Análise Instrumental - Da Amostragem À Validação

Anlise instrumental - da
amostragem validao
Ministrante: Thais Vitria da Silva Reis
Doutorada em Qumica Analtica pelo IQ/USP, coordenadora do curso Anlise
Instrumental Avanada da Faculdade Oswaldo Cruz
thais.vitoria@oswaldocruz.br
Santos, 13 de julho de 2013
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ANLISE INSTRUMENTAL
Da Amostragem Validao
Qualidade e Confiabilidade nas Anlises Qumicas
Profa. Dra. Thais Vitria da Silva Reis

Contatos: tvsreis@gmail.com
thais.vitoria@rumosconsult.com
Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal/Sinquisp
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Contedos a serem desenvolvidos
1 - Utilizao de Mtodos Instrumentais;

2 - Classificao dos Principais Mtodos analticos Quantitativos;
3 - Desenvolvimento de Metodologia; Confiabilidade das Medidas
4 - Amostragem
5 - Validao de Amostragem e de Mtodos Analticos
6 - Medidas
7 - Validao de Amostragem e de Mtodos Analticos
8 - Fototransduo e Processamento de Informaes na retina;
9 - Fundamentos
F d
t da
d Espectroscopia
E
t
i Molecular
M l
l nas R
Regies
i d
de
Visvel e Ultra Violeta;
10 - Aplicaes da Espectrofotometria de Visvel e Ultra
Violeta/Estudo de Casos.
Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.02

Classificao dos Mtodos Analticos

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Interao entre Mtodos

Analticos e complementares
Eletroamtricos e
Eletroanalticos
V lid
Validao
Quimiomtricos
Fotomtricos e
E
Espectrofotomt f t
tricos
De Separao

Desenvolvimento de Metodologia
g
Garantir confiabilidade de resultados experimentais
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Definir os objetivos da Qualidade dos Dados

Que graus de preciso e exatido so necessrios?
Qual a qualidade das Informaes Desejadas?
Pode-se selecionar o mtodo analticos para

satisfazer os critrios:
Qualidade dos resultados
Limites de custo e disponibilidade de
equipamentos
Escolhido
E
lhid o Mt
Mtodo,
d em gerall otimizam-se
ti i
os
parmetros de Operao:
Planejamento Fatorial (Quimiometria)
Pirmide de Rastreabilidade
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p.06
D fi i d alguns
Definindo
l
termos
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ltimo Censo de 2010
Populao Brasileira 190

190.755.799
755 799
habitantes...logo :
Censo?
Censo= Conjunto de dados obtidos de todos

os membros da populao
Populao?
p
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Coleo completa de todos os elementos (pessoas,

medidas , idades...)) = todos os sujeitos
j
a serem
estudados
Logo, a populao consiste no conjunto completo de
brasileiros de todas as idades,, etnias e do sexo fem.
e masc.
Atualmente h um supervit de 3.941.819
brasileiras.
96:100

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Aleatorizao e outras
estratgias amostrais
Caso os dados amostrais no sejam coletados adequadamente,
eles podero ser de tal forma inteis que nenhuma manipulao
estatstica poder salv-los.
Amostragens Mais Comuns:
Aleatria: quando os membros de uma populao so selecionados

de tal modo que cada membro individual tem chance igual de ser
selecionado.
Aleatria Simples :de tamanho n selecionada de modo que toda

amostra possvel de mesmo tamanho n, tem a mesma chance de ser
escolhida.
Amostra probabilstica :envolve a seleo de membros de uma

populao de tal modo que os membros tenha uma chance conhecida
((mas no necessariamente igual)
g ) de ser selecionado.
Amostragem aleatria: Cada membro da populao tem igual

chance de ser escolhido(computadores usados para gerar n
n
telefnicos aleatrios).
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Amostragem
g
Aleatria Simples
p
uma amostra de n sujeitos
j
selecionada de forma que toda amostra possvel de mesmo tamanho

n tem a mesma chance de ser selecionada.
Amostragem de Convenincia usa resultados fceis de coletar.

Voc acha que a maioridade
penal deve ser reduzida?

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Amostragem
g
Estratificada A p
populao
p subdividida em p
pelo menos
dois subgrupos diferentes(ou estratos);os sujeitos dentro dos sub grupos
tem as mesmas caractersticas(ex .sexo, faixa etria e a seguir se extrai
uma amostra de cada sub grupo.

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Amostra por Conglomerado divide a populao em sees (ou

conglomerados) e a seguir seleciona aleatoriamente alguns destes
conglomerados e escolha todos os membros destes conglomerados.
Vacinar todos os habitantes destas ilhas.

Erros amostrais
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Erro amostral a diferena entre o resultado amostral e o

verdadeiro resultado da p
populao
p
((vem de flutuaes
amostrais devidas ao acaso).
Erro no
E
amostral
t l - vem de
d dados
d d
amostrais
t i coletados,
l t d
registrados ou analisados incorretamente (instrumento no
calibrado, seleo de amostra tendenciosa, cpia incorreta
de dados).

Medidas de Centro
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um valor no centro ou no meio do conjunto de dados:

1 - Mdia Aritmtica
Mdi X/
Mdia=X/n
X= soma de todos os valores amostrais

n=n de valores amostrais
X= a varivel usada para representar valores individuais dos dados
Ex. Monitorao de Chumbo no Ar

A Agncia de Proteo Ambiental Americana estabeleceu como padro de
qualidade no ar um limite mximo de 1,5 g/m3.
As medidas abaixo ((em g
g/m3 no ar)foram
)
tomadas no ed.5 do World Trade
Center, em diferentes dias, logo aps sua destruio pelos ataques terroristas de 11
de setembro de 2001:
5 40
5,40
1 10
1,10
0 42
0,42
0 73
0,73
0 48
0,48
1 10
1,10
Calculando-se com a expresso acima(1-Mdia aritmtica), Xmedio()=1,538

g/m3.
5,40=outlier---- investigar

2 - Mediana a medida do centro, quando os dados amostrais

esto em ordem crescente; representada por x til.
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Assim, para os dados da Monitorao de Pb teremos:

0 42 0
0,42
0,48
48 0,73
0 73 1,10
1 10 1,10
1 10 5
5,4
4
Mediana= (0,73+1,10)/2=0,915
Caso 5,40 fosse mantido

Media=1,538 g/m3,
Caso fosse alterado para 1,20...
1 20 A mdia cairia para 0,838
0 838
g/m3 mas a mediana seria a mesma.
Ex. Inclua nos dados da monitorao o valor 0,66

Ex
0 66 g/m3
Ache Mdia e Mediana

3 - Moda o valor que ocorre mais frequentemente em um conjunto de

dados.
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-Quando dois valores ocorrem com a mesma maior frequncia, o conjunto

chamado de Bimodal.
- Quando no se repete, No h Moda.
- Esta
E t modalidade
d lid d de
d medida
did de
d centro
t muito
it usada
d com dados
d d no nvel
l
nominal de mensurao (nomes, rtulo, categorias)
Ex Ache a Moda dos seguintes valores
Ex.
a)
5,40 1,10 0,42 0,73 0,48 1,10
b)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
c)
35 35 35 67 67 67 98 99 99
4 - Ponto Mdio a medida de centro exatamente a meio caminho entre o

valor mximo e o mnimo:
Ponto Mdio= (valor Mximo+ valor Mnimo)/2
Medidas de variao
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Qumica Analtica
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Qualidade
Quantidade
E t t
Estrutura
Qualitativa
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Estabelece a natureza dos componentes

p
da amostra e a
reproduz, aproximadamente.
Quais atributos so essenciais ao analista qumico?

Inteligncia?
Imaginao?
Intuio
Age
g em dois nveis:
1 - Refere-e aos componentes da amostra sob a tica da
quantidade
tid d e da
d estrutura;
t t
2 - Refere-se a anlise propriamente.

Qualidades do analista
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1 - Amostragem
g
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Passo mais importante para

obteno do resultado final
Como Amostrar?
Onde Amostrar?
Como preservar a amostra?
Buscar confiabilidade do
resultado
30% dos erros vm da
amostragem
Operao de coleta de
amostra representativa
para a anlise do
universo amostral

Diferenciao entre Amostrar e Coletar

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Amostrar ((estudo p
para a
tomada da amostra)
Coletar
Preparao
Equipamentos
Representatividade dos
pontos
Pessoas envolvidas
Ato de pegar
Isolar
Tomar uma alquota
No existe amostra
Significativa apenas
representativa
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Anlise: resduo agroqumico em plantao de abboras

N de plantas com frutos 500.0000
1
1-Tamanho
Tamanho do Universo Amostral:
1 aboboreira ocupa 4m
2 milhes de m
m so
necessrios para a plantao
de 500.000 plantas.

2 - Qual a poro de
abboras
bb
que deve
d
ser
coletada da plantao?
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Fruto mais maduro

Fruto mais verde
Da p
parte mais
sombreada pelas
folhas
Da parte mais exposta
3 - A coleta:
Quantas coletar?
1 saco?
1 caminho?
i h ?
4 - No Laboratrio:
Q
Qual poro
p tomar?
5 - Aspectos da amostragem
Figura do amostrador
Quanto amostrar
A concentrao a ser analisada
Como amostrar
Decidida esta etapa, ento

s coletar
coletar, mas
mas....
Os mtodos envolvidos na
anlise
li e a validao
lid

Concluses
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Na amostragem: no
existe
i t lote
l t homogneo.
h
Portanto, impossvel tirar

uma alquota que
signifique
i ifi
o universo
i
amostral
Logo, no h
possibilidade de se obter
amostra significativa
Em virtude da
heterogeneidade, s
podemos ter uma amostra,
no mximo
Representativa do
universo amostra!
Mesmo tomando a melhor

amostra representativa
representativa,
haver necessidade de
torn-la disponvel
analiticamente! (p
(passar
por uma preparao)

Preservao
da amostra
(evitar que a amostra se altere)
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Alteraes da amostra podem ser:

FSICAS:
P
HIGROSCOPICIDADE
CONTAMINAO POR TOQUE OU EMBALAGENS

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QUMICAS:
Reaes qumicas
Ao de luz sobre
molculas
l l
BIOLGICAS: ao
de bactrias

Como preservar?
R
Resguardar
d as condies
di
da
d amostra
t
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Resguardar as condies da
amostragem
Evitar contaminao contato

da pele
Evitar poeira
Cuidar da embalagem
Cuidar da estocagem
Diminuir quantidade de oxignio

para amostras oxidveis
(Trabalhar a vcuo ou atm de
nitrognio)
Isolar a espcie analisada de

contaminantes
Reduzir a cintica qumica (diminuir T)
Reduzir luz para substncias

fotossensveis (evita tambm
crescimento de alguns microorganismos) (uso de frascos mbar)
Diminuir grau de umidade ,

evitando presena de gua em
substncias higroscpicas ou
ao de crescimento de microorganismos
i
((usar d
dessecador,
d
desumidificador)

Validao da amostragem possvel?

