UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO DE CINCIAS FSICAS E MATEMTICAS

DEPARTAMENTO DE QUMICA

TCNICAS DE SEPRAO E IDENTIFICAO APLICADAS

A PRODUTOS NATURAIS

MARCO AURLIO SAMPAIO PINTO

Florianpolis, novembro de 2005

UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO DE CINCIAS FSICAS E MATEMTICAS
DEPARTAMENTO DE QUMICA

TCNICAS DE SEPRAO E IDENTIFICAO APLICADAS

A PRODUTOS NATURAIS

Trabalho de concluso no Curso de Qumica

do Centro de Cincias Fsicas e Matemticas
da Universidade Federal de Santa Catarina
Orientador :Profa. Dra. Ins Maria Costa Brighente

MARCO AURLIO SAMPAIO PINTO

Florianpolis, novembro de 2005

ii

AGRADECIMENTOS

Agradeo a professora Ins e ao professor Moacir pelo espao cedido e pelas

orientaes para que este trabalho pudesse ser realizado;
Agradeo tambm ao pessoal do LQPN em destaque a Munique;
A todos os meus amigos: do curso, de infncia, de longe e de perto;
A Marilda,coordenadora do Linjur, que me ajudou nesses ltimos dois anos, e por quem
eu tenho um enorme carinho;
A todos os meus familiares, em especial a minha me.

iii

SUMRIO
RESUMO____________________________________________________________________ 1
1. INTRODUO_____________________________________________________________ 2
2. OBJETIVOS _______________________________________________________________ 3
3. PROCEDIMENTOS GERAIS PARA A OBTENO DE PRINCPIOS ATIVOS DE
PALNTAS ___________________________________________________________________ 4
3.1.SELEO DAS ESPCIES VEGETAIS __________________________________________ 4
3.2.IDENTIFICAO BOTNICA ___________________________________________________ 5
3.3.COLETA DA AMOSTRA _______________________________________________________ 6
3.4.SECAGEM DO MATERIAL VEGETAL ___________________________________________ 7
3.5. PROCESSO DE MOAGEM _____________________________________________________ 8
3.6. PREPARAO DOS EXTRATOS VEGETAIS ____________________________________ 8
3.6.1. OPERAES EXTRATIVAS ________________________________________________________ 9

3.6.1.1 MACERAO
3.6.1.2 PERCOLAO
3.6.1.3 SOXHELT 10

10
10

3.7. FRACIONAMENTO DOS EXTRATOS VEGETAIS OBTIDOS ______________________ 11

3.7.1 PARTIO LQUIDO-LQUIDO _____________________________________________________ 11
3.7.2 MTODOS CROMATOGRFICOS __________________________________________________ 13

3.8. REVELAO DE CROMATOGRAMAS_________________________________________ 15

3.9. PURIFICAO DE COMPOSTOS _____________________________________________ 16
3.9.1 RECRISTALIZAO ______________________________________________________________ 16

3.10. ELUCIDAO ESTRUTURAL ________________________________________________ 16

4. PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS_______________________________________ 20
4.1.MATERIAL E MTODOS ______________________________________________________ 20
4.1.1.COLETA E IDENTIFICAO DA PLANTA ____________________________________________ 20
4.1.2.OBTENO DOS EXTRATOS VEGETAIS ___________________________________________ 21
4.1.3. ESTUDO FITOQUMICO DO EXTRATO HEXNICO DE SCHINUS molle ________________ 21

5. RESULTADOS E DISCUSSO _____________________________________________ 23

5.1.ANLISE FITOQUMICA DO EXTRATO HEXNICO DE S. molle _________________ 24

6.CONCLUSO _____________________________________________________________ 31
7.BIBLIOGRAFIA ___________________________________________________________ 32
ANEXOS ___________________________________________________________________ 34

iv

LISTA DE TABELAS

Pg

Tabela 1: Partes das plantas utilizadas e pocas de colheita

Tabela 2: Reativos para a cromatografia em camada delgada

16

Tabela 3: Fraes eludas atravs de coluna cromatogrfica

23

Tabela 4: Reunio das fraes obtidas na coluna cromatogrfica

24

Tabela 5: Dados de RMN 1H para a mistura de cido isomasticadiennico e

27

cido masticadiennico comparado com dados da literatura

Tabela 6: Dados de RMN 13C para a mistura de cido isomasticadiennico e

28

cido masticadiennico comparado com dados da literatura

Tabela 7: Dados de RMN

H para a mistura de cido

3-epi-

29

isomasticadienlico e cido 3-epi-masticadienlico comparado com dados

da literatura.

Tabela 8: Dados de RMN 13C para a mistura de cido 3-epi-

30

isomasticadienlico e cido 3-epi-masticadienlico comparado com dados

da literatura

LISTA DE FIGURAS

Pg

Figura 1: Fluxograma geral de partio e separao provvel dos principais

12

metablitos secundrios presentes em plantas

Figura 2: Fluxograma para obteno de extratos e fraes de Schinus molle

22

Figura 3: monitoramento das fraes obtidas com os padres

25

Figura 4: Triterpenos isolados de Schinus molle, cido isomasticadiennico (1) e

26

cido masticadiennico (2)

Figura 5: Triterpenos isolados de Schinus molle, cido3-epi- isomasticadienlico

(3) e cido 3-epi-masticadienlico (4).

2
6

vi

LISTA DE ABREVIATURAS
CC

Cromatografia em coluna

CCD

Cromatografia em camada delgada

CCDP

Cromatografia em Camada Delgada Preparativa

CG

Cromatografia gasosa

EM

Espectrometria de massas

IV

Infra Vermelho

MHz

Megahertz

Rf
RMN

ndice de reteno
13

Ressonncia Magntica Nuclear de Carbono

RMN 1H

Ressonncia Magntica Nuclear de Hidrognio

UV

Ultra Voileta

vii

RESUMO

Embora muitos compostos derivados de plantas possam ser sintetizados em

laboratrio, tal sntese freqentemente to complexa que os rendimentos so baixos e
a produo torna-se economicamente invivel.
Por outro lado, alguns compostos tambm originados de plantas no podem ser
ou nunca foram quimicamente sintetizados. Sendo assim, a qumica dos produtos
naturais realiza um papel importante na obteno e descoberta de compostos que
apresentam alguma atividade biolgica.
Nesse trabalho, procurou-se descrever as tcnicas aplicadas a produtos naturais,
desde a etapa inicial, seleo e identificao do material vegetal, pois a falta de
identificao cientfica (ou uma identificao errnea) anular todo o trabalho do
qumico, tornando-o impublicvel e praticamente intil, seguindo pela preparao e
obteno de extratos vegetais, que utiliza a macerao e a partio lqudo-lquido,
fracionamento

dos

extratos

vegetais

atravs

de

cromatografia

de

adsoro

(cromatografia em coluna e cromatografia em camada delgada) e finalizando na

elucidao estrutural do composto isolado, a partir de dados espectroscpicos, tais
como IV, RMN 1H e RMN

13

C, e com posterior comparao com dados da literatura,

quando estes esto disponveis.

Utilizando-se essas tcnicas, obteve-se a partir o isolamento de duas mistura de
quatro triterpenos: cido isomaticadiennico com o cido masticadiennico e cido 3epi-isomasticadienlico com o cido 3-epi-masticadienlico, a partir do extrato hexnico
da espcie Schinus molle.

