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Julio-Diciembre de 2013.
DEDICATORIA
A Dios que nos da la vida, y fuerza para seguir el camino hacia nuestros sueos. Ya
que el todo lo puede.
A nuestros padres que son el soporte principal para nuestras vidas,
Agradecimientos
Agradecemos a Dios todopoderoso por concedernos la vida y lograr cumplir con ms
una meta de nuestras vidas.
A nuestros padres por brindarnos los consejos certeros para lograr ser seres integrales.
A nuestros maestros por brindarnos los conocimientos que nos sirvieron para realizar
este trabajo.
A nuestro tutor Msc. Oscar Heriberto Arbizu Medina por darnos su conocimiento,
confiar en nosotros y brindarnos el apoyo necesario para concluir nuestro trabajo.
ndice
Introduccin.1
Antecedentes...2
Justificacin.3
Objetivos...4
Marco terico...5
Diseo Metodolgico.16
Operacionalizacin de variables.22
Anlisis y discusin de resultados....25
Conclusiones29
Recomendaciones...30
Bibliografa....31
Anexos35
1. Introduccin.
El presente trabajo tratar sobre la bacteria Streptococcus agalactiae, la cual es una
bacteria clasificada como Gram positiva. Su principal importancia radica en que tiene la
capacidad de provocar aborto, as como neumona y meningitis en recin nacidos.
Este trabajo destaca por ser pionero en este campo en el pas, y con esto se pretende
promover la realizacin rutinaria de su diagnstico en los diferentes hospitales de
Nicaragua, con el fin de prevenir complicaciones severas en los nios recin nacidos y
sus madres.
2. Antecedentes
En len, 2004, se realiz un estudio con fin de describir el comportamiento clnicoepidemiolgico del Streptococcus del grupo B en Neonatos atendidos en el HEAODRA
y su relacin sepsis Neonatal en el periodo comprendido julio a Diciembre del 2003.
Donde se determin que la prevalencia del S.B en nios atendidos en HAEODRA fue de
0.9 por cada 100 nacidos vivos, el 100% de los nios infectados con S.B cursaron con
bacteriemia asintomtica. Los cultivos positivos se encontraron en frecuencia de
Streptococcus del grupo F y del grupo B 2.9% respectivamente.
En Len, 2005, se realiz un estudio sobre la colonizacin por Estreptococo del grupo B
en pacientes con 35-40 semanas de gestacin, en donde la poblacin de estudio se
caracteriz por estar entre los 20 y 35 aos el 72.72%, provenientes del rea urbana el
57.47%, el 51,61% con niveles de escolaridad bajo, y ser en su mayora amas de casa
(83.87) con antecedente de 1 a 3 embarazo (52.30%). Se concluy que la prevalencia
del Estreptococo del Grupo B fue de 26.69%.
3. Justificacin
Los resultados de este estudio aportaran informacin que podr ser utilizada para la
implementacin de medidas correctas y estandarizadas para la identificacin de S.B.
Con este trabajo, se trata de reducir los resultados falsos negativos y falsos positivos que
afectan que afectan la poblacin. De este modo los beneficios sociales que este estudio
daran lugar serian la reduccin de situaciones de trgicas como nios spticos,
lesionados irreversiblemente, as como prevencin de abortos por infecciones por S.B.
4. Objetivo General:
5. Objetivos especficos:
6. Marco Terico.
6.1.
agalactiae
6.1.4 Pruebas de Identificacin
6.1.4.1
Tincin de Gram
La membrana externa contiene diversas protenas, siendo una de ellas las porinas o
canales proteicos que permiten el paso de ciertas sustancias. Tambin presenta unas
estructuras llamadas lipopolisacridos (LPS), formadas por tres regiones: el polisacrido
O (antgeno O), una estructura polisacrida central (KDO) y el lpido A (endotoxina).
