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INTRODUCTION..2
I.
INTRODUCTION
point de vue thorique 30 100 fois plus important que les olagineux terrestres), (ii) ne sont pas
lorigine de concurrence dusage vis--vis des terres agricoles et (iii) valorisent de manire trs efficace le CO2.
Aussi dans les rves les plus fous de certains chercheurs, ces organismes microscopiques
encore mal connus, seraient une usine photosynthtique potentiellement efficace pour le recyclage
du CO2 et la production de biocarburants. Quen est-il aujourdhui de cette potentialit?
Nous avons tent de rpondre cette problmatique, en lien avec le Conseil de Pays du Val
de Lorraine qui sinterroge sur les potentialits des micro-algues notamment dans un contexte de
dveloppement local du territoire. Ce travail nous a permis de raliser une exprimentation (passage
du thorique la pratique) mais surtout d'avoir un premier contact avec le monde professionnel et
celui de la recherche.
I.
A. Les micro-algues
a) Dfinition et caractristiques
Les micro-algues sont des organismes microscopiques unicellulaires. On utilise le terme
micro car la taille d'une micro-algue varie de quelques micromtres une centaine de
micromtres. Pour les tudier, il est ncessaire de les observer au microscope optique ou au
microscope lectronique, ce qui permet de voir plus de dtails, en particulier relatifs leur
morphologie. Dun point de vue taxonomique, les micro-algues appartiennent diffrentes familles
qui ont chacune leurs propres caractristiques, mais elles ont aussi des points communs en
particulier dans leur ultra structure et leur mtabolisme. Les organismes photosynthtiques sont
regroups en trois catgories distinctes: les bactries photosynthtiques, les algues et les plantes
terrestres. Le terme algue regroupe des individus chlorophylliens vivant essentiellement dans l'eau
et qui ne sont pas des embryophytes. Les contraintes du milieu aquatique ont conduit des
convergences structurales et physiologiques comme lexistence dune paroi souple. Les organismes
ainsi regroups sont pourtant bien loigns phylogntiquement: comme les Rhodobiontes (algue
rouge), Chlorobiontes, Stramnopiles (algue brune), Haptophytes. Algues rouges et algues brunes
sont des groupes monophyltiques c'est--dire se reconnaissent comme partenaires sexuels et
donnent une descendance fconde, par contre les algues vertes sont paraphyltiques et donc des
groupes dont l'anctre commun est aussi partag avec d'autres groupes.(voir annexe 1)
Une micro-algue est un organisme photosynthtique unicellulaire dlimite par une membrane
plasmique, qui contient au sein de son cytoplasme de nombreux organites ncessaires son fonctionnement et son mtabolisme : chloroplastes, amyloplastes, oloplastes, mitochondries et son
noyau entour de son enveloppe.
Les micro-algues peuvent vivre sous forme libre ou en colonie. Leur cellule unique et
indiffrencie assure toutes les fonctions. Ce sont des micro-organismes appartenant deux
groupes: les eucaryotes et les procaryotes. Les micro-algues eucaryotes possdent une structure
cellulaire vgtale classique compartimente, avec ou sans paroi cellulosique, et, avec des pigments
photosynthtiques renferms dans des plastes. Les micro-algues procaryotes, appeles aussi
cyanobactries, ont une structure bactrienne classique sans compartiment, les pigments
photosynthtiques tant contenus dans des membranes lamellaires.
En ce qui concerne la multiplication des micro-algues, elles ne grandissent pas. Par contre,
certaines d'entre elles, comme les diatomes, peuvent voir leur taille diminuer. Comme toutes les
micro-algues, elles colonisent leur milieu en se divisant par mitose, rapidement et activement, si les
conditions physico-chimiques et nutritives sont favorables. Lors de cette reproduction asexue, leur
taille diminue jusqu' ce qu'elles ne puissent plus se diviser.
b) Milieu de vie
Les micro-algues vivent dans les milieux fortement aqueux. Il existe 1100 genres de microalgues dont 14000 espces d'eau douce et 14000 d'eau sale. Ce sont des tres photosynthtiques,
c'est--dire qu'elles sont capables de produire de la matire organique partir d'lments minraux
grce aux processus d'assimilation photosynthtique. Ds lors qu'elles disposent de la lumire, elles
vont assimiler les lments minraux nutritifs comme le potassium, le sodium, le calcium et le magnsium, des oligo-lments (molybdne, zinc, cuivre) et le CO2 dissous dans l'eau pour produire
leurs constituants cellulaires. Dans leur cytoplasme, elles possdent des chloroplastes, organites
renfermant des pigments chlorophylliens. Ces pigments assurent le captage de l'nergie lumineuse,
qui est ensuite utilise pour synthtiser la matire organique ncessaire la cellule, partir des lments minraux nutritifs. Les miro-algues sont donc des tres autotrophes par photosynthse mais il
est possible que certaines d'entre elles, comme les euglnes, deviennent htrotrophes lorsqu'elles
sont places dans des conditions dfavorables de survie. Par exemple, si des micro-algues sont places dans le noir, elles perdent leurs chloroplastes et deviennent dpigmentes : elles vont s'alimenter alors grce la matire organique prsente dans le milieu. Notons que certaines micro-algues, en
majorit les cyanobactries filamenteuses, sont capables de fixer l'azote de l'air, grce des structures spcialises appeles htrocystes, qui contiennent une enzyme la nitrognase. Cet htrocyste
n'est pas capable de photosynthse mais il est en relation avec les cellules somatiques adjacentes qui
lui fournissent les matires carbones en change de composs azots.
a) La photosynthse
Interception de lnergie lumineuse
L'nergie lumineuse constitue l'apport initial permettant l'assimilation du carbone et d'autres
lments par les tres vivants chlorophylliens lors de la photosynthse: synthse de matire
organique partir de la lumire. La photosynthse se droule dans les chloroplastes des tissus
chlorophylliens comme le msophylle. Elle commence par une phase photochimique dans laquelle
un rducteur fort (NADPH) et de l'nergie sous forme d'ATP (adnine tri phosphate) sont labors.
