 8 lminas
- 5 l de Mix de enzima 10x
- Agua milli-Q para completar 45 l
2. Mezclar muy bien y centrifugar brevemente por 5 s.
3. Incubar a 16 C por 1 2 h.
4. Adicionar 5 l de Stop Buffer.
5. Adicionar 5 l de acetato de sodio 3M ms 100 l de etanol absoluto bien
frio(preferiblemente colocado en ultrafreezer a -70 C). Mezclar inviertiendo el tubo
varias veces.
6. Manter a -20 C durante no menos de 3 h.
92

7. Centrifugar el material a 13.000 r.p.m. por 10 min.

8. Descartar el sobrenadante cuidadosamente y adicionar 50 l de etanol 70% bien
fro.
9. Centrifugar el material una vez ms a 13.000 r.p.m. durante 5 min.
10. Descartar el sobrenadante con mucho cuidado y secar en estufa a 37oC.
11. Resuspender la sonda marcada en 80 l de agua milli-Q.
Preparacin de las lminas
Las lminas pueden ser preparadas con un da de antelacin o justo antes de ser usadas.
1. Tratar cada lmina con las preparaciones cromosmicas con 100 l de solucin de
RNAsa 40 g/ml (0,4 l de RNAsa 10mg/ml y 99,6 l de 2xSSC - para cada lmina)
durante 1 hora y 30 min, en cmara hmeda con 2xSSC, a 37 C.
2. Lavar las lminas en 2xSSC durante 10 min.
3. Repetir el lavado en 2xSSC.
4. Deshidratar as lminas en serie alcohlica (etanol frio70%, 85% y 100%) durante 10
min en cada concentracin.
5. Colocar las lminas en formamida 70% diluda en 2xSSC durante 5 min a 70oC
(utilizar 28 ml de formamida y 12 ml de 2xSSC) para provocar la desnaturalizacin del
ADN en los cromosomas. Esta solucin se puede guardar para ser reutilizada (ver
ms adelante en el texto).
6. Deshidratar las lminas nuevamente en serie alcohlica (etanol fro 70%, 85% y
100%) por 5 min en cada concentracin.
7. Dejar secar las lminas al aire.
Hibridacin
1. En el tubo que contiene la sonda (80 l), agregar 200 l de formamida
(concentracin final de 50%), 80 l de sulfato de dextrano 50% (concentracin final de
10%) y 40 l de 20xSSC (concentracin final de 2xSSC).
2. Desnaturalizar la solucin de hibridacin en bao hirviente durante 10 min y colocar
inmediatamente en hielo.
3. Colocar 50 l de solucin de hibridacin (conteniendo cerca de 125 ng de la sonda)
sobre un cubreobjetos e invertir sobre la lmina.
4. Mantener las lminas, con el material volteado hacia abajo, en cmara hmeda con
2xSSC, a 37 C durante 12-14 h.
Lavado
93

1. Lavar las lminas en 2xSSC a temperatura ambiente apenas para desprender los
cubreobjetos. Desde este momento las lminas no pueden secarse..
2. Lavar las lminas en solucin de formamida 50% diluda en 2xSSC por 15 min a
37C. Puede emplearse las solucin del dia anterior - agregar 16 ml de 2xSSC).
3. Lavar en 2xSSC por 15 min a 37 C.
4. Lavar en 2xSSC por 15 min a temperatura ambiente.
5. Lavar en 4xSSC por 5-10 min a temperatura ambiente.
Deteccin:
1. Sobre cada lmina, colocar 70 l de FITC 0,07% (Fluorescena Isotil Cianato Avidina Conjugada) diluida en tampn C (usar 0,1 l de solucin stock de FITC 250
g/100 l, y 70 l de tampn C).
2. Cubrir con un cubreobjetos y dejar por 40 min a 1 hora en cmara hmeda con
2xSSC a 37oC.
3. Lavar en tampn de bloqueo recin preparado a 42 C durante 5 min, con agitacin.
4. Repetir el lavado en tampn de bloqueo dos veces ms.
5. Escurrir las lminas y secarlas por debajo.
6. Aplicar, sobre cada lmina, 80 l de anticuerpo anti-avidina biotina conjugada (2 l
de anti-avidina stock y 78 l de tampn de bloqueo).
7. Cubrir la lmina con un cubreobjetos y dejar en cmara hmeda con 2xSSC a 37 C
durante 30 min.
8. Lavar en tampn de bloqueo a 42 C durante 5 min, con agitacin.
9. Repetir el lavado en tampn de bloqueo dos veces ms.
10. Aplicar nuevamente el FITC sobre la lmina. (La seal de hibridacin puede ser
aumentada mediante pasos sucesivos utilizando avidina-FITC y anti-avidina biotinilada
sobre la lmina).
11. Lavar las lminas en tampn de bloqueo a 42 C durante 5 min, con agitacin.
12. Repetir el lavado en tampn de bloqueo dos veces ms.
13. Lavar en 4xSSC y Triton 2% a temperatura ambiente durante 3 min, con agitacin.
14. Repetir el lavado en 4xSSC y Triton 2%.
15. Lavar en 4xSSC y Triton 0,2% a temperatura ambiente durante 3 min, con
agitacin.
16. Repetir el lavado en 4xSSC y Triton 0,2%.
17. Escurrir las lminas y dejar secar al aire.
Montaje de las lminas
Aplicar Ioduro de Propidio en las lminas para hacer la contracoloracin del material
25 l de antifading (Vectashield antifade-Vector) y 1 l de solucin de ioduro de
propidio (50 g/ml) por cada lmina.

94

Anlisis
Analizar las preparaciones de hibridacin fluorescente in situ en microscopio de
fluorescencia, con filtro 450-490 nm.
Soluciones
20xSSC
NaCl - 175,3g
Citrato de sodio - 88,2g
Agua destilada hasta completar 800ml
Ajustar a pH 7,0
Agua destilada hasta completar 1000ml
T am p n d e B lo q u eo
(NaHCO3 1.26%, citrato de sodio 0.018%, Triton 0.038% y leche descremada 1%)
para 1800ml:
4,41g NaHCO3
0,324 g citrato de sodio
694,28 l de Triton 20 o 138,85 l de Triton 100
completar com agua destilada hasta 1.800 ml
mezclar bien
medir el pH (debe estar entre 8,0-10,8)
agregar 3,5 g de leche descremada en polvo
mezclar bien y mantener a 42 C en bao-mara
Tampn C
Bicarbonato de sodio 0,1M pH 8,5
NaCl 0,15M
Dividir en alcuotas, esterilizar en autoclave y guardar a -20 C.

95

ANEXO 1: BREVE HISTORIA DE

LA CITOGENTICA DE PECES
NEOTROPICALES DE AGUA
DULCE
Lurdes Foresti de Almeida Toledo
Universidade de So Paulo, So Paulo, SP, Brasil
La ictiofauna neotropical de agua dulce comprende, segun inventario reciente,
4475 especies vlidas ms 1550 especies no descritas, totalizando 6025 especies
(Reis et al., 2003). Esta vasta variabilidad de especies ha sido objeto de estudios
gentico-evolutivos y citogenticos que se han intensificado en los ltimos 30 aos,
con un importante impacto en el conocimiento y conservacin de la biodiversidad de
peces notropicales.
Los estudios citogenticos en especies de peces tropicales comenzaron a
ganar terreno en los primeros aos de la dcada que se inici en 1971, siendo que
hasta entonces, haba poca informacin sobre ese grupo de peces. An cuando
algunas tcnicas para la obtencin de cromosomas de peces ya haban sido descritas,
los estudios disponibles se limitaban practicamente a peces de regiones templadas. A
lo largo de esta dcada, descripciones cariotpicas de algunas espcies neotropicales
fueron publicadas por investigadores como Howell (1972) y Scheell et al., (1972),
entre otros.
Para entonces fueron publicadas, varias listas con las revisiones sobre
nmeros cromosmicos haploide de peces en las que aparecian varias especies
Neotropicales de modo que en 1978 ya se disponia de datos sobre 230 especies
neotropicales obtenidas por investigadores no latinoamericanos, en 1978, se dispone
ya de datos de 230 de esas especies, obtenidos por investigadores no
latinoamericanos. Sin embargo, el origen geogrfico de esas especies no era
generalmente informado posiblemente por tratarse de especmenes obtenidos de
acuarilfilos.
Paralelamente, es a partir de 1971, con el desarrollo de tcnicas de estudio
cromsomico de mayor resolucin, cuando comenzaron a surgir en Brasil los primeros
estudios citogenticos en peces. En la casi totalidad de estos estudios los ejemplares
provenian de poblaciones naturales, lo que propici el desarrollo de estudios
comparativos entre especies y poblaciones. El nmero de estos estudios fue
aumentando de manera continua, de modo tal que, el conocimienrto citogentico
96

sobre las especies de peces neotropicales de agua dulce salt de 252 especies
analizadas en 1978, a 1041 en 2004. Para muchas de esas especies fueron
analizadas diferentes poblaciones, lo que eleva el nmero de estudios a 1731
poblaciones (Oliveira, 2004, base de datos no publicada).

Evolucin de los estudios citogenticos, en especies gneros y

familias de peces neotropicales de agua dulce desde 1978 a
2004.

Los primeros datos citogenticos sobre esas especies y poblaciones, obtenidos

por investigadores brasileros, fueron presentados en comunicaciones a Congresos
cientficos y algunos de ellos nunca fueron publicados en revistas. El primero de esos
estudios fue realizado por Andrea (1971), en Synbranchus marmoratus, al cual
siguieron los estudios de Foresti (1974), sobre el cariotipo de Phalloceros
caudimaculatus y el de Foresti et al., (1974) sobre especies de la famlia Curimatidae,
y las disertaciones de Maestra de Toledo (1975), sobre Pimelodidae, y de Michele
(1975) sobre Loricariidae. En 1977, se publicaron en revistas cientficas
internacionales los primeros artculos sobre investigaciones citogentica de peces
Neotropicales realizadas en Brasil. Estas publicaciones describian el cariotipo de
Geophagus brasiliensis (Michele y Takahashi, 1977) y de algunas especies de
Loricariidae (Michele et al., 1977).
A finales del ao 1978 con dos tesis doctorales, una sobre Erythrinidae
(Bertollo, 1978) y la otra sobre Gymnotiformes (Almeida-Toledo, 1978), y con la
produccin de un nmero importante de comunicaciones presentadas en Congresos,
sobre Characidae, Curimatidae y Prochilodontidae (Foresti et al., 1974; Foresti et al.,
1977), aparecieron tres grupos de investigacin que formaron la base inicial de la
Citogentica de Peces Neotropicales en Brasil: el grupo de la Universidad Estadual
Paulista, en Botucatu, SP, dirigido por el Prof. Fausto Foresti; el grupo de la
97

Universidad Federal de So Carlos, en So Carlos, SP, liderizado por el Prof. Luis

Antnio Carlos Bertollo; y el grupo de la Universidad de So Paulo, de So Paulo, SP,
conducido por la Profa. Lurdes F. Almeida-Toledo. Esos grupos se encuentran activos
actualmente y muchos investigadores formados en el seno de ellos liderizan o forman
parte de unos 15 grupos que trabajan en Citogentica y Gentica Molecular de Peces
actualmente en Brasil.
Los estudios citogenticos de peces neotropicales dulceacucolas, que en 1978
apenas constaban de nmeros cromosmicos y frmulas cariotpicas obtenidas
mediante coloracin convencional con Giemsa (Almeida-Toledo, 1978) evolucionaron
a investigaciones actuales sobre un gran nmero de espcies, utilizando un conjunto
importante de marcadores cromosmicos. Esos marcadores, actualmente permiten
realizar estudios comparativos de especies y poblaciones, y han hecho posible
identificar la ocurrencia de sistemas de cromosomas sexuales morfologicamente
diferenciados, cromosomas supernumerarios, evolucin por poliploidia, y variabilidad
cromosmica inter e intra-especfica.
Mientras que durante la dcada anterior, los estudios se limitaban a coloracin
convencional de los cromosomas, ya en la dcada que se inici en 1981 se habian
publicado los primeros datos sobre patrones de distribucin de heterocromatina
constitutiva y localizacin de las regiones organizadoras del nucleolo (RONs), en
Apteronotus albifrons (Almeida-Toledo et al., 1981), especie que presenta el menor
nmero cromosmico conocido en los Gymnotiformes, y en Anostomidae (Galetti et
al., 1984). Tambin fue descrita la naturaleza polimrfica de las regiones
organizadoras de nucleolo en peces (Foresti et al., 1981). En esa poca ya habian
sido identificadas las primeras especies de peces neotropicales con cromosomas
sexuales morfologicamente diferenciados (Bertollo, 1978; Almeida-Toledo, 1978).
Otros marcadores citogenticos fueron paulatinamente identificados, como la
presencia de cromosomas supernumerarios (Bs) en Prochilodus lineatus (Pauls y
Bertollo, 1983) y comenz a ser estudiada la evolucin por poliploida en Corydoras
(Oliveira, 1987). Actualmente ya han sido descritas unas 50 especies que presentan
cromosomas sexuales morfolgicamente diferenciados (Centofante et al., 2002), y
unas 40 especies portadoras de cromosomas B (Oliveira 2004, disponible en
www.ibb.unesp.br/lbgpe).
Otras tcnicas citogenticas fueron incorporadas, como por ejemplo la
coloracin con fluorocromos, que brinda importante informacin sobre la naturaleza de
las secuencias de regiones heterocromticas ricas en Adenina-Timina o GuaninaCitosina (Almeida-Toledo et al., 2001), las bandas R en regiones eucromticas,
obtenidas por incorporacin de 5-Bromodeoxiuridina en Eigenmannia virescens
(Almeida-Toledo et al., 1988b), las bandas de restriccin (Almeida-Toledo et al.,
2001), e hibridacin in situ con secuencias de DNAs ribosmico, como en dos
98

citotipos de Eigenmannia (Almeida-Toledo et al., 1996) o en Astyanax (AlmeidaToledo et al., 2002), con sondas de DNA ribosmico 5S. Numerosos estudios
utilizando estos marcadores fueron realizados por otros investigadores, en un gran
nmero de especies. Ms recientemente, fueron obtenidas secuencias de DNA
repetitivo no asociada a los DNAs ribosmicos para hibridacin in situ (Jesus et al.,
2003). La existencia de todos estos marcadores cromosmicos deber hacer posible,
a corto plazo, el mapeo fsico de los cromosomas de especies de inters para
estudios aplicados o para estudios filogenticos.
Por otro lado, la asociacin de marcadores citogenticos y moleculares, como viene
ocurriendo en estudios ms recientes en peces neotropicales, involucrando anlisis
citogentos y secuenciacin de segmentos de DNA mitocondrial y nuclear,
seguramente har posible un avance considerable del conocimiento y la conservacin
de la biodiversidad de la ictiofauna neotropical.

99

ANEXO 2: LOS CARACTERES

CROMOSMICOS Y LA ACUACULTURA.
Julio E. Prez
Laboratorio de Gentica
Instituto Oceanogrfico de Venezuela, Universidad de Oriente

El conocimiento del cariotipo, vale decir, del nmero y estructura de los

cromosomas, es de gran importancia en estudios sistemticos y filogenticos (Nirchio
et al., 2002a, 2003b, 2005), pero adems tiene una gran importancia en la agricultura
y en el caso de los peces, en la acuicultura. Una de las vas en el mejoramiento
gentico de organismos acuticos cultivados es la de determinar el cariotipo de dos
especies (Nirchio et al. 2003a) para predecir, por ejemplo, la posibilidad de cruzar con
xito dos especies cuyos mejores caracteres puedan reunirse en los hbridos. La
similitud de los cariotipos indicara, en este caso, elevadas posibilidades de una
hibridacin exitosa.
Un ejemplo de hibridacin intraespecfica e interespecfica exitosa ha sido
realizada en cepas y especies de bagres cultivados en los Estados Unidos. La
principal especie cultivada es el bagre de canal (Ictalurus punctatus), con varias cepas
domesticadas que crecen ms rpidamente que las salvajes. Cruces intraespecficos
de estas cepas han producido hbridos F1 con vigor hbrido en la mayora de los
casos. Este tipo de hibridacin ha resultado en el mejoramiento de caracteres tales
como: crecimiento, resistencia a algunas enfermedades, fecundidad, etc. (Dunham, et
al., 2001). La hibridacin interespecfica entre los bagres de canal con el bagre blanco
(I. catus), o del bagre azul (I. furcatus) con el bagre blanco son difciles de realizar y
muchos hbridos resultan anormales. Esta dificultad es causada por la diferencia de
cariotipos (nmero y morfologa de los cromosomas). El bagre blanco tiene 48
cromosomas, 10 de los cuales son grandes; las especies de bagres de canal y azul
por otra parte presentan 58 cromosomas todos de pequeo tamao. Los hbridos
entre blancos x azules y blancos x canal, tienen un numero intermedio de
cromosomas. Como es de esperar, los hbridos producidos por cruces entre azules y
canales, especialmente hembras canal x machos azul son fciles de obtener y son
superiores a los bagres de canal en varios fenotipos tales como: crecimiento,
conversin alimenticia, ms tolerantes a bajas concentraciones de oxgeno,
resistentes a enfermedades y son ms uniformes en tamao, lo cual es una ventaja
para las procesadoras automticas, y esto significa disminucin de los costos
(Dunham, et al. 2001).

100

Otro aspecto muy interesante, relacionado con caracteres cromosmicos, es el

conocimiento de la determinacin sexual en los peces, en los cuales existen una serie
de formas de determinacin sexual (Alfonsi y Prez, 1994), siendo las principales:
a) mecanismo de determinacin sexual XX XY, similar al de los mamferos,
donde las hembras homogamticas (XX), producen un solo tipo de gametos en
relacin con los cromosomas sexuales. Los machos (XY), son heterogamticos,
producen dos tipos de espermios, unos portadores del X y otros del Y. La mezcla al
azar de los gametos origina hembras y machos en proporcin de 1:1. Se presenta en
truchas, salmones, algunas especies de tilapia, tales como: O. mossambicus y O.
niloticus y en los bagres de canal, entre otros.
b) mecanismo ZZ-ZW, similar al presentado por las aves, en el cual las
hembras son heterogamticas ZW y los machos homogamticos ZZ. Lo presentan
algunas especies de tilapias: O. hornorum, O. aureus, O. macrochir, O. varibilis.
Debemos sealar que el sexo en los peces generalmente no es tan
vigorosamente controlado por sistemas genticos de determinacin sexual, como
ocurre con mamferos y aves. Por otra parte, se conocen muy pocas especies de
peces con cromosomas sexuales diferenciados (Blanc et al. 2001, Ota et al. 2003). En
ocasiones, la existencia de cromosomas sexuales se deduce mediante cruces
apropiados.
El cruzamiento entre especies de diferente mecanismo de determinacin
sexual, puede resultar en poblaciones monosexuales. Los ejemplos mejor
documentados se presentan en las tilapias.
En muchas zonas tropicales o subtropicales, el cultivo de tilapias tiene una gran
importancia. Estos peces crecen en cultivos semi-intensivos, que permiten la
reproduccin natural y, puesto que se trata de peces muy prolficos y precoces
sexualmente, producen gran nmero de peces pequeos de poco inters comercial.
La produccin de cultivos monosexuales parece la solucin, ya que reduce o elimina
la reproduccin. En este caso se prefieren los machos por tener un crecimiento ms
rpido que las hembras.
La produccin de hbridos puros machos se basa en los diferentes tipos de
determinacin sexual que presentan las especies de tilapias. Algunas tienen el
mecanismo XY-XX y otras el mecanismo WZ - ZZ. Es importante sealar que la
presencia de cromosomas sexuales en tilapias no se ha determinado visualmente,
pero se infiere por estudios de cambio de sexo y de hibridaciones, empleando
especies que presentan distintos tipos de determinacin sexual. Para producir tilapias
hbridas puros machos, se debe cruzar dos sexos homogamticos: hembras XX de
una especie como Oreochromis mossambicus u O. niloticus con machos ZZ de una

101

especie con determinacin WZ-ZZ como O. hornorum, O. aureus, O. variabilis, O.