Las bacterias Gram-negativas pueden presentar una capa S que se apoya directamente
sobre la membrana externa, en lugar de sobre la pared de peptidoglicano como sucede
en las Gram-positivas. Si presentan flagelos, estos tienen cuatro anillos de apoyo en
lugar de los dos de las bacterias Gram positivas porque tienen dos membranas. No
presentan cidos teicoicos ni cidos lipoteicoicos, tpicos de las bacterias Grampositivas. Las lipoprotenas se unen al ncleo de polisacridos, mientras que en las
bacterias Gram-positivas estos no presentan lipoprotenas. La mayora no forma
endosporas (Coxiellaburnetti, que produce estructuras similares a las endosporas, es
una notable excepcin).
6.1.4.1.2 Bacterias Gram Positivas.
La clula bacteriana est rodeada por una envoltura que, observada al microscopio
electrnico, se presenta como una capa gruesa y homognea, denominada pared
celular. Luego en seccin (corte) se observa una estructura semejante a dos lneas
paralelas separando una capa menos densa; esto corresponde a la membrana
plasmtica. Entre la membrana plasmtica y la pared celular se encuentra
el periplasma o espacio periplasmtico. En el interior de la membrana plasmtica se
encuentra el citoplasma que est constituido por una disolucin acuosa, el citosol, en el
cual se encuentran ribosomas y otros agregados de macromolculas, y en el centro se
ubica la zona menos densa llamada nucleoide, que contiene una madeja de hebras difcil
de resolver (distinguir) y cuyo principal componente es el ADN.
La pared externa de la envoltura celular de una bacteria Gram positiva tiene como base
qumica fundamental el peptidoglicano, que es un polmero de N-acetil-2-D-glucosamina,
unido en orientacin -1,4 con N-acetil murmico, a ste se agregan por el grupo lactilo
cuatro o ms aminocidos. Esta molcula se polimeriza gran cantidad de veces, de modo
que se forma una malla especial, llamada sculo de murena. Dicho compuesto es de
vital importancia para conservar la forma y darle rigidez a la clula bacteriana (si este
compuesto no existiese, la clula reventara debido a su gran potencial osmtico).
6.1.5 Cultivo.
Un cultivo se puede definir como la mezcla o conjunto de nutrientes que crean las
condiciones necesarias para el crecimiento y multiplicacin de microorganismos. Es un
mtodo ampliamente utilizado para la recuperacin de microorganismos, para observar
sus colonias y tambin se puede hacer uso de medios especiales para que el
microorganismo de inters sea ms simple de identificar.
6.1.5.1
Se usa un medio de Agar sangre de carnero al 5% esto para poder observar la hemolisis,
se cultiva el microorganismo con un rayado de agotamiento por estras para obtener
colonias aisladas. El medio debi ser incubado en un ambiente con dixido de carbono
24 horas antes de ser inoculado por el estreptococo beta hemoltico para obtener un
mejor crecimiento.
Medios de enriquecimiento.
Es un medio de cultivo que contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento
de una amplia variedad de microorganismos, entre ellos algunos de los ms exigentes.
Se utilizan comnmente para la cosecha de diferentes tipos de microbios que estn
presentes en la muestra.
Medio de Transporte
6.1.6.1
Camp-test
Llamada la prueba de oro para estreptococo grupo B. Consiste en hacer una azada de
una cepa de control de Staphylococcus aureus partiendo el plato por la mitad, si fuera un
reloj sera un corte entre las 3 y las 9. Luego con el microorganismo que sospechamos
que puede ser estreptococo grupo, hacemos una azada describiendo un ngulo de 90
grados con respecto a la azada de Staphylococcus aureus lo que resultara en una
hemlisis muy marcada formando una V en la zona donde las azas casi se convergen.
Esto es posible por una protena termo estable producida por el Streptococcus agalactiae
llamada Factor CAMP, esta protena reacciona con la esfingomielinasa C producida por
el Staphylococcus aureus, lo cual lisa eritrocitos y produce la tan notable hemlisis.