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SIM
SIM....
Variveis:
1.Mtodo analtico para slidos...
Problema=pesagem
p
g
2.Amostragem
Problema=variabilidade do
tamanho de partculas
Quando ser aplicvel?
Quando:
Tomada de amostra a ser
levada ao lab (maior
dificuldade)
d
cu dade)
Tomada de amostra a ser
analisada .....Amostras de 1
L petrleo representativa de
milhes de barris/dia
.......1L de
gua de estao de
tratamento
amostradores e
analisadores
contnuos

Regras
g
vlidas para
p
esta validao
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Aplicar estimativas de varincia e desvio padro

Usar lotes que permitam a representatividade
Regras de rejeio para quantidades mxima de valores
5-10 tomadas de amostra
Classificar a amostragem em categorias:

1 - RENOVVEIS
2 - NO RENOVVEIS
3 - SAZONAIS
4 - ASSEGURADAS
5 - COMPLEXAS

Categorias de Amostragem
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CATEGORIA
1
2
3
4
5
ESPECIFICAO
DA AMOSTRA
RENOVVEIS
NO RENOVVEIS
SAZONAIS
ASSEGURADAS
COMPLEXAS
CARACTERSTICAS
NO FICAM MARCAS DA COLETA;
H
RENOVAO
Ex. Rios, processos industriais contnuos, fontes

DEIXAM MARCAS DE COLETA
Ex. Solo, madeira, amostras forenses, processos
descontnuos
VARIAM COM CONDIES CLIMTICAS,
OU OUTRAS VARIVEIS
Ex. Plantas, folhas, frutos, carnes
TEM QUALIFICAES
DETERMINADAS(NORMAS OU HISTRICO)
Ex. lotes de matria prima, produto acabado,
produtos de prateleira
H DIFICULDADE NA IDENTIFICAO
Ex. amostras com alterao de cor/odor/
sabor; de escala micro

Validando a amostragem
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AMOSTRAS LQUIDAS
AMOSTRAS GASOSAS
RESPEITAR:
Representatividade
Ex.Lenol
E L
l ffretico;em
ti
rios
i fluxo , central, lateral, caminhos
preferenciais
AMOSTRAS SLIDAS
RESPEITAR:
Garantir boa coleta
Evitar perdas (vazamentos ou
evaporao);
calibrar equipamentos de medida
de vazo;
amostrar com mesma velocidade
de fluxo
RESPEITAR:
RESPEITAR
Representatividade
Ex.Processos
ind striais(batelada o
industriais(batelada
ou
contnuo)
Produtos dispersados em solo
(n pontos em funo da rea e
(n
profundidade( 30-60 cm )

Erros de amostragem
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Considerando SLIDOS HETEROGNEOS

a preciso ser:
ST =(S2S + S2A)1/2
Onde
S2A estimativa da varincia da anlise
S2S estimativa da varincia da amostragem
ST estimativa do desvio padro
Exemplo
Erro de
amostragem
suposto=3%
Erro analtico=1%
ST =(3
( 2 + 12)1/2
ST =3,16%

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Validao em Anlise Qumicas
Validao do Mtodo:
Processo que prova que
um mtodo
analtico aceitvel para os propsitos a
que se destina.

Figuras de Mrito da Validao:

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1 - Especificidade: capacidade do mtodo de distinguir o analito de

todo o resto que se encontra na amostra; adiciona-se deliberadamente
impurezas para testar a especificidade;
2 - Linearidade: mede o quanto o grfico da resposta analtica contra

a concentrao (ou quantidade do analito) segue uma linha reta
(quadrado do coeficiente de correlao acima de 0,995);
3 - Exatido: a proximidade do valor verdadeiro; pode ser verificada

por anlise de um material de referncia ou mais mtodos analticos
diferentes que so comparados dentro da preciso de cada um; por
anlise de um branco que propositadamente contaminado com
quantidade de analito conhecida; por adies de padro de analito
amostra.
4 - Preciso: a reprodutibilidade de um resultado.
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Preciso Intrnseca do Ensaio:

Ensaio uma
ma pessoa analisa vrias
rias
alquotas de um material homogneo no mesmo dia de trabalho.
Cada anlise independente e assim a preciso intrnseca do
ensaio expressa o quo reprodutvel pode ser o mtodo.
mtodo
Preciso Intermediria ou Robustez: diferentes pessoas, em
di diferentes
dias
dif
e em instrumentos
i
dif
diferentes
analisam
li
a mesma
amostra, no mesmo laboratrio (cada anlise pode usar reativos
diferentes, preparados independentemente);
Preciso Interlaboratorial: alquotas da mesma amostra so
analisadas em diferentes dias, com equipamentos diferentes, com
reagentes de cada laboratrio, por diferentes pessoas (medida
mais geral da reprodutibilidade);

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5 - Faixa:Intervalo de Concentraes onde Linearidade,

preciso e Exatido so aceitveis.
Testes Utilizados:
1-Determinao do Limite de Confiana da Mdia
(teste t-Student)
= t. s/ N

Valores do Parmetro t-Student em funo do Nmero

de Determinaes para 95% e 99% de probabilidade
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Graus de
Liberdade(N-1)
(
)
95% de Probabilidade
99% de Probabilidade
12,71
63,66
4,30
9,93
3 18
3,18
5 84
5,84
2,78
4,60
2,57
4,03
2,45
3,71
2,37
3,50
2,31
3,36
2,26
3,25
10
2,23
3,17
11
2,20
3,11
12
2,18
3,06
13
2,16
3,01
infinito
1,96
2,58

Rejeio
j de Resultados ((teste Q))
Caso Q calc>Q tab o valor rejeitado
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Valores Crticos do quociente Q para diferentes Limites de Confiana

Nmero de
Observaes(N)
Q 95%
Q 99%
0,970
0,994
0,829
0,926
0,710
0,821
0 625
0,625
0 740
0,740
0,568
0,680
0 526
0,526
0 634
0,634
0,493
0,598
10
0,466
0,568
Teste F (para comparar conjunto de dados)

Por conveno o maior valor de varincia colocado no numerador.
F= s2 x / s2y
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Quando F exp>F tab, a diferena em varincia(ou preciso) tida como

significante
Valores Crticos de F para o Nvel de 95%
Graus de Liberdade (Numerador)
Graus de
Liberdade
(denomina
d )
dor)
12
20
infinito
9,28
9,12
9,01
8,94
8,74
8,64
8,53
6,56
6,39
6,26
6,16
5,91
5,80
5,63
5,41
5,19
5,05
4,95
4,68
4,56
4,36
4,76
4,53
4,39
4,28
4,00
3,87
3,67
12
3,49
3,26
3,11
3,00
2,69
2,54
2,30
20
3,10
2,87
2,71
2,60
2,28
2,12
1,84
infinito
2 60
2,60
2 37
2,37
2 21
2,21
2 10
2,10
1 75
1,75
1 57
1,57
1 00
1,00
p.40
Critrios para utilizao de mtodos

instrumentais com confiana
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Rastreabilidade
Propriedade de um resultado de medio ou valor de padro estar
relacionado s grandezas estabelecidas (padres internacionais)
atravs de cadeia contnua de comparaes tendo todas as incertezas
estabelecidas
1 - Calibrao do equipamento rastreada com padres apropriados
( t i l de
(material
d referncia=subst.
f i
b t Pura
P
/SI)
/SI);
2 - Mtodo Primrio de Medio (rastrevel diretamente ao SI
incerteza com respeito referncia;
...menor
3 - Utilizando Materiais de Referncia (MR) da subst. Pura (adio de padro);

4-Medio
4
M di de
d Material
M t i l de
d Referncia
R f i Certificado
C tifi d (MRC) ..compara-se os
resultados vs. uma matriz certificada (reduz incerteza);
5 Medio usando procedimento aceito (baseado em norma nacional ou
5-Medio
Internacional).

Aplicaes
p
dos testes T,Q

, eF
M
i
n
i
c
u
r
s
o
s
s
2
0
1
3
1 - Na determinao de cobalto em uma amostra, por mtodo
espectrofotomtrico,
t f t t i
obtiveram-se
bti
as seguintes
i t
elemento: 21,44;21,42;21.36;21,39;21,7;22,9.
porcentagens
t
d
do
Verifique se haver rejeio de resultados para um nvel de 95% de

confiana e, aps calcular o desvio padro, apresente o intervalo onde
deve estar a mdia da populao com um grau de confiana de 95%.
2 - Ao avaliar a qualidade de um novo laboratrio de anlises, foram
feitas no mesmo 6 determinaes de cobalto em Sulfato de Cobalto,
tendo-se encontrado uma mdia de 35,25% m/v de Co com desvio
padro de 0,34%.
O laboratrio de referncia obteve uma mdia de 35,35% de Co com
desvio padro de 0,25%
0 25% em 5 determinaes.
determinaes
H diferena significativa entre os resultados dos laboratrios envolvidos
a um nvel de 95% ?
Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p. 42

Validando na Espectrofotometria UV /Vis

Atenuao do Feixe
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s
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3
Nas interfaces: ar/parede; parede /soluo;

Como resultado de espalhamento por molculas grandes; por
absoro das paredes da clula
p.43
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Fototransduo e processamento
de informaes na retina

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p.46
t t sua habilidade
teste
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Fototransduo e processamento
de informaes na retina
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3
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Espectro Eletromagntico nas

Regies de Visvel e Ultra Violeta

INFLUNCIA DA CONCENTRAO DA SOLUO

A=xbxc
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1
3
IT
Io
soluo 0,001 g L-1
Io
IT
soluo 0,002 g L-1
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s
s
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0
1
3
INFLUNCIA
DA ESPESSURA DA CLULA
A=xbxc
Io
IT
1 cm
Io
IT
5 cm
Espectro de Absoro e Curva de Calibrao

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1
3
02M
0 1 M 0.2
0.1
03M
0.3
04M
0.4
05M
0,5

M
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s
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s
s
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0
1
3
Aplicaes do Mtodo
1 - Determinao
de uma espcie
p
absorvente
2 - Determinao simultnea de ons
Estudo de caso:
1 - Otimizao
e validao
de Mtodo Analtico Volumtrico p
para
Quantificao do Carbonato de Clcio;
2 - Caracterizao e Quantificao de Contaminantes em aguardente de
cana
Diferenciao entre Protocolos e Relatrios

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1
3
Aplicaes da Espectrofotometria
de Visvel e Ultra Violeta
1 - Determinado composto apresentou absortividade molar de

2 17 103 L cm-1 mol-1. Que concentrao do composto ser necessria
2,17.10
para produzir uma soluo em clula de 2,5 cm? %T=36,8.
2 - Uma
U
soluo
l contendo
t d um complexo
l
d tiouria
de
ti i e Bi(III)
apresentou absortividade molar de 9,32.103 L cm-1 mol-1 a 472 nm.
a) Qual a absorbncia de soluo de 6,24 .10-5 mol L-1 do complexo
472 nm em clula
l l de
d 1 cm de
d espessura?
?
b) Qual a %T descrita em (a) ?
c) Qual a concentrao molar do complexo na soluo que tem

absorbncia descrita em (a) quando medida em clula de 3 cm?