1. INTRODUO
As plantas representaram, durante sculos, a nica fonte de agentes
teraputicos para o homem. No incio do sculo XIX, com o desenvolvimento da
qumica farmacutica, as plantas passaram a representar a primeira fonte de
substncias para o desenvolvimento de medicamentos.
Nos ltimos anos tem-se verificado um grande avano cientfico envolvendo os
estudos qumicos e farmacolgicos de plantas medicinais que visam obter novos
compostos com propriedades teraputicas.
A qumica de produtos naturais, fitoqumica, tem por objetivo imediato o
esclarecimento e registro dos constituintes resultantes do metabolismo secundrio das
plantas, atravs de seu isolamento e elucidao de suas estruturas moleculares.
Com o desenvolvimento de novas tcnicas espectroscpicas, os qumicos
orgnicos tm conseguido elucidar rapidamente estruturas moleculares complexas de
constituintes naturais, at h pouco tempo difceis de serem identificadas.
Existe a necessidade de se obter produtos naturais purificados para que se
possa efetuar a completa identificao espectroscpica, realizar ensaios biolgicos para
a obteno de padres para a indstria farmacutica e material de partida para a
sntese. A obteno de produtos puros de um extrato vegetal pode ser um processo
longo, caro e necessitar, na maioria dos casos, de vrias etapas. s vezes, pode-se
conseguir quantidades nfimas de um composto desejado e, alm disso, ele pode ser
instvel.
A diversidade de molculas ativas nas plantas representa um desafio para o
qumico que pretende isolar e determinar a estrutura de compostos ativos, uma vez que
um extrato de uma determinada planta pode conter centenas ou milhares de
metablicos secundrios. Desta forma, numerosos mtodos de extrao e estudo de
compostos, oriundos de plantas, tm sido sugeridos pela literatura.
Por isso, importante que se tenha acesso a diferentes tcnicas de extrao e
isolamento. Hoje em dia, existe a possibilidade de se realizar esquemas rpidos e
adequados de separaes, por meio de uma escolha sensata de diferentes tcnicas
disponveis.

2. OBJETIVOS
Este trabalho tem por finalidade a aplicao de tcnicas de separao e
identificao, de metablitos secundrios, usadas rotineiramente em laboratrio de
produtos naturais de origem vegetal.
Especificamente tm-se os seguintes objetivos:
1)Pesquisa bibliogrfica envolvendo mtodos de separao e identificao de
compostos.
2)Obteno dos extratos das folhas e galhos de S. molle por macerao em
hexano e etanol.
3)Particionamento lquido-lquido do extrato etanlico com acetato de etila.
4)Fracionamento por cromatografia em coluna do extrato hexnico
6)Anlise espectroscpica atravs de infravermelho e ressonncia magntica
nuclear das fraes purificadas.

3. PROCEDIMENTOS GERAIS PARA A OBTENO DE PRINCPIOS ATIVOS DE

PLANTAS

Uma planta pode conter milhares de diferentes metablitos secundrios, os

estudos fitoqumicos podem nos dar uma idia desta complexa mistura. 1 Apenas os
compostos presentes em maior concentrao so geralmente isolados e estudados
pela fitoqumica clssica.2 O reino vegetal representa, desta forma, um enorme
reservatrio de molculas farmacologicamente ativas a serem descobertas.

2,3

A anlise de substncias ativas muito mais complexa e longa, j que

geralmente os compostos presentes em menor proporo na planta so os que
apresentam melhores efeitos biolgicos. Por isso a necessidade de um trabalho em
colaborao mais ampla entre qumicos e farmaclogos para a anlise de extratos,
onde se obtm extratos semipuros, fraes e finalmente compostos puros. Desta forma,
para se obter substncias puras dotadas de efeitos biolgicos, so requeridos alm da
dedicao

da

determinao

dos

pesquisadores,

uma

ampla

colaborao

multidisciplinar. 2,3

3.1.SELEO DAS ESPCIES VEGETAIS

Em uma investigao fitoqumica objetivando isolar os princpios ativos de uma

planta, o primeiro passo a escolha do material vegetal.4
Embora parea, inicialmente, uma etapa simples, o processo de seleo
certamente de extrema importncia para o sucesso do estudo das plantas na presena
de alguma atividade biolgica.3 Vrias abordagens para a seleo de espcies vegetais
tm sido apresentadas na literatura, dentre elas, trs tipos so alvo de maiores
investigaes: a) abordagem randmica escolha da planta sem qualquer critrio,
tendo

como

fator

determinante

disponibilidade

da

planta;

b)

abordagem

quimiotaxonmica ou filogentica seleo da espcie correlacionada com a

ocorrncia de uma dada classe qumica de substncias em um gnero ou famlia; c)
abordagem etnofarmacolgica seleo da espcie de acordo com o uso teraputico
evidenciado por um determinado grupo tnico.
4

Em geral a escolha de uma determinada planta feita atravs da abordagem

etnofarmacolgica. Uma vez definida a espcie vegetal a ser estudada, define-se
tambm o local da coleta (origem da espcie vegetal colida). Nesta fase inicial do
trabalho cientfico, o pesquisador deve estar completamente inteirado da literatura
sobre a planta escolhida, porque muitas vezes, plantas medicinais so investigadas
parcialmente, validando, portanto, o interesse em novas investigaes cientificas. Por
exemplo: a) se a espcie escolhida encontrada em regies diferentes no pas, tornase importante avaliar as modificaes qumicas que possam ocorrer em decorrncia de
fatores ambientais variveis 5 b) se a espcie vegetal medicinal estudada sofreu apenas
investigao fitoqumica, deixando de lado a abordagem farmacolgica, so vlidos
estudos que interliguem reas multidisciplinares como etnobotnica, qumica e
farmacologia,5,6 buscando resultados que possam validar ou no o uso da planta
medicinal. Em quaisquer circunstncias, a pesquisa bibliogrfica da planta alvo deve
ser realizada obedecendo-se os seguintes fatores: famlia, gnero e classes de
substncias predominantes.
As probabilidades de novas descobertas de substncias inditas, bioativas ou
no, , sem dvida, maior na seleo randmica.