L'nergie lumineuse absorbe par les photosystmes assure un transfert d'lectrons fournis par l'eau.
Puis la phase chimique comporte une carboxylation catalyse par la Rubisco qui consiste rduire
le CO2. Dans cette phase ce sont les NADPH et ATP forms prcdemment qui sont utiliss.
La rduction du CO2
Les micro-algues contiennent diffrents pigments essentiels parmi lesquels la chlorophylle. Il sagit
dune mtalloprotine c'est dire un noyau ttrapyrrolique substitu et centr sur un ion mtallique.
Elle possde une longue chane hydrophobe ce qui augmente sa solubilit dans le milieu apolaire de
la membrane. Son rle est d'absorber l'nergie lumineuse puis la convertir en nergie chimique
(ATP et NADPH, H+). Chez les micro-algues, on trouve de la chlorophylle avec une concentration
suprieure 10 g/l. Elles contiennent galement la lutine en forte concentration qui est un
pigment carotnode, frquemment utilis en pharmacologie pour soigner les maladies oculaires du
vieillissement.
Les ractions photochimiques de la photosynthse vont permettre la rduction du CO2 et former les
glucides. Ce recyclage est ralis grce au cycle de Calvin Benson.
II.
A. Production de lipides
a) Localisation de la production des lipides
Comme chez les vgtaux terrestres, certaines espces de micro-algues peuvent accumuler, dans
certaines conditions de culture, le carbone fix, sous forme de lipides appels triglycrides. Les
lipides stocks constituent alors une rserve de carbone pour la micro-algue. En conditions normales, ces teneurs restent faibles, comprises entre 20 et 50%, et les lipides sont principalement
constitus de phospholipides et de glycolipides (constituants des membranes). Cependant certaines
espces sont capables d'accumuler jusqu' 80 % de leur poids sec en lipides (Bigogno et al., 2002 ;
Chisti, 2007) . Ainsi, les familles d'algues suivantes sont les plus productrices de lipides : Chlorophyces (ex : Chlorella vulgaris), Chrysophyces (ex : Diatomes) et Bacillariophyces (ex : Chaetoceros calcitrans).
Le stockage de lipides rsulte d'un dsquilibre transitoire entre le flux de carbone issu de la
photosynthse et le flux d'autres lments ncessaires la croissance (phosphore ou azote). La cellule, qui est carence en l'un de ces lments, n'interrompt pas immdiatement l'acquisition du CO 2
ncessaire la photosynthse, alors qu'elle ne peut pas l'utiliser pour construire des protines
puisque, par exemple, l'azote est manquant. Elle doit donc stocker ce flux, et chez certaines espces,
ce stockage a lieu principalement sous forme de lipides.
Ainsi, on observe chez ces espces de micro-algues des organites particuliers : les oloplastes.
Les oloplastes sont des organites spcifiques des cellules vgtales spcialiss dans le stockage des
lipides, essentiellement sous forme de plastoglobules (gouttelettes lipidiques sphriques de triglycrides synthtiss partir d'acides gras venant des chloroplastes). Ce sont des plastes sans pigments,
et plus spcifiquement des leucoplastes. Ils sont souvent associs aux membranes des thylakodes.
glycolyse.
La
raction
est
catalyse
par
la
3-phosphoglycrol
dshydrognase.
Les triacylglycrols sont librs dans le cytosol sous forme de gouttelettes lipidiques.
prieur celles d'eau douce. Cependant, on remarque que la production de lipides par jour est plus
importante chez les espces d'eau douce. On remarque quil n'y a pas de relation de proportionnalit
entre le contenu maximum en lipides et la production de lipides journalire chez les micro-algues;
en effet, certaines espces produisent beaucoup de lipides mais n'ont pas un stockage suffisant face
leur production.
Les micro-algues d'eau douce : Chlorella vulgaris, Scenedesmus sp, Bottytricus braunii sont
constitues principalement des acides gras suivants : acide palmitique, palmitolique, starique,
olique et linolique. Les acides gras ont plusieurs rles importants pour la cellule : mtabolique et
structural. La composition en acides gras de ces phospholipides donne aux membranes des proprits physiques (lasticit, viscosit) particulires.
Mais mme sils sont largement utiliss dans le monde, les bassins de type raceway prsentent
des inconvnients : tant ciel ouvert, il est difficile de contrler les diffrents paramtres de
culture. De plus, ces systmes sont sensibles la contamination, soit par des espces locales qui
vont se dvelopper et remplacer lespce cultive (bactries), soit par des prdateurs (crustacs, ...).
Pour viter ces problmes, seules des espces extrmophiles poussant dans des milieux alcalins
(comme Spirulina) ou hyper salins (comme Dunaliella salina en Isral) sont cultives en plein air.
Les bassins peuvent aussi tre bchs. Pour toutes ces raisons, les bassins ne permettent quune
production extensive (la productivit est denviron 10 30 t/ha/an).
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Bassins raceway
Les micro-algues peuvent tre galement cultives en bioracteurs (enceintes dans lesquelles
se droulent des interactions biologiques, utilises pour la production de biomasse, d'un mtabolite,
pour la conversion d'une molcule,...). Dans le cas des algues, on utilise des photobioracteurs,
construits dans des matriaux transparents laissant passer la lumire et autorisant les ractions de
photosynthse. Lclairage se fait partir de la lumire solaire ou artificielle avec des tubes
fluorescents. Il peut tre optimis avec un certain angle d'inclinaison du racteur.