3 - Uma alquota de 25 mL de soluo aquosa de quinino foi diluda a 50

mL e encontrou-se
encontrou se a 348 nm uma absorbncia de 0,832,
0 832 quando medida
em clula de 2 cm.
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1
3
Uma segunda alquota de 25 mL foi misturada a 10 mL de soluo

contendo 28 ppm de quinino.
Aps diluio a 50 mL, a soluo apresentou Absorbncia de 1,22, em
clula de 2,00 cm.
Qual a concentrao
de q
quinino na amostra?

4 - Ti e V formam complexos coloridos com gua oxigenada. Solues

separadas
d
d
destes
metais,
i contendo
d 5 mg dos
d
mesmos, foram
f
tratadas
d
com cido perclrico e gua oxigenada e diludas a 100 mL.
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3
Uma terceira
U
t
i soluo
l foi
f i preparada,
d
di
dissolvendo-se
l
d
10 mg de
d uma liga
li
(que contem apenas Ti e V) e tratada de mesma forma que os padres.
As absorbncias das trs solues foram medidas em 410 e 460 nm.
nm
Calcule as %T de Ti e de V na liga.
soluo
A 410 nm
A 460 nm
Ti
0 760
0,760
0 513
0,513
0,185
0,250
Liga
g
0,715
,
0,657
,

REFERNCIAS
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1
3
1-SKOOG,D.A.;Holler,F,J, and Nieman,T.A. Principles of Instrumental Analysis . .5Th Ed.Harcourt. Brace &
Company.USA, 1998.
2-HARRIS,D.C.
,
Anlise Q
Qumica Quantitativa.6
Q
Ed.LTC Ed.Rio de Janeiro,2005.
,
3-BASSET,J.;Denney,R.C.;Jeffery,G.H.;Mendham,J. Vogel-Anlise Inorgnica Qualitativa Ed. Guanabara
II,.Rio de Janeiro 1978.
4.OHLWEILLER,O.A.Fundamentos de Anlise Instrumental.Rio de Janeiro, LTC Ed.,1981.
5-GONALVES,M.L.S.S.MTODOS Instrumentais para Anlise de Solues.3 Ed.FUNDAO CALOUSTE
Gulbenkian,Lisboa,1996.
6-DOQ-CGCRE-008 rev03,fev
,
2010-Orientao
sobre validao
de Mtodos Analticos.INMETRO.
7-Resoluo .Res n 899,29/05/2003Guia para Validao de mtodos analticos e Bioanalticos.ANVISA.
8-PINTO,T.J.;FERRARINI,M.;GATTI,R.M.Proposta para Roteiro Prtico para Validao de Mtodos
Analticos. Farm. e Qum.SP,v.36.p26-36,2003.
9-Acta Farm.Bonaerense 25(2): 262-6(2006)
10-TRIOLA,M.Introduo Estatstica .TCT,RJ, 2008
11-LEITE,F.Amostragem fora e dentro de Laboratrio, Campinas,Ed Atomo 2005
12-__________Validao em Anlise Quimica .Campinas, Ed Atomo1998
13Levine, DM et alli Estatstica Teoria e Aplicaes.% Ed. RJ LCT 2008

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Anexos
Artigos Cientficos para Atividades em Classe

Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP)
Minicursos 2013
Validao
Dra. Thais Vitria da Silva Reis
Diferenciao entre Protocolos e Relatrios

Fonte: GUIAS RELACIONADOS GARANTIA DE QUALIDADE;Gerncia de Inspeo e Certificao
de Insumos, Medicamentos e Produtos GIMEP;www.anvisa.gov.br
Validao Prospectiva
Os fatores/parmetros crticos que podem afetar a qualidade do produto acabado devem
ser determinados durante a fase de desenvolvimento do produto. Para isso, o processo
produtivo deve ser quebrado em fases, a fim de que cada fase seja avaliada
individualmente. A criticidade desses fatores deve ser determinada atravs do desafio do
pior caso, quando possvel.
A Validao Prospectiva deve ser realizada de acordo com o Protocolo de Validao, que
deve incluir:
(a) descrio do processo;
(b) descrio do experimento;
(c) detalhes do equipamento/instalao a ser usado, juntamente com seu status de
qualificao/calibrao;
(d) variveis a serem monitoradas;
(e) amostras a serem tiradas onde, quando, como e quanto;
(f) caractersticas/atributos de desempenho do produto a serem monitorados,
juntamente com os mtodos de teste;
(g) limites aceitveis;
(h) cronogramas;
(i) responsabilidades do pessoal; e
(j) detalhes sobre os mtodos para registro e avaliao dos resultados, incluindo
anlises estatsticas.
Validao Concorrente
Em certos casos, adequado validar um processo durante sua produo de rotina, por
exemplo, no caso de diferentes concentraes do mesmo produto, tendo sido uma delas
validada anteriormente, e ainda nos casos de diferentes formas de comprimidos ou
processos bem conhecidos.
essencial que os sistemas e equipamentos a serem utilizados durante a validao tenham
sido corretamente qualificados anteriormente.
A documentao necessria a mesma daquela especificada na validao prospectiva
Validao Retrospectiva
A validao retrospectiva baseada na reviso histrica de dados a fim de fornecer
evidncias documentadas de que o desempenho do processo objeto do estudo seja aquele
esperado. Esse tipo de validao ainda requer a preparao de protocolos, relatrios
contemplando resultados dos dados revisados, concluso e recomendaes.
A validao retrospectiva no o mtodo de escolha para estudos de validao de processo,
Apoio: Caixa Econmica Federal e Sind. dos Qumicos, Qumicos Industriais e Engenheiros Qumicos de So Paulo
Minicursos 2013
e dever ser utilizada apenas em casos excepcionais. A escolha desse tipo de estudo
somente ser aceitvel para processos bem conhecidos, no entanto, inadequada quando
houver ocorrido mudanas recentes na composio do produto, nos procedimentos de
produo ou em equipamentos utilizados.
Os resultados devem ser documentados no Relatrio de Validao. Devem conter, no
mnimo:
(a) uma descrio do processo Ordem de Produo/Embalagem, incluindo detalhes
das etapas crticas;
(b) um sumrio detalhado dos resultados obtidos no controle em processo e no
produto final, incluindo dados fora das especificaes. Quando os dados brutos no
fizerem parte do documento, referenciar suas fontes e mencionar onde podem ser
encontrados;
(c) qualquer trabalho adicional necessrio durante a atividade de validao que no
conste no protocolo ou qualquer desvio observado deve ser formalmente contemplado
no relatrio com sua respectiva explicao;
(d) uma reviso e comparao com os resultados esperados;
(e) uma aceitao/rejeio do trabalho por parte da equipe/pessoa designada como
responsvel pela validao depois de qualquer ao corretiva ou retrabalho.
Minicursos 2013
e dever ser utilizada apenas em casos excepcionais. A escolha desse tipo de estudo
somente ser aceitvel para processos bem conhecidos, no entanto, inadequada quando
houver ocorrido mudanas recentes na composio do produto, nos procedimentos de
produo ou em equipamentos utilizados.
Os resultados devem ser documentados no Relatrio de Validao. Devem conter, no
mnimo:
(a) uma descrio do processo Ordem de Produo/Embalagem, incluindo detalhes
das etapas crticas;
(b) um sumrio detalhado dos resultados obtidos no controle em processo e no
produto final, incluindo dados fora das especificaes. Quando os dados brutos no
fizerem parte do documento, referenciar suas fontes e mencionar onde podem ser
encontrados;
(c) qualquer trabalho adicional necessrio durante a atividade de validao que no
conste no protocolo ou qualquer desvio observado deve ser formalmente contemplado
no relatrio com sua respectiva explicao;
(d) uma reviso e comparao com os resultados esperados;
(e) uma aceitao/rejeio do trabalho por parte da equipe/pessoa designada como
responsvel pela validao depois de qualquer ao corretiva ou retrabalho.
Minicursos 2013
Nota Tcnica
Quim. Nova, Vol. 34, No. 2, 320-324, 2011

CARACTERIZAO E QUANTIFICAO DE CONTAMINANTES EM AGUARDENTES DE CANA
Lidiany Mendona Zacaroni, Maria das Graas Cardoso,* Adelir Aparecida Saczk, Wilder D. Santiago e Jeancarlo
Pereira dos Anjos
Departamento de Qumica, Universidade Federal de Lavras, CP 3037, 37200-000 Lavras - MG, Brasil
Jos Masson e Felipe C. Duarte
Departamento de Cincia dos Alimentos, Universidade Federal de Lavras, CP 3037, 37200-000 Lavras - MG, Brasil
David Lee Nelson
Departamento de Alimentos, Faculdade de Farmcia, Universidade Federal de Minas Gerais, 31270-901 Belo Horizonte - MG, Brasil
Recebido em 26/1/10; aceito em 27/8/10; publicado na web em 24/11/10
ANALYSIS OF ORGANIC CONTAMINANTS AND COPPER IN CACHAA. The objective of the present study was the evaluation
of the presence of organic and inorganic contaminants in samples of aged cachaa from the South of the state of Minas Gerais. Furfural,
methanol and copper were determined by colorimetric reactions, while the analyses of ethyl carbamate and acrolein were performed by GC/
MS and HPLC, respectively. High levels of furfural and copper were obtained. All samples showed concentrations below the established
by legislation for the ethyl carbamate, and for acrolein, only one sample showed higher levels. Methanol was not detected in the samples.
Keywords: beverage; contaminants; wood.
INTRODUO
De acordo com o Decreto n 4851 de 2003 e com a Instruo
Normativa n 13 de 30/6/ 2005, aguardente de cana a bebida com
graduao alcolica de 38 a 54% v/v 20 C, obtida do destilado
alcolico simples de cana-de-acar ou pela destilao do mosto
fermentado do caldo de cana-de-acar, podendo ser adicionada de
acares at 6 g/L, expressas em sacarose. A cachaa, entretanto, foi
definida como sendo a denominao tpica e exclusiva da aguardente
de cana produzida no Brasil, com graduao alcolica de 38 a 48%
v/v 20 C, obtida pala destilao do mosto fermentado do caldo de
cana-de-acar com caractersticas sensoriais peculiares, podendo ser
adicionada de acares at 6 g/L, expressos em sacarose.1,2
As bebidas alcolicas fermento-destiladas distinguem-se uma das
outras pela presena de componentes secundrios que iro formar um
buqu caracterstico de cada bebida. Esses componentes secundrios se formam juntamente com o lcool etlico durante o processo
de fermentao do mosto, mudam de carter e proporo durante
a destilao, havendo uma posterior maturao do produto.3,4 No
entanto, alguns compostos so indesejveis bebida devido, principalmente, as suas propriedades txicas, cancergenas e caractersticas
que depreciam a qualidade do produto final.
Devido complexidade da composio qumica da cachaa esta
dividida em frao orgnica e inorgnica. A primeira constituda
basicamente de alcois, aldedos, steres, cidos carboxlicos, cetonas, carbamato de etila e compostos sulfurados. Dependendo do
teor e dos compostos presentes, a bebida pode ser classificada como
desejvel ou no, em relao aceitao sensorial, ou em txica e
no txica, em relao sade. A frao inorgnica constituda
principalmente por ons metlicos, tais como alumnio, cdmio,
clcio, chumbo, cobalto, cobre, cromo, ferro, etc.5
A legislao brasileira, Decreto n 2314 de 04/09/1997 estabelece
o limite mximo de cobre em 5 mg/L de produto.6 No entanto, no
*e-mail: mcardoso@dqi.ufla.br
mercado internacional o limite mximo estabelecido de 2 mg/L tornando-se, assim, um entrave para as exportaes da bebida.7 Embora
nesta concentrao o cobre no possa ser considerado como txico, a
sua presena contribui para ressaltar o sabor cido na bebida, alm de
facilitar os processos oxidativos devido presena de ons cobre (II).
O metanol um lcool indesejvel na bebida, devido a sua alta
toxidez. Ele origina-se da degradao da pectina, um polissacardeo
presente na cana-de-acar, durante o processo de fermentao.4,8
O furfural, aldedo cuja presena indesejvel na bebida, resulta
da decomposio qumica de carboidratos. Pode ser formado em
diferentes etapas do processo de produo da cachaa, tais como
pela pirogenizao da matria orgnica depositada no fundo dos
alambiques ou mesmo durante o envelhecimento da bebida por meio
da ao de cidos sobre pentoses e seus polmeros (hemiceluloses),
que podem estar presentes nos recipientes de madeira utilizados no
armazenamento da bebida.9-13
A acrolena, tambm conhecida como 2-propenal, uma substncia carcinognica oriunda do processo de fermentao, podendo
ser formada pela desidratao do glicerol ou por contaminao bacteriana.8,14 uma substncia extremamente txica por todas as vias
de administrao e tem mostrado caractersticas mutagnicas, alm
de provocar irritao no trato respiratrio de animais e humanos.15,16
Os vapores de acrolena so lacrimognicos, muito irritantes aos
olhos, nariz e garganta, podendo associar sua presena ao aroma de
pimenta das bebidas.17
O carbamato de etila, substncia altamente carcinognica,
um contaminante orgnico, cuja quantificao em aguardentes de
cana passou a ser exigida a partir de junho de 2010. encontrado
naturalmente em baixas concentraes, em diferentes bebidas alcolicas e em alguns alimentos fermentados. Sua origem e formao
ainda no esto bem elucidadas. Alguns autores acreditam que
originam da degradao de aminocidos, outros que venham de
reaes entre o etanol e o cido ciandrico catalisado pelo cobre
ou pela auto-oxidao de compostos insaturados induzidos pela
radiao ultravioleta.18-20
Apoio: Caixa Econmica Federal e Sindicato dos Qumicos, Qumicos Industriais e Engenheiros Qumicos de So Paulo

