UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA

Laboratorio de Bioqumica

Compilacin y adaptacin: Anglica Mara Garca T

10. PROPIEDADES CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS

Material a traer por parte del estudiante: marcador para rotular, papel de aluminio, gotero (2),
pinza o depilador, un porta y cubre objetos, un sobre de refresco en polvo de guanabana, pera o
cualquiera que no tenga una fuerte coloracin, guantes, tapabocas, jabn, toalla (2, una para uso
personal y otra para el trabajo prctico).
INTRODUCCIN
Los carbohidratos estn ampliamente distribuidos en vegetales y animales asumiendo participacin
ya sea estructural, funcional y/o metablica. Su clasificacin depende del nmero de tomos de
carbono que poseen y su funcin aldehdica o cetnica, lo cual es la base para los diferentes
mtodos de identificacin y caracterizacin. De acuerdo con el nmero de molculas monosacridas
que conformen el carbohidrato, stos pueden ser clasificados en mono, di, tri, oligo o polisacridos.
Por otra parte, presentan propiedades caractersticas frente a la accin de acidos y/o bases as como
a reactivos especficos.
CONSULTA PREVIA A LA PRCTICA
a. Defina los siguientes trminos: azcares, enlace glucosdico, azcares reductores y azcares no
reductores.
b. Indique el fundamento qumico de cada una de las siguientes pruebas o test en carbohidratos:
Molish, Bial (o de orcinol-HCl), Lugol, Benedict y Nelson. PARA CADA TEST, CONSULTE SUS
CARACTERSTICAS CUALITATIVAS EN CASO DE REACCIN POSITIVA Y/O NEGATIVA.
c. Realice un diagrama de flujo de la prctica a realizar y no olvide todas las indicaciones para un
preinforme.
MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales: 25 tubos de ensayo, 2 gradillas, 3 vasos de precipitados de 100 mL, vaso de precipitados

de 400 mL, vaso de precipitados 1L, 2 pipetas de 2 mL, 2 pipetas de 5 mL, dos pipetas de 10 mL,
pipeteador, 2 varillas de agitacin, probeta, papel indicador, plancha de calentamiento, microscopio.

Reactivos: agua destilada, glucosa al 2% y 5% , fructosa al 2%, xilosa al 2%, sacarosa al 2% y 5%,
lactosa al 2%, galactosa al 2%, Almidn al 2% y 5%, reactivo de molish (-naftol al 1% en etanol),
reactivo de Bial (1,5 g orcinol en 500 mL de HCl concentrado, agregar 20 a 30 gotas de FeCl3 al 10%
(mantener en oscuridad), reactivo de Nelson A (1,25 gr Na2CO3 anhidro, 1,25 gr tartrato Na y K, 1,0
gr NasSO4 anhidro, aforar a 50 mL), reactivo de Nelson B (1,5 gr de CuSO4 5H2O en 10 mL aadir 1
gota de H2SO4 concentrado), reactivo de Benedict, H2SO4 concentrado, butanol, HCl concentrado y
1M, NaOH 30%, lugol. La solucin para el test de Nelson se prepara de la siguiente manera: 12,5 mL

de Nelson A y 0,5 mL de Nelson B.

PROCEDIMIENTO
1. Propiedades qumicas segn clasificaciones generales de los carbohidratos

1.1.

Realice el siguiente set de tubos con soluciones de carbohidratos al 2%.

mL
Tubo
A
B
C
D
E
F
G
H
I

Agua
(Blanco)
1
0,5

Glucosa
2

Fructosa
3

Xilosa
4

Muestra
Sacarosa
5

Lactosa
6

Galactosa
7

Almidn
8

Fresco
(sln), 9

0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5

Test de Molish: a cada tubo, adicionar 2 gotas de -naftol y homogenizar. Hacer escurrir
por la pared del tubo inclinado, 1,0 mL de H2SO4 concentrado (NO HOMOGENIZAR), de modo
que forme una capa bajo la solucin acuosa. Despus de unos minutos observe los posibles
cambios. Analice y discuta lo sucedido en cada tubo apoyndose en el fundamento qumico
del test.

1.2.

Repita el set de tubos del numeral 1.1 y para la realizacin del test de Bial, a cada tubo
adicione 1,5 mL del reactivo de Bial y homogenizar. Calentar las soluciones suavemente hasta
que aparezcan las primeras burbujas. Diluir las muestras hasta 6 mL con agua destilada y
agitar con 1,0 mL de n-butanol. Si hay pentosa presente, aparece un color azul verdoso en la
capa alcohlica. Analice y discuta lo sucedido en cada tubo apoyndose en el fundamento

qumico del test.

1.3.

1.4.

1.5.

1.6.