macrochir.
El conocimiento del cariotipo tambin puede ser importante en la planificacin
de modificaciones a la ploida y comprobacin de su ocurrencia.
La mayor parte de los organismos de reproduccin sexual tienen dos sets o
conjuntos de cromosomas y se les conoce como diploides (2n). Los cromosomas
existen en pares, un miembro de cada par viene de la madre y el otro del padre.
Algunas especies de organismos tienen ms de dos sets de cromosomas: los
triploides (3n) tienen tres, los tetraploides (4n) tienen cuatro sets. En relacin con los
triploides, se han encontrado algunos en poblaciones naturales del ciprnido
Hesperoleucus symmetricus (Gold & Avise, 1976), en poeclidos del gnero
Poecilopss (Quathro et al. 1992) y en Poecilia formosa (Kallman, 1968). Los casos
de tetraploides son ms comunes, ya que los salmnidos y catostmidos son
tetraploides y esta duplicacin de 2n a 4n se considera que ha sido una importante
fuerza evolutiva. Sin embargo, a pesar de que estos peces son tetraploides, se
comportan como diploides y se les considera diploides funcionales.
En los diploides, los vulos y los espermios llevan un solo complemento
haploide (n). Cuando el espermio fertiliza al vulo (u oocito), los dos ncleos haploides
se fusionan y se restablece el estado diploide. Sin esta reduccin no ocurriera, el
nmero de cromosomas se duplicara en cada generacin.
Las espermatogonias y ovogonias de testculos y ovarios, se multiplican por
mitosis y originan clulas ms pequeas, los espermatocitos y ovocitos primarios. Al
comenzar la meiosis I, que es una divisin reduccional, los cromosomas son dobles,
cada uno tiene dos cromtidas, y al disponerse las parejas de homlogos en la
metafase se forman las llamadas ttradas, las cuales originarn diadas al final de la
meiosis I y cromosomas simples al finalizar la meiosis II. Es en la profase de la
meiosis I cuando se produce el intercambio de material hereditario entre los
cromosomas homlogos, intercambio conocido con el nombre de crossing-over o
entrecruzamiento. Finalizada la telofase I se originan dos clulas por divisin
citoplasmtica, los espermatocitos y ovocitos secundarios, cada uno con un
cromosoma (con dos cromtidas) de cada par. Inmediatamente, o despus de un
lapso de tiempo conocido como intercinesis, comienza la Meiosis II, con su profase II,
en la cual se pueden observar los cromosomas con sus dos cromtidas unidas por su
centrmero (diadas), en preparacin para la prxima divisin meitica. Los
cromosomas se disponen en el plano ecuatorial (metafase II) y en anafase II se
dividen los centrmeros convirtindose cada cromtida en un cromosoma. En telofase
II los ncleos tendrn un miembro de cada par de cromosomas homlogos; stos son
los ncleos de las espermtidas y ovtidas. Las espermtidas sufren cambios
nucleares y citoplasmticos que conducirn a la formacin de los esperrnios. De las
102

meiosis I y II resultarn cuatro ncleos haploides. En el caso de los machos, de cada

clula germinal se producirn cuatro espermatozoides, mientras que en las hembras,
por divisiones citoplasmticas desiguales (debido a que el vulo debe suministrar
alimento al futuro embrin), tres de los cuatro productos de la meiosis sern unas
pequeas clulas abortivas llamadas cuerpos polares que contienen muy poco
citoplasma. As, en las hembras se formar un ovocito y dos (ocasionalmente tres),
cuerpos polares. Un set de cromosomas producidos por la meiosis I permanece en el
ovocito, mientras que el otro set es eliminado dentro del primer corpsculo polar.
Igualmente el segundo cuerpo polar contiene uno de los sets de cromosomas
derivados de la meiosis II. A veces el primer corpsculo polar puede sufrir su propia
meiosis II originndose un total de tres corpsculos.
En ocasiones ocurren anormalidades tanto en la mitosis como en la meiosis y
se producen clulas u organismos aneuploides, vale decir, con cromosomas de ms o
de menos que el nmero diploide. Esto se traduce muchas veces en anomalas
funcionales que podrar ser una de las causas de la gran variacin en tamao que
presentan las ostras juveniles, como las halladas en Crassostrea gigas, en que el
tamao est relacionado con la prdida de cromosomas: los individuos de mayor talla
son los que tienen su complemento cromosmico completo (2n = 20). La talla
disminye a medida que la prdida de cromosomas es mayor (Thiriot-Qhivreux et al.,
1992).
En la ovognesis de algunas especies, las divisiones meiticas se encuentran
detenidas y se reanudan con la penetracin del espermio en la clula que originar el
vulo. Este es el caso de los moluscos y crustceos en los que el proceso se
encuentra detenido en metafase I y en peces, en los que se encuentra detenido en la
profase II.
Triploides
Los organismos triploides, muy empleados en acuicultura poseen tres sets de
cromosomas. La meiosis es un proceso muy complejo de apareamiento de los dos
sets de cromosomas y la presencia de un tercer set en los triploides complica an ms
el apareamiento y determina que generalmente los triploides sean estriles, esterilidad
que puede resultar en la ausencia total de gametos funcionales o en la produccin de
stos en un nmero reducido.
Bsicamente se pueden distinguir dos formas de obtener triploides. La primera, por el
cruzamiento de un tetraploide con un diploide, en que los primeros se obtienen por
choques de presin aplicados al inicio de la primera divisin mittica. El embrin
permanece en el estado de una clula, y los dos ncleos diploides se fusionan para
formar uno tetraploide. Esto se ha realizado en varias especies, como por ejemplo la
trucha arco iris,en la que algunos especmenes han sido llevados hasta adultos.

103

Los tetraploides as obtenidos, en general presentan viabilidad y crecimiento

reducidos, pero son frtiles por lo menos parcialmente, lo cual se ha podido
comprobar en la trucha arco iris y en el bagre de canal, Ictalurus punctatus. Tambin
se ha intentado producir tetraploides en las tilapias Oreochromis niloticus y O.
mossambicus y se han producido embriones tetraploides que no se han desarrollado
bien (Prez, 1996). La segunda forma de obtener triploides se basa en la supresin en
el ovocito de una de las divisiones meiticas, por ruptura del huso acromtico. Esto se
logra mediante choques trmicos o de presin, o por el empleo de algunos
compuestos qumicos. Estos procedimientos son posibles de realizar en peces,
moluscos y crustceos, porque en estos organismos, como ya se explic, la meiosis
no se ha completado y estrictamente hablando los gametos femeninos son ovocitos
primarios en moluscos y crustceos (meiosis bloqueada en metafase I) y ovocitos
secundarios en peces (meiosis bloqueada en profase II). Al penetrar el espermio el
proceso meitico se reanuda y culmina con la formacin del cigoto. Mientras las
divisiones meiticas toman lugar, la cabeza del espermio penetra el ovocito y el
proncleo masculino migra para unirse al proncleo femenino en el plato metafsico.
Examinemos las consecuencias de interrumpir (impidiendo la formacin del
huso), la meiosis I en moluscos y crustceos o la meiosis II en moluscos, crustceos y
peces, utilizando un organismo hipottico con un par de cromosomas. Si en la meiosis
I, no se produce la disyuncin de los cromosomas homlogos, el ovocito secundario
resultara constituido por 2 cromosomas (4 cromtidas). Posteriormente la meiosis II
separara los homlogos y a la vez dividiria el centrmero obtenindose una ovtida
con 1 cromosoma (2 cromtidas) y el segundo cuerpo polar. Si se interrumpe la
meiosis II, el ovocito secundario se convertir en una ovtida con 2 cromosomas (4
cromtidas).
Como se mencion anteriormente, es posible producir triploides empleando
diferentes tcnicas:
a) choques de temperatura: pueden ser temperaturas altas o bajas; en general la
variacin es de unos 10 oC por encima o por debajo de la temperatura a la cual ocurre
normalmente el desarrollo y se emplea cuando se tratan grandes volmenes de
ovocitos.
b) presiones elevadas: la aplicacin de 7.000 a 10.000 psi (libras por pulgada
cuadrada), permite producir triploides y tetraploides. En este caso, despus de 4 a 8
min de fertilizados, los ovocitos (unos 250-500) son colocados en un cilindro lleno de
agua, cerrndolo con un pistn y mediante una prensa hidrulica se eleva la presin
rpidamente alcanzando la deseada en pocos segundos; a esto sigue una
descompresin inmediata. El inconveniente con esta metodologa es el reducido
nmero de ovocitos que se puede tratar.

104

c) compuestos qumicos: se utiliza principalmente la citocalasina B (CB) o el 6dimetilamino purina (6-DMAP). Inicialmente se emple la CB, pero exmenes por
parte de agencias del gobierno de los Estados Unidos, demostraron que el compuesto
es teratgeno, lo que ha determinado el cambio hacia 6-DMAP. Uno de los mayores
inconvenientes observados en el empleo de compuestos qumicos, es la elevada
mortalidad.
En las granjas de cultivo de la trucha arco iris, tanto en Europa como de
Estados Unidos, es usual el empleo de triploides. Durante la poca reproductiva las
truchas declinan no slo en su crecimiento, sino tambin en la calidad de su carne.
Esto ocurre especialmente en los machos, que generalmente maduran un ao antes
que las hembras, a veces a los 10 meses. Los machos adquieren una apariencia
desagradable y una actitud agresiva, fruto de lo cual sufren heridas, frecuentemente
infectadas por hongos y bacterias. Adems en algunas cepas los machos mueren al
final de la poca reproductiva. Este problema ha sido en parte solucionado eliminando
los machos mediante el empleo de hormonas, como lo veremos ms adelante. Sin
embargo, la triploida es el mtodo ms simple y confiable de producir truchas
estriles, y se prefiere a la utilizacin de esteroides.
Los efectos de la triploida no son evidentes externamente, las diferencias
principales se encuentran a nivel celular. La incorporacin de un set extra de
cromosomas aumenta el tamao del ncleo y de la clula, aproximadamente en la
relacin 1,5:1. Sin embargo, y puesto que el nmero de clulas se reduce en los
triploides el tamao es similar a los diploides (Prez, 1996).
La triploida tiene efectos muy importantes sobre las gnadas. En los machos
de la trucha arco iris, se desarrollan los testculos y alcanzan un tamao similar al de
los diploides, sin embargo, son casi estriles, el esperma no es capaz de fertilizar o se
produce en muy poca cantidad; an cuando se secretan las hormonas esteroides y
producen los efectos indeseables de la maduracin sexual. Por otra parte, el
desarrollo de los ovarios est suprimido y se pueden observar como estructuras muy
pequeas. As la triploida es beneficiosa slo para las hembras en esta especie y lo
recomendable es producirlas exclusivamente.
En relacin con el crecimiento, es preciso sealar que los triploides crecen ms
rpidamente que los diploides solamente durante la poca reproductiva, pero cuando
se cultivan juntos, los diploides crecen ms. Los triploides se cultivan frecuentemente
y el xito de estos animales se debe en parte a que el desove natural, en el hemisferio
Norte, se produce en invierno, cuando la celebracin de la Navidad y el Ao Nuevo,
incrementan la demanda de truchas grandes de alta calidad: los triploides. Su cultivo
es ventajoso, a pesar de que varios estudios en diferentes especies de salmnidos,
han demostrado que la triploidizacin generalmente conduce a una depresin en la

105

supervivencia y en el crecimiento en embriones y larvas, con efectos en el peso

corporal durante un periodo variable de tiempo (Blanc et al., 2001).
Es as, que las ventajas de los triploides para la acuicultura se deben a su
esterilidad, no gastan energa en la formacin de los gametos y en general, alcanzan
mayores tamaos durante la poca de reproduccin y a veces viven ms tiempo. Sin
embargo, a menudo los triploides juveniles exhiben un crecimiento inferior que los
diploides; lo que puede deberse a que la induccin de la triploida en los ovocitos
puede tener efectos dainos sobre el embrin. Como se ha indicado los beneficios de
la triploida son efectivos al llegar la poca reproductiva. Otra ventaja tambin
determinada por su esterilidad, es que durante el perodo reproductivo los triploides no
pierden la textura y el sabor de su carne, lo cual en los diploides puede constituir una
gran desventaja para el acuicultor.
Tambin es motivo de preocupacin de los pequeos empresarios el no
obtener semillas de las grandes compaas, motivado a las dificultades en la
obtencin de triploides. Todos estos problemas se eliminarn cuando sea posible la
obtencin de triploides, a partir de cruces entre diploides normales y tetraploides, los
que reciben el nombre de triploides naturales y los cuales han sido difciles de
obtener.
Una tercera ventaja, adems del mayor crecimiento y el mejor sabor, es el
evitar la propagacin de especies exticas, al hacerlas estriles, aspecto ste de gran
importancia para la conservacin de la biodiversidad. Una cuarta importancia de la
triploida es el aumento de la viabilidad, como es el caso de muchos hbridos de
salmnidos, que no son viables en el estado diploide, pero lo son como triploides.
Examinemos un ejemplo: la septicemia hemorrgica viral (SHV) elimina una quinta
parte de las truchas criadas en Europa. El problema es muy grave porque afecta a los
animales de mayor edad, en los que el acuicultor ha invertido ms. Para obtener
truchas arco iris resistentes al SHV se han producido hbridos entre esta especie
econmicamente interesante y otros salmnidos resistentes al SHV, como el salmn
coho (Oncorhynchus kisutch) esperando obtener hbridos con resistencia y parecidos
a la trucha arco iris. Felizmente se encontr que convirtiendo los hbridos en triploides
se aumentaba considerablemente su supervivencia (Prez, 1996). Los triploides han
comenzado a ser usados en muchas granjas de cultivo, cuyos propietarios se
encuentran permanentemente amenazados por el virus. Por otra parte los peces son
estriles y no sufren los procesos relacionados con la madurez sexual. El
inconveniente es su aspecto; es intermedio entre las especies parentales.
La manipulacin cromosmica tambin puede emplearse para crear individuos
cuyos genomas completos provienen de la madre (ginognesis) o del padre
(andrognesis). Con relacin al primero de los casos debemos sealar que la
ginognesis es la forma natural de reproduccin de unas pocas especies, tales como
106

Poecilia formosa (Hubbs y Hubbs, 1932), Carassius auratus gibelius (Cherfas, 1966).
En la ginognesis artificial los ovocitos son fecundados por espermios expuestos a
rayos ultravioletas (para destruir su material gentico), an cuando son capaces de
fertilizar. Los cigotos resultantes son haploides (n), se desarrollan en forma anormal
y mueren muy rpido. Pero, si estos cigotos haploides son sometidos a choques de
temperatura o de presin, inmediatamente despus de la activacin o durante la
primera divisin del cigoto, ste resultar diploide. Si el choque ocurre inmediatamente
despus de la activacin, el primer o segundo corpsculo polar es retenido y se
fusiona con el ncleo del ovocito. Si el shock ocurre durante la primera divisin
mittica, se fusionarn dos ncleos haploides para formar uno diploide. En ambos
casos los dos sets de cromosomas provienen de la madre.
En vista de que todos los individuos provienen de una sola hembra, el nivel de
consanguinidad debera ser elevado y esto en verdad ocurrira si se interrumpe la
meiosis I (en moluscos por ejemplo, pero difcilmente en peces). Si la interrupcin es
en meiosis II, como se realiza comnmente en peces, la consanguinidad no ser
elevada. La tasa de consanguinidad obtenida por ginognesis es aproximadamente
similar a una generacin de cruces hermano-hermana (Dunham, et al. 2001). Por el
contrario los ginognicos obtenidos al bloquear la primera divisin mittica son
totalmente homocigotos; son productos de la replicacin de un solo set de
cromosomas.
La ginognesis artificial fue realizada por primera vez con peces planos y
actualmente ha sido realizado exitosamente en numerosas especies de peces (Prez,
1996). Si el material que se destruye es el del ovocito, pueden originarse organismos
andrognicos, cuyo genoma proviene exclusivamente del padre. El material gentico
del ovocito se inactiva por exposicin a radiacin gamma y posterior bloqueo de la
primera divisin meitica con alta presin. En estos casos se obtiene homocigosis
total y herencia exclusivamente paterna.
Los organismos andrognicos son ms difciles de obtener que los
ginognicos. La irradiacin de los ovocitos puede destruir el ADN mitocondrial, lo que
afectar el desarrollo de los andrognicos; recordemos que este tipo de ADN es casi
exclusivamente de origen materno y su funcin es primordialmente el metabolismo
energtico.
Existe una importancia adicional para la andrognesis. Como se sabe, se estn
desarrollando los llamados bancos de genes en organismos acuticos, como una
forma de preservar recursos genticos en peligro. Por lo pronto en peces se ha
logrado la criopreservacin de espermios. La andrognesis surge como una
alentadora alternativa para conservar organismos mediante sus espermios.
Otra interesante aproximacin, para la formacin de un banco de genes, es el
empleo de la criopreservacin de los espermios de organismos tetraploides. Los
107

espermios de estos peces sern diploides y no haploides, que es lo normal. Los

ovocitos irradiados fertilizados por estos espermios diploides no necesitan
reestablecer la diploida.
Cada individuo ginognico es genticamente nico y todos sern hembras si el
sexo homogamtico es el femenino. Es posible cambiar el sexo de estas hembras
mediante tratamiento hormonal; permitiendo as el cruce de lneas ginognicas. Estos
individuos, producirn vulos completamente homocigotos. Si stos son fertilizados
con espermios irradiados, se desarrollan ginogenticamente hasta la segunda
generacin, toda la progenie ser clon de la madre.
La ginognesis y la andrognesis, pueden ser empleadas para obtener cepas
monosexuales. Cuando las hembras son homogamticas, todos los ginognicos sern
hembras XX, si las hembras son heterogamticas los ginognicos sern ZZ y WW y
ambos sexos se encontrarn en la progenie. Cuando el sexo homogamtico es el
masculino, los andrognicos sern 100% machos ZZ, si los machos son
heterogamticos, se producirn andrognicos: hembras XX y machos YY.
En muchas especies de peces las hembras forman el sexo homogamtico y
mediante ginognesis se pueden producir poblaciones monosexuales solamente de
hembras. Esto se ha logrado en numerosas especies de peces (Prez, 1996). Pero,
por ahora, esta tcnica no es comercialmente til, debido a la baja supervivencia de
los ovocitos tratados para producir ginognicos. El mismo problema ocurre con la
andrognesis mediante la cual se pueden obtener poblaciones monosexuales puros
machos si estos son el sexo homogamtico. El problema del bajo rendimiento de los
organismos ginognicos ha sido parcialmente superado, combinando la ginognesis
con el cambio de sexo por tratamientos hormonales. Cuando las hembras son
homogamticas, la progenie ginognica ser de puras hembras XX; si estas larvas se
transforman en machos y stos machos XX son frtiles, se pueden cruzar con
hembras XX normales, siendo la progenie de 100% hembras XX.
Este sistema para producir poblaciones monosexuales puras hembras,
parece ser conveniente para especies en que las hembras sean el sexo
homogamtico, si es que stas son ms deseables en un cultivo que los machos. Un
proceso similar que combine andrognesis y cambios de sexo producira poblaciones
de puros machos, siempre que el sexo homogamtico sea el masculino y que los
machos puedan ser cambiados de sexo para convertirse en hembras funcionales.
La ginognesis permite crear las llamadas superhembras (WW) en especies
que tienen el sistema de determinacin sexual ZZ-WZ. La mitad de los diploides
ginognicos sern machos ZZ y la otra mitad superhembras WW. Al cruzarlas con
machos normales, las superhembras producirn un 100% de hembras (ZW). Al igual
que la ginognesis, la andrognesis puede emplearse para examinar los efectos de
alelos recesivos y producir organismos altamente consanguneos.Por lo expuesto, es
108

indudable que la manipulacin cromosmica surge como un rea de investigacin

aplicada de gran importancia en los cultivos de peces.

109

ANEXO 3: ESTUDIOS CITOGENTICOS

EN PECES MEDIANTE HIBRIDACIN
FLUORESCENTE IN SITU
Cesar Martins
Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biocincias, Departamento de Morfologa.
Botucatu, SP, Brazil.

Los peces presentan una gran diversidad de formas cariotpicas que incluyen
variaciones en el nmero y frmula cromosmica, presencia de cromosomas
supernumerarios y cromosomas sexuales, y polimorfismos cromosmicos
poblacionales. Por lo tanto, el estudio de los cromosomas constituye una poderosa
herramienta que puede contribuir a obtener respuestas para muchas interrogantes
relacionadas con la biogeografa, evolucin, estructura cromosmica y organizacin
del genoma de los peces.
Gran parte de la informacin relacionada con la localizacin de secuencias de
DNA en los cromosomas de los peces, se refiere a secuencias repetitivas como DNAs
ribosomales, DNAs satlites y elementos transponibles. Apenas algunos genes de
copia nica o con pocas copias han sido mapeados en los cromosomas de este grupo
de vertebrados. En este orden de ideas, en este captulo, se hace una revisin de la
localizacin de secuencias de DNA en los cromosomas de los peces y se presentan
algunos elementos obtenidos de analizas modernos que involucran la localizacin
cromosmica de secuencias de DNA y genes con las que ha sido posible realizar
nuevas interpretaciones de esta diversidad, en particular sobre el origen de los
cromosomas sexuales y de los cromosomas supernumerarios as como tambin sobre
la organizacin genmica de segmentos especficos como las regiones centromricas,
telomricas y los sitios ribosomales.