Vol. 34, No. 2
Minicursos 2013
Caracterizao e quantificao de contaminantes em aguardentes de cana
O presente trabalho objetivou avaliar a presena de contaminantes

orgnicos (furfural, metanol, carbamato de etila e acrolena) e inorgnicos (cobre) em aguardentes de cana da regio Sul de Minas Gerais.
PARTE EXPERIMENTAL
Doze amostras de aguardentes de cana foram coletadas na regio
sul do Estado de Minas Gerais. As anlises fsico-qumicas (grau
alcolico, metanol, furfural e cobre) foram realizadas segundo parmetros estabelecidos pela Instruo Normativa n 13, de 29/06/2005
do Ministrio Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA).
Reagentes
Os reagentes empregados para anlise foram permanganato de
potssio, cido cromotrpico, 2,4-dinitrofenil-hidrazina 99% (2,4DNPH), bissulfito de sdio, cido actico, anilina, ambos da Vetec;
carbamato de etila 97% e acrolena 99% da Acros Organics; metanol
e acetonitrila grau HPLC (J. T. Baker); gua ultrapura, cido sulfrico
e etanol absoluto da Merck.
Carbamato de etila
O mtodo empregado para a quantificao do carbamato de etila
foi o CG/EM no modo de monitoramento de ons seletivos (SIM).
Para as anlises, utilizou-se um cromatgrafo gasoso (GC-17A) acoplado a um espectrmetro de massas (QP5050A), ambos Shimadzu.
O monitoramento de ons seletivos foi empregado e os ons selecionados foram 62, 74 e 89 m/z. A coluna utilizada para a separao do
carbamato de etila foi DB Wax 60 m x 0,25 mm x 0,50 m.
Para as anlises, empregou-se o modo split (1:10), com a temperatura do injetor e do detector 220 C. O hlio foi utilizado como o
gs de arraste em um fluxo de 1,5 mL/min e o volume de injeo da
amostra foi de 2 L. A temperatura da coluna foi programada como
segue: temperatura inicial de 90 C por 2 min, seguida de uma rampa
de aquecimento de 10 C/min at 150 C e a partir desta temperatura,
uma rampa de aquecimento de 40 C/min at 220 C.
Para a quantificao utilizou-se a tcnica de padronizao externa.
A curva analtica foi preparada por meio da diluio de uma soluo
estoque de carbamato de etila na concentrao de 10 mg/L, cuja
variao linear foi de 0,05 a 0,75 mg/L. As amostras e as solues
da curva analtica foram analisadas em triplicata, sendo as primeiras
previamente filtradas em membrana GV (durapore) em pvdf (0,22
m x 12 mm).
321
com etanol absoluto. A pureza foi confirmada por determinao da

temperatura de fuso e anlise elementar (C, H e N) e por HPLC.
A derivao das amostras foi realizada pela adio de 4 mL da
amostra e 50 L de HClO4 consecutivamente para 1 mL da soluo
0,4% de 2,4-DNPH em acetonitrila. A soluo resultante foi estocada
temperatura ambiente por aproximadamente 45 min, seguida pela
filtragem em membranas de polietileno 0,45 m (Milipore).
Um HPLC Shimadzu, equipado com duas bombas de alta presso
modelo LC-20AD, detector com arranjo de diodos (DAD) modelo
SPD-M20A, injetor automtico modelo SIL-M20A e forno modelo
CTO-20AC foram empregados para anlises. As separaes foram
realizadas empregando-se uma coluna empacotada Shim-pack VPODS (250 x 4,6 mm), com partculas esfricas de 5 m, conectada
a uma pr-coluna Shim-pack VP-ODS (5,0 cm x 4,0 mm, 5 m
- Shimadzu). A fase mvel utilizada foi cido actico 2% em gua
(Solvente A) e metanol (Solvente B). As amostras foram eludas de
acordo com o seguinte gradiente: 0 a 3 min(70% B); 3 a 5 min(7085% B); 5 a 7 min(85-90% B); 7 a 9 min (90-70% B); 9 a 12 min
(70% B). A absorbncia foi medida a 365 nm, no fluxo de 1,0 mL
min-1, temperatura de 40 C e volume de injeo de 20 L.
A converso quantitativa do aldedo nas bebidas destiladas em
2,4-dinitrofenil-hidrazona foi garantida pelo excesso de 2,4-DNPH
empregada. A quantificao foi realizada utilizando-se o mtodo de
padronizao externa. A curva analtica foi obtida por sucessivas
diluies da soluo-estoque (1000 mg/L em acetonitrila) em soluo
de lcool 50%, com uma faixa linear de 0-20 mg/L. Essa foi obtida
por regresso linear, plotando-se a rea do pico versus concentrao.
Limites de deteco (LD) e de quantificao(LQ)
Os limites de deteco e quantificao dos mtodos foram estimados utilizando-se os parmetros da curva analtica, conforme
equaes abaixo:

LD = 3,3 x s/S
(1)
LQ = 10 x s/S
(2)
onde, s a estimativa do desvio-padro da resposta, que pode ser

a estimativa do desvio padro do branco, da equao da linha de
regresso ou do coeficiente linear da equao e S a inclinao ou
coeficiente angular da curva analtica.21,22
RESULTADOS E DISCUSSO
Acrolena
Teor alcolico, metanol e furfural
A metodologia empregada para a quantificao de acrolena

baseou-se na metodologia proposta por Nascimento e colaboradores,17 que consiste na derivao da amostra para posterior anlise
por cromatografia lquida de alta eficincia. Os reagentes empregados para anlise foram padro de acrolena, metanol e acetonitrila
(grau HPLC), gua ultrapura, cido sulfrico, etanol absoluto e
2,4-dinitrofenil-hidrazina (2,4-DNPH), previamente purificado por
trs sucessivas recristalizaes com metanol.
Para a preparao da 2,4-dinitrofenil-hidrazona de acrolena,
H2SO4 concentrado (2 mL) foi adicionado a 0,4 g de 2,4-DNPH, seguido da adio de 3 mL de gua destilada, gota gota, at a solubilizao
completa. Imediatamente 10 mL de etanol 95% foram adicionados.
Em outro recipiente, dissolveu-se 0,1 g de acrolena em 20 mL de
etanol. Em seguida, adicionou-se a soluo preparada anteriormente,
deixando a mistura em repouso aproximadamente por 15 min, at a
formao de um precipitado. Filtrou-se e recristalizou-se duas vezes
Os resultados obtidos por meio das anlises fsico-qumicas

esto representados na Figura 1. Pode-se observar que, das amostras analisadas, 25% se apresentaram fora dos padres de qualidade
exigidos quanto ao teor alcolico, 16,67% quanto ao teor de cobre e
83,33% quanto presena de furfural. O metanol no foi detectado
nas amostras analisadas.
O teor alcolico elevado observado na amostra 7 pode ser explicado pela utilizao da bebida, na fabricao de blends, misturando-a
com outras cachaas mais fracas. Quanto aos teores alcolicos
inferiores ao permitido na legislao, para as amostras 10 e 11,
podem ser relacionados s condies de armazenamento da bebida,
tais como umidade, temperatura e porosidade do barril ou ao corte
incorreto durante a etapa de destilao. Pesquisas de Maia e Campelo
mostraram que as perdas de etanol podem ser reduzidas durante o
envelhecimento, mantendo-se a temperatura da adega abaixo de 20
C e a umidade relativa do ar em torno de 85%.23 Entretanto, mesmo