Quando se procura obter substncias ativas de plantas, um dos principais

aspectos a serem observados consiste nas informaes da medicina popular. 6 J do
conhecimento que mais provvel encontrar atividade biolgica em plantas orientadas
pelo seu uso na medicina popular, que em plantas escolhidas ao acaso. 3

3.2.IDENTIFICAO BOTNICA

A planta escolhida deve ser seguramente identificada. Para atender esta

exigncia, depende-se de outro especialista: um botnico ou um tcnico especializado.
A falta de identificao cientifica (ou uma identificao errnea) anular todo o trabalho
do qumico, tornando-o impublicvel e praticamente intil.5,7
A identificao pode ser feita com a planta recentemente coletada ou com a
exsicata j preparada. aconselhvel a presena de flores e/ou frutos; a falta dessas
estruturas pode induzir ao erro ou dificultar extremamente o trabalho do botnico. 4
5

Com a escolha da planta definida e o local de coleta estabelecido, o

levantamento bibliogrfico efetuado e o projeto de pesquisa elaborado, parte-se ento,
para a coleta da planta.5
A preparao das exsicatas inicia com a coleta. Coleta-se pequenos ramos com
folhas, flores e frutos em vrios estgios de desenvolvimento. As amostras devem ser
representativas do aspecto geral da planta, de modo que ramos com danos, devem ser
evitados, porm, se as amostras representativas estiverem com estes danos, devem
ser coletadas assim mesmo, pois a representatividade fator prioritrio.
Concluda esta etapa inicial do trabalho, deve-se providenciar o seguinte registro
de informaes: 1) nome cientifico e famlia botnica; 2) nome de quem identificou a
espcie; 3) nmero de registro da exsicata; 4) local do herbrio; 5) local e data da
coleta; 6) nome popular da planta; 7) anotar a parte da planta utilizada na medicina
popular e suas indicaes teraputicas; 8) anotar o tipo de solo onde a planta foi
coletada, tipo de vegetao local, tipo de planta (arbusto ou rvore), horrio de abertura
floral (no caso de conter flores), poca de frutificao (no caso de conter frutos), cor e
cheiro de vrias partes da planta. Quando possvel, deve ser tirada uma ou mais fotos
da planta inteira no seu habitat natural.4,5

3.3.COLETA DA AMOSTRA

A primeira etapa da investigao fitoqumica a coleta do material vegetal. A

coleta o processo de se retirar uma ou mais plantas inteiras ou parte delas da
natureza. Mesmo que o objetivo da coleta seja a obteno de um extrato vegetal para
um estudo fitoquimico ou para a obteno ou de substancias ativas, obrigatria a
preparao de exsicata.4
Na etapa que determina o estudo fitoqumico, escolhe-se parte da planta que
ser investigada e a quantidade de material coletado.Coleta-se no mnimo 2 kg de
material vegetal fresco; no entanto, havendo boas condies de trabalho no laboratrio,
deve-se coletar entre 3-6 kg de material vegetal, buscando com isso, o isolamento em
grandes quantidades de substncias majoritrias, possibilitando suas avaliaes
farmacolgicas. Durante a coleta, os seguintes itens devem ser cuidadosamente
6

monitorados: separao e etiquetao do material coletado; embalagem em sacos

plsticos; transporte do material; pesagem do material mido; secagem do material;
pesagem do material seco; armazenagem; moagem; pesagem do material triturado;
obteno de extratos.5
Em geral, as espcies apresentam pocas especificas em que contm maior
quantidade de princpio ativo no seu tecido, podendo esta variao ocorrer tanto no
perodo de um dia como em pocas do ano. O conhecimento do momento correto de
coleta do material desejado leva obteno de produtos de melhor qualidade
(Tabela1)4.
Tabela 1: Partes das plantas utilizadas e pocas de colheita
Parte utilizada
Folhas e plantas inteiras
Flores
Frutos
Sementes
Cascas e razes

Quando colher
Pr-florao
Bem abertas
Bem maduros
Bem desenvolvidas
Outono e inicio de inverno

3.4.SECAGEM DO MATERIAL VEGETAL

A partir do momento da colheita inicia-se um processo de degradao enzimtica

na planta, que leva tambm degradao dos princpios ativos. O menor perodo de
tempo entre a colheita e a secagem crucial para a manuteno da integridade
mxima dos princpios ativos.
A incidncia de raios solares sobre o material colhido tambm acelera a
degradao de substncias das plantas. A secagem ao sol, alm de promover a
degradao de princpios ativos, acaba por gerar uma secagem rpida das bordas dos
rgos vegetais e a criao de uma crosta relativamente impermevel gua nessas
regies. O material, em pouco tempo, se apresenta aparentemente seco. No entanto
seu interior permanece mido. A secagem deve, portanto, ser procedida ao abrigo de
luz, em secadores que promovam ambiente limpo, bem ventilado e protegido do ataque
de insetos e outros animais. A gerao de um aumento artificial de temperatura de
7

extrema importncia. Para a secagem de folhas e flores a temperatura deve estar em

torno de 38C. Para cascas e razes, temperaturas de at 60 C so aceitveis.
Temperaturas acima desses limites aceleram o processo de secagem, promovendo a
degradao de muitos princpios ativos. O perodo de armazenamento deve ser o
menor possvel, pois com o passar do tempo podem ocorrer perdas qualitativas e/ou
quantitativas nas substncias ativas da planta.
A secagem das plantas deve ser individual, para no haver mistura de elementos
volteis. A separao das partes das plantas mais midas como ramos de partes
mais secas como folhas deve ser feita para que o material esteja pronto no mesmo
tempo de secagem.4
Caso haja interesse no leo essencial, deve-se evitar a secagem.5
3.5. PROCESSO DE MOAGEM
A moagem tem por finalidade reduzir, mecanicamente, o material vegetal a
fragmentos de pequenas dimenses, preparando-o, assim, para a prxima etapa, a
extrao.
Geralmente, o corte ou moagem grosseira assumem um carter preliminar,
deixando-se a reduo mais fina do tamanho de partcula para uma etapa seguinte.
Para fins de armazenagem, por exemplo, usual que a planta inteira, partes areas,
razes, folhas e caule sejam reduzidos a um tamanho de partcula grosseira. A reduo
definitiva somente ocorrer no momento prvio s fases de extrao ou de mistura. No
caso de sementes e outros farmacgenos ricos em leos essenciais, recomenda-se
que os mesmos sejam armazenados intactos ou na forma mais intacta possvel,
procedendo moagem em momento imediatamente anterior extrao.4

3.6. PREPARAO DOS EXTRATOS VEGETAIS

A preparao dos extratos brutos das plantas o ponto de partida na etapa de

isolamento e purificao dos constituintes qumicos fixos das plantas.7
Na escolha de um mtodo extrativo, deve-se avaliar a eficincia, a estabilidade
das substncias extradas, a disponibilidade dos meios e o custo do processo
8

escolhido, considerando a finalidade do extrato que se quer preparar. Como a

composio qumica das plantas extremamente complexa, muito freqentemente
ocorre a extrao concomitante de vrios tipos de substncias, farmacologicamente
ativas ou no, desejadas ou no. Por isso, deve-se primeiramente definir, com a maior
preciso possvel, o que se deseja obter. De acordo com essa definio e levando-se
em considerao os fatores envolvidos no processo extrativo, pode-se escolher o
mtodo e o solvente que sero empregados.4

3.6.1. OPERAES EXTRATIVAS

O termo extrao significa retirar, da forma mais seletiva e completa possvel, as

substncias ou frao ativa contida em um material vegetal, utilizando, para isso, um
lquido ou mistura de lquidos tecnologicamente apropriados e toxicologicamente
seguros.
Uma das formas mais aceitas de classificar as operaes de extrao segundo
a sua eficincia, permitindo reconhecer dois tipos: operaes de extrao parcial
(extrao sem esgotamento) e operaes de extrao exaustiva, que permitem o
esgotamento da matria-prima.
Apesar da ampla variedade de solventes conhecidos (lquidos extratores), so
poucos os utilizados na extrao dos compostos vegetais. Essa limitao de uso
devida a trs aspectos principais: propriedades extrativas, adequao tecnolgica,
inocuidade fisiolgica e fatores econmicos.
O solvente escolhido deve ser o mais seletivo possvel. graas seletividade
que se pode extrair apenas as substncias desejadas ou em maior quantidade. Como a
seletividade depende da polaridade, o conhecimento do grau de polaridade do grupo de
substncias que se deseja preferencialmente extrair determina o solvente ou mistura
solvente que mais se aproxima do timo de seletividade para aquela extrao. Em
anlises fitoqumicas, quando no se conhece previamente o contedo do material a
ser analisado, costuma-se submeter o material vegetal a sucessivas extraes, com
solventes de polaridade crescentes, conseguindo-se, assim, uma extrao fracionada,
em que as diferentes fraes contm compostos de polaridades tambm crescente.
9

As operaes extrativas geralmente mais utilizadas so: a macerao,

percolao e soxhelt, obtendo-se assim os chamados extratos brutos vegetais.