ORGANIZACIN CROMOSMICA DE LAS

REPETICIONES EN TANDEM
ADNs Satlite

An cuando en las ltimas dos dcadas se han llevado a cabo estudios

citogenticos en un gran nmero de especies cticas, tales anlisis estaban orientados
principalmente al conocimiento de la estructura cariotpica bsica, mientras que son
muy pocos los trabajos realizados en el campo de la organizacin de las secuencias
de ADN en los cromosomas. Con relacin a la organizacin cromosmica de las
110

secuencias de ADN repetitivo, una de las fracciones del genoma de los peces ms
estudiadas es el ADN satlite. Satellite DNA families are repetitive tandem arrayed
copies of non-coding sequences that are clustered in one to several regions of the
genome.
En el genoma ecucaritico, los ADNs satlites consisten en mltiples copias de
secuencias en tandem de unidades repetidas (comnmente 100 - 300 pares de bases
(pb). Estas secuencias pueden variar de 1.000 a ms de 100.000 copias y estn
organizadas como grandes conglomerados, principalmente en las regiones
centromricas y telomricas de los cromosomas y son el componente principal de las
heterocromatinas. Las familias de ADN satlite pueden corresponder al 0-66% de
algunos genomas de mamferos y su composicin y nmero de familias no
relacionadas puede ser altamente variable (Beridze, 1986). Especies distintas, a
menudo presentan divergencia entre las familias de ADN satlite como resultados de
mecanismo de evolucin concertada (Arnheim, 1983), originando secuencias de ADN
satlite especie-especficas. Por otra parte, existen unas pocas excepciones en las
que un grupo de especies, o incluso toda una familia u orden, comparten la misma
familia de ADN satlite. El ejemplo ms interesante lo constituye el ADN satlite alpha
centromrico que est preservado en el orden de los primates, muy probablemente
debido a su funcin centromrica (Schueler et al., 2001). Se han detectado tambin
secuencias tipo satlite en gallinas y en el pez zebra, que presentan una interesante
coincidencia con las secuencias humanas alfa (Li y Kirby, 2003).
Los ADNs satlites son tiles para anlisis genticos moleculares tales como la
identificacin de cromosomas homlogos y anormalidades cromosmicas por
hibridacin in situ. Se ha estudiado la organizacin molecular, localizacin
cromosmica y posibles funciones de los ADNs satlites en diversos grupos animales
(Brutlag, 1980; Singer, 1982; Arnason et al., 1984; Hummel et al., 1984; Clabby et al.,
1996). Estos estudios han indicado que las secuencias tipo satlite pueden jugar un
papel importante a nivel cromosmico y nuclear (Singer, 1982; Haaf y Schmid, 1991;
Larin et al., 1994; Sart et al., 1997).
An cuando la distribucin cromosmica de la heterocromatina en donde se
supone estn concentrados los ADNs satlites ha sido estudiada ampliamente en
peces utilizando mtodos citolgicos de tincin o bandeo cromosmico, los datos
moleculares sobre ADNs satlites se restringen a unas pocas especies (Tabla 1).
Las primeras descripciones de familias de ADN satlite en peces fueron
publicadas a finales de la dcada de los 80 (Datta et al., 1988; Moyer et al., 1988;
Monaco et al., 1989). Los datos sobre ADNs satlites en peces muestran que estas
111

secuencias estn localizadas principalmente en las regiones centromricas de los

cromosomas (Tabla 1) (Figura 1a).
Estudios realizados en esturiones indican que una familia de ADN satlite HindIII
aislada del genoma de Acipenser naccarii est preservada en las regiones
pericentromricas de los cromosomas de seis especies del gnero Acipenser y una
del gnero Huso (Lanfredi et al., 2001). Tambin han aislado familias de ADN satlite
centromrico del genoma del gbido Gobius cobitis (Canapa et al., 2002) y la tilapia
del Nilo Oreochromis niloticus (Franck y Wright, 1993). Especficamente en la tilapia
del Nilo, la familia satlite estaba presente en los centrmeros de todos los
cromosomas del complemento (Oliveira y Wright 1998) (Figura 1a). El DNA satlite de
tilapia tambin estaba preservado en otras especies de tilapiine y haplochromine
(Franck et al., 1994), conduciendo a proponer la posibilidad de que sta secuencia
satlite se origin en un ancestro en este grupo y desde entonces se ha mantenido en
los centrmeros de todos los cromosomas debido a su funcionalidad. Una
caracterstica interesante de la mayora de las repeticiones satlites centromricas es
la longitud de su unidad bsica (155-180 pb) que corresponde a la gama de las
longitudes de las unidades nucleosmicas (Henikoff et al., 2001). Longitudes de
repeticin mayores pueden abarcar dos nucleosomas.
El estudio generalizado de los ADNs satlites centromricos de vertebrados ha
puesto en evidencia la presencia de unidades repetitivas ricas en A, las cuales son
tpicas de satlites centromricos (Vins et al., 2004). Tambin se han identificado
unidades repetitivas cortas ricas en A en los ADNs satlites centromricos de diversas
especies de peces (Wright 1989; Denovan and Wright, 1990; Garrido-Ramos et al.,
1994, 1995; Kato, 1999; Vias et al., 2004; Canapa et al., 2002). Estas secuencias
cortas son bastante similares y presentan una homologa considerable respecto a
otras unidades repetitivas centromricas encontradas en humanos (Vissel et al.,
1992), ratn (Wong y Rattner, 1988) y reptiles (Cremisi et al., 1988), sugiriendo que
tales secuencias podran tambin jugar algn papel importante en la estructura y
funcin del centrmero de peces.
Se ha prestado especial atencin a la identificacin de los ADNs satlites
relacionados con los cromosomas sexuales y supernumerarios de peces. Por ejemplo,
se ha aislado y mapeado ADNs satellites en los cromosomas sexuales de Leporinus
elongatus (Nakayama et al., 1994), Chiondraco hamatus (Capriglione et al., 1994),
Poecilia reticulata (Nanda et al., 1990), Oncorhynchus tschawytscha (Devlin et al.,
1991; Stein et al., 2001), entre otras.
Existen cromosomas sexuales, morfolgicamente diferenciados, en diversas especies
de peces. Los peces suramericanos del gnero Leporinus (Anostomidae, Characiformes)
112

representan un buen modelo para estudiar la diferenciacin de los cromosomas sexuales.

Se ha descrito un claro sistema cromosmico sexual ZZ/ZW para siete de las 40 especies
estudiadas (L. conirostris, L. trifasciatus, L. obtusidens, L. elongatus, L. macrocephalus, L.
reinhardti and L. aff elongatus) (Galetti et al., 1995). En estas especies el cromosoma
subtelocntrico W, presente solo en el complemento femenino, es grande y casi totalmente
heterocromtico. En contraste, el cromosoma Z, presente en ambos sexos, es
heterocromtico en el tercio distal del brazo largo.
Debido a que las caractersticas morfolgicas de los cromosomas Z y W se encuentran
compartidas por siete especies del gnero Leporinus, se ha sugerido un origen comn de
stos cromosomas (Galetti et al. 1995) y la posibilidad de que la heterocromatinizacin
inicial podra haber sido el primer paso en la diferenciacin de estos cromosomas sexuales
(Galetti y Foresti, 1986). Por otra parte, un nuevo sistema cromosmico ZW, diferenciado
morfolgicamente del sistema ZZ/ZW detectado previamente, fue descrito para Leporinus
sp2 (Venere et al., 2004)
Se aislaron dos familias de AND satlite a partir de Leporinus elongatus (Nakayama et
al., 1994). Una de ellas fue localizada en ambos cromosomas Z y W, mientras que la
segunda familia fue especfica del cromosoma W, lo que permite la identificacin sexual de
los individuos de esas especies. Se detectaron en el anlisis tres individuos atpicos, una
hembra ZW reconocida como macho con la sonda especfica de la secuencia W y dos
machos ZW, presentando uno de ellos patrn satlite de machos. Estos tres individuos
parecen haberse originado por el intercambio gentico entre regiones de los cromosomas
Z y W, originando los patrones atpicos observados. Esta informacin sobre los
cromosomas sexuales de Leporinus ha permitido la construccin de un modelo sobre la
diferenciacin del cromosoma W que aporta importantes contribuciones al conocimiento
de los mecanismos de determinacin sexual en peces.
En los salmnidos, se han llevado a cabo extensos estudios con el fin de aislar las
secuencias de ADN a ser usadas como marcadores para la identificacin sexual, dado
que el heteromorfismo de los cromosomas X e Y no es detectado fcilmente. A partir
del genoma del salmn Oncorhynchus tshawytscha, se aisl una secuencia de ADN
repetitiva especfica de Y con 300 copias organizadas en aproximadamente seis
conglomerados distintos (Devlin et al., 1991, 1998; Stein et al., 2001). Contrariamente
a lo observado en diversos eucariotas, en los que las secuencias repetitivas largas se
originaron por duplicacin de unidades repetidas cortas, la repeticin de 8 kb aislada
del salmn no contiene vestigios de repeticiones cortas internas.
Otro aspecto interesante es la presencia de los cromosomas supernumerarios que
ha sido descrita para diversas especies de peces. Un ADN satlite correlacionado con
un cromosoma supernumerario fue aislado por primera vez en Astyanax scabripinnis,
113

un pequeo pez que se ha convertido en una especie modelo no slo debido a las
variaciones cromosmicas numricas y estructurales, sino tambin a la presencia de
cromosomas supernumerarios. En esta especie, la familia de ADN repetitivo aislada,
llamada As51, tena repeticiones de 51 pb y estaba ubicada en las heterocromatinas
no centromricas, en las RONs y en lo cromosoma supernumerario.
Sorprendentemente, la familia satlite As51 present un 58,8% de similitud con un
segmento del retrotransposon RT2 del Anopheles gambiae y una similitud menor con
el gen de la transposasa del transposon TN4430 de Bacillus thuringiensis, sugiriendo
que esta secuencia puede haber surgido a partir de un elemento mvil. La presencia
del satlite As51 en la RON sugiere que esta familia repetitiva puede estar esparcida
en los espaciadores de los ADNr 45S, habiendo sido insertada en esta regin por
transposicin, como ha sido descrito previamente para otros organismos. An cuando
la hibridacin cromosmica detectaba seales de fluorescencia en casi toda la
extensin de lo cromosoma supernumerario, fue posible verificar que el ADN satlite
As51 est organizado en pequeos conglomerados entremezclados con otros tipos de
ADN. La distribucin simtrica en ambos brazos del cromosoma supernumerario de A.
scabripinnins y su comportamiento meitico sugiere que este cromosoma es un
isocromosoma (Mestriner et al., 2000).
Anlisis de la composicin nucleotdica de los cromosomas supernumerarios de
otras especies ha revelado que stos estn compuestos principalmente por ADN
repetitivo. Tal informacin est relacionada con la naturaleza heterocromtica de los
cromosomas supernumerarios.
Tambin se aisl ADNs satlites a partir de Prochilodus lineatus que presenta de
cero a cinco pequeos cromosomas supernumerarios (Pauls y Bertollo, 1983). En esta
especie se aislaron dos familias de ADN satlite, con unidades monomricas de 441 y
900 pb (Jesus et al., 2003). Ambas familias satlites estaban localizadas en la regin
pericentromrica de diversos cromosomas del complemento A y el satlite de 900 pb
estaba tambin localizado en diversos supernumerarios. La hibridacin cromosmica
doble, empleando los satlites de 441 y 900 pb como sondas, mostr que ambas
familias se co-localizan en la regin pericentromrica de algunos cromosomas. En el
satlite de 900 pb se detectaron diversas subrepeticiones, sugiriendo su origen a partir
de unidades repetidas pequeas. Tales resultados demuestran que los cromosomas
supernumerarios de esta especie se originaron a partir de cromosomas A que portan
la familia de ADN satlite de 900 pb (Jesus et al., 2003).
Los estudios en ADNs satlites han probado ser tiles para aclarar miles de
preguntas, incluyendo la estructura centromrica y el origen y evolucin de los
cromosomas sexuales y supernumerarios. Los ADNs satlites tambin pueden
encontrar aplicaciones en el mapeo fsico del genoma, contribuyendo al desarrollo de
114

marcadores genticos de importancia significativa para la biologa bsica y aplicada

de los peces.

ADNs Minisatlites
La definicin de repeticin minisatlite no est bien estandarizada. Los
minisatlites incluyen todas las repeticiones en tndem que no son tan grandes como
para ser includas en las repeticiones satlites, ni tan pequeas como para ser
consideradas secuencias microsatlites. La mayora de los investigadores consideran
a los minisatlites como disposiciones en tndem (5-50 repeticiones) de secuencias
cortas de ADN moderadamente repetitivas (10-60 bases) que se encuentran dispersas
en todo el genoma y aglomeradas cerca de los telmeros. La intensa dinmica
evolutiva de los minisatlites genera disposiciones complejas de tales secuencias en
el genoma que pueden ser empleadas como marcadores especficos para un
individuo.
Los microsatlites fueron empleados por primera vez en aplicaciones forenses y
en pruebas de paternidad en humanos (Jeffreys et al., 1985) y ms tarde fueron
ampliamente aplicadas a las poblaciones y a la identificacin de organismos, desde
las bacterias hasta los mamferos. Se han descrito minisatlites para muchas especies
de peces (Goodier y Davidon, 1998), mientras que la localizacin cromosmica de los
minisatlites ha sido descrita slo para unas pocas especies (Tabla 1). En los
cromosomas del salmn del Atlntico (Salmo salar) (Prez et al., 1999), se mapearon
tres minisatlites con secuencias repetitivas de 42, 28 y 34 nucletidos. Para los
satlites de 42 y 34 nucletidos se detect hibridacin con un nico locus y se detect
un patrn multilocus para el microsatlite de 28 nucletidos. Anlisis del genoma del
pufferfish (Tetraodon nigroviridis) permiti la identificacin de dos clases principales
de elementos repetidos en tndem: uno correspondiente a un satlite de 118
nucletidos que mapeaba en la regin centromrica de todos los cromosomas y el
otro con un minisatlite de 10 nucletidos que fue mapeado en toda la longitud del
brazo corto de 10 cromosomas subtelocntricos (Crollius et al., 2000).

ADNs Microsatlites
Los microsatlites consisten en repeticiones en tndem de secuencias de ADN
cortas diseminadas en el genoma de eucariotas constituidas por una a cinco o seis
115

bases (Tautz and Renz, 1984). La disposicin de los microsatlites usualmente son de
menos de 100 bases de largo y han sido empleados para anlisis de mapas de
ligamiento. Un anlisis de mapa de ligamiento del genoma del pez zebra Danio rerio
empleando 200 marcadores microsatlites de los tipos CA y GA revelaron que las
repeticiones (CA)n y (GT)n estn ms aglomeradas en las regiones centromricas y
telomricas (Shimoda et al., 1999). La aglomeracin de microsatlites en los
centrmeros y telmeros fue tambin detectada por mapeo cromosmico in situ. En
tres especies del gnero Prochilodus (Prochilodontidae, Characiformes), las
repeticiones (AATTT)n revelaron 13 alelos y el mapeo cromosmico mostr seales
predominantemente en las regiones telomricas de diversos cromosomas (Hatanaka
et al., 2002). Las repeticiones de microsatlites (GA)n estaban altamente aglomeradas
en las regiones telomricas de Imparfinis schubarti (Heptapteridae, Siluriformes),
dispersas a lo largo de los brazos cromosmicos con seales acrecentadas en
algunas regiones telomricas en Steindachneridion scripta (Pimelodidae, Siluriformes),
y cerca de los sitios RON en Rineloricaria latirostris (Loricariidae, Siluriformes)
(Vanzela et al., 2002). Mediante hibridacin in situ se detectaron segmentos ricos en
la secuencia repetida (GACA)n en la porcin heterocromtica de los cromosomas W y
Y de Poecilia reticulata (Poecilidae, Cyprinodontiformes) (Nanda et al., 1990). Los
microsatlites estn localizados esencialmente en las regiones heterocromticas
(telmeros, centrmeros y cromosomas sexuales) del genoma de peces, en donde se
cree est localizada una fraccin significativa de los ADNs repetitivos.

SECUENCIAS REPETITIVAS EN TANDEM DE

ADN RIBOSOMAL
El estudio de los genes de ARN ribosmico han ganado importancia en una
amplia gama de animales y plantas, especialmente en relacin a la caracterizacin de
especies o poblaciones, relaciones evolutivas y estructuracin del genoma. En los
eucariotas superiores, los genes de ARN ribosmico (ARNr) esn organizados como
dos familias multignicas distintas constitudas por arreglos de repeticiones dispuestas
en tndem compuestas por de cientos a miles de copias. Una clase est representada
por el ADNr de 45S que consiste en una unidad trasncripcional que codifica para los
ARNrs 18S, 5.8S y 28S y un espaciador intergnico no transcrito (IGS). Mltiples
copias de esta disposicin corresponden a las regiones organizadoras nucleolares
(RONs). La otra clase (ADNr 5S) consiste de una secuencia altamente conservada de
120 pb que codifican para el ARNr 5S que est separado de cada unidad
trasncripcional por un espaciador variable no transcrito (NTS) (revisado en Long y
Dawid, 1980). Mientras los genes de ARNr estn conservados incluso entre taxa no
relacionados, los espaciadores no transcritos presentan una extensa variacin en
longitud y secuencia, lo que confiere un acentuado dinamismo a los genes ARNr.
116

Secuencias repetitivas de ADNr 45S

La distribucin de los sitios cromosmicos del A 45S en los peces ha sido
ampliamente estudiadas mediante impregnacin con nitrato de plata. Los primeros
estudios de RONs en peces fueron realizados por Galetti (1979), que localiz y
analiz la diversidad de estas regiones cromosmicas en 8 espcies de la familia
Anostomidae, y por Foresti et al., (1981), que verificaron un acentuado polimorfismo
de stas regiones en una especie del grupo de los Gimnotiformes. Numerosos
trabajos posteriores mostraron diferentes aspectos relacionados con estos sitios
cromosmicos en prcticamente todos los grandes grupos de peces. Uno de los
aspectos ms recurrentes en esos estudios es el hecho de que la tcnica de
coloracin con nitrato de plata ha sido considerado un mtodo indirecto de localizacin
de las RONs debido a que la plata se asocia con las protenas nucleolares
involucradas en la actividad transcripcional de los genes ribosomales y no
directamente al ADNr (Miller et al., 1976) y, por lo tanto, gran parte de la variacin
detectada, tanto intra-, interindividual, interespecfica, puede estar asociada a la
actividad de estos cistrones.
Mas recientemente, el empleo de tcnicas de coloracin con fluorocromos GC
especficos, como la mitramicina A (MM) y cromomicina A3 (CMA3), mostr una
estrecha relacin entre las RONs evidenciadas con nitrato de plata y las regiones
coloreadas con estos fluorocromos en los cromosomas de los peces (Galetti y Rasch,
1993; Mestriner et al., 1995; entre otros).
La mayora de las veces, todos los sitios RONs de los cromosomas de peces,
detectados con el nitrato de plata, se evidencian como marcas fuertemente brillantes
con mitramicina o cromomicina. Sin embargo, esta correlacin no es absoluta. Existen
muchos casos en la CMA3 evidencia stios adicionales a los revelados con la plata. Por
otro lado, tambin se han descritos caso en que se sealan stios detectados con
nitrato de prata que no son marcados con la CMA3 (Mandrioli et al., 2001; Souza et al.,
2001).
Con la finalidad de determinar claramente si los sitios CMA3 positivos representan
de hecho los stios de ADNr 45S o heterocromatinas ricas en GC, se ha empleado la
hibridacin in situ con sondas de ADNr 45S en diversas especies de peces, como por
ejemplo en Leporinus friderici (Galetti et al., 1995), en el gnero Eigenmannia
(Almeida-Toledo et al., 1996) y en especies del gnero Schizodon (Martins y Galetti,
1998).
117

Mandrioli et al. (2001), estudiando Gobius niger (Gobiidae), identificaron sitios

positivos a la plata y a la hibridacin con sondas de ADNr 45S, aunque se mostraron
negativos a la coloracin con el fluorocromo CMA3. Estudios conjugados de bandeo C,
coloracin con nitarto de plata, fluorocromos GC especficos y hibridacin in situ con
sondas de ADNr 45S en A. scabripinnis, ha suministrado importantes datos sobre la
organizacin de las RONs en los peces. Stios de DNAr 45S, no evidenciados
mediante fluorocromos GC especficos, fueron tambin observados en esta especie
(Souza et al. 2001). Al contrario de lo observado por Mandrioli et al. (2001), las RONs
CMA3 negativas de A. scabripinnis se mostraron negativas, tambin a la coloracin
con nitrato de plata, siendo reveladas slo mediante hibridacin in situ. Los
conglomerados de ADNr 45S negativos la plata, sugieren que estos segmentos de
ADN no presentan actividad transcripcional perceptible por coloracin con plata o
pueden representar vestigios no funcionales de segmentos de ADN 45S.

REPETICIONES DE ADNr 5S Y ADNr 5SVARIANTE

Organizacin cromosmica del ADNr 5S
La localizacin cromosmica de los genes 5S ha sido descrita para ms de 60
especies de peces representantes de distintos grupos tales como Acipenseriformes,
Anguilliformes, Cypriniformes, Characiformes, Salmoniformes, Perciformes, y
Tetraodontiformes y demostrado ser de gran importancia en la comprensin de la
estructura y organizacin de las secuencias repetidas en sus cromosomas (revisado
por, Martins y Wasko, 2004).
En la mayora de los eucariotas, los genes ARNr 5S son detectados en distintas
reas del genoma, organizados como uno o ms conglomerados repetidos en tndem
y el nmero de genes de ARNr 5S oscila de 100 a 300.000 copias, lo cual es
generalmente mayor que el nmero de genes de ARNr 45S (Hadjiolov, 1985). En
muchos vertebrados, los genes ARNr 5S estn localizados en un solo par
cromosmico, mientras que el ADNr 45S est frecuentemente presente en mltiples
cromosomas (Suzuki et al., 1996; Makinem et al., 1997). En especies de anfibios
(Schmid et al. 1987; De Lucchini et al. 1993) y peces (Martins y Wasko, 2004; Mazzei
et al., 2004), los genes ARNr 5S pueden ser detectados en diversos cromosomas
(Figura 1c, 1d). En la mayora de las especies de peces, los genes ARNr 5S tienen
una posicin intersticial en los cromosomas, lo que sugiere que tal localizacin podra
implicar alguna ventaja relacionada con la organizacin de estos genes en el genoma.
Adicionalmente, los loci de ADNr 45S and 5S pueden presentar una organizacin
118

sintnica en el cromosoma (Pends et al., 1994; Mran et al., 1996; Mazzei et al.,
2004) o pueden detectarse en distintos pares cromosmicos (Martnez et al., 1996;
Martins y Galetti, 1999). Sin embargo, las localizaciones divergentes de los loci RONs
y ADNr 5S parecen ser la situacin ms comn encontrada en peces y por mucho el
patrn de distribucin ms frecuente observado en vertebrados (De Lucchini et al.
1993, Suzuki et al. 1996). Se ha sugerido que una localizacin cromosmica distinta
de los ADNr 5S y 45S podra representar alguna ventaja en comparacin con la
condicin de ligamiento (Martins y Galetti, 1999). La localizacin sintnica de los
conglomerados 5S y 45S podra facilitar las traslocaciones entre las disposiciones 45S
y 5S, ocasionando interferencia disruptiva en la estructura y funcin de tales genes.
Esto podra explicar por qu la mayora de los vertebrados tienen los conglomerados
de ADNr 45S y 5S en cromosomas distintos.
En el caraciforme Leporinus, se identificaron dos clases de ADNr 5S, una que
consista de unidades monomricas repetidas de aproximadamente 200 pb y otra con
monmeros de 920 pb (Martins y Galetti, 2001). Cada una de estas clases de ADNr de
diferente tamao estaba caracterizada por distintas secuencias NTS y estaba
conglomerada en diferentes pares cromosmicos. Diversos estudios de las
secuencias de ADNr 5S en especies de peces, han identificado tipos variantes de las
repeticiones en tndem de ADNr 5S, caracterizados por marcadas diferencias en las
NTSs. En Perciformes (Martins et al., 2002) y Salmoniformes (Pends et al., 1994) se
ha observado la presencia de dos tipos de repeticiones en tndem de este ADN
ribosmico. En O. niloticus, se identificaron dos unidades de ADNr 5S distintas y estn
caracterizadas por distintos NTSs que varan en secuencia y longitud entre los loci. La
primera clase tiene monmeros de 1.405 pb (denominado ADNr 5S tipo I) y el
segundo tiene monmeros de 475 pb (denominado ADNr 5S tipo II). En el ADNr 5S
tipo I tambin se detect un pseudogen putativo de ARNr 5S y dos genes ARNr 5S
putativos (uno de ellos invertidos) (Martins et al., 2002). Ambas clases estaban
aglomeradas en distintos cromosomas. Mientras el ADNr tipo I se detect en una
posicin intersticial en el brazo largo de un par cromosmico subtelo-acrocntrico
(cromosoma 3), el ADNr 5S tipo II se ubic intersticialmente en el brazo largo de pares
cromosmicos subtelo-acrocntrico diferentes (cromosomas 9 y 13). La investigacin
exhaustiva de los segmentos de NTS de los ADNr tipo I y tipo II, permiti detectar la
presencia de slo un tipo de NTS en el ADNr 5S tipo I y dos subtipos de NTS en el
ADNr 5S tipo II (Alves et al., in preparacin). Los subtipos detectados en las NTS del
ADNr 5S tipo II estn relacionados con la presencia de una expansin/delecin
microsatlite de TG. Resulta interesante el hecho de que el ADNr 5S tipo I est
localizado slo en un locus cromosmico y el ADNr 5S est localizado en dos loci
cromosmicos diferentes. Tales datos evidencian que la homogenizacin de las
repeticiones del ADNr 5S puede ocurrir slo dentro de un locus especfico, mientras
que diferentes loci en el mismo genoma pueden estar altamente diferenciados en la
119

secuencia de nucletidos y tamao de las unidades repetidas. La asignacin de

diferentes clases de ADNr 5S a distintos loci cromosmicos, refuerza la idea de que
distintas clases de ADNr 5S, ocupan distintas posiciones cromosmicas y parecen
estar evolucionando independientemente en los ambientes nucleares individuales.