6.1.6.2
Coagulasa
6.1.6.3
Catalasa
Son pruebas que nos permite comprobar la presencia de anticuerpos en sangre. Es una
prueba fundamental a la hora de realizar donaciones de sangre y transfusiones. Este se
basa en un examen serolgico, que tiene como fin el conocer la exposicin o presencia
previa de un microorganismo patgeno
6.1.7.1
ELISA
Para realizar un ELISA se necesita tener el antgeno o anticuerpo marcado con la enzima
y una vez que este marcador entra en contacto con el antgeno o el anti cuerpo del
microorganismo que se busca forman inmunocomplejos y gracias a la enzima, sucede
una reaccin inmunolgica y enzimtica, la reaccin antgeno-anticuerpo quedara
Son pruebas que nos permite comprobar la presencia de anticuerpos en sangre. Es una
prueba fundamental a la hora de realizar donaciones de sangre y transfusiones. Este se
basa en un examen serolgico, que tiene como fin el conocer la exposicin o presencia
previa de un microorganismo patgeno.
6.1.8.1
PCR
Es una tcnica que permite ampliar una regin del ADN para poder observarse e
identificar al microorganismo con el uso de Primers
6.2
6.2.2 Septicemia.
Sntomas:
Los S.B ahora se presentan con menos frecuencia, debido a que en la actualidad
hay mtodos para examinar y tratar a las mujeres embarazadas en riesgo.
Con respecto a los -lactmicos, el fenotipo ms frecuente tanto en los estreptococos hemolticos de los grupos B, C y G como en los estreptococos del grupo viridans, es el
de sensibilidad a todos ellos. La sensibilidad a penicilina en estos estreptococos implica
Diseo metodolgico.
Tipo de estudio
Se realiz un estudio descriptivo de corte transversal con el fin de determinar la
prevalencia de infecciones por Streptococcus agalactiae en muestras de hisopado rectal
de mujeres embarazadas de la consulta externa en el Hospital Solidaridad en el periodo
de Julio-Diciembre 2013.
Universo.
El universo est constituido por 313 mujeres embarazadas que acudieron a la consulta
externa del rea de ginecologa del Hospital Solidaridad, a las que se practicaron pruebas
prenatales, entre ellas el cultivo rectal, en el periodo de Julio-Diciembre de 2013.
Muestra.
Para la realizacin de este estudio se tom del universo 1 paciente en el cual, el cultivo
del hisopado rectal, fue positivo el crecimiento de Streptococcus agalactiae.
Con un hisopo estril se introduce en el recto y se rota por las paredes del mismo luego
se introduce en un tubo con un medio de cultivo especifico (Amies y Stuart, agar de
enriquecimiento Todd hewitt) se traslada a temperatura ambiente al laboratorio.
El cultivo se realiz en los laboratorios del hospital solidaridad, se inocul la muestra 44R
en agar sangre con dixido de carbono al 5% y al mismo tiempo se inocul una cepa
control (ATTC-25923) y posteriormente a las 24hrs se realiz su lectura.
Diagnstico de laboratorio
Tcnica de Hisopado Vagino-rectal
Muestras
Consisten en restos de material biolgico de los que se dispone para realizacin de
estudios con el fin de determinar algn tipo de afeccin e identificar a los agentes
causales de estas.
Hisopado Rectal.
Los hisopados rectales se utilizan para sustituir la muestra normal de coprocultivo en
casos en que una muestra de heces no puede ser obtenida de manera habitual y en la
bsqueda de Streptococcus agalactiae.
El exudado Vaginal.
Es un mtodo de recoleccin de muestras vaginales, en la cuales se toman las
secreciones de diversas porciones de rgano reproductor femenino. El exudado vaginal
es utilizado para la identificacin de diversos microorganismos como Mobiluncus,
Neisseriagonorreae, Trichomonas vaginales, garnerela, cndida albicans y del mismo
modo es paso primordial para la identificacin de S.B.