3.6.1.1 MACERAO

Operao na qual a extrao da matria-prima vegetal realizada em recipiente

fechado, em diversas temperaturas, durante um perodo prolongado (horas ou dias),
sob agitao ocasional e sem renovao do lquido extrator. Pela sua natureza, no
reduz ao esgotamento a matria-prima vegetal, seja devido a saturao do lquido
extrator ou ao estabelecimento de um equilbrio difusional entre o meio extrator e o
interior da clula.
Deve-se evitar o emprego de gua ou de misturas hidroalcolicas com
concentraes etanlicas inferiores a 20%, dadas s circunstncias favorveis
proliferao microbiana.4

3.6.1.2 PERCOLAO

Esta extrao tem como caracterstica comum a extrao exaustiva das

substncias ativas. Na percolao, o material vegetal modo colocado em um
recipiente cnico ou cilndrico (percolador), de vidro ou de metal, atravs do qual
passado o lquido extrator.
Diferentemente da macerao, a percolao uma operao dinmica, indicada
na extrao de substncias, farmacologicamente muito ativas, presente em pequenas
quantidades ou pouco solveis e quando o preo da substncia ativa a ser extrada
relevante.4

3.6.1.3 SOXHELT

utilizada, sobre tudo, para extrair slidos com solventes volteis, exigindo o
emprego do aparelho Soxhelt. A extrao por Soxhelt, em nvel laboratorial, tambm
no deixa de ser um tipo de percolao cclica, com destilao simultnea e
10

reaproveitamento do solvente. Essa tcnica tem a desvantagem de usar a

temperatura.4

3.7. FRACIONAMENTO DOS EXTRATOS VEGETAIS OBTIDOS

Depois de finalizada a etapa de extrao, o passo seqencial uma

semipurificao do extrato bruto obtido, que pode ser realizado utilizando-se uma
partio lquido-lquido e/ou mtodos cromatogrficos.8

3.7.1 PARTIO LQUIDO-LQUIDO

Na extrao lqudo-lquido ocorre a partio da amostra entre duas fases

imiscveis (orgnica e aquosa). A eficincia da extrao depende da afinidade do soluto
pelo solvente de extrao, da razo das fases e do nmero de extraes. 9
Uma vez que se obteve o extrato, os mtodos de partio entre solventes
eliminam uma grande parte do material indesejado. Quando se utiliza esse mtodo
combinado com testes biolgicos obtm-se, rapidamente, fraes enriquecidas com a
substncia desejada.1
Considerando que o extrato em estudo apresenta efeitos biolgicos de interesse,
deve-se proceder a um mtodo sistemtico de investigao. Este extrato pode ser
submetido a um processo de partio lquido-lquido, com solventes de polaridade
crescente, visando uma separao (semipurificao) das substncias atravs de suas
polaridades. A figura 1 ilustra os procedimentos mencionados, indicando as provveis
classes de compostos que podem ser separados.3

11

Figura 1: Fluxograma geral de partio e separao provvel dos principais metablitos

secundrios presentes em plantas.4
12

3.7.2 MTODOS CROMATOGRFICOS

O mtodo cromatogrfico distingue-se entre os diversos mtodos de separao e

de anlise como um dos mais frutferos em resultados satisfatrios e mais rico em
nmero de variadas tcnicas. Como processo de anlise imediata, tem permitido o
fracionamento de misturas em seus componentes, com maior preciso e com menor
consumo de tempo e trabalho, medida que vm sendo desenvolvidos novos matrias
e novas tcnicas.
Em sua expresso mais simples, podemos definir a cromatografia como um
processo de anlise imediata por migrao diferencial dos componentes de uma
mistura, dentro do sistema cromatogrfico.7
Em todo trabalho investigativo sobre produtos naturais preciso extrair
cuidadosamente os componentes vegetais em estudo para em seguida analisar e
purificar os componentes presentes nas extraes obtidas. Logo, esses componentes
puros devem ser analisados por tcnicas espectroscpicas e mtodos qumicos,
permitindo obter as estruturas qumicas correspondentes.
Para que a extrao seja completa deve-se usar solventes de polaridade muito
distinta. Assim que se escolhe um mtodo separativo adequado, usando-se
adsorventes e eluentes apropriados no ser difcil obter compostos puros. 10
Os extratos obtidos na partio lquido-lquido, devero ser submetidos a
diferentes tcnicas cromatogrficas.3
A Cromatografia em Coluna (CC), uma das tcnicas mais utilizadas, um
processo de separao entre duas fases, uma slida uma lquida, baseada na
capacidade de adsorso e solubilidade, onde o equilbrio dinmico estabelecido entre
a concentrao do soluto em duas fases.11
Em geral, inicialmente empregada a cromatografia em coluna aberta (CC), com
slica gel como fase estacionria que, dependendo do extrato, eluda com uma
mistura de solventes que deve ser previamente determinada por cromatografia em
camada delgada (CCD). Outros suportes cromatogrficos podem ser usados, como
alumina, celulose, poliamida e sephadex. A CC, usando coluna aberta, consiste no
13

mtodo cromatogrfico mais utilizado, devido sua rapidez, simplicidade, eficincia e

baixo custo.
As fraes obtidas devem ser reunidas segundo seu perfil cromatogrfico,
verificado por CCD. Em muitos casos, se obtm compostos puros usando somente uma
CC ou utilizando a cromatografia flash. Este tipo de cromatografia, similar CC
comum, permite separar composto com Rf muito prximos, uma vez que empregada
a mesma slica, de granulometria fina, usada na CCD, porm com o auxlio de uma
bomba de presso.
Dependendo da quantidade e da natureza do composto isolado, uma simples
recristalizao com solvente adequado pode levar purificao do composto ativo. As
fraes reunidas (subfraes), se no estiverem puras ou no conseguir purificar,
devem ser submetidas anlise biolgica para a localizao dos componentes ativos e,
aps esta etapa, a subfrao de interesse deve ser novamente submetida CC.
Embora as vantagens do uso da CC ou flash sejam evidentes, tambm apresentam
algumas desvantagens, como a adsoro irreversvel de alguns compostos na fase
estacionria empregada, e a possibilidade de degradao de substncias pouco
estveis.
Dependendo da complexidade da mistura, outras tcnicas cromatogrficas
podem ser mais adequada como:
a) cromatografia em camada delgada preparativa (CCDP): tcnica eficiente em
muitos casos em que os componentes da mistura possuem Rf muito prximos e que
sejam visveis sob ao da lmpada de UV, sendo um mtodo prtico, rpido e de
baixo custo. As desvantagens so as perdas de rendimento inerentes interao dos
compostos com a fase estacionria, possibilidade de se obter compostos impuros
durante a retirada dos compostos de interesse, e capacidade de separar somente
poucas quantidades de amostras.3
A Cromatografia em Camada Delgada (CCD) mais rpida e geralmente mais
aplicvel que outras tcnicas cromatogrficas lquidas e, assim, largamente usada
como um auxlio para seguir uma sntese de laboratrio, estabelecer evidncias
presumveis de pureza, etc, exatamente como na cromatografia gasosa (CG). 12