Dinmica del ADNr 5S y ADNr 5S-variante en el genoma

de Hoplias malabaricus
Un modelo interesante para demostrar el intenso dinamismo de las repeticiones
del ADNr 5S en el genoma, es el pez Hoplias malabaricus. En el genoma de esta
especie se aislaron y caracterizaron dos familias repetivas en tndem, denominadas
ADNr 5S-verdadero y ADNr 5S-variante (Figura 2). Las repeticiones de ADNr 5Sverdadero contienen las regiones codificantes completas para el ARNr 5S y las
repeticiones de ADNr 5S-variante coantienen una regin codificante truncada para el
ARNr 5S. Tambin se observ similitud entre los NTS de ambas clases. Se llev a
cabo una hibridacin cromosmica utilizando como sondas a las secuencias de ADNr
5S-verdadero y ADNr 5S-variante. En condiciones de baja restriccin, ambas sondas
hibridaron en la regin centromrica de 18 cromosomas y cerca de los centrmeros en
el brazo corto de los pares cromosmicos 3 y 15. Bajo condiciones de alta restriccin,
la sonda de ADNr 5S-verdadero se hbrido al brazo corto de los pares cromosmicos 3
y 15 y la sonda de ADNr 5S-variante a la regin centromrica de 18 cromosomas
(Figura 2).
Las repeticiones de ADNr 5S-verdadero de H. malabaricus fueron casi idnticas,
con un valor bajo para la distancia gentica promedio (0,001) entre las repeticiones,
sugiriendo que tales secuencias son gobernadas por fuerte presin selectiva. Por otra
parte, el alto valor (0,045) para el promedio de la distancia gentica entre las
repeticiones del ADNr 5S-variante, sugiere que estas secuencias estn libres de
presin selectiva. Una evidencia del intenso dinamismo de las secuencias de ADNr
5S-variante, es a presencia de uno microsatlite TAAA expandido (Figura 2). Para
explicar la diferencia entre la distancia gentica de las secuencia de ADNr 5Sverdadero y ADNr 5S-variante, es posible hipotetizar que una transferencia de
unidades de ADNr 5S-verdadero a la pocisin centromrica, cambi el estatus de la
presin selectiva sobre los genes de ARNr 5S, liberndolos para multiplicarse y
dispersarse en los centrmeros de diversos pares cromosmicos, como ha sido
demostrado para otras secuencias satlite centromricas.
La organizacin y evolucin de los ADNs repetitivos en tndem, est gobernada
por patrones particulares de evolucin, tales como intercambio desigual,
transpocisin, transpocisin mediada por ARN y conversin gnica (Dover, 1986).
120

Drouin y Moniz de S (1995) sugirieron la hiptesis de que la traspocisin mediada

por ARN es el mecanismo responsable del ligamiento inusual de los genes de ARNr
5S a otras familias multignicas repetidas en tndem. De acuerdo a los autores, la
transpocisin mediada por ARN podra ser la responsable de la dispersin de copias
nicas de las repeticiones de ADNr 5S, puesto que se esperara que molculas de
ADN circular cerrado covalentemente (ADNccc), que contengan genes de ARN 5S,
conllevasen algunas veces a la insercin de varias copias del gen de ARN 5S, entre
otras secuencias del genoma. Tales molculas de ADNccc han sido encontradas en
muchas especies de eucariotas, incluyendo mamferos, gallina, Drosophila, y plantas
(revisado en Renault et al., 1993). Se han encontrado diversos tipos de ADNccc en
embriones de D. melanogaster y uno de ellos contiene un nmero variable de
secuencias homlogas a los genes de ARNr 5S (Pont et al., 1987). Por esto, en H.
malabaricus las primeras copias del ADNr 5S-variante, pueden haberse transferido a
una pocisin centromrica mediante ADNcccs. Alternativamente, la secuencia de
ADNr 5S-variante podra haberse originado en la regin centromrica de los
cromosomas 3 15 por duplicacin, o inversin cromosmica, involucrando a algunas
copias de ADNr 5S adyacentes presentes en estos cromosomas. Las primeras copias
de ADNr 5S-variante podran haberse asociado con otras secuencias repetitivas en la
heterocromatina centromrica, que facilit su dispersin a otros cromosomas debido a
mecanismos evolutivos concertados.
An no puede dilucidarse si estas repeticiones pueden estar confiriendo alguna
ventaja estructural o funcional a los cromosomas como componente del ADN
centromrico de H. malabaricus. Los centrmeros han sido reconocidos como
regiones del genoma evolutivamente dinmicas (Eichler y Sankoff, 2003) pero, an
cuando han sido bien estudiados desde animales hasta hongos, an est por
comprenderse asuntos importantes (Henikoff et al., 2001). El centrmero es vital para
la correcta reparticin de los cromosomas durante la divisin celular, siendo esencia
para un apropiado mantenimiento y segregacin del material gentico. An cuando
este papel est conservado a lo largo de la evolucin, las secuencias de ADN
encontradas en las regiones cromosmicas son frecuentemente variables (Henikoff et
al., 2001). Perturbaciones en la organizacin estructural y funcional de los
centrmeros conllevan a problemas crticos tales como defectos del desarrollo y
cncer. Las regiones centromricas son ricas en ADNs repetitivos, rasgo comn en
humanos (Willard and Wayne, 1987), ratn (Kipling et al., 1991; Narayanswami et al.,
1992), maz (Kaszs y Birchler, 1996), Drosophila (Murphy y Karpen, 1995),
Neurospora (Centola y Carbon, 1994) y levadura (Clark, 1990). Un hallazgo
interesante es que el motivo expandido TAAA en el ADNr 5S-variante, es similar a los
motivos cortos ricos en A identificados en los ADNs satlites centromricos de
diferentes especies de peces, como se report previamente en e captulo. Estas
secuencias cortas son bastante similares, mostrando una homologa considerable a
121

otros motivos centromricos hallados en humanos (Vissel et al., 1992), ratn (Wong y
Rattner, 1988) y reptiles (Cremisi et al., 1988), sugiriendo que tales secuencias
podran jugar un papel importante en la estructura y funcin del centrmero de H.
Malabaricus.
Diversos estudios previos han encontrado evidencia de elementos con secuencias
relacionadas al ADNr 45S, bien dispersas o aglomeradas en los genomas eucariotas.
Estos elementos han sido caracterizados principalmente como repeticiones en tndem
de unidades pequeas de nmero variable de copias, no codificantes y han sido
identificadas en diversas especies eucariotas, incluyendo levadura (Childs et al.,
1981), animales (Arnheim et al., 1980; Kominami and Muramatsu, 1987; De Lucchini
et al., 1988; Lohe and Roberts, 1990), y plantas (Unfried et al., 1991; Falquet et al.,
1997). Los resultados aqu presentados para el pez H. malabaricus muestran que
tambin pueden originarse elementos similares a partir del ADNr 5S. Los ADNr 5Svariantes y pseudogenes parecen ser comunes en mamferos (Emerson y Roeder,
1984; Doran et al., 1987; Leah et al., 1990). Por otra parte, la caracterstica de inters
en las repeticiones de ADNr 5S-variante del H. malabaricus es la gran abundancia de
nmero de copias, la disposicin en tndem y su posicionamiento centromrico.
Las secuencias de ADN repetitivo son sujeto de la accin de diversos mecanismos
moleculares y se cree son los componentes de evolucin ms rpida de los genomas
eucariotas. Los resultados discutidos para H. malabaricus representan tambin un
buen ejemplo de la fluidez de secuencias repetitivas proporcionando novedades en la
organizacin genmica de la regin centromrica de los vertebrados. La familia
satlite de ADNr 5S-variante, se ha dispersado en la regin centromrica de diversos
cromosomas y ha sido favorecido durante la evolucin debido a un posible papel en la
estructura y funcin del centrmero. Una vez ms, parece claro que los estudios sobre
las secuencias repetitivas pueden aportar un enfoque interesante para la comprensin
de la estructuracin y evolucin del genoma.

ORGANIZACIN CROMOSMICA DE LOS ELEMENTOS

REPETITIVOS DISPERSOS
Transposones
La mayora de las secuencias repetidas del genoma se derivan de elementos
transponibles. En los humanos, el 45% del genoma pertenece a este tipo de
repeticiones (The Genome International Sequencing Consortium, 2001). En los
vertebrados, es posible reconocer dos clases de transposones. La primera clase (i)
122

incluye tres tipos que transponen a travs de intermediarios de ARN: elementos

dispersos largos (LINEs), elementos dispersos cortos (SINEs), y retrotransposones
LTR; y la segunda clase (ii) incluye a aquellas secuencias que se transponen
directamente como ADN: transposones de ADN. Los genomas de peces contienen
todos los tipos de elementos transponibles conocidos (Volff et al., 2003) y algunos de
estos elementos fueron mapeados a los cromosomas (Tabla 2).
Los genomas pequeos y compactos de los pufferfish Tetraodon nigroviridis y
Takifugu rubripes resultan interesantes para estudiar las secuencias repetitivas. El
contenido total de transposones en el genoma de T. nigroviridis es slo del 0,9%, una
gran fraccin de lo cual est constituido por elementos LINE (0,4%) (Crollius et al.,
2000). Los genomas de los dos peces globo poseen un contenido bajo de repeticiones
(Aparicio et al., 2002; Fischer et al., 2004). Por otra parte, el T. nigroviridis contiene
una alta diversidad de elementos transponibles que no se observan en genomas ms
grandes tales como el humano y de ratn (Aparicio et al., 2002; Volff et al., 2003). Los
elementos transponibles estn comartamentalizados en heterocromatinas y estn
distribuidos al azar en el genoma de este pez globo (DaSilva et al., 2002; Bouneau et
al., 2003; Fischer et al., 2004) (Tabla 2). Adicionalmente la distribucin de repeticiones
en el genoma del T. nigroviridis es diferente de la observada en humanos, en donde
las secuencias repetidas constituyen una fraccin importante del ADN y es ms similar
a la distribucin observada en Drosophila melanogaster y Arabidopsis thaliana
quienes tienen tambin genomas pequeos (Fischer et al., 2004). En el T. nigroviridis,
las secuencias repetitivas tales como minisatlites y elementos transponibles estn
claramente localizadas en las regiones cromosmicas ricas en AT (Fischer et al.,
2004). Tal compartimentalizacin del genoma del pez globo parece no ser la norma
en peces y podra representar una caracterstica de los genomas pequeos y
compactos.
An cuando los estudios citogenticos de los elementos transponibles de peces
estn slo empezando, los resultados preliminares sugieren que estos elementos
pueden contribuir grandemente al conocimiento de evolucin del genoma de los
peces. Por ejemplo un elemento LINE denominado CiLINE2, aislado a partir del
genoma del O. niloticus (Oliveira et al., 1999) fue detectado por hibridacin en el ADN
genmico de todas las especies Tilapiini probadas de los gneros Oreochromis,
Tilapia, y Sarotherodon. Es interesante resaltar que el ADN de las especies
Oreochromis y Sarotherodon produjo un patrn diferente de las especies de Tilapia,
sugiriendo que la sonda CiLINE2 pudiera ser utilizada para distinguir peces del gnero
Tilapia de los de Oreochromis y Sarotherodon. La hibridacin fluorescente in situ con
el elemento CiLINE2 evidenci en O. niloticus seales muy pequeas distribuidas ms
o menos al azar sobre las cromtidas de todos los cromosomas, pero
sorprendentemente enriquecidas a lo largo de los dos tercios terminales del brazo
123

largo del par cromosmico uno (Oliveira et al., 1999) que corresponde a los
cromosomas sexuales XY putativos.
La distribucin de las secuencias SINE denominadas ROn-1 y ROn-2, en los
cromosomas de la tilapia del Nilo, investigada por hibridacin fluorescente in situ por
Oliveira et al. (2003), mostr que ambas secuencias SINE estn organizadas en
pequeos conglomerados dispersos en todos los cromosomas. Adicionalemente el
elemento ROn-1 est distribuido casi exclusivamente en las regiones intersticiales de
los cromosomas y las copias de ROn-2 estn localizadas cerca de la regin telomrica
de diversos cromosomas. Existe un conglomerado grande de ROn-1 en la mitad del
brazo largo del par cromosmico uno (Figura 1b). No se observ similitud en la
distribucin de los SINEs y LINEs entre los cromosomas de tilapia del Nilo y
mamferos.
Las sondas cromosmicas completas obtenidas mediante la microdiseccin y
amplificacin DOP-PCR a partir del cromosoma uno de O. niloticus, se hibridaron ms
intensamente en el brazo largo del cromosoma uno, sugiriendo la presencia de un
gran nmero de elementos repetitivos en esta regin cromosmica (Harvey et al.,
2002). La clonacin y secuenciacin del ADN microdisectado a partir de los
cromosomas sexuales XY (par cromosmico uno) de la misma especie, mostr que
estos cromosomas estn enriquecidos en secuencias repetitivas, la mayora de ellas
elementos transponibles (Harvey et al., 2003). Adicionalmente, la distribucin de los
elementos repetitivos en el cromosoma sexual de O. Niloticus, sugiere que existen
diferencias significativas entre los cromosomas X e Y. Considerando que las
principales diferencias detectadas entre los cromosomas X e Y residen en el brazo
largo (Foresti et al., 1993), el desarrollo de nuevos marcadores capaces de distinguir a
los cromosomas X e Y, ser de un valor considerable para propsitos de acuacultura.
Se estudi la dinmica en el genoma y localizacin cromosmica de dos
retrotransposones de repeticin terminal no-largos (Rex1 and Rex3), en 13 especies
de peces nototenidos del Antrctico (Ozouf-Costaz et al., 2004) (Tabla 2). Ambos
elementos transposones Rex1 y Rex3 estaban dispersos en todas las partes de los
cromosomas con acumulacin en algunas regiones particulares, como en el
cromosoma sexual de Chionodraco hamatus. Tambin se identific la presencia de
otro elemento tipo transposon (Tc1) (Capriglione et al., 2002), en el cromosoma Y de
C. hamatus. Particularmente, el elemento tipo-Tc1 se hbrida intersticialmente al brazo
largo del cromosoma sexual Y, que se supone se ha originado por fusin en tndem o
Robertsoniana (Morescalchi et al., 1996). Esto sugiere que los elementos
transposones podran haber estado involucrados en la diferenciacin del cromosoma
sexual en notothenioidos.
124

La presencia de elementos derivados de transposones son tambin comunes

en los cromosomas B de diversos organismos, tales como las plantas Brachycone
dichronosonidica (Franks et al., 1996) y Rye (Langdon et al., 2000), y animales tales
como el insecto Nasonia vitripennis (McAllister, 1995) y el pez Astyanax scabripinnis
(Mestriner et al., 2000). Se ha encontrado que un elemento tipo retrotransposon
especfico aislado de Alburnus alburnus, por Amplified fragment length polymorphism
(AFLP), es abundante en cromosomas B y est ausente en los cromosomas A
normales (Ziegler et al., 2003).
Tomados en conjunto los resultados de los estudios sobre ADNs repetitivos
parecen tener un valor considerable para aclarar diversos aspectos concernientes al
origen y evolucin de los cromosomas sexuales y supernumerarios en los organismos
y a la evolucin del genoma. La constante presencia de secuencias repetidas en los
cromosomas sexuales y supernumerarios en las especies de peces, indica que los
ADNs repetitivos han jugado un papel importante en la evolucin de sus genomas.

Mapeo cromosmico de genes de copia simple

La localizacin cromosmica de secuencias de copia simple ha sido poco
realizada en peces, debido a la dificultad para generar la seal a partir de la
hibridizacin de sondas representadas por una pequea secuencia de ADN que no se
encuentra repetida en el genoma. Recientemente, el empleo de sondas de bibliotecas
genmicas construidas en Cromosomas Artificiales de Bacterias (BAC), ha permitido
la localizacin por FISH, de genes de copia simple de peces. Por ejemplo, un
fragmento del gen de la hormona de crecimiento (GH2-D) fue localizado en los
cromosomas de los salmones O. mykiss y O. kisutch (Iturra et al., 2001) y el gen de la
tirosina-kinasa neurotrfica fue localizado en los cromosomas del pez zebra, Danio
rerio (Sola y Gornung, 2001). An se requiere mucho en relacin a la deteccin de
genes de copia nica en peces lo cual es, sin duda, una de las grandes perspectivas
de los estudios con FISH en estos animales. La localizacin cromosmica de estos
genes ser de gran importancia en el establecimiento de grupos de ligamiento, base
para la construccin de mapas genticos.

Otras tecnologas aplicadas para localizar

secuencias de ADN en los cromosomas
Aun cuando la hibridao in situ clsica ha sido utilizada como procedimiento
clsico en la localizacin de secuencias de DNA en los cromosomas de los peces,
otras tecnologas se estn mostrando muy prometedoras y ya comienzan a ser
aplicadas. Una de estas metodologias, el Zoo-FISH, brinda la posibilidad de que la
125

organizacin de secuencias de DNA aisladas de una especie sea investigada en otras

especies. Hasta ahora, los trabajos que involucran Zoo-FISH se han relacionado
principalmente con el mapeo de secuencias repetitivas (genes ribosomales y DNAs
satlite) en los cromosomas.
Las diferencias entre genomas han sido estudiadas en especies de peces por
hibridacin genmica comparativa (CGH), metodologa que posee amplia aplicacin,
permitiendo que regiones cromosomicas exclusivas de un genoma sean distinguidas
en relacin a otro genoma. La CGH est relacionada con las diferencias que existen
en el DNA entre dos genomas, y no requiere conocimiento previo de la composicin
de las secuencias. Por ejemplo, la CGH se presenta como un mtodo universal para
identificar cromosomas sexuales diferenciados desde el punto de vista molecular.
Traut y Winking (2001) estudiaron los estadios de evolucin cromosmica del sexo en
peces utilizando CGH, e identificaron segmentos cromosmicos particulares, que eran
sexo-especficos. La CGH tambin ha sido aplicada en la identificacin de hbridos
entre especies de salmnidos (Fujiwara et al., 1997) y se revela como
herramientafabulosa para la investigacin de los sistemas de cromosomas
supernumerarios que ocurren con frecuencia en los peces neotropicales.
La localizacin simultnea de diferentes secuencias de DNA o genes en los
cromosomas se muestra extremadamente promisoria ya que brinda la posibilidad de
una mayor precisin en el mapeo de los cromosomas. Mediante esta tecnologa,
Jesus et al. (2003) maperon dos familias de DNAs satlite en los cromosomas de
Prochilodus lineatus, y Almeida-Toledo et al. (2002) realizaron el mapeo de dos genes
ribosomales 5S y 45S en cromosomas de diferentes especies del gnero Astyanax.
Otra tecnologa que ha sido aplicada con mucho xito en peces es la PRINS
(Primed in situ labeling) que consiste en la identificacin de secuencias especficas de
DNA en los cromosomas, utilizando el procedimiento de una PCR (Polymerase Chain
Reaction) que se realiza en la lmina donde se encuentran fijados los cromosomas .El
fundamento de la tcnica est en la utilizacin de DNA cromosmico como molde de
reccin en la PCR y de iniciadores (primers) especficos de las secuencias de inters
que se pretende localizar. El procedimiento de PRINS ya ha sido aplicado en la
identificacin de los genes ribosomales 5S en el gnero Leporinus (Martins y Galetti,
1999) (Figura 1c, 1d) y de DNA satlite en D. rerio (Sola et al., 1999). Particularmente
en Leporinus, el PRINS se ha mostrado muy eficiente, pues permiti la identificacin
de agrupamientos muy pequeos de DNAr 5S, de difcil visualizacin por hibridacin
in situ convencional. El PRINS se muestra bastante prometedor en la localizacin
cromosmica de genes de copia nica o de pocas copias, una vez que un gran
nmero de ciclos de amplificacin puede ser realizado, aumentando la seal
producida y facilitando as su visualizacin.
126

