Colegio de educacin profesional

tcnica
Qumica industrial

Modulo: Anlisis de procesos

microbiolgicos
APMI-02
2016

Tincin
La tincin es un
proceso por el cual las
molculas de un
colorante se absorben
a una superficie. El
uso de colorantes
permite cambiar el
color de las clulas de
los microorganismos y
poder realizar la
observacin en
microscopio ptico.

Profesor: Mara Cecilia Osornio

Velzquez
Investigacin
Tincin
Tcnicas de tincin
Bacterias Gram
Estructura bacteriana
Grupo: 507Q-M
Elias Joshua Sanchez
Martnez

Dado que las bacterias

son casi incoloras, no
presentan contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no

pueden observarse claramente sin algn tratamiento previo. De acuerdo a la

reaccin que ocurre, existen diferentes tipos de tincin:

Simple: el colorante utilizado sirve solo para denotar la morfologa celular.

Diferencial: el colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre
clulas bacterianas o entre partes de una misma clula, estas tcnicas
utilizan ms de un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para
la tincin.

Los colorantes ms usados son: azul de metileno, cristal violeta, safranina, estos
son catinicos y se combinan fuertemente con componentes celulares cargados
negativamente, como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de
teirlas, proceso conocido como fijacin. Despus de esta habitualmente se
realiza la tincin. La fijacin produce generalmente encogimiento de las clulas, la
tincin por el contrario, hace que las clulas parezcan mayores de lo que son
realmente.
Algunos colorantes teirn mejor solo despus de que la clula haya sido tratada
con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. El mordiente se
combina con un constituyente celular y lo altera de manera que ahora s podr
atacar el colorante.

Tcnicas de tincin
Tinciones simples
Se usa un nico colorante, que siempre es de tipo bsico. Se utilizan solamente
para incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el colorante y
quedarn teidas del mismo color. Se fija el espcimen, se aade el colorante y se

deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la

preparacin ya est lista para ser observada.
Tinciones diferenciales
Se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos. La tcnica de tincin
diferencial consta de dos etapas: una tincin simple seguida de una tincin de
contraste. En la tincin de contraste se utiliza otro colorante que tie (y por tanto,
revela) las clulas no teidas por el primer colorante. Estas tinciones son muy
utilizadas en microbiologa.
Tinciones especficas
Se utilizan para incrementar el contraste en las clulas microbianas y revelan
estructuras particulares, entre las que se incluyen en los flagelos y las cpsulas.
Tincin adecuada
En su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin puede implicar la
inmersin de la muestra en la solucin colorante, seguido del aclarado que es un
lavado para eliminar el exceso de colorante y la observacin. Muchos tintes, sin
embargo, requieren del uso de un mordiente. Cuando la solucin de colorante en
exceso se elimina durante el aclarado, la tincin mordentada permanece.
Tincin de Gram
La tincin de este tipo ms extensamente utilizada es la tincin de Gram,
denominada as por el bacterilogo dans Hans Christian Gram, quien la
desarrollo. Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias
pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y gramnegativos. Debido a su
importancia en taxonoma bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de
la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aqu con cierto detalle la
tincin de Gram. Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien primero
con una solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y
son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado todas las
clulas, tanto las gramnegativos como las Gram positivas, estn teidas de azul.

El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo (I2) yoduro potsico
(KI). El ingrediente activo es aqu el yodo, el yoduro potsico simplemente hace
soluble el yodo en agua. El yodo entra en las clulas y forma un complejo
insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas Gram positivas
como las Gram negativos se encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo
despus de la decoloracin, usando bien alcohol o bien acetona, sustancias en las
que es soluble el complejo yodo cristal violeta. Algunos organismos (Gram
positivos) no se decoloran mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La
diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est, por lo tanto, en la
resistencia a la decoloracin. Despus de la decoloracin las clulas Gram
positivas son todava azules, pero las gramnegativos son incoloras. Para poner de
manifiesto las clulas gramnegativos se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica.
Despus de la coloracin de contraste las clulas gramnegativos son rojas
mientras que las Gram positivas permanecen azules.