14

A cromatografia gasosa, atualmente , uma das tcnicas de anlise de maior

uso. utilizada para a separao e quantificao de produtos diversos, podendo
tambm ser usada como tcnica de identificao, em casos especiais.13
Na Cromatografia Gasosa (CG), a amostra vaporizada e injetada numa coluna
cromatogrfica. A eluio feita por fluxo de um gs inerte que atua como fase mvel.
Ao contrrio, da maioria dos outros tipos de cromatografia, a fase mvel no interage
com as molculas do analito. Sua nica funo transportar o analito atravs da
coluna.11
Consiste em uma ferramenta extremamente importante para a identificao
rpida e eficiente de misturas de compostos com peso molecular menor que 500 e que
no apresentam grupos carboxlicos, grupos hidroxila ou grupo amino (que podem ser
retidos na coluna cromatogrfica). Esta tcnica permite que seja acoplado um
espectrmetro de massas (CG/EM), onde grande parte dos componentes de uma
mistura pode ser identificada e quantificada.3

3.8. REVELAO DE CROMATOGRAMAS

Esta ultima etapa consiste em tornar visveis as substncias incolores presentes

na amostra. Muitos compostos podem ser visualizados atravs de luz ultravioleta, por
se tornarem fluorescentes quando excitados por essas radiaes (em geral nos
comprimentos de onda de 254 a 366nm). Quando as substncias no so fluorescentes
pode-se utilizar adsorventes impregnados com reagentes fluorescentes e neste caso
observamos manchas escuras contra fundo claro. Existem vrias lmpadas
ultravioletas portteis que emitem radiaes a 254 e 366nm, combinadas no mesmo
equipamento ou isoladas.13
Alguns reveladores utilizados na anlise cromatogrfica, esto listados na tabela
2.

14

15

Tabela 2: Reativos para a cromatografia em camada delgada.

Reveladores
Anesaldedo sulfrico
Vanilina sulfrica
Sulfato de crio (IV)
Cloreto frrico
Cloreto de alumnio
Acido p-toluenosulfnico
Tiocinanato de cobalto (II)
Reagente de Dragendorf
Hidrxido de potssio em 10% etanol
Acido sulfrico
Permaganato de potssio + gua
Cuba de iodo

Deteco
Esterides, terpenides, etc
Esterides, terpenides, flavonides
Triterpenos, diterpenos, sesquiterpenos
Fenis e flavonides
Flavonides
Catequinas, esterides, etc
Alcalides e aminas
Alcalides
Cumarinas,antronas,antraquinona
Reativo universal
Reativo universal
Sistema pi

3.9. PURIFICAO DE COMPOSTOS

3.9.1 RECRISTALIZAO

O solvente usado na recristalizao deve proporcionar uma fcil dissoluo da

substncia a altas temperaturas e pouca solubilidade da substncia a baixas
temperaturas. A tcnica de recristalizao baseia-se na diferena de solubilidade que
pode existir entre um composto cristalino e as impurezas presentes no produto da
reao.15
Durante o processo de recristalizao, o resfriamento, deve ser feito lentamente
para que se permita a disposio das molculas em retculos cristalinos, com formao
de cristais grandes e puros.4

3.10. ELUCIDAO ESTRUTURAL

Uma vez isolados os compostos ativos, deve-se proceder elucidao estrutural

dos mesmos, principalmente atravs do uso de dados espectroscpicos ou
espectromtricos. O uso de tcnicas espectrais em conjunto, como UV, IV, RMN 1H e

16

13

C e EM aliado ao uso de tcnicas sofisticas de RMN tem permitido propor com

segurana a estrutura molecular de substncias naturais complexas.

3,16

Na determinao estrutural, o espectro de absoro de uma substncia no UV,

uma vez determinado o esqueleto carbonado e o tipo de composto, indica a presena
de certos grupos funcionais, bem como a posio dos substituintes no esqueleto da
molcula. Assim, por exemplo, os espectros UV de flavonides proporcionam
informaes sobre a presena e a posio de grupamentos hidroxila no sistema de
anis, ao mesmo tempo em que possibilitam a diferenciao entre os vrios tipos de
flavonides.4
O espectro infravermelho (IV) mostra um rico agregado de bandas de absoro
situadas nas regies de 4000 a 400 cm-1.16 O IV de uma substncia orgnica
corresponde ao conjunto de bandas de absoro apresentadas pela amostra submetida
radiao infravermelha e estas bandas correspondem s mudanas na energia
vibracional dos compostos orgnicos. A energia seletivamente absorvida da radiao IV
provoca alteraes transitrias nas ligaes interatmicas, que podem sofrer
estiramentos ou deformaes nos ngulos de ligao. As freqncias em que ocorrem
as vibraes dependem da natureza das ligaes em particular, mas so tambm
afetadas pela vizinhana qumica e pela molcula como um todo. A presena de
insaturaes (conjugadas ou no), sistemas aromticos e grupos funcionais especficos
pode ser verificada atravs da presena de bandas caractersticas, que tm grande
importncia na anlise estrutural. Se o espectro IV de uma substncia desconhecida
superponvel com o espectro de IV de uma amostra autntica conhecida, isso pode
servir como uma prova de identidade, que muitas vezes preconizada para a
identificao de frmacos pelas farmacopias.
O espectro de massas (EM) de uma substncia pode fornecer importantes
informaes relacionadas com a sua estruturam como a massa molecular e padres de
fragmentao. O peso molecular permite estabelecer a frmula molecular da
substncia, enquanto o padro de fragmentao pode ajudar a caracterizar a presena,
bem como a localizao de certos grupos funcionais e cadeias laterais.
A espectroscopia de ressonncia magntica (RMN) uma das ferramentas mais
valiosas para a determinao estrutural de compostos orgnicos, contribuindo para o
17

estabelecimento do esqueleto da molcula.4

Este sistema permite a anlise de

pequenas quantidades de compostos puros, com grande preciso em escala de

miligramas ou microgramas.16
O espectro de prton fornece os deslocamentos qumicos dos vrios tipos de
prtons presentes na molcula, o nmero de cada tipo de prton (integrao) e as
constantes de acoplamento (J) com os prtons que ficam sobre carbonos adjacentes.16
Em alguns casos, a integrao permite determinar a percentagem de cada
componente em uma mistura simples. Irradiando seletivamente a freqncia de
ressonncia de um prton (dupla ressonncia), seus acoplamentos podem ser
eliminados e o resultado uma simplificao dos sinais dos prtons prximos ao prton
irradiado.
Os espectros de RMN