La pintura de cromosomas (Chromosome Painting), ampliamente difundida en

mamferos por la disponibilidad de sondas producidas a partir de lols cromosomas de
algunas especies, representa una tecnologa muy a ser aplicada tambin en peces,
presentndose como herramienta para los estudios de homologas cromosmicas, ya que
no es posible obtener bandas longitudinales estructurales en los cromosomas de peces.
Mediante tcnicas de microdiseccin, un cromosoma o parte de l puede ser
aislado y apartir de all construir sondas utilizables para pintar cromosomas.
Actualmente se puede encontrar en la literatura slo una referencia de microdiseccin
cromosmica en peces. En busca de marcadores cromosmicos sexuales, Harvey et
al. (2002) utilizaron microdiseccin cromosmica para investigar los probables
cromosomas sexuales en la tilapia O. niloticus. En un anlisis del complejo
sinaptonmico realizados por Foresti et al. (1993), fue sugerido que la tilpia posee
sistema XX/XY, representado por el par cromosmico ms grande del complemento.
Posteriormente, Harvey et al. (2002) obtuvieron sondas por microdiseccin de los
probables cromosomas X e Y, y la hibridacin de estas sondas en los cromosomas
metafsicos mostr la existencia de diferencias en los cromosomas sexuales de la
especie. Estos datos soportan la hiptesis de que el primer par cromosmico de la
est relacionado con la determinacin sexual y sugiere tambin que los cromosomas
sexuales en esta especie se encuentran en un estadio inicial de diferenciacin.
Con la culminacin de la secuenciacin del genoma de especies de peces
genoma del pez zebra (Danio rerio) y del pez globo (Fugus rubripes), por ejemplo
estarn disponibles para la comunidad cientfica, bibliotecas genmicas conteniendo
secuencias de todo el genoma de estas especies que podran ser utilizadas como
sondas en el mapeo gnico, pintura cromossmica y Zoo-FISH.
En general, poco se sabe sobre la organizacin genmica de los peces. La
gran caracterstica en que difiere el genoma de los peces en relacin a otros
vertebrados de sangre caliente es la compartimentalizacin genmica. La especies
de sangre caliente presentan su genoma organizado en mosaicos isocricos, es
decir, segmentos de DNA caracterizados por una composicin de bases similares
(Bernardi, 1992). Genes constitutivos y estructurales, por ejemplo, se encuentran
localizados en isocoras especficas. Mientras unas familias isocricas son ricas en
contenido de GC, otras son pobres en las presencia de estas bases. En los peces, as
como en los anfibios, el grado de compartimentalizacin composicional es menor, y se
cree que este hecho, per se, sera responsable de la ausencia de bandas
longitudinales (tipo G) en sus cromosomas (Bernardi, 1992).
De esta forma, las tcnicas presentadas en este tpico, aunque todavia poco
aplicadas en peces, representan fuentes prometedoras de resultados que ayuden en
127

el esclarecimiento de la organizacin estructural del genoma de este importante grupo

de vertebrados.
Tabla 1: Repeticiones de DNA en tandem y su distribucin cromosmica en peces
Tamao
(pb)

Distribucin

180

centromrica

Acipenser gueldenstaedtii
Acipenser baerii
Acipenser transmontanus
Acipenserruthenus
Huso huso
Adrianichthyidae

180
180
180
180
180

centromrica
centromrica
centromrica
centromrica
centromrica

Garrido-Ramos et al. 1997;

Lanfredi et al., 2001
Lanfredi et al., 2001
Lanfredi et al., 2001
Lanfredi et al., 2001
Lanfredi et al., 2001
Lanfredi et al., 2001

Oryzias latipes
Anostomidae
Leporinus elongatus
Leporinus obtusidens
Channichthydae

600

ligado al sexo

Matsuda et al., 1998

174, 729
483

cromosomas Z y W
pericentromrica

Nakayama et al., 1994

Koehler et al., 1997

Chionodraco hamatus
Characidae
Astyanax scabripinnis
Cichlidae
Oreochromis niloticus

1,000

centromrica y telomrica

Capriglione et al., 1994

51

heterocromatinas

237

centromerica

Oreochromis niloticus

1,900

brazo corto del

cromosoma N 4

Familias y especies de peces

Acipenseridae
Acipenser naccarii

Cyprinidae
Carassius auratus langsdorfi
Danio rerio
Danio rerio
Danio rerio
Erythrinidae
Hoplias malabaricus
Hoplias malabaricus
Gobiidae
Gobius cobitis
Gobius paganellus
Heptapteridae
Imparfinis schubarti
Loricariidae
Rineloricaria latirostris
Parodontidae
Parodon hilarii
Pimelodidae
Steindachneridion scripta
Poecilidae
Poecilia reticulata
Prochilodontidae
Prochilodus lineatus
Prochilodus lineatus
Prochilodus lineatus

Referencias

Mestriner et al., 2000

Franck et al., 1992; Oliveira
and Wright, 1998
Frank and Wright, 1993; Oliveira
and Wright, 1998

137
180, 191

centromerica

200
92

heterocromatinas ricas en AT
heterocromatinas ricas en GC

333-366
356-360

centromrica
centromrica

Haaf et al., 1993

Martins et al., submitted

332
332

centromrica
centromrica

Canapa et al., 2002

Canapa et al., 2002

telomrica

Vanzela et al., 2002

cercana a la NOR

Vanzela et al., 2002

200

heterocromatinas terminales,
cromosoma W

Vicente et al., 2003

telomrica, dispersa

Vanzela et al., 2002

cromosoma Y

Nanda et al., 1990

441
900

pericentromrica
pericentromrica y
supernumerarios
telomrica

Jesus et al., 2003

Jesus et al., 2003

Murakami and Fujitani, 1997

Ekker et al., 1992; He et al., 1992;
Sola and Gornung, 2001
Phillips and Reed, 2000
Phillips and Reed, 2000

Hatanaka et al., 2002

128

Familias y especies de peces

Prochilodus marggravii
Salmonidae
Salvelinus alpinus

Tamao
(pb)
5

Distribucin
telomrica

Referencias
Hatanaka et al., 2002

72, 127, 200,

400
140
120
359
380, 442, 923

centromrica

Hartley and Davidson, 1994

centromrica
centromrica
NOR
NOR, rDNA

Reed and Phillips, 1995

Reed and Phillips, 1995
Abun et al., 1996
Goodier and Davidson, 1994;
Abun et al., 1996

Salmo salar
Salmo salar
Salmo salar

260
42
28

Salmo salar
Oncorhynchus tshawytscha
Sparidae

34
939

pericentromrica
intersticial
telomrica, pericentromrica,
centromrica
intersticial
subtelomrica

Sparus aurata

186

centromrica

Garrido-Ramos et al., 1994

Pagrus pagrus
Pagrus aurica
Pagellus erythrinus
Tetraodontidae
Tetraodon nigroviridis
Tetraodon nigroviridis
Tetraodon nigroviridis
Tetraodon nigroviridis
Fugu rubripes

186

subtelomrica

Garrido-Ramos et al., 1998

186
186

subtelomrica
subtelomrica y telomrica

Garrido-Ramos et al., 1998

Garrido-Ramos et al., 1998

118
10
100
104
118

(peri)centromrica
heterocromatinas
heterocromatinas
heterocromatinas
centromerica

Salvelinus namaycush
Salvelinus namaycush
Salmo trutta
Salmo salar

Cyclostomata
Eptatretus okinoseanus
Eptatretus burgeri
Petromyzon marinus

90
57 y 64

Prez et al., 1999

Prez et al., 1999
Prez et al., 1999
Devlin et al. 1991, 1998

Crollius et al., 2000

Crollius et al., 2000
Fischer et al., 2004
Fischer et al., 2004
Brenner et al., 1993; Elgar et al.,
1999

intersticial
Kubota et al., 1993
intersticial
Kubota et al., 2001
centromrica y pericentromrica Ban et al., 1996

129

Tabla 2: Elementos repetitivos dispersos y su localizacin cromosmica en especies

de peces.
rdenes y especies de
peces
Aulopiformes
Aulopus japonicus
Cypriniformes
Alburnus alburnus
Cyprinodontiformes
Xiphophorus maculatus
Perciformes
Artedidraco shackletoni
Bovichtus angustifrons
Chionodraco hamatus

Tipo de
elemento

Localizacin
cromosmica

Referencias

Cromosoma W

Ota et al., 2003

Gypse, Ty3

Cromosoma B

Ziegler et al., 2003

XIR LTR-like

Cromosoma Y

Nanda et al., 2000

Rex1, Rex3
Rex1, Rex3
Tc1-like

Disperso
Disperso
pericntrica, telomrica,
intersticial
Disperso
Disperso
Solapando las NORs
Disperso
Disperso
Disperso
Disperso
Cromosoma 1 y disperso

Ozouf-Costaz et al., 2004

Capriglione et al., 2002

Chianodraco hamatus
Dissostichus mawsoni
Gobius Nger
Gymnodraco acuticeps
Gymnodraco victori
Neopagetopsis ionah
Notothenia coriiceps
Oreochromis niloticus

Rex1, Rex3
Rex1, Rex3
Mariner-like
Rex1, Rex3
Rex1, Rex3
Rex1, Rex3
Rex1, Rex3
CiLINE2

Oreochromis niloticus

Ron1

Oreochromis niloticus

Ron2

Oreochromis niloticus

Cromosoma 1 y disperso Harvey et al., 2003

Centromrica, telomrica
y dispersa
Dispersa
Dispersa
Dispersa
Dispersa
Dispersa

Harvey et al., 2003

Patagonotothen tessellata
Trematomus hansoni
Trematomus newnesi
Trematomus bernacchii
Trematomus pennellii

On2318
On239, Tc1like
Rex1, Rex3
Rex1, Rex3
Rex1, Rex3
Rex1, Rex3
Rex1, Rex3

Tetraodontiformes
Tetraodon fluviatilis

Mariner-like

Mandrioli and Manicardi

2001

Tetraodon nigroviridis
Tetraodon nigroviridis
Tetraodon nigroviridis

Dm-Line
Tc1-like
Zebulon

Asociada a la
heterocromatina de las
NOR
Heterocromatinas
Heterocromatinas
Heterocromatinas

Tetraodon nigroviridis

Tol2

Heterocromatinas

Fischer et al., 2004

Oreochromis niloticus

Ozouf-Costaz et al., 2004

Ozouf-Costaz et al., 2004
Mandrioli et al., 2001
Ozouf-Costaz et al., 2004
Ozouf-Costaz et al., 2004
Ozouf-Costaz et al., 2004
Ozouf-Costaz et al., 2004
Oliveira et al., 1999

Cromosoma 1 y disperso Bryden et al., 1998;

Oliveira et al., 2003
Disperso
Oliveira et al., 2003

Ozouf-Costaz et al., 2004

Ozouf-Costaz et al., 2004
Ozouf-Costaz et al., 2004
Ozouf-Costaz et al., 2004
Ozouf-Costaz et al., 2004

Dasilva et al., 2002

Dasilva et al., 2002
Bouneau et al., 2003

130

rdenes y especies de
peces
Tetraodon nigroviridis
Tetraodon nigroviridis
Tetraodon nigroviridis

Tipo de
elemento
Buffy1
Rex3
Babar

Localizacin
cromosmica
Cromosomas 4-5

Fischer et al., 2004

Heterocromatinas

Fischer et al., 2004

Heterocromatinas

Fischer et al., 2004

Referencias

131

Figura Hibridacin Fluorescente in situ del DNA satellite SATA DNA (a) y del
Ron1 SINE (b) en los cromosomas de Tilapia del Nilo, Oreochromis niloticus y
PRINS (Primed in situ labeling) de los genes 5S rRNA de los cromosomas de
Leporinus elongatus. El satellite SATA est distribudo en la region
centromrica de todos los cromosomas, el elemento Ron 1 (arrows) est
agrupado en posicin intersticial en el primer para de cromosomas de O
niloticus y los genes 5S rRNA est organizados en dos pares de cromosomas
(arrows) en L. elongatus. El cromosoma sexual W de L. elongatus est
tambien sealado. (Cortesa de Irani Alves Ferreira).

132

Figura 2: Secuencia de nucleotidos del ADNr 5S y de las repeticiones del ADNr 5S-variante (ADNr 5Svar) en Hoplias malabaricus. La region codificadora del 5S rRNA se indica en negritas y las repeticiones
TAAA expandidas en negritas tipo itlicas. Se emple Hibridacin Fluorescente in situ para el mapeo
cromosmico del ADNr 5S y el ADNr 5S-variante. El ADNr 5S est localizado en el par de cromosomas 1
(flechas) y el ADNr 5S-variante se encuentra localizado en la regin centromrica de 18 cromosomas. (La
Hibridacin Fluorescente in situ es cortesa de Irani Alves Ferreira).

133

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PREPARACIN DE SOLUCIONES
a) Colchicina
Disolver 0,0125 g de colchicina (C22H25NO6) en 100 ml de agua deionizada. Esta solucin
debe ser almacenada en frasco ambar y conservada en freezer (stock) y en nevera
(solucin de uso rutinaeiro).
b) Solucin hipotnica de KCl, 0,075 M
Diluir 2,78 g de KCl en agua destilada hasta completar un volumen de 500 ml. Es
recomendable tapar adecuadamente el frasco donde se almacenar la solucin, para
evitar evaporacin de agua y que se altere la concentracin de la misma.
c) Fijador para clulas (solucion de Carnoy)
Metanol...................................3 partes
Acido actico..........................1 parte
Esta solucin debe ser preparada en el momento de usar. Es recomendable colocar el
frasco en un recipiente con hielo para mantener fra la solucin.
d) Giemsa
Solucin stock: Disolver 1 g de Giemsa en polvo (Azur-eosina - Azul de metileno) en 66 ml
de glicerina pura calentando hasta la formacin de burbujas. Retirar del calentamiento.
Despus de enfriada la solucin, agregar 66 ml de metanol y despus filtrar con papel de
filtro normal.
La filtracin se demora bastante y es preferible realizarla en un sitio con poca iluminacin.
Despus de filtrada debe ser almacenada en frasco oscuro.
Solucin de trabajo:
Para preparaciones directas usar la solucin diluda al 5-10% en tampn fosfato pH 6,8.
Para coloracin de bandas C es preferible utilizar la solucin al 2% y aumentar el tiempo
de coloracin.
e) Tampn fosfato
Solucin A:
Na2HPO4.12H2O............................................ 10,7442 g
168

Agua destilada.................................................. 500 ml

Solucin B:
KH2PO4............................................................. 4,0827 g
Agua destilada.................................................. 500 ml
Las dos soluciones deben ser preparadas por separado y luego mezcladas. El pH del la
solucin final debe ser 6,8. Debe ser mantenida en refrigerador.
f) Solucin 2xSSC
Cloruro de sodio (NaCl) 0,29M............................................ 17, 53g
Citrato de Sodio (Na3C6H5O7. 2H2O).................................. 8,82 g
Agua destilada....................................................................... 800 ml
Disolver todo y ajustar a pH 7,0 con NaOH 10N (si est acida) o con HCL 1 N (si est
basica). Completar con agua destilada hasta 1000 ml.
g) HCl (0,2N)
Acido clorhdrico (HCl).............................................................16,6 ml
Agua destilada............................................................................ 900 ml
Colocar 900 ml de agua destilada en un Erlenmeyer y dejar correr el cido lentamente por
las paredes del frasco. Completar hasta 1 litro.
h) Solucin de Hidrxido de Bario
Hidrxido de Bario Ba(OH).8H2O........................................... 2,5 g
Agua destilada................................................................................... 50 ml
Diluir el Hidrxido en de Bario en un frasco y llevar a un bao-mara a 42 C. Filtrar y
colocar de nuevo en el baomara.
i) Gelatina 2%
Gelatina comercial sin color ni sabor............................................... 1 g
Agua destilada...................................................................................... 50 ml
cido Frmico.................................................................................... 0,5 ml
169

Disolver la gelatina en un poco de agua hirviente. Completar con agua a temperatura

ambiente. Agregar el cido frmico y guardar en frasco mbar a 4 C.
j) Nitrato de Plata 50%
Nitrato de Plata............................................................ 0,5 g
Agua deionizada........................................................... 1 ml
Diluir el Nitrato de Plata y colocarlo en un frasco mbar a 4 C
K) Solucin de Hanks
Solucin A:
NaCl..............................................8 g
KCl................................................0,4 g
Na2HPO4.....................................0,047 g
Na2HPO4.7H2O.........................0,0898 g
Na2HPO4.12H2O.......................0,12 g
KH2PO4.......................................0,06 g
Agua bidestilada.........................100ml
Solucin B:
CaCl2.................................................0,14 g
MgSO4.7H2O................................ 0,2 g
Agua Bidestilada............................. 100 ml
Solucin de Rojo Fenol:
Rojo fenol.......................................... 0,14 g
NaOH 0,1N.................................. ....0,2 g
Agua bidestilada................................. 100ml
Mezclar las soluciones A y B junto con 0,35 g de bicarbonato de sodio, 1 g de dextrosa
y 2 ml de rojo fenol. Completar con agua bidestilada hasta 1 Litro. Debe tomar una
coloracin roja. Almacenar en frasco ambar a 4 C (La solucin de rojo fenol debe ser
almacenada en congelador).

170

Solucin tripsina/EDTA
50 ml da agua destilada
0,03 g de tripsina
1 ml de EDTA 0,5mM, pH 8,0

171

GLOSARIO
A
Aberracin cromosmica: Accidente durante la meiosis de los gametos o de las
primeras divisiones del huevo y que provoca una anomala de nmero o estructura de
los cromosomas. Son cambios estructurales que pueden ser observados en la
metafase del ciclo celular y que tienen su origen en roturas (procesos clastognicos)
de las cadenas de ADN no reparadas o mal reparadas.
Acntrico: Cromosoma (o fragmento) que carece de centrmero.
Acidos nuclicos: macromolculas de gran importancia biolgica, formados por una
pentosa, fosfato y una base nitrogenada, son de dos tipos: ADN y ARN.
Acrocntrico: Cromosoma que tiene su centrmero muy cercano al extremo de uno
de sus brazos, es decir los brazos cortos normalmente no son ms que material
satlite.
Adaptabilidad: capacidad de adaptacin de un organismo, cuantificable por el nmero de
progenie que origina, en comparacin con el promedio de la poblacin o comparado con
individuos de diferentes genotipos.
Adaptacin: proceso mediante el cual los organismos o poblaciones de organismos,
ajustan sus funciones a un ambiente determinado.
ADN complementario: ADN que ha sido sintetizado a partir de un ARN mensajero
usando una ADN-polimerasa ARN-dependiente.
ADN: Abreviatura de cido desoxirribonucleico (en ingls deoxyribonucleic acid o
DNA). Es la molcula que contiene y transmite la informacin gentica de los
organismos excepto en algunos tipos de virus (retrovirus). Est formada por dos
cadenas complementarias de nucletidos que se enrollan entre s formando una doble
hlice que se mantiene unida por enlaces de hidrgeno entre bases complementarias.
Los cuatro nucletidos que forman el ADN contienen las bases adenina (A), guanina
(G), citosina (C) y timina (T). Dado que en el ADN la adenina se empareja slo con la
timina y la citosina slo con la guanina, cada cadena del ADN puede ser empleada
como molde para fabricar su complementaria.
ADN genmico: ADN cromosmico nuclear que ha sido aislado directamente de
clulas o tejidos.
ADN intergnico: Regiones de ADN genmico situadas entre los genes. Contienen
elementos reguladores y ADN repetitivo, pero en su mayor parte es de funcin
desconocida.
172

ADN mitocondrial: Genoma existente en el interior de las mitocondrias formado por

un cromosoma circular de ADN que est en nmero variable de copias segn los
tejidos.
ADN polimerasa: Complejo enzimtico que cataliza la sntesis de un polidesoxirribonucletido utilizando como molde un ADN (ADN polimerasa ADNdependiente) o un ARN (ADN polimerasa ARN-dependiente.
ADN recombinante: Molcula de ADN formada in vitro a partir de fragmentos de ADN
procedentes de dos o ms genomas distintos.
ADN repetitivo en tndem: Secuencia de ADN que se encuentra en dos o ms
copias yuxtapuestas, tanto en orientacin cabeza-cola (repeticin directa) como colacola cabeza-cabeza (repeticin invertida).
ADN repetitivo: Fragmentos de ADN que estn repetidos a lo largo del genoma, bien
en tndem o bien dispersos. El nmero de repeticiones (nmero de copia) es variable.
ADN satlite: Un tipo de ADN repetitivo en tndem, que forma bandas "satlite"
cuando el ADN genmico se fracciona mediante centrifugacin en gradientes de
cloruro de Cesio.
Alelo: Cada una de las formas en que puede presentarse un gen en un determinado
locus de cromosomas homlogos.
Alopoliploide: organismo poliploide resultado de la combinacin de dos set distintos de
cromosomas. En oposicin a los autopoliploides, en que los dos sets de cromosomas son
iguales.
Alozimas: formas alternativas de una enzima, codificada por alelos diferentes en un
mismo locus.
Aminocidos esenciales: Aqullos que al no ser sintetizados por un organismo,
deben ser incorporados en la dieta. En humanos son arginina, fenilalanina, histidina,
isoleucina, leucina, lisina, metionina, treonina, triptfano y valina.
Aminocidos: La unidad constitutiva de los polipptidos (protenas). Compuestos
orgnicos que contienen un grupo amino (NH2), un cido carboxilo (COOH) y una cadena
lateral (R) de composicin variable unida a un carbono. Existen 20 aminocidos
comunes que universalmente forman parte de las protenas, en una secuencia definida,
determinada por la secuencia de nucletidos en el gen estructural que codifica la protena.
Amrfico: Se aplica al gen inactivo, es decir sin efecto valorable.
Amplificacin: Aumento del nmero de copias de una secuencia de ADN, bien
mediante un proceso biolgico en la clula, o bien mediante tcnicas de laboratorio.
Anafase: Tercera fase de la mitosis, en la que las cromtidas hijas se separan y
migran hacia polos opuestos del huso acromtico. Durante la anafase de la primera
173

divisin meitica se separan los cromosomas homlogos despus de la

recombinacin.
Aneuploide: Clula o individuo con un nmero de cromosomas que no es mltiplo
exacto del nmero haploide. Los ejemplos ms frecuentes son las trisomas o
monosomas.
Aneusoma segmentaria: Situacin en la que se ha perdido un segmento de uno de
los cromosomas homlogos de un par, habitualmente incluyendo varios genes. El
sujeto queda, por tanto, con una sola copia de esos genes (en el otro cromosoma
homlogo).
Anfiaster: Figura que forman las fibras de cromatina en la cariocinesis que consiste
en dos estrellas unidas por un huso.
Angioblasto: Tejido embrionario del que derivan los vasos sanguneos.
Amstrong : Unidad de longitud utilizada para medir distancias atmicas y
moleculares. Equivale a 10-10 metros y se simboliza por la letra .
Anticodn: Secuencia de tres ncletidos en el ARN transferente que se emparejan
de forma complementaria con un codn especfico del ARN mensajero: durante la
sntesis proteica para determinar un aminocido concreto de la cadena polipeptdica.
Antisentido: Cadena de ADN que contiene la misma secuencia de nucletidos que el
ARN mensajero.
ARN mensajero: Molcula de ARN que es el resultado de la transcripcin de una
secuencia de ADN. El ARN mensajero madura en el ncleo y es exportado al
citoplasma para ser traducido en protena.
ARN polimerasa: Complejo enzimtico que cataliza la sntesis de ARN (transcripcin)
utilizando como molde la cadena antisentido de una molcula de ADN.
ARN: Molcula formada por un poli-ribonucletido de longitud variable que contiene
Uracilo en vez de Timina. Hay tres tipos: ARN mensajero (ARNm), ARN ribosomal
(ARNr) y ARN transferente (ARNt).
Autosoma: Cualquier cromosoma que no es un cromosoma sexual.
Autosmico dominante: Cualquier carcter de herencia dominante no ligado al sexo.
Autosmico recesivo: Cualquier carcter de herencia recesiva no ligado al sexo.