322
Minicursos 2013
Zacaroni et al.
Figura 1. Teores de lcool etlico, furfural e cobre nas amostras de aguardente de cana
Quim. Nova
processo de envelhecimento na formao de furfural. Para esses

autores, a presena do contaminante est relacionada ao processo
de destilao. Resultados semelhantes foram observados em sidras
por Madrera e colaboradores,11 que constataram aumento de furfural
apenas nas amostras que passaram por dupla destilao.
Barcelos e colaboradores,20 analisando cachaas produzidas a
partir de cana no queimada, proveniente de trs regies do Estado de
Minas Gerais (Zona da Mata, sul de Minas e Vale do Jequitinhonha),
verificaram concentraes de furfural dentro do limite estabelecido
pelo MAPA. Os autores atriburam a formao do furfural a falhas
durante o processo fermentativo. Masson e colaboradores13 quantificaram furfural em amostras de cachaas produzidas com cana queimada
e no queimada e verificaram que a queima do palhio da cana-deacar proporcionou um aumento significativo na concentrao de
furfural nas amostras analisadas. Segundo os autores, durante a queima, a exsudao do acar torna-se um excelente aderente ao colmo,
de resduos da combusto, de partculas slidas de solo, minerais e
outros. No processamento da cana, esses resduos so transferidos
para o caldo e, em suspenso, vo para as dornas e posteriormente
para o alambique, cuja matria orgnica transformada em furfural,
chegando ao produto final.
Um problema comum que preocupa os produtores de aguardente
de cana do Estado de Minas Gerais o excesso de cobre nas bebidas.
De acordo com a Figura 1, 16,67% das amostras analisadas apresentaram nveis superiores a 5 mg/L. A presena desse metal se deve principalmente dissoluo do carbonato bsico de cobre [Cu2(OH)2CO3]
presente nas paredes internas do alambique, pelos vapores cidos da
bebida. A contaminao pode ser evitada fazendo-se uma cuidadosa
higienizao dos alambiques nas safras e entressafras, utilizando-se
gua e limo na primeira destilao8 ou filtros com adsorventes, como
o carvo ativado e as resinas de troca inica. Entretanto, recomendase um cuidado especial na utilizao desses ltimos, pois, alguns
materiais retiram alm do cobre substncias importantes para o
sabor e aroma da bebida, descaracterizando-a.25-28 Quanto relao
entre o envelhecimento da bebida e o teor de cobre, alguns autores
apontam o processo de envelhecimento como uma alternativa para a
reduo do metal na bebida. Cavalheiro e colaboradores29 mostraram
reduo significativa quanto aos teores de cobre em 7 amostras de
cachaa, de diferentes procedncias, antes e aps o armazenamento
em tonis de carvalho com capacidade de 5 L, por um perodo de 6
meses. Resultados similares foram obtidos por Miranda et al.,24 que
atriburam a reduo do cobre a um possvel processo de absoro
ou de adsoro promovido pela madeira, durante o processo de envelhecimento da bebida.
Carbamato de etila (CE)
assim, pode ocorrer perda de 1% ao ano.

As concentraes obtidas nas amostras analisadas quanto ao teor
de furfural variaram de 4,28 a 39,78 mg/100 mL de lcool anidro.
Pelos resultados apresentados na Figura 1, pode-se observar que
a maioria das amostras analisadas se apresenta fora dos padres
de qualidade exigidos, exibindo valores acima do permitido pela
legislao brasileira (5 mg/100 mL de lcool anidro), exceto as
amostras 4 e 8. Este composto um aldedo indesejvel na bebida,
por ser considerado nocivo sade. A contaminao da bebida pode
ocorrer por meio da degradao de pentoses durante as etapas de
fermentao, destilao e envelhecimento da bebida. Outras possveis
formas de contaminao da bebida so por meio da requeima dos
barris de madeira, no processo de envelhecimento e pela queima da
cana durante a colheita.9-13
Estudos realizados por Miranda e colaboradores,24 em cachaas
armazenadas em tonis de madeira, submetidos ao tratamento de
irradiao por perodo de 390 dias, no mostraram influncia do
A quantificao do carbamato de etila foi feita utilizando-se a

tcnica de padronizao externa e as curvas analticas foram obtidas
por regresso linear (y = 975050x + 2072,75). O coeficiente de correlao obtido para a curva foi de 0,9997 e os limites de deteco
(LD) e quantificao (LQ) encontrados foram de 15,7 e 52,5 g/L,
respectivamente. De acordo com os resultados obtidos, todas as
amostras apresentaram concentraes abaixo do limite estabelecido
pela legislao brasileira (150 g/L), sendo a maior concentrao encontrada de 119 g/L. Esses resultados se equiparam ao de Barcelos,
que tambm no encontrou nveis de carbamato de etila nas cachaas
do Sul de Minas Gerais.20
Diversos autores relatam a presena elevada desse contaminante
em aguardentes de cana. Andrade Sobrinho et al.,30 investigando a
presena de CE em amostras de cachaas, tiquira, grapa e usque,
relataram que elas apresentaram teores mdios de 770, 2400, 45 e
140 g/L, respectivamente, observando que as amostras de cachaa

Vol. 34, No. 2
Minicursos 2013
Caracterizao e quantificao de contaminantes em aguardentes de cana
e tiquira apresentaram maiores concentraes para esse composto

quando comparadas quelas obtidas para as demais bebidas, alm
de estarem com a concentrao de CE acima do limite exigido pela
legislao.
Barcelos e colaboradores,20 avaliando amostras de aguardente
de cana de trs diferentes regies do Estado de Minas Gerais (Sul de
Minas, Zona da Mata e Vale do Jequitinhonha), obtiveram valores que
variaram de no detectado a 700 g/L, encontrando um teor mdio de
243 g/L. Dentre as regies estudadas, apenas as amostras do Vale do
Jequitinhonha apresentaram nveis superiores ao estabelecido pelo
MAPA para o contaminante em estudo.
Estudos de Labanca et al.,31 com 71 amostras de aguardente de
cana provenientes de diferentes regies do Estado de Minas Gerais,
demonstraram teores mdios de 893 g/L. Segundo os autores, 35%
das amostras apresentaram teores de carbamato de etila entre 500 e
1000 g/L e 12% continham teores 10 vezes maiores que o estabelecido pela legislao.
Para alguns autores, a realizao da destilao da cachaa em
alambiques de cobre poderia ser uma agravante na formao do carbamato de etila, j que h a possibilidade de esse metal atuar como
catalisador nas reaes de formao desse contaminante.19 Porm,
no se observou correlao entre o material do alambique e teores
elevados de carbamato de etila nas amostras analisadas (Figura 2).
Estes resultados corroboram com estudos realizados recentemente,
como os de Barcelos et al. e Masson.20,32
Figura 2. Comparao entre os teores de cobre e carbamato de etila nas

amostras analisadas do Sul de Minas Gerais (CE carbamato de etila e
Cu cobre)
Acredita-se que a formao do CE durante o perodo de armazenamento da cachaa ocorra de maneira gradativa, por meio da reao
entre o etanol e a ureia formada pela degradao de precursores
nitrogenados, intrnsecos do processo de produo da bebida, sendo
os principais deles os aminocidos arginina, ornitina e citrulina.
Alm desses, outros compostos nitrogenados tm sido estudados
como possveis precursores para a formao do carbamato de etila
antes e aps o processo de destilao, como o caso do fosfato de
carbamila e do on cianeto.33,34
Diversos trabalhos relatam a influncia positiva do tempo de
estocagem e da temperatura na formao de carbamato de etila em
vinhos e cachaas.35-38 Nesse processo, a provvel via de formao
do carbamato de etila seria por meio da reao do etanol com ureia
e com citrulina.
323
correspondente. Os limites de deteco e quantificao obtidos foram

de 0,02758 e 0,09194 mg/100 mL de lcool anidro, respectivamente.
As concentraes de acrolena presentes nas amostras de aguardente de cana analisadas esto mostradas na Figura 3.
Figura 3. Concentraes de acrolena nas amostras de aguardente de cana

analisadas do Sul de Minas Gerais
Pela anlise dos resultados, pode-se observar valores para teores

de acrolena de no detectado a 7,45 mg/100 mL de lcool anidro.
Dentre as amostras analisadas, somente a amostra 9 se apresentou fora
dos padres exigidos pela legislao brasileira, estando sua concentrao acima do limite estabelecido de 5 mg/100 mL de lcool anidro.
Na literatura so encontrados poucos relatos sobre a quantificao
de acrolena em aguardentes de cana. Nascimento e colaboradores,
analisando 56 amostras de aguardentes de cana oriundas de vrios
estados do Brasil, obtiveram concentraes que variaram de no
detectada a 0,660 mg/100 mL de lcool anidro.17 Posteriormente,
Nascimento et al., avaliando a influncia da destilao de aguardentes de cana em alambiques confeccionados com cobre e ao inox,
quanto presena de alcois, steres, cidos, aldedos e cetonas, no
detectaram a presena de acrolena nas 3 amostras analisadas, provenientes de cada alambique.39 Em 2006, Braga avaliou a presena de
acrolena em aguardentes de cana produzidas com trs linhagens de
leveduras com temperatura de fermentao controlada (20 e 32 C)
e encontrou nveis inferiores a 0,7 mg/100 mL de lcool anidro para
o contaminante.40 Esses valores relatados na literatura mostram-se
bem inferiores aos resultados obtidos para a maioria das amostras
analisadas no presente trabalho.
Para Azevedo e colaboradores, esse contaminante pode ser
formado durante o processo de fermentao da bebida, por meio da
degradao do glicerol, podendo tambm estar associado presena
de bactrias termofermentativas (Bacillus amaracrylus e Lactobacillus colinoides).41
CONCLUSO
Em termos fsico-qumicos, 25% das amostras analisadas apresentaram-se fora dos padres de qualidade exigidos quanto ao teor alcolico,
16,67% quanto ao teor de cobre e 83,33% quanto presena de furfural.
Todas as amostras apresentaram concentrao abaixo do estabelecido
pela Legislao (150,00 g/L) para o carbamato de etila e, para a acrolena, apenas uma amostra apresentou nveis superiores a 5,00 mg/100 mL
de lcool anidro. O metanol no foi detectado nas amostras analisadas.
Acrolena
AGRADECIMENTOS
A curva analtica foi obtida por regresso linear (y = 133686,58x
2471,76) e o coeficiente de correlao de 0,9999, sendo y a rea
do pico obtida por meio das anlises de acrolena e x a concentrao
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfica e Tecnolgica (CNPq), Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de

