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Cantidad de soluto
eluyente
Polímero
microparticulado
Volumen de elución
moléculas
matriz del gel pequeñas
microesferas
porosas moléculas
grandes
HINCHADO Y
EQUILIBRADO
DIÁLISIS
membrana
de diálisis
disolvente
Cromatografía de penetrabilidad: Permite separar a
disolución las biomoléculas en función de su tamaño (y forma),
a desalar conforme eluyen en orden decreciente de tamaño.
Métodos de Separación Cromatografía
CROMATOGRAFÍA DE PENETRABILIDAD
Ferricianuro
Potásico
(M.W.=329)
Azul
Dextrano
(M.W.=2x106)
Aλ
Azul
Dextrano
Ferricianuro
Vo Vt ml
Volumen de Volumen
exclusión total
Métodos de Separación Cromatografía
CROMATOGRAFÍA DE PENETRABILIDAD: Calibrado de la columna
RECTA DE CALIBRADO
4.5
0.39
Métodos de Separación Cromatografía
CROMATOGRAFÍA DE PENETRABILIDAD: Separación de biomoléculas por tamaño
Criterio de pureza
Preparación enzimática
HOMOGÉNEA
Criterio de pureza
NEGATIVO
Métodos de Separación Cromatografía
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO: Separación por interacción electrostática
ELUCIÓN ESPECÍFICA
con agentes que
compitan por la unión Volumen (ml)
Métodos de Separación Cromatografía
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN: HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
Columnas de HPLC