B
Bandas G: Bandas horizontales observadas en los cromosomas despus de un
tratamiento con una enzima proteoltica, como la tripsina y subsecuente tincin de los
cromosmas con Giemsa.
174

Bandas Q: Bandas cromosmicas generadas por tincin con el fluorocromo

quinacrina.
Base nucleotdica: estructura plana en forma de anillo compuesta por nitrgeno, carbono,
oxigeno e hidrgeno, que forma parte de los nucletidos de la cadena de cidos
nucleicos. Las bases son de cinco tipos: adenina, timina, guanina, citosina y uracilo,
comnmente abreviadas A, T, G, C y U.
Biblioteca (o banco) gnica (o): coleccin de genes donados. Pueden estar compuestas
por a) secuencias genmicas o b) secuencias de ADN complementario (cADN). En las
primeras las secuencias se obtienen directamente del ADN, existen millones y no se est
seguro de que las secuencias representen genes completos; en las segundas en cambio,
las secuencias provienen de una copia del ARN mensajero, por lo cual carecen de intrones
y cada secuencia representa genes completos.
Blastocito: Clula embrionaria que todava no se ha diferenciado.
Blastodermo: Primitiva acumulacin celular del embrin. Las clulas o blastmeros
se disponen en estratos (ectodermo, mesodermo y endodermo) alrededor de la
vescula blastodrmica o blstula.
Blastmero: Una de las dos clulas que se desarrollan en las primeras divisines
mittica de la segmentacin del ncleo de un huevo fertilizado. Los dos blastmeros
se dividen y subdividen repetidamente para formar la mrula en los primeros das del
embarazo.
Blastoporo: Abertura que comunica el arquentern de la gstrula con el exterior.
Blstula: Perodo del desarrollo embrionario consecutivo a la segmentacin del huevo
constituido por el blastodermo que rodea una cavidad central.
Bucle de inversin: Estructura formada en la primera divisin meitica por un
cromosoma con una inversin para o pericntrica.

C
Cama gentica: proporcin en la cual la adaptabilidad del genotipo ptimo disminuye por
alelos deletreos.
Cariocinesis: Divisin del ncleo con reparto del material nuclear durante la mitosis y
meiosis. Comprende las cuatro etapas: profase, metafase, anafase y telofase y
precede a la divisin del citoplasma.
Cariotipo: Dotacin cromosmica completa de un individuo o una especie, que puede
observarse durante la mitosis. El trmino tambin se refiere a la presentacin grfica
de los cromosomas, ordenados en pares de homlogos y que se puede describir
conforme a una nomenclatura convencional.
175

Carrier: Voz inglesa que significa portador.

Catabolismo: produccin de molculas sencillas a partir de otras ms complejas.
Cebador: Pequea cadena de nucletidos a partir de la cual la ADN polimerasa inicia
la sntesis de una molcula nueva de ADN.
Clula: la unidad funcional de la materia viva capaz de auto-perpetuacin. Se encuentra
rodeada por una membrana que la separa de ambiente externo. Contiene cidos nucleicos
que almacenan la informacin gnica, ribosoms, donde se construyen las protenas y
dems organelos y mecanismos que convierten la energa de una forma a otra.
Clulas germinales: gametos, o cualquiera clula sexual capaz de dar origen a un
gameto en animales multicelulares. Generalmente se originan a partir de las celulas
somticas, muy temprano en el desarrollo.
Centimorgan: Unidad usada para expresar distancias en un mapa gentico. Es
definido como la longitud de un intervalo en el cual hay un 1% de probabilidad de
recombinacin. En la prctica un cM es equivalente a un Megabase de ADN. Se
representa por la letra griega .
CentiRay: Unidad usada para expresar distancias en un mapa gentico. Es definido
como la longitud de un intervalo en el cual hay un 1% de probabilidad de ruptura
inducida por rayos-X. Su abreviatura es CR y para ser completamente especificada
debe indicarse la dosis de radiacin en RAD ya que esto determina la probabilidad de
ruptura.
Centrmero: Regin del cromosoma que separa los dos brazos y en la que se unen
las dos cromtides. Es la regin de unin a las fibras del huso acromtico durante la
divisin celular.
Centrosoma: corpsculo citoplasmtico localizado en cada polo del huso durante el
proceso de divisin nuclear.
Cigoteno: Segundo estadio de la profase de la primera divisin meitica, en la que se
forman los complejos sinaptonmicos entre cromosomas homlogos.
Cigoto: Huevo fecundado originado por la unin de dos gametos con fusin de sus
ncleos.
Cinco-prima (extremo 5: Extremo de una cadena de ADN o ARN que tiene un grupo
fosfato libre en la posicin 5.
Cistrn: unidad de funcin del ADN, que especfica un polipptido en la sntesis proteica.
Citocalasina B3 (C29H37NO5): Uno de varios metabolitos producidos por mohos del
gnero Helminthosporium, que puede inhibir la formacin de microfilamentos. Induce
poliploidia. Induce extrusin nuclear
176

Citogentica: Parte de la gentica que estudia la apariencia microscpica de los

cromosomas.
Citometra de flujo: Tcnica de clasificacin de clulas en que los cromosomas son
teidos con un marcador fluorescente que se une selectivamente al ADN, permitiendo
la diferente fluorescencia de cada cromosoma y su separacin fsica.
Citoplasma: protoplasma de una clula, excluyendo el ncleo.
Citoplasmtica herencia: Trasmisin hereditaria dependiente del citoplasma o de las
estructuras citoplasmticas y no de los genes nucleares. Tambin se le llama herencia
extracromosmica.
Clastogenesis: Cualquier proceso que conduce a roturas en el material cromosmico, o
reorganizaciones o prdidas o ganancia de fragmentos cromosmicos.
Clon: Son todas las clulas derivadas de una clula nica que ha sufrido repetidas
mitosis. Por ello todas esas clulas tendrn la misma constitucin gentica.
Clonacin de Genes: mtodo mediante el cual un fragmento de ADN que contiene un
gen se trasfiere a un microorganismo para producir millones de copias idnticas de este
ADN.
Clonaje de ADN: Produccin de mltiples copias idnticas de un fragmento concreto
de ADN.
Cdigo Gentico: Correspondencia entre los posibles tripletes de ADN (o ARN) y los
aminocidos que codifican.
Codn: grupo de tres nucletidos cuyo ordenamiento preciso codifica la incorporacin de
un aminocido especfico en una cadena polipeptidica. Existen adems, codones que no
codifican para aminocido alguno y actan como seales de trmino de lectura. En
algunos casos dos o ms codones diferentes codifican para el mismo aminocido. Los
codones existen en el ARN mensajero y son por lo tanto transcritos de secuencias
complementarias del ADN. Ellas se acoplan a tripletas de ARN de transferencia conocidos
como Anticodones, secuencia de tres nucletidos del ARN de transferencia que es
complementaria con otra regin tambin de tres nucletidos del ARN mensajero (codn).
La complementariedad entre el codn y el anticodn constituye la base del alineamiento
de los aminocidos en la cadena polipeptidica.
Codn de terminacin: Uno de los tres tripletes que al no codificar ningn
aminocido ocasionan el cese de la sntesis proteica. Se denominan
convencionalmente como mbar (U-A-G), Ocre (U-A-A) y palo (U-G-A).
Colchicina: alcaloide derivado del azafrn de otoo, gnero Colchicurn de la lileceas,
que se usa para detener la formacin (por inhibicin de la agregacin de microtubulos) del
huso, interrumpiendo la mitosis.
177

Congnita: Cualquier anomala, gentica o no, que se presenta con el nacimiento.

Cromtida: Filamentos de ADN idnticos que se observan en los cromosomas
durante la divisin celular, como resultado de la replicacin del ADN en la fase S
previa.
Cromatina: La cromatina es el conjunto de ADN y protenas que se encuentra en el
ncleo de las clulas eucariotas y que constituye el cromosoma eucaritico.
Cromidio: Grnulo de cromatina extranuclear en el citoplasma de una clula, rico en
ARN que se tie intensamente por los colorantes bsicos.
Crommero: Grnulos intensamente teidos que se observan en los cromosomas en
ciertas condiciones, especialmente durante la meiosis.
Cromosoma en anillo: Cromosoma anormal desde el punto de vista estructural, que
se forma cuando se pierden los extremos de cada brazo y los extremos libres se
fusionan.
Cromosoma recombinante: Cromosoma que resulta del intercambio de segmentos
entre cromosomas homlogos durante la meiosis.
Cromosoma W: En las especies en que el sexo heterogamtico es el femenino, ste
es el cromosoma sexual determinante del sexo femenino.
Cromosoma X: Cromosoma sexual presente en una sola copia en varones y en dos
copias en mujeres. En este ltimo caso, uno de ellos es inactivado.
Cromosoma Y: Cromosoma sexual presente nicamente en varones, en una sola
copia.
Cromosoma Z: En las especies en que el sexo heterogamtico es el femenino, los
varones poseen dos copias de este cromosoma sexual.
Cromosomas homlogos: Cromosomas que forman un par y se recombinan durante
la meiosis. Tienen la misma estructura y el mismo locus pero distintos alelos, ya que
cada uno procede de un progenitor.
Cromosomas estructuras subcelulares, que consisten de masas condensadas de
cromatina (ADN e histonas, en proporcin aproximada de 1:1), visibles al microscopio
ptico en clulas que se encuentran en procesos de divisin. Los cromosomas pueden ser
sexuales, que determinan el sexo y autosomas. De acuerdo a la posicin del centrmero,
los cromosomas pueden ser metacntricos, submetacntricos, subtelocntricos y
acrocntricos.
Cruce retrgrado: el cruce de un hbrido F1, con uno de los padres o con un individuo de
igual genotipo a uno de los padres.

178

Cuerpos polares: clulas muy pequeas producidas en la meiosis. En la primera divisin

meitica de la ovognesis, se producen dos ovocitos secundarios, uno diminuto (cuerpo
polar) que normalmente es expulsado de la superficie de la otra clula grande que retiene
todo el potencial para el desarrollo; que sufre la segunda divisin y produce de nuevo dos
clulas una grande el ovocito y otro cuerpo polar que de nuevo es expulsado de la
superficie del ovocito. Los cuerpos polares contienen ncleos haploides completos y por lo
tanto su expulsin permite las divisiones reduccionales de la meiosis para finalizar en un
ovocito haploide. En algunos organismos el primer corpsculo polar se divide antes de su
expulsin para producir dos corpsculos.

D
Dalton: Unidad estndar de msa de los tomos. Un protn tiene una msa de 1,007
Daltons y un electrn una msa de 0,0005 Daltons, por lo que 1 Dalton en la prctica
es equivalente a la msa de un tomo de hidrgeno.
De novo: Literalmente "de nueva procedencia", para referirse a algo no heredado.
Deleccin: Prdida de material gentico de un cromosoma que puede ir desde la
prdida de un solo nucletido (deleccin puntual) hasta la prdida de grandes
regiones visibles citogenticamente.
Denver, Clasificacin de: Sistema de identificacin y clasificacin de los cromosomas
humanos segn los criterios establecidos por las conferencias de citogentica de
Denver (1960), Londres (1963) y Chicago (1966). Se basa en el tamao de los
cromosomas y la posicin de los centrmeros determinada durante la fase mittica y
segn la misma existen siete grupos fundamentales de cromosomas que se
denominan por letras maysculas de la A a la G segn un orden de longitud
decreciente.
Deriva gentica: fluctuaciones al azar de las frecuencias gnicas de generacin en
generacin. Aunque ocurre en todas las poblaciones, sus efectos son ms notorios en
poblaciones pequenas.
Desnaturalizacin: De protenas o ADN. Proceso por el cual una protena pierde su
estructura original y en consecuencia cambian muchas de sus propiedades fsicas.
Una protena se puede desnaturalizar por calor, cambios en el pH del medio,
presencia de diversas sustancias qumicas como detergentes, etc. La aplicacin en el
caso del ADN es la separacin de sus dos hebras.
Diana de restriccin: Sinnimo de lugar de restriccin.
Dicntrico: Cromosoma estructuralmente anormal por tener dos centrmeros.

179

Diploide: Clula u organismo con dos complementos cromosmicos, de forma que

posee un nmero total de cromosomas que es doble del haploide. El nmero diploide
se representa por 2n.
Dismorfismo: Anomala morfolgica del desarrollo, que forma parte de muchos
sndromes.
Disoma uniparental: Situacin en la que los dos cromosomas homlogos de un par
tienen el mismo origen parental. Existen dos situaciones heterodisoma e isodisoma.
Disyuncin: la separacin de los cromosomas homlogos durante la anafase de las
divisiones mitticas y meiticas. Una falla de disyuncin, conocida como no disyuncin
resulta en cromosomas de ms en algunas clulas hijas y de menos otras.
Divisin reduccional: Primera divisin meitica, en la que el nmero de cromosomas
se reduce de diploide a haploide.
DNA: Abreviatura inglesa que significa ADN.
Dominante: Rasgo fenotpico (y el alelo que lo determina) que se expresa en un
individuo heterocigoto. Los alelos dominantes se denominan con letras maysculas
para diferenciarlos de los recesivos.
Dominio: Segmento de un polipptido o de ADN que tiene propiedades especficas
conocidas.
Dosimetra: Medida de la exposicin a la radiacin.
Dsis gnica: Nmero de copias de un gen, es decir, el nmero de veces que est
repetido en el genoma.
Duplicacin: presencia de un segmento doble, puede estar en el mismo cromosoma o ser
transportado a otro cromosoma. Una copia adicional de cualquier cromosoma, tambin se
le denomina duplicacin cromosmica.

E
Ectodermo: La capa celular primaria ms externa del embrin. Da lugar al sistema
nervioso, rganos especiales de los sentidos como los ojos y odos, la epidermis y
derivados epidrmicos como las uas y pelo, y a las mucosas de la boca y el ano.
Efecto fundador: efecto gentico de uno o unos pocos individuos de una especie que
originan una poblacin. Puesto que, estos pocos individuos fundadores no representan
todo el pool gnico, estas poblaciones pueden presentar caracteres distintivos.
Eficacia biolgica: Capacidad de un individuo de sobrevivir hasta transmitir sus
genes a la siguiente generacin. En los seres humanos dicha eficacia es 100% (1) si
al menos dos descendientes alcanzan la edad reproductiva.
180

Electroforesis: tcnica para separar molculas en una solucin, segn su tamao y carga
elctrica. La solucin es incorporada en un medio estabilizador, como papel o geles
(almidn, poliacrilamida). Las mezclas de protenas solubles son introducidas al gel en
lugares especficos, en forma tal que la migracin ocurra y se separen las diferentes
protenas. La velocidad y direccin con que las distintas molculas se desplazan dependen
de su tamao y carga. La identificacin de la posicin final de una determinada protena se
obtiene por el empleo de unciones especficas (Fig. 1).
Embrin: Producto de la concepcin, desde el momento de la implantacin del vulo
fertilizado hasta el final de las semanas sptima u octava en que pasa a denominarse
feto.
Endodermo: La capa celular primaria ms interna del embrin. A partir de l se
origina la cubierta de las cavidades y conductos del organismo y la capa que recubre
la mayora de los rganos internos como el epitelio de la trquea, los bronquios, los
pulmones, el conducto gastrointestinal, el hgado, el pncreas, la vejiga urinaria, la
faringe, el tiroides, la cavidad timpnica, las amgdalas y las glndulas paratiroides.
Endonucleasas de Restriccin: Grupo de enzimas, cada una de las cuales se une al
ADN en una secuencia de bases distinta y produce fragmentos de ADN de distinta
longitud.
Endotelio: Capa de clulas epiteliales escamosas, derivada del mesodermo, que
recubre el corazn, los vasos sanguneos y linfticos y las cavidades serosas. Est
muy vascularizada y cicatriza rpidamente.
Epistsis: interaccin de genes no allicos, generalmente en forma tal que un gen
suprime la expresin de otro.
Equilibrio gentico: situacin en la cual las frecuencias de dos o ms alelos de un gen
permanecen constantes de generacin en generacin.
Especie: grupo de organismos que comparten un pool gnico y una combinacin nica de
caracteres taxonmicos. Poblaciones naturales aisladas reproductivamente de otros
grupos similares.
Estomodeo: Invaginacin del ectodermo situada en el intestino anterior del embrin
en desarrollo que dar origen a la boca.
Eucariotes: organismos superiores compuestos de clulas con ncleos verdaderos
rodeados por membranas y que sufren meiosis. Por el contrario los procariotes, son
organismos inferiores (virus, bacterias, algas azules) que no tienen un ncleo bien definido
y no sufren meiosis.
Eucromatina: La cromatina genticamente activa, desenrollada en interfase y que se
tie ms intensamente durante la mitosis en la cual adquiere un estado condensado
en forma de hlice.
181

Euploide: clula u organismo con un nmero cromosmico mltiplo exacto del nmero
haploide (o monoploide). Los trminos empleados para identificar diferentes niveles en una
serie euploide son: diploides (2n), triploides (3n), tetraploides (4n). En oposicin los
aneuploidcs o heteroploides, son organismos caracterizados por un nmero cromosmico
diferente del nmero haploide o diploide (2n + 1 o 2n - 1).
Exn: Porcin de una molcula de ADN, que produce aquellas partes del ARN
precursor que no son eliminadas durante la transcripcin, forman el ARN mensajero y
por tanto especifican la estructura primaria del producto de los genes.
Expresin: Efecto fenotpico de un rasgo o condicin en particular, detectable en el
genotipo.
Expresividad: Variabilidad con la cual se modifican los posibles fenotipos expresados
por un mismo genotipo, dependiendo de circunstancias ambientales o de interaccin
con otros genotipos no allicos.

F
F1: la primera generacin filial obtenida cuando se cruzan dos organismos. La generacin
pateARN que produce la F1 se denomina P1. El cruce de miembros de la F1 produce la
generacin F2, la segunda generacin filial.
F2: Smbolo utilizado para representar la segunda generacin filial; prole producida por
el cruzamiento de dos miembros de la generacin F1 o de dos cepas heterocigotas
cualesquiera.
Fago: Virus cuyo husped es una bacteria.
Familia gnica: Conjunto de genes que tienen en comn uno o varios fragmentos de
ADN, por haberse originado a partir de un gen ancestral comn.
Fecundacin: fusin de los gametos femenino y msculino para formar el cigoto.
Fecundidad: medida del nmero de progenies producidas por un organismo.
Fenocopia: Rasgo fenotpico que se induce por factores no genticos, pero que
reproduce el fenotipo producido habitualmente por un determinado genotipo. Este
rasgo ni se ha heredado ni se transmitir a la prole. Trastornos como la sordera, el
retraso mental y las cataratas congnitas son habitualmente producidos por genes
mutantes pero tambin pueden deberse a agentes diversos, por ejemplo al virus de la
rubola en el caso de las cataratas congnitas. A causa de este fenmeno hay que
descartar todos los factores exgenos antes de considerar un rasgo o defecto
congnito como hereditario, especialmente en los estudios enfocados al consejo
gentico.
Fenotipo: caracteres de un organismo resultado del genotipo modificado por las
influencias del ambiente. Originalmente el trmino se emple para referirse a las
182

caractersticas observables, tales como forma, color, conducta, forma; pero ahora se usa
en sentido ms extenso e incluye caracteres moleculares y microscpicos.
Fertilidad: capacidad para producir progenie.
Fijacin de alelos: estado en el cual todos los miembros de una poblacin son
homocigotos o hemicigotos para un determinado alelo; todos los otros alelos de ese locus
se han perdido en el curso de la evolucin.
Fisin cntrica: Escisin de un cromosoma en dos. Aparece un nuevo centrmero.
Flujo gnico: movimiento de alelos de una poblacin a otra por cruce de individuos de
ambas poblaciones; este flujo permite el aumento de la variacin gentica en la poblacin
receptora.
Frecuencia de recombinacin: Cociente del nmero de individuos recombinantes
encontrados para un marcador gentico en una generacin dividido por el nmero
total de individuos de esa generacin. Se representa por la letra griega q y se utiliza
en estudios de ligamiento para estimar la distancia gentica entre dos loci.
Frecuencia gnica (o allica): la proporcin en la cual se presentan alelos alteARNtivos
de un gen, en una poblacin.
Fusin cntrica: Es la unin de dos cromosomas no homlogos, con prdida del
centrmero de uno de ellos.