324
Minicursos 2013
Zacaroni et al.
Minas Gerais (FAPEMIG), pela bolsa concedida e apoio financeiro,

aos produtores pelo fornecimento de amostras, ao Departamento de
Qumica da UFLA e ao Departamento de Engenharia de Alimentos
da Universidade Federal de Viosa pelo suporte nas anlises.
REFERNCIAS
1. Brasil, Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento; Decreto n
4851 de 02/11/ 2003, Dirio Oficial da Unio, Braslia, 03/10/2003.
2. Brasil, Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento; Instruo
normativa n 13 de 29/6/ 2005, Dirio Oficial da Unio, Braslia,
30/6/2005, Seo 1.
3. Almeida, M. E. W.; Barreto, H. H. C.; Revista do Instituto Adolf Lutz
1971, 31, 117.
4. Pereira, N. E.; Cardoso, M. G.; Azevedo, S. M.; Morais, A. R.;
Fernandes, W.; Aguiar, P. M.; Cincia e Agrotecnologia 2003, 27, 1068.
5. Siebalde, H. G. L.; Canuto, M. H.; Lima, G. M. de; Silva, J. B. B.;
Informe agropecurio 2002, 23, 59.
6. Brasil, Leis, decretos, etc.; Decreto n 2.314 de 04/9/1997, Dirio Oficial
da Unio, Braslia, 05/9/1997.
7. Azevedo, S. M.; Cincia e Agrotecnologia 2003, 27, 618.
8. Cardoso, M. G.; Produo de aguardente de cana, 2a ed., UFLA: Lavras,
2006.
9. Moreno, M. V. G.; Barroso, C. G.; J. Agric. Food Chem. 2002, 50, 7556.
10. Ledauphin, J.; Guichard, H.; Saint-Clair, J. F.; Picoche, B.; Barillier, D.;
J. Agric. Food Chem. 2003, 51, 433.
11. Madrera, R. R.; Gomis, D. B.; Alonso, J. J. M.; J. Agric. Food Chem.
2003, 51, 7969.
12. Risner, C. H.; Kiser, M. J.; Dube, M. F.; J. Food Sci. 2006, 71, 179.
13. Masson, J.; Cardoso, M. G.; Vilela, F. J.; Pimentel, F. A.; Morais, A. R.;
Anjos, J. P.; Cincia e Agrotecnologia 2007, 31, 1805.
14. Sauvageot, N.; Gouffi, K.; Laplace, J. M.; Auffray, Y.; International
Journal of Food Microbiology 2000, 55, 167.
15. Nouguer, T.; Marty, J. L.; Enzyme Microb. Technol. 1995, 17, 453.
16. Fleet, G. H.; Food Science and Technology: LWT 2003, 86, 11.
17. Nascimento, R. F.; Marques, J. C.; Lima Neto, B. S.; Keukeleire, D.;
Franco, D. W.; J. Chromatogr., A 1997, 782, 13.
18. Mackenzie, W. M.; Clyne, A. H.; Macdonald, L. S.; Journal of the Institute of Brewing 1990, 96, 223.
19. Aresta, M.; Boscolo, M.; Franco, D. W.; J. Agric. Food Chem. 2001, 49,
2819.
20. Barcelos, L. V. F.; Cardoso, M. G.; Vilela, F. J.; Anjos, J. P.; Quim. Nova
2007, 30, 1009.
Quim. Nova
21. Snyder, L. R.; Kirkland, J. J.; Glajch, J. L.; Practical HPLC method
development, 2nd ed., Wiley: New York, 1997.
22. Harris, D. C.; Anlise qumica quantitativa, 7a ed., LTC: Rio de Janeiro,
2008.
23. Maia, A. B. R. A.; Campelo, E. A. P.; Sebrae/MG/Sindbebidas, Belo
Horizonte, 2006.
24. Miranda, M. B.; Hori, J.; Alcarde, A. R.; Cincia e Tecnologia de
Alimentos 2006, 26, 772.
25. Neves, E. A.; Oliveira, A.; Fernandes, A. P.; Nbrega, J. A.; Food Chem.
2007, 101, 33.
26. Canto, F. O.; Dissertao de Mestrado, Universidade Federal de
Lavras, Brasil, 2006.
27. Lima, A. J. B.; Cardoso, M. G.; Guerreiro, M. C.; Pimentel, F. A.; Quim.
Nova 2006, 29, 247.
28. Cantanhede, L. B.; Lima, J. B.; Lopes, G. S.; Farias, R. F.; Bezerra, C.
W. B.; Cincia e Tecnologia de Alimentos 2005, 25, 500.
29. Cavalheiro, S. F. L.; Andrade-Sobrinho, L. G.; Cardello, H. M. A. B.; B.
CEPPA 2003, 21, 99.
30. Andrade-Sobrinho, L. G.; Boscolo, M.; Lima-Neto, B. S.; Franco, D.
W.; Quim. Nova 2002, 25, 1074.
31. Labanca, R. A.; Glria, M. B. A.; Afonso, R. J. C. F.; Quim. Nova 2008,
31, 1860.
32. Masson, J.; Tese de Doutorado, Universidade Federal de Lavras, Brasil,
2009.
33. Cook, R.; Mccaig, N.; Mcmillan, J. M. B.; Lumsden, W. B.; Journal of
the Institute of Brewing 1990, 96, 233.
34. Lawrence, J. F.; Page, B. D.; Conacher, H. B. S.; Advice Environment
Science Technology 1990, 23, 457.
35. Stevens, D. F.; Ough, C. S.; American Journal Enology and Viticulture
1993, 44, 309.
36. Hasnip, S.; Caputi, A.; Crews, C.; Brereton, P.; Food Addit. Contam.,
Part A 2004, 21, 1155.
37. Andrade Sobrinho, L. G.; Cappelini, L. T. D.; Silva, A. A.; Galinaro, C.
A.; Bushviser, S. F.; Cardoso, D. R.; Franco, D. W.; Quim. Nova 2009,
32, 116.
38. Nbrega, I. C. C.; Pereira, J. A. P.; Paiva, J. E.; Lachenmeier, D. W.;
Food Chem. 2009, 117, 693.
39. Nascimento, R. F.; Cardoso, D. R.; Lima-Neto, B. S.; Franco D. W.;
Faria, J. B.; Quim. Nova 1998, 21, 735.
40. Braga, V. S.; Dissertao de Mestrado, Universidade de So Paulo,
Brasil, 2006.
41. Azevdo, L. C.; Reis, M. M.; Silva, L. A.; de Andrade, J. B.; Quim. Nova
2007, 30, 1968.
Revista de Cincias
Farmacuticas
Bsica e Aplicada
Rev. Cinc. Farm. Bsica Apl., v. 28, n.2, p.177-183, 2007

ISSN 1808-4532
Journal of Basic and Applied Pharmaceutical Sciences
Otimizao e validao do mtodo analtico

volumtrico para quantificao do carbonato de clcio
Santana, A.K.M.1,2; Nunes, L.C.C.1,3; Medeiros, F.P.M.1,2; Silva, M.J.2; Lavra, Z.M.M.1,2; Rolim-Neto, P.J.1*
1
Laboratrio de Tecnologia dos Medicamentos, LTM, Faculdade de Farmcia, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, PE, Brasil.
2
Laboratrio Farmacutico do Estado de Pernambuco, LAFEPE, Recife, PE, Brasil.
3
Ncleo de Tecnologia Farmacutica, NTF, Universidade Federal do Piau, UFPI, Teresina, PI, Brasil.
Recebido 14/05/07 / Aceito 05/11/07
in
ic
ur
so
s
20
-IV
A osteoporose definida pela Organizao Mundial de

Sade como uma doena metablica ssea sistmica,
caracterizada por diminuio da massa ssea e
deteriorao da microarquitetura do tecido sseo, com
conseqente aumento da fragilidade do osso e da
suscetibilidade a fraturas. A suplementao de clcio
pode ser realizada utilizando-se diferentes sais de clcio.
O mais recomendado o carbonato de clcio, que
apresenta a maior quantidade de clcio elementar (40%).
Atualmente, quando todos os caminhos levam busca
da qualidade total, torna-se indispensvel conhecer
perfeitamente cada fase de um processo produtivo. Neste
caso, a validao uma ferramenta da qualidade
adequada para garantir a confiabilidade e
reprodutibilidade de um mtodo analtico, pois um ato
documentado que atesta que o mesmo conduz a
resultados esperados. A escolha de uma metodologia
de fundamental importncia para o procedimento do
controle de qualidade da substncia ativa ou da forma
farmacutica. Desta forma, o presente estudo teve por
objetivo desenvolver e validar o mtodo de doseamento
da matria-prima carbonato de clcio por titulometria.
As caractersticas de desempenho investigadas no
processo de validao foram: exatido, preciso, limite
de deteco, limite de quantificao, linearidade e
robustez. Os resultados obtidos demonstraram que o
mtodo robusto, exato e preciso, apresentando
resultados reprodutveis e confiveis.
Palavras-chave: validao; titulometria; carbonato de clcio.
A validao do mtodo analtico um aspecto vital

da garantia da qualidade analtica e se constitui em uma das
exigncias das normas de Boas Prticas de Laboratrio (BPL)
e Boas Prticas de Fabricao (BPF) vigentes (Soares
Sobrinho et al., 2006).
Em um programa de garantia de qualidade bem
estruturado, a validao do mtodo constitui-se em atividade
essencial e inicial, representando um fator crtico na validao
do processo produtivo (Soares Sobrinho et al., 2005).
Segundo a RDC 210 (ANVISA, 2003b), validao
um ato documentado que atesta que qualquer procedimento,
processo, equipamento, material, operao, ou sistema
realmente conduz aos resultados esperados.
A validao tem como objetivo principal assegurar
que determinado procedimento analtico fornea resultados
reprodutveis e confiveis, que sejam adequados aos fins para
os quais tenha sido planejado (Matioli et al., 2004). Para
tanto, deve apresentar especificidade, linearidade, intervalo,
preciso, limite de quantificao, sensibilidade, exatido,
adequados anlise (ANVISA, 2003a).
Uma vez validada uma metodologia analtica, esta
pode ser utilizada como pr-requisito para o estudo de
estabilidade bem como para o prprio controle de qualidade,
alm de ser utilizada na validao de limpeza e processo
(Silva Filho et al., 2006).
A necessidade da validao justificada por ser um
requisito inerente aos modernos processos de registro de
medicamentos, para garantir a qualidade do produto, bem
como para a indstria, do ponto de vista econmico e de
competitividade no mercado (Monteiro et al., 2006).
A validao a ser realizada nesse estudo para
quantificao do carbonato de clcio, este apresenta-se como
suplemento mineral, fonte de clcio, e sua determinao foi
realizada atravs de mtodo volumtrico de complexao.
Os suplementos de clcio so geralmente
encontrados na forma de sais ou combinaes de sais, por
exemplo, carbonato, citrato, lactato e fosfato. Tais
suplementos iro variar no contedo de clcio, com maior
porcentagem para carbonato de clcio (40%). A ingesto de
13
RESUMO
INTRODUO
O desenvolvimento de um mtodo analtico, adaptao
ou implementao de mtodo conhecido, envolve processo de
avaliao que estime sua eficincia na rotina do laboratrio.
Esse processo denominado de validao (Brito et al., 2003).
*Autor Correspondente: Pedro Jos Rolim Neto - Laboratrio de

Tecnologia dos Medicamentos - Departamento de Cincias
Farmacuticas - Faculdade de Farmcia - Universidade Federal de
Pernambuco, UFPE - R. Prof. Arthur de S s/n - Cidade
Universitria - CEP: 50740-521 - Recife - PE, Brasil - Fone / Fax:
(81) 3272-1383 - e-mail: pedro.rolim@pq.cnpq.br
Os minicursos tm o apoio da CEF e do Sinquisp
Quantificao do carbonato de clcio

de EDTA 0,05 M (SV) at colorao azul. Cada mL de EDTA
equivale a 5,004mg de carbonato de clcio.
A adaptao proposta foi avaliar a necessidade de
dessecao da amostra e a quantidade de indicador suficiente
para a verificao do ponto de equivalncia.
A partir do mtodo farmacopico foi realizada uma
anlise comparativa do doseamento, com e sem dessecar a
amostra, com o intuito de aumentar a agilidade do processo
analtico. Em seguida, foram testadas variaes na quantidade
de indicador utilizada, visto que o mesmo dificultava a
visualizao do ponto de viragem.
doses de 1500mg/dia de clcio ajuda na preveno e

tratamento da osteoporose (Bedani & Rossi, 2005).
A titulao por formao de complexos so reaes
que dependem da combinao de ons, diversos dos ons de
hidrognio e hidrxido, que formam um on ou um composto
levemente dissociado. O cido etilenodiaminotetractico
(EDTA), comumente na forma de sal dissdico, um reagente
muito importante para as titulaes com formaes de
complexos e se tornou um dos mais notveis reagentes usados
na titrimetria (Jeffery et al., 1992).
Com isso, o presente estudo teve como objetivo
desenvolver e validar o mtodo analtico de doseamento do
carbonato de clcio matria-prima atravs da titulometria por
complexao, com intuito de otimizar o mtodo
farmacopeico, garantindo que este atenda s exigncias das
aplicaes analticas, preconizadas pela ANVISA.
Validao do mtodo analtico