Le principal avantage de cette technique est quelle permet de contrler les conditions de culture
(distribution et vacuation du CO2, de lO2, contrle du pH, de la temprature,), et aussi de
maintenir la strilit de la culture.
Les productivits atteignent environ 100 t/ha/an (alors que lon estime que la limite
thermodynamique de conversion photosynthtique est de 400 t/ha/an).
Les gomtries des photobioracteurs sont trs variables :
-Les photobioracteurs plats sont constitus de deux panneaux parallles transparents, avec une
mince couche de culture circulant entre les deux. Souvent, ces racteurs, de petits volumes, sont peu
utiliss dans le commerce et l'industrie, mais sont dominants pour les essais en laboratoire.
-Les photobioracteurs gomtrie cylindrique sont constitus dun ou de plusieurs tubes
transparents (en verre ou en plastique), agencs horizontalement ou verticalement, ou bien enrouls
en hlice, dans lesquels circule le milieu de culture. Ces racteurs peuvent contenir de 0,5 15 L
pour ceux utiliss en laboratoire, de 20 1000L pour ceux servant des tests en vue de
lindustrialisation, et plus de 1 000 000 L pour ceux utiliss en production industrielle. Parmi ces
derniers types de racteurs, les plus rpandus sont ceux de type colonne. Il existe aussi des
photobioracteurs de type tubulaire orients horizontalement ou verticalement.
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Mais ces systmes prsentent plusieurs inconvnients. En effet, laccumulation d'O2, dchet
de la photosynthse, peut devenir toxique, du fait de laugmentation de pH qui en rsulte. Les
rayonnements UV passant travers les parois transparentes des racteurs, ainsi que llvation de
temprature, peuvent galement tre fatals. De plus, il est ncessaire davoir un systme d'agitation
par pompe, hlice, turbine, bullage magntique, circulation force ... pour limiter les dpts de la
biomasse sur la paroi (ce qui a pour consquence de diminuer la productivit). Enfin, ces techniques
sont plus volues et donc leur cot de revient est beaucoup plus lev que les cultures en bassin.
Dans le cas de notre projet, nous avons conduit une exprience de mise en culture de deux
souches de micro-algues appartenant deux genres diffrents. En raison des contraintes rencontres
et des moyens dont nous disposions, les algues ont t places en flacon de type Erlenmeyer sur une
table agitante dans un phytotron, ce qui quivaut une culture en systme clos de type bioracteur
en discontinu.
b) Influence du milieu
La croissance d'une culture de micro-algues est contrle par un trs grand nombre de
facteurs dont les plus importants sont la lumire (intensit et photopriode), le pH, les nutriments,
les concentrations en CO2 et O2 et l'tat physiologique. De ce fait, la recherche dune production de
biomasse algale doit passer par une modlisation de la croissance au cours du temps, en fonction de
diffrents paramtres d'tude.
Modlisation de la cintique de croissance algale :
La matrise de la cintique de croissance est galement importante. Les micro-algues sont capables
de se multiplier de manire rapide dans des conditions favorables. Leur croissance en culture suit un
dveloppement en 4 phases:
Une premire phase de latence, qui se traduit par une adaptation aux nouvelles conditions de
culture.
Une croissance exponentielle, o les cellules se multiplient au maximum de leur capacit. Elles
prsentent au cours de celle-ci leur meilleur profil nutritionnel.
Une phase stationnaire durant laquelle les micro-algues ont puis un ou plusieurs lments
nutritionnels ou ont relch des composs limitant la multiplication cellulaire.
Une dcroissance rapide, o la culture vient mourir du fait de la pollution du milieu; on parle de
crash .
D'un point de vue pratique, il convient donc de garder la culture en phase de croissance
exponentielle le plus longtemps possible. Ceci permet de bnficier dun matriel biologique en
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Cintique de croissance des micro-algues : la croissance suit un dveloppement que lon peut
diviser en 4 phases distinctes.
Les diffrents paramtres dtude influenant le taux de croissance sont la lumire, la temprature et
les apports en azote et en phosphore.
Sur la souche Chlorella sorokiniana, Belkoura et Dauta (en 1992) ont ainsi mis en vidence
un taux de croissance maximal de 2,2 algues supplmentaires par jour, ce qui correspond 3,1
divisions par jour. Ces valeurs sont infrieures pour les Chlorella vulgaris, dont le taux s'lve une
algue en plus par jour (Piquemal, 1990). Le modle dfini pour le taux maximal de croissance est
confirm pour des algues d'un autre genre (Scenedesmus). De plus, les auteurs remarquent qu'un
clairement continu assure, certes, un taux maximal de croissance, mais qu'au-del de 12h
d'clairement, le rendement de production baisse par rapport la quantit d'nergie dispense la
culture. Il en dcoule alors, chelle industrielle, un surcot nergtique qui ne correspond pas un
gain substantiel de masse (comme nous pouvons le voir dans le graphique issu dune publication
ultrieure de Benider, Tahiri, Belkoura et Dauta, en 2001).
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Les auteurs soulignent galement que les limites de leurs expriences sont lies au phnomne
d'auto-ombrage et aux carences en azote ou en phosphore.