G
Gameto: Clula germinal madura, funcional que contiene el nmero haploide de
cromosomas de la clula somtica. Los gametos provinientes de sexos opuestos
(vulo y espermatozoide) se fusionan para formar el cigoto.
Gametognesis: proceso de formacin de gametos: espermios y vulos.
Gstrula: Forma de embrin primitivo formado por la invaginacin de la blstula y se
compone de una capa exteARN de ectodermo y una inteARN de mesentodermo, que
ms adelante se diferencia en el mesodermo y el endodermo y dos cavidades, una
entre las dos capas y otra formada por una invaginacin del endodermo (arquentern)
que comunica con el exterior por una abertura (blastoporo).
Gastrulacin: Proceso de desarrollo de la gstrula y formacin de las tres capas
germinativas en el embrin. Se caracteriza por una extensa serie de movimientos
morfogenticos coordinados mediante el cual se establece el plan estructural orgnico
primitivo del organismo. Las reas que ms adelante se diferenciarn en las diversas
estructuras corporales deben quedar en la posicin adecuada para su desarrollo.
183

Gen domstico: Gen que se expresa en todas o la mayor parte de las estirpes
celulares, por codificar una protena necesaria para la funcin celular. Tambin
llamados genes estructurales, en oposicin a los genes especficos de tejido.
Gen hometico: Gen que contiene una secuencia de 180 pares de bases
(homeobox) que codifica una secuencia de 60 aminocidos que acta como sitio de
unin al ADN y regula la expresin de otros genes, sobre todo durante el desarrollo.
Gen mutante: Gen que ha experimentado un cambio en su secuencia de bases como
prdida, ganancia o intercambio de material gentico, lo que afecta a la transmisin
normal y a la expresin del carcter para el que codifica. Estos genes pueden
convertirse en inactivos o mostrar actividad reducida, aumentada o antagonista.
Gen recesivo: Gen que slo se expresa si estn presentes dos copias, una de cada
progenitor.
Gen supresor: Unidad de informacin gentica, capaz de invertir los efectos de un
tipo especfico de mutacin de otros genes.
Gen: unidad hereditaria formada por una secuencia de ADN que ocupa una posicin fija
(locus) en un cromosoma. La actividad del gene afecta en ltimo trmino el fenotipo del
organismo, an cuando, no todos los genes se expresen en el organismo que los posee.
Se distinguen al menos tres tipos de genes. Los denominados genes estructurales que
codifican la secuencia aminoacdica de una determinada protena y su produccin
mediante la sntesis de un ARN intermedio. Un segundo tipo son aquellos que no se
expresan como protenas y tienen al ARN como producto final: ARN de transferencia y
ARN ribosmico. El tercer tipo es el regulador, que actua como una secuencia de
reconocimiento para otras molculas como ADN-polimerasas, ARN-polinierasas o factores
de transcripcin.
Gentica: rama de la biologa que estudia la herencia y la variacin.
Gentica de Poblaciones, a la rama de la gentica que estudia el comportamiento de los
genes en las poblaciones; tambin puede definirse como la rama de la gentica que
describe en trminos matemticos, las consecuencias de la herencia mendeliana a nivel
poblacional.
Genoma: Complemento cromosmico bsico que contiene toda la informacin
gentica del individuo.
Genotipo: Conjunto de los alelos de un individuo en uno, varios o todos sus loci.
Gnadas: tejidos involucrados directamente con la produccin de clulas reproductivas:
ovarios y testculos.
Gray: Unidad de medida de radiacin equivalente a cien RAD. Su abreviatura es Gy.
Un gray es equivalente a 1 julio de energa absorbida por kilogramo de tejido.
184

H
Hbitat: lugar o tipo de ambiente en el que existen naturalmente un organismo o una
poblacin.
Haploide: Clula u organismo con un solo complemento cromosmico, como sucede
en los gametos tras la meiosis. El nmero haploide se simboliza con la letra n (en
humanos, el nmero haploide es n=23 cromosomas).
Hemicigoto: Situacin en la que un gen est presente en una sola copia, bien por
tratarse de un gen situado en un cromosoma sexual o bien por prdida de uno de los
dos alelos normalmente presentes en loci autosmicos.
Heredabilidad: Proporcin de la variacin fenotpica que es debida a la variacin
gentica total. Da una idea del grado en que un carcter fenotpico est determinado
genticamente.
Herencia citoplasmtica: transmisin de caracteres hereditarios por medio del citoplasma
(y no por genes llevados por los cromosomas) detectados generalmente, por la mayor o
exclusiva contribucin del fenotipo materno o la progenie en cruces reciprocos. Este tipo
de herencia tambin recibe el nombre de herencia mateARN.
Herencia dominante: Rasgo fenotpico que solo precisa un alelo de un determinado
gen para expresarse.
Herencia: Proceso por el cual determinados rasgos o caractersticas se transmiten de
padres a hijos. Implica la separacin y recombinacin de genes durante la meiosis y
las posibles influencias posteriores sobre el material gentico durante la
embriognesis.
Herencia mendeliana: Patrn de herencia monofactorial definido por Mendel, puede
ser autosmica (dominante o recesiva) o ligada al cromosoma X.
Herencia mitocondrial: Patrn de herencia tpico de los rasgos codificados por genes
localizados en el ADN mitocondrial, caracterizado por transmisin exclusivamente
mateARN.
Herencia multifactorial: Patrn de herencia de los rasgos fenotpicos que estn
determinados a la vez por factores genticos (a menudo por varios genes) y por
factores ambientales.
Herencia recesiva: Rasgo fenotpico que precisa ambos alelos de un determinado
gen para poder expresarse.
Herencia: trasmisin de genes de padres a la progenie. Parecido entre individuos
relacionados por descendencia.

185

Hermafroditas: individuos que poseen rganos reproductivos msculinos y femeninos. En

algunos casos, un rgano aparece antes que otro: hermafroditismo secuencial; en otros se
presentan ovarios y testculos al mismo tiempo: hermafroditas simultneos.
Heterocarin: Clula somtica que contiene dos o ms ncleos de procedencia
gentica distinta.
Heterocigosidad: estado en que se tiene uno o ms pares diferentes de alelos de genes
determinados. Se acostumbra usar el trmino con relacin a un locus cuando es legtimo
referirse a aumento o disminucin de la heterocigosidad general.
Heterocigoto doble: Individuo que es heterocigoto para dos loci distintos.
Heterocigoto manifiesto: En gentica humana, la mujer heterocigota para un rasgo
recesivo ligado al cromosoma X que manifiesta la enfermedad con la misma gravedad
que los varones hemicigotos.
Heterocigoto obligado: Individuo que no manifiesta un rasgo fenotpico pero que
necesariamente es portador por haberlo transmitido a su descendencia.
Heterocigoto: Clula o individuo diploide con alelos diferentes en uno o ms loci de
cromosomas homlogos.
Heterocromatina: Cromatina transcripcionalmente inactiva que muestra alta
condensacin durante la interfase y se replica al final de la fase S del ciclo celular
(heterocromatina constitutiva). La heterocromatina facultativa est constituda por
eucromatina que adquiere las caractersticas de la heterocromatina en determinados
estados del desarrollo.
Heterodisoma: Caso de disoma uniparental en la que un par de cromosomas
homlogos de un individuo proceden de un par de cromosomas homlogos del mismo
progenitor.
Heterogeneidad allica: Situacin en la que distintas mutaciones en un mismo gen
producen variaciones en las manifestaciones clnicas, o incluso dan lugar a cuadros
clnicos diferentes.
Heterogeneidad de locus: Situacin en la que mutaciones en genes diferentes dan
lugar a la misma enfermedad clnica.
Heterogeneidad gentica: Trmino amplio utilizado para indicar que un mismo
cuadro clnico puede tener causas genticas diferentes.
Heteromorfismo: Par de cromosomas homlogos que muestran alguna diferencia en
forma o tamao.
Heteroploide: En una especie con predominio de la diplofase -como la humana- se
refiere al nmero de cromosomas distinto al diploide, tanto euploide como aneuploide.
186

Hibridacin: Unin entre dos individuos con fenotipos o genotipos distintos, o bien
procedentes de dos poblaciones o especies diferentes. En biologa molecular, el
emparejamiento especfico entre cadenas complementarias de ADN ARN.
Hibridacin fluorescente in situ (FISH): Tcnica usada para localizar una sonda
marcada en una regin cromosmica, hacindola hibridar con el ADN de una
preparacin de clulas en interfase o en mitosis.
Hiperploide: Clula o individuo con uno o ms cromosomas o segmentos
cromosmicos aadidos al nmero euploide caracterstico (ntese la diferencia con
"poliploide"). Segn el grado de ploida puede hablarse de hiperhaploide,
hiperdiploide, hipertriploide, etc.
Hipoploide: Clula o individuo con uno o varios cromosomas o segmentos
cromosmicos perdidos respecto al nmero euploide caracterstico. Segn el grado de
ploida puede hablarse de hipohaploide, hipodiploide, hipotriploide, etc.
Histonas: Protenas bsicas, de bajo peso molecular, ricas en Lisina y Arginina, muy
conservadas evolutivamente entre los eucariotas y algunos procariotas. Forman la
cromatina junto con el ADN, sobre la base de unas unidades conocidas como
nucleosomas.
H-N-H (Grupo amino)
Homocigosidad: condicin en la cual ambos miembros de un par de alelos son idnticos,
o muchos pares de alelos en loci diferentes son idnticos.
Homocigoto: Clula o individuo con alelos idnticos en uno o ms loci de
cromosomas homlogos.
Hormonas: molculas orgnicas sintetizadas en un tejido, cuyo efecto se ejerce sobre
otro(s) tejido(s).
Huso: aparato compuesto por microtbulos que aparece en muchas clulas eucariticas al
comienzo de la divisin nuclear y es responsable por la separacin ordenada de los
cromosomas, los cuales se unen a las fibras del huso por sus centrmeros

I
Impronta: Fenmeno por el que un gen se expresa de manera diferente dependiendo
de si es de procedencia mateARN o pateARN.
Inactivacin del X: Mecanismo de compensacin de la dosis gnica en mamferos,
propuesto por Mary Lyon en 1966, mediante la inactivacin de uno de los
cromosomas X en las clulas somticas de las hembras.
Influenciado por el sexo: Rasgo fenotpico que est condicionado por el sexo del
individuo sin estar determinado por un gen ligado al sexo.
187

Ingeniera gentica: manipulacin del material gentico, especialmente para uso industrial
o mdico. Comprende las tcnicas de donacin gnica, la modificacin del ADN por
cambios en las secuencias o deleciones y la introduccin de genes nuevos en clulas y
organismos.
Insercin: Mutacin por la que se aaden al menos un par de bases a una molcula
de ADN.
Interccin gnica: la modificacin del efecto de un gen por la accin de uno o ms
genes no allicos (epistasis).
Intercambio de cromtidas hermanas: Intercambio de material gentico por
sobrecruzamiento entre cromtidas hermanas durante la meiosis o la mitosis.
Interfase: Perodo del ciclo celular comprendido entre dos divisiones sucesivas.
Intrn: Secuencia de pares de bases en el ADN que genera aquellas partes del ARN
precursor que se escinde durante la transcripcin y que no entrar a formar parte del
ARN mensajero maduro por lo que no especificar la estructura primaria del producto
de los genes.
Inversin: Anomala estructural de los cromosomas por la que un segmento invierte
su posicin respecto a la disposicin normal. Puede ser pericntrica (cuando los
puntos de ruptura estn separados por el centrmero) o paracntrica (si ambos puntos
de ruptura estn al mismo lado del centrmero).
Isocromosoma: Cromosoma metacntrico anormal que se produce durante la
meiosis o mitosis, cuando la divisin del centrmero se produce segn el plano
horizontal en vez de vertical. Ambos brazos del isocromosoma son genticamente
idnticos pero en sentido inverso.
Isodisoma: Caso de disoma uniparental en la que un par de cromosomas
homlogos de un individuo proceden de un solo cromosoma parental que se ha
duplicado.
Isoenzimas (isozimas): formas mltiples de una determinada enzima presente en un
organismo. Las isozims han sido distinguidas por electrofresis. Generalmente estn
constituidas por al menos dos tipos de polipptidos genticamente distintos; los cuales
pueden presentarse en diferentes proporciones, dando origen a enzimas que difieren en
su afinidad por substratos, inhibidores, etc. Por ejemplo la enzima lactato deshidrogenasa
(LHD) en mamferos est compuesta por proporciones diferentes de las cadenas
polipeptdicas M y H. Existen cinco isoenzimas: M4, M3H, M2H2. MH3, H4. La cantidad
relativa de estas isoenzimas difiere de tejido en tejido y tambin con los diferentes estados
del desarrollo embrionario.
Isognicos: genticamente uniforme (homocigotos).
188

K
Kilobase (Kb): Unidad de tamao de los cidos nucleicos, correspondiente a una
longitud de 1000 nucletidos. En ADN bicatenario se denomina kilopares de bases
(Kbp).

L
L1: Familia de elementos nucleares dispersos largos (LINE), presente en el genoma
humano en nmero moderado de copias (alrededor de 80.000). Formada por
unidades de unas 6 kb que pueden comportarse como retrotransposones.
Leptoteno: Primer estado de la profase de la primera divisin meitica, en la que los
cromosomas (cada uno formado por dos cromtides) estn desenrollados y unidos por
sus extremos a la membrana nuclear.
Ley de Hardy-Weinberg: Exposicin en trminos matemticos del principio de que las
frecuencias genotpicas permanecen constantes en una poblacin grande en
condiciones de panmixia, siempre que no haya mutacin, seleccin ni migracin. En
gentica humana se utiliza para calcular las frecuencias allicas a partir de la
prevalencia de una enfermedad.
Leyes de Mendel: 1.- Principio de Segregacin: los alelos ocurren en pares en las clulas
de los individuos, cuando se producen los gametos, los miembros de cada par se separan
en forma tal que cada gameto recibe solamente uno de los miembros de cada par. Ahora
sabemos que la base fsica para este principio es la primera anafase meitica donde los
cromosomas homlogos se segregan o separan entre s. 2.-Principio de Distribucin
Independiente: la transmisin de alelos de un locus a los gametos no influye la trasmisin
de alelos de otros loci en los gametos durante la gametognesis. Sabemos que esto es
cierto slo para los loci de los cromosomas no homlogos.
Ligado al sexo: Relativo a los genes o a las caractersticas o transtornos que
transmiten. Estos genes se encuentran en los cromosomas sexuales.
Ligado al X: Rasgo determinado por un gen localizado en el cromosoma X.
Ligado al Y: Rasgo determinado por un gen localizado en el cromosoma Y.
Ligamiento: Tendencia de dos o ms marcadores genticos a heredarse juntos en
una proporcin mayor a la explicada por el principio de distribucin independiente que
aumenta con su proximidad al reducirse la probabilidad de ser separados durante una
reparacin del ADN o los procesos de replicacin (fisin binaria en procariotas, mitosis
o meiosis en eucariotas).
Ligasa del ADN: Enzima que puede reparar la rotura de una cadena de ADN
sintetizando un puente entre nucletidos vecinos. En ciertas circunstancias este
189

enzima puede unir extremos sueltos de cadenas de ADN e incluso reparar tambin
molculas de ARN.
Limitado por el sexo: Rasgo fenotpico que se expresa slo en un sexo, aunque el
gen que lo determina est localizado en un autosoma. Estos rasgos se ven influidos
tpicamente por las condiciones ambientales u hormonales.
Lneas puras o consanguneas: poblaciones de organismos que son homocigotos como
resultado de un proceso contnuo de consanguinidad.
Locus (plural=Loci): Posicin que ocupa un gen en el genoma.
Lugar de restriccin: Secuencia de nucletidos que es reconocida especficamente por
una endonucleasa de restriccin.

M
Mapa de ligamientos: Un mapa de las posiciones relativas de los loci en un
cromosoma basndose en las frecuencias con que dichos loci se heredan juntos. Las
distancias se miden en centimorgans.
Mapa de restriccin: Representacin lineal de los lugares (o dianas) de restriccin
contenidos en una secuencia de ADN.
Mapa fsico: Serie ordenada de genes y marcadores genticos localizados en un
cromosoma mostrando las distancias fsicas relativas (expresadas en pares de
bases). Se construye utilizando mtodos fsicos: secuenciacin, mapas de restriccin
de clones solapantes, hibridacin in situ, estudios de delecciones, etc.
Mapa gnico: Serie ordenada de loci genticos en un cromosoma, deducida tanto por
mtodos genticos (estudios de ligamiento) como fsicos.
Mapeo: Trmino que designa colectivamente los distintos procedimientos (tanto
genticos como fsicos) empleados en la construccin de mapas gnicos.
Mapeo de Restriccin: procedimiento que utiliza endonucleasas de restriccin para
producir cortes especificos en el ADN. Las posiciones de los cortes y sus orientaciones
pueden ser medidas y as crear un mapa de restriccin. Sonda: molcula de ADN o ARN
usada para identificar y seleccionar genes especificos.
Marcador gentico: Locus gentico con alelos fcilmente detectables, bien porque
producen un fenotipo caracterstico o porque pueden estudiarse por mtodos
moleculares. Son utilizados en estudios de ligamiento y en la creacin de mapas
fsicos.
190

Marco de lectura: Cada una de las posibles lecturas de una secuencia de ADN en
forma de tripletes. Un marco de lectura abierto es el que da lugar a un ARN mensajero
traducible a una protena.
Material gentico todo material de origen vegetal, animal, microbiano que contenga
unidades funcionales de la herencia.
Meiosis: Divisin celular que tiene lugar durante la formacin de los gametos en
especies de reproduccin sexual, mediante la cual una clula germinal diploide da
lugar a cuatro gametos haploides.
Mendelismo: la herencia de los genes de acuerdo a las leyes de Mendel.
Mesodermo: Capa celular intermedia de las tres que forman el embrin en desarrollo.
De ella se derivan los huesos, el tejido conectivo, los msculos, la sangre, los tejidos
linftico y vascular, la pleura, el pericardio y el peritoneo.
Metacntrico: Cromosoma en que el centrmero est localizado cerca del centro, de
modo que los brazos de las cromtides tienen aproximadamente la misma longitud.
Metafase: Segunda fase de la divisin celular, en la que los cromosomas (o ttradas
en la primera divisin meitica) se colocan en el plano ecuatorial del huso acromtico.
Microdelecin: Delecin que no puede ser observada por tcnicas citogenticas
clsicas.
Migracin movimiento de individuos de una poblacin a otra, que resulta en la
transferencia de material que puede cambiar las frecuencias gnicas en la poblacin
receptora.
Mitocondrias pequeos corpsculos citoplasmticos, especializados en la trasformacin
de la energa qumica proveniente de diversas fuentes energticas en una energa
biolgicamente utilizable. Estos organelos contienen ADN y son capaces de multiplicarse
independientemente de la divisin celular.
Mitosis: Divisin celular caracterstica de las clulas somticas, que produce dos
clulas hijas que sern genticamente idnticas a la clula progenitora.
Monohbridos: organismos que, de acuerdo a un determinado cruce, es heterocigoto para
un solo par de alelos; dihbridos: para dos pares de alelos, etc.
Monmeros: una molcula simple de peso molecular relativamente bajo. Dmero:
molcula constituida por dos subunidades que pueden ser iguales o desiguales
(hommeros o hetermeros), trmeros, tres subunidades, etc.
Monosoma: Aneuploida debida a la prdida de uno de los miembros de un par de
cromosomas homlogos.

191

Mrula: Msa esfrica maciza de clulas procedente de la divisin del vulo fertilizado
en los primeros estadios del desarrollo embrionario. Representa una fase intermedia
entre el cigoto y el blastocisto, y est compuesta por blastmeros uniformes en cuanto
a tamao, forma y potencialidad fisiolgica.
Mosaicismo: Coexistencia en un individuo de dos o ms lneas celulares con distinta
constitucin cromosmica pero que proceden del mismo cigoto.
Mosaico: organismo, parte del cual esta constituido por tejido genticamente diferente del
resto.
Mutacin: Cualquier modificacin introducida en una secuencia nucletica que es
estable (permanece tras la replicacin del ADN).
Mutacin nula: Mutacin que produce un alelo no funcional (que no produce ningn
efecto fenotpico.
Mutacin por cambio de marco: Mutacin consistente en la insercin o deleccin de
un nmero de bases que no es mltiplo de 3, con lo que se cambia el marco de
lectura original y la secuencia de aminocidos a partir del punto de la mutacin ser
diferente a la de la protena original. Con frecuencia aparece un codn de terminacin,
por lo que adems se producen protenas truncadas.
Mutacin puntual: Mutacin que afecta nicamente a un nucletido.
Mutacin sin sentido: Mutacin por la cual un codn que especifica un aminocido
es cambiado a un codn de terminacin, dando lugar a una protena truncada.
Mutacin somtica: Mutacin que afecta a una clula somtica (y a la poblacin
celular originada por sta) pero no a las clulas de la lnea germinal. Por tanto, no se
transmitir a la descendencia del individuo portador.
Mutgeno: Agente fsico o qumico que causa mutaciones.
Mutante: Clula u organismo que porta una mutacin.

N
No-Disyuncin: Error en la separacin de cromosomas homlogos (en mitosis o en la
primera divisin meitica) o de cromtides hermanas (en la segunda divisin meitica)
hacia polos opuestos, que provoca aneuploidas en las clulas hijas.
Nomenclatura citogentica Conjunto de reglas y abreviaturas
convencionalmente para describir los cariotipos y cromosomas.

usadas

Ncleo: parte de una clula que contiene los genes, rodeada por una membrana nuclear
que lo separa del citoplasma.

192

Nuclolos: estructuras dentro del ncleo de algunas clulas, sitios de sntesis de ARN
ribosmico y ensamblaje de ribosomas.
Nucleosomas: El conjunto del ADN enrrollado alrededor del octmero de histonas, junto
con la histona H1 y una cierta longitud de ADN linker, o internucleosomal constituye lo que
se conoce como nucleosoma.
Nucleoprotenas: compuestos de cidos nucleicos y protenas que forman los
cromosomas.
Nucletido: Molcula constituda por una base nitrogenada, una pentosa y un grupo
de cido fosfrico. Es la unidad bsica que compone los cidos nucleicos.

O
O=C-OH (Grupo Carboxlico)
Oligonucletido: Secuencia lineal de nucletidos unidos por enlaces fosfo-dister,
habitualmente no mayor de 50 nucletidos.