Parmetros avaliados
13
Conforme a Resoluo RE 899, de 29 de maio de

2003, considerando que este trabalho encontra-se classificado
na Categoria I da Tabela 2, foram avaliados os parmetros
de: robustez, linearidade, limite de quantificao, limite de
deteco, preciso e exatido para validao do mtodo de
doseamento do carbonato de clcio matria-prima (ANVISA,
2003a).
20
MATERIAL E MTODOS
Robustez
A robustez a medida da capacidade que o mtodo

apresenta em se manter inaltervel atravs de pequenas, mas
deliberadas modificaes em seus parmetros e fornecer
indicaes de segurana durante o uso normal.
Para validao do mtodo foram analisadas
variaes nos volumes de hidrxido de sdio e fabricante
do EDTA. Foram realizadas anlises das amostras em seis
replicatas na concentrao de 200mg (100%).
Para o estudo desenvolvido, foram utilizadas

vidrarias certificadas e reagentes preparados conforme
mtodos farmacopeicos, de forma a minimizar possveis
variveis que poderiam influir na confiabilidade do mtodo
empregado.
-IV
MATERIAL
Instrumentos
so
s
Balana analtica (Shimadzu AW 220), estufa

(Imarvil ), esptula, agitador magntico (Quimis), im de
agitao e suporte metlico.
Reagentes
ic
ur
Amostra utilizada
in
EDTA 0,05M (SV) Merck, cido clordrico PA

(Quimex ), hidrxido de sdio (Nuclear ), azul de
hidroxinaftol (Vetec) e gua deionizada.
Carbonato de clcio (Dinalab, teor: 97,44%).

MTODOS
Linearidade
a capacidade de um mtodo analtico de
demonstrar que os resultados obtidos so diretamente
proporcionais concentrao do analito na amostra, dentro
de um intervalo especificado.
O teste foi realizado a partir de trs curvas
autnticas, construdas por cinco concentraes (100, 125,
150, 175 e 250mg) que variaram num intervalo de 50% a
125% da concentrao do teste, ou seja, dentro da faixa de
aceitao do produto.
Desenvolvimento do mtodo analtico

Preciso
O mtodo analtico utilizado foi uma adaptao do
doseamento do carbonato de clcio matria-prima descrito
na USP (United States Pharmacopoeia, 2006). Segundo este,
para o preparo da amostra deve-se pesar 200mg de carbonato
de clcio e dessecar a 200C por quatro horas. Umedecer a
amostra com um pouco de gua purificada e adicionar
lentamente cido clordrico 3 N suficiente para dissolver.
Adicionar 100mL de gua, 15mL de hidrxido de sdio 1 N
e 300mg de azul de hidroxinaftol, titular com uma soluo
O teste de preciso pode avaliar os critrios de

repetitividade, preciso intermediria e de reprodutibilidade.
Neste trabalho, a preciso foi avaliada em dois nveis,
repetitividade e preciso intermediria. A repetitividade
(preciso intra-ensaio) a concordncia entre os resultados
dentro de um curto perodo de tempo com o mesmo analista
e mesma instrumentao. A preciso intermediria (preciso
inter-ensaio) corresponde concordncia entre os resultados

do mesmo laboratrio, porm obtidos em dias diferentes,
com analistas diferentes e/ou equipamentos diferentes.
A repetitividade foi determinada pela anlise de
seis replicatas e a preciso intermediria tambm realizada
em seis replicatas, mas em dois dias por analistas
diferentes.
Tendo em vista que a dessecao utilizada apenas para a

retirada da umidade residual, acreditando no interferir no
procedimento. O estudo comparativo foi realizado em
quadruplicata. A Tabela 1 mostra os resultados obtidos desta
anlise e o tratamento estatstico realizado pelo teste tStudent que analisou se havia diferena entre as mdias
obtidas.
Exatido
Quantidade de indicador
A exatido de um mtodo analtico a proximidade
dos resultados obtidos pelo mtodo em estudo em relao
ao valor terico.
A exatido foi obtida a partir de anlises de amostras
em concentraes conhecidas de carbonato de clcio, em trs
replicatas, equivalentes a 50, 100 e 150% (baixa, mdia e
alta) da concentrao terica analisada (200mg), cobrindo a
faixa especificada do produto que varia de 98,5 a 100,5%.
13
A quantidade de indicador preconizada pela

monografia inscrita na Farmacopia Brasileira (1988), de
300mg, dificultava a visualizao do ponto de viragem, por
isso foi realizado um estudo prvio para se determinar a
quantidade de indicador ideal para se visualizar o ponto de
equivalncia com nitidez. Foram testadas seis replicatas
utilizando quantidade de azul de hidroxinaftol equivalente
a 150, 225 e 300mg. A Tabela 2 mostra o resultado obtido
das anlises pelo mtodo em desenvolvimento. Foi realizado
o tratamento estatstico atravs da ANOVA (Granjeiro
Jnior et al., 2004), que analisou se havia diferena entre
as mdias obtidas a partir das quantidades de indicador em
estudo.
20
Anlise Estatstica
-IV
Utilizou-se ANOVA como ferramenta estatstica

para anlise dos dados obtidos bem como teste t de student,
teste T, coeficiente de variao-CV, desvio padro-desvpad
e mdia (Granjeiro Jnior et al., 2004).
Validao do mtodo de doseamento de carbonato de

clcio - matria-prima
RESULTADOS
Desenvolvimento do mtodo
Parmetros avaliados
so
s
Retirada da dessecao
Com o intuito de agilizar a anlise do teste de

doseamento, bem como de reduzir o custo, verificou-se a
interferncia da etapa de dessecao durante a anlise.
Linearidade
in
ic
ur
Os resultados da linearidade esto expostos na

Tabela 3. Os pontos das trs curvas de linearidade foram
plotados em um nico grfico evidenciado na Figura 1.
Tabela 1 - Comparao entre os resultados obtidos das anlises realizadas com e sem a dessecao e o tratamento
estatstico presumindo varincias diferentes.
Amostras Concentrao (%)
Mdia
DPR
Mtodo
t (cal)
t(0.95 , 3)
(%)
(%)
1
2
3
4
Com
97,57
96,29
97,06
96,80
96,93
0,55
dessecao
1,2641
2,4469
Sem
97,57
97,57
97,06
97,06
97,32
0,30
dessecao
Tabela 2 - Avaliao da quantidade de indicador a ser empregado no mtodo em desenvolvimento utilizando

ANOVA one-way.
Quantidade
de indicador
(mg)
150
225
300

1
Mdia
(%)
DPR
(%)
F(cal)
F(0.95,5)
96,95
97,09
96,83
96,83
96,95
97,09
96,95
97,09
97,20
96,83
97,09
97,33
97,09
96,83
97,09
97,09
96,83
97,20
96,96
96,98
97,12
0,12
0,13
0,17
2,5046
3,6823

Tabela 3 - Resultados da linearidade.
Concentrao de CaCO 3 (mg)
Curva 1
Curva 2
Curva 3
98,33
97,58
97,33
121,10
121,35
121,10
145,37
145,62
146,12
171,14
170,14
172,64
245,20
247,70
246,20
Concentrao de
CaCO 3 (mg)
100
125
150
175
250
Mdia das
curvas (mg)
97,75
121,18
145,70
171,31
246,37
DPR (%)
0,53
0,12
0,26
0,73
0,51
Figura 1. Curva analtica
-IV
20
13
Concentrao
r = 0,99967

2
3
4
5
96,70
96,58
96,83
96,70
96,70
96,95
96,33
97,08
96,33
97,08
96,95
96,45
6
97,08
97,08
97,08
ic
ur
1
96,33
97,20
96,70
Mdia
(%)
96,70
96,89
96,77
DPR
(%)
0,26
0,33
0,33
F(cal)
F(0.95,5)
0,5988
3,6823
in
Volume de
NaOH (mL)
13
15
17
so
s
Tabela 4 - Resultado da robustez variando a quantidade de hidrxido de sdio 1 N.
Tabela 5 - Resultado da robustez variando diferentes fabricantes de EDTA 0,05 M, presumindo varincias
equivalentes.
Procedncia do
EDTA
Nuclear

1
Mdia
(%)
DPR
(%)
t (cal)
t (0.95,5)
96,83
96,53
96,45
96,40
96,58
96,40
96,58
96,65
96,33
96,65
96,58
96,78
96,56
96,57
0,17
0,16
1,1417
2,2622
Robustez
Os resultados obtidos com o parmetro robustez para
o volume de NaOH 1N utilizado foram tratados estatisticamente atravs da ANOVA one-way, para avaliar se havia diferena
entre as mdias obtidas e esto demonstrados na Tabela 4.
A avaliao da procedncia (fabricante) de EDTA
foi realizada utilizando uma soluo da Merck e outra soluo preparada com o sal da Nuclear, o qual foi fatorado
seguindo mtodo farmacopeico. Os resultados esto dispostos na Tabela 5.

Preciso
Repetitividade
A repetitividade foi realizada em sextuplicata e os
resultados obtidos encontram-se expostos na Tabela 6.

entre o mesmo analista nos diferentes dias, podendo ser
visualizado na Tabela 8.
Preciso Intermediria
Os resultados obtidos com este parmetro esto dispostos na Tabela 7.
O tratamento estatstico realizado pelo teste tStudent verificou se havia diferena entre as mdias obtidas entre os analistas no primeiro e segundo dia, assim como
Exatido
Os resultados obtidos com o parmetro exatido
esto dispostos na Tabela 9.
Tabela 6 - Resultado analtico da repetitividade do mtodo.

1
96,58
2
96,33
Concentrao (%)
3
4
96,58
95,08
5
97,33
Tabela 7 - Resultado analtico da preciso intermediria do mtodo.
20
Mdia
(%)
97,05
97,47
97,43
97,44
DPR
(%)
0,77
DPR
(%)
1,68
0,23
0,23
0,24
Analista 2

2
3
4
5
97,83
97,58
96,95
94,33
97,32
97,32
97,58
97,32
97,08
97,58
97,58
97,32
97,63
97,58
97,58
97,08
-IV
1 dia
2 dia
1 dia
2 dia
Analista 1
1
98,58
97,83
97,58
97,32
Mdia
(%)
96,33
6
96,08
13
Amostras
ic
ur
so
s
Tabela 8 - Tratamento estatstico da preciso intermediria do

mtodo.
t calculado
t (0.95 , 5)
0,5080
2,7765
1 dia Analistas 1 e 2
0,2460
2,3060
2 dia Analistas 1 e 2
0,5703
2,7765
Analista 1 1 e 2 dias
0,0689
2,3060
Analista 2 1 e 2 dias
in
Tabela 9 - Resultado analtico e tratamento estatstico da exatido.