Les influences de l'azote et du phosphore sur des micro-algues Porphyridium purpureum
sont releves dans les travaux de Joannis et al., (2007). Grce leurs rsultats, ces auteurs concluent
qu'il faut une quantit minimale d'azote initiale pour ne pas limiter la croissance micro-algale, sans
dpasser une quantit maximale pour ne pas l'inhiber. Quant au phosphore, la biomasse augmente
avec sa concentration jusqu atteindre un plateau pour une concentration initiale de 30mg.L-1 , ce
qui correspond 30 mg pour 0,2.109 cellules en dbut d'exprience biomasse.
Grce des modles prcis de l'volution de la population algale, reposant sur des paramtres
externes, nous pourrions optimiser les rendements de production de biomasse algale.
c) Facteurs permettant daugmenter la synthse lipidique
Chez certaines espces, il est possible d'augmenter significativement la production de lipides
par un stress. Les stress identifis peuvent tre de diffrentes natures (Sheehan et al., 1998).
Les conditions de carence en azote sont connues pour stimuler la production de lipides. Pour
les diatomes, une limitation par la silice conduit galement la production de lipides. L'augmentation soudaine de l'intensit lumineuse produit un effet similaire. Enfin, un choc thermique, de mme
qu'un choc osmotique stimule galement la production de lipides (Takagi et al., 2006), mais il
semble que ces deux derniers stress favorisent davantage les lipides polaires (phospholipides et glycolipides) associs aux membranes cellulaires.
Les teneurs en lipides (qui seront alors principalement constitues de triglycrides) sont considrablement accrues et peuvent atteindre 80% de la matire sche (Metting, 1996). Ces conditions
de fortes productivits ne peuvent toutefois pas tre maintenues pendant de longues dures : elles
conduisent le plus souvent un arrt de la croissance, puis, aprs un laps de temps, la remobilisation des rserves lipidiques ainsi produites.
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L'optimisation de la productivit en lipides doit donc passer par un compromis entre croissance
(donc sans carence) et production d'huile (avec un stress ralentissant la croissance). Huntley et Redalje (2006), proposent une manire d'optimiser la production de lipides chez Haematococcus pluvialis en deux tapes : une croissance en photobioracteurs permettant d'atteindre des rendements
levs et de limiter les sources de contaminations de la culture. Cette phase de croissance est suivie
de 2 jours de carence en tang dans lequel les micro-algues sont limites par l'azote.
Le programme franais de production de biocarburant issu de micro-algues, soumis l'ANR
(dans le cadre du Programme National de Recherche sur les Biotechnologies) nomm SHAMASH
cherche tester tous les facteurs possibles permettant d'optimiser la production de lipides par les
micro-algues ceci afin de produire des biocarburants lipidiques
Voici notamment les facteurs sur lesquels la communaut scientifique sest focalise dans le
cadre de ce projet :
1- Carence en azote (N)
Naturellement, les algues produisent assez peu d'huile. Pour parvenir leur faire accumuler
70% de leur poids sec en acide gras, il faut les stresser, explique Olivier Bernard, chercheur
l'INRIA de Nice. En effet, une carence en azote provoque dans le milieu de culture dsquilibre la
proportion d'azote et de carbone que l'algue a l'habitude d'absorber en continu dans ses cellules. Ce
dsquilibre a pour consquence un stockage du carbone, sous forme d'huile.
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D'aprs le graphique, la teneur en acides gras reste quasiment nulle en absence de nitrates
alors qu'en condition normale celle-ci augmente au cours de la culture. Cependant, on observe un
pic de production de lipides lors de la priode de carence qui est d'autant plus accentu lorsque la
carence se fait rapidement et court terme. Les plus fortes concentrations (1-2 mM) sont plus
efficaces que 0,5 mM pour la production de lipides.
2- Stress lumineux
D'aprs l'exprience dcrite dans l'tude sur l'influence du stress lumineux sur la teneur en acide
gras de Dunaliella salina (bulletin de la Socit de Pharmacie de Bordeaux, 2007), il y a une adaptation des micro-algues au stress lumineux. En effet, en rponse ce stress, elles produisent davantage d'acides gras saturs mais les acides gras polyinsaturs reprsentant toujours environ le double
des saturs. Les acides gras les plus reprsents tant l'acide palmitique (16:0, 32,2 %), suivi des
acides linolnique (18:3, 24,0 %), linolique (trans-18:2, 15,2 %), hexadcattranoque (16:4, 7,3
%), olique (trans-18:1 5,8 %), hexadcanoque (cis-16:2, 3,4 %) et starique (18:0, 2,0 %). Cependant, suite ce stress, elles rintgrent en 24 heures leur teneur initiale en acides gras.
3- Choc thermique
Un brevet de Procd de production slective de lipides polyinsaturs partir d'une culture de
Porphyridium cruentum a t dpos pour une invention permettant la mise en place d'un choc
thermique sur une culture de micro-algues :
En effet, la teneur en acides gras polyinsaturs l'intrieur des micro-algues varie fortement en
fonction des conditions de temprature. Un choc thermique appliqu la biomasse de micro-algues
pendant un temps donn, est un cart thermique par rapport la temprature de culture dans le photobioracteur, de faon modifier l'insaturation des acides gras des lipides.
Une diminution de temprature allant jusqu 4C-15C environ, permet dobtenir des lipides
plus insaturs alors quune augmentation de temprature allant jusqu 40C environ, permet
dobtenir des lipides moins insaturs.
4- Choc osmotique
Une augmentation de la salinit dans un milieu aqueux est l'origine d'un milieu hypertonique qui
constitue un choc osmotique pour des micro-algues marines. Ainsi, la production cellulaire d'acides
gras totaux augmente avec la quantit de sel. Au 20me jour de culture, elle est de 50 g/ml pour 10
% de sel contre 250 g pour 30 %.