Muestras inadecuadas:
El anlisis de muestras inadecuadas es uno de los factores predisponentes a que se
obtengan resultados errneos. Los Hisopados rectales secos, hisopados rectales sin
medio de transporte, y los hisopados rectares que se toman despus de la aplicacin de
antispticos.
Hisopados con heces cuando buscamos bacterias diferentes de enteropatgenos, es
decir, se necesita principalmente secreciones de mucosa ya que no es indispensable la
materia fecal para la identificacin de S.B.
Toma de muestras
No debe usarse antisptico previo a la toma de la muestra. Si se utiliza espculo, lubricar
con agua caliente. Es recomendable tomar dos escobillones. Se introduce un escobilln
estril en la vagina y se recoge la muestra de la zona de mayor exudado, y en su defecto,
del fondo del saco vaginal posterior. Se introduce el escobilln en medio de transporte.
Identificacin
Cultivo en Agar Sangre:
Fue cultivado en agar sangre de carnero en atmosfera de CO2 al 5% por 24horas.
Catalasa:
Fundamento: La catalasa es una enzima que cataliza el perxido de hidrgeno (H2O2)
en oxgeno y agua. La liberacin del oxgeno se puede observar a simple vista por la
formacin de burbujas.
Procedimiento:
1. Recoja, con un asa varias colonias de 18-24 horas de crecimiento.
2. Colquelas sobre la superficie de un portaobjetos de vidrio limpio.
3. Agregue una gota de H2O2 al 3%. La formacin inmediata denota una reaccin
positiva. La produccin puede ser leve, moderada o intensa.
Tincin de Gram.
Es el nico mtodo aceptado para el diagnstico microbiolgico del Streptococcus
agalactiae. Se har una extensin del escobilln en portaobjetos y tincin de Gram.
Los pasos que se han de seguir para realizar la tincin son los siguientes:
I.
II.
III.
IV.
V.
Los tiempos para aplicar cada colorante son orientativo. En la tincin se observarn de
color azul-violeta las Gram + y de color rosa las Gram -.
Morfologa Microscpica.
Los estreptococos del grupo B son cocos Gram positivos (0,6 a 1,2 um.) que forman
cadenas cortas en las muestras clnicas y cadenas ms largas en cultivo,
caractersticas que los hacen distintos de S. pyogenes.
El test de CAMP
Procedimiento:
1. Con una cepa fresca de Staphylococcus aureus (ATCC 25923, para el control de
calidad) haga una estra recta en un plato de ASC, de manera que abarque de un
lado al opuesto, pasando por el centro (imaginando un reloj, sera como trazar
una lnea entre las 12 y las 6 pasando por el centro).
2. Con la cepa sospechosa de ser Streptococcus grupo B realizar una estra en lnea
recta de tal manera que forme un ngulo recto con respecto a la estra del
Staphylococcus aureus. (en el reloj, sera como trazar una lnea de las 9 al
centro).
3. Repetir el mismo procedimiento del lado opuesto, utilizando 2 cepas. Un control
positivo con un Streptococcus -hemoltico del grupo B (Streptococcus
agalactiae) previamente identificado y que debe ser mantenido como una cepa
control. La otra cepa debe ser un control negativo, realizada con un Streptococcus
-hemoltico del grupo A (Streptococcus spyogenes).
4. Incubar a 35-37oC durante 18-24 horas.
5. Lectura: el control con Streptococcus agalactiae da una imagen similar a una
flecha. La punta de la flecha es una zona de hemlisis intensa. El control negativo
no da la imagen de flecha, solamente se observa hemlisis alrededor de la estra
del inculo realizado. Si la cepa en estudio da una imagen similar al control
positivo (Streptococcus agalactiae) se considera CAMP positiva y por lo tanto,
presuntivamente como Streptococcus -hemoltico del grupo B.