Amostras (mg)
1
2
3
99,08
99,58
99,08
199,16
198,91
199,66
298,99
299,24
299,74
Concentrao
terica (%)
50
100
150
Mdia (%)
DPR (%)
t (cal)
t (0.95 , 2)
99,16
199,24
299,32
0,38
0,38
0,38
3,8099
3,4470
3,0842
4,303
DISCUSSO
Desenvolvimento do mtodo
Retirada da dessecao
Quantidade de indicador
Conforme observado na Tabela 1, como o t calculado menor que o t tabelado, pode-se afirmar que no h
diferena estatisticamente significativa entre os resultados
mdios obtidos, com um intervalo de confiana de 95%.
Sendo assim, a retirada da dessecao passou a ser utilizada
pelo mtodo a ser validado, por ser mais vivel na rotina
laboratorial.
De acordo com a Tabela 2, o F calculado menor

que o F tabelado, logo se confirmou estatisticamente que o
mtodo no sofreu interferncia com as diferentes quantidades de indicador testadas, e desta forma adotou-se 150mg,
em virtude da melhor visualizao do ponto de viragem e
tambm considerando uma provvel reduo de custo
operacional.

A partir dos resultados obtidos, o mtodo passou a
ser utilizado sem a necessidade de dessecar a amostra,
tornando-o mais rpido e prtico. Outra modificao
importante foi a reduo da quantidade de indicador com o
intuito de facilitar a percepo do ponto de equivalncia.
Os parmetros investigados garantiram que o
mtodo robusto, exato e preciso para determinao de teor
de carbonato de clcio, portanto considerado validado,
conforme a RE 899, ANVISA. um mtodo simples, rpido
e apresenta confiabilidade e segurana necessria para
procedimentos analticos, sendo recomendado para anlises
em laboratrios de controle de qualidade. Apresenta-se
portanto, como uma alternativa de baixo custo para a rotina
da indstria farmacutica e farmcias magistrais.
Validao do mtodo
Parmetros avaliados
Linearidade
13
20
Optimization and validation of volumetric analytical

method for calcium carbonate assay
-IV
Osteoporosis is defined by the World Health

Organization as a systemic metabolic bone disease
characterized by a reduction in bone mass and
deterioration of the bone tissue microarchitecture,
resulting in an increase in bone fragility and susceptibility
to fractures. Calcium supplementation can be carried
out with various calcium salts. The most recommended
is calcium carbonate, which has the greatest proportion
of elementary calcium (40%). Nowadays, when all paths
in product development are converging on a search for
total quality, it is becoming indispensable to know as
much as possible about each phase of a production
process. In the case of an analytical method, validation
is a suitable quality control tool to ensure its reliability
and reproducibility, as it is a documented procedure that
certifies that it leads to the expected results. The choice
of analytical method is of fundamental importance to
controlling the quality of an active substance or a dosage
form. Therefore, the aim of this study was to develop
and validate the use of titration as the dosing method for
the raw material calcium carbonate. The performance
characteristics investigated in the validation were:
accuracy, precision, detection limit, quantitation limit,
linearity and robustness. The results obtained show that
the method is robust, accurate and precise, giving
reproducible and reliable results.
Keywords: validation; titration; calcium carbonate.
Robustez
in
ic
ur
so
s
De acordo com os resultados descritos nas Tabelas

4 e 5, e o tratamento estatstico realizado por ANOVA oneway e pelo teste t-Student respectivamente, pode-se afirmar
que o mtodo robusto, com 95% de confiana, pois no h
diferena estatisticamente significativa entre as mdias dos
parmetros avaliados.
Preciso
ABSTRACT
Pelo mtodo dos mnimos quadrados obteve-se a

seguinte equao da reta: y = 0,9947x - 2,6855. A anlise da
regresso linear demonstrou um coeficiente de determinao (R2) muito prximo da unidade (0,99967), o que comprova a linearidade do mtodo.
Atravs da anlise de varincia (ANOVA), podemos testar a linearidade do mtodo e a significncia estatstica da curva ajustada. Utilizando a razo entre a mdia
quadrtica devido falta de ajuste e a mdia quadrtica devido ao erro puro foi possvel verificar se houve falta de
ajuste.
Esta relao apresentou um F calculado de 2,7192
abaixo do valor crtico tabelado 3,7083; onde podemos afirmar no nvel de 95% de confiana que o modelo linear est
bem ajustado na faixa de concentrao estudada.
A partir da curva analtica foram estimados o LD e
LQ, atravs das frmulas LQ = DPa x 10/IC e LD = DPa x 3/
IC, obtendo os seguintes valores LD = 1,41 mg e LQ = 2,14
mg. Onde: DPa o desvio padro do intercepto com o eixo
do Y, mdio das trs curvas e IC a inclinao da curva de
calibrao.
De acordo com os resultados expostos na Tabela 6

pode-se concluir que o mtodo apresenta uma boa
repetitividade, visto que o desvio padro relativo inferior a
5%, limite especificado pela RE 899 ANVISA (2003a).
Como observado nas Tabelas 7 e 8, o t calculado
menor que o t tabelado, logo podemos afirmar com 95% de
confiana que no h diferena estatisticamente significativa entre dias e analistas. Portanto, o mtodo apresenta-se
preciso intra-corrida e inter-corrida.
Exatido
REFERNCIAS
De acordo com o tratamento estatstico realizado
por t-Student, vendo que o t calculado foi inferior ao t
tabelado para as concentraes citadas na Tabela 9, no h
evidncia de erro sistemtico no mtodo analtico com nvel
de confiana de 95%, comprovando assim que o mtodo
exato.
ANVISA. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.

Resoluo RE 899, de 29 de maio de 2003. Guia para a
validao de mtodos analticos e bioanalticos. Dirio
Oficial da Unio, Braslia, DF, 02 de junho de 2003a.

ANVISA. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.
Resoluo RDC n 210, de 04 de Agosto de 2003.
Regulamento Tcnico das Boas Prticas para a Fabricao
de Medicamentos. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 14
de agosto de 2003b.
Monteiro DB, Braga JMF, Albuquerque MM, Strattmann R,

Silva KER, Rolim Neto PJ. Desenvolvimento e validao
do mtodo analtico de doseamento da matria-prima
lamivudina por cromatografia lquida de alta eficincia. Rev
Bras Farm 2006; 87(4):120-3.
Bedani R, Rossi EA. O consumo de clcio e a osteoporose.

Semina Cinc Biol Sade 2005; 26(1):3-14.
Silva Filho CA, Arajo JCF, Silva PRP. Metodologia analtica

por titulometria para paracetamol - Parte I. Controle de
Contaminao 2006, 8(85):30-4.
Brito NM, Amarante Jnior OP, Polese L, Ribeiro ML.

Validao de mtodos analticos: estratgia e discusso.
Pesticidas 2003; 13(dez/jan):129-46.
Soares Sobrinho JL, Nunes LCC, Grangeiro Jnior S, Roca

MF De La, Rolim Neto PJ. Alternativa para o doseamento de
metildopa comprimido: desenvolvimento e validao do mtodo
analtico. Controle de Contaminao 2006; 7(82):31-5.
Farmacopia brasileira. 4.ed. So Paulo: Atheneu; 1988, pt.1.

p.V.1.5-V.1.5-4.
Soares Sobrinho JL, Nunes LCC, Grangeiro Jnior S, Roca

MF De La, Rolim Neto PJ. Validao de metodologias
analticas no mercado farmacutico: caso paracetamol.
Controle de Contaminao 2005; 7(73):35-41.
13
Grangeiro Jnior S, Galindo Bedor DC, Soares Sobrinho

JL, Strattmann R, Rolim Neto PJ, Albuquerque MM.
Validao da metodologia analtica de comprimido base
de nevirapina. Controle de Contaminao 2004; 7(65):25-8.
The United States Pharmacopeia. 29th.ed. Rockville: The

United States Pharmacopeial Convention, 2006.
20
Jeffery GH, Basset J, Mendham J, Denney RC. Vogel: anlise

qumica quantitativa. 5.ed. Rio de Janeiro: LTC; 1992.
in
ic
ur
so
s
-IV
Matioli G, Valentini SR, Sommer WA. Validao de mtodos

analticos na quantificao de comprimidos de captopril comparao de metodologias para um programa de garantia da
qualidade. Acta Scientiarum Health Sci 2004; 16(2):357-64.

Análise Instrumental - Da Amostragem À Validação

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Análise Instrumental - Da Amostragem À Validação

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Anlise instrumental - da

Santos, 13 de julho de 2013

Profa. Dra. Thais Vitria da Silva Reis

Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal/Sinquisp

Contedos a serem desenvolvidos

1 - Utilizao de Mtodos Instrumentais;

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.02

Classificao dos Mtodos Analticos

Interao entre Mtodos

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.04

Definir os objetivos da Qualidade dos Dados

Pode-se selecionar o mtodo analticos para

ltimo Censo de 2010

Populao Brasileira 190

Censo= Conjunto de dados obtidos de todos

Coleo completa de todos os elementos (pessoas,

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.08

Aleatria: quando os membros de uma populao so selecionados

Aleatria Simples :de tamanho n selecionada de modo que toda

Amostra probabilstica :envolve a seleo de membros de uma

Amostragem aleatria: Cada membro da populao tem igual

selecionada de forma que toda amostra possvel de mesmo tamanho

Amostragem de Convenincia usa resultados fceis de coletar.

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.10

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.11

Amostra por Conglomerado divide a populao em sees (ou

Vacinar todos os habitantes destas ilhas.

Erro amostral a diferena entre o resultado amostral e o

amostrais devidas ao acaso).

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.13

um valor no centro ou no meio do conjunto de dados:

X= soma de todos os valores amostrais

Ex. Monitorao de Chumbo no Ar

Calculando-se com a expresso acima(1-Mdia aritmtica), Xmedio()=1,538

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.14

2 - Mediana a medida do centro, quando os dados amostrais

Assim, para os dados da Monitorao de Pb teremos:

Caso 5,40 fosse mantido

Ex. Inclua nos dados da monitorao o valor 0,66

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.15

3 - Moda o valor que ocorre mais frequentemente em um conjunto de

-Quando dois valores ocorrem com a mesma maior frequncia, o conjunto

5,40 1,10 0,42 0,73 0,48 1,10

4 - Ponto Mdio a medida de centro exatamente a meio caminho entre o

Estabelece a natureza dos componentes

Quais atributos so essenciais ao analista qumico?

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.19

Passo mais importante para

Como preservar a amostra?

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.21

Diferenciao entre Amostrar e Coletar

Anlise: resduo agroqumico em plantao de abboras

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.23

Fruto mais maduro

Decidida esta etapa, ento

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.24

Portanto, impossvel tirar

Mesmo tomando a melhor

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.25

Alteraes da amostra podem ser:

CONTAMINAO POR TOQUE OU EMBALAGENS

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.26

Dra.Thais Vitria da Silva Reis,p.27