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Ainsi, la micro-algue rpond au stress osmotique par rgulation du flux de carbone entre la synthse d'amidon dans le chloroplaste et la production de glycrol (CH2OH-CHOH-CH2OH) dans le
cytoplasme. Le glycrol intracellulaire sert quilibrer osmotiquement le sel extracellulaire. Dans
les organismes vivants, le glycrol est un composant important des glycrides (graisses et huiles) et
des phospholipides.
C. Extraction
a) Protocoles d'extraction des lipides
1- L'extraction: un dfi
La production de biocarburants partir des micro-algues est souvent cite dans les mdias,
mais elle compte encore de nombreux dfis relever. Lun des premiers challenges consiste
identifier les micro-algues les plus riches en lipides parmi les millions d'espces existantes. En effet,
actuellement trs peu de travaux ont t ralis dans le domaine de la slection de souches de
micro-algues les plus efficientes pour la production de lipides en rponse des stress. Un second
dfi prendre en compte est loptimisation de lextraction des lipides qui demeure une tape encore
trop nglige. Les techniques de pressage froid sont en effet inefficaces: les rendements ne sont
que de 70% (Guillaume Calu, 2006, Biodiesel et Microalgues). Lextraction de lhuile est ralise
lhexane, ce qui nest comptitif ni au niveau conomique ni au niveau environnemental. Des
recherches sur lextraction sont actuellement en cours : la socit Valcobio, un des partenaires du
projet Shamash, travaille sur des techniques dextraction sans produits toxiques.
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suivante :
1 mol de trilinolate de glycryle + 3 mol de mthanol --> 3 mol d'E.M.H.V + 1 mol de glycrol.
Cette technique est aussi utilise pour transformer d'autres huiles vgtales en biocarburants,
elle permet de rutiliser le mthanol et d'extraire le glycrol qui a de nombreux usages notamment
en cosmtique.
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Les huiles extraites de micro-algues diffrent des huiles de vgtaux suprieurs par leur teneur
nettement suprieure en acides gras poly-insaturs (Olagineux, Corps gras, Lipides 2004, vol 11, p
118-121). Les acides gras et les esters mthyliques possdant 4 ou plus doubles liaisons risquent de
soxyder lors de leur stockage et de rduire lacceptabilit de lhuile. Linsaturation totale est
dailleurs limite pour les standards europens: le biodiesel utilis pour les transports et les huiles
de chauffage ne doivent pas dpasser un indice d'iode de respectivement 120 et 130. Les huiles de
micro-algues peuvent tre traites par hydrognation catalytique (cette technique est communment
employe pour obtenir de la margarine partir dhuiles vgtales insatures).
D. Exprimentation au laboratoire Agronomie et Environnement (LAE) de lENSAIA
Nous avons tudi au laboratoire la croissance et la production de lipides des deux espces de
micro-algues suivantes :
- Chlorella vulgaris (provenant de lIfremer), micro-algue deau douce;
- Nannochloropsis salina (provenant de lalgothque de Caen), micro-algue deau de mer.
Ces deux espces ont t cultives dans un milieu minral (Conway) dont la composition est donne
en annexe 2. Pour les deux espces, un inoculum initial de 5ml a t introduit dans 250ml de
Conway. Dans le cas de Nannochloropsis salina, le milieu de Conway utilis a t amend avec du
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Aprs deux semaines de culture en agitation 20C (photographie), une extraction de lipides a t
ralise sur les volumes suivants :
120ml de Nannochloropsis salina, pour une densit de 11,68.106cellules/ml
235ml de Chlorella vulgaris, pour une densit de 13,52.106 cellules/ml
Lextraction des lipides a t ralise selon le protocole suivant :
-
La suspension cellulaire est filtre sur Buchner (filtre Whatman GFC, diamtre 70 mm).
Chaque filtre sec est remis dans 250ml dun mlange de chloroforme/ mthanol (150/(75)).
Une agitation longue est ralise pour extraire les composs hydrophobes : lipides et chlorophylle.
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vaporateur rotatif
On analysera les diffrents types acides gras par Chromatographie Phase Gazeuse. (analyses en
cours ce jour)
III.
Une valorisation plus abordable serait celle par mthanisation (permettant indirectement la
rcupration de chaleur et d'lectricit par combustion). Mais ce processus impliquerait une
production directement dans le digesteur afin d'viter la phase de rcolte (qui nuit la
rentabilit).
La valorisation par la filire aquacole (avec la nutrition des levages piscicoles) est en plein
essor notamment au travers de diverses commissions travers la France.
La valorisation par les industries alimentaires et cosmtiques reste trs intressante car elle
consiste en la production de molcules forte valeur ajoute.
4 Analyser et chiffrer le projet dans ses dimensions physiques, ses dimensions en terme de flux et
dans ses cots d'investissement et de fonctionnement.
5 Identifier les limites techniques, financires et humaines du projet
De plus, ils nous ont signals que ctait un projet de grande ampleur ncessitant beaucoup
de temps pour bien s'assurer de l'efficacit relle du systme en terme de cots, d'conomie de
combustible fossile et de rejets de gaz effet de serre.
Les interrogations de ces tudiants, plutt spcialiss en industrie et gnie des procds,
concernaient essentiellement les potentialits du matriel biologique. Nous leur avons ainsi donn
des indications plus avises sur la bibliographie concernant la croissance et le contenu lipidique des
micro-algues. Ils ont ainsi notamment appris (i) qu lheure actuelle aucune espce de micro-algue
na t choisie au niveau de la communaut scientifique comme modle pour une valorisation
optimale du CO2, (ii) que lassimilation ntait pas totale car un certain taux le CO2 devient
toxique pour les micro-algues, (iii) que toutes les algues ntaient pas quivalentes pour la
production dhuiles vgtales et de co-produits (tourteaux), (iv) que beaucoup de recherches taient
encore en cours notamment en terme de slection despces vu la grande diversit des micro-algues
existant dans les diffrents cosystmes naturels.