Repita el set de tubos del numeral 1.1 y para la realizacin del test de Nelson a cada tubo
adicione 0,5 mL del reactivo de Nelson y homogenizar. Caliente durante 20 minutos en bao
mara. Observe los posibles cambios. Analice y discuta lo sucedido en cada tubo apoyndose
en el fundamento qumico del test. Para las muestras en que este test de negativo, repetir el
mismo ensayo despus de la hidrlisis cida.
Repita el set de tubos del numeral 1.1 y para la realizacin del test de Benedict a cada
tubo adicione 0,5 mL del reactivo de Benedict y homogenizar. Caliente durante 5 minutos en
bao mara a ebullicin. Despus de 5-10 minutos observe los posibles cambios. Analice y
discuta lo sucedido en cada tubo apoyndose en el fundamento qumico del test. Para las
muestras en que este test de negativo, repetir el mismo ensayo despus de la
hidrlisis cida.
Hidrlisis cida: Tomar 2,0 mL de la muestra problema, acidificar con 0,3 mL de HCl
concentrado. Colocar el tubo en bao de agua hirviente por media hora. Neutralizar en fro
con NaOH al 30% (neutralizacin gota a gota).
Test de Nelson y Benedict en las muestras hidrolizadas: nicamente para las muestras
que dieron negativas las pruebas de Nelson y Benedict, repita dichos procedimientos una vez
las muestras hayan sido hidrolizadas y neutralizadas.

2. Prueba del Lugol. Realice el siguiente set de tubos:

Tubo
Reactivo (mL)
Glucosa al 5%
Sacarosa al 5%
Almidn al 5%

1
1
1

Agregue a cada tubo 3 gotas de lugol y

homogenice. Analice y discuta lo sucedido en cada

tubo apoyndose en el fundamento qumico del

test.

RESULTADOS
Para cada uno de los tubos y test realizados, analice y discuta los resultados obtenidos incluyendo las
correspondientes observaciones cualitativas as como la o las reacciones qumicas correspondientes.
Complemente su informe consultando otros mtodos para la identificacin de carbohidratos en
muestras problema. Presente sus resultados de la forma ms clara posible apoyndose en el uso de
tablas, grficos, etc.

NO OLVIDE ENTREGAR COPIA DE LA HOJA DE RESULTADOS AL PROFESOR.

BIBLIOGRAFA
La presente prctica fue diseada tomando como pauta base:
EDWARDS, A.M., GARCA, A.M., SOTO, M., FUENTEALBA, D. 2010. Prcticas de Laboratorio
de Bioqumica. Pontificia Universidad Catlica de Chile, Facultad de Qumica, Programas de Qumica y
Qumica y Farmacia, Santiago de Chile, Chile.
VARIOS AUTORES. 2010. Prcticas de Laboratorio de Bioqumica para Ingeniera Agronmica.
Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia, Facultad de Ciencias, escuela de Qumica, Tunja,
Colombia.
CANO, H. 2008. Manual de Laboratorio de Bioqumica. Universidad Industrial de Santander, Facultad
de Ciencias, Escuela de Qumica, Bucaramanga, Colombia.
MIGUEZ, J.B.1997. Prcticas de bioqumica. Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia,
Facultad de Ciencias, escuela de Qumica, Tunja, Colombia.
Textos de apoyo:
LEHNINGER, A., NELSON; D.; COX, M. 2004. Lehninger Principles of Biochemistry. Macmillan
Higher Education, 4a ed.
VOET, D., VOET, J. 2002. Biochemistry. Wiley & Sons. 2 ed. Canada.
BOHINSKI, R.C. 1991. Bioqumica. Addison-Wesley-Longman, 5 ed. Mxico D.F. Mxico.

UNIVERSIDAD PEDAGGICA Y TECNOLGICA DE COLOMBIA

LABORATORIO BIOQUMICA
HOJA DE RESULTADOS
Docente: Anglica M. Garca T.

10. PROPIEDADES CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS

Nombres:___________________________________________________________________
Seccin/grupo: ________________

1. Propiedades qumicas segn clasificaciones generales de los carbohidratos. Indique si el test

es positivo o negativo (incluya posible coloracin y/o formacin de precipitado). B: blanco (agua)

Test

Muestra

Glucosa

Fructosa

Xilosa

Sacarosa

Lactosa

Molish
Bial
Nelson, sin
hidrlisis
Nelson, con
hidrolisis
Benedict, sin
hidrlisis
Benedict, con
hidrlisis

2. Propiedades qumicas especficas de los carbohidratos.

Lugol
Glucosa
Sacarosa
Almidn
Observaciones adicionales:

observaciones

Galactosa

Almidn

Fresco
(sln)