INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE
CIENCIAS BIOLGICAS

1. Materia: Mtodos de anlisis (Laboratorio)

2. Prctica: Separacin de una mezcla de azul de
metileno y fluorescena usando cromatografa
por adsorcin
3. Alumna: Acua Vzquez Elia Gabriela
4. Grupo: 5QV2
5. Seccin 2
6. Profesor: Arturo Rivas Faras
7. Fecha de realizacin: 3-Octubre-2016
8. Fecha de entrega: 10-Octubre-2016
9. Situacin escolar: Inscrita
RESULTADOS
DATOS EXPERIMENTALES E INFORME
CONSTRUCCIN DEL PERFIL DE ELUCIN
Con los valores obtenidos. Complete la tabla 1.
TABLA 1. VALORES DE ABSORBENCIA OBTENIDOS PARA LA
SEPARACIN DE FLUORESCENA Y AZUL DE METILENO
Tubo No.

Volumen de
elucin (mL)

A493
Exp
0.01
1
0.05
9

Corr
0.02
9
0.09
9

A668
Exp
0.01
0
0.49
6

Corr
0.03

0.53
6

Observacione
s
Transparente

Azul

0.10
2
0.02
6
0.01
3
0.04
0
0.01
0
0.00
7
0.03
5

0.14
2
0.01
4

1.82
7
0.41
0

1.86
7
0.04
5

Azul

12

15

0.02
7

0.07
4

0.11
4

Azul

18

0.04
0

Transparente

21

0.03

0.01
5

0.05
5

Transparente

24

0.03
3

0.03
6

Transparente

0.03
6

Verde

30

1.12
9

1.16
9

0.03
2

Verde

11

33
36

1.31
9
0.42
2

0.04
4
0.01
0

Verde

12

1.27
5
0.38
8

13

39

0.25
0

0.29

0.02
7

Verde

14

42

0.13
9

0.17
9

0.06
2

Verde

15

45

0.04
2

0.08
2

0.01
9

Verde

16

48

0.04
1

0.08
1

0.02
9

Verde

17

51
54

0.05
8
0.00
5

0.04
5
0

Verde

18

0.01
8
0.00
5

19

57

0.03

0.03

0.03
4
0.00
4
0.00
8
0.00
4
0.03
0
0.01
3
0.02
2
0.02
1
0.01
1
0.00
5
0.04
0
-

27

10

0.00

Transparente

0.07
5

Azul

Verde

Transparente

0.01
2

Haga un grfico colocando en el eje de las abscisas e volumen

de elucin y en un doble eje de ordenadas, el valor
correspondiente de absorbancia a 493 y 668 nm. Interprete el
resultado.

Perfil de elucin
2

Azul
de

1.5

Absorbancia

1
0.5
0

10

20

30

40

50

60

Volumen de elucin (mL)

A493

A668

GRFICA 1. PERFIL DE ELUCIN

DISCUSIN
La cromatografa por adsorcin se basa en el diferente grado de
adsorcin de cada compuesto orgnico sobre la superficie de una
sustancia qumicamente inerte, denominada adsorbente, de modo que
el compuesto se ve atrado a zonas polares de la superficie del
adsorbente por fuerzas electrostticas, quedando reversiblemente
ligado a la misma, durante nuestra experiencia prctica utilizamos la
albmina como fase estacionaria, y realizamos este proceso para
separar una mezcla de colorantes: el azul de metileno y la
fluorescena. Para que el proceso ocurra es necesaria la presencia de
un disolvente, o mezcla de disolventes, que interaccionan con el
adsorbente y los compuestos de la mezcla; en este caso agua
destilada y regulador de fosfatos; esa interaccin triple entre soluto,

disolvente, y adsorbente, establece las proporciones relativas que se

fijan y migran, a travs del adsorbente, los diferentes solutos y por
tanto, determina la separacin entre los mismos.

Cabe mencionar que en la reaccin entre la fase estacionaria

(albmina) y nuestros colorantes interactun diferentes fuerzas de
atraccin tales como las fuerzas de Van der Walls, dipolo-dipolo,
dipolo-inducido, puentes de hidrgeno, y las fuerzas electrostticas,
sin embargo si alguna de estas presenta interferencias las reacciones
pueden llevarse a cabo de manera diferente a lo esperado. Durante la
cromatografa, el primer colorante en salir fue el azul de metileno,
seguido de varias recolecciones incoloras, lo cual si nos guiamos por
la estructura que de cada uno de los colorantes, no tendra razn de
ser ya que la fluorescena al ser disdica acta como un dianin lo
que la hace mucho ms soluble en el agua y esto conllevara a salir
primero con esta fase mvil. No obstante el azul de metileno es un
catin que a pesar de ser menos soluble en el agua presenta una
interaccin electrosttica de repulsin la cual se opone a todas las
dems fuerzas de atraccin ante la almina la cual era de tipo acida
con un pH de 5 (carga positiva). Las cargas se repelen impidiendo la
fijacin de este colorante en la almina. Ya que la fluorescena es
polar, tiene carga contraria a la almina, esto la fija a ella (puede
formar puentes de hidrogeno), adems de que su interaccin
electrosttica es de atraccin la cual no la permite salir con la primera
fase mvil (agua), pero cuando cambiamos la fase mvil por regulador
de fosfatos bsico, alcalinizamos la almina, rompiendo las fuerzas
que formo con la fluorescena, permitindola fluir. En la grfica
podemos observar cual es la longitud de onda a la que cada colorante
tiene su mayor absorbancia (668nm para azul de metileno / 493nm
para fluorescena)

Sin embargo, se observa un pico ms pequeo a 493; a pesar de que

el azul de metileno tiene mayor absorbancia a 668nm, en la grfica
observamos que est absorbiendo una fraccin ms pequea de
radiacin electromagntica a 493.Ambos picos correspondientes a
azul de metileno, se observan en los primeros volmenes
recolectados, esto nos indica la presencia nicamente de azul de
metileno, obteniendo as una completa separacin de ambos
colorantes.

CONCLUSIN
Se realiz una completa separacin de los colorantes, los cuales en
ningn momento volvieron a juntarse debido a sus interacciones
electrostticas con la fase estacionaria.

PREGUNTAS EXTRA
1. Especifique y defina los elementos del sistema cromatogrfico
para esta separacin:
Fase mvil 1: Agua destilada
Fase mvil 2: Regulador de fosfatos bsico
Fase estacionaria: Almina cida
Soporte: Columna.

2. Defina el termino adsorcin y empleando formulas esquematice

que fuerzas intermoleculares participan en el proceso de
separacin de los solutos.
La adsorcin puede definirse como la tendencia de un
componente del sistema a concentrarse en la superficie de otro.
El adsorbato y la superficie estn sujetos a fuerzas
intermoleculares de van der Waals, dipolo-dipolo, dipoloinducido, puentes de hidrgeno pero mayoritariamente
participaron en la separaciones las interacciones electrostticas.

3.
Considerando las propiedades de solubilidad de los
colorantes, indique que modificaciones hara para invertir el
orden de elucin.
Utilizar almina bsica, lo cual cambiara el tipo de interaccin
electrosttica de esta fase estacionaria con los colorantes.
BIBLIOGRAFA
https://www.rsc.org/merck-index Consultado 7 Octubre 2010
P. Molina Buenda. Prcticas de qumica orgnica. p.22
By J M Costa. Diccionario de qumica fsica. p.11