Le plan de leur projet est prsent sur la figure suivante :
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Dans le schma de leur projet industriel, les micro-algues arrivent en bout de chane pour
permettre la rgnration du CO2 en O2 par le biais de la photosynthse. Celles-ci seraient par la
suite sches, grce la chaleur produite par le brlage des dchets vgtaux et organiques, et
permettre ainsi aprs extraction, la production de tourteaux, huile vgtale pure et algo-carburants.
En conclusion, les micro-algues apparaissent comme une ressource particulirement
prometteuse pour un cycle nergtique propre. Les difficults semblent plutt lies aux techniques
de production et de transformation des micro-algues. Cette ressource renouvelable est donc
lorigine dun vritable dfi pour de nombreuses filires industrielles.
lIfremer Nantes recherche un spcialiste en biologie molculaire. Il revient donc aux sources
Nantes et intgre le Laboratoire de Physiologie et Biotechnologie des Algues. Il cre son quipe
Nantes en 2001 et dirige le laboratoire partir de 2005. Cest ainsi que lentreprise de
biotechnologie Algenics se cre tout naturellement en 2008 sur un sujet clair Comment utiliser les
algues comme usine cellulaire pour fabriquer des mdicaments . Depuis presque deux ans,
lentreprise compte 13 salaris.
C. Autres projets dans le Monde
Aujourdhui, de nombreux projets et initiatives de recherches sont en cours lchelle mondiale
pour optimiser la production de micro-algues et de lipides. Tous les projets semblent vouloir
minimiser au mieux les impacts ngatifs (contamination des eaux, sensibilit certains facteurs
environnementaux). Certains pays sorientent plus particulirement sur la slection de microalgues par rapport leur potentiel de rendement par des techniques de slection classique jusquaux
manipulations gntiques. Ainsi, travers le monde, de nombreuses quipes de chercheurs se
livrent une lutte sans merci pour trouver la souche de micro-algue la plus rentable et la plus
performante.
Le tableau ci-aprs rsume la particularit des projets au niveau international :
Pays
Etats-Unis
Utilisation d'OGM
Projet en Chine
GreenFuel (2001) :
But : Rduire les taux de NOx et de CO2 tout en produisant de la biomasse algale
Angleterre
France
Japon
Canada
Shamash (2007-2010)
Universit Tsukuba : Recherche avance sur Botryococcus (souche prometteuse qui a la particularit
dexporter les lipides lextrieur de la cellule)
Projet SRCA (Systme de Recyclage du Carbone par les Algues) :
Systme hybride de bassins ouverts et de serres alimentes par des capteurs photovoltaques
28
IV.
A. Limites rencontres
De prime abord, contrairement aux biocarburants de 1re gnration, la culture de microalgues napparat pas concurrentielle en terme dutilisation de terres arables, qui restent ainsi
disponibles pour les cultures alimentaires. Pour cette raison, la production dalgo-carburant suscite
lintrt et lespoir des chercheurs. Cependant, certaines limites entravent le dveloppement et la
mise sur le march de ces algo-carburants.
Lun des plus gros problmes rsoudre pour obtenir une production qui permettrait de
saffranchir des nergies fossiles reste le manque de surface. En effet, pour remplacer 50 tonnes de
ptrole en France, la culture dalgues ncessiterait environ 1 077 000 ha de culture en zone humide,
ce dont nous ne disposons pas actuellement.
Autre problme important: le cot de tous ces procds. Il est bien plus lev que pour
lutilisation de ptrole. Ces problmes viennent la fois de la production de micro-algues, de
l'extraction des lipides et du schage de l'huile qui consomme de lnergie. Les infrastructures, le
transport de la biomasse, la main d'uvre et les cots d'exploitation en nergie viennent s'ajouter
aux frais, augmentant ainsi le prix de revient. L'un des objectifs des chercheurs est de rduire au
maximum ce cot car pour l'instant le prix d'un litre d'algo-carburant est d'environ 10 euros. La
difficult pour concentrer les micro-algues augmente encore le prix du carburant.
A l'heure actuelle, il est difficile davoir des ides prcises sur le cot de leur culture
grande chelle car il faut souvent se baser sur les chiffres quon obtient partir de la production sur
quelques mtres carrs et extrapoler plusieurs hectares. Les cots peuvent atteindre 70 dollars par
kg de matire sche. Les systmes de type raceway permettent d'obtenir les cots les plus faibles,
cependant, le rendement est relativement peu lev par rapport la culture en racteur. La
production de biocarburants partir de micro-algues ne peut tre rentable que si elle est associe
un systme de dpollution (consommation de nitrate, ammonium et phosphate, CO2) et la
production de coproduits valorisables drivs de la biomasse.
En outre, quelques problmes environnementaux peuvent galement se prsenter : mme si
les algo-carburants produits partir de biomasse micro-algale pourraient compenser lpuisement
en nergie fossile, les pertes en eau dues lvaporation lors de la culture en bassin de type raceway
peuvent tre importantes, ce qui amne en consommer de grandes quantits. De plus, les
substances utilises dans le milieu de culture des algues sont toutes normalement non polluantes et
non toxiques, mais les micro-algues peuvent concentrer les mtaux lourds et cela pose un problme
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qu'elles peuvent tre intgres l'alimentation en aquaculture marine. Elles sont notamment
utilises dans les levages de bivalves et pour les larves de poissons et de crustacs. Ce sont
notamment leurs nombreux acides gras insaturs qui aident la croissance des jeunes larves. Ces
micro-algues (mortes) sont fournies sous forme de ptes de micro-algues ou de micro-algues
sches. Il semble cependant que ces micro-algues mortes soient utilises essentiellement en tant que
complment de l'alimentation donne habituellement ou en tant que supplment quand il n'y a pas
suffisamment d'algues vivantes. En effet, ces algues sches ont des valeurs nutritionnelles plus
faibles que les vivantes et sont peu disponibles dans le commerce. Les micro-algues vivantes
apportent plus de bnfices dans l'alimentation des levages marins que lorsqu'elles sont sches.