Fundamentos fisiolgicos de la bacteria:
Las hemolisinas S de los Streptococcus del grupo B actan sinrgicamente con las
hemolisinas del Staphylococcus aureus, lo cual da como resultado una intensificacin de
la zona de hemlisis. La forma en punta de flecha se logra por la disposicin espacial de
ambas estras.
Resultado de laboratorio:
Positivo: Se observa beta hemlisis en forma de punta de flecha
Antibiograma.
El antibiograma fue realizado de manera automatizada mediante un equipo llamado
Vitek2.
Anlisis de la informacin:
El procesamiento de los datos se realiz automticamente, a travs del Vitek2
(Microbiologists for Microbiologists, Julio 2011)un instrumento que proporciona
estandarizacin del inoculo, determinar los fenotipos de resistencia y CMI gestiona la
fase de incubacin y lectura, por medio de cdigos de barra. As tambin los programas
de Microsoft Word para la elaboracin del documento, Microsoft Excel para la realizacin
de tablas y grficos, y Microsoft Power Point para la presentacin del documento.
Operacionalizacin de Variables.
Variable
Sub-variable
Indicadores
Mtodos diagnsticos
Crecimiento ASC
Blancas
Valores
o Si-No
grises de 0.6 a
2.0
mm
de
dimetro
rodeadas
de
una zona de
completa
hemolisis.
Tipos de hemlisis
Si-No
Beta Hemolisis
CATALASA
Si-No
Produccin de
burbujas
Tincin Gram
Si-No
Cocos de color
azul
en
Criterios
cadenas
cortas
Camp-Test
Si-No
Se
observa
una hemolisis
en forma de
flecha.
Patologas
Sepsis
Si-No
Es la respuesta
sistmica
de
organismo ante
una infeccin.
Neumona
Si-No
Inflamacin
de
los pulmones.
Meningitis
Si-No
Infeccin
bacteriana de las
Ceguera
cubren
Abortos
el
cerebro
Si-No
prematuros
Prdida total o
parcial de la vista
Es la prdida de
un embrin por
causas
no
provocadas
intencionalmente
Frecuencia de casos
Resistencia
Resistencia
farmacolgica
Lincosamidas
Resistencia
Positiva
Si-No
Negativa
Si-No
a Actividad
Si-No
enzimtica
las
sitio de accin
fluoroquinolonas
Tratamientos
Penicilina
Si-No
Ampicilina
Si-No
~0.3
%
Casos Negativos
Casos Positivos.
99%
Grafico No.1 Frecuencia de infecciones por S.B. en mujeres embarazadas entre las semanas 35 y
37 de gestacin sometidas al hisopado rectal entre los meses Julio a Diciembre de 2013.
Este tipo de bacteria se encuentra en la flora normal del hombre en muchas ocasiones,
y estn al alcance de todo los seres humanos afectando a cualquier persona,
principalmente debido a que pasa por desapercibido en los exmenes por su exigencia
de cultivo. El diagnostico depende de una elevada sospecha y/o de los programas de
consultas prenatales ,as como un obtencin del material adecuado para su cultivo ya
que este microorganismo no puede ser aislado con tanta facilidad en algunas muestras.
Referencias
C. Torres, E. C. (2010). Emfermedade Infecciosas Microbiologia Clinica.Madrid.
Microbiologists for Microbiologists. (Julio 2011). Microbiology World, 3.
Grafica No. 2
21-26
27-32
33-38
Negativos
39-44
45-50
51-56
Positivos
Grafica No.2 Clasificacin segn edad de las pacientes que se les realiz cultivo
rectal.
El grafico de clasificaron segn edades de los pacientes que se les realiz cultivo rectal,
se encontr que el caso positivo con crecimiento de S.B. estaba entre las edades de 2126 aos
Mtodos diagnosticos
100
100
100
100
Porcentajes
100
CATALASA
TINCIN DE GRAM
CAMP-TEST
TIPO DE HEMOLISIS
CULTIVO ASC
Patologas
Neumonia
Meningitis
Sepsis
Ceguera
Parto prematuro
Resistencia farmacolgica
Resistencia a lincosamidas
Resistencia a fluorquinolonas
Las principales resistencias conocidas son hacia las lincosamidas por inactivacin
enzimtica y hacia las fluorquinolonas por modificacin del sitio de accin. No se
encontr resistencia a los antibiticos b-lactmicos.