13

C fornecem os deslocamentos qumicos dos vrios tipos

de carbonos presentes na molcula. Estes esto distribudos em um campo de 0-220

ppm, muito mais amplo do que os prtons (0-16 ppm), permitindo uma melhor
visualizao dos tipos de carbonos.16
A grande variedade de tcnicas disponveis de RMN permite identificar a
proximidade espacial ou mesmo a conectividade de alguns tomos em particular,
auxiliando dessa maneira, na montagem do quebra-cabea constitudo pelas diferentes
partes da molcula.
As amostras slidas destinadas a obteno de seus espectros devem seguir
certos requisitos para a anlise espectroscpicas:
i)Pureza: a pureza do material dever ser a maior possvel, avaliada atravs da
determinao do ponto de fuso e do comportamento da substncia em cromatografia
de camada delgada. Para que a amostra seja considera suficientemente pura pelo
exame cromatogrfico em camada delgada, deve mostrar a formao de apenas uma
mancha, quando submetida ao desenvolvimento pelo menos em trs sistemas de
diferentes eluentes.
ii)Umidade: a presena de gua no material pode provocar alteraes
desvantajosas nos espectros de uma substncia. Faz-se, ento, necessria sua
retirada completa das amostras. Isto se pode conseguir de maneira simples, por
aquecimento do material em estufa cuja temperatura seja regulada para 5-10C abaixo
18

do ponto de fuso da substncia, deixando-se, em seguida,o material esfriar dentro do

dessecador a vcuo, sobre slica-gel desidratante, bem azul.
iii)Solubilidade: necessria antes da obteno do espectro de RMN. Devem ser
testados vrios solventes de modo a se obter 1-2 mL de soluo decimolar, ou
normalmente concentrao de 30 mg em 1 mL.
iv)Quantidades: as amostras destinadas a obteno de espectros devem ser
encaminhadas ao laboratrio de espectrometria separadamente em quantidades
adequadas e acondicionadas em pequenos frascos. De modo geral, so necessrias
pores de 1-2 mg para os espectros de UV, IV e EM e cerca de 30 mg so
necessrias para obteno de espectros de RMN 1H e RMN 13C.7

19

4. PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS

4.1.MATERIAL E MTODOS

Os espectros de absoro na regio do infravermelho foram obtidos em

espectrofotmetro Perkin Elmer FTIR 16 PC utilizando-se pastilhas comprimidas de
brometo de potssio anidro.
Os espectros de ressonncia magntica nuclear de hidrognio (RMN 1H) e
carbono 13 (RMN 13C) foram obtidos em aparelho Bruker AC a 200 MHz.
Os pontos de fuso foram determinados em aparelho de ponto de fuso MQAPF301 da Microqumica.
Para os fracionamentos e separaes cromatogrficas em coluna, foi utilizado
slica gel de granulao 70-230 mesh (0,063-0,2 mm) da Merck. Para cromatografia em
camada delgada (CCD) foi usado slica gel 60 GF Merck.
Os compostos nas placas cromatogrficas foram revelados sob lmpada de
ultravioleta a 254 e 354 nm e por mergulho das placas em soluo de sulfato de crio
2N em cido sulfrico e anisaldedo sulfrico, seguido de aquecimento da placa.
Os solventes utilizados para separaes em coluna de slica gel, em camada
delgada e parties lquido/lquido so todos P.A. sem passar por processos de
purificao ou secagem. Os solventes foram evaporados em evaporador rotatrio da
Quimis presso reduzida e temperatura controlada.
As fraes foram acompanhadas por cromatografia em camada delgada analtica
e os produtos analisados e caracterizados por espectroscopia de IV, RMN 1H, 13C.
Os procedimentos para as tcnicas de separao foram feitos conforme a
literatura e, sempre que necessrio, foram adaptados s condies que o nosso
laboratrio oferece.

4.1.1.COLETA E IDENTIFICAO DA PLANTA

A espcie Schinus molle foi coletada no bairro Santa Mnica em Florianpolis,
em Janeiro de 2005, sendo identificada no Departamento de Botnica da Universidade
Federal de Santa Catarina UFSC, pelo professor Daniel de Barcellos Falkenberg.
20

4.1.2.OBTENO DOS EXTRATOS VEGETAIS

Aps a coleta, as folhas e os galhos do material vegetal (390 g), foram secos em
estufa e em seguida triturados. Deixou-se em macerao por 15 dias com hexano. Logo
aps, o extrato hexnico, foi filtrado e evaporado sob presso reduzida (temperatura
aproximada de 60). A macerao foi repetida trs vezes. Obteve-se cerca de 17,8 g de
extrato hexnico seco (rendimento 4,6%). O material vegetal resultante foi macerado
com etanol e aps 15 dias foi filtrado e concentrado. Neste estgio, observou-se a
formao de um precipitado que foi separado por filtrao. O filtrado foi concentrado
rendendo o extrato etanlico (14,8g). O extrato etanlico foi suspenso com EtOH/ H 2O
20% e posteriormente particionado com acetato de etila fornecendo as fraes, acetato
de etila (9,5 g) e a frao aquosa (6,2 g), que aps secar renderam 2,4 g e 1,6 g por
100 g de material vegetal seco, respectivamente (Figura 2).

4.1.3. ESTUDO FITOQUMICO DO EXTRATO HEXNICO DE SCHINUS molle

Para a cromatografia em coluna fez-se uma pastilha, na proporo 1:2 que

consistiu na mistura do extrato vegetal em estudo com a slica gel Utilizou-se uma
coluna de vidro de 30 cm, com 2/3 de slica gel e 1/3 de pastilha aproximadamente. A
eluio da coluna foi realizada segundo uma ordem crescente de polaridade de acordo
com o sistema hexano/acetato de etila, conforme a Tabela 3.
Foram coletadas 70 fraes de 200 mL e concentradas por meio de um
evaporador rotativo sob presso reduzida, e, por fim, transferidas para frascos menores,
sendo posteriormente analisadas por cromatografia em camada delgada (CCD) e
reunidas, segundo semelhana de seu perfil cromatogrfico. Algumas destas fraes
foram purificadas atravs de recristalizao.

21

Material Vegetal
1) Macerao 15 dias em hexano
2) Filtrao

Ext. Hexnico

Cromatografia

Material Vegetal
1)Macerao 15 dias em etanol

em coluna (CC)

2)Formao
3)Filtrao

70 Fraes
Cromatografia

de ppt

em camada delgada (CCD)

Precipitado

Ext. Etanlico

Fraes reunidas
Partio lquido lquido
Recristalizao

Composto1 e 2

Composto 3 e 4

Frao Acetato de
etila

Frao Aquosa

Ponto de Fuso
Espectroscopia (IV, RMN 1H e RMN 13C)
Co eluio com padres em CCD.

IDENTIFICAO

Figura 2:Fluxograma para obteno de extratos e fraes de Schinus molle.

22

Tabela 3: Fraes eludas atravs de coluna cromatogrfica.