De plus, il existe une flore bactrienne naturelle avec la culture des micro-algues qui a t prouve
bnfique pour la sant des mollusques. Enfin, l'utilisation de levures et de bactries dans
l'alimentation de ces levages donnent des rsultats beaucoup moins bons en apports nutritionnels
qu'avec des micro-algues. Les micro-algues vivantes apparaissent comme le meilleur choix dans les
conditions d'levages, pour apporter des valeurs nutritives leves, prsenter des proprits
physiques appropries et fournir un environnement sain l'levage.
On peut par exemple citer Isochrysis galbana et Tetraselmis suecica qui sont considres comme la
meilleure nourriture pour les larves de bivalves.. Les carotnodes prsents prcdemment ont
aussi des applications dans l'levage puisqu'ils amliorent l'tat de sant gnral des animaux. Ils
sont aussi un supplment vitaminique chez les volailles. En aquaculture, ils favorisent la qualit et
la survie des larves de crevettes et sont utiliss dans l'levage et la coloration des saumons.
2- Engrais
Les micro-algues apparaissent galement comme de bons fertilisants des sols pauvres
puisqu'elles apportent notamment du potassium, de l'azote, lments essentiels la croissance
vgtale. Elles permettent aussi de capturer et de garder l'humidit. Enfin, elles acclrent la pousse
des cultures et les protgent en limitant la prolifration des piphytes (organismes vgtaux qui
croient et vivent sur d'autres vgtaux sans se nourrir leurs dpens) et des parasites.
c) Alimentation humaine
Certaines micro-algues sont sources de matire alimentaire haute valeur nutritive en
vitamines, protines, sucres et lipides, produits en grande quantit et utilisables par l'homme.
Notamment les Diatomes, la Chlorelle et la Spiruline sont consommes (sous forme de
complments alimentaires). Par exemple, la Spiruline est forme par 60 68% de sa matire sche
en protines (elle est donc bnfique pour des rgimes alimentaires dsquilibrs en protines), 19%
de glucides, 3% lipides (dont des omga-6), du fer et des vitamines A, B2, B6, B12. Voici des
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14mg
1mg
0.4mg
0.4mg
1.4mg
0.01mg
0.08mg
0.03mg
0.20mg
70mg
80mg
40mg
15mg
0.3mg
0.12mg
0.5mg
90mg
140mg
6 8g
Acide linolique (omga-6) 80mg
Chlorophylle 110mg
160kJ
http://www.spirulinestaugustin.com/analyse-valeurs-nutritionnelles.html,
La Spiruline est la micro-algue la plus connue pour ses nombreuses proprits. Grce cellesci, de nombreux scientifiques pensent que la Spiruline serait la rponse apporter pour lutter contre
la malnutrition qui touche les pays les plus pauvres. D'ailleurs, un texte des Nations Unies traite de
l'utilisation des micro-algues alimentaires pour lutter contre la malnutrition aigu dans les situations
d'urgence humanitaire et favoriser le dveloppement durable.
Les omga-6 (en particulier l'acide linolique) sont aussi produits par certaines micro-algues
(Spiruline). Ces acides gras ne sont pas synthtiss chez l'homme ni chez les animaux et pourtant ils
sont essentiels au bon fonctionnement de l'organisme. En effet, ils initient les processus
inflammatoires essentiels pour lutter contre les infections, cicatriser des blessures, ou encore
permettre la synthse d'hormones thyrodiennes, entre autres fonctions mtaboliques. Ces omga-6
peuvent galement se trouver dans la viande, les volailles, les huiles vgtales et les fruits coque.
32
33
CONCLUSION
Partout dans le monde, l'intrt pour les micro-algues est de plus en plus grand et ce dans
divers domaines tels que les biocarburants de troisime gnration, la pharmacologie, la mdecine
et l'aquaculture. En effet, elles prsentent un rendement photosynthtique lev et permettent ainsi
un fort recyclage du CO2 industriel. Leur utilisation comme source dnergie permet aussi dviter
les comptitions pour leau potable et les surfaces cultivables.
Mme si les micro-algues prsentent tous ces avantages, de nombreux dfis sont encore
relever afin d'augmenter la production de biomasse et celle dnergie. De plus, les cots de
production et d'extraction de lipides restent encore trop levs pour pouvoir remplacer lheure
actuelle les nergies fossiles par les biocarburants de troisime gnration. La production de
molcules hautes valeurs ajoutes, issues des rsidus dextraction, pour lindustrie en gnral ou
lutilisation de la biomasse algale en mthanisation ou pisciculture semblent tre les seules solutions
lheure actuelle permettant de rentabiliser les algo-carburants.
La ralisation de ce projet au cours de cette anne nous a permis dapprendre ce quest le
travail de groupe, la recherche bibliographique, la prise de contact avec le milieu scientifique et
professionnel. Son droulement a ncessit que nous gardions une motivation intacte et constante
malgr les difficults rencontres.
