DISEO EXPERIMENTAL

TRABAJO FINAL

ALEJANDRO VLEZ ROMN COD. 1130661800

GRUPO: 57

TUTOR
CAMPO ELIAS RIAO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

CEAD PALMIRA
MAYO DEL 2016

Definicin del Artculo a Trabajar.

Artculo: Evaluacin de mtodos de extraccin de ADN para deteccin de
Listeria monocytogenes en productos
Autores: Lina Lpez DA,1* Micr, Carlos Meja G,1 M.Sc.
Revista: REVISTA MVZ CRDOBA
Volumen: Volumen 17
Ao de publicacin: Septiembre - Diciembre 2012
Pginas: 1 - 8

Antecedentes:
Listeria monocytogenes es un patgeno emergente importante asociado al
consumo de alimentos; causando listeriosis en humanos, una infeccin que
puede presentar manifestaciones clnicas graves en ancianos, recin nacidos,
mujeres embarazadas y en general personas con compromiso de la inmunidad
celular (1). Aunque la incidencia de listeriosis es baja con respecto a otras
enfermedades transmitidas por alimentos, esta enfermedad presenta tasas de
mortalidad altas (20-30%).
Anlisis estadstico:
Los mtodos de extraccin de ADN de cultivo puro de L. monocytogenes y de
muestras de productos crnicos contaminados artificialmente fueron realizados
por triplicado. Las determinaciones de la cantidad y calidad del ADN obtenido
con los diferentes mtodos de extraccin fueron evaluadas estadsticamente
con un anlisis de Varianza (ANOVA) en un diseo multifactorial con dos
factores: tipo de alimento y mtodos de extraccin de ADN .Los anlisis
estadsticos se realizaron en el software STATGRAPHICS PLUS Versin 5.1
DESARROLLO
El lmite de deteccin y la reproducibilidad de ambos mtodos fueron evaluados
con el procesamiento de muestras contaminadas con 1 hasta 105 UFC/ml de L.
monocytogenes por triplicado. En la figura 1, se puede observar la
amplificacin de una banda de 234 pb correspondiente al gen hlyA en todas las
muestras evaluadas, indicando que esta metodologa es capaz de detectar
bajos niveles de contaminacin en este tipo de alimentos (1 UFC/ml).

Tabla 1. MedicinA260/A280 de ADN obtenido a partir de

cultivo puro de L. monocytogenes
MEDICIN
ESPECTROFOTOMT
RICA

PROTOCOLO

260
nm
2.098
0.664
0.673

Tritn X-100
Buffer KCL
PBS + Tween 20
Solventes
0.566
orgnicos
CONC. = CONCENTRACIN

COND. DE
ADN (g/l)

RELACIN
A260 / 280
0.949
1.550
1.718

-0.34
0.52

1.724

.44

Nueva tabla : 31/05/2016 - 1:32:27 p. m. - [Versin : 23/02/2016]

Anlisis de la varianza
Variable
Caso

N
4

R
1,00

R Aj CV
sd 0,00

Datos desbalanceados en celdas.

Para otra descomposicin de la SC
especifique los contrastes apropiados.. !!
Cuadro de Anlisis de la Varianza (SC tipo I)
F.V.
SC
gl
CM
F
p-valor
Modelo.
5,00
3
1,67 sd
sd
Columna2
5,00
3
1,67 sd
sd
Columna4
0,00
0
0,00 sd
sd
Columna6
0,00
0
0,00 sd
sd
Error
0,00
0
0,00
Total
5,00
3

Versin Estudiantil
Versin Estudiantil

Versin Estudiantil
Versin Estudiantil

Versin Estudiantil
Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil
Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

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1,14

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Versin Estudiantil
0,76

Versin Estudiantil

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Versin Estudiantil
Versin Estudiantil

Medicion
ADN
Versin
Estudiantil

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

0,20frecuencia relativa0,59

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

0,79

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

0,39

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

0,00

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

Versin Estudiantil

Versin
Estudiantil Versin
1,53
1,92 Estudiantil Versin Estudiantil
Versin Estudiantil Versin Estudiantil Versin Estudiantil

CONCLUSION
En conclusin, la identificacin molecular de L. monocytogenes empleando el
protocolo de extraccin con PBS + Tween 20 mostr un lmite de deteccin
bajo, requiriendo insumos de bajo costo y poca experticia en el desarrollo de
tcnicas moleculares, por lo tanto puede ser aplicado al diagnstico de rutina
de este microorganismo en productos crnicos, productos frecuentemente
asociados con la ocurrencia de listeriosis.

BIBLIOGRAFIA
Evaluacin de mtodos de extraccin de ADN para deteccin de Listeria
monocytogenes en productos crnicos. Evaluation of DNA extraction
methods for detection of Listeria monocytogenes in meat products Lina Lpez
DA,1* Micr, Carlos Meja G,1 M.Sc. 1Universidad de Antioquia, Escuela de
Microbiologa, Grupo de investigacin Biotransformacin, Medelln, Colombia.
*Correspondencia: lina_deavila@yahoo.es Recibido: Mayo de 2011; Aceptado: Febrero de
2012.