Hexano ( % ) Acetato de etila ( % )

Fraes Recolhidas

100

1-8

99

9 13

98

14 19

97

20 26

96

27 31

94

32 37

92

38 43

90

10

44 46

85

15

47 49

75

25

50 53

70

30

54 59

50

50

60 69

100

70

O monitoramento por cromatografia em camada delgada (CCD) foi realizado em

placas prontas de alumnio, utilizando como fase mvel o sistema hexano/acetato de
etila (80:20).
As fraes que apresentaram precipitados foram tratadas a fim de isolar
possveis compostos ativos. Estes foram estudados atravs da anlise conjunta de
dados espectroscpicos, tais como infravermelho (IV), ressonncia magntica nuclear
de prton (RMN 1H) e carbono 13 (RMN

13

C) e por comparao com os dados da

literatura, quando possveis.

5. RESULTADOS E DISCUSSO

O material vegetal seco, Schinus molle constitudo por folhas e galhos, rendeu
4,6 g de extrato hexnico e 8,4 g de extrato etanlico por 100 g de material vegetal.

23

Analisou-se cromatograficamente apenas o extrato hexnico de Schinus molle ,

procura de triterpenos para posterior modificao estrutural em trabalhos futuros.

5.1.ANLISE FITOQUMICA DO EXTRATO HEXNICO DE S. molle

O fracionamento cromatogrfico atravs de cromatografia em coluna do extrato
hexnico de Schinus molle, resultou em 70 fraes eludas com o sistema de solventes
hexano/acetato de etila em ordem crescente de polaridade, (Figura 2 pg 22). Estas
fraes primeiramente foram recristalizadas com solventes apropriados e seus pontos
de fuso determinados. Em seguida, as fraes cromatogrficas foram

analisadas

atravs de cromatografia em camada delgada e reunidas conforme a semelhana de

seu perfil cromatogrfico (Tabela 4). As fraes foram reveladas com anisaldedo
sulfrico, apropriado para revelar triterpenos, o qual mostrou que as fraes 42 a 48, 54
e 55 eram triterpenos.

Tabela 4: Reunio das fraes obtidas na coluna cromatogrfica.

Fraes Reunidas

p.f. (C)

6 17

72 73

25 31

72 76

34 36

76 79

37 39

73 80

42 48

150 157

54 55

167 177

57 63

173 182

65 70

180 186

As primeiras fraes, de 6 a 39, atravs de anlises de seus espectros de IV,

RMN 1H, mostrou tratar-se de uma mistura de lcoois, steres e cidos carboxlicos de
cadeia longa (Os espectros de infravermelho das fraes 17, 29 31, 34 36 e 39 e o
espectro RMN 1H da frao 34 36 encontram se em anexo, Anexo 1a 5).

24

A frao obtida da reunio das fraes 42 48 que se apresentou na forma de

um slido branco, foi suspensa em metanol e filtrada para uma pr-lavagem do material
slido. Em seguida o slido obtido foi redissolvido em acetona e deixado recristalizar.
Posteriormente monitorou-se novamente essa frao por cromatografia em camada
delgada (CCD), utilizando como fase mvel hexano/acetato (80:20) e anisaldedo como
revelador, comparando com os padres; T 1-2 (cido isomasticadiennico e cido
masticadiennico) e T3 (cido 3-epi-isomasticadienlico e cido 3-epi-masticadienlico)
(Figura 3). Na reunio das fraes 54 e 55, seguiu-se novamente a mesma seqncia
feita anteriormente.

Figura 3: monitoramento das fraes obtidas com os padres.

Pela anlise atravs de CCD, observou-se o Rf de 0,55 e 0,40 para os

triterpenos cidos, T1-2 e T3 respectivamente, que por se tratar de ismeros (Figura 4 e
5), no foi possvel diferenci-los por CCD. As fraes 40, 41, 42 e 48 apresentaram o
mesmo Rf de 0,55, semelhante ao padro (T 1-2), porm, as fraes 40 e 41 diferiram
das demais na semelhana cromatogrfica. As fraes 54 e 55 apresentaram o mesmo
Rf de 0,40, semelhante ao padro (T3), e semelhana cromatogrfica.

25

21

21

H3C

18

H3C
12
19

CH3
1

22
20

24
23

25

13

14

27

10

26

19

CH3

15

1
2

10

CH3
4

28

24
23

CH3
25

27

13

14

H3C

28

29

cido 3-oxo-8,24Z-tirucaladien-26-ico

COOH
26

16

H
15

CH3
30

H
CH3

H3C

22
20

17

11

30

18

12

COOH
16

H3C
H3C

17

11

CH3

H
CH3
29

cido 3-oxo-7,24Z-tirucaladien-26-ico

Figura 4: Triterpenos isolados de Schinus molle, cido isomasticadiennico (1) e

cido masticadiennico (2).
21

21

H3C

18

22
20

24
23

CH3
25

27

12
11

17

12

COOH
26

16

19

14

10

15

10

CH3
25

27

HO

H
CH3

H3C

28

29

cido 3-hidroxilanosta-8,24Z-dien-26-ico

COOH
16

26

H
14

15

CH3

30

28

24
23

17
13

CH3
4

11

H3C

22
20

H3C

13

H3C

H3C

18

H3C

19

HO

H3C

30

7
6

H
CH3
29

cido 3-hidroxilanosta-7,24Z-dien-26-ico

Figura 5: Triterpenos isolados de Schinus molle, cido 3-epi-isomasticadienlico

(3) e cido 3-epi-masticadienlico (4).

Aps recristalizao a frao 42 48 apresentou-se na forma de cristais brancos

e com ponto de fuso de 150 a 157 C. A anlise do espectro de infravermelho mostrou
uma absoro em 2952,52 cm

-1

caracterstica do estiramento da ligao C-H. A banda

de absoro em 1678,24 cm

-1

indica a presena do grupo funcional carbonila que

sugere ser de um cido carboxlico, porque em aproximadamente em 3200 cm

26

obteve-se uma banda muito larga e de pouca intensidade, correspondente a hidroxila

de um cido.
O espectro de RMN 1H apresenta um perfil caracterstico de triterpenos para a
frao 42 48, que foi analisado e identificado como uma mistura de triterpenos.
Pode-se observar a presena de uma ligao dupla trissubstituda pela absoro
do hidrognio olefnico posicionada em aproximadamente 6,1 ppm, que se refere ao H 24
(C24C25) presente em ambos triterpenos, porm o sinal em aproximadamente 5,3 ppm,
refere-se ao H7 de dupla ligao (C7C8), caracterstico de apenas um dos triterpenos
(cido masticadiennico) presente na mistura. (Tabela 5)
Atravs do RMN 1H foi possvel calcular a proporo desses compostos na
mistura, que de 3:1 (67% de cido isomasticadiennico e 33% de cido
masticadiennico). Espectros em anexos (Anexo 6).
Tabela 5: Dados de RMN 1H para a mistura de cido isomasticadiennico e
cido masticadiennico comparado com dados da literatura.
Prton

metil ster do cido

cido

Dados

isomasticadiennico17

masticadiennico18

experimentais

CDCl3

C6D6

CDCl3

CDCl3

5,30

5,3

18

0,77(s)

0,79(s)

0,81(s)

0,759 e 0,791(s)

19

1,11(s)

1,01(s)

1,12(s)

1,118 e 1,1131(s)

21

0,87(s)

0,88(s)

0,89(d)

0,892 e 0,903(s)

24

5,93

5,84

6,09(t)

6,1(t)

27

1,9(s)

1,9(s)

1,92(s)

1,953 e 1,923(s)