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REMERCIEMENTS
Notre groupe de projet professionnel tient remercier en tout premier lieu Sverine Piutti,
professeur et matre de confrence lENSAIA, qui a supervis le droulement de ce projet. Tout au
long de cette anne, elle a su orienter nos recherches et nous rediriger dans les moments de
dispersion. Sa bonne humeur et ses encouragements nous ont permis de garder notre vitalit et notre
envie davancer lors du projet.
Nous remercions tout particulirement Jean-Paul Cadoret, directeur du laboratoire
Physiologie et Biotechnologie des Algues lIFREMER de Nantes pour nous avoir accueilli au sein
de son laboratoire et accord un peu de son temps prcieux de chercheur. De plus, il nous a permis
de mettre en place nos exprimentations grce au don dun inoculum de micro-algues. Sa rencontre
fut trs enrichissante pour notre projet.
Un grand merci M. Christophe Schwartz et lAdministration de lINPL pour leur soutien
financier lors de notre visite lIFREMER.
Certaines personnes du groupe ont galement eu le plaisir de collaborer avec M. Michel
Linder pour lextraction et lanalyse des lipides.
Nous tenons aussi remercier M. Laurent Fordoxcel, Responsable des Aquariums au
Musum Aquarium de Nancy pour le don de vitamines.
Enfin, nous voudrions remercier les groupes dtudiants de GAIN en 3me anne de
lENSAIA et le groupe ARTEM de lEcole de Mines pour leur apport dinformations et de
complments nos recherches.
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SOURCES
Sitographie
- Acadmie de Renne, Photothque, http://espace-svt.ac-rennes.fr/photo/microalg/malg_0.htm
(11/05/10)
- Cavalla Michel, (2000), Les Algues-les micro-algues,
http://mcavalla.free.fr/rsr/Algues_operon.pdf (18/05/10)
- Wikipedia, Micro-algue, http://fr.wikipedia.org/wiki/Microalgue (11/05/10)
- Techno-Science, Biocarburant, http://www.technoscience.net/?onglet=glossaire&definition=1057 (11/05/10)
- Wikipedia, Photosynthse, http://fr.wikipedia.org/wiki/Photosynth%C3%A8se (11/05/10)
- UsineNouvelle.com, Biocarburants: la modlisation numrique sied aux algues,
http://www.usinenouvelle.com/article/biocarburants-la-modelisation-numerique-sied-auxalgues.140632 (11/05/10)
- Interstices, Projet Shamash: production de biocarburants lipidiques par des micro-algues,
http://interstices.info/jcms/c_24036/projet-shamash-production-de-biocarburants-lipidiques-pardes-microalgues (11/05/10)
- INRIA Sophia-Antipolis, http://www-sop.inria.fr/comore/shamash/ (11/05/10)
- Colln Jonas,
http://lpva.snv.jussieu.fr/Pages%20modules%20Master/doc%20LV213/LV213%202008%20algues
08.pdf (11/05/10)
- Blogagroalimentaire.com, http://www.blogagroalimentaire.com/?extraits-de-microalgues-plusforts-que-les-antioxydants-artificiels (11/05/10)
- Centre National de Ressources Textuelles et Lexicales,
http://www.cnrtl.fr/definition/%C3%A9piphyte (11/05/10)
- IFREMER, la production de biocarburant lipidique
- S. Chader, Le gnie des micro-algues: de l'aliment au carburant
http://www.cder.dz/vlib/bulletin/pdf/bulletin_004_09.pdf (18/05/10)
- Spectrosciences, Guillaume Calu (01/02/06), Biodiesel et microalgues,
http://www.spectrosciences.com/spip.php?article26 (18/05/10)
- Tela Botanica, Yusuf Chisti (2000), Le biodiesel algual lemporte sur le biothanol,
http://www.tela-botanica.org/page:menu_610 (18/05/10)
- GEPEA, Jack Legrand(2007) Capture biologique du CO2. Utilisation de micro-organismes photosynthtiques, http://www.biomasse-pour-energie.ensma.fr/Presentations/Legrand.pdf (18/05/10)
- ESA, La culture de spirulina en photobioracteur, http://ecls.esa.int/ecls/attachments/MELiSSAPhase5/education/photobioreacteur.pdf (18/05/10)
- IFP, Les biocarburants, http://www.ifp.fr/actualites/dossiers/les-biocarburants (18/05/10)
- Risal.info, (08/03/07) Les biocarburants: une grave menace masque de vert,
http://risal.collectifs.net/article.php3?id_article=2062 (18/05/10)
- Wikipdia, Biocarburant, http://fr.wikipedia.org/wiki/Biocarburant (18/05/10)
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- Liliana Rodolfi, Graziella Chini Zittelli, Niccolo` Bassi, Giulia Padovani, Natascia Biondi, Gimena Bonini, Mario R. Tredici (2008). Microalgae for Oil: Strain Selection, Induction of Lipid Synthesis and Outdoor Mass Cultivation in a Low-Cost Photobioreactor, Biotechnology and Bioengineering vol.102 n1, 100-112
- Arief Widjaja, Chao-Chang Chien, Yi-Hsu Ju (2009). Study of increasing lipid production from
fresh water microalgae Chlorella vulgaris, Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers
40, 13-20
- Chan Yoo, So-Young Jun, Jae-Yon Lee, Chi-Yong Ahn, Hee-Mock Oh (2010). Selection of microalgae for lipid production under high levels carbon dioxide, Bioresource Technology 101, 71-74
- Olivier Bernard (2008). Shamash, Production de biocarburants lipidiques par des micro-algues,
Projet ANR-PNRB
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ANNEXE 1
Les microalgues
Les microalgues: Une diversit
Microalgues rouges
Microalgues vertes
Diatomes
Microalgues brun/or
Dinophyce
Microalgues dores
Jean-Paul CADORET
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