Cintica de Enzimtica

MELISSA LIMOEIRO ESTRADA GUTARRA

Quais so as
funes das
enzimas?

 Aumentam a velocidade das reaes qumicas 105 a

1017 vezes maiores.

 Catalisadores dos sistemas biolgicos

Condio fundamental para a vida atuam de forma

organizada

degradando

transformando

energia

macromolculas.
A maioria so protenas.

nutrientes;

qumica;

conservando

formando

 vantagens das enzimas em relao a catalisadores

inorgnicos ou sintticos:
-Atuar em condies brandas de pH e T
-Alta especificidade

 Afetam a velocidade de uma reao e no o equilbrio

G* energia de
ativao influencia a
velocidade
G - energia livre de S
para P influencia o
equilibrio

 Reduo da energia de ativao

- Aumento da T
- Aumento da presso
- Catalisador

Relao entre a velocidade de uma reao e a

energia de ativao
Inversa e exponencial

V=k*[S] e V=k*[S1]*[S2]

Como as
enzimas reduzem
a energia de
ativao?

Formao do complexo ES
- Ligao covalente
- Interaes mais fracas (ligao de H, interao
hidrofbica e inicas)

O sitio ativo complementar ao estado de transio

Elaborao da hiptese Linus Pauling

-As interaes fracas so responsveis pela reduo da

energia de ativao energia de ligao (GB)
-A ligao do substrato promove mudanas
conformacionais na enzima para promover a ligao

-A especificidade esta relacionada com a

complementariedade da enzima e substrato no estado de
transio.

Estratgias para compreender o mecanismo de ao das

enzimas:

-Estrutura tridimensionais de protenas

-Mutagneses sitio-dirigida
- Dinmica de protenas
- Determinao das velocidades de reaes alteraes
de parmetros e emprego de inibidores

Cintica enzimtica

 Cintica enzimtica:
o estudo da velocidade de uma reao na presena de
uma molcula de enzima.
Fatores que afetam a velocidade de uma reao
enzimtica:

Concentrao de substrato
concentra da enzima
Temperatura
pH do meio reacional

Presena de inibidores e ativadores

Curvas de consumo de substrato e formao de produto

ao longo do tempo

[S] muda
ao longo do
tempo

Nota-se que as velocidades mudam ao longo do tempo

variao nas condies importncia da medida no inicio
da reao velocidade inicial (V0)

Estudo das velocidade de reao e influencia da

concentrao de substrato modelo de MichaelisMenten
Este modelo admite que:

A catlise ocorre por meio da formao rpida e

reversvel de um complexo ES entre a enzima (E) e o
substrato (S)
Passo relevante ES a P + E
E que este ultimo passo irreversivel
k

E+S

K -1

ES

k2

E+P

A velocidade inicial funao da concentraao de enzima:

V0 = k [E0]
Lenvando-se em considerao a etapa mais lenta:

V0 = k2 [ES]
A equao de conservao de enzima [E0] = [E] + [ES] e
para o substrato [S0] = [S] + [ES]
Sendo [E] << [S] , [S0] = [S]
Presume-se que E, S e ES esto em equilbrio Hiptese
de equilbrio ou de Michaelis-Menten

Constante de equilibrio (K) dada por :

K = [E] . [S] = ([E0] [ES]) . [S]
[ES]
[ES]

[ES] = [E0] . [S]

K + [S]
O que permite chegara equaao de Michaelis-Menten
V0 = k2 [ES] = k2 [E0] . [S]
K + [S]
V0 = V . [S]
Km + [S]

Levando-se em considerao
que a velocidade mxima V
= k2 [E0] e que Km a
constante de dissociao de
ES constante de Michaelis

S = Km a V0 igual a Vm/2
Quanto menor km maior a afinidade da enzima pelo
substrato.

Vmax considera-se que toda enzima se encontra na forma

ES e E quase nulo o aumento da [S ] no interfere na
velocidade
Quando S>>Km, Vo =Vmax
Quando Km>>S, Vo = Vmax [S]
km

Quase todas enzimas

seguem cintica de
Michaelis
Principal exceo
enzimas regulatrias

Vmax e Km
- varia para cada enzima
- varia na mesma enzima com diferentes substratos

Kcat constante cataltica

-Descreve a velocidade limitante para qualquer reao na
saturao
Kcat = Vmax/ [Et]

equivalente ao numero de molculas de substrato

convertido em produto por tempo por uma nica molcula
de enzima quando a enzima esta saturada pelo substrato.

Kcat / Km constante de especificidade

Permite avaliar a eficincia cataltica das enzimas

A determinao de Km e Vm deve ser realizada atravs da

medida de V0 em diferentes concentraes de S e
utilizando mtodos de linearizao da equao de
Michaelis-Menten.

Reao com mais de um substrato

- muito comum
- pode ser avaliado pela cintica de Michaelis
- apresenta um Km para cada substrato

Modelos de inibio:
Podem ser reversveis ou irreversiveis
Importancia:
- uso de inibidores como medicamentos
- elucidao de mecanismo de ao de enzimas
- elucidao de rotas metabolicas
- emprego industrial

Inibio reversvel:
Competitivo:
Geralmente a estrutura do inibidor semelhante ao
substrato

Competitivo:
-Em [S] >> [I] a chance do inibidor se ligar a enzima
minimizada e Vmax no se altera
- [S] na condio de Vo = Vmax - Km aumenta na
presena do inibidor pelo fator
-Afeta a afinidade mas nao a reatividade de ES

Competitivo:

No competitivo:
-Se liga em sitio diferente do sitio ativo do substrato e se
liga apenas no complexo ES
- ESI cataliticamente inativo

Nao competitivo:

-Alta [S] Vmax reduzida

Vo= Vmax/
-Km tambm reduzido
-Afeta a afinidade e a reatividade de ES

Nao competitivo:

Mista:
- Se liga em sitio diferente do sitio ativo do substrato mas
se liga em E e ES

Mista:
- Afeta a afinidade (depende do valor de ) e a reatividade
de ES

Mista:

Inibio irreversvel:
-Ligao covalente com o grupo funcional da enzima
essencial para a atividade
- interao estvel no covalente

Pode ser um composto que segue os primeiros passos da

reao e convertido em um composto reativo que se liga
a enzima.