28

1,07(s)

0,87(s)

1,01(s)

1,006 e 1,010(s)

29

1,07(s)

1,07(s)

1,01(s)

1,006 e 1,010(s)

30

0,91(s)

0,87(s)

1,05(s)

0,924 e 0,939(s)

J no espectro de RMN

13

C possvel observar duas carbonilas de cetona da

mistura, em aproximadamente 218,0 e 218,5 ppm. Em 173,3 ppm a absoro

corresponde a sobreposio dos sinais referentes as carbonilas da funo do cido
27

carboxlico. Em 147,6 e 126,0 ppm pode-se observa os picos referentes a dupla ligao
prxima ao grupo cido carboxlico. A absoro em 132,8 e 134,8 ppm caracteriza a
dupla ligao entre o carbono 8 e 9 do composto 1. Fato este deduzido pela
comparao com os dados de RMN

13

C do triterpeno cido 3-epi-isomasticadiennico,

que possui um grupo OH ligado ao carbono 3, ao invs de uma carbonila no C3. J a

dupla ligao entre os carbonos 7 e 8 do composto 2 caracterizada pela absoro em
119,0 e 144,0 ppm. Espectros em anexo (Anexo 6)
Os nmeros de carbonos e os dados encontrados na literatura possibilitaram a
identificao e confirmao dos compostos 1 e 2 como sendo os triterpenos cido
isomasticadiennico e cido masticadiennico respectivamente (Tabela 6).
Esta mistura de triterpenos rendeu 0,3 g em 100 g de extrato hexnico (6,5%).

Tabela 6: Dados de RMN

13

C para a mistura de cido isomasticadiennico e

cido masticadiennico comparado com dados da literatura.

Carbono

cido

cido 3-epi-

Dados

masticadiennico18

isomasticadienlico19

Experimentais

CDCl3

CDCl3

CDCl3

217,1(s)

218,0 e 218,5

117,8(d)

27,26

28,3 e 119,0

145,9(s)

133,30

132,8 e 144,0

134,33

50,2 e 134,8

24

147,2(d)

147,37

147,6

25

125,8(s)

125,81

126,0

26

173,4(s)

173,12

173,3

Aps a recristalizao a frao 54 55 apresentou-se na forma de cristais

brancos e com ponto de fuso de 167 a 177 C. Seu espectro de infravermelho mostra
uma banda de absoro larga em 3415,11 cm-1 que acusa a presena de hidroxila na
molcula, a absoro em 2947,10 cm-1 referente a ligao C-H aliftico, j a absoro
em 1689,11 cm-1 indica a presena do grupo funcional carbonila que sugere ser de um
28

cido carboxlico, porque em aproximadamente em 3200 cm

obteve-se uma banda

muito larga e de pouca intensidade, correspondente a hidroxila de um cido

O espectro de RMN 1H apresenta um perfil de absoro caracterstico de uma
mistura de triterpenos. Observa-se uma banda de absoro de hidrognio em
aproximadamente 3,5 ppm, indicando a presena de um grupo OH no C-3 (Tabela 7).
Tambm se pode observar a presena de uma ligao dupla trissubstituda pela
absoro do hidrognio olefnico posicionada em aproximadamente 6,1 ppm referente
ao

H24 (C24=C25),

presente

em ambos os triterpenos, porm o

sinal em

aproximadamente 5,36 ppm, refere-se ao H7 de dupla ligao (C7=C8), caracterstico de

apenas um dos triterpenos (cido 3-epi-masticadienlico). Alguns sinais de hidrognio
de metil, embora observados, no foi possvel desiguin-los para cada hidrognio.
Atravs do RMN 1H foi possvel calcular a proporo desses compostos na
mistura, que de 4:1 (80% de cido3-epi-isomasticadienlico e cido 3-epimasticadienlico). Espectros em anexo, (Anexo 7).
Esta mistura de triterpenos rendeu 0,17 g em 100 g de extrato hexnico (3,7%).
Tabela 7: Dados de RMN 1H para a mistura de cido 3-epi-isomasticadienlico e
cido 3-epi-masticadienlico comparado com dados da literatura.
Prton

cido 3-epi-

cido 3-epi-

isomasticadienlico19 masticadienlico20

Dados
experimentais

CDCl3

CDCl3

CDCl3

3,448(t)

3,69

3,5

5,36

5,3

18

0,778(s)

0,80(s)

0,774 e 0,819

19

0,966(s)

0,87(s)

21

0,933(d)

0,97(d)

24

6,093(t)

6,06(d)

6,1(t)

27

1,922

2,14(s)

28

0,977(s)

1,17(s)

0,973 e 1,1125

29

0,869(s)

0,98(s)

30

0,872(s)

1,05(s)

29

No espectro de RMN

13

C pode-se identificar a carbonila do grupo cido

carboxlico a 172,1 ppm. A ligao dupla trissubstituda observada pelos sinais em

118,0 e 147,0 ppm, entre os carbonos 7 e 8 (C7=C8) e uma dupla ligao
tetrassubstituda, entre os carbonos 8 e 9, que pode ser deduzida a partir dos sinais em
133,4 e 134,5 ppm. A presena do grupo OH no C-3 confirmada pelo sinal em 76,194
ppm. Espectros em anexo, (Anexo 7)
A comparao entre estes dados espectroscpicos com os dados da literatura
possibilitou a identificao deste triterpeno como sendo a mistura do cido 3-epiisomaticadienlico e cido 3-epi-masticadienlico.(Tabela 8)
Tabela 8: Dados de RMN

13

C para a mistura de cido 3-epi-isomasticadienlico

e cido 3-epi-masticadienlico comparado com dados da literatura.

Carbono

cido 3-epi-

cido 3-epi-

isomasticadienlico19 masticadienlico20

Dados
Experimentais

CDCl3

CDCl3

CDCl3

76,07

73,5

76,194

27,26

118,5

27,44 e 118,0

133,30

146,5

133,4 e 147,0

134,33

49,1

50,2 e 134,5

24

147,37

142,6

146,2

25

125,81

128,6

126,3

26

173,12

170,7

172,1

Finalmente, para total certeza sobre a identidade das amostras, analisou-se

atravs de cromatografia em camada delgada (CCD) em dois distintos sistemas de
solventes, as amostras juntamente com os padres, e apresentaram o mesmo valor de
Rf de seus padres.

30

6.CONCLUSO

A aplicao de tcnicas de separao e identificao de metablitos secundrios

ao extrato hexnico de folhas e galhos de Schinus molle, permitiu o isolamento e
identificao

de

duas

misturas

de

quatro

compostos:

1)mistura

do

cido

isomasticadiennico com o cido masticadiennico e 2) a mistura do cido 3-epiisomasticadienlico com o cido 3-epi-masticadienlico.
Os

compostos

tiveram

suas

estruturas

espectroscpicos, tais como IV, RMN 1H e RMN

propostas

partir

de

dados

13

C, e por comparao com dados da

literatura.
Estes resultados e o isolamento destes triterpenos sero utilizados para posterior
modificao estrutural em trabalhos futuros.

31

7.BIBLIOGRAFIA
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33

ANEXOS

34

ANEXOS 1 - 5

35

36

37

38

Anexos 6

39

40

41

42

ANEXOS 7

43

44

45