Conclusin
2. Las principales patologas que causan son meningitis sepsis neonatal y abortos
en mujeres embarazadas pero tambin en pacientes inmunodeprimidos (VIH+,
diabticos, ancianos, hepatiticos) causando neumona septicemia meningitis e
infecciones urinarias crnicas.
Recomendaciones
1- Que se implementen actualizaciones en los Manuales de Bacteriologa del Ministerio
de la salud y en las Universidades con el fin de definir mtodos estandarizados ms
eficientes para el aislamiento de microorganismos exigentes, as como fornecer los
materiales necesarios para este fin.
2- Actualizacin continua del personal que labora en los hospitales del pas.
4- A los Hospitales, para que se preocupen ms por decepcionar los datos completos de
los pacientes atendidos.
10
Bibliografa
1. Crespo Ortiz Mara del Pilar, M.Sc1, Vlez L., Juan Diego M.D.2 Importancia clnica
del Streptococcus Agalactiae como causante de infeccin, Colombia Medica Vol.
27 N 2, 1996.
2. T. Juncosa Morros, C. Muoz Almagro, A. Gene Giralt, J. ForteaBusquests, C.
Latorre Otn Infecciones neonatales por Streptococcus Agalactiae, VOL. 45 N 2,
1996
3. Jacqueline Snchez*,Jess M. Feris**Antibiogramas: utilidad y limitacionesVol 34
N" 3 Septiembre-Diciembre, I 998
4. C.
Torres,
E.
Cercenado
Enfermedades
Infecciosas
11
Glosario
Agar: es una gelatina vegetal de origen marina, utilizada continuamente en los medios
de cultivo microbianos.
Esfingomielinasa. Es una enzima fosfodiesterasa (es decir, una enzima que cataliza la
ruptura de los enlaces fosfodister) que acta sobre la esfingomielina. El enzima se
localiza en la clula perifricamente en la membrana plasmtica.
Gestacin. Cuando un ser vivo lleva y sustenta a una cra embrionaria o fetal dentro de
su vientre hasta el momento del nacimiento.
Mucosa: es una capa formada por el epitelio la cual reviste paredes celulares con el fin
de brindar proteccin.
Primer. Es una cadena de cido nucleico o de una molcula relacionada que sirve como
punto de partida para la replicacin del ADN. Es una secuencia corta de cido nucleico
que contiene un grupo 3'hidroxilo libre que forma pares de bases complementarios a una
hebra molde y acta como punto de inicio para la adicin de nucletidos con el fin de
copiar la hebra molde.
Gestacin: Cuando un ser vivo lleva y sustenta a una cra embrionaria o fetal dentro de
su vientre hasta el momento del nacimiento.
Sangre: Es un tejido conectivo liquido en cual circula a travs de los capilares, venas y
arterias
Parto: Accin de dar a luz, es la culminacin del embarazo, cuando l bebe sale de la
madre.
12
ANEXOS
Edad
Sexo
S. de Gestacin
Mtodos diagnsticos
1=100%
Pruebas
Frecuencia
Catalasa
100%
Camp-Test
100%
Tincin de Gram
100%
Cultivo en ASC
100%
Tipo de hemlisis
100%
Patologas
Neumona
Sepsis
Ceguera
Meningitis
Parto prematuro
Frecuencia de casos
Positivo
Negativo
312
Resistencia farmacolgica
Resistencia a lincosamidas
Resistencia
b- Resistencia a fluorquinolonas
lactamicos
100% resistente
0% resistente
Tratamiento
Penicilina
Ampicilina
100% resistente