P
p: En nomenclatura citogentica, brazo corto (del francs, "petit") de un cromosoma.
Palndromo: Aplicado al ADN, se utiliza tanto para las secuencias nucleotdicas que
se leen igual en ambos sentidos sobre la misma hebra (repeticiones invertidas en
tndem) como para las secuencias que se leen igual en sentido 5' a 3' sobre hebras
complementarias.
Panmixia: Condicin que se da cuando cada individuo en una poblacin tiene la
misma probabilidad de aparearse con otro de sexo opuesto. Eleccin de pareja al
azar.
Paquiteno: Tercer estado de la profase de la primera divisin meitica, en el que los
bivalentes se convierten en ttradas al hacerse visibles las dos cromtides de cada
homlogo.
Par de bases: Dos nucletidos complementarios en una molcula de ADN
bicatenario.
Partenognesis: el desarrollo de un nuevo individuo de un vulo sin fertilizar.
Pedigr: Diagrama que representa la descendencia de unos ancestros, estableciendo
la relacin entre los diferentes miembros de la familia. Se elabora siguiendo un
sistema de smbolos aprobado por convencin.
Penetrancia: Proporcin de individuos portadores de un genotipo que muestran el
fenotipo esperado, en unas condiciones ambientales concretas. Es decir la relacin
193

entre el nmero de individuos que presentan una enfermedad con el nmero de

individuos que deberan presentarla conforme a su genotipo.
Pptidos: molculas en las cuales hay al menos una unin peptdica entre dos residuos
aminoacdicos. Dipptidos, tripptidos, tetrapptidos, polipptidos, tienen dos, tres, cuatro
o muchos residuos aminoacdicos.
pH: medida de la acidez de una solucin o concentracin de protones (H+). Soluciones de
pH 7,0 tienen igual concentracin de iones hidrgenos e hidroxilos, bajo pH 7,0 las
soluciones son cidas y sobre pH 7,0 son alcalinas o bsicas.
PIC: Acrnimo ingls de "Polymorphism information content" (contenido de
informacin de un polimorfismo). Medida de la informatividad de un marcador
gentico, que depende del nmero de alelos para ese locus y de sus frecuencias
relativas.
Pirimidinas: Un tipo de bases nitrogenadas con un anillo nico de carbono de las
cuales la Timina se encuentra slo en el ADN, el Uracilo slo en el ARN y la Citosina
en ambos.
Plsmido: Elemento gentico extracromosmico presente en bacterias, consistente
en una molcula circular de ADN bicatenario. En biologa molecular se usan como
vectores de clonacin.
Pleiotropa: Fenmeno por el cual un solo gen es responsable de efectos fenotpicos
distintos y no relacionados.
Ploidia: nmero de sets de cromosomas presentes en una clula, tejido u organismo. As,
un set de cromosomas = condicin haploide, dos sets = diploide, tres sets = triploide, etc.
Poblacin panmtica: es aquella en la cual los individuos se cruzan al azar y cada inviduo
tiene la misma oportunidad de cruzarse con otro del sexo opuesto. Se denomina como
poblacin efectiva a los miembros reproductores de la misma.
Poblacin: grupo de organismos de la misma especie que comparten un pooi gnico y
existen en un rea geogrfica definida. Comunidad de individuos que poseen reproduccin
sexual y puesto que los principios mendelianos se aplican a la trasmisin de genes entre
estos individuos, tal comunidad ha sido denominada poblacin mendeliana.
Poligenes: grupo de genes que afectan un carcter cuantitativo, como velocidad de
crecimiento por ejemplo.
Polignico: Rasgo fenotpico o enfermedad causado por la interaccin de varios
genes.
Polimorfismo: Locus gentico que est presente en dos o ms alelos distintos, de
forma que el alelo ms raro tiene una frecuencia mayor o igual a 1% (0,01) en la
poblacin general. Un polimorfismo puede ser transitorio (las frecuencias allicas
194

tienden a cambiar debido a una ventaja selectiva) o estable (las frecuencias allicas
permanecen constantes durante muchas generaciones).
Polipptido: Polmero formado por aminocidos unidos por enlaces peptdicos.
Poliploide: Clula o individuo que tiene tres o ms complementos cromosmicos (3n,
4n, etc.).
Polispermia: entrada de dos o ms espermios en un ovocito u vulo en la fertilizacin.
Normalmente un slo proncleo msculino se fusiona con el proncleo femenino y los
derivados de otros espermios son reabsorbidos.
Pool o poza gnica: la suma total de todos los alelos de los gametos de una poblacin,
en un tiempo determinado.
Portador: Individuo clnicamente sano que transmite una enfermedad, por poseer un
alelo patolgico. Suele aplicarse a individuos heterocigotos para un gen recesivo, o a
individuos heterocigotos para un gen dominante que no expresan la enfermedad.
Primer: Voz inglesa que significa cebador.
Principio de Hardy - Weinberg: establece que si formas alteARNs de un gen autosmico
estn presentes en una gran poblacin panmtica, en ausencia de mutacin, seleccin o
migracin diferencial, las proporciones originales (frecuencias gnicas) se mantendrn de
generacin en generacin, y luego de una generacin la proporcin de genotipos
alcanzar un estado de equilibrio. El equilibrio de las frecuencias genotpicas est dado por
los trminos de la expansin: (p1+ p2 + p3 +... + pn)2. En el caso donde hay un par de
alelos (A y a), las frecuencias de los gametos que llevan A y a se definen como p y q,
respectivamente y el equilibrio de las frecuencias genotpicas ser: p2 (AA), 2pq (Aa) y q2
(aa).
Probe: Voz inglesa que significa sonda.
Procariota: Perteneciente al super-reino Procariotas, que incluye los microorganismos
que se multiplican por divisin binaria y carecen de ncleo delimitado por envoltura
nuclear.
Profase: Primera fase de la divisin celular, en la que los cromosomas se hacen
visibles como entidades aisladas.
Promotor: Regin de ADN que contiene diferentes dominios de unin a factores de
transcripcin y que determina el lugar donde la ARN polimerasa comienza la
transcripcin de un gen.
Proncleo femenino: ncleo haploide de un vulo producido por divisiones meiticas, los
otros ncleos resultantes de estas divisiones son eliminados como corpsculos polares.
Su fusin con el ncleo del espermio resulta en la formacin del cigoto.
Proncleo msculino: ncleo del gameto msculino.
195

Protenas: molculas biolgicas compuestas de una o ms cadenas polipeptdicas; cada

cadena compuesta por una serie de aminocidos unidos covalentemente por enlaces
peptdicos.
Punnett, cuadro de: Diagrama grfico en forma de tablero, que se utiliza para
representar proporciones genticas en el que se muestran todas las posibles
combinaciones de gametos msculinos y femeninos, cuando se cruzan uno o ms
pares de alelos independientes. Las letras que representan los gametos msculinos
se situan en el eje Y y las que representan los femeninos a lo largo del eje X, los
resultados se disponen en los cuadrados de cruce.
Purinas: Un tipo de bases nitrogenadas que contienen dos anillos (uno de seis y otro
de cinco miembros). Las que forman parte del ADN y el ARN son la Adenina y la
Guanina.

Q
q: En nomenclatura citogentica, brazo largo de un cromosoma.
Quiasma: Manifestacin citolgica de un sobrecruzamiento entre cromtides no
hermanas.
Quimera Chimera: Individuo compuesto por lneas celulares genticamente distintas
y procedentes de distintos cigotos.

R
RAD: Medida de la cantidad de cualquier radiacin ionizante absorbida por los tejidos.
Un RAD es equivalente a cien ergios de energa absorbida por gramo de tejido.
Radiacin ionizante: Las ondas electromagnticas de alta energa y los rayos
constitudos por partculas en movimiento que en su trayectoria disocian a las
sustancias en iones. Afectan directamente a los organismos vivos al interferir el
desarrollo celular. Sus efectos genticos comprenden la produccin de mutaciones en
los genes y diversas alteraciones cromosmicas.
Rasgo: Cualquier caracterstica determinada genticamente que se transmite
asociada a un genotipo especfico. La manifestacin del rasgo en el fenotipo puede
producirse de modo dominante o recesivo.
Rastreo gentico: Bsqueda sistemtica y generalizada de un genotipo concreto en
todos los individuos de una poblacin.
Recesivo Recessive: Rasgo fenotpico (y los alelos que lo determinan) que slo se
expresa en el estado homocigoto o hemicigoto. Los alelos recesivos se denominan
con letras minsculas para diferenciarlos de los dominantes.
196

Recombinacin: formacin de nuevas combinaciones de genes como resultado de la

segregacin en los cruces entre padres genticamente diferentes. Tambin el rearreglo de
genes ligados debido al entrecruzamiento. Constituye un proceso natural que genera
diversidad gentica. La recombinacin de ADN entre cromtidas del mismo cromosoma,
en lugar de entre cromosomas homlogos (como ocurre en el crossing-over), recibe el
nombre de recombinacin intracromosmica. La recombinacin entre cromtidas
hermanas no tienen consecuencias genticas.
Recombinante: Clula u organismo que resulta de la recombinacin de genes en la
molcula de ADN, independientemente de si se ha producido de forma natural o por
medios artificiales.
Recn: Unidad gentica ms pequea capaz de recombinarse. Se cree que es un
triplete de nucletidos.
Recursos genticos: conjunto de genes de una poblacin, especie etc. que constituye la
materia prima para la adaptacin a los cambios del medio ambiente. En las poblaciones,
aparecen constantemente variaciones genticas por medio de mutaciones o por
inmigracin de material gentico proveniente de otras poblaciones.
Rem: Dosis de cualquier radiacin que tiene el mismo efecto biolgico que un RAD de
rayos X.
Retrotransposn: Elemento mvil de ADN que se transpone utilizando un
intermediario de ARN.
Retrovirus: Familia de virus con ARN monocatenario que tienen la capacidad de
retro-transcribir su ARN en ADN y que incluye tres gneros: oncovirus, lentivirus y
espumavirus. Los oncovirus son causantes de diversos procesos tumorales y
leucemias en animales y algunos oncovirus (especialmente del tipo C) y lentivirus se
utilizan en terapia gnica como vectores de ADN.
Reversin: Aparicin de caracteres hereditarios que no se haban manifestado en
varias generaciones.
Ribosa: Pentosa que entra en la composicin de los nucletidos.
Ribosoma: Organela citoplasmtica de un dimetro de unos 200 ; y compuesta por
cido ribonucleico y proteinas que interviene en la sntesis de las protenas celulares
catalizando la translacin del ARN mensajero para secuenciar aminocidos.
RNA: Abreviatura inglesa que significa ARN.

S
Satlite cromosmico: Segmento distal de un cromosoma que est separado del
resto del mismo por un pednculo o constriccin secundaria. No confundir con ADN
satlite.
197

Screening: Voz inglesa que significa deteccin.

Secuencia de consenso: Secuencia ideal que representa los nucletidos o
aminocidos que se encuentran con mayor frecuencia en cada posicin de un
fragmento de ADN o de una protena, respectivamente.
Segregacin: Proceso de separacin de los alelos de un locus durante la meiosis: al
separarse los dos cromosomas homlogos de un par, cada alelo pasa a un gameto
distinto. En sentido ms amplio se aplica a la separacin de alelos y su distribucin a
clulas hijas diferentes, que se produce tanto en la meiosis como en la mitosis.
Seleccin (coeficiente, s): expresin que indica la seleccin relativa contra un
determinado genotipo. Es la reduccin proporcional en la contribucin al pool gnico de la
siguiente generacin hecha por individuos con un genotipo particular, comparado con la
contribucin hecha a este pool por otros genotipos, usualmente el que tiene mayor
adaptabilidad.
Seleccin (presin): efectividad del ambiente en cambiar la frecuencia de alelos en una
poblacin.
Seleccin natural: mecanismo evolutivo que comprende la seleccin de individuos con
adaptabilidad superior, en trminos de fertilidad y fecundidad en relacin con otros
individuos de la misma poblacin. A largo plazo el aumento en la adaptabilidad de una
poblacin es proporcional a la varianza gentica de adaptabilidad de sus miembros.
Seleccin: cualquier proceso natural o artificial que favorezca la supervivencia y
reproduccin de ciertos individuos. Diferencial de seleccin, la diferencia entre el valor
fenotpico promedio de un carcter cuantitativo en la poblacin total y la de individuos
seleccionados para ser padres de la siguente generacin. Intensidad de seleccin, la
fraccin de la poblacin total que es escogida como padres de la siguiente generacin.
Separacin: Eliminacin de los intrones y unin de los exones en ARN durante la
transcripcin.
Seudogn: Gen inactivo (no produce un producto proteico) cuya secuencia tiene un
alto grado de homologa con otro gen funcional que est en un locus distinto. Un
seudogn procesado es una copia de otro gen pero que carece de intrones, tiene una
pequea cadena de poliadeninas y est flanqueado por repeticiones cortas; se piensa
que proviene de la integracin en el genoma de ARN maduro retro-transcrito. Un
seudogn no procesado (o tradicional) surge por duplicacin de un gen y posterior
acumulacin de mutaciones inactivantes, y suele estar cerca del gen funcional del que
se origin.
Silvestre: El fenotipo o el alelo que se encuentra con mayor frecuencia en la
naturaleza, y que por tanto se designa arbitrariamente como "normal".

198

Sinapsis: Emparejamiento de los cromosomas homlogos durante el comienzo de la

profase mittica para formar cromosomas dobles o bivalentes.
Sndrome: Complejo de signos y sntoms resultantes de una causa comn o que
aparecen en combinacin como expresin del cuadro clnico de una enfermedad o
una alteracin hereditaria.
Sobrecruzamiento o Crossing-over: Intercambio recproco de segmentos de
material gentico entre cromosomas homlogos, producido mediante rotura simtrica
y unin cruzada de los extremos. Tiene lugar durante la meiosis y ms raramente,
durante la mitosis y proporciona una base biolgica al fenmeno de la recombinacin.
Sobrecruzamiento desigual: Sobrecruzamiento que tiene lugar entre segmentos no
homlogos y que, por tanto, da lugar a duplicaciones y delecciones en las clulas
resultantes.
Sobredominancia: el fenmeno de los heterocigotos que tienen un fenotipo extremo.
Sonda (del francs sonde, abreviacin del anglosajn sundline, en su acepcin de
elemento exploratorio): Molcula de ADN o ARN monocatenario con una secuencia de
bases especfica, marcada radiactivamente o inmunolgicamente, que se utiliza para
detectar secuencias de bases complementarias por hibridacin
Stock: trmino prctico en el manejo de pesqueras que describe un grupo de individuos
que comparten un pool gnico.
STS: Acrnimo ingls de "Sequence-tagged site" (lugar con una secuencia marcada).
Fragmento corto (200 a 500 pb) de ADN genmico cuya secuencia es conocida y su
posicin ha sido determinada en el mapa fsico o gentico. Esto permite que sean
usados como marcadores genticos en el desarrollo de mapas fsicos del genoma
humano
Subespecie: subdivisin de una especie que puede estar aislada geogrficamente y tener
caracteres distintivos pero no est reproductivamente aislada. Raza; grupo de poblaciones
que pueden ser distinguidos por caracteres fenotpicos y el aislamiento geogrfico de otros
grupos o poblaciones de la misma especie. Las razas pueden o no ser consideradas como
subespecies y lo son cuando las diferencias raciales son considerables y de importancia
taxonmica.

T
Tasa de mutacin: Nmero de mutaciones por gameto y por generacin que se
producen en uno cualquiera de los locus. Se representa por la letra griega .
Taxn: unidad de rango taxonmico en cualquier nivel de la escala jerrquica.
Telocntrico: Cromosoma que tiene su centrmero muy prximo a su extremo.
199

Telofase: Cuarta y ltima fase de la mitosis, durante la cual desaparece el huso

acromtico y se forman las membranas nucleares alrededor de cada uno de los
grupos de cromosomas.
Telmero: Extremo libre de los cromosomas lineales de eucariotas. En humanos, as
como en muchos otros eucariotas, el ADN de los telmeros est compuesto por
repeticiones en tndem de la secuencia TTAGGG.
Teratgeno: Agente fsico o qumico que aumenta la incidencia de malformaciones
congnitas.
Termolbil: Que se altera o descompone por accin del calor.
Ttrada: Las cuatro cromtides (dos por cada cromosoma homlogo de un bivalente)
que estn en sinapsis durante la primera divisin meitica.
Traduccin: Proceso por el que se sintetiza un polipptido tomando un ARN
mensajero como molde. Se lleva a cabo en los ribosomas.
Trans, configuracin: Presencia del alelo dominante de un par de genes y el alelo
recesivo de otro en el mismo cromosoma.
Transcripcin: Proceso de sntesis de una molcula de ARN mensajero por accin
de la ARN-polimerasa, tomando como molde la cadena antisentido del ADN
genmico. Este es el primer paso de la expresin gnica.
Transcriptasa inversa: ADN-polimerasa ARN-dependiente, es decir, complejo
enzimtico que sintetiza una molcula de ADN tomando un ARN como molde.
Transduccin: Mtodo de recombinacin gentica por el cual se introduce un cido
nucleico exgeno en una clula por medio de un vector vrico. Originalmente
designaba la transferencia de material gentico entre bacterias por medio de un fago.
Transfeccin: Trmino general utilizado para referirse a la introduccin de ADN
exgeno al interior de una clula eucariota.
Transformacin: 1. Proceso de introduccin de ADN exgeno en una bacteria por
medios fsicos o qumicos. 2. Conversin de una clula animal fenotpicamente normal
en una clula con crecimiento descontrolado, por accin de un virus oncognico. Se
manifiesta adems en alteraciones de la forma celular y en la prdida de inhibicin por
contacto.
Transgnico: Clula u organismo que contiene en su lnea germinal un ADN exgeno
introducido experimentalmente.
Transicin: Mutacin puntual que consiste en el cambio de un nucletido por otro de
su misma clase (es decir, purina por purina o pirimidina por pirimidina).

200

Translocacin equilibrada: Transferencias de segmentos entre cromosomas no

homlogos de tal forma que se producen cambios en la configuracin pero no en el
nmero total de cromosomas.
Translocacin recproca: Intercambio mutuo de material gentico entre dos
cromosomas no homlogos.
Translocacin Robertsoniana: La fusin de dos cromosomas acrocntricos por sus
centrmeros, a menudo acompaada por la prdida de los brazos cortos de los
cromosomas implicados. Tambin se denomina fusin cntrica.
Translocacin: Anomala cromosmica debida al cambio de posicin de un segmento
cromosmico. El segmento translocado puede situarse en el mismo cromosoma
(translocacin intracromosmica) o en otro cromosoma (translocacin
intercromosmica). La translocacin producida por intercambio de segmentos entre
dos cromosomas sin prdida de material gentico se denomina translocacin
recproca equilibrada cuando da lugar a cromosomas monocntricos.
Transposn: Elemento gentico mvil que puede moverse de una localizacin
genmica a otra, gracias a la presencia de secuencias repetidas cortas que lo
flanquean y que es capaz de replicar e insertar una copia en un lugar nuevo en el
genoma.
Transversin: Mutacin puntual que consiste en el cambio de un nucletido por otro
de distinta clase (es decir, purina por pirimidina pirimidina por purina).
Tres-prima(3'), extremo: Extremo de una cadena de ADN o ARN que tiene un grupo
hidroxilo libre en la posicin 3'.
Triplete: Sinnimo de codn.
Triploide: Clula u organismo con tres complementos cromosmicos, de forma que
posee un nmero total de cromosomas que es triple del haploide (3n).
Trisoma: Aneuploida debida a la presencia de un cromosoma extra en un par de
cromosomas homlogos, ya sean autosoms o cromosomas sexuales, o por la
translocacin de una porcin de un cromosoma en otro. El nmero total de
cromosomas es 2n+1.

U
Unin aleatoria: Sinnimo de panmixia.
Univalente: cromosoma no apareado en meiosis.
Uracilo: Base de pirimidina en el ARN.

V
201

Variacin: la presencia de diferencias entre los individuos de una misma especie.

Variedad: grupo de organismos dentro de una especie, con uno o ms caractersticas
distintivas. A menudo se mantienen solamente por domesticacin y seleccin artificial. No
existen diferencias claras entre una cepa y una variedad, pero las diferencias son
generalmente mayores en las variedades.
Vector: En sentido amplio, sinnimo de vehculo. Se aplica a molculas de ADN que
se replican y sirven para transferir fragmentos de ADN entre clulas (plsmidos,
csmidos, BACs, PACs, YACs, etc); a sistems de transferencia de genes utilizados
en terapia gnica (virus, liposoms, etc); o a organismos capaces de transmitir una
bacteria o un parsito (como el mosquito anopheles).
Ventaja selectiva: Aumento en la eficacia biolgica producido por un genotipo
determinado, de manera que la frecuencia de ese genotipo tender a aumentar en la
poblacin.
Vescula germinal: ncleo de un ovocito primario, a menudo detenido en un estado
postsinptico en la primera profase meitica.
Viabilidad: grado de capacidad para vivir y desarrollarse normalmente.
VNTR: Acrnimo ingls de "Variable number of tandem repeats". Locus cuyos alelos
difieren por tener un nmero variable de repeticiones en tndem. Son muy
polimrficos, por lo que se utilizan como marcadores en estudios de ligamiento y en la
determinacin de identidad en medicina legal.

W
W, Z cromosomas: En las especies en que el sexo heterogamtico es el femenino, el
cromosoma W determina el sexo femenino y el msculino es ZZ.

X
X: En nomenclatura citogentica se refiere al cromosoma X.

Y
Y: En nomenclatura citogentica se refiere al cromosoma Y.
YAC: Acrnimo ingls de "Yeast artificial chromosome" (Cromosoma artificial de
levadura). Vector plasmdico de clonaje que contiene en su ADN las secuencias del
centrmero, del telmero y la secuencia que controla la replicacin autnoma del
cromosoma, lo que posibilita el clonaje de fragmentos de hasta tres millones de bases
de longitud.

Z
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Z, W cromosomas: En las especies en que el sexo heterogamtico es el femenino, el

cromosoma W determina el sexo femenino y el msculino es ZZ.
Zigoto: Sinnimo de cigoto.

203