Tincin cido alcohol resistencia

Esta tincin sirve principalmente para clasificar micobacterias y actinomicetos, que
tienen un alto contenido en lpidos y en cidos miclicos y que no pueden ser
calificadas por la tincin de Gram. Para empezar se hecha sobre el portaobjetos
una mezcla de fucsina fenol, en la que la fucsina hace de colorante rosa y el
fenol de mordiente. Las clulas se tien de rosa, tanto el cido alcohol sensible
como las resistentes. Despus se usa un decolorante orgnico que hace que las
bacterias cido alcohol sensibles se decoloren mientras que las cido alcohol
resistentes se quedan rosa. Como en la tincin de Gram se utiliza un colorante de

contraste que en este caso es el azul de metileno que tie las clulas cido
alcohol sensible de color azul quedando las clulas cido alcohol resistente de
color rosa.

Tincin de esporas
Se utiliza para teir las estructuras de resistencia llamadas endosporas
bacterianas. Sobre el portaobjetos con la preparacin se echa verde malaquita
que tie las clulas de verde. Luego se lava con agua destilada con lo que las
clulas se quedan incoloras y las endosporas permanecen verde. Finalmente se
usa la safranina para obtener bacterias de color rosa mientras que las endosporas
continan con su color verde de la verde malaquita.

Colorantes:
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna
afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con
frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con

intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como

los cidos nucleicos y los polisacridos cidos.
Azul de metileno: El azul de metileno se utiliza para teir clulas animales, para
hacer ms visibles sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de
sangre para ser utilizados en citologa y como colorante vital en el recuento de
reticulocitos.
Azul Nilo: Tie los ncleos de color azul. Tambin puede ser utilizado para teir
clulas vivas.
Cristal violeta: El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tie
las paredes celulares de color prpura. El cristal violeta es un componente
importante en la coloracin de Gram.
Eosina: La eosina se utiliza ms frecuentemente como contra coloracin de la
hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al material
citoplasmtico, membrana celular, y algunas estructuras extracelulares. Adems
imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. La eosina puede ser utilizada tambin
en algunas variantes de la coloracin de Gram, y en muchos otros protocolos de
tincin.
Safranina: La safranina es un colorante nuclear. Colorea los ncleos celulares de
rojo, y se utiliza principalmente como contra coloracin. Tambin puede ser
utilizada para darle una coloracin amarilla al colgeno.
Verde de metilo; El verde de metilo se utiliza frecuentemente en microscopia de
campo claro, para teir la cromatina de las clulas y facilitar as su visualizacin.

Bacterias Gram
Bacterias Gram-negativas aerobias

Gnero Campylobacter:
Especies: C. fetus, C. jejuni y C. coli

Gnero Helicobacter.
Especie: H. pylori.

Bacilos y cocos Gram-negativos aerobios:

Bacilos: Familia Pseudomonadaceae. Bacilos Gram-negativos, con

flagelos polares.
Producen citocromo y oxidasa.
Gnero: Pseudomonas: P. aeruginosa
Familia Moraxellaceae.
Gnero Moraxella.
Especies: M. lacunate, M catharralis
Gnero Acinetobacter
Especie: A baunannii.
Familia Xanthomonadaceae
Gnero Stenotrophomonas.
Especie: S. maltophila.
Familia Burkholderia
Especie B. cepacea
Familia Legionellaceae. Bacilos mviles de vida libre. Patgenos para el
hombre.
Especie: L. pneumophila.
Cocos: Familia Neisseriaceae. Gnero Neisseria
Especies: N. meningitidis, N. gonorrhoeae.
Gnero Kingella
Especie: K. kingae
Familia Bartonellaceae
Gnero Bartonella
Familia Brucellaceae. Cocobacilos Gram-negativos. Parsitos del hombre y
de animales.
Gnero Brucella.
Especie: B. melitensis, B. abortus.
Familia Bradyrhizobiaceae
Gnero Afipia.
Especie: A. felis

Bacilos Gram-negativos anaerobios facultativos:

Gnero Escherichia.
Especie: E. coli
Gnero Shigella.
Especies: S. dysenteriae, S. sonney
Gnero Salmonella.
Especie: S. enterica, S. typhimurium, S. typhi, S. cholerasuis
Gnero Citrobacter.
Especie: C. freundii

Gnero Klebsiella.
Especie: K. pneumoniae
Gnero Enterobacter.
Especies: E. cloacae, E. aerogenes
Gnero Serratia.
Especie: S. marcescens
Gnero Proteus.
Especies: P. mirabilis, P. vulgaris
Gnero Yersinia.
Especies: Y. enterocolitica, Y. pseudotuberculosis, Y. pestis

Bacilos Gram-negativos anaerobios:

Gnero Fusobacterium.
Especie: F. nucleatum
Gnero Bacteroides.
Especie: B. fragilis
Gneros Prevotella y Porphyromonas:

Cocos Gram-negativos anaerobios:

Familia Veillonellaceae.
Gnero Veillonella
Especie V. prvula

Cocos Gram-positivos:

Gnero Micrococcus
Especie: M. Luteus.
Gnero Staphylococcus.
Especies: Staph. Aureus, Staph. Epidermidis, Staph. Saprophyticus
Gnero Streptococcus.
Especies: S. Pyogenes, S. Pneumoniae, S. Agalactiae
Gnero Enterococus
Especie: E. Faecalis.

Estructura bacteriana:
Pared celular
Es una capa rgida que se localiza en el exterior de la membrana plasmtica en las
clulas de bacterias. La pared celular protege los contenidos de la clula, da
rigidez a la estructura celular, media en todas las relaciones de la clula con el
entorno y acta como compartimiento celular, est hecho por peptidoglicano, que

est formado por cadenas de polisacridos entrecruzadas por pptidos inusuales

que contienen aminocidos D.
Existen diferencias en las paredes celulares de las diferentes bacterias, lo cual
origina diferentes reacciones a la tincin Gram, gracias a ellas podemos dividirlas
en 2 grandes grupos, las positivas y negativas:
Gram positivas:
En las bacterias Gram positivas la pared celular contiene una capa gruesa de
peptidoglicano adems de cidos teicoicos, que son los polmeros de glicerol o
ribitol fosfato, los cidos teicoicos se unen al peptidoglicano o a la membrana
citoplasmtica.

Gram Negativas
En las bacterias Gram negativas la capa de peptidoglicano es relativamente fina y
se encuentra rodeada por una segunda membrana lpida exterior que contiene
lipopolisacaridos y lipoprotenas. La capa de petidoglicano se una a la membrana
externa por medio de lipoprotenas

La alta concentracion de acido micolico en la pared celular es la causante, como

las bacterias del genero Mycobacterium, de la baja absorcion y alta retencion de la
tincion. Los peptidoglicano puede ser destruido por accion de algunos agentes
como la lisozima, esta enzima rompe los enlances acetilglucosamina y de NAcetilmuramico presentes en el peptidoglicano y en concecuancia debilita la pared
celular.

Bibliografa

Autor: Aguanatura
Ttulo: Tcnicas de tincin
Fecha: 2007
Link:http://acuanatura.galeon.com/cursosonlin
e/tecnicasdetincion/tecnicasdetincion.pdf
Autor: Quistin Hylary
Ttulo: Mtodos y tcnicas de tincin
Fecha: 29 de octubre de 2014
Link:http://microbiologia3bequipo5.blogspot.mx/2014
/10/metodos-y-tecnicas